JPH03500363A - ヒトｔ細胞表面レセプターのガンマ鎖のエピトープを認識する単クローン性抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ヒトＴ細胞表面レセプターのガンマ鎖のエピトープを認識する単クローン性抗体 技術分野 この発明は、一般に単クローン性抗体及びそれらと特定の抗原決定基との相互作 用に関し、またヒトＴリンパ球の細胞表面レセプターに特異的に結合する単クロ ーン性抗体を産生ずるハイブリドーマ細胞系統に関する。いっそう詳細には、こ の発明を具体化する単クローン性抗体は、Ｔ細胞ガンマ再配列遺伝子により暗号 化されるヒトＴ細胞表面レセプターの特有のエピトープと結合する。

背景技術 この技術分野においてヒト免疫系がリンパ細網系の種々の器官と共に血液中の細 胞及び可溶性要素からなることはよく知られている。身体系に入ってくる、抗原 と呼ばれる異物は、同定された場合、免疫系応答（ｒｅｓｐｏｎｓｅ）又は反応 （ｒｅａｃｔｉｏｎ）をもたらす。反応は、局部的炎症若しくは食細胞反応の形 を取ることができ、又は特定の体液性若しくは細胞介在反応を起こしうる。

えば細胞、ウィルス又はバクテリアに対する抗体を産生ずることを必要とする。

免疫応答における主な要素は、胸腺に由来するＴ細胞と骨髄に由来するＢ細胞で ある。Ｔ細胞は、Ｂ細胞と相互作用して細胞介在免疫といわれる仕方で異物に対 する抗体形成を行う。体液性免疫応答は、予備感作Ｂリンパ球が異物と共に存在 することのみが必要である。それらの相互作用がＢ細胞を増殖させ抗原に対する 免疫グロブリン又は抗体タンパク質を合成させ始める。循環末梢血液細胞成分は 、赤血球、白血球及び血小板よりなる。白血球は、好中球、好酸球、好塩基球、 単球及びリンパ球と呼ばれる五つの主要な集団に分けられる。

リンパ球は、更に胸腺由来Ｔ細胞と骨髄由来Ｂ細胞に分けられる。Ｔ及びＢリン パ球は、更に誘導物質細胞、サプレッサー細胞、キラー細胞のような多数のサブ セットに分けられ、その他の中には最近の研究努力によってサブセットの同定数 が増加している。

１９７５年におけるケーラー（Ｋｏｅｈｌｅｒ）とミルスタイン（Ｍｉｌｓｔｅ ｉｎ）の研究による単クローン性抗体技術、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２５ ６゜４９５〜４９７頁、は白血球の機能とそれらのヒト生理学の関係に対する科 学的研究に大きな刺激を与えた。単クローン性抗体は、それらの種々の発生及び 成熟段階においてヒトＴリンパ球及びＢリンパ球表面抗原又はエピトープに展開 されＴ及びＢ細胞白血球及びリンパ腫のようなり及びＴ細胞悪性度を分類する。

種々の機能的に関連するＴ又はＢ細胞表面分子構造を認識する単クローン性抗体 の有効性は、Ｔ細胞活性化プロセスとＴ細胞の別個のサブセットの両方の詳細な 確認を可能にする。

更に、若干の例をあげると固化した腫瘍細胞、赤血球の糖タンパク質表面分子及 びエイズ疾患におけるようなウィルスに感染したヒト組織の炎症部位と結合する 単クローン性抗体が展開された。ヒト免疫系における、正常及び異常の両方のヒ ト細胞の機能と衝撃についての有効な研究は、診断及び治療の適用のために試験 管内及び生体内の両方で発生される新規単クローン性抗体をめざましく増加させ ている。

「ヒトＴ細胞を認識する単クローン性抗体」という発明の名称の米国特許第４５ ５００８６号明細書においてｒＴｉＪ　’ＴａＪ及び「Ｔ、」　と呼ばれる構造 のような、Ｔリンパ球及び他の細胞上に発現される表面分子の定義（ｄｅｆ　ｉ ｎ　ｉ　ｔ　１ｏｎ）に注意が向けられる。

ｒＴｓに対する抗Ｔ３（ａｎｔ、１−Ｔｓ　ｔｏ　Ｔａ）Ｊと呼ばれる単クロー ン性抗体は、いかなる機能的Ｔ細胞クローンのその標的抗原を認識する能力をも 遮断することかできた。種々の成熟Ｔ細胞クローンは、各Ｔ細胞がその標的抗原 を認識することを可能にする特有のタンパク質分子構造をそれぞれ有することが 分かつていた。

しかし、前記特許は、Ｔ細胞クローンがそれらのいわゆる［認織構造」の点で異 なるとはいえ、それらがある共通特徴を有するように見えることを教える。

すべてのＴ細胞クローンの一つの共通的特徴は、Ｔ３糖タンパク質と、前記特許 で同定された２種の異なるタンパク質分子からなる二量体との存在からなる。前 記特許に記載される単クローン性抗体は、Ｔ細胞表面レセプター錯体を特異的に 認識した。

この発明を具体化する単クローン性抗体は、ヒトの末梢Ｔ細胞の亜集団を認識し 、該亜集団は循環単核血球の約１〜１５％とこれらのリンパ球の約３％の平均値 を示す。この亜集団のリンパ球は、Ｔ細胞中で特異的に再配列するガンマクラス の遺伝子により暗号化される、「第２科（ｓｅｃｏｎｄ　ｆａｍｉｌｙ）　Ｊの Ｔ細胞表面レセプターを発現する。この発明の単クローン性抗体は、非還元条件 下に測定した約８５０００ダルトン及び還元条件下に測定した４１０００〜４４ ０００ダルトンの分子質量を有するヒトＴリンパ球の表面上の糖タンパク質分子 の特有のエピトープに結合する。

この単クローン性抗体により確認される特有のエピトープは、従来達成されたよ りはるかに改良されたデフィニティ（ｄｅｆ　１ｎｉｔｙ）を有するヒトＴリン パ球の亜集団の確認を可能にする。

この発明の単クローン性抗体は、Ｔ細胞レセプターガンマ錯体を有するヒトリン パ球の新規サブセットを同定する。この単クローン性抗体は「抗ＴｉガンマＡ　 （ａｎｔｉ−ＴｉｇａｍｍａＡ）　Ｊと呼ばれる。この単クローン性抗体は、Ｉ ｇＧｚサブクラスに属する。この単クローン性抗体は、健康人、病人又は器官移 植若しくは骨髄移植を受けた個人から取られた循環血液中のヒトＴす、ンバ球の 亜集団を同定し定義するために放射線標識又は蛍光マーカーのような適当なマー カーで標識することができる。該抗体は、循環血液中のヒトＴリンパ球の分化の 状態を確認するためにも有用である。更に、該抗体は、ＴｉガンマＡエピトープ を有するヒトＴリンパ球の試験管内、生体外又は生体内最終取扱いにより治療上 に適用することができる。

発明の開示 Ｔ細胞ガンマ再配列遺伝子により暗号化される、末梢血液中のＴリンパ球のヒト Ｔ細胞表面レセプターの特有エピトープと特異的に結合する単クローン性抗体を 産生ずるハイブリドーマ細胞系統。該エピトープは、非還元条件下に測定された 約８５０００ダルトンと、還元条件下に測定された４１０００〜４４０００ダル トンの分子質量を有する、循環血液中のヒトＴリンパ球の表面上の糖タンパク質 構造中に位置する。この発明の単クローン性抗体は、抗ＴｉガンマＡと呼ばれ、 １ｇＧ２サブクラスに属する。この単クローン性抗体は、ＴｉガンマＡエピトー プすなわち抗原決定基を発現する、循環血液中のヒトＴリンパ球の確認を可能に する。

発明を実施する最良の形態 単りローン性抗体抗ＴｉガンマＡは、ヒトＴリンパ球レセプターの抗原決定基に 、及び特にヒトＴ細胞表面レセプターのＴｓＴｉ構造のＴｉ錯体に結合する。該 Ｔｉ分子構造はガンマ鎖を有し、抗ＴｉガンマＡ単りローン性抗体はガンマ鎖を 定義する（ｄｅｆ　１ｎｅ）ので、この発明はＴ細胞表面レセプターの「第２科 」のＴｉ錯体の検出、定量及び確認を可能にする。このエピトープは、ヒトの血 液中並びに胸腺、牌臓、神経節及び骨髄のようなヒトリンパ系器官中のＴリンパ 球の亜集団に現われる。この単クローン性抗体の診断及び治療への利用から導か れうる利点は、広い。

この発明の抗ＴｉガンマＡ単りローン性抗体は、以下に述べるように展開された 。

ＣＤ３′″、　ＷＴ３Ｆ表現型のヒトリンパ球クローンの細胞懸濁液（ノーウィ ル（Ｎｏｗｉ　１１）ら、「胎児（２５週間）血液に由来するナチュラルクロー ンＪ　、Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　６３：１６０１１９８６）を調製したが該 細胞はそれらの表面にＴα／βレセプターを発現しない。

これらの細胞は、「ナチュラル細胞傷害活性」と呼ばれる機能活性を発現する。

懸濁液をビオジ（Ｂｉｏｚｚｉ）マウスに注射する。

免疫感作をフロインドアジュバント中４Ｘ１０６細胞の２回の最初の腹腔内注射 に続（アジュバントなしの４Ｘ１０’細胞の静脈内注射により実施する。３日後 、該動物を殺し、牌臓を取り出し牌臓細胞を得る。

得られた牌臓細胞とネズミＮ５−１骨髄腫細胞系統とを融合することにより交雑 を行う。前記細胞融合は、モインジエオン・ピー（Ｍｏｉｎｇｅｏｎ　Ｐ）ら、 １９８６、ネイチャー３２３巻６３８頁記載の既知方法に従って実施した。融合 後得られた雑種細胞は、ヒボキサンチン、アミノプテリン、チミジン、１０％ウ シ胎児血清及び１０％ウマ血清を含有するＨＡＴ培地中培養される。

次いで、ハイブリドーマを選択する。スクリーニングは、培養中に保たれる白血 病細胞系統に対して免疫感作するクローンにより発揮されるハイブリドーマ上澄 みの細胞傷害反応を遮断する能力を試験することにより実施される。

単クローン性抗体を産生ずるハイブリドーマは、限界希釈技術によりクローン化 される。最後に、その中で抗体を取ることができる免疫腹水症がつくられる。こ のようにしてつ（られた抗ＴｉガンマＡ抗体は、ＩｇＧｚサブクラスに属し補体 タンパク質と結合することができる。

単クローン性抗体の反応性とその作用範囲は、ヒトリンパ球みによって測定した 。試験する亜集団の細胞は、３０人の健康な成人の供血者から取り出した末梢血 液の単核部分から単離された。

この部分をフィコール勾配の遠心技術で精製した。３．０ＸＩＧ’細胞のサンプ ルを米国フロリダ州ハイアリーア（Ｈｉａｌｅａｈ）のクールター・コーポレー ション製造になるｒＥＰｉＣ３ＣＪ流動細胞計測装置のような細胞蛍光測定装置 で分析される。対照試薬は、ＦＩＴＣ−ＴｇＧ及びＰＥ−ｒｇＧである。

非付着リンパ球を、蛍光赤色マーカー、藻紅素（ＰＥ）をそなえる他の既知抗体 の存在下に、蛍光緑色マーカー、すなわちフルオレセインをそなえるこの発明の 単クローン性抗体、抗ＴｉガンマＡで３０分間処理する。他の既知抗体は次のも のである：抗−ＣＤ２．−　ＣＤ３．−　ＣＤ４．−　ＣＤ５．−　ＣＤ８．　 ＮＫ）ＩＩ及び組織適合性の主要錯体のクラス■遺伝子と呼ばれる遺伝子により 暗号化される分子を決定するそれらの抗体。これらの既知抗体は、フランス国フ ランス・オブマルゼンシ−（Ｆｒａｎｃｅ　ｏｆ　Ｍａｒｇｅｎｃｙ）クールト ロニクス（Ｃｏｕｌｔｒｏｎｉｃｓ）社により供給される。

この発明に従う抗体から得られる結果は、ＴｉガンマＡ抗原決定基を発現するヒ トＴリンパ球を確認することを許す。

ＴｊガンマＡ′″リンパ球の大多数は、ＣＤ２及びＣＤ３糖タンパク質を発現す る。ＴｉガンマＡ１リンパ球の多数は、ＣＤ５タンパク質を発現する。この場合 、これらのＣＤ５タンパク質が存在するところでは細胞当りのＣＤ５抗原の密度 がＴｉガンマＡ＋細胞サブセットにおいてＴα／βレセプターを発現する通常の リンパ球の集団におけるより低いことが観察される。ＴｉガンマＡ＋亜集団にお けるＣＤ８０発現は、一つの個体から他の個体へと広く変化する。はとんどの個 体においてＴｉガンマＡ１リンパ球の小数だけが弱い抗原密度をもってＣＤ８タ ンパク質を発現する。

休止では、ＴｉガンマＡ１リンパ球は、ＣＤ４タンパク質、ＮＫＨＩ及び組織適 合性の主な錯体のクラス■の遺伝子により暗号化される分子を発現しない。

蛍光抗体技術によって実施される、抗ＴｉガンマＡ単りローン性抗体の反応性の 他の比較分析は、入手可能なＴ、特異性単クローン性抗体及びＢＭＡＯ３１単ク ローン性り体（ベーリング社（Ｂｅｈｒｉｎｇ　Ｃｏ。）供給）を用いることに より一方ではＣＤ３タンパク質を発現する細胞を、他方ではＴα／βレセプター を発現する細胞を検出することを可能にした。これらの特定の抗体は、それらか 間接的蛍光抗体分析における最適信号を防止するので選はれた。

結果は、ＴｉガンマＡ“亜集団かＣＤ３タンパク質を発現するかそれらの表面上 に通常のＴα／βレセプターを発現しない循環リンパ球の多数を示すことを示す 。

他方、抗ＴｉガンマＡ単りローン性抗体と対応する抗原決定基を発現するリンパ 球との間の相互作用により誘起される若干の機能的効果を研究した。

約５０υ／ＪＮＩ）Ｉの量での外因性インターロイキン２の存在において単クロ ーン性抗体と抗原決定基との相互作用は、非培養循環リンパ球の活性化と増殖を 起こす。

ＴｉガンマＡ”リンパ球が例えば約２■／　ｍｌの用量の植物凝隼素のようなマ イトジェンで予備活性化され、培養され臭化シアンにより活性化されたセファロ ースビーズと組み合わせた抗ＴｉガンマＡ単りローン性抗体で刺激された場合、 １９２３球の増殖が刺激後４８ｈｒ明らかに示される。これらの１９２３球は、 更にそれら自身のインターロイキン２を分泌することができる。

リンパ球の細胞傷害活性が他の実験によって一層正確に観察された。

細胞傷害性は、ｓ′Ｃｒにより標的細胞の標識後３時間の実施中測定される。

この発明の単クローン性抗体により測定されたＴｉガンマ八へ″細胞は、休止の 場合、粒状リンパ球の極めて均一な集団として現われる。しかし、それらは、例 えば慢性の骨髄性白血病の胸膜滲出に由来するに５６２系統のように［ナチュラ ル細胞傷害系」と呼ばれる系の通常の標的に対して自発的細胞傷害活性を少し介 在するか介在しない。

したがって、この亜集団は、末梢血液のナチュラル細胞傷害活性に著しく寄与せ ず、またこれは前に説明したようにＮＫＨＩ標識の表面上の発現が存在しないこ とと一致する。

反対に、ＴｉガンマＡ＋リンパ球がマイトジェン及び外因性インターロイキン２ によって活性化される場合、それらは多数の腫瘍細胞、特にに５６２系統のそれ らの細胞に対して極めて細胞傷害になる。この細胞傷害性は、３〜５Ｂの極めて 短時間内に誘起されることができる。次いで、このように活性化されたＴｉガン マＡ１リンパ球は、「リンフ才力イン活性化キラー機能」（英国のｒ　ＬＡＫ現 象」に該当）と呼ばれる現象に関与しつる。

更に、活性化ＴｉガンマＡ１リンパ球と抗Ｔｉガンマへ単りローン性抗体との間 の相互作用に従って細胞傷害機能の重要な修飾が観察される。

修飾の型は、用いた実験条件に依存する。

例えば、Ｕ９３７ヒト組織球系統のような、免疫グロブリンのＦｃレセプターを 発現する比較的耐性の標的細胞を使用した場合、抗体の作用は、細胞の細胞傷害 性の相当の増加をもたらす。

前記結果は、抗ＴｉガンマＡ抗体が若干の標的細胞上に発現されるＦｃフラグメ ントと結合しうるという事実により説明される。

いっそう詳細には、前記結合において、抗体がエフェクターと標的細胞の間に橋 かけをつくりＴｉガンマＡ抗原決定基を修飾する。したがって、溶菌プロセスの 引き金が引かれる。

反対に、例えば「ジャーカット（ｊｕｒｋａｔ）」と呼ばれる白血病細胞系統の ような、免疫グロブリンのＦｃフラグメントに対するレセプターを奪われた標的 細胞を選ぶ場合、抗体の作用は細胞傷害機能の事実上の廃棄に到る。

実際のところ、標的細胞がＦｃレセプターを発現しない場合には、Ｕ９３７ヒト 組織球細胞系統に対する上記橋かけ結合反応は起こらない。この場合、抗体は、 その特定抗原決定基とのみＦａｂフラグメントにより相互作用する。この相互作 用は、ＣＤ３−ＴｉガンマＡ分子錯体の調節を誘起する。ＣＤ３及びＴｉガンマ Ａ分子は細胞表面に非共有的に結合する。この現象は、細胞溶菌（ｃｅｌｌｌｙ ｓｊｓ）の重要な現象をもたらす。

この場合、前記のすべての結果がＴｉガンマＡが組織適合性の主な錯体の遺伝子 により制限されない細胞傷害性の機構に含まれる機能的レセプターの一部を表す という仮説に直接導くということが観察される。

抗ＴｉガンマＡ抗体で行なわれた若干の免疫沈殿実験は、抗体により確認される レセプターの構造が実際はＣＤ３タンパク質に関係する分子錯体であり、この錯 体はジスルフィド結合により結合されるということを示した。

更に、これらの免疫沈殿実験は、抗ＴｉガンマＡ抗体により定義される抗原決定 基の分子量を同定することを可能にする。

実験は、Ｆ６Ｃ７の名前で知られる胎児のヒト細胞系統で行われる。これらのＦ ６Ｃ７細胞は、モインジエオン・ピーら、１９８６、ネイチャー、３２３巻、６ ３８頁記載の標準ラクトペルオキシダーゼ法を用いることにより＋２５１により それらの表面上に標識される。

ブドウ球菌Ａの懸濁液で、そしてまた他の抗体で予備精製の若干段階が行われる 。次いで、沈殿反応が約４〜６時間の間４°Ｃの温度で抗ＴｉガンマＡ単りロー ン性抗体をセファロース−タンパク質へのビーズと組み合わせて用いて行う。５ ＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動を、１０％ポリアクリルアミドゲル上、一方では非還元 条件下に、他方では５％の２〜ＭＢ添加後添加後件下に実施する。

電気泳動分析の結果は次の通りである。

はぼ非還元条件下にＴｉガンマＡ分子は、移行して８５０００ダルトンに均一バ ンドをつくる。還元条件で分子は約４４０００ダルトンで主バンドとして、約４ １０００ダルトンで小さいノくンドとしてあられれる。この免疫沈殿パターンは 一つの細胞から他の細胞へと極めて類似している。細胞による電気泳動移動度の 極めて小さい差は、恐らくグリコジル化（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）の差に 対応するのであろう。

これらの実験は、抗ＴｉガンマＡ抗体により免疫沈殿された４４０００及び４１ ０００ダルトンの２本のバンドが全部及び一部グリコシル化され、Ｔ細胞ガンマ 再配列遺伝子により暗号化されるタンパク質に対応することを示す。

細胞表面上にＴｉガンマＡタンパク質を暗号化する沈殿遺伝子は、Ｃガンマ、Ｊ ガンマ及びｖガンマ型のプローブのような若干の適当な分子プローブを用いて「 サザン及びノーサン法」と呼ばれる一連の実験によりいっそう正確に確認される 。これらの実験の結果は、次の結論を導いた。

ＴｉガンマＡタンパク質をそなえるＲＮＡメツセンジャーの転写を生じる特定の 再配列は、Ｖガンマ９遺伝子とＪガンマＰ遺伝子の間の特有の結合を含む。この 再配列は、細胞表面で発現されるタンパク質がジスルフィド橋かけで結合された 二量体であるので、Ｃガンマ１不変部で更に転写される。したがって、抗Ｔｉガ ンマＡ単りローン性抗体は、Ｖガンマ９断片をＪガンマＰ断片に会合させる再結 合遺伝子により暗号化された糖タンパク質を認識する。

前述のすべての実験及び結果は、抗ＴｉガンマＡ単りローン性抗体及びしたがっ てＣＤ３タンパク質に会合され、かつ細胞機能、特に細胞傷害機能に含まれるＴ リンパ球細胞のレセプター構造を確認する。

抗ＴｉガンマＡ抗体を産生ずるハイブリドーマ細胞系統は、ＡＴＣＣＮ（ＬＨＢ 　９５２８の下に米国メリーランド州ロックビル（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ）にある アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ｔｈｅ　ａｍｅｒｉｃａｎ　 Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎＸＡＴＣＣ）に寄託されてい る。

この発明に従う単クローン性抗体は、ガンマ遺伝子により暗号化されるレセプタ ーを有するヒトＴリンパ球細胞を同定するのに用いることができる。また、これ は、これらのＴ細胞の分化の状態を確認するのに用いることもできる。

更に、この単クローン性抗体は、自己免疫疾患、癌及びウィルス感染に対して治 療上適用することができる。生体外で用いる単クローン性抗体は、器官又は骨髄 移植前に対応するリンパ球集団の涸渇を可能にすることができる。移植拒絶及び 移植片対宿主疾患の生理学的現象にＴｉガンマＡを発現する細胞が役割を果たす と判明した場合、上記移植拒絶か移植片対宿主疾患のいずれかに対して介在させ るために移植処置後肢抗体を生体内で使用することも考えられる。

補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）平成２年　３月３０日 特許庁長官　吉　１）　文　毅　殿 １、特許８願の表示 ＰＣＴ／ＵＳ　８８１０３１２３ ２発明の名称 ヒトＴ細胞表面レセプターのガンマ鎖のエピトープを認識する単クローン性抗体 ３、特許出願人 名　称　クールター　コーポレーション４、代　理　人 住所　東京都千代田区霞か関三丁目２番４号霞山ビルディング７階　電話（５８ １）２２４１番（代表）住所　同　所 １９８９年１０月３日 訂正した請求の範囲 １、（補正後）単クローン性抗体が「ガンマ」と呼ばれる遺伝子により前記ガン マ遺伝子のＶ又は可変領域において暗号化される「第２科」のＴリンパ球のレセ プターを認識することを特徴とする抗ＴｉガンマＡ型の単クローン性抗体。

２、単クローン性抗体が１ｇＧ２のサブクラスに属する請求の範囲第１項記載の 単クローン性抗体。

３、（補正後）単クローン性抗体がＳＤＳ　−ＰＡＧＥ電気泳動により非還元条 件下に測定した約８５０００ダルトンの分子量を有するヒトＴリンパ球の表面上 の糖タンパク質構造を認識する請求の範囲第１項又は第２項記載の単クローン性 抗体。

４、（補正後）単クローン性抗体がＳＤＳ　−ＰＡＧＥ電気泳動により還元条件 下に測定した約４１０００ないし４４０００ダルトンＯ分子量を有するヒトＴリ ンパ球の表面上の糖タンパク質構造を認識する請求の範囲第１項又は第２項記載 の単クローン性抗体。

５、（補正後）単クローン性抗体がＶガンマ９断片をＪガンマＰ断片に会合させ る再結合遺伝子により暗号化される糖タンパク質構造を特異的に認識する請求の 範囲第１項又は第２項記載の単クローン性抗体。

６、　単クローン性抗体がＡＴＣＣに受託番号）ＪＢ　９５２８で寄託されたハ イブリドーマ細胞系統により産生されることを特徴とする抗ＴｉガンマＡ型の単 クローン性抗体。

７、（補正後）単クローン性抗体がそれに複合する検出可能な標識を有する請求 の範囲第１項ないし第６項のいずれか一つの項に記載の単クローン性抗体。

８、（補正後）前記標識が放射性又は蛍光マーカーよりなる請求の範囲第７項記 載の単クローン性抗体。

９、（補正後）ハイブリドーマ細胞系統がガンマと呼ばれる遺伝子により前記ガ ンマ遺伝子のＶ又は可変領域において暗号化される第２科のＴリンパ球のレセプ ターを認識する抗ＴｉガンマＡ型の単クローン性抗体を産生ずることができるこ とを特徴とするハイブリドーマ技術により産生されるハイブリドーマ細胞系統。

１０、（補正後）ハイブリドーマ細胞系統が抗ＴｉガンマＡ型の単クローン性抗 体を産生ずる、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション番号ＨＢ　９５ ２８で寄与するサンプルの本質的特徴を有することを特徴とするハイブリドーマ 技術により産生されるハイブリドーマ細胞系統。

１１、（補正後）　ＣＤ３タンパク質に会合したＴレセプター構造を有する分子 を免疫沈殿するために請求の範囲第１項ないし第６項のいずれか一つの項に記載 の単クローン性抗体の使用。

１２、（補正後）それぞれ還元及び非還元条件下に測定した４１０００ないし４ ４０００ダルトン及び８５０００ダルトンの分子量を有する膜分子を免疫沈殿す るために請求の範囲第１項ないし第６項のいずれか一つの項に記載の単クローン 性抗体の使用。

１３、（削除） 国際調査報告 ＰＣＴ／ＵＳ８８１０３１２３

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. １．単クローン性抗体がＴ細胞内で特異的に再配列する「ガンマ」と呼ばれる遺 伝子により暗号化される「第２科」のＴリンパ球のレセプターを認識することを 特徴とする抗ＴｉガンマＡ型の単クローン性抗体。
2. ２．単クローン性抗体がＩｇＧ２のサブクラスに属する請求の範囲第１項記載の 単クローン性抗体。
3. ３．単クローン性抗体がＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動により非還元条件下に測定し た約８５０００ダルトンの分子量を有するヒトＴリンパ球の表面上の糖タンパク 質構造を認識する請求の範囲第１項又は第２項記載の単クローン性抗体。
4. ４．単クローン性抗体がＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動により還元条件下に測定した 約４１０００ないし４４０００ダルトンの分子量を有するヒトＴリンパ球の表面 上の糖タンパク質構造を認識する請求の範囲第１項又は第２項記載の単クローン 性抗体。
5. ５．単クローン性抗体がＶガンマ９断片をＪガンマＰ断片に会合させる再結合遺 伝子により暗号化される糖タンパク質構造を特異的に認識する請求の範囲第１項 又は第２項記載の単クローン性抗体。
6. ６．単クローン性抗体がＡＴＣＣに受託番号ＨＢ９５２８で寄託されたハイブリ ドーマ細胞系統により産生されることを特徴とする抗ＴｉガンマＡ型の単クロー ン性抗体。
7. ７．検出可能な標識により標識された請求の範囲第１項ないし第６項のいずれか 一つの項に記載の単クローン性抗体。
8. ８．放射線標識された請求の範囲第７項記載の単クローン性抗体。
9. ９．蛍光標識又はマーカーをそなえる請求の範囲第７項記載の単クローン性抗体 。
10. １０．請求の範囲第１項記載の単クローン性抗体を産生することができることを 特徴とするハイブリドーマ細胞系統。
11. １１．ＡＴＣＣに受託番号ＨＢ９５２８で寄託したことを特徴とするハイブリド ーマ細胞系統。
12. １２．ＣＤ３タンパク質に会合したＴレセプター構造を有する分子を免疫沈殿す るために請求の範囲第１項ないし第６項のいずれか一つの項に記載の単クローン 性抗体の使用。
13. １３．それぞれ還元及び非還元条件下に測定した４１０００ないし４４０００ダ ルトン及び８５０００ダルトンの分子量を有する膜分子を免疫沈殿するために請 求の範囲第１項ないし第６項のいずれか一つの項に記載の単クローン性抗体の使 用。