JPS58116458A - ２３−デヒドロ−２５−ヒドロキシビタミンｄ↓３化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規なビタミンＤ誘導体に関する。

さらに詳しくは、本発明は、側鎖に二重結合を含む２５
−ヒドロキシビタミンＤ、誘導体（２５−ヒドロキシコ
レカルシフエロール）及ヒソのアシル化又はシリル化誘
導体に関する。

ビタミンＤ３は動物又は人間のカルシウム及びリンホメ
オスタシスの維持に対する周知の薬剤であり、くる病及
びその他の骨の病気の防止のために幅広く使用されてい
る。今や、ビタミンＤの生物学的な有効性は、その、生
体内でのヒドロキシル化誘導体への代謝変換によつてい
ることは、確固として確立されたこととなっている。多
数のそのような生物学的に活性なヒドロキシ誘導体が知
られており、それらは２５−ヒドロキシビタミンＤ８．
１．２５−ジヒドロキシビタミンＤ３．２４．２５−ジ
ヒドロキシビタミンＤ３、及び２５．２６−ジヒドロキ
シビタミンＤ３を包含している。これらの化合物の単離
と特徴化及びその生物学的有効性は、特許及び他の文献
に詳しく記録されている。

新規なヒドロキシビタミンＤ誘導体がここに見出された
。この新規な化合物は炭素２５におけるヒドロキシ置換
と炭素２３と２４間の二重結合によって特徴付けられ、
これはこれまで知られたビタミンＤ誘導体又は代謝物質
がこれまで出会わなかった特徴である。この化合物は下
記に示す式（Ｉ）によって表わされ、２３−デヒドロ−
２５−ヒドロキシビタミンＤ３又は２３−デヒドロ−２
５−ヒドロキシコレカルシフェロールと呼ぶことができ
この化合物は高投与量のビタミンＤ３せっ取した鶏の血
液から、次の方法によって得られる。

血漿の入手と抽出 ６０羽の１２−週才のホワイトレグホンの雄のヒナトリ
（ノーザン　ハツチリーズ、ビーバーダム　ライスコン
シン）を市販の食餌（ラルストングユリナ、セントルイ
ス、ミズーリー）で育て、各々に筋肉内に１０　１．Ｕ
、ビタミンＤ３（アルドリッチ　ケミカルズ、ミルフォ
ード、ライスコンシン）を５０μｔのエタノールに溶解
したものを毎日投与し、３日間続けた。このビタミンの
純度は、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に
よれば、＞９９．９％であることがわかった。４日目に
各ヒヨコは筋肉内に全量で１．５Ｘ１０　１．Ｕ、ビタ
ミンＤ３を投与された。この投与の４日後、心臓を刺し
て血液を集めた。血液を細胞を除くために遠心分離にか
け、生成した血漿を、３容量のメタノール／クロロポル
、ム（２：１）で約４〜１０℃で１晩抽出した。その後
、もう１容量のクロロホルムを添加し、有機相を分離し
た。水相を再び１容量のクロロホルムで抽出し、このよ
うにして得られた有機相を蒸発させて、次のクロマトグ
ラフィーにかける。

血漿１１６０ｍｔからの抽出物をヘキサン／メタ）　−
ル／クロロホルム（９：１：１）で溶ｊｌ−１−ル３Ｘ
３０ｍのセファデックスＬＨ−２０カラム（ファーマシ
ア、ピスカタウエイ、ニューシャーシー）上のクロマト
グラフィーにかけた。２３　ｍｌフラクション８０個が
集められた。ビタミンＤ代謝物質の存在はシヱパードら
の競争タンパク質結合分析法（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、
　１８２　５−５．　１９７９）を用いて検知した。２
５−とドロキシビタミンＤ３（２５−０Ｈ−Ｄ３）領域
において溶離する、結合ピーク部分を集めた。このサン
プルを、次いで、ヘキサン／りｏｏホルム（９２：８）
で溶離する２×５７ｃＩＮリピデツクス５０００カラム
（パラカード　インスツルメント社、ドーナーズ　グロ
ーブ、イリノイ）上のクロマトグラフィーＫかけた。１
６ｍｔフラクフラクション６０めて上記のようにして分
析した。

２５−０Ｈ−Ｄ３領域のフラクションを貯めて、減圧下
で溶剤を蒸発除去した。

このサンプルをさらにウォーターズモデルＡＣＰ／ＧＰ
Ｃ２０４インスツルメント（ウォーターズアソシエイツ
社　ミルフォード、マサチューセッツ）でクロマトグラ
フィー精製した。この装置はモデル４５０可変波長検知
器と波長ドライブアタッチメントを有し、ヘキサン中の
２％　２−ブロノくノールで溶離する０、４５Ｘ２５ｃ
ｍの微粒シリカカラム（シーパックス−８ＩＬ、デュポ
ン社、ウイルミントン、プラウエア）を使用するもので
ある。この系では標準の２５−０Ｈ−Ｄ３は約３６ｍｔ
で溶出する。タンパク質結合分析法において反応性であ
り、かつ、２５−０Ｈ−Ｄ３標準の直前に溶出する物質
を、２３−デヒドロ代謝物質の単離のために貯める。次
いで、この物質を、メタノール中の１５チ水で溶離する
０、４５Ｘ２５ｃｍ逆相カラム（シリカに結合したオク
タデシルシラン；シーパックス−０ＤＳ、デュポン社、
ウイルミントン、プラウエア）を用いてＨＰＬＣによる
クロマトグラフィを行った。

この系では２ｓ−ｏＨ−ｎ３は約２８ｍｔで溶出する。

タンパク質結合分析法で活性を示す代謝物質２３−デヒ
ドロ−２５−ヒドロキシビタミンＤ３を集めた。この化
合物はＵ、　Ｖ、最大吸収’ｍａｘ＝　２６５％ｍを示
した。

この化合物の最終精製を、ヘキサン中の４１２−プロパ
ツールで溶離する、０．４５Ｘ２５ａＩｌ微粒シリカカ
ラムを用いてＨＰＬＣ上で実施した。目的の生成物を構
造特徴付けのために集めた。

生成物の同定 この単離された化合物は、紫外スペクトルの最大２６５
　ｎｍを示した。これはビタミンＤの５゜６−シス−ト
リエン　クロモホルンの典型の存在を指示する。マスス
ペクトルでは主なイオンと相対強度は次の通りである。

ｍ／ｚ　３９８．ＩＩＬＭ＋；　ａｓｏ、　ｌ、　Ｍ−
Ｈ２Ｏ；　２７１．２％１Ｍ側鎖；　２５３．５％、　
２７１−Ｈ２Ｏ；　１３６．１００％（Ａ環＋Ｃ６＋Ｃ
７）＋；　１１８．７４％、１３６−Ｈ２Ｏ。ｍ／ｚ１
３６及び１１８（１３６−Ｈ２Ｏ）の、ビタミンＤ分子
のＡ環プラス炭素６及び７から生完全なロスから生起す
る、ｍ／ｚ２７１及び２５３（２７１−Ｈ，Ｏ）のピー
クの存在は側鎖において完全な代謝変更が起こったこと
を証明している。分子イオンｍ／ｚ３９８は酸素原子の
結合と側鎖の不飽和と一致する。同様にこれらのデータ
と一致する側鎖修正の点は、ａ）　　カルボニル機能の
生成り）環状エーテル（例えばエポキシド）の生成及び
　Ｃ）ヒドロキシ基プラス二重結合の存在、である。カ
ルボニル又はエーテル機能の存在をチェックするため、
この化合物を過剰量のＮａＢＨ４で処理しくメタノール
溶液中で室温で３０分間）、次いでトリメチルシリル化
した（回収生成物を、ピリジン溶液中、１チドリメチル
シリルクロリドを含む過剰量のＮ、Ｏ−ビスートリメチ
ルシリルートリフルオロアセタ′ミ□ドで処理すること
により）。

生成したトリメチルシリルエーテル（ＴＭＳ−ｘ−チル
）生成物は次のようなマススペクトルを示す。ｍ／ｚ　
５４２．２２４５１Ｍ　；　５２７．８Ｌ　Ｍ”−ＣＨ
３；　４５２．１８チ、Ｍ−ＨＯＴＭＳ；４３７，８ｓ
、４５２−ＣＨ３；　２０８，６０％（ＴＭＳ−Ａ環＋
Ｃ６＋Ｃ７）＋；　１３１．５６％、　Ｃ３Ｈ，ＯＴＭ
Ｓ　　；　１１８゜１００％、２０８−ＨＯＴＭＳ、　
　このｍ／ｚ５４２の分子イオンは分子量３９８（つま
り、最初の代謝物質の分子量）のジオールのジメチルシ
リルエーテル誘導体の生成を指示している。この結果は
、ケトン及び環状エーテル構造を排斥し、不飽和モノヒ
ドロキシル化側鎖であることを示している。

Ｃ−２５位のヒドロキシ基は、ｍ／ｚ１３１１ｃおける
目立ったピーク（これはイオン（ＣＨ３）２Ｃ＝Ｏ５ｔ
（ＣＨ３）３　　を表わし、側鎖炭素２５．２６及び２
７かも発生する）から推定することができる。一方、２
０８（Ａ環　＋Ｃ６＋Ｃ７）と１１８のイオンはビタミ
ンＤ−３β−ＯＴＭＳ誘導体の特徴的なフラグメントで
あり、Ａ環部分がそのまま残っていることを再確認させ
る。

側鎖の二重結合の存在とその位置はこの化合物のオゾン
分解と、メタン化学イオン化を用いるオゾン分解生成物
のガスクロマトグラフィーマススペクトロメトリー分析
により立証された。オゾン分解は、代謝物質のメチレン
クロリド溶液を一７８℃で、メチレンクロリドのオゾン
　飽和溶液で処理し、２分後、メチレンクロリド中のト
リフェニルホスフィン溶液を添加することにより達成で
きる。この混合物を室温まであたため、溶剤を蒸発させ
たのち、オゾン分解生成物を、ガスクロマトグラフとマ
ススペクトロメーターとを結合したフィーガンモデル４
０００ガスクロマトグラフーマススヘクトロメーター（
フィニガン社、サニーベル、カルフォルニア）によりメ
タンガスの化学イオン化方式で操作し、メタンをキャリ
アー／試薬ガスとして３０ｍｔＺ分で用いるクロマトグ
ラフィーカラム（２ｍＸ２ｍｍ、３％０Ｖ−１）、直接
分析した。オゾン分解生成物はプロトン化分子イオン（
Ｍ＋Ｈ）　　をｍ／ｚ２２３で、低強度アダクトイオン
を１．イｚ　２５１　（Ｍ＋Ｃ２Ｈ５）　　及び２６３
（Ｍ＋Ｃ３Ｈ３）　　で与えた。この結果゛は、このオ
ゾン分解生成物の分子量は２２２であり下記構造式のケ
ト−アルデヒドであることを示している。

０ このケト−アルデヒド生成物は、予期されるＣ−７，８
とＣ−２３，２４の二重結合のオゾン分解開裂の結果生
じ、したがって、代謝物質の炭素２３と２４間忙側鎖二
重結合の存在していることを証明している。

それ故、この新規化合物は、前記式■に描いた如く、２
３−デヒドロ−２５−ヒドロキシビタミンＤ３であると
確認される。

この化合物はこの技術分野で周知の方法によりアシル化
又はアルキルシリル化して対応のモノ又はジヒドロキシ
保護誘導体を得ることができる。

このように容易に得ることができるアシル誘導体には、
アセチル、プロピオニル、ブチリル、トリフルオロアセ
チル、トリクロロアセチル、ベンゾイル、ニトロベンゾ
イル及ヒノ１０ベンゾイル誘導体を包含する。これらの
誘導体は、その化合物を適当な酸無水物又はアシルハラ
イドで処理することにより調製される。例えば、この化
合物を無水酢酸で室温で処理して３−モノアセチル誘導
体を与えるが、一方、昇温下（５０〜１００℃）で処理
して、３．２５−ジアセチル生成物を生じる。

このジアシル化生成物は逆に選択的に脱アシル化（例え
ば５　’１６　ＫＯＨ／Ｍｅ　ＯＨ）　Ｌ、て２５−モ
ノー〇−アシル誘導体を与えることができ、そしてＣ−
３又はＣ−２５−モノアシル誘導体は、フリーのヒドロ
キシ基を別のアシル基でさら忙アシル化スることができ
、また十分確立された方法によって、例えばピリジン中
のアルキルシリルクロリド試薬による処理によってアル
キルシリル化されてもよい。なおここで語１アルキル”
とは炭素ｌから約５の炭化水素、メチル、エチル、プロ
ピル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチルなどを指体する。この
ようにして２３−デヒドロ−２５−ヒドロキシビタミン
Ｄ３０Ｃ−３及びＣ−２５に異なる０−アシル又は〇−
アルキルシリル基を有するもの及ヒ／又はアシル及びア
ルキルシリル基が混合したものも容易に得ることができ
る。

本発明の新規な生成物は、このようＫ、生物学的に効能
あるビタミンＤ代謝物質である２５−ヒドロキシビタミ
ンＤ３の側鎖不飽和の類似体として示される。このよう
な構造上の関係によってこの化合物は、２５−ヒドロキ
シビタミンＤ３０代り又はビタミンＤ３０代りとして種
々の治療上又は他の応用面で利用される。なお、２３．
２４−二重結合が存在するので、この化合物は、生体中
で、２５−ヒドロキシビタミンＤ３のような２４−ヒド
ロキシル化を起しにくい。したがって２５−ヒドロキシ
ビタミンＤ３のような２４−ヒドロキシル化による生物
学的効力の低下をきたさず、この点で本発明の化合物は
医学的に使用するのに好適な類似体である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）次式で表わされる化合物。　　　ＣＨ。 （式中各Ｒ１及びＲ２は水素、アシル及びアルキルシリ
   ル基からなる群から選ばれたものである。）（２）各Ｒ
   １及びＲ２がアセチル基及びベンゾイル基から選ばれた
   ものである特許請求の範囲第１項記載の化合物。 ｔ８１２３−デヒドロ−２５−ヒドロキシビタミンＤ、
   である特許請求の範囲第１項記載の化合物。 （４）結晶形である特許請求の範囲第１項記載の化合物
   。