JPH0331214A - 癌転移抑制剤 - Google Patents
癌転移抑制剤Info
- Publication number
- JPH0331214A JPH0331214A JP1163830A JP16383089A JPH0331214A JP H0331214 A JPH0331214 A JP H0331214A JP 1163830 A JP1163830 A JP 1163830A JP 16383089 A JP16383089 A JP 16383089A JP H0331214 A JPH0331214 A JP H0331214A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cancer
- suppressing
- cancer metastasis
- metastasis
- cancer cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規な癌転移抑制剤に関するものである。
癌の治療には主として外科的療法、放射線及び化学療法
が行なわれているが、癌の再発転移等の点では満足すべ
き治療効果は上げられていない。現在用いられている多
（制癌剤は核酸、蛋白質の生合成系を阻害し癌細胞を死
に至らしめるものである。しかしながらこれら制癌剤の
効果には正常細胞と癌細胞の区別はつかず副作用の面で
は大きな問題があった。またこれらの制癌剤は癌原発巣
を縮小させ治療するというものであるが、癌の治療で常
に問題になるのは癌が原発巣から離れ、他の臓器に転移
しそこで増殖し致命的な結果を招くことである。従って
癌の根本的治療の為には癌細胞の増殖抑制作用と共に癌
転移、浸潤の有効な抑制剤を示す制癌剤の開発が強（望
まれている。
が行なわれているが、癌の再発転移等の点では満足すべ
き治療効果は上げられていない。現在用いられている多
（制癌剤は核酸、蛋白質の生合成系を阻害し癌細胞を死
に至らしめるものである。しかしながらこれら制癌剤の
効果には正常細胞と癌細胞の区別はつかず副作用の面で
は大きな問題があった。またこれらの制癌剤は癌原発巣
を縮小させ治療するというものであるが、癌の治療で常
に問題になるのは癌が原発巣から離れ、他の臓器に転移
しそこで増殖し致命的な結果を招くことである。従って
癌の根本的治療の為には癌細胞の増殖抑制作用と共に癌
転移、浸潤の有効な抑制剤を示す制癌剤の開発が強（望
まれている。
癌転移の機構に関しては、多くの研究が為され転移の抑
制に関する物質の検索も広くなされてきた。癌細胞は原
発巣より遊離した後、血管中に侵入する。そして癌細胞
は血管壁の血管内皮細胞層にもぐりこみ細胞外基質成分
と接着した後、分解酵素により細胞外基質を破壊する。
制に関する物質の検索も広くなされてきた。癌細胞は原
発巣より遊離した後、血管中に侵入する。そして癌細胞
は血管壁の血管内皮細胞層にもぐりこみ細胞外基質成分
と接着した後、分解酵素により細胞外基質を破壊する。
このようにして癌細胞は他の臓器に侵入しそこで新たな
転移巣を形成すると考えられている（Ｌ、 Ａ、Ｌｉｏ
ｔｔａ、 ｅｔ ａｌ、 （１９８３）Ｌａｂ、 Ｉｎ
ｖｅｓｔ、 、 ４９゜６３６−６４９）。癌転移抑制
剤の開発の為には、上で示す各ステップのいずれかを抑
制するものが開発されればよいと考えられる。例えば細
胞外基質と細胞の結合を効率よく阻害するもの（例えば
、Ｍ、Ｊ、Ｈｕｍｐｈｒｉｅｓ、に、０１ｄｅｎ、ａｎ
ｄＫ、Ｍ、Ｙａｍａｄａ（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ
、２２３，４６７−４７０．あるいはＹ、Ｉｗａｍｏｔ
ｏ ｅｔ ａｌ、 ５ｃｉｅｎｃｅ （１９８７）２３
８ 。
転移巣を形成すると考えられている（Ｌ、 Ａ、Ｌｉｏ
ｔｔａ、 ｅｔ ａｌ、 （１９８３）Ｌａｂ、 Ｉｎ
ｖｅｓｔ、 、 ４９゜６３６−６４９）。癌転移抑制
剤の開発の為には、上で示す各ステップのいずれかを抑
制するものが開発されればよいと考えられる。例えば細
胞外基質と細胞の結合を効率よく阻害するもの（例えば
、Ｍ、Ｊ、Ｈｕｍｐｈｒｉｅｓ、に、０１ｄｅｎ、ａｎ
ｄＫ、Ｍ、Ｙａｍａｄａ（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ
、２２３，４６７−４７０．あるいはＹ、Ｉｗａｍｏｔ
ｏ ｅｔ ａｌ、 ５ｃｉｅｎｃｅ （１９８７）２３
８ 。
１１３２−１１３４など）、血管内皮細胞へ浸潤を抑制
する物質、分解酵素を阻害する物質（例えば、Ｔ、Ｉｒ
ｉｍｕｒａ、 Ｍ、Ｎａｋａｊｉｍａ、ａｎｄ Ｇ、Ｌ
、Ｎ１ｃｏｌｓｏｎ。
する物質、分解酵素を阻害する物質（例えば、Ｔ、Ｉｒ
ｉｍｕｒａ、 Ｍ、Ｎａｋａｊｉｍａ、ａｎｄ Ｇ、Ｌ
、Ｎ１ｃｏｌｓｏｎ。
（１９８６）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ 、 ２５．５３
２２−５３２８ ）等が上げられる。また、その中でも
特に副作用の弱い物質が望ましい。
２２−５３２８ ）等が上げられる。また、その中でも
特に副作用の弱い物質が望ましい。
本発明者らは癌転移抑制剤の１つとして癌細胞浸潤を抑
制する物質について鋭意研究を重ねた結果、哺乳動物の
肝臓からイオン交換法、ゲルろか法、逆相カラム法など
を用いて、強い癌細胞浸潤抑制作用が見い出される下記
ポリペプチドを単離精製することに成功し本研究を完成
した。本発明はこのポリペプチド性物質を有効成分とす
る癌転移抑制剤に係る下記発明である。
制する物質について鋭意研究を重ねた結果、哺乳動物の
肝臓からイオン交換法、ゲルろか法、逆相カラム法など
を用いて、強い癌細胞浸潤抑制作用が見い出される下記
ポリペプチドを単離精製することに成功し本研究を完成
した。本発明はこのポリペプチド性物質を有効成分とす
る癌転移抑制剤に係る下記発明である。
Ａｓｘ （１０） 、 Ｔｈｒ （７） 、 Ｇｌｘ
（７） 、 Ｐｒｏ （７） 、 Ｓｅｔ （６） 。
（７） 、 Ｐｒｏ （７） 、 Ｓｅｔ （６） 。
Ａｌａ（５）、Ｇｌｙ（３）、Ｖａｌ（２）、Ｌｅｕ（
１）、Ｐｈｅ（１）。
１）、Ｐｈｅ（１）。
Ａｒｇ（１）
ただし、（）内はアミノ残基の数を、ＡｓｘはＡｓｐあ
るいはＡｓｎを、およびＧｌｘはＧｌｕあるいはＧｌｎ
を表わす） 抗転移剤開発の為の評価系として８１６メラノーマ、ル
イス肺癌細胞等を使用した実験的癌転移系が広く使われ
ている。しかしながら、これらのスクリーニング法では
結果にばらつきが多く、スクリーニングにがけられる薬
剤の数も限定され多（の数の癌転移抑制剤スクリーニン
グを行なうには必ずしも好ましい方法とはいえない。本
発明において癌細胞浸潤の阻害作用を示す物質の検索方
法としては明渡らの開発した方法（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ、（１９８６）４６．２４１６−２４２２）を用いス
クリーニングを行なった。明渡らの試験管内試験方法は
、その結果が１ｎｖｉｖｏ 試験と非常によい相関関
係を示し、癌転移抑制剤のスクリーニング方法として優
れたものと考えられる。明渡らの方法は、初代培養を行
なうことによりシャーレ上に一層の正常細胞層を作製し
、この上に浮遊癌細胞を添加、しばら＜ （２０−４０
時間）インキュベートした後、細胞層の下に潜り込んだ
癌細胞の数を測定する方法である。正常細胞としては腸
間膜の中皮細胞や血管内皮細胞等が考えられる。また癌
細胞は多種類存在するが例えば、腹水肝癌細胞ＡＨ−１
３０等があげられる。この方法に従って多（の物質につ
いて鋭意転移抑制作用を試験した。
るいはＡｓｎを、およびＧｌｘはＧｌｕあるいはＧｌｎ
を表わす） 抗転移剤開発の為の評価系として８１６メラノーマ、ル
イス肺癌細胞等を使用した実験的癌転移系が広く使われ
ている。しかしながら、これらのスクリーニング法では
結果にばらつきが多く、スクリーニングにがけられる薬
剤の数も限定され多（の数の癌転移抑制剤スクリーニン
グを行なうには必ずしも好ましい方法とはいえない。本
発明において癌細胞浸潤の阻害作用を示す物質の検索方
法としては明渡らの開発した方法（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ、（１９８６）４６．２４１６−２４２２）を用いス
クリーニングを行なった。明渡らの試験管内試験方法は
、その結果が１ｎｖｉｖｏ 試験と非常によい相関関
係を示し、癌転移抑制剤のスクリーニング方法として優
れたものと考えられる。明渡らの方法は、初代培養を行
なうことによりシャーレ上に一層の正常細胞層を作製し
、この上に浮遊癌細胞を添加、しばら＜ （２０−４０
時間）インキュベートした後、細胞層の下に潜り込んだ
癌細胞の数を測定する方法である。正常細胞としては腸
間膜の中皮細胞や血管内皮細胞等が考えられる。また癌
細胞は多種類存在するが例えば、腹水肝癌細胞ＡＨ−１
３０等があげられる。この方法に従って多（の物質につ
いて鋭意転移抑制作用を試験した。
本発明の癌転移抑制剤について以下実施例に基づいて説
明するが、本発明はこの実施例に限られるものではない
。
明するが、本発明はこの実施例に限られるものではない
。
去」ｌ引上
ウシ肝臓（５ｋｇ）を塩酸（１８７，５ｍ１） 、エタ
ノール（９，５β）、 ＰｌｉｌＳＦ（１ｇ）の混合液
にてホモジエナイズし、同溶液中に４℃、１晩にて抽出
を行なった。その後遠心分離操作（７，５００ｒｐｍ
、６０分）にて上清と沈渣とにわけ、上清にアンモニア
水を加えてｐＨ５，２とし、さらに２Ｍ酢酸アンモニウ
ム（ｐＨ５，２） １／８５容加えた。
ノール（９，５β）、 ＰｌｉｌＳＦ（１ｇ）の混合液
にてホモジエナイズし、同溶液中に４℃、１晩にて抽出
を行なった。その後遠心分離操作（７，５００ｒｐｍ
、６０分）にて上清と沈渣とにわけ、上清にアンモニア
水を加えてｐＨ５，２とし、さらに２Ｍ酢酸アンモニウ
ム（ｐＨ５，２） １／８５容加えた。
４℃、１晩混合した後遠心分離操作似て（９（ｔｏ。
ｒｐｍ 、 ３０分）上清と沈渣とに分け、上清（２５
０ｍｌ）に対し、冷却したエーテル（５００ｍｌ） 、
エタノール（２５０ｍｌ）の混合液を加えて一２０℃、
１晩にて沈殿を生じさせた。生じた沈殿を１Ｍ酢酸にて
溶解し、０．１７Ｍ酢酸に対し透析を行ない、充分に透
析した後、凍結乾燥しさらに生理食塩水に溶解した。で
きた溶液をメンブレンフィルター（Ｄｉａｆｌｏ ＵＭ
−１０）にて加圧濾過し、炉液を集めた。
０ｍｌ）に対し、冷却したエーテル（５００ｍｌ） 、
エタノール（２５０ｍｌ）の混合液を加えて一２０℃、
１晩にて沈殿を生じさせた。生じた沈殿を１Ｍ酢酸にて
溶解し、０．１７Ｍ酢酸に対し透析を行ない、充分に透
析した後、凍結乾燥しさらに生理食塩水に溶解した。で
きた溶液をメンブレンフィルター（Ｄｉａｆｌｏ ＵＭ
−１０）にて加圧濾過し、炉液を集めた。
上記のようにして得た溶液を１０ｍＭ酢酸アンモニウム
（ｐＨ７，２）にて平衡化したＤＥＡＥ−Ｔｏｙ。
（ｐＨ７，２）にて平衡化したＤＥＡＥ−Ｔｏｙ。
ｐｅａｒｌカラム（５ｃｍＸ １２ｃｍ）にかけＯＭ
−０，２Ｍ ＮａＣ１にて濃度勾配をつけることにより
溶出させた（分画グラフを第１図に示す）。活性画分（
第１図棒線部分）を集め、凍結乾燥した後Ｂｉｏｇｅｌ
Ｐ−６カラム（Ｉ Ｘ １００ ｃｍ）にてゲル濾過
を行った（分画グラフを第２図に示す）。溶出液にはＯ
，１Ｍ酢酸を用いた、分子量的５．２００に相当する活
性画分（第２図棒線部分）を集め、０ＤＳ−カラム（Ｙ
ＭＣ−ＰＡＣＫ、 Ｄ−ＯＤＳ−５） （２ｘ２５ｃ
ｍ）にて分画しく分画グラフを第３図に示す）、活性画
分（第３図棒線部分）をさらに０ＤＳ−カラム（Ｗａｔ
ｅｒｓ ＬＬＢＯＮＤＡＳＰＨＥＲＥ）にかけ（分画
グラフを第４図に示す）、活性画分（第４図棒線部分）
を集めた。その結果、得られた活性画分は、上記第４図
に示した０ＤＳ−カラム分画と同じ試験で第５図に示す
ように純度の高い、癌細胞浸潤抑制作用を有するポリペ
プチドであった。
−０，２Ｍ ＮａＣ１にて濃度勾配をつけることにより
溶出させた（分画グラフを第１図に示す）。活性画分（
第１図棒線部分）を集め、凍結乾燥した後Ｂｉｏｇｅｌ
Ｐ−６カラム（Ｉ Ｘ １００ ｃｍ）にてゲル濾過
を行った（分画グラフを第２図に示す）。溶出液にはＯ
，１Ｍ酢酸を用いた、分子量的５．２００に相当する活
性画分（第２図棒線部分）を集め、０ＤＳ−カラム（Ｙ
ＭＣ−ＰＡＣＫ、 Ｄ−ＯＤＳ−５） （２ｘ２５ｃ
ｍ）にて分画しく分画グラフを第３図に示す）、活性画
分（第３図棒線部分）をさらに０ＤＳ−カラム（Ｗａｔ
ｅｒｓ ＬＬＢＯＮＤＡＳＰＨＥＲＥ）にかけ（分画
グラフを第４図に示す）、活性画分（第４図棒線部分）
を集めた。その結果、得られた活性画分は、上記第４図
に示した０ＤＳ−カラム分画と同じ試験で第５図に示す
ように純度の高い、癌細胞浸潤抑制作用を有するポリペ
プチドであった。
上記精製法で肝臓１００ｋｇから合計約５μｇの精製ポ
リペプチドを得た。
リペプチドを得た。
Ａｌり皿ユ逝ユ
前記の精製した本物質１００ｇを用いて、アミノ酸分析
を行なった。その結果を下記第１表に示す。
を行なった。その結果を下記第１表に示す。
第１表
但し、
ｓｘ
はＡｓｐ
またはＡｓｎ
を、
およびＧｌｘ
は
Ｇ １． ｕまたはＧｌｎを表わす。
評価方法は明渡らの方法にしたがって行なった。即ち、
ラット腸間膜細胞を初代培養し５−７日後、−層の細胞
シートになった後腹水肝癌細胞ＡＨ１３０−ｃｌｏｎｅ
３０を添加、２４時間後細胞シートの下に浸潤する肝
癌細胞の数を測定する。この方法により、浸潤阻害活性
を測定した。その結果、本物質Ｌｏｎｇ／ｍ（！の濃度
で癌細胞の湿潤を５０％阻害することが明らかとなった
。
ラット腸間膜細胞を初代培養し５−７日後、−層の細胞
シートになった後腹水肝癌細胞ＡＨ１３０−ｃｌｏｎｅ
３０を添加、２４時間後細胞シートの下に浸潤する肝
癌細胞の数を測定する。この方法により、浸潤阻害活性
を測定した。その結果、本物質Ｌｏｎｇ／ｍ（！の濃度
で癌細胞の湿潤を５０％阻害することが明らかとなった
。
【図面の簡単な説明】
第１図〜第５図は実施例１の活性成分の精製におけるカ
ラムクロマトグラフィーによる分画の結果を示すグラフ
であり、第１図〜第４図のグラフ中の棒線は活性成分の
存在する領域を示す。第５図は最終精製結果を示す。第
１図〜第５図において用いたカラムは下記の通りである
。 第１図： ＤＥＴＡ−Ｔｏｙｏ ｐｅａｒｌカラム第２
図： Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ−６力ラム第３図： ０ＤＳ−
カラム 第４図： ０ＤＳ−カラム
ラムクロマトグラフィーによる分画の結果を示すグラフ
であり、第１図〜第４図のグラフ中の棒線は活性成分の
存在する領域を示す。第５図は最終精製結果を示す。第
１図〜第５図において用いたカラムは下記の通りである
。 第１図： ＤＥＴＡ−Ｔｏｙｏ ｐｅａｒｌカラム第２
図： Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ−６力ラム第３図： ０ＤＳ−
カラム 第４図： ０ＤＳ−カラム
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、分子量５２００±５００で、少なくとも下記のアミ
ノ酸残基を下記の数含み、癌細胞浸潤抑制作用を有する
ポリペプチド性物質を有効成分とする癌転移抑制剤。 Ａｓｘ（１０）、Ｔｈｒ（７）、Ｇｌｘ（７）、Ｐｒｏ
（７）、Ｓｅｒ（６）、Ａｌａ（５）、Ｇｌｙ（３）、
Ｖａｌ（２）、Ｌｅｕ（１）、Ｐｈｅ（１）、Ａｒｇ（
１） ただし、（ ）内はアミノ残基の数を、ＡｓｘはＡｓｐ
あるいはＡｓｎを、およびＧｌｘはＧｌｕあるいはＧｌ
ｎを表わす） ２、哺乳動物の肝臓から抽出された請求項第１項記載の
ポリペプチド性物質を有効成分とする癌転移抑制剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1163830A JPH0331214A (ja) | 1989-06-28 | 1989-06-28 | 癌転移抑制剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1163830A JPH0331214A (ja) | 1989-06-28 | 1989-06-28 | 癌転移抑制剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0331214A true JPH0331214A (ja) | 1991-02-12 |
Family
ID=15781559
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1163830A Pending JPH0331214A (ja) | 1989-06-28 | 1989-06-28 | 癌転移抑制剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0331214A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1559723A1 (en) | 2004-01-27 | 2005-08-03 | Toshikazu Nakamura | A segment of glycosylation-deficient HGF alpha-chain |
-
1989
- 1989-06-28 JP JP1163830A patent/JPH0331214A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1559723A1 (en) | 2004-01-27 | 2005-08-03 | Toshikazu Nakamura | A segment of glycosylation-deficient HGF alpha-chain |
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