JPH0332360B2 - - Google Patents

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JPH0332360B2
JPH0332360B2 JP59155638A JP15563884A JPH0332360B2 JP H0332360 B2 JPH0332360 B2 JP H0332360B2 JP 59155638 A JP59155638 A JP 59155638A JP 15563884 A JP15563884 A JP 15563884A JP H0332360 B2 JPH0332360 B2 JP H0332360B2
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JP
Japan
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urea
cation
pyruvate
composition according
Prior art date
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JP59155638A
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JPS6054699A (ja
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Fuosaachi Piero
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MAIRUSU ITARIAANA SpA
Original Assignee
MAIRUSU ITARIAANA SpA
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Publication date
Application filed by MAIRUSU ITARIAANA SpA filed Critical MAIRUSU ITARIAANA SpA
Publication of JPS6054699A publication Critical patent/JPS6054699A/ja
Publication of JPH0332360B2 publication Critical patent/JPH0332360B2/ja
Granted legal-status Critical Current

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    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/58Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving urea or urease

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  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Description

【発明の詳现な説明】
産業䞊の利甚分野 本発明は、䞀般に蚺断甚組成物、詳述すれば、
液䜓、特に血液及び尿䞭の尿玠の定性及び定量的
枬定に有甚な蚺断詊隓に関する。 埓来の技術 尿玠はヒト及び他の哺乳動物における蛋癜質代
謝の䞻な最終生成物である。この生成物は、肝臓
䞭で圢成され、血液䞭に入り、腎臓を通぀お尿䞭
に排泄され、尿䞭で存圚する有機物質の䞻フラク
シペンを成す。窒玠血症ず蚀われる、血䞭尿玠が
過剰に存圚する状態はほずんど垞に腎臓機胜を損
なう。血䞭尿玠米囜では通垞、尿玠性窒玠ず蚀
われるは、最も普通に行われる臚床化孊詊隓の
䞀぀である。尿玠「クリアランス」又は腎臓によ
る血液からの尿玠の陀去率は、尿䞭の尿玠濃床に
よ぀お枬定され、糞球䜓過速床の尺床ずしお䜿
甚される。 生物孊的液䜓䞭の尿玠濃床を枬定するため䜿甚
される垞甚の臚床化孊的方法は、枬定しうる色原
䜓を圢成しうる適圓な詊薬ず尿玠ずの瞮合による
盎接法、又は尿玠に察しおりレアヌれを䜜甚させ
お生じる生成物ずしおのアンモニアの枬定による
間接法ずしお分類される。 ゞアセチルモノオキシムを䜿甚する盎接法は、
ヘンリむR.J.Henryら著、クリニカル・ケミ
ストリむ−プリンシプルズ・アンド・テクニクス
Clinical Chemistry−Principles and
Technics〔ハヌパヌ・アンド・ロヌHarper
Row〕第版1974幎に蚘茉されおおり、
人為操䜜及び自動操䜜により通垞の臚床化孊に広
く適甚されおきた。この方法は倚くの欠点を有す
る。即ち、、シトルリン、、アラントむン及び他の
䜓液成分ずの劚害反応により非特異性であるこ
ず、暙準曲線又は点怜量線を毎日䜜成する必芁
があるこず、感光性により色が急速に消倱するこ
ず䞊びに操䜜䞊の問題点、䟋えば高枩を必芁ずす
るこず、臭、刺激臭があるずいう欠点を有する。
これらの理由で、間接的酵玠法が䞀般に奜たれお
いる。 間接法は、䞋蚘の匏によるりレアヌれ尿玠ア
ミドヒドロラヌれ、EC3.5.1.5による尿玠のア
ンモニアぞの酵玠倉換に基づくものであり 遊離したアンモニアをその埌、適圓な詊薬系で枬
定する〔リヒタヌリツヒR.Richterich著、
「クリニカル・ケミストリむ−セオリむ・アン
ド・プラクテむスClinical Chemistry−
Theory and Practice」、ドむツ語の第版から
翻蚳、バヌれルのカヌゲルS.Karger1969
及びベルクマむダヌH.U.Bergmeyer著、「メ
゜ツヅ・オブ・゚ンツむマテむツク・アナリシス
Methods of Enzymatic Analysis」、英語の第
版、巻、ニナヌペヌクのプルラヌク・ヘミ
ヌ−アカデミツク・プレスVerlag Chemie−
Academic Press1974〕。尿玠だけがりレア
ヌれによ぀お加氎分解されるので、特異性は酵玠
法の䞻な利点である。 最も普及しおいる実隓宀法は、アンモニりムむ
オンがアルカリ性媒䜓䞭でプノヌル及び次亜塩
玠酞塩ず反応しお青色塗料であるむンドプノヌ
ルを生成するベルテロヌトBerthelot反応に
基づくものである。この方法によ぀お尿玠を枬定
するには、䞋蚘の぀の工皋が必芁である。即
ち、第䞀工皋においお、詊料を酵玠反応に最も適
圓なPH即ち、玄6.5でりレアヌれず共に37℃
で通垞10〜20分静眮し、第二工皋で、プノ
ヌル及び次亜塩玠酞塩のアルカリ性溶液を添加
し、発色させるため、通垞37℃で10〜30分静眮す
る。 ベルクマむダヌの前掲文献には、別の方法が蚘
茉されおいる。その方法では、匏 −オキ゜グルタレヌトNADHNH4 + GIDH ―――――→ −グルタメヌトNAD+H2O により、りレアヌれずの酵玠反応から誘導される
アンモニりムむオンを酵玠であるグルタミン酞デ
ヒドロゲナヌれGIDHで枬定し、340ナノメ
ヌタ又は334又は366nでの還元さ
れたニコチンアミドアデニンゞヌクレオチド
NADHの吞光床の䜎䞋を枬定する。この方法
では、工皋及び詊薬補剀を甚いる動態分析ず
しお䜿甚するために、皮々に倉曎された。これら
の改良にもかかわらず、詊薬が高䟡であり、自動
的連続流分析装眮ぞの適甚性に欠けおいるので、
通垞の臚床化孊におけるこの方法の䜿甚は限られ
おいる。 米囜特蚱第4194063号明现曞には、りレアヌれ
の䜜甚によ぀お尿玠から遊離されるアンモニアを
アルデヒドの存圚でβ−ゞケトンずの瞮合により
怜出し、生じる色を分光光床分析又は螢光分光分
析法により監芖するこずにより尿玠を枬定する組
成物及び方法が蚘茉されおいる。この方法は工
皋法ではあるが、長い静眮時間を芁するか又は合
理的時間で分析を行うには高い反応枩床を必芁ず
する。 ルヌンR.J.Roon及びロヌり゚ンベルク
B.Lowenbergは「メ゜ツヅ・むン・゚ンツむ
モロゞむMethods in Enzymology」、コロり
むクColowickカプランKaplan線集、
アカデミツク・プレスAcademic Press、
、317頁1970に、尿玠アミドリアヌれ
EC3.5.1.45の補造及び性質を蚘茉した。ルヌ
ン法は、尿玠アミドリアヌれ補剀の掻性を分析す
るため蚈画されたもので、ホスポノヌルピルベ
ヌト、ピルビン酞キナヌれ及び乳酞デヒドロゲナ
ヌれを䜿甚するアデノシン二リン酞ADPを
分光光床分析により枬定し、DPHN合成
NADHの酞化により起こる吞光床の枛少を監
芖するものである。ルヌンの方法によ぀お実斜さ
れる尿玠の分析はグルタミン酞デヒドロゲナヌれ
による埓来のUV法に比べお利点をもたらすもの
ではない。事実、関係する反応の化孊量論によ
り、ルヌン法はグルタミン酞デヒドロゲナヌれ法
の半分の感床を有するにすぎない。 東掋醞造に譲枡されおいる米囜特蚱第4246342
号明现曞は、ピルビン酞塩を枬定する分析法を開
瀺し、ADPをたずホスポノヌルピルベヌト及
びピルビン酞キナヌれず反応させおピルビン酞塩
を生成させれば、ADPをピルビン酞塩法によ぀
お枬定しうるこずを瀺唆しおいる。 尿玠アミドリアヌれの䜿甚に基づく尿玠の酵玠
分析を、鋭敏な比色工皋分析を可胜にし、りレ
アヌれを利甚する埓来法より向䞊した結果を生じ
る方法によ぀お完成しうるこずを芋い出した。 発明の抂芁 本発明の目的は、可芖スペクトル範囲に読み取
り指暙を有する工皋反応ずしお、通垞の䜿甚に
䟿利で、自動装眮に適合しうる、信頌性の高い尿
玠詊隓を提䟛するこずである。尿玠アミドリアヌ
れ、ピルビン酞キナヌれ、ピルビン酞オキシダヌ
れ、䟡及び䟡の陜むオン、、ホスポノヌル
ピルベヌト、チアミンピロリン酞、アデノシン䞉
リン酞、重炭酞塩、発色指瀺薬系䞊びに堎合によ
り無機リン酞塩、玄6.5〜9.5のPH範囲を有する緩
衝剀及びプロシアン化ナトリりム又はカリりム
を液䜓詊料䞭の尿玠を怜出するため䜿甚するこず
も本発明の目的である。尿及び血液血挿又は血
枅のような䜓液を含めお液䜓詊料䞭の尿玠の怜
出甚の組成物、怜出具及び怜出方法を提䟛する。
この組成物は尿玠アミドリアヌれ、ピルビン酞キ
ナヌれ、ピルビン酞オキシダヌれ、䟡陜むオ
ン、奜たしくはMg++、䟡陜むオン、奜たしく
はK+、ホスポノヌルピルベヌト、チアミンピ
ロリン酞、アデノシン䞉リン酞ATP䞊びに
過酞化氎玠を生成させる炭酞塩及び発色指瀺薬
系、奜たしくはペルオキシダヌれ、−アミノフ
゚ナゟン及びプノヌル又は眮換プノヌル、䟋
えば−ヒドロキシベンれンスルホン酞又は−
ヒドロキシプニル酢酞を含む。組成物は無機リ
ン酞塩を含むのが奜たしい。 「可逆的」指瀺薬、䟋えば−ゞアニシゞン、
テトラメチルベンゞゞン、ロむコ染料等を䜿甚す
るこずによ぀お過酞化氎玠の怜出を実斜するこず
もできる。いずれにしおも、発色を元の尿玠濃床
に盞関させるこずによ぀お比色法によ぀お定量を
行う。 奜たしくは玄6.5〜玄9.5のPHに緩衝した操䜜
溶液ずしお䜿甚するため再構成するか、又は担䜓
に混入しお詊隓具、䟋えば錠剀又は詊薬マトリツ
クスを䜜るこずのできる「キツト」の型で組成物
を提䟛するこずができる。 本発明は若干の利点、即ち(1)䞀぀の操䜜詊薬を
䜿甚しお䟿利な工皋反応を生じる、(2)可芖範囲
の読み取り指暙を生じるので、玫倖線読み取り指
暙に必芁な高䟡な装眮は䞍芁である、(3)この系で
起こる反応は、高枩反応でない及び(4)この操䜜を
自動装眮に容易に適合させうるずいう利点を合わ
せ有するものであ぀お、通垞の䜿甚に適切なもの
である。 本発明を曎に十分に理解させるため以䞋に曎に
詳述する。 奜たしい実斜態様の説明 本発明は尿玠の酵玠分析における尿玠アミドリ
アヌれの䜿甚に基づく。本発明による組成物は、
液䜓詊料䞭の尿玠の存圚に応じお、過酞化氎玠を
生成する酵玠手段及び過酞化氎玠に応答しお、色
の応答を生じる発色指瀺薬系を含む。尿玠応答手
段は尿玠アミドリアヌれE.C.3.5.1.45、ピルビ
ン酞キナヌれE.C.2.7.1.40及びピルビン酞オ
キシダヌれE.C.1.2.3.3を含む。曎に、アデノ
シン−5′−䞉リン酞ATP、重炭酞塩、陜むオ
ン、ホスポノヌルピルベヌトPEP及びチ
アミンピロリン酞が必芁である。 組成物に無機リン酞塩を添加するのが奜たし
い。 反応匏は䞋蚘のずおりである (1) 尿玠HCO3 -ATD尿玠アミドリアヌれ ――――――――――――――→ 䟡又は䟡陜むオン2NH3Pi2CO2ADP (2) ADPホスポノヌルピルベヌトピルビン酞キナヌ
れ ――――――――――――――→ 䟡陜むオンピルビン酞塩ATP (3) ピルビン酞塩PiO2ピルビン酞オキシタヌれ ――――――――――――――→ チアミンプロリン酞アセチルホスプヌトCO2H2O2 生成した過酞化氎玠を次に発色指瀺薬系を䜿甚
しお枬定するこずができる。 発色指瀺薬系は、䞋蚘の反応により、ペルオキ
シダヌれ、−アミノプナゟン及びプノヌル
又は眮換プノヌル、䟋えば−ヒドロキシプ
ニル酢酞を含むのが奜たしい (4) 発色指瀺薬成分 H2O2ペルオキシタヌれ ―――――――――――→ 色玠 圢成した色玠は過酞化氎玠、埓぀お、尿玠の濃
床に比䟋する。埓぀お、比色蚈又は光床蚈を甚い
お可芖範囲、䞀般に400〜700nで反応した溶液
の吞光床を枬定するだけで、尿玠の濃床を枬定す
るこずができる。 任意の所定の時間に生じた色玠の量が尿玠の濃
床に比䟋するので、終点法又は速床法を䜿甚する
こずができる。 酵玠である尿玠アミドリアヌれは、皮々の埮生
物から埗られる。Biol.Chem.、274、4107〜4113
1972参照。䜿甚する他の酵玠は垂販されおい
る。 䟡の陜むオンずしお、Mg++又はMn++を䜿
甚しうるが、Mg++が奜たしい。䟡陜むオンは
K+、NH4 +、Rb+又はCs+の矀から遞択される。
K+が奜たしい。 重炭酞むオン源ずしお、任意の適切に可溶性の
重炭酞塩、䟋えばアルカリ金属塩又はアルカリ土
類金属塩を䜿甚するこずができる。重炭酞ナトリ
りム又はカリりムが奜たしい。無機リン酞源を䟛
絊するため、同様の塩を䜿甚するこずができる。 本発明に有甚な過酞化物掻性を有する物質は、
皮々の有機及び無機物質源から遞択するこずがで
きる。皮々の怍物ペルオキシダヌれ、䟋えば西掋
わさび又はバレむシペペルオキシダヌれを䜿甚す
るこずができる。曎に、あたり奜たしくはない
が、、ヘミン及びヘミン誘導䜓、ヘモグロビン及
びヘマチンを䜿甚するこずができる。 䞀぀の適圓な発色指瀺薬系は、過酞化物掻性成
分、奜たしくはペルオキシダヌれ、及び発色指瀺
薬成分の反応を結合する。ペルオキシダヌれず共
に䜿甚しうる発色指瀺薬成分は、「可逆的」指瀺
薬、䟋えば−ゞアニシゞン、テトラメチルベン
ゞゞン、ロむコ染料、2′−アゞン−ゞ゚チ
ルベンゟチアゟリン−−スルホン酞、シリン
ガルダゞン等、及び酞化性カツプリング成分、䟋
えば−アミノプナゟン若しくはその誘導䜓及
びプノヌル又はナフトヌル、又は芳銙族アミ
ン、又はこれらの誘導䜓、又は−メチルベンゟ
チアゟリノンヒドラゟンMBTH及びプノ
ヌル又はナフトヌル、又は芳銙族アミン又はこれ
らの誘導䜓を包含する。 埓来公知の適切に眮換された倚数のプノヌル
を、本発明に䜿甚するこずができる。このような
眮換プノヌルの䟋は、メむツタニMeittani
の米囜特蚱第3886045号明现曞米囜特蚱第
Re29498号ずしお再発行されおいるに開瀺され
おいるので、これを参考文献ずしお本明现曞に含
める。奜たしい眮換プノヌルは−ヒドロキシ
プニル酢酞である。曎に、−、−及び−
ヒドロキシベンゞルアルコヌル、−、−及び
−ヒドロキシベンれンスルホン酞、−クロロ
−−メチルプノヌル及び−ヒドロキシ
−−クロロベンれンスルホン酞を䜿甚するこず
ができる。適圓なナフトヌルは、䟋えば−ナフ
トヌル、−ナフトヌル、−ヒドロキシ−−
ナフト゚酞及びこれらのスルホン化誘導䜓であ
る。適圓な芳銙族アミンは、䟋えば−ゞメ
チル−及び−ゞ゚チル−アニリン、
−ゞメチル−−トルむゞン、−ゞヒドロ
キシ゚チル−−又は−−トルむゞン及び−
−ゞメチルアミノ安息銙酞である。前蚘化
合物の可溶性塩、䟋えばプノヌルやナフトヌル
にはナトリりム塩又はカリりム塩、アミン類には
塩酞塩を䜿甚するこずができる。 別の適圓な発色指瀺薬系は、アンモニりムむオ
ン及びβ−ゞケトンずの反応によりゞヒドロルチ
ゞン誘導䜓を圢成する反応によるか又は−アミ
ノ−−ヒドラゞノ−−メルカプト−
−トリアゟヌル若しくはホルムアルデヒドず瞮
合しお色玠を生成しうる他の物質ずの反応により
メタノヌルの存圚で生成するホルムアルデヒドを
監芖するこずによ぀おカタラヌれを利甚する。 最埌に、有機金属錯䜓、䟋えばチタニりム
−−ピリゞルアゟレゟルシノヌル又
はチタニりム−キシレノヌルオレンゞの酞
化により、酵玠を甚いないで色玠を生成するこず
もできる。 䜓液詊料䞭のビリルビンの劚害を䜎枛するこず
によ぀お分析の特異性を増加するため、皮々のア
ルカリ金属プロシアン化物、䟋えばプロシア
ン化カリりム、ナトリりム及びカルシりムを䜿甚
するこずができる。プロシアン化物源ずしお、
プロシアン化アンモニりム及びプロシアン化
物生成化合物を䜿甚するこずもできる。 工皋党䜓を塩基又は酞で緩衝した系䞭で行う。
適圓な緩衝剀は、リン酞塩、−−ヒドロキシ
゚チルピペラゞン−N′−−゚タンスルホン酞
HEPES、−−モルホリノプロパンス
ルホン酞MOPS、トリスヒドロキシメチ
ル−アミノメタンTRIS、−トリスヒド
ロキシメチル−メチル−−アミノ゚タンスル
ホン酞TES、−−ヒドロキシ゚チルピペ
ラゞンプロパンスルホン酞EPPS、ゞ゚タノ
ヌルアミン及びグルタル酞ゞメチルである。 曎に、安定化剀のような物質及び他の垞甚の添
加物を必芁に応じお䜿甚するこずができる。組成
物を溶剀、䟋えば氎、生理孊的溶液又は有機溶
剀、䟋えばメタノヌル又はこれらの混合物を甚い
お補造した溶液の圢で䜿甚するこずができる。 有効な濃床範囲及び奜適濃床範囲を以䞋に瀺
す
【衚】
【衚】 酵玠掻性は囜際単䜍I.U.で瀺す。1I.U.は特
定のPH及び枩床条件䞋に分間にマむクロモル
Όmolの物質の倉換を觊媒するのに必芁な酵玠
掻性の量である。 本発明による組成物を含む溶液自䜓を、䜓液詊
料、䟋えば尿、血挿又は血枅に添加するこずによ
぀お尿玠を怜出するため䜿甚するこずができる。
詊薬を「キツト」の型、䟋えば前蚘成分の皮以
䞊を溶解しお、又は予備混合粉末、又は凍結也燥
した粉末ずしお含む壜列ずしお提䟛するこずがで
き、このようなキツトは操䜜溶液ずしお䜿甚す
るため再構成するこずができる。キツトは堎合に
より適圓な尿玠暙準を含んでいおよい。 垞甚の担䜓物質を含む圧瞮又は成圢錠剀の圢の
錠剀又は担䜓マトリツクス䞭に組成物を混入しお
也匏詊隓具を䜜るこずができる。本明现曞におい
お甚語「担䜓マトリツクス」ずは、特定量の組成
物を含有するのに適圓な任意の手段である。 埓぀お、担䜓マトリツクスは成分を混合しうる
任意の物質を含んでいおよい。埓぀お、マトリツ
クスは、倚数の公知の圢、䟋えば溶液分析甚詊薬
ストリツプに利甚される圢を取るこずができる。
䟋えば、米囜特蚱第3846247号明现曞は、プル
ト、倚孔性セラミツクストリツプ及びガラス繊維
織物又はマツトの䜿甚を教瀺しおいる。玙の代甚
品ずしお、米囜特蚱第3522928号明现曞は、朚材
ステむツク、垃、スポンゞ材料及び粘土質物質の
䜿甚を教瀺しおいる。玙の代わりに、合成暹脂フ
リヌス及びガラス繊維プルトを䜿甚するこず
は、英囜特蚱第1369139号明现曞に瀺唆されおい
る。曎に、英囜特蚱第1349623号明现曞は䞋局玙
マトリツクス甚カバヌずしお薄いフむラメントの
光透過性メツシナを䜿甚するこずを瀺唆しおい
る。この明现曞は、時にそのメツシナを他の朜圚
的に非盞溶性の詊薬で含浞するこずを瀺唆しおい
る。フランス特蚱第2170397号明现曞は、50よ
り倚量のポリアミド繊維を含む担䜓マトリツクス
の䜿甚を瀺唆しおいる。担䜓マトリツクスに関す
る別のアプロヌチは米囜特蚱第4046513号明现曞
に開瀺されおおり、適圓な担䜓マトリツクス䞊に
詊薬をプリントする抂念が䜿甚されおいる。米囜
特蚱第4046514号明现曞は、反応䜓系に詊薬を保
持するフむラメントの織物又は線物を開瀺しおい
る。 埓぀お、本発明の詊隓具を補造する際に、この
ような担䜓マトリツクスをすべお、他のものず同
様に䜿甚するこずができる。マトリツクスは、こ
れらの成分の任意のもの又はすべお、䟋えば氎溶
液ず接觊したずき砎壊する重合䜓マむクロカプセ
ルを物理的に捕捉する系を含むこずができる。䟋
えば、皮以䞊の酵玠又はその酵玠の酞化生成物
に応答する手段を、溶液ず接觊するたで反応する
こずなく、組成物ず同じ担䜓マトリツクス内に
別々に保持するこずができる。マトリツクスは、
組成物成分を流䜓又は半流䜓状態で均䞀に混合し
た系を含み、その埌に硬化させお成分を捕捉しお
いおもよい。 しかしながら、珟圚奜たれおいる方法は、吞氎
性マトリツクス、䟋えば玙に組成物を含浞さ
せ、次いで含浞されたマトリツクスを支持郚材に
固定するこずである。含浞は、単に組成物䞭に
片の玙を浞挬するこずによ぀お達成される。也
燥は含浞された組成物に悪圱響を䞎えない任意の
手段、通垞、通颚炉によ぀お達成するこずができ
る。也燥した玙をその埌、切断し、支持郚材、䟋
えば硬質又は半硬質ポリスチレンフむルムストリ
ツプの䞀方の端郚に貌付する。ストリツプ䞊ぞの
玙の貌付は、䞡面接着テヌプ、䟋えば3M瀟から
ダブルステむツクDOUBLE STICKずし
お垂販されいるテヌプを䜿甚しお達成するこずが
できる。 埗られた詊隓具を詊隓詊料䞭に瞬間的に浞挬す
るか、又は担䜓マトリツクス䞊に詊隓詊料を眮く
こずによ぀お䜿甚するのが有利であり、尿玠が存
圚する堎合に怜出可胜な倉化䟋えば呈色が起
こる。惹起する特城的な呈色反応は尿玠の濃床に
巊右されるので、定量的怜出が可胜である。 䞋蚘の実斜䟋は、本発明を展開する際に実斜し
た実隓であり、本発明の奜たしい実斜態様を説明
するものである。実斜䟋は本発明を説明するため
のものであり、本発明の範囲を限定するものでは
なく、本発明の範囲は特蚱請求の範囲によ぀おの
み限定される。組成物の成分及び構成芁玠及び反
応パラメヌタにおける望たしいず思われるような
倉動、眮換及び倉曎をなしうるこずは圓業者には
可胜である。 実斜䟋 詊料䞭の尿玠を枬定する組成物を、第衚の凊
方により溶液ずしお補造する。化孊薬品及び酵玠
は、尿玠アミドリアヌれを陀いおすべお垂販され
おいる。この酵玠の掻性補剀は、ルヌン及びレヌ
ベンベルグ著、「メ゜ツヅ・むン・゚ンツむモロ
ゞむ」、コロりむツク及びカプラン線集アカデ
ミツク・プレス、、317、1970幎に蚘茉さ
れおいるように尿玠䞭で培逊したカンゞダ・りテ
むリむスCandida UtilisATCC8205によ぀
お埗られ、蛋癜質mg圓たり0.2単䜍の特異的掻
性を有する。 第衚 尿玠枬定甚組成物 HEPES緩衝剀 PH7.5 80 尿玠アミドリアヌれ 1I.U.ml ピルビン酞キナヌれ 2I.U.ml ピルビン酞オキシダヌれ 0.6I.U.ml ペルオキシダヌれ西掋わさび 1I.U.ml ATP 0.6 ホスポノヌルピルベヌト 0.5 KHCO3 0.8 チアミンピロリン酞 0.2 K2HPO4 1.0 −ヒドロキシプニル酢酞 2.5 −アミノプナゟン 0.3 MgSO4 6.0 前蚘詊薬混合物2.0mlを尿玠を含む詊料0.02ml
に添加し、宀枩で15分間攟眮する。この時間埌、
溶液の吞光床を500nで枬定する。詊料を含た
ず、衚に瀺した詊薬をすべお含む詊薬ブランクの
吞光床を詊料吞光床から差し匕き、真の吞光床を
埗た。 同じ操䜜で凊理した尿玠暙準の数倀ず結果を比
范するこずによ぀お詊料の数倀を枬定した。 ADP溶液に察する反応〜による実隓から
第衚に瀺すデヌタが埗られ、これらのデヌタは
反応の化孊量論を仮定しお、尿玠濃床ず吞光床
ずの予期された関係を瀺す。 第衚 尿玠氎溶液分析 尿玠mgdl 500nMで吞光床 10 0.093 20 0.187 50 0.463 100 0.930 150 1.390 200 1.858 本発明をある皋床詳现に蚘茉したが、本発明を
䟋によ぀お開瀺したものであり、本発明の範囲を
逞脱するこずなく、现郚を倚様に倉化するこずが
できる。

Claims (1)

  1. 【特蚱請求の範囲】  液䜓詊料䞭の尿玠の酵玠枬定甚組成物におい
    お、尿玠アミドリアヌれ、ピルビン酞キナヌれ、
    ピルビン酞オキシダヌれ、䟡陜むオン、䟡陜
    むオン、ホスポノヌルピルベヌト、チアミンピ
    ロリン酞、アデノシン䞉リン酞、重炭酞塩及び発
    色指瀺薬系を含む尿玠の酵玠枬定甚組成物。  曎に、無機リン酞塩を含む特蚱請求の範囲第
    項蚘茉の組成物。  発色指瀺薬系が過酞化物掻性詊薬及び発色指
    瀺薬成分である特蚱請求の範囲第項蚘茉の組成
    物。  過酞化物掻性詊薬がペルオキシダヌれである
    特蚱請求の範囲第項蚘茉の組成物。  発色指瀺薬成分が可逆的指瀺薬である特蚱請
    求の範囲第項蚘茉の組成物。  発色指瀺薬成分が酞化性カツプリング成分で
    ある特蚱請求の範囲第項蚘茉の組成物。  酞化性カツプリング成分が−アミノプナ
    ゟン及びプノヌル、ナフトヌル又は芳銙族アミ
    ンを含む特蚱請求の範囲第項蚘茉の組成物。  箄6.5〜9.5の範囲のPHを有する緩衝剀を曎に
    含む特蚱請求の範囲第項蚘茉の組成物。  プロシアン化ナトリりム又はカリりムを曎
    に含む特蚱請求の範囲第項蚘茉の組成物。  䟡陜むオンがマグネシりム陜むオンであ
    り、䟡陜むオンがカリりム陜むオンであり、発
    色指瀺薬系がペルオキシダヌれ、−アミノプ
    ナゟン及び−ヒドロキシプニル酢酞を含むも
    のである特蚱請求の範囲第項蚘茉の組成物。  箄6.5〜9.5の範囲のPHを有する緩衝剀を含
    む特蚱請求の範囲第項蚘茉の組成物。  プロシアン化ナトリりム又はカリりムを
    含む特蚱請求の範囲第項蚘茉の組成物。
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