JPH03500409A - 血管作動性ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 血管作動性ペプチド 本発明は、新規なバットシン誘導体に関し、更に詳細にはバットシン（ＶＴ）構 造が１．２および８位で改質された点で天然のホルモンと異なるバッドシン誘導 体に関する。

新規なＶＴ誘導体は血管作動性であり、更に詳細には血圧を明確に上昇させこと により血管作動性であり、幾つかの場合には効果がかなり延長される。

背景 脳下歪体の後葉か′ら産生されるペプチドホルモンであるバンプレシンは主とし て２つの機能を有する。すなわちこのホルモンは抗利尿作用（尿の排泄低下）お よび血管壁の平滑筋に対する収縮作用を有し、後者の作用は血圧上昇を生じ、出 血傾向を低下させる。したがって、臨床的使用では、パップレシンは短期間の非 特異的作用を有する。

今日、効果が長時間持続するパップレシン類似体、すなわちＮ−末端に３個のア ミノ酸残基が伸長されたりジン−パップレシンが発売されている。このパップレ シン類似体はいわゆるプロホルモンまたはホルモゲンとして作用し、すなわちこ れはパップレシンの効果の持続時間を増加させるのである。この伸長されたパッ プレシン類似体の薬理作用自体は極めて小さく、付加されたＮ−末端が酵素加水 分解によって開裂して遊離のりジン−パップレシンが形成されて初めて作用する 。このプロホルモンは、効果が長時間持続する他に、放出されるパップレシンの 血中濃度を決定する生体の酵素活性が限定されていることにより、過剰投与の危 険性が少なくなるという利点を有する。このようにして、血圧を上昇させて患者 に害を及ぼすことがあるパップレシンの、血中濃度の極端な増加を回避すること が可能である。しかしながら、前記のパップレシン類似体は効力が低く且つパッ プレシンと同様に非特異的であるという大きな欠点を有している。

出血抑制剤として用いられ、かつ、いわゆる起立性低血圧、すなわち体位の変化 による血圧降下の状態に、用いられる血管収縮性物質が必要とされている。これ らの薬物は特異的に血圧を上昇させ、抗利尿作用が低いため長期間治療を受けて いる患者の水中前を回避するものである。また、これらの化合物は効果が長時間 持続することが有利である。

発明の説明 本発明の新規な血管作動性ペプチドは、特異的に血圧を増加させ、すなわちこれ らは昇圧特異性であり、抗利尿作用に対する血圧作用の比率が高いことを意味す る。

更に、これらのペプチドは幾つかの場合には効果がかなり長時間持続する。本発 明による化合物は、出血を抑制し、体位の変化による血圧降下の状態、いわゆる 起立性低血圧に用いられ、また一般の血圧増加剤としても用いられる医薬組成物 として用いられるものである。

本発明によるＶＴ誘導体は、式 ％式％ （式中、Ｈｒｎｐ−２−ヒドロキシ−３−メルカプトプロＨ ＱｌとＱ２は同じであるかまたは異なるものであり、Ｈまたは同じであるかまた は異なる天然のまたは天然でないＬ−またはＤ−アミノ酸であり、 ｎは１．２または３である）を有する。

本発明によるＶＴ誘導体は、医薬組成物の形態であって、本発明による少なくと も１種類のＶＴ誘導体が薬学上受容可能な添加剤および／または希釈剤と組合せ た活性成分として含まれているものとして表わすことができる。本発明による医 薬組成物は、好ましくは非経口投与に好適な製剤の形態をしている。これらの製 剤は、注射、輸液または鼻腔内投与による投与に好適である。希釈剤は、例えば 生理食塩溶液でよい。

本発明による医薬組成物は、瞬間的効果を生じる持続時間が比較的短い特異的に 血圧を増加させる誘導体を、効果を長時間延長する持続時間の長い特異的に血圧 を増加させる誘導体と組合せて含むことができる。

本発明によるＶＴ誘導体の調製 本発明によるＶＴ誘導体は、ペプチドの分野で知られている方法と類似の方法に よって調製することができる。

例えば、本発明による化合物は、例えばＬａｗ、　Ｈ，Ｂ、とＤｕ　Ｖｉｇｎｅ ａｕｄ、　Ｖ、（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｃｈｅｍ ｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ）、８２．　（１９８０）　４５７９−４５８１）　、 Ｚｈｕｚｅ、　Ａ、Ｌ、　。

Ｊｏｓｉ、　Ｋ、、　ＫａｓａｒＩｒｅｋ、　Ｅ、およびＲｕｄｉｎｇｅｒ、　 Ｊ。

（Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ’　Ｃｚｅｅｈｏｓｌｏｖａｋ　Ｃｈｅｍｉｃａ ｌ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ　。

２９、　（１９１３４）、　２６４８−２１ｉ６２）により開示され、Ｌａｒｓ ｓｏｎ、　Ｌ、−Ｅ、、　Ｌｌｎｄｅｂｅｒｇ、　Ｇ、　、　Ｍｅｌｉｎ、　Ｐ 、　Ｐｌｉｓｋａ、　Ｖ、、（Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈ ｅｍ１ｓｔｒｙ亜（１９７Ｂ）、　３５２−３５８）によって改良された通常の 方法で、アミノ酸を液相で互いに逐次的にカップリングすることによって調製す ることができる。アミノ酸を互いにカップリングするいわゆるペプチド結合の生 成は、固形相（一般的には樹脂）を出発物質として用いて、第一のアミノ酸のＣ −末端を力・ノブリングした後、次のアミノ酸のＣ−末端を第一のアミノ酸のＮ −末端にカップリングする等によって行うこともできる。最後に、生成したペプ チドを固層から遊離させる。

下記の実施例では、ＭｅｒｒｉＮｅｌｄ、　Ｒ，Ｂ、　Ｊ、　Ａａ、　Ｃｈｅｗ 、　Ｓ。

ｃ、、　（１９６３）　８５．２１４９　、Ｍｅｒｒｉｒｉｅｌｄ、Ｒ，Ｂ、　 Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９Ｇ４）、　３．　ｔ３ｇｓおよびＫｏｎｉｇ、 　Ｗ、　Ｇｅｊｇｅｒ、　Ｒ，。

Ｃｈｅｌｌ、　Ｂｅｒ、（１９７０）、１０３．７８８に開示の方法に従って、 このいわゆる固相法が用いられている。

合成の一般的説明 下記に示される実施例において調製される総てのＶＴ誘導体は、第二のカップリ ングの後に停止工程を有する二重カップリング法を用いてアプライド・バイオシ ステムス・４３０Ａ・ペプチド・シンセタイザー（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓ ｔｅａｓ　４３０Ａ　Ｐｅｐｔｊｄｅ　５ｙｎｔｈｅｔｊｚｃｒ）上で合成した Ｏ用いた樹脂は、理論配合量がＯ，８６ミリ当量／ｇの４−メチルベンズヒドリ ルアミン型のもの（ペプチド・インターナショナル（Ｐｅｐｔ４ｄｅｓ　Ｉｎｔ ｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、ルイスヴイル、ケンタラキー、米国）であった。この 合成の最終生成物は、真空で一晩乾燥した。。このペプチドを、次に掃去剤とし てのアニソールとエチル−メチル−スルフィド（ＩＦ：アニソール：　ＥＭＳ− １０＋　０５　：　０５）の存在下にて液体フッ化水素で処理することによって 樹脂から離層させた。フッ化水素を蒸発によって除去させた後、樹脂を酢酸エチ ルに懸濁して濾過した。固形物をフィルター上で追加の酢酸エチル（３ｘ　１０ ０ｍ１）で洗浄し、離層したペプチドを酢酸（１００ｍｌ）で抽出した。抽出液 を２０％酢酸／メタノールで手早く希釈して体積を２リツトルとし、０．１モル ヨウ素／メタノール溶液で処理して、微かに褐色を帯びる程度とした。次に、ア セテート型のＤｏｗｅｘ　Ｉ　Ｘ　８イオン交換体（Ｂｌｏ−Ｒａｄ、リッチモ ンド・カリフォルニア）を加え、混合物を濾過した。濾液を蒸発させ、残渣を１ ％酢酸／水から凍結乾燥した。次いで、生成物をＶｙｄａｃ　２０−２５　ｕ　 （Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　Ｇｒｏｕｐ、カリフォルニア）を充填したカラム上で ０．１％トリフルオロ酢酸水溶液中にアセトニトリルを含む適当な系で逆相液体 クロマトグラフィによって精製した。カラムから集めた試料を、Ｂｏｎｄａｐａ ｋ　Ｃ１８カラム（Ｍｉ　ｌ　ｌ　ｊｐｏｒｅ、ミルフォード、マサチニーセッ ツ）を備えた分析用高性能液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）（Ｖａｒｉａｎ　 ５５００、サニーバレー、カリフォルニア）によって分析した。純粋な物質を含 む両分を集め、溶媒を蒸発させ、生成物を１％酢酸／水から凍結乾燥した。完成 品について最終的なＨＰＬＣ分析を行い、ペプチドの構造をアミノ酸分析および 高速原子衝撃質量分析法（Ｆ　Ａ　Ｂ　Ｍ　Ｓ　）によって確かめ合成の際に用 いた総てのアミノ酸はＬ−アミノ酸であり、α−アミノ官能基を第三級ブトキシ カルボニル基で保護した。側鎖は次のようにして保護した。

Ｓｅ　ｒ　（ＢＺＬ）　、Ｔｈ　ｒ　（ＢＺＬ）　、Ｔｙ　ｒ（２−ＢｒＣｂｚ ）　、Ｌｙｓ　（２−ＣＩＣｂｚ）、Ｏｒｎ　（Ｃｂｚ）、Ａｓｐ　（ＢＺＬ） 、Ｇｌｕ（ＢＺＬ）　、Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）　、Ｃｙｓ　（Ｍｏｂ）、Ｈｍｐ　 （Ａｃｍ）　、Ｃｙｓ　（Ａｃｍ）　、Ｏｒｍ（Ｂｏｃ）。

括弧内の略号は、下記の意味を表わす。

ＢＺＬ−ベンジル、 ２−ＢｒＣｂｚ−２−ブロモカルボベンゾキシ、２−ＣＩＣｂｚ−２−クロロカ ルボベンゾキシ、Ｃｂｚ−カルボベンゾキシ、 Ｔｏｓ−トシル、 Ｍｏｂ−４−メトキシベンジル、 Ａｃｍ−アセタミドメチル、および Ｂｏｃｍ第三級ブチルオキシカルボニル。

アミノ酸誘導体は、Ｂａｃｈｅｍ八〇　（スへス）から入手した。

実施例ｌ ｌ−Ｈｍｐ−２−Ｐｈｅ−８−Ｏｒｎ−ＶＴ［Ｑ　１−　ＨＳｎ　−３およびＱ ２−Ｈコペプチドは、一般的説明に従って合成した。２−ヒドロキシ−メルカプ トプロピオン酸［５−（ｐ−メトキシ）ベンジル］を１位に用いた。

純度（ＨＰＬＣ）：　９９．５％（２７％アセトニトリル１０．１％ＴＦＡ、保 持時間８．１３分（２ｍｌ／分、２２３　ｎｏで検出）。

アミノ酸分析： Ａｓｐ　１．０５、Ｇｌｕ　１．０２、Ｐｒｏ　１．００、ＧｌｙＯ，９４、Ｉ 　ｌ　ｅ　１．００　、Ｐｈ　ｅ　Ｏ，９５，０ｒｎ０．９ｉ。

実施例２ １−ｌｍｐ−２−Ｐｈｅ−８−Ｄａｂ−ＶＴ［Ｑ−Ｈ，ｎ−２、Ｑ２−Ｈコ この類似体は、一般的説明および実施例１にしたかって合成した。８位のカップ リングにはＢｏｃ　Ｄａｂ（Ｃｂｚ）を用いた（Ｄａｂ−２，４−ジアミノ酪酸 ）。

純度（ＨＰＬＣ）７　９９．５％（２４％アセトニトリル１０．１％ＴＦＡ、保 持時間６．０分（２ｍｌ／分、２２３　ｎａで検出）。

アミノ酸分析： Ａｓｐ　１．００、Ｇｌｕ　１．０３、Ｐｒｏ　０．９７、Ｇｌｙｌ、０Ｂ、Ｉ 　ｌ　ｅ　Ｏ，９ｇ　、Ｐｈｅ　Ｏ，９９゜実施例３ １−Ｈｍｐ−２−Ｐｈｅ−８−Ｏｒｎ　（Ａｌａ）−ＶＴ［Ｑ−Ｈ，ｎ−３、Ｑ ２−アラニル］ この化合物は、８位のアミノ酸を除き実施例１と同様に合成した。ＢｏＣ−Ｏｒ ｎ　（Ａｌａ）−ＯＨをＢｏｃ−Ｏｒｎ　（Ｃｂｚ）ＯＨの変わりに用いた。

純度（ＨＰＬＣ）：　９７．８％（２７％アセトニトリル１０．１％ＴＦＡ、保 持時間１０．０９分（２ｍｌ／分、２２３　ｎｍで検出）。

アミノ酸分析： Ａｓｐ　１．０５、Ｇｌｕ　Ｏ，９５、Ｐｒｏ　１．０３、Ｇｌｙ　１．０　、 Ａｌａ　０．９ｇ、Ｃｙｓ　Ｏ，８７、ｌｉｅ　Ｏ，７３、Ｐｈｅ　Ｏ，９０、 Ｏｒｎ　０．９Ｂ。

［Ｑ　−Ｇｌｙ、ｎ−３およびＱ２−Ｈ１保護されたノナペプチドＨｍｐ　（Ａ ｃｍ）−Ｐｈｅ−Ｉ　１ｅ−Ｇｉｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ　（Ａｃｍ）−Ｐｒｏ−Ｏ ｒｎ　（Ｂｏｃ）−Ｇｌｙ−ＮＨ２（５００ｍｇ；一般的説明にしたがって固相 法によって調製）をＤＭＦ　（２５ｍｌ）に溶解した。ピリジン（５ｍｌ）と予 め生成されたＢｏｃｃ１ｙ無水物（１０当ｆｆ１）を、激しく撹拌しながら０℃ で加えた。反応物混合物を一晩室温で放置した。生成物をエタノールとジエチル エーテルで沈澱し、濾過し、真空で乾燥することによって単離した。

保護されたデカペプチド（Ｂｏｃ−Ｇｌｙ、−Ｉｍｐ（Ａｃｍ）　−Ｐｈ　ｅ　 −１１ｅ−Ｇ　ｌ　ｎ−Ａｓ　ｎ−Ｃｙ’ｓ（Ａｃｍ）−Ｐｒｏ−Ｏｒｎ　（Ｂ ｏＣ）−Ｇｌｙ　−ＮＨ２（３４２ｍｇ、　０．２５ミリモル）を７０％メタノ ール（１５００ｍｌ）に溶解して、ヨウ素（１８０ｍｇ）のメタノール（３７５ ｍｌ）溶液を撹拌下にて滴下して加えた。Ｄｏｖｅ　ＩＸ８（５０ｇ、アセテー ト型）を加え、混合物を濾過した。

濾液を蒸発させ、残渣をトルエンを蒸発させた後、デシケータ−中で真空で乾燥 させた。

次いで、生成物をアニソール（１ｍｌ）含むＴＦＡ（１０ｍｌ）で処理し、１５ 分間撹拌した後、ジエチルエーテル（１００ｍｌ）で処理した。沈澱を濾過によ って分離し、真空で乾燥した。

生成物を逆相液体クロマトグラフィによって精製した。

純度（ＨＰＬＣ）：　９５％（２４％アセトニトリル１０．１％ＴＦＡ、保持時 間５．８分（１ｍｌ／分、２２３　ｎｉで検出）。

構造はアミノ酸分析とＦＡＢ　ＭＳ分析によって確認した。

アミノ酸分析： Ａ、ｓｐ　１．２９、Ｇｌｕ　１．００、Ｐｒｏ　０．９Ｂ、Ｇ　１　ｙ　２． ３５　、Ｃｙ　ｓ　Ｏ，４４、Ｉ　ｌ　ｅ　Ｏ，８２、Ｐｈ　ｅ　Ｏ，９７、Ｏ ｒ　ｎ　１．１２゜薬理試験 本発明のバットシン誘導体を、いわゆる４点試験で血圧および抗利尿作用の効果 について試験した。すなわち試験物質の活性を標準製剤（ＡＶＰ−アルギニン− パップレシン）に関連付け、それぞれの物質についての２種類の投与量の効果を 分析した。更に、２種類の既知の昇圧特異性類似体（ＶＴ誘導体）、すなわち１ −ｍｐ　ａ　−２−Ｐｈｅ−８−Ｏｒｎ−ＶＴ　（ｍｐａ−３−メルカプトプロ ピオニル）　（Ｈｕｇｕｅ　ｎｉｎ、　Ｒ，Ｌ、、Ｂｏｉｓｓｏｎｎａｓｕ、Ｒ 。

Ａ、、　１９６Ｂ、Ｈｅ１ｖ、　Ｃｈｉｓ、　ＡｃＬａ、　４９．７１１　）お よび２−Ｐｈｅ−８−Ｏｒｎ−ＶＴ　（ＳＥ−３３２９９３，５ａｎｄｏｚ）を 比較のために試験した。

血圧試験を、予めジベナミンで処理した麻酔を施したＳｐｒａｇｕｅ　Ｄａｖｌ ｅｙラット（約２５０ｒ）について行った（Ｄｅｋａｎｓｋｉ、　Ｊ、　、　１ ９５２、Ｂｒ、　Ｊ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　７．５６７）。

ペプチドを静脈内注射した後の最大血圧増加量を強度で表したものを、効果の尺 度として用いた。

作用強度に基づく効果の測定に加えて、作用の長さの尺度を示した［持続性指数 （１，Ｐ、　）　、Ｐｌｉｓｋａ、　Ｖ、。

１９６Ｂ、　Ａｒｚｎｅｉｍ、　Ｐｏｒｓｃｈ、、ｌｆ３．８８Ｂ］　ｏこの無 次元因子は、標準的ＡＶＰに対するそれぞれの類似体の効果持続時間の尺度であ る。

抗利尿効果は、麻酔した水負荷したＳｐｒａｕｇｅ　ｄａｗｌｅｙラット（約２ ００ｇ）によって測定した（Ｌａｒｓｓｏｎ、　Ｌ、Ｅ、　。

Ｌｉｎｄｅｂｅｒｇ、　Ｃ，、Ｍｅｒｉｎ、　Ｐ、　ａｎｄ　Ｐｌｉｓｋａ、　 Ｖ、、　１９７Ｂ、　Ｊ。

性の最大増加量を効果のパラメーターとして用いた。

これらの２種類の試験において、それぞれの誘導体の作用と標準製剤、ＡＶＰ、 の作用とを比較して、効果を４点試験によって測定し、ｍｇ当たりの国際単位（ １υ／ＩＩ１ｇ）（Ｓｔｕｅｒｍｅｒ、　Ｅ、、　Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｒ　Ｅ ｘｐｅｒｉｍｅｎｔａ！Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　、　１９ＢＢ、Ｖｏ１２３ ．１３０〜１８９　）で表す。

血圧に対する特異性を、血圧に対する効果／抗利尿性に対する効果の比（ＢＰ／ ＡＤ）によって表す。

薬理試験の結果を表−１に示す。

表−１から、本発明の化合物４および５は、既知の誘導体２および３に比較して 血圧増加に関する効果が極めて高く、且つ特異性は既知化合物１．２および３と 同等であるかまたはこれらより高いことが判る。血圧増加に関する効果が極めて 高いことにより、化合物４および５は既知の昇圧特異性を有する物質２および３ よりもかなり低い投与量で投与することが可能である。また、表−１より、プロ トラグと考えることができる化合物６および７は、血圧に対する効果が極めて高 く且つ特異性は適度であることも判る。更に、これらの化合物は、既知の物質１ ．２および３と比較してかなり長時間の効果を示す。

医薬組成物の調製の例 ＶＴ誘導体を、マンニトールと共に蒸留水に溶解する。

この溶液をアンプルに入れ、凍結乾燥して、密封する。

次に、アンプル中の内容物を所望により等張食塩水で希釈して、投与に適当な濃 度にすることができる。

国際調査報告 ・Ｍ１１１１＠１ｖｌ＾ｗ’ｕ１ｍ判＊、Ｐこ１／Ｓ［εε１００５０９

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. １．下式を有するバソトシン誘導体。 【配列があります】 （式中、Ｈｍｐは２−ヒドロキシ−３−メルカプトプロピオン酸残基 ▲数式、化学式、表等があります▼ Ｑ１とＱ２は同じであるかまたは異なるもので、Ｈまたは同じであるかまたは異 なる天然のまたは天然でないＬ−またはＤ−アミノ酸であり、 ｎは１、２または３である）
2. ２．Ｑ１がＨであり、 ｎが３であり、Ｑ２がＨである、請求の範囲第１項に記載のバソトシン誘導体。
3. ３．Ｑ１がＨであり、 ｎが２であり、Ｑ２がＨである、請求の範囲第１項に記載のバソトシン誘導体。
4. ４．Ｑ１がＨであり、 ｎが３であり、Ｑ２がアラニルである、請求の範囲第１項に記載のバソトシン誘 導体。
5. ５．Ｑ１がグリシルであり、 ｎが３であり、Ｑ２がＨである、請求の範囲第１項に記載のバソトシン誘導体。
6. ６．少なくとも１種類の請求の範囲第１項に記載のバソトシン誘導体を活性成分 として薬学上受容可能な添加剤および／または希釈剤と組合せて含んで成る、医 薬組成物。
7. ７．医薬組成物が非経口投与に好適な製剤の形態である、請求の範囲第６項に記 載の医薬組成物。
8. ８．医薬組成物が鼻腔内投与に好適な溶液の形態をしている、請求の範囲第７項 に記載の医薬組成物。