JPH0348178B2

JPH0348178B2 -

Info

Publication number: JPH0348178B2
Application number: JP57215637A
Authority: JP
Inventors: Efu Deruuka Hekutaa; Kee Shunoozu Hainritsuhi; Kee Uitsukuman Josefu
Original assignee: UISUKONSHIN ARAMUNI RISAACHI FUAUNDEESHON
Current assignee: UISUKONSHIN ARAMUNI RISAACHI FUAUNDEESHON
Priority date: 1981-12-11
Filing date: 1982-12-10
Publication date: 1991-07-23
Also published as: DE3243073A1; JPS58116458A; FR2518091B1; US4360471A; GB2111504A; GB2111504B; FR2518091A1

Description

【発明の詳細な説明】本発明は新規なビタミンＤ誘導体に関する。

さらに詳しくは、本発明は、側鎖に二重結合を
含む25−ヒドロキシビタミンD₃誘導体（25−ヒ
ドロキシコレカルシフエロール）及びそのアシル
化又はシリル化誘導体に関する。

ビタミンD₃は動物又は人間のカルシウム及び
リンホメオスタシスの維持に対する周知の薬剤で
あり、くる病その他の骨の病気の防止のために幅
広く使用されている。今や、ビタミンＤの生物学
的な有効性は、その、生体内でのヒドロキシル化
誘導体への代謝変換によつていることは、確固と
して確立されたこととなつている。多数のそのよ
うな生物学的に活性なヒドロキシ誘導体が知られ
ており、それらは25−ヒドロキシビタミンD₃、
１，25−ジヒドロキシビタミンD₃、24，25−ジ
ヒドロキシビタミンD₃、及び25，26−ジヒドロ
キシビタミンD₃を包含している。これらの化合
物の単離と特徴化及びその生物学的有効性は、特
許及び他の文献に詳しく記録されている。

新規なヒドロキシビタミンＤ誘導体がここに見
出された。この新規な化合物は炭素25におけるヒ
ドロキシ置換と炭素23と24間の二重結合によつて
特徴付けられ、これはこれまで知られたビタミン
Ｄ誘導体又は代謝物質がこれまで出会わなかつた
特徴である。この化合物は下記に示す式（）に
よつて表わされ、23−デヒドロ−25−ヒドロキシ
ビタミンD₃又は23−デヒドロ−25−ヒドロキシ
コレカルシフエロールと呼ぶことができる。

この化合物は高投与量のビタミンD₃せつ取し
た鶏の血液から、次の方法によつて得られる。

血漿の入手と抽出 60羽の12−週才のホワイトレグホンの雄のヒナ
ドリ（ノーザンハツチリーズ、ビーバーダム
ウイスコンシン）を市販の食餌（ラルストンプ
ユリナ、セントルイス、ミズーリー）で育て、
各々に筋肉内に10⁵I.U.ビタミンD₃（アルドリツチ
ケミカルズ、ミルウオーキ、ウイスコンシン）
を50μのエタノールに溶解したものを毎日投与
し、３日間続けた。このビタミンの純度は、高性
能液体クロマトグラフイー（HPLC）によれば、
＞99.9％であることがわかつた。４日目に各ヒヨ
コは筋肉内に全量で1.5×10⁷I.U.ビタミンD₃を投
与された。この投与の４日後、心臓を刺して血液
を集めた。血液を細胞を除くために遠心分離にか
け、生成した血漿を、３容量のメタノール／クロ
ロホルム（２：１）で約４〜10℃で１晩抽出し
た。その後、もう１容量のクロロホルムを添加
し、有機相を分離した。水相を再び1/2容量のク
ロロホルムで抽出し、このようにして得られた有
機相を蒸発させて、次のクロマトグラフイーにか
ける。

代謝物質のクロマトグラフイー精製血漿1160mlからの抽出物をヘキサン／メタノー
ル／クロロホルム（９：１：１）で溶離する３×
30cmのセフアデツクスLH−20カラム（フアーマ
シア、ピスカタウエイ、ニユージヤージー）上の
クロマトグラフイーにかけた。23mlフラクシヨン
80個が集められた。ビタミンＤ代謝物質の存在は
シエパードらの競争タンパク質結合分析法
（Biochem.J.182 55，1979）を用いて検知した。
25−ヒドロキシビタミンD₃（25−OH−D₃）領域
において溶離する、結合ピーク部分を集めた。こ
のサンプルを、次いで、ヘキサン／クロロホルム
（92：８）で溶離する２×57cmリピデツクス5000
カラム（パツカードインスツルメント社、ドー
ナーズグローブ、イリノイ）上のクロマトグラ
フイーにかけた。16mlフラクシヨン60個を集めて
上記のようにして分析した。25−OH−D₃領域の
フラクシヨンを貯めて、減圧下で溶剤を蒸発除去
した。

このサンプルをさらにウオーターズモデル
ACP／GPC204インスツルメント（ウオーターズ
アソシエイツ社、ミルフオード、マサチユーセツ
ツ）でクロマトグラフイー精製した。この装置は
モデル450可変波長検知器と波長ドライブアタツ
チメントを有し、ヘキサン中の２％２−プロパ
ノールで溶離する0.45×25cmの微粒シリカカラム
（ゾーバツクス−SIL、デユポン社、ウイルミン
トン、デラウエア）を使用するものである。この
系では標準の25−OH−D₃は約36mlで溶出する。
タンパク質結合分析法において反応性であり、か
つ、25−OH−D₃標準の直前に溶出する物質を、
23−デヒドロ代謝物質の単離のために貯める。次
いで、この物質を、メタノール中の15％水で溶離
する0.45×25cm逆相カラム（シリカに結合したオ
クタデシルシラン；ゾーバツクス−ODS、デユ
ポン社、ウイルミントン、デラウエア）を用いて
HPLCによるクロマトグラフイーを行つた。この
系では25−OH−D₃は約28mlで溶出する。タンパ
ク質結合分析法で活性を示す代謝物質23−デヒド
ロ−ヒドロキシビタミンD₃を集めた。この化合
物はU.V.最大吸収λ_nax＝265nｍを示した。

この化合物の最終精製を、ヘキサン中の４％２
−プロパノールで溶離する、0.45×25cm微粒シリ
カカラムを用いてHPLC上で実施した。目的の生
成物を構造特徴付けのために集めた。

生成物の同定この単離された化合物は、紫外スペクトルの最
大265nｍを示した。これはビタミンＤの５，６
−シス−トリエンクロモホルンの典型の存在を
指示する。マススペクトルでは主なイオンと相対
強度は次の通りである。ｍ／ｚ398，11％，M⁺；
380，５％，M⁺−H₂O；271，２％，M⁺側鎖；
253，５％，271−H₂O；136，100％（Ａ環＋C6
＋C7）⁺；118，74％，136−H₂O。ｍ／ｚ136及び
118（136−H₂O）の、ビタミンＤ分子のＡ環プラ
ス炭素６及び７から生ずる目立つたピークはビタ
ミンＤ−Ａ環部分は不変であることを立証してい
る。さらにまた、側鎖の完全なロスから生起す
る、ｍ／ｚ271及び253（271−H₂O）のピークの
存在は側鎖において完全な代謝変更が起こつたこ
とを証明している。分子イオンｍ／ｚ398は酸素
原子の結合と側鎖の不飽和と一致する。同様にこ
れらのデータと一致する側鎖修正の点は、(a) カ
ルボニル機能の生成 (b) 環状エーテル（例えば
エポキシド）の生成及び (c)ヒドロキシ基プラス
二重結合の存在、である。カルボニル又はエーテ
ル機能の存在をチエツクするため、この化合物を
過剰量のNaBH₄で処理し（メタノール溶液中で
室温で約30分間）、次いでトリメチルシリル化し
た（回収生成物を、ピリジン溶液中、１％トリメ
チルシリルクロリドを含む過剰量のＮ，Ｏ−ビス
−トリメチルシリル−トリフルオロアセタミドで
処理することにより）。生成したトリメチルシリ
ルエーテル（TMS−エーテル）生成物は次のよ
うなマススペクトルを示す。ｍ／ｚ542，22％，
M⁺；527，８％，M⁺−CH₃；452，18％、M⁺−
HOTMS；437，８％，452−CH₃；208，60％
（TMS−Ａ環＋C6＋C7）⁺；131，56％，
C₃H₆OTMS⁺；118，100％、208−HOTMS。こ
のｍ／ｚ542の分子イオンは分子量398（つまり、
最初の代謝物質の分子量）のジオールのジオチル
シリルエーテル誘導体の生成を指示している。こ
の結果は、ケトン及び環状エーテル構造を排斥
し、不飽和モノヒドロキシル化側鎖であることを
示している。Ｃ−25位のヒドロキシ基は、ｍ／ｚ
131における目立つたピーク（これはイオン
（CH₃）₂C＝Ｏ−Si（CH₃）₃ ⁺を表わし、側鎖炭素
25，26及び27から発生する）から推定することが
できる。一方、208（Ａ環⁺＋C6＋C7）と118のイ
オンはビタミンＤ−3β−OTMS誘導体の特徴的
なフラグメントであり、Ａ環部分がそのまま残つ
ていることを再確認させる。

側鎖の二重結合の存在とその位置はこの化合物
のオゾン分解と、メタン化学イオン化を用いるオ
ゾン分解生成物のガスクロマトグラフイーマスス
ペクトロメトリー分析により立証された。オゾン
分解は、代謝物質のメチレンクロリド溶液を−78
℃で、メチレンクロリドのオゾン飽和溶液で処理
し、２分後、メチレンクロリド中のトリフエニル
ホスフイン溶液を添加することにより達成でき
る。この混合物を室温まであたため、溶剤を蒸発
させたのち、オゾン分解生成物を、ガスクロマト
グラフとマススペクトロメーターとを結合したフ
イニガンモデル4000ガスクロマトグラフ−マス
スペクトロメーター（フイニガン社、サニーベ
ル、カルフオルニア）によりメタンガスの化学イ
オン化方式で操作し、メタンをキヤリアー／試薬
ガスとして30ml／分で用いるクロマトグラフイー
カラム（２ｍ×２mm，３％OV−１）、直接分析
した。オゾン分解生成物はプロトン化分子イオン
（Ｍ＋Ｈ）⁺をｍ／ｚ223で、低強度アダクトイオン
をｍ／ｚ251（Ｍ＋C₂H₅）⁺及び263（Ｍ＋C₃H₅）⁺で
与えた。この結果は、このオゾン分解生成物の分
子量は222であり下記構造式のケト−アルデヒド
であることを示している。

このケト−アルデヒド生成物は、予期されるＣ
−７，８とＣ−23，24の二重結合のオゾン分解開
裂の結果生じ、したがつて、代謝物質の炭素23と
24間に側鎖二重結合の存在していることを証明し
ている。

それ故、この新規化合物は、前記式に描いた
如く、23−デヒドロ−25−ヒドロキシビタミン
D₃であると確認される。

この化合物はこの技術分野で周知の方法により
アシル化又はアルキルシリル化して対応のモノ又
はジヒドロキシ保護誘導体を得ることができる。
このように容易に得ることができるアシル誘導体
には、アセチル、プロピオニル、ブチリル、トリ
フルオロアセチル、トリクロロアセチル、ベンゾ
イル、ニトロベンゾイル及びハロベンゾイル誘導
体を包含する。これらの誘導体は、その化合物を
適当な酸無水物又はアシルハライドで処理するこ
とにより調製される。例えば、この化合物を無水
酢酸で室温で処理して３−モノアセチル誘導体を
与えるが、一方、昇温下（50〜100℃）で処理し
て、３，25−ジアセチル生成物を生じる。このジ
アシル化生成物は逆に選択的に脱アシル化（例え
ば５％KOH／MeOH）して25−モノ−Ｏ−アシ
ル誘導体を与えることができ、そしてＣ−３又は
Ｃ−25−モノアシル誘導体は、フリーのヒドロキ
シ基を別のアシル基でさらにアシル化することが
でき、また十分確立された方法によつて、例えば
ピリジン中のアルキルシリルクロリド試薬による
処理によつてアルキルシリル化されてもよい。な
おここで語“アルキル”とは炭素１から約５の炭
化水素、メチル、エチル、プロピル、ブチル、
tert−ブチルなどを指称する。このようにして23
−デヒドロ−25−ヒドロキシビタミンD₃のＣ−
３及びＣ−25に異なるＯ−アシル又はＯ−アルキ
ルシリル基を有するもの及び／又はアシル及びア
ルキルシリル基が混合したものも容易に得ること
ができる。

本発明の新規な生成物は、このように、生物学
的に効能あるビタミンＤ代謝物質である25−ヒド
ロキシビタミンD₃の側鎖不飽和の類似体として
示される。このような構造上の関係によつてこの
化合物は、25−ヒドロキシビタミンD₃の代り又
はビタミンD₃の代りとして種々の治療上又は他
の応用面で利用される。なお、23，24−二重結合
が存在するので、この化合物は、生体中で、25−
ヒドロキシビタミンD₃のような24−ヒドロキシ
ル化を起しにくい。したがつて25−ヒドロキシビ
タミンD₃のような24−ヒドロキシル化による生
物学的効力の低下をきたさず、この点で本発明の
化合物は医学的に使用するのに好適な類似体であ
る。

Claims

【特許請求の範囲】１次式で表わされる化合物。（式中各R₁及びR₂は水素、アシル及びアルキル
シリル基からなる群から選ばれたものである。）２各R₁及びR₂がアセチル基及びベンゾイル基
から選ばれたものである特許請求の範囲第１項記
載の化合物。３ 23−デヒドロ−25−ヒドロキシビタミンD₃
である特許請求の範囲第１項記載の化合物。４結晶形である特許請求の範囲第１項記載の化
合物。