JPH0347085A - ２―デオキシウリジンの製法 - Google Patents
２―デオキシウリジンの製法Info
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- JPH0347085A JPH0347085A JP2069525A JP6952590A JPH0347085A JP H0347085 A JPH0347085 A JP H0347085A JP 2069525 A JP2069525 A JP 2069525A JP 6952590 A JP6952590 A JP 6952590A JP H0347085 A JPH0347085 A JP H0347085A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は２−デオキシウリジンの製造方法、及びその製
造に用いられる新規菌株に関する。
造に用いられる新規菌株に関する。
２−デオキシウリジンは、治療薬として有用な組成物の
ための核として使用しうる。それは下記の構造を有する
。
ための核として使用しうる。それは下記の構造を有する
。
我々の公告欧州特許出願第３４４９３７号において、我
々は、米国特許第３５８６６０６号明細書に述べられて
いる菌株ＡＴＣＣ１９３９０からの新規なブレビバクテ
リウム菌株ＮＣＩＭＢ４００１４の製造について記載し
た。ＮＣＩＭＢ４００１４はデオキシリボヌクレオシド
及び／またはその対応する塩基チミンの製造のための発
酵プロセスにおいて使用できる。
々は、米国特許第３５８６６０６号明細書に述べられて
いる菌株ＡＴＣＣ１９３９０からの新規なブレビバクテ
リウム菌株ＮＣＩＭＢ４００１４の製造について記載し
た。ＮＣＩＭＢ４００１４はデオキシリボヌクレオシド
及び／またはその対応する塩基チミンの製造のための発
酵プロセスにおいて使用できる。
本発明によれば、我々は、ブレビバクテリウム（Ｂ ｒ
ｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の２−デオキシウリジン
産生菌株を、資化性炭素源及びその他の栄養を含む培地
中で適当な培養条件下で好気培養し；産生される２−デ
オキシウリジンをその培地中に直接に蓄積し７しかる後
にその産生及び蓄積された２−デオキシウリジンを培地
から分離する；ことからなる２−デオキシウリジンの製
法を提供する。
ｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の２−デオキシウリジン
産生菌株を、資化性炭素源及びその他の栄養を含む培地
中で適当な培養条件下で好気培養し；産生される２−デ
オキシウリジンをその培地中に直接に蓄積し７しかる後
にその産生及び蓄積された２−デオキシウリジンを培地
から分離する；ことからなる２−デオキシウリジンの製
法を提供する。
ブレビバクテリウム属の適宜な菌株が本発明方法におい
て使用されうるが、プレビバクテリウｌ、ヘルボルム（
ｈｅｌｖｏｌｕｍ）種の２−デオキシウリジン産生株が
好ましい。殊に適当な菌株はこの明細書の実施例１に詳
しく記載されている方法によってブレビバクテリウム・
ヘルボルムＮＣＩ ＭＢ４００１４から誘導されるし一
１７菌株である。
て使用されうるが、プレビバクテリウｌ、ヘルボルム（
ｈｅｌｖｏｌｕｍ）種の２−デオキシウリジン産生株が
好ましい。殊に適当な菌株はこの明細書の実施例１に詳
しく記載されている方法によってブレビバクテリウム・
ヘルボルムＮＣＩ ＭＢ４００１４から誘導されるし一
１７菌株である。
菌株ＡＴＣＣ１９３４０（このものは、発酵により２−
置換−６−ヒドロキシプリン類のリボチドを産生ずる方
法を開示している米国特許第３５８６６０６号明細書に
記載されている）からの菌株ＮＣＩＭＢ ４００１４
の誘導は、我々の公告欧州特許出願第３４４９３７号明
細書に詳しく記載されている。もう一つの適当な菌株も
菌株ＡＴＣＣ１９３９０から誘導された、ブレビバクテ
リウム・ヘルボルム薗株の２．９７７である。菌株Ｌ−
１７及び２．９７７は培養物は、１９８９年２月２１日
に英国スコツトランド、ＡＢ２ １ＲＹ、アバ−デイン
、２３ Ｓｔマチャン・ドライブの「ザ・ナショナル
・コレクションズ・オブ・インダストリアル・アンド・
マリン・バクテリアＬｔｄ、」に寄託され、それぞれ受
託番号ＮＣＩＭＢ４０１１７及びＮＣＩＭＢ ４０１
１６が与えられている。菌株ＮＣＩＭＢは、１９８８年
４月２８日に寄託されている。
置換−６−ヒドロキシプリン類のリボチドを産生ずる方
法を開示している米国特許第３５８６６０６号明細書に
記載されている）からの菌株ＮＣＩＭＢ ４００１４
の誘導は、我々の公告欧州特許出願第３４４９３７号明
細書に詳しく記載されている。もう一つの適当な菌株も
菌株ＡＴＣＣ１９３９０から誘導された、ブレビバクテ
リウム・ヘルボルム薗株の２．９７７である。菌株Ｌ−
１７及び２．９７７は培養物は、１９８９年２月２１日
に英国スコツトランド、ＡＢ２ １ＲＹ、アバ−デイン
、２３ Ｓｔマチャン・ドライブの「ザ・ナショナル
・コレクションズ・オブ・インダストリアル・アンド・
マリン・バクテリアＬｔｄ、」に寄託され、それぞれ受
託番号ＮＣＩＭＢ４０１１７及びＮＣＩＭＢ ４０１
１６が与えられている。菌株ＮＣＩＭＢは、１９８８年
４月２８日に寄託されている。
また本発明によれば、我々は、ブレビバクテリウム・ヘ
ルボルム菌株ＮＣＩＭＢ ４０１１７及びブレビバク
テリウム・ヘルボルム菌株ＮＣＩ ＭＢ４０１１６なら
びにこれらの菌株から誘導された変異体及び突然変異株
、の生物学的に純粋な培養物を提供する。
ルボルム菌株ＮＣＩＭＢ ４０１１７及びブレビバク
テリウム・ヘルボルム菌株ＮＣＩ ＭＢ４０１１６なら
びにこれらの菌株から誘導された変異体及び突然変異株
、の生物学的に純粋な培養物を提供する。
本発明方法は、供給回分式または回分式プロセスで実施
されるときに最も効果的であるが、連続法で実施するこ
とも可能である。好ましくは、炭素源はグルコースであ
るが、その池の糖及びアルコールのような、その他の炭
素源も使用できる。
されるときに最も効果的であるが、連続法で実施するこ
とも可能である。好ましくは、炭素源はグルコースであ
るが、その池の糖及びアルコールのような、その他の炭
素源も使用できる。
好ましくはｐＨは５〜９、殊に６〜８の範囲てあり、７
またはその付近のｐＨが特に適当である。
またはその付近のｐＨが特に適当である。
水酸化アンモニウムのような塩基を培地に添加してｐＨ
値を所要水準に維持するようにできる。適当には、温度
は２０〜３５℃の範囲内であり、２５〜３０℃の範囲内
の温度が好ましい。本発明方法のための非常に適当な培
地を表１に例示する。
値を所要水準に維持するようにできる。適当には、温度
は２０〜３５℃の範囲内であり、２５〜３０℃の範囲内
の温度が好ましい。本発明方法のための非常に適当な培
地を表１に例示する。
嚢二Ｌ
２−デオキシウリジンの産生及びｉ １１ ｆ＆に、培
養物の上澄液から適宜な方法、例えば、イオン交換、液
抽出及び疎水性クロマトグラフィ法によってそれを分離
することができる。イオン交換法が好ましい。２−デオ
キシウリジンのための適当なイオン交換分Ｍ操作は、こ
の溶質をイオン交換樹脂に吸着させ、水を用いてその２
−デオキシウリジンを特異的（特定的）に溶離させるこ
とである。
養物の上澄液から適宜な方法、例えば、イオン交換、液
抽出及び疎水性クロマトグラフィ法によってそれを分離
することができる。イオン交換法が好ましい。２−デオ
キシウリジンのための適当なイオン交換分Ｍ操作は、こ
の溶質をイオン交換樹脂に吸着させ、水を用いてその２
−デオキシウリジンを特異的（特定的）に溶離させるこ
とである。
生産された２−デオキシウリジンは、多数の医療及び生
化学薬剤製品の製造に使用できる。
化学薬剤製品の製造に使用できる。
本発明を以下の実施例により例示説明する。
及１匠Ｌ （菌株Ｌ−１７の調製）
菌株ＮＣｒＭＢ ４００１４の培養物を、５フルオロ
−２−デオキシウリジンで処理し、そしてこのピリミジ
ンアナログの高濃度に耐えるそれらの細胞を選択して、
菌株Ｌ−１７を得ることにより、菌株ＮＣＩＭＢ ４
００１４がら菌株Ｌ１７を作った。菌株Ｌ−１７は、培
地中に蓄債する生成物である２−デオキシウリジンを産
生する項著な能力を示す。
−２−デオキシウリジンで処理し、そしてこのピリミジ
ンアナログの高濃度に耐えるそれらの細胞を選択して、
菌株Ｌ−１７を得ることにより、菌株ＮＣＩＭＢ ４
００１４がら菌株Ｌ１７を作った。菌株Ｌ−１７は、培
地中に蓄債する生成物である２−デオキシウリジンを産
生する項著な能力を示す。
表２に示した接種培地を調製し、振どうフラスコ中で、
実施例１で作ったブレビバクテリウム菌株Ｌ−１７の培
着物を接種した。
実施例１で作ったブレビバクテリウム菌株Ｌ−１７の培
着物を接種した。
上記接種された培地を、ｐＨ７及び２８℃の温度で、１
５０ｒｐ＋ｎの撹拌速度で振とうした。次いで２００ｍ
１の接種培地を、３１の有効容積の発酵槽に移して、表
１記載の培地分加えた。次いで培養を、ｐＨ７（５０％
水酸化アンモニウム溶液の添加によってこの値に維持）
、２５℃の温度で、溶存酸素張力（ＤＯＴ）ゼロの下に
開始した。５００ｒｐａ＋の撹拌速度を培養中に維持し
た。培養中培地中のグルコース濃度を監視し、さらに２
００１Ｆ／Ｉｌのグルコースを発酵槽に供給した。
５０ｒｐ＋ｎの撹拌速度で振とうした。次いで２００ｍ
１の接種培地を、３１の有効容積の発酵槽に移して、表
１記載の培地分加えた。次いで培養を、ｐＨ７（５０％
水酸化アンモニウム溶液の添加によってこの値に維持）
、２５℃の温度で、溶存酸素張力（ＤＯＴ）ゼロの下に
開始した。５００ｒｐａ＋の撹拌速度を培養中に維持し
た。培養中培地中のグルコース濃度を監視し、さらに２
００１Ｆ／Ｉｌのグルコースを発酵槽に供給した。
結果の培養液は２．ｈ／１の２−デオキシウリジンを含
んでいた。
んでいた。
２−デオキシウリジン生成物は、下記の操作でのイオン
交換分層法により培地から分離した。
交換分層法により培地から分離した。
遠心分離によって細胞を発酵槽製品から除去した。２−
デオキシウリジンを含む液を、「５Ｐ２０７」樹脂（英
国ロンドンの三菱化成がら入手）を詰めた吸着剤カラム
（直径２．６ｃｍ、長さ５０ｃｎ）に通した。カラムを
、毎時カラム容積の４倍の流量の水（ｐＨ７）で溶離処
理した。２−デオキシウリジンに富む分画は、カラム容
積の３倍の液がカラムを通過した後に溶融された。
デオキシウリジンを含む液を、「５Ｐ２０７」樹脂（英
国ロンドンの三菱化成がら入手）を詰めた吸着剤カラム
（直径２．６ｃｍ、長さ５０ｃｎ）に通した。カラムを
、毎時カラム容積の４倍の流量の水（ｐＨ７）で溶離処
理した。２−デオキシウリジンに富む分画は、カラム容
積の３倍の液がカラムを通過した後に溶融された。
菌株２．９７７を、ＡＴＣＣ１９３９０がら２段階法に
より作った。
より作った。
第１段階において、ＡＴＣＣ１９３９０をＵＶ光で処理
し、得られた培−ｉ物に対して葉酸拮抗体トリメトプリ
ムを加えた。トリメトプリムに耐える細胞を選択し、菌
株Ｎｏ、 ２．６０２を得た。しかる後、菌株Ｎｏ、
２．６０２を培養し、Ｕ■光で処理し、結果の培養物に
、５−フルオロ−２−デオキシウリジンを添加した。高
濃度の５−フルオロ−２−デオキシウリジンに耐える＃
ｌ胞を選択し、菌株２．９７７３得た。
し、得られた培−ｉ物に対して葉酸拮抗体トリメトプリ
ムを加えた。トリメトプリムに耐える細胞を選択し、菌
株Ｎｏ、 ２．６０２を得た。しかる後、菌株Ｎｏ、
２．６０２を培養し、Ｕ■光で処理し、結果の培養物に
、５−フルオロ−２−デオキシウリジンを添加した。高
濃度の５−フルオロ−２−デオキシウリジンに耐える＃
ｌ胞を選択し、菌株２．９７７３得た。
２−デオキシウリジンの生産は、実施例１の菌株Ｌ−１
７についてのものと実責的に同じである。
７についてのものと実責的に同じである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ）属の２−デオキシウリジン産生菌株を、資化性炭素
源及びその他の栄養を含む培地中で適当な培養条件下で
好気培養し；産生される２−デオキシウリジンをその培
地中に直接に蓄積し；しかる後にその産生及び蓄積され
た２−デオキシウリジンを培地から分離する；ことから
なる２−デオキシウリジンの製法。 ２、菌株がブレビバクテリウム・ヘルボルム（Ｂｒｅｖ
ｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｈｅｌｖｏｌｕｍ）種の菌株であ
る請求項１記載の方法。 ３、菌株がブレビバクテリウム・ヘルボルムＮＣＩＭＢ
４０１１７またはブレビバクテリウム・ヘルボルムＮＣ
ＩＭＢ４０１１６である請求項２に記載の方法。 ４、炭素源がグルコースである請求項１〜３のいずれか
に記載の方法。 ５、菌株を５〜９の範囲内のｐＨで培養する請求項１〜
４のいずれかに記載の方法。 ６、ｐＨが６〜８の範囲内である請求項５記載の方法。 ７、菌株を２０°〜３５℃の範囲内の温度で培養する請
求項１〜６のいずれかに記載の方法。 ８、温度が２５°〜３０℃の範囲内である請求項７記載
の方法。 ９、２−デオキシウリジンを、イオン交換樹脂へ吸着さ
せ、しかる後に水でイオン交換樹脂からそれを特定的に
溶離することにより、分離する請求項１〜８のいずれか
に記載の方法。 １０、ブレビバクテリウム・ヘルボルム菌株ＮＣＩＭＢ
４０１１７及びブレビバクテリウム・ヘルボルム菌株Ｎ
ＣＩＭＢ４０１１６ならびにこれらの菌株から誘導され
た変異体及び突然変異株、の生物学的に純粋な培養物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8906624.5 | 1989-03-22 | ||
| GB898906624A GB8906624D0 (en) | 1989-03-22 | 1989-03-22 | Production of 2-deoxyuridine |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0347085A true JPH0347085A (ja) | 1991-02-28 |
| JP2807308B2 JP2807308B2 (ja) | 1998-10-08 |
Family
ID=10653833
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2069525A Expired - Fee Related JP2807308B2 (ja) | 1989-03-22 | 1990-03-19 | ２―デオキシウリジンの製法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5120645A (ja) |
| EP (1) | EP0389163B1 (ja) |
| JP (1) | JP2807308B2 (ja) |
| AT (1) | ATE105022T1 (ja) |
| DE (1) | DE69008400T2 (ja) |
| GB (1) | GB8906624D0 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7111880B2 (en) | 2003-07-18 | 2006-09-26 | Alpha Corporation | Outside handle assembly of automobile |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112210577A (zh) * | 2020-11-04 | 2021-01-12 | 赤峰蒙广生物科技有限公司 | 一种发酵法生产β-胸苷的方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61104795A (ja) * | 1984-10-26 | 1986-05-23 | Takeda Chem Ind Ltd | ウリジンの製造法 |
| US4835104A (en) * | 1987-06-16 | 1989-05-30 | Ajinomoto Co., Inc., Patent & Licensing Department | Process for producing and purifying 2',3'-dideoxynucleosides, and process for producing 2',3'-dideoxy-2',3'-didehydronucleosides |
| DE68916708T2 (de) * | 1988-05-31 | 1994-12-01 | Zeneca Ltd | Herstellung eines Desoxyribonucleosids. |
-
1989
- 1989-03-22 GB GB898906624A patent/GB8906624D0/en active Pending
-
1990
- 1990-03-13 AT AT9090302652T patent/ATE105022T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-03-13 DE DE69008400T patent/DE69008400T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-03-13 EP EP90302652A patent/EP0389163B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-03-16 US US07/494,528 patent/US5120645A/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-03-19 JP JP2069525A patent/JP2807308B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7111880B2 (en) | 2003-07-18 | 2006-09-26 | Alpha Corporation | Outside handle assembly of automobile |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5120645A (en) | 1992-06-09 |
| DE69008400T2 (de) | 1994-08-25 |
| EP0389163A1 (en) | 1990-09-26 |
| GB8906624D0 (en) | 1989-05-04 |
| JP2807308B2 (ja) | 1998-10-08 |
| EP0389163B1 (en) | 1994-04-27 |
| DE69008400D1 (de) | 1994-06-01 |
| ATE105022T1 (de) | 1994-05-15 |
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