JPH03501560A

JPH03501560A - 食細胞の細胞表面タンパク質の付着機能領域に特異的なモノクローナル抗体

Info

Publication number: JPH03501560A
Application number: JP63504165A
Authority: JP
Inventors: シュロースマン　スチュアート　エフ; グリフィン　ジェームス　ディー
Original assignee: ダナ‐ファーバー　キャンサー　インスティチュート
Priority date: 1987-07-06
Filing date: 1988-05-02
Publication date: 1991-04-11
Also published as: ES2013338A6; AU1721888A; DE3853588D1; EP0357672A4; US5019648A; IE61392B1; MX9203245A; ATE121130T1; CN1030611A; WO1989000190A1; AU616182B2; CA1340015C; KR890701734A; DE3853588T2; DK3390A; EP0357672A1; IE881357L; KR960009013B1; IL86676A; IL86676A0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】５、前記モノクローナル抗体は慢性顆粒球白血病起源の末梢血液試料からの顆粒球との反応性を示す請求項１記載の細胞系。

６、前記モノクローナル抗体は正常な単球、正常な顆粒球および正常な骨髄単核細胞との反応性を示す請求項１記載の細胞系。

７、前記モノクローナル抗体は正常な赤血球および血小板との反応性を示さない請求項１記載の細胞系。

８、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８食細胞表面タンパク質の付着領域に対して特異的な抗体ＭＹ　９０４を産生し、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，）ｍＨＢ　９５１０という受配番号で寄託されている試料の本質的な特性を有し、ハイブリドーマ技術によって製造された細胞系。

９、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８食細胞表面タンパク質の付着領域に特異的に結合し、補体の１ｃ３ｂ成分との結合を示さないモノクローナル抗体。

１０、ヒトのＴリンパ球または３９７８球との反応性を示さない請求項９記載のモノクローナル抗体。

１１、慢性顆粒球白血病の末梢血液試料からの顆粒球との反応性を示す請求項９記載のモノクローナル抗体。

１３、正常な赤血球および血小板との反応性を示さない請求項９記載のモノクローナル抗体。

１４゜ヒトおよび犬の正常な好中球との反応性を示す請求項９記載のモノクローナル抗体。

１５、＾、Ｔ、Ｃ，Ｃ，受記番号Ｎｏ、ＨＢ　９５１０の本質的特性を有するハイブリッド細胞系によって産生された請求項９記載のモノクローナル抗体。

１６、　Ｍｏ１顆粒球および単球の細胞表面タンパク質のエピトープと特異的に結合して、正常な顆粒球および単球の細胞の付着依存性機能の活性化を阻害し、かつ補体の１Ｃ３ｂ成分に結合しないモノクローナル抗体。

１７、ヒトにおける正常な好中球との特異的な結合を示す請求項１６記載のモノクローナル抗体。

１８、１５５０００ドルトン分子量および９４０００　ドルＩ・ン分子量の２種のサブユニットから成る正常なヒトの好中球表面上タンパク質に結合する請求項１６記載のモノクローナル抗体。

１９、モノクローナル抗体が正常なヒトの好中球表面上の抗原部位に本質的に結合し、該抗原部位がＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８食細胞表面タンパク質の付着領域でありかつ補体の１Ｃ３ｂ成分に結合しない特性を有し、実験室的インビトロ診断イムノアッセイにおいて反応体として使用されるモノクローナル抗体。

２０、前記表面タンパク質が、１５０００　ドルトン分子量および９４０００ドルトン分子量の２種のサブユニットを有しかつヒトのＴリンパ球およびＢリンパ球との反応性を示さない特性を有する請求項１９記載のモノクローナル抗体。

２１、ヒトの慢性顆粒球白血病細胞で免疫したマウスからハイブリドーマ技術によって得られたものであり、正常な単球、正常な顆粒球および正常な骨髄単核細胞との反応性を示す請求項１９記載のモノクローナル抗体。

明　細　書食細胞の細胞表面タンパク質の付着機能領域に特異的なモノクローナル抗体（背景技術）本発明は食細胞表面上に発現された特異的抗原部位に結合するモノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマ細胞系に関するものである。特に、このモノクローナル抗体はＣＤ１１ｂｌｉタンパク質の特異的８４Ｈに結合し、該領域を不活性にすることにより食細胞の付着依存性機能（ａｄｈｅｓｉｏｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ）を阻害するが、他の食細胞機能には影響を及ぼさない。

（従来技術）ヒトの循環系内の末梢血液は主として赤血球、血小板および白血球から成る。白血球群はリンパ球、好中球、単球、好酸球および好塩基球から成る。リンパ球は主として］゛細胞またはＢ細胞のサブタイプから成り；リンパ球の追加サブセットも既知である。白血球の多様な機能および白血球の臨床面での関連性は科学分野において大きな異心を呼び起した。

好中球は、好酸球および好塩基球はその細胞質顆粒含有量のために「顆粒球」として識別されている。顆粒球および単球は、食細胞すなわち消化細菌、他の微生物、および一般的に「抗原」と呼ばれる他の種類の異物に対する性質のために「食細胞」として識別されている。この食細胞機能は宿主を種々の感染から守るのに重要であり、また種々の炎症疾患において重要である。

食細胞は骨髄中の普通の前駆細胞から産生され、梢血液中を循環し、最後に感染を制御するのに必要なものとして、あるいは炎症反応に関与するのに必要なものとして組織に入る。このような応答機能はヒトの食細胞および動物すなわち霊長類動物および犬の食細胞において見い出されている。

好中球はヒトおよび動物の末梢血液中の最も普通な白血球である。１ミクロリンドルの正常なヒトの全血は平均して５Ｘ１０３個の白血球を含有し、そのうち３９７５個は好中球であり、１５０個は好酸球であり、２５個は好塩基球であり、２５０個は単球であり、１５００個はリンパ球である。

あらゆる種類の感染または炎症に対する顆粒球または単球の免疫学的応答において、これらの細胞は先ず活性化され、ある細菌産生物、補体成分などのような「化学誘引物質因子（ｃｈｅｍ。

−ａｔｔｒａｃｔａｎｔ　ｆａｃｔｏｒｓ）に応答して適当な区域に移動する。

この誘引プロセスは「走化性」と呼ばれる。顆粒球および単球は、炎症区域または感染区域において、その標的に対して強固に付着しようとする。このために、これらの細胞はこのような相互作用を促進する補体Ｆｃおよびフィブロネクチン　レセプターのような特異的細胞表面レセプター塘タンパク質を多数持っている。

食細胞付着に包含される最も重要な細胞表面レセプター糟タンパク質群の一つは、「カム（ＣＡ？Ｉ）　ＪまたはＣＤＩＩ／ＣＤ１８として識別（ｉｄｅｎｔｉｆｙ）されている白血球細胞付着分子群である。この群は少くとも３種の細胞表面タンパク質から成り、これらのタンパク質はそれぞれ２種のサブユニットを有する。これらのタンパク質は９４０００　ドルトンの分子量を有する共通のベーターサブユニットＣＤ１８を共有し、異なるアルファーサブユニットを有する。

この群に属する既知のものはＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、Ｍｏ１（ＣＤＩ　ｌｂ／ＣＤｌ８）、オヨびＰ２Ｓ５．９４　（ＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８）　と呼ばれている。

これらの糖タンパク質はそれぞれ１８００００．１５５０００および１５００００のドルトン分子量を有するアルファーサブユニットを有する。

これらの細胞表面タンパク質はいずれもモノクローナル抗体を使用することにより特異的に識別される。この群の表面槽タンパク質の生物学的重要性は、白血球が遺伝的にこの抗原群に欠けているというヒトの疾患を識別（ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ）することにより認められている。この疾患は重い細菌感染が再発し、食作用、走化性、白血球凝集、およびプラスチック上における好中球の拡散のような付着依存性機能が不足しているという特性を有する。

Ｍ　ｏ　１は顆粒球、単核食細胞およびヌル細胞の上に存在する細胞表面槽タンパク質である（トッド、アール、エフ、　ＩＩＩ、ナドラー、エル、エム１．およびシュロスマン、ニス、エフ、　（Ｔｏｄｄ、　Ｒ。

Ｆ、ＩＩＩ、Ｎａｄｌｅｒ、Ｌ、Ｍ、ａｎｄ　Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ、Ｓ、Ｆ、ａｎｄ　Ｔｅｒｈｏｒｓｔ、Ｄ、）。

ヒトの単球上の抗原、「ジャーナル、オプ、イムノロジー」（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＪ　）、１２６：１４３５〜１４４２．１９８１）。ヒトにおいては、この分子は１５５０００ドルトンおよび９４０００　ドルトンを有する２種の非共有結合タンパク質から成る（トッド、アール。

エフ、　ＩＩＩ、ファン　アグトーフェン、アー、、シュロスマン、ニス、エフ０．およびターホースト、ディー、（Ｔｏｄｄ、Ｒ，Ｆ、ＩＩＩ、ｖａｎＡｇｔｈｏｖｅｎ、八、＋Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ、Ｓ、Ｆ、、ａｎｄ　Ｔｅｒｈｏｒｓｔ、Ｄ、）＋　ヒトの単球上の分化抗原（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ａｎｔｉｇｅｎｓ）ＭｏｌおよびＭＯ２の構造分析、「ハイブリドーマ（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ）　＝　１：３２９〜３３７．１９８２）。

この複合体は他の顆粒球、内皮および不活性基質を包含する種々の表面に対する細胞の付着を媒介することが分っている。これらの分子における遺伝子欠失は、顆粒球が抗菌炎症応答を媒介できないために、細胞感染の再発を招（。これらの分子が欠失している患者は、白血球数の増大（「白血球増多症」と呼ばれる）、およびインビトロ測定を行った場合に基質に対する凝集付着、走化性およびオプソニンを作用させた粒子の食作用の減少あるいは不存在という食細胞活性における機能的欠点を特性として持っている。可溶性の炎症メディエータによる顆粒球および単球の活性化はこれらの分子の発現を増大させる（トッド、アール、エフ、ＩＩＬアーナウト、エム、ニー０．ロジン、アール、イー１．クロウリ−、シー、ニー１．ビータース、ダブリユウ、ニー０．およびパビアー、ビー、エム、（Ｔｏｄｄ、Ｒ，Ｆ、　Ｉ［［、Ａｒｎａ。

ｕ　ｔ、　Ｍ、Ａ、　、　Ｒｏｓ　ｉｎ、　Ｒ，Ｅ、　＋　Ｃｒｏｗｌｅｙ＋　Ｃ，Ａ、　、　Ｐｅｔｅｒｓ＋　Ｗ、　Ａ、　ａｎｄ　Ｂａｂ奄盾秩A　Ｂ。

Ｍ、）、ＭｏＨＭｏｌアルファ；以前にはｇｐ＋　＋　ｏ）の亜細胞性限界化（ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ　１ｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）、好中球と関連する糖タンパク質の表面、「ジェー、クリニ、インベスト、Ｕ、Ｃｌ１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ）、　Ｊ　７４：１２８０〜１２９０．１９８４；アーナウト、エム、ニー３．ハキム、アール。

エム６．トッド、アール、エフ０．ドナ、エヌ、およびコルチン。

エッチ、アール、　（Ａｒｎａｏｕｔ＋Ｍ、Ａ、＋Ｈａｋｉａ＋Ｒ，Ｍ、＋Ｔｏｄｄ、Ｒ，Ｆ、＋Ｄａｎａ＋Ｎ、ａｎｄ　Ｃｏ１ｔｅｎ、Ｈ，Ｒ，）＋血液透析の顆粒球減少における付着促進表面槽タンパク質の発現の増大、「二ニー。エングル、ジェー。

メト（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌ、Ｊ、Ｍｅｄ、）　Ｊ　、３１２：４５７〜４６２．１９８５）　、　Ｍｏｌ　塘タンパク質とは反対に向いたモノクローナル抗体はインビトロ好中球凝集を有効に阻止する゛ほか、食作用を有効に阻止する。

Ｍｏｌ　Ｉ！タンパク質は特に関心が持たれている。その理由は、この糖タンパク質の特殊な分子構造がｒ　１Ｃ３ｂ　Ｊと呼ばれる成分である補体の第３成分フラグメントに結合することができる性質を持っているからである（アーナウト、エム、ニー０．トフド、アール、エフ、ＩＩＩ、ダナ、エヌ、、メ°ラムド、ジェー、、シュロスマン、ニス、エフ、およびコルチン、エッチ、アール、１（Ａｒｎａｏｕｔ、　Ｍ、　Ａ、　、　Ｔｏｄｄ、　Ｒ，Ｆ、　Ｉ　１１．　Ｄａｎａ　Ｎ、　、　？ｊｅｌａｍｅｄ＋　Ｊ、　、　Ｓｃｈ@１ｏｓｓｔａａｎ。

およびモノクローナル抗体による１Ｃ３ｂの単球−顆粒球膜糟タンパク質（Ｍｏｌ）に対する結合の阻害、「ジェー、クリニ、インベスト、（Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、）　Ｊ　、７２：１７１〜１７９．１９８３）　、またＭｏｌ　Ｉ！タンパク質は付着依存性食細胞機能のすべてにおいて決定的に重要である。種々のモノクローナル抗体力筒０１糖タンパク質の機能を阻害することは知られている。

本発明の新規なハイブリッド細胞系から得られたモノクローナル抗体は、好中球の付着依存性機能を阻害することができるが、補体の第３成分の１Ｃ３ｂフラグメントには結合しない、このモノクローナル抗体はｒＭＹ９０４」という名称によって識別されている。このモノクローナル抗体は好中球に特異的に結合する、すなわち顆粒球付着に特異的に関係するＣＤ１１ｂ／ＣＤ食細胞表面タンパク質上の抗原部位に特異的に結合する。　？ＩＹ　９０４モノクローナル抗体が食細胞に付加すると付着依存性食細胞機能が阻害されるが、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８分子の他の機能、例えば、補体の１ｃ３ｂ成分の結合、あるいは他の種類の好中球または単球の機能、例えば走化性ペプチドまたはホルボールエステルなどによるＦｃレセプター活性化およびレスピレ−トリイ・バースト（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｂｕｒｓｔ）の活性化を阻害することはない。

このような特異的なモノクローナル抗体の有用性は極めて多様である。　？ｌＹ　９０４モノクローナル抗体が好中球に結合すると、炎症区域または感染区域への好中球の移動が阻害される。このような好中球への結合は炎症部位または感染部位における既に活性化された好中球の付着および拡散を阻害し、好中球による有毒物質の放出（ｒｅｌｅａｓｅ）を妨害する。モノクローナル抗体ＭＹ９０４はＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８分子のイムノアッセイに適したマーカーによって標識することができ、あるいは蛍光活性化細胞選別または磁気ビーズ分離による結合細胞の除去に適した基質に結合（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）することができる。ある食細胞機能を妨害することができる財９０４モノクローナル抗体の性質は、食細胞の機能を深く研究する際に、特に過大または有害な食細胞機能が臨床疾患に関与している場合に、特に有用である。さらに、このモノクローナル抗体はＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８の表面発現を定量するのに有用であり、従っ゛てこの抗体を上述のＭｏｌ欠失疾患の診断に適用することができる。

（発明の開示）モノクローナル抗体を産生ずるハイブリッド細胞系は、ヒトおよび動物の食細胞の表面上に発現されるＭｏｌ抗原の付着依存性領域に対して特異的である。このモノクローナル抗体は好中球および単球の付着に関与するＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８食細胞のｍ胞表面の部分に対して特異的であり、従ってこのモノクローナル抗体は付着依存性食細胞機能、例えば炎症部位または感染部位に対する走化性および食作用を妨害するが、他の食細胞機能には影響を及ぼさない。

モノクローナル抗体は融合パートナ−の一方がヒトの慢性顆粒球白血病細胞で免疫されているハイブリッド細胞系によって産生される。

（本発明を実施する最良の方法）本発明のモノクローナル抗体はＭＹ　９０４という名称で識別される。このモノクローナル抗体は、コーラ−（Ｋｏｈｌｅｒ）およびミルスタイン（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ）、「ネーチ＋　−（Ｎａｔ、ｕｒｅ）　」２５６：４９５〜４９７（１９７５）に記載されている標準方法によって精製された慢性顆粒球白血病（ＣＧＬ）およびマウス骨髄腫細胞で免疫したマウス膵臓細胞の融合によって生成した。

免疫化法に使用されるヒトのＣＧＬ細胞は独特なもので、特別に作った０日常の診断上の研究のために一人の幼若相のＣＧＬ患者から静脈穿刺により血液を採取した。単核細胞はフィコルーハイバーク（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ）密度勾配沈降法（１，０７７ｇ／ｅｃ）によって作った。次いで、この単核細胞を使用するまで液体窒素の蒸気中の１０χジメチルスルホキシド中で冷凍保存した。

免疫化のために、ＣＧＬ細胞のアリコートを融解し、リン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）中に懸濁させ、ｌ０ＸＩＯ’個の細胞をバルブ／シー（Ｂａｌｂ／ｃ）マウスの腹膜腔および皮下区域に注射した。この操作を１週間１回の間隔で１ケ月間繰り返した。さらに１ケ月経過した後に、同じ患者から得たｌ０ＸＩＯ’個の細胞をマウスの尾の静脈に静脈内注射することによりマウスに追加量を投与した。

３日後に、マウスの肺臓を取り出し、肺臓細胞を従来技術によって採取した。

融合によるパイブリドーマの生成は次のようにして行った。

肺臓細胞を洗浄し、次いで血清を含有していない媒体中でＮ５−１プラズマ細胞腫細胞系と肺臓細胞８個対Ｎ５−１細胞１個の比で混合した。これらの細胞を遠心分離してペレット形状にし、次いで２５°Ｃで８分間Ｑ、５　ｌｌ１１の３０ χポリエチレングリコール（ＰＥＧ）中に懸濁させた。　ＰＥＧをデカンチーシランして除去し、細胞をハイポキサンチンアミノプテリン−チミジン媒体中に希釈し、ミクロタイター　プレート（ｓ＋１ｃｒｏｔｉｔｒｅ　ｐｌａｔｅｓ）に分布させた。

モノクローナル抗体ＭＹ　９０４の反応性試験は間接蛍光抗体法および流動細胞計測法によって行い、選別は当初の患者からのＣＧＬ細胞との反応性について行った。モノクローナル抗体ＭＹ　９０４は、免疫状態にするＣＧＬ細胞との反応性および正常なヒトのＴリンパ球および８９７３球との反応性の不足によって選別した。

モノクローナル抗体ＭＹ　９０４は試験した正常な提供者１０／Ｎｏの精製単球、試験した正常顆粒球１０／１０　、および正常な骨髄単核細胞試料１０／１０と反応することが分った。このモノクローナル抗体は精製３９７８球とは反応しなかった。末梢血液の大きい顆粒状リンパ球のサブセラＩ・において低抗原密度が検出された。

このリンパ球は天然キラー細胞を含有していることが分った。

組織培養に維持されていた細胞系ＫＧ−１を試験し、この細胞系が？ｌＹ　９０４エピトープに対して陽性であることが分った。骨髄細胞系ＨＬ−６０およびＵ９３７を試験し、これらの細胞系が陰性であることが分った。しかし、ホルボールジエステルを付加することによってこれらの骨髄細胞系をインビトロ分化（ｃ！１ｆｆｅｒｅｒｎｔ、１ａｔｅｉｎ　ｖｉｔｒｏ）させた場合には、両細胞系はＭＹ　９０４エピトープを発現した１−次の細胞系：に５６２．ダウジ（Ｄａｕ４ｉ）　、ナルム（Ｎａｌａ＋）−１、ナルムー６、ジェービー（ＪＢ）、ラジ（Ｒａｊ　ｉ）、シーイ・−エム（ＣＥｌつ）、エッチエスピー（）ＩＳＢ）　、および５エプスタイン−バール−形質転換３９７８球細胞系（ラズ（Ｌａｚ）−２２１，−３８８，−１５６，−１４７，−５０９）を試験し、これらの細胞系が陰性であることが分った。正常な赤血球および血小板は、フィトヘマグルチニン活性化１９７３球のように、ＭＹ　９０４の発現に欠けていた。

ヒトの白血病細胞におけるＭＹ　９０４エピトープの発現を検討した。抗体は安定相の慢性顆粒球白血病（ＣＧＬ）患者のすべてからの顆粒球と反応した。幼若相の慢性顆粒球白血病患者３０人について検討を行った。９症例において幼若細胞は陽性であった。

２、性骨髄芽球白血病の１９３症例について検討を行った。モノクローナル抗体ＭＹ−９０４はこれらの患者の５６１の白血病細胞と反応した。

モノクローナル抗体はＩｇＧ１サブクラスに属し、糖タンパク質の免疫沈降物（ｉｎ＋ｍｕｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｓ）は表面標識正常ヒト顆粒球からの１５５０００ダルトンおよび９４０００ダルトンという２種のサブユニットから成る（ダナ、エヌ、　（Ｄａｎａ＋Ｎ−）等、モノクローナル抗体によって識別された食細胞膜塘タンパツ質Ｍｏｌにおける２個の機能領域、「ジュー。イムノロ、（Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、）　Ｊ　１３７：３２５９〜３２６３．１９８６）。

モノクローナル抗体ＭＹ　９０４の反応性の分布は１Ｃ３ｂとの結合を阻害しないが、これは付着依存性プロセス、プラスチック上に拡散している顆粒球および走化性の強力阻害剤である（ダナ等。

上回）。他の抗−Ｍｏｌモノクローナル抗体と比較すると、モノクローナル抗体ＭＹ　９０４は付着依存性機能のみを阻害し、１ｃ３ｂとの結合を阻害しない点で独特なものである。試験を行った他の抗体はモノクローナル抗体４４，９０３．９４．１７．０に珂１０．およびロイシン（Ｌｅｕ）−１５である　（ダナ等上同）。

従って、モノクローナル抗体ＭＹ　９０４はＭｏｌ顆粒球単球細胞表面糟タンパク質を識別し、さらに顆粒球／単球活性の付着依存性プロセスに関与している糖タンパク質におけるエピトープに特異的に結合する。

モノクローナル抗体ＭＹ９０４を産生ずることができるハイブリッド細胞系の試料は１９８７年８月１９日付けにて米国メリーランド州２０８５２．ロックビル、バークローンドライブ１２３０１番地所在のアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，）に寄託されており、その受配番号はＡ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，ＮＣＬ）Ｉ８９５１０である。

インビトロ研究の結果、ヒト、犬および人間に近い霊長類の白血球はＭｏｌ　糖タンパク質を含有する点において共通していることが分った（レトビン、エヌ、エル０．トッド、アール、エフ。

ＩＩｌ、バレー、エル、ニス、およびグリフイン、ジュー。ディー。

（Ｌｅｔｖｉｎ、　Ｎ、Ｌ、、　Ｔｏｄｄ、　Ｒ＋　Ｆ、　ＩＩＩ、　Ｐａ１ｌｅｙ、　ｔ、、ｓ、　、　ａｎｄ　Ｇｒｉｆ　ｆ　ｉｎ＋　i、　Ｄ、）　＋霊長類および犬の顆粒球上におけるＭＹ　９０４骨髄表面抗原の保存（「ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）　Ｊ　６１：４０８〜４１０．１９８３）　、また、正常な犬の好中球に対するモノクローナル抗体ＭＹ　９０４の結合は、ホルボールエステルＰＭＡで刺激した場合における好中球のインビトロ凝集を有効に阻害することが分った（ガイガー、ニー０．ボクサー、エル、ニー９．シンプソン、ビー、ニー０．クラチェシー、ビー１．アール、およびトッド、アール、エフ、　、　１１１　（Ｇｉｇｅｒ＋　Ｕ、　、　Ｂｏｘｅｒ、　Ｌ＋　Ａ　、　、　Ｓｉｎ＋ｐｓｏｎ＋　Ｐ、Ａ、　、　Ｌｕｃｃｈｅｓ　ｉ、　Ｂ、Ｒ，＋　ａｎп@Ｔｏｄｄ、　Ｒ。

Ｆ、　１１１．）、ｉ＋Ｉｉｌ菌怒染を繰り返した場合の犬における白血球表面糟タンパク質Ｍｏｌ　、　ＬＦＡ−１およびＬｅｕ−Ｍ５の欠失：動物モデル。

「ブラッドＪ　６９：１６２２〜１６３０．１９８７）。

モノクローナル抗体１１Ｙ　９０４は、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８食細胞表面タンパク質の付着領域に対する例外的な特異性のために、独特なものである。さらに、この抗体はこのような不可欠な細胞表面構造の発現を必要とする食細胞機能を完全に阻害できる性質を有する。

国際調査報告ＰＣＴ／ビ５８８１０１４ユ４

Claims

【特許請求の範囲】

１．食細胞膜糖タンパク質Ｍｏ１と特異的に結合して顆粒球および単球の付着依存性機能のみを阻害し、補体のｉＣ３ｂ成分と結合しないモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ技術によって製造された細胞系。
２．前記モノクローナル抗体産生細胞はヒトの慢性顆粒球白血病（ＣＧＬ）細胞で免疫したマウスから得られたものである請求項１記載の細胞系。
３．前記モノクローナル抗体が細胞を生成し、該細胞はヒトの慢性顆粒球白血病（ＣＧＬ）細胞で免疫したマウスの脾臓細胞である請求項１記載の細胞系。
４．前記モノクローナル抗体はさらにヒトのＴリンパ球およびＢリンパ球との反応性を示さない特性を有する請求項１記載の細胞系。
５．前記モノクローナル抗体は慢性顆粒球白血病起源の末梢血液試料からの顆粒球との反応性を示す請求項１記載の細胞系。
６．前記モノクローナル抗体は正常な単球、正常な顆粒球および正常な骨髄単核細胞との反応性を示す請求項１記載の細胞系。
７．前記モノクローナル抗体は正常な赤血球および血小板との反応性を示さない請求項１記載の細胞系。
８．ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８食細胞表面タンパク質の付着領域に対して特異的な抗体ＭＹ９０４を産生し、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａ，Ｔ，Ｃ，Ｃ，）ＮａＨＢ９５１０という受記番号で寄託されている試料の本質的な特性を有し、ハイプリドーマ技術によって製造された細胞系。
９．ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８食細胞表面タンパク質の付着領域に特異的に結合し、補体のｉＣ３ｂ成分との結合を示さないモノクローナル抗体。
１０．ヒトのＴリンパ球またはＢリンパ球との反応性を示さない請求項９記載のモノクローナル抗体。
１１．慢性顆粒球白血病の末梢血液試料からの顆粒球との反応性を示す請求項９記載のモノクローナル抗体。
１２．正常な単球、正常な顆粒球および正常な骨髄単核細胞との反応性を示す請求項９記載のモノクローナル抗体。
１３．正常な赤血球および血小板との反応性を示さない請求項９記載のモノクローナル抗体。
１４．ヒトおよび犬の正常な好中球との反応性を示す請求項９記載のモノクローナル抗体。
１５．Ａ，Ｔ，Ｃ，Ｃ，受託番号Ｎｏ，ＨＢ９５１０の本質的特性を有するハイブリッド細胞系によって産生された請求項９記載のモノクローナル抗体。
１６．Ｍｏ１顆粒球および単球の細胞表面タンパク質のエピトープと特異的に結合して、正常な顆粒球および単球の細胞の付着依存性機能の活性化を阻害し、かつ補体のｉＣ３ｂ成分に結合しないモノクローナル抗体。
１７．ヒトにおける正常な好中球との特異的な結合を示す請求項１６記載のモノクローナル抗体。
１８．１５５０００ドルトン分子量および９４０００ドルトン分子量の２種のサブユニットから成る正常なヒトの好中球表面糖タンパク質に結合する請求項１６記載のモノクローナル抗体。
１９．モノクローナル抗体が正常なヒトの好中球表面上の抗原部位に本質的に結合し、該抗原部位がＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８食細胞表面タンパク質の付着領域でありかつ補体のｉＣ３ｂ成分に結合しない特性を有し、実験室的インビトロ診断イムノアッセイにおいて反応体として使用されるモノクローナル抗体。
２０．前記表面タンパク質が、１５０００ドルトン分子量および９４０００ドルトン分子量の２種のサブユニットを有しかつヒトのＴリンパ球およびＢリンパ球との反応性を示さない特性を有する請求項１９記載のモノクローナル抗体。
２１．ヒトの慢性顆粒球白血病細胞で免疫したマウスからハイブリドーマ技術によって得られたものであり、正常な単球、正常な顆粒球および正常な骨髄単核細胞との反応性を示す請求項１９記載のモノクローナル抗体。