JPH0331215A - 制癌療法支持剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は制癌療法支持剤に関する。

より詳細に記すと、本発明はヒ）ＢＣ叶を有効成分とす
る制癌療法支持剤に関する。

〔従来の技術〕

ヒト及びマウスにおいて成熟Ｂ細胞を抗体産生細胞へ分
化させる因子をＢ細胞分化因子（ＢＣＤＦ）と総称する
。

ヒトの体内においてこのような重要な作用を有するしト
ＢＣ叶について、本発明者等は研究を重ね、そのＤＮＡ
配列、及びアミノ酸配列を決定（特開昭６３−４２６８
８．６３−５６２９１）Ｌ、大腸菌によるヒトＢＣＤＦ
の生産に成功している（特開昭６３−１５７９９６）。

またヒトＢＣＤＦが原発性、二次性免疫不全症に有効な
免疫療法剤となる事、骨髄移植療法の有効な支持剤とな
る事、ワクチン効果増強剤となる事及び血小板減少症治
療剤となる事も見出している（特開平１−６３５２４゜
特願昭６３−１８３０８３．特願昭６３３１０５７８、
特願平１−６９５４）。

しかしながら、今までこのヒトＢＣＤＦが強力制癌療法
を支持する薬効を有する事についての報告はない。

なおヒトＢＣＤＦをＢＳＦ−２あるいはインターロイキ
ン６　（ＩＬ−６）と呼ぶことも提唱されているが、（
Ｎａ−ｔｕｒｅ、　３２４．７３（１９８６）、　ＥＭ
ＢＯｊ、、　　６．１２１９（１９８７）ここでは従来
よりのＢＣＤＦなる名称を用いる。またここで用いるヒ
トＢＣＤＦはインターフェロン活性を有さす、よってイ
ンターフェロン活性を持つＩＦＮ−Ｂｚ標品（ヨーロッ
パ出願公開階０２２０５７４）とは異なる。

ここでまずヒ）　ＢＣＤＦを含有する強力制癌療法支持
剤が効果を呈する癌及びこれと関連して起こる合併症に
ついて概説するとともに、現在行なわれている治療法に
ついて簡単に説明する。

癌の治療においては強力な制癌療法の確立が待ち望まれ
ている。

例えば癌の一種である急性白血病に治癒をもたらすには
完全寛解に導入する事が絶対的な条件である。このため
には治療初期に強力な癌化学療法剤を大量に投与する事
が有効である。しかしながらこのような強力治療は、骨
髄増殖を抑制する（以下骨髄抑制という）という極めて
恐しい副作用があり、これ故いわゆる化学療法孔をまね
く場合もあるため、積極的には施行されていない。

（日本血液学会雑誌、第５２巻、第２号、２０７頁（１
９８９））。

また肺癌等に対する制癌剤の投与も、白血球や血小板の
減少による感染・出血を招くため、正常な細胞が正常値
に戻るまで約３週間体薬期間をおき、また制癌剤を投与
するという３週１サイクルの治療を行なわざるを得ない
。

放射線療法でも同様の問題で大量・頻回の放射線照射は
行なえない。

ところで骨髄抑制による副作用は、癌化学療法剤により
正常な細胞も死滅する結果、感染菌を直接食・殺菌する
顆粒球やマクロファージ、更には感染菌に対する抗体を
産生ずるＢリンパ球等の生体防御を担当する免疫・血液
細胞の数、機能が減少低下する事に起因する。これら免
疫・血液学的機能の低下は大腸菌・緑膿菌等による肺炎
や敗血症を招きやすい。これらの場合、患者の全身及び
感染局所となる臓器での感染防御能が発症因子として重
要である。例えば敗血症は主として腸管粘膜からの内因
性感染に起因しており、抗生物質の使用、空気中の細菌
除去等を行なっても有効性が低いとされている。

以上のような現状に対し、各種血球の数あるいは抗体産
生能、活性酸素産生能等血球の機能を高める、もしくは
回復を促進する支持剤を用いる事により、強力な制癌療
法を頻度高く行なう事が癌の治療効果を高める方法とし
て考えられている。

これまでに我々はヒ）　ＢＣＤＦが造血幹細胞の増殖や
抗体産生の誘導能を有し、癌や免疫不全患者の免疫療法
剤として有用である事を特開平１−６３５２４にて、ま
た癌患者の血小板減少症に有用である事を特願平１−６
９５４にて示してきた。

また各種のコロニー刺激因子、例えばＧＭ−ＣＳＦ　。

Ｇ−Ｃ５Ｆ　、　Ｍ−Ｃ５Ｆ等が白血球数の回復を促進
する事は報告されている　（Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　
Ｇｒｏｗｔｈ　ＦａｃｔｏｒＲｅｓｅａｒｃｈ、　　１
．　１（１９８９）　）。

しかし生体内投与にて血液中及び臓器中の血球数及び活
性酸素産生能・抗体価等の機能のいずれをも高め、宿主
の感染を防御し、しかも実際に強力制癌療法を行なった
際に延命効果を有する制癌療法支持剤は未だない。

〔発明が解決しようとする課題〕

そこで本発明の目的は、従来にない生体内投与にて強力
制癌療法を可能とさせる制癌療法支持剤である。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者等は上記課題を解決するために鋭意研究を重ね
た結果、放射線療法後または化学療法後にヒトＢＣＤＰ
を有効成分とする制癌療法支持剤の投与が ■　末梢血または臓器中の白血球数の回復を促進する事 ■　抗体産生能、活性酸素産生能を高める事■　細菌に
対する感染防御能を増大する事■　強力放射線療法、大
量化学療法後のマウスに対し延命効果を示す事 を見出し本発明を完成した。

すなわち、本発明はヒ）　ＢＣＤＰを有効成分とする制
癌療法支持剤である。

本発明に係るヒ）　ＢＣＤＦは例えば特開昭６３４２６
８８．６３−５６２９１及び特開平１６３５２４号公報
に示されるような、下記のアミノ酸配列（Ｉ）又は（ｎ
）を有する。

アミノ酸配列（■）： Ｐｒｏνａｌ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ａｓ
ｐ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　ＶａｌＡｌａ　Ａｌａ　
ｐｒｏ旧ｓ　Ａｒｇ　Ｇｌｎ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ
　Ｓｅｒ　５ｅｒＧｌｕ　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ａｓｐ　Ｌ
ｙｓ　Ｇｉｎ　Ｉｌｅ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ｌｅ
ｕ八ｓへ　　Ｇｌｙ　　Ｉｌｅ　　Ｓｅｒ　　Ａｌａ　
　Ｌｅｕ　　Ａｒｇ　　Ｌｙｓ　　Ｇｌｕ　　Ｔｈｒ　
　Ｃｙｓ八ｓへ　　Ｌｙｓ　　Ｓｅｒ　　Ａｓｎ　　Ｍ
ｅｔ　　Ｃｙｓ　　Ｇｌｕ　　Ｓｅｒ　　Ｓｅｒ　　Ｌ
ｙｓ　　ＧｌｕＡｌａ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ａｓ
ｎ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ
Ｍｅｔ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｃ
ｙｓ　Ｐｈｅ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　ＧｌｙＰｈｅ　Ａｓｎ
　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ｖａｔ　
Ｌｙｓ　Ｉｌｅ　ｌ１ｅＴｈｒ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｌｅ
ｕ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ
　ＧｌｕＴｙｒ　　Ｌｅｕ　　Ｇｌｎ　　Ａｓｎ　　Ａ
ｒｇ　　Ｐｈｅ　　Ｇｌｕ　　Ｓｅｒ　　Ｓｅｒ　　Ｇ
ｌｕ　　ＧｌｕＧｉｎ　Ａｌａ　Ａｒｇ＾ｌａ　Ｖａｔ
　Ｇｉｎ　Ｍｅｔ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　ＶａｌＬ
ｅｕ　　Ｉｌｅ　　Ｇｉｎ　　Ｐｈｅ　　Ｌｅｕ　　Ｇ
ｉｎ　　Ｌｙｓ　　Ｌｙｓ　　Ａｌａ　　Ｌｙｓ　　Ａ
ｓｎＬｅｕ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ
　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ八ｓへ　　
Ａｌａ　　Ｓｅｒ　　Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ　　Ｔｈｒ　　
Ｌｙｓ　　Ｌｅｕ　　Ｇｌｎ　　Ａｌａ　　ＧｌｎＡｓ
ｎ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ａｓｐ　Ｍｅｔ
　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｈｉｓ　Ｌｅｕｌｌｅ　Ｌｅｕ　Ａ
ｒｇ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｌｅ
ｕ　Ｇｉｎ　５ｅｒＳｅｒ　　Ｌｅｕ　　Ａｒｇ　　Ａ
ｌａ　　Ｌｅｕ　　Ａｒｇ　　Ｇｉｎ　　Ｍｅｔ又は アミノ酸配列 Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ Ｖａｌ　Ａｌａ　Ａｌａ Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ Ｃｙｓ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｌｃｕ しｙｓ　　Ｍｅｔ　　ＡＬａ Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ａｓｎ １ｉｅ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　Ａｌａ Ｖａｌ　Ｌｅｕ　１ｌｅ Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ Ｔｈｒ　　Ａｓｎ　　Ａｌａ Ｇｉｎ　Ａｓｎ　Ｇｌｎ Ｌｅｕ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ アミノ酸配列 （■）　： Ｐｒｏ　　Ｐｒｏ　　Ｇｌｙ　　ＧｌｕＰｒｏ　Ｈｉｓ
　Ａｒｇ　Ｇｌｎ １１ｅ　　Ａｓｐ　　Ｌｙｓ　　Ｇ１ｎ１１ｅ　　Ｓｅ
ｒ　　Ａｌａ　　ＬｅｕＳｅｒ　Ａｓｎ　　Ｍｅｔ　　
Ｃｙｓ Ａｌａ　　Ｇｌｕ　　Ａｓｎ　　ＡｓｎＧｌｕ　　Ｌｙ
ｓ　　Ａｓｐ　　ＧｌｙＧｌｕ　Ｇｌｕ　　Ｔｈｒ　Ｃ
ｙｓ Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ　　Ｇｌｕ　　ＰｈｅＧｉｎ　　Ａｓ
ｎ　　Ａｒｇ　　ＰｈｅＡｒｇ　　Ａｌａ　　Ｖａｔ　
　ＧｌｎＧｉｎ　　Ｐｈｅ　　Ｌｅｕ　　Ｇｌｎ＾１ａ
　　ｌｉｅ　　Ｔｈｒ　　ＴｈｒＳｅｒ　　Ｌｅｕ　　
Ｌｅｕ　　ＴｈｒＴｒｐ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ａｓｐ Ａｒｇ　Ｓｅｒ　　Ｐｈｅ　　Ｌｙｓ Ａｒｇ　　Ａｌａ　　Ｌｅｕ　　Ａｒｇ（１）は天然型
ヒ 八ｓｐ　　Ｓｅｒ　　Ｌｙｓ　　ＡｓｐＰｒｏ　　Ｌｅ
ｕ　　Ｔｈｒ　　５ｅｒｒｌｅ　　Ａｒｇ　　Ｔｙｒ　
　ＩｌｅＡｒｇ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ Ｇｌｕ　　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ Ｌｅｕ　　Ａｓｎ　　Ｌｅｕ　　Ｐｒ。

Ｃｙｓ　　Ｐｈｅ　　Ｇｉｎ　　５ｅｒＬｅｕ　　Ｖａ
ｌ　　Ｌｙｓ　　ｌ１ｅＧｌｅ　　Ｖａｌ　　Ｔｙｒ　
　ＬｅｕＧｌｕ　　Ｓｅｒ　　Ｓｅｒ　　ＧｌｕＭｅｔ
　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　　Ｌｙｓ Ｌｙｓ　　Ｌｙｓ　　Ａｌａ　　ＬｙｓＰｒｏ　Ａｓｐ
　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ Ｌｙｓ　　Ｌｅｕ　　Ｇｉｎ　　ＡｌａＭｅｔ　Ｔｈｒ
　Ｔｈｒ　Ｈｉｓ Ｇｌｕ　　Ｐｈｅ　　Ｌｅｕ　　ＧｉｎＧｌｎ　　Ｍｅ
ｔ トＢＣ叶であり、ア ミノ酸配列（Ｉ［）は天然型ヒトＢＣＤＦのＮ末端に八
ｌａが１つ付加されたポリペプチド（以下ヒトＡｌａ−
ＢＣＤＦと記す）である。しかし、本発明で用いるヒト
ＢＣ叶は必ずしも上記アミノ酸配列（１）又は（ＩＩ）
で示される構造をとる必要はない。

即ち、天然型ヒトＢＣＤＦのＮ末端及び／又はＣ末端よ
り１個もしくは複数個のアミノ酸が付加された構造を有
するもの、天然型ヒ）　ＢＣＤＦ構造中の１個もしくは
複数個のアミノ酸が他のアミノ酸に置換された構造を有
するものも、ヒトＢＣＤＦ活性を有する限り本発明のヒ
トＢＣＤＦとして用いることができる。好ましくは天然
型ヒトＢＣＤＦ又はヒト八Ｉａ−ＢＣＤＦを用いるのが
よい。本発明に係るヒトＢＣＤＦの含量は該制癌療法支
持剤中０．０００１〜１ｏｏ重量％、好ましくは０．１
〜１．０重量％である。

また本発明のヒ）　ＢＣＤＦを有効成分とする制癌療法
支持剤には血清アルブミン等の安定化剤、マンニトール
等の賦形剤を含有させてもよい。

さらに本発明の制癌療法支持剤にはヒトＢｃ叶以外に、
助剤として癌化学療法剤を１種類以上含をさせでもよい
。

癌化学療法剤としては例えば５−フルオロウラシル（以
下５−Ｆｌｌと記す）を示す事ができる。その他、マイ
トマイシンＣ、サイクロホスファミド、アドリアマイシ
ン、ＶＰ−１６、Ａｒａ−Ｃ等正常骨髄細胞の増殖を抑
制する可能性のあるものを含め、いずれでも良い。

これらの助剤の添加量は特に限定しないが、ヒトＢＣＤ
Ｆを１００とした場合にそれぞれ１００〜２０００００
重量％添加すればよい。

くり返し述べるが、これら助剤の添加量は決して上述の
値に限定されるものでなく、症状、患者の年令等により
適宜決定すればよい。

尚、５−ＦＵ等の助剤は必ずしもヒ）　ＢＣＤＦと同時
に同じ薬剤として投与しなくともよい。即ち、ヒトＢＣ
ＤＦを有効成分とする制癌療法支持剤の投与前又は後の
適当な時期にこれらの助剤を投与してもかまわない。

もちろん、本発明の制癌療法支持剤は他のサイト力イン
、例えばＩＬ−３，Ｇ−Ｃ５Ｆ、　ＧＭ−ＣＳＦ、　Ｍ
−Ｃ５Ｆ。

ＩＬ−１等や免疫療法剤、例えばレンチナンと併用して
もかまわない。本刷癌療法支持剤は静脈内注射で用いて
もよいし、筋肉内注射・皮下注射で用いても良い。即ち
、いずれの方法を用いて投与してもかまわない。

また制癌療法後に投与する事が望ましいが、制癌療法前
、あるいは同時に投与してもかまわない。

ヒトＢＣ叶の投与量は０．００１〜１０００μｇ　／　
ｋｇ、好ましくは０．０１〜５００μｇ　／　ｋｇ、よ
り好ましくは０．１〜２５０μｇ　／　ｋｇであるが、
上述の値に限定されるものではなく、患者の状態により
適宜決定しうる。

さて、本発明に用いるヒ）　ＢＣＤＦはヒＩ−Ｔ細胞、
Ｂ細胞、線維芽細胞等より既知の方法（Ｐｒｏｃ、Ｎａ
ｔｌ。

＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、　８２．５４９０（１
９８５））により生産、精製したものでも大腸菌、酵母
、サル細胞（ＣＯ５細胞）、ハムスター、細菌など適当
な宿主にヒトＢＣ叶をコードする遺伝子を適当なヘクタ
ーを用いて形質転換された株を培養することにより、生
産、更には精製したヒトＢＣＤＦを用いてもよい。

なお、これらの製造法の詳細については特開昭６１−１
１５０２４、特開昭６３−４２６８８、特開昭６３−５
６２９１号公報及び特開昭６３１５７９９６を参考にさ
れたい。

〔効　果〕

本発明のヒトＢＣ叶を有効成分として含有する制癌療法
支持剤は放射線療法後、化学療法後筒制癌療法後の末梢
血及び／または臓器中の免疫・血液学的機能を回復させ
、内因性悪染閑の増殖を抑制する作用を示す。すなわち
強力制癌療法時の副作用を抑制し、延命作用を有する事
により強力制癌療法を可能とする。よって癌、Ｑ者の治
療に有効である。

以下、本発明を実施例に基づいて説明する。

［実施例エ　ヒトＢＣＤＦの製剤化］ ヒトＢＣＤＦまたはヒトＡｌａ−ＢＣＤＦのＨＰ　Ｌ　
Ｃ画分（５０〜６０％アセトニトリル溶液０．１％ＴＦ
八含有へをゲルが過性によりＰＢＳ溶液に置換した。こ
れに２０％ヒト血清アルブミン液（ナトリウム３．３■
／　ｍ　１、塩素３．１ｍｇ／ｍ＋２、カプリル酸ナト
リウム２．６５９■／　ｍ　ｌ、アセチルトリプトファ
ンナトリウム４．２９２５■／ｍ７！含有）を適量添加
し、無菌を濾過し、“ヒトＢＣＤＦ製剤”とした。マウ
ス投与用にはヒト血清アルブミンに代え、マウス血清ア
ルブミンまたはマウス血清を用いた製剤も作成した。以
下の実施例についてはこれも“ヒトＢＣＤＰ製剤”と記
す。

［実施例２　ヒトＢＣＤＦ製剤投与による放射線照射マ
ウスの免疫血液学的回復効果］ ヒトＢＣ叶製剤７０μｇまたは対照としてヒト血清アル
ブミン７０μｇを充填したミニ浸透圧ポンプ（アルザ社
製、モデル２００１）を、Ｘ線４．０Ｇｙ（０，５Ｇｙ
／分）を照射したＤＢＡ／２マウス（雌性１０週令）各
１８匹の皮下に埋めこみ７日間徐放投与した。

まず、経時的に各群から血液を採血し、血球数を自動血
球計数装置（東亜医用電子型、モデルに１０００）に測
定したところ、第１表に示すように、ヒ１−ＢＧ叶製剤
投与群において、照射後ｌＯ〜１５日目に有日日白血球
数の回復の促進が認められた。

また血液塗床標本をメイーグリュンワルドーギムザ染色
し分画を測定したところ白血球のうち、特に顆粒球と骨
髄法等の幼若球の増加が認められた。

なお赤血球数は大差なく、血小板数はヒ）ＢＣＣ調製剤
投与増加していた。

また照射後７日目の肺臓中の各種造血前駆細胞数につい
ても検討した。

幹細胞（ＣＦＶ−５）数はＴｉ１ｌ　らの牌コロニー形
成法（Ｒａｄ、　Ｒｅｓ、　１４．２１３（１９６１）
）で、多分化能幹細胞（ＣＦＵ−ＧＥＭ）、顆粒球マク
ロファージ前駆細胞（ＣＦ［Ｉ−Ｇ旧、赤芽球前駆細胞
（未熟型、　　ＢＦＵ−Ｅ、成熟型；　ＣＦＵ−Ｅ）数
は２．５％ポークウィードマイトゲン刺激マウス牌臓細
胞培養上清及び２単位／ｍ４エリスロボエチン添加での
メチルセルロース法（造血幹細胞実験法、中外医学社（
１９８６））で、巨核球前駆細胞（ＣＦＵ−Ｍｅｇ）数
はフィブリン・クロ。

ト法で培養後アセチルコリンエステラーゼ染色を行ない
（Ｅｘｐ、ｌｌｅｍａｔｏｌ、、　　１５．８９６　（
１９８７）　）測定した。第２表に示すように造血前駆
細胞数の回復もヒ）　ＢＣＤＦ製剤投与群において有意
に認められた。

この回復促進効果は投与１００日目も認められた。

また骨髄細胞でも同様に認められた。

さらに放射線照射当日にｌＸｌ０６個の羊赤血球（ＳＲ
ＢＣ）を抗原として感作し、照射後７日目の肺臓の抗５
ＲＢＣ抗体産生能をＪ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、＋　１４Ｌ
３０７２　（１９８８）の方法で測定したところ第３表
に示すように、ヒ）　ＢＣＤＦ製剤投与群で有意な抗体
産生能の増強がＩｇＭ、　ＩｇＧ両サブクラスとも認め
られた。

また照射後１４４日目血清中の抗５ＲＢＣ抗体価もヒト
ＢＣ叶製剤投与により約４倍に増加した。

ＩｇＭ　　　　　　　　　１４５±２８　　”　　　　
　　　　２１±１＊：５％危険率で有意差有り 以上ヒ）　ＢＣＤＦ製剤投与は放射線照射マウスの白血
球数、造血前駆細胞数、抗体産生細胞数等の回復を促進
した。

［実施例３　ヒ）　ＢＣＤＦ製剤投与による大量放射線
照射マウスへの延命効果１ ＤＢ八へ２マウス（雌性、９週令、体重１９〜２２ｇ）
１０匹にＸ線１０．５Ｇｙ　（０，５Ｇｙ／分）を照射
した後ヒ）　ＢＣＤＦ製剤（１Ｇｙｇ／日）または対照
として１００℃４０分間加熱処理し失活させた変性ヒト
ＢＣＤＦ製剤（１Ｇｙｇ／日）を、７日間、皮下徐放投
与し、延命効果を検討した。

第４表に示すように、対照群に比し、ヒｈ　ＢＣＤＦ製
剤投与は有意な延命効果を示した。

第４表 ５−ＦＵ　（協和醗酵製、１５０■／ｋｇ）を静脈注射
し約５時間後のＤＢＡ／２マウス（雌性、１００週令各
２４匹の皮下に埋めこみ７日間徐放投与（１０μｇ／マ
ウス７日）した。経時的に各臓器について検討したとこ
ろ、ヒトＢＣＤＦ製剤投与により、第５表に示すように
５−ＦＵ投与後９日日日肺臓細胞の増加（牌重量の増加
）が認められた。肺臓細胞の遠心塗抹標本を作成し、メ
イーグリュンワルトーギムザ染色を行った結果、顆粒球
・単球系細胞の増加が認められた。

ヒトＢＣＤＦ製剤投与群 対　　　照 ＋ １６２±２３１ ［実施例４　ヒｌ−ＢＣＤＦ製剤投与による５−ＦＵ投
与マウスの免疫血液学的回復効果］ ヒトＢＣＤＦ製剤７０μｇ　（３５，０００ｉ位）また
は対照としてヒト血清アルブミン７０μｇを充填したミ
ニ浸透圧ポンプ（アルザ社製、モデル２００１）をさら
に肺臓中の造血幹細胞（ＣＦｔｌ−５）、顆粒球・単球
系造血前駆細胞（ＣＦＵ−、ＧＭ）数を特願６３−３１
０５７８及びＢｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒ
ｅｓ、Ｃｏｍｍ、。

旦虹９３３　（１９８９）の方法で測定したところ、５
−ＦＵ投与後５〜９日目の早期でも、ヒ）　ＢＣＤＦ製
剤投与群で回復の促進がごめられた。（第６表）なお末
梢血では９〜１２日目に日日板の増加が見られた。

一方、５−ＦＵ投与当日に羊赤血球（ＳＲＢＣ）　　Ｉ
　Ｘ１０６〜１×１０ｓ個を投与し、肺臓ノ抗５ＲＢＣ
抗体（ＩｇＭ）産生能を経時的にＪ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ
、、　１４１＋３０７２　（１９８Ｂ）の方法で測定す
ると５日目以降でヒトＢＣＤＦ製剤投与群に有意に高い
抗体産生が認められた（第７表）。

以上のことよりヒ）　ＢＣＤＦ製剤投与は癌化学療法剤
投与により低下したマウスの免疫・血液学的機能の回復
を促進することが実証された。

［実施例５　ヒトＢＣ叶製剤投与による大１５−ＦＵ投
与マウスへの延命効果］ 強力制癌療法のモデルとしてＤＢＡ／２マウス（雌性、
１０週令）５１匹にＬＤｓ。を上回る、３００■／　ｋ
ｇの５−ＦＵを静脈注射した。実施例２の方法に従って
２８匹にヒ）　ＢＣＤＦ製剤、２３匹に対照としてヒト
血清アルブミンを７日間皮下徐放投与したところ第１図
に示すように対照投与群（２１日生存率２６％）に比し
、ヒトＢＣＤＦ製剤投与群は７５％が２１日以上生存し
た。この延命効果はＸ２検定にて危険率０．１％で統計
的に有意であった。

すなわちヒトＢＣＤＦ製剤は強力化学療法後のマウスに
対し延命効果を有する事が認められた。

［実施例６　ヒ１−ＢＣ叶製剤投与による感染防御効果
］ 実施例５に示した方法にて、５−ＦＵ、３００■／ｋｇ
を静脈注射したマウスに、ヒトＢＣ叶製剤または対照と
してヒト血清アルブミンを投与した。

ヒ）　ＢＣＩ）Ｆ製剤投与群と対照投与群の生存率に有
意差があられれる直前の投与７日目〜９日目に両群の肝
臓及び肺臓をホモジネートし、臓器中の感染菌数を寒天
コロニー法にて測定したところ、いずれの群も大腸菌の
内因性感染を発症していたが、ヒ）ＢＣＣ製製剤投与群
おいては大腸菌数が対照群の１０％以下に制御された。

この時投与９臼目のマウス血清中の大腸菌に対する抗体
（ＩｇＧ）ｔを大腸菌破砕抗原を固相としたサンドイッ
チＥＬＩＳＡ法で常法に従い測定したところ、ヒＩ−Ｂ
Ｃ叶製剤投与群の方が約３２倍高い抗大腸菌抗体価を示
した（ヒ）　ＢＣＤＦ製剤投与群：　２０４Ｂ単位、対
照群＝３２単位；標準抗大腸菌血清を１単位とする）。

さらにマウス血清を最終濃度１０％添加した培地１００
μβ中で分離した大腸菌を１６時間培養後、生存菌数を
コロニー法で測定すると、正常マウスまたは対照投与群
マウス血清添加に比し、ヒ）　ＢＣＤＦ製剤投与マウス
血清添加にて菌の増殖は約２０％に制御された（ヒ）　
ＢＣＤＦ投与群投与製血清添加３、対照投与群血清添加
２７．２（倍、Ｘｌ０−’））。

一方、ヒトＢＣ叶製剤投与により、臓器中の活性酸素産
生能も光道した。すなわち正常マウス肺臓細胞を常法に
従いホルボールミリステートアセテート刺激し、ルミノ
ールを用いた化学発光法にて発光強度を測定したところ
、ヒ）　ＢＣＤＦ製剤投与マウスでは肺臓細胞数の増加
とともに、単位細胞当りの発光強度も２倍以上増加した
（ヒトＢＣ叶製剤：１６５±２１、対照投与７５±３１
／１０’牌細胞）。

この効果は正常マウスのみならず、放射線療法、化学療
法後のマウスに対しても同様であった。

以上ヒ）　ＢＣＤＦ製剤の投与は特異的抗体産生及び活
性酸素産生の光道を誘導し、強力制癌療法後の内因性感
集菌の増殖を抑制した。

【図面の簡単な説明】

第１図はヒ）ＢＣＣ調製剤投与５−ＵＰ大量投与マウス
に対し延命効果を示す事を示す図面である。 第１図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）ヒトＢ細胞分化因子（以下ヒトＢＣＤＦと記す）を
   有効成分とする制癌療法支持剤。 ２）ヒトＢＣＤＦが下記のアミノ酸配列（ I ）を有す
   るものである請求項第（１）項記載の支持剤。 ￥アミノ酸配列（ I ）：￥ ＰｒｏＶａｌＰｒｏＰｒｏＧｌｙＧｌｕＡｓｐＳｅｒＬ
   ｙｓＡｓｐＶａｌＡｌａＡｌａＰｒｏＨｉｓＡｒｇＧｌ
   ｎＰｒｏＬｅｕＴｈｒＳｅｒＳｅｒＧｌｕＡｒｇＩｌｅ
   ＡｓｐＬｙｓＧｌｎＩｌｅＡｒｇＴｈｒＩｌｅＬｅｕＡ
   ｓｐＧｌｙＩｌｅＳｅｒＡｌａＬｅｕＡｒｇＬｙｓＧｌ
   ｕＴｈｒＣｙｓＡｓｎＬｙｓＳｅｒＡｓｎＭｅｔＣｙｓ
   ＧｌｕＳｅｒＳｅｒＬｙｓＧｌｕＡｌａＬｅｕＡｌａＧ
   ｌｕＡｓｎＡｓｎＬｅｕＡｓｎＬｅｕＰｒｏＬｙｓＭｅ
   ｔＡｌａＧｌｕＬｙｓＡｓｐＧｌｙＣｙｓＰｈｅＧｌｎ
   ＳｅｒＧｌｙＰｈｅＡｓｎＧｌｕＧｌｕＴｈｒＣｙｓＬ
   ｅｕＶａｌＬｙｓＩｌｅＩｌｅＴｈｒＧｌｙＬｅｕＬｅ
   ｕＧｌｕＰｈｅＧｌｕＶａｌＴｙｒＬｅｕＧｌｕＴｙｒ
   ＬｅｕＧｌｎＡｓｎＡｒｇＰｈｅＧｌｕＳｅｒＳｅｒＧ
   ｌｕＧｌｕＧｌｎＡｌａＡｒｇＡｌａＶａｌＧｌｎＭｅ
   ｔＳｅｒＴｈｒＬｙｓＶａｌＬｅｕＩｌｅＧｌｎＰｈｅ
   ＬｅｕＧｌｎＬｙｓＬｙｓＡｌａＬｙｓＡｓｎＬｅｕＡ
   ｓｐＡｌａＩｌｅＴｈｒＴｈｒＰｒｏＡｓｐＰｒｏＴｈ
   ｒＴｈｒＡｓｎＡｌａＳｅｒＬｅｕＬｅｕＴｈｒＬｙｓ
   ＬｅｕＧｌｎＡｌａＧｌｎＡｓｎＧｌｎＴｒｐＬｅｕＧ
   ｌｎＡｓｐＭｅｔＴｈｒＴｈｒＨｉｓＬｅｕＩｌｅＬｅ
   ｕＡｒｇＳｅｒＰｈｅＬｙｓＧｌｕＰｈｅＬｅｕＧｌｎ
   ＳｅｒＳｅｒＬｅｕＡｒｇＡｌａＬｅｕＡｒｇＧｌｎＭ
   ｅｔ３）ヒトＢＣＤＦが下記のアミノ酸配列（II）を有
   するものである請求項第（１）項記載の支持剤。 アミノ酸配列（II）： ＡｌａＰｒｏＶａｌＰｒｏＰｒｏＧｌｙＧｌｕＡｓｐＳ
   ｅｒＬｙｓＡｓｐＶａｌＡｌａＡｌａＰｒｏＨｉｓＡｒ
   ｇＧｌｎＰｒｏＬｅｕＴｈｒＳｅｒＳｅｒＧｌｕＡｒｇ
   ＩｌｅＡｓｐＬｙｓＧｌｎＩｌｅＡｒｇＴｙｒＩｌｅＬ
   ｅｕＡｓｐＧｌｙＩｌｅＳｅｒＡｌａＬｅｕＡｒｇＬｙ
   ｓＧｌｕＴｈｒＣｙｓＡｓｎＬｙｓＳｅｒＡｓｎＭｅｔ
   ＣｙｓＧｌｕＳｅｒＳｅｒＬｙｓＧｌｕＡｌａＬｃｕＡ
   ｌａＧｌｕＡｓｎＡｓｎＬｅｕＡｓｎＬｅｕＰｒｏＬｙ
   ｓＭｅｔＡｌａＧｌｕＬｙｓＡｓｐＧｌｙＣｙｓＰｈｅ
   ＧｌｎＳｅｒＧｌｙＰｈｅＡｓｎＧｌｕＧｌｕＴｈｒＣ
   ｙｓＬｅｕＶａｌＬｙｓＩｌｅＩｌｅＴｈｒＧｌｙＬｅ
   ｕＬｅｕＧｌｕＰｈｅＧｌｅＶａｌＴｙｒＬｅｕＧｌｕ
   ＴｙｒＬｅｕＧｌｎＡｓｎＡｒｇＰｈｅＧｌｕＳｅｒＳ
   ｅｒＧｌｕＧｌｕＧｌｎＡｌａＡｒｇＡｌａＶａｌＧｌ
   ｎＭｅｔＳｅｒＴｈｒＬｙｓＶａｌＬｅｕＩｌｅＧｌｎ
   ＰｈｅＬｅｌＧｌｎＬｙｓＬｙｓＡｌａＬｙｓＡｓｎＬ
   ｅｕＡｓＰＡｌａＩｌｅＴｈｒＴｈｒＰｒｏＡｓｐＰｒ
   ｏＴｈｒＴｈｒＡｓｎＡｌａＳｅｒＬｅｕＬｅｕＴｈｒ
   ＬｙｓＬｅｕＧｌｎＡｌａＧｌｎＡｓｎＧｌｎＴｒｐＬ
   ｅｕＧｌｎＡｓｐＭｅｔＴｈｒＴｈｒＨｉｓＬｅｕＩｌ
   ｅＬｅｕＡｒｇＳｅｒＰｈｅＬｙｓＧｌｕＰｈｅＬｅｕ
   ＧｌｎＳｅｒＳｅｒＬｅｕＡｒｇＡｌａＬｅｕＡｒｇＧ
   ｌｎＭｅｔ４）ヒトＢＣＤＦが糖鎖を有さないものであ
   る請求項第（１）項記載の支持剤。 ５）ヒトＢＣＤＦが原核生物で作られたものである請求
   項第（１）項記載の支持剤。 ６）制癌療法支持剤がヒトＢＣＤＦ以外に助剤として癌
   化学療法剤を１種類以上含有する事を特徴とする請求項
   第（１）項記載の支持剤。