JPH03501604A - ガンマ・インターフェロンの安定化処方 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ガンマ・インターフェロンの安定化処方発明の技術分野 この発明は、インターフェロンの安定化に有用な組成物および方法に関する。更 に詳しくは、この発明は、溶液中、凍結および凍結乾燥形態、並びに徐放性薬剤 配給および池の薬学的調製物中にて増加した安定性を有するガンマ・インターフ ェロンを処方することに関し、これは、製造の容易性および投与単位の容量当り に到達し得る最大濃度に関して利点を有する。この発明によれば、ガンマ・イン ターフェロンを、アセテ−１−／グリシンＭｍ液中にてラクトビオン酸を用いて 処方する。

インターフェロン（’ＩＦＮＪ）のま著な臨床的可能性を実現するなめには、保 存および投与に際してその生物活性を保持する必要がある。しかしながら、ＩＦ Ｎの安定性は、粗製材料の安定性についての初期の観察から予想されたより大き な問題であることが分つな、ジエー・セドマツクら、「インターフェロンノ安定 化の手順Ｊ　、ＨｅｔｈＯｄＳ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｒｎｏｌｏｇｙ＋７８、　ｐ、 　５９１　（１９８１）。溶液中のインターフェロンは、種々の物理的および化 学的処理により、不活性化され得、また、ガンマ・インターフェロン（ＭＦＮ− γ」）は特にＰ、　Ｈおよび熱に対して不安定であることが今や認められている 。ジエー・セドマックとニス・グロスバーブ、［インターフェロンの安定化］　 、Ｔｅｘａｓ　Ｉ’１ｅｐｏｒｔｓ　ｏｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｍｅｄｉ ｃｉｎｅ、　３５゜凱１９８　（１９７７）　。

血清アルブミン存在下での凍結乾燥はＩＦＮの標準的な安定化処方物であるが（ 「インターフェロンの安定化の手順」、Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｌ′Ｉ ｏｌｏｏｙ、　７８．　ｐｐ、　５９３−９４　（１９８１））　、多数の他の 試薬が試験されている。これには、ゼラチン、トリペプチド、ドデシル硫酸すＩ ・リウム並びにチオクチン酸が含まれる。ジエー・セドマックら、「精製ヒト繊 維芽細胞インター７、、＋ｊ）ンの熱および攪拌安定性Ｊ　、ＨｕＩｇａｎ　Ｉ ｎｔｅｒｆｅｒｏｎＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｃｌ１ｎｉｃａｌ　Ｕｓｅ 、　ｏｐ、　１３３−５２　（１９７８）、ビー・ジャメソンら、「凍結乾燥哺 乳類インターフェロンの熱安定性Ｊ　、Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇ’／　１６．　ｐ ｐ、　３０１−１４　（１９７９）　。

１旦塁コｊ 本発明は、ＩＦＮの安定化処方物を、ラクトビオン酸をこれに混合することによ り得られることを突き止めたことを基礎とする。

ここに記載する処方物は、製造の容易性および投与単位の単位容量当り達成し得 る最大濃度の点で、リン酸緩衝血清アルブミン処方物より優れ、また、これらは 、溶液、凍結形態、凍結乾燥粉末並びに再構成調製物の増加した安定性を与える ことを突き止めな、更に、本発明の処方物は、原則的にＩＦＮ−γの二量体形態 を与え、これは天然で優勢であり、循環するヒトＩＦＮ−γの分子形態である。

図面の簡単な説明 第１図は、凍結乾燥粉末からの再構成に際し、ＩＦＮ−γの凝集に対して種々の 処方物が有する効果を示すものである。

更に詳しくは、この発明により処方されたＣＹＳ　ＴＹＲ−ＣＹＳ組換えヒトＩ ＦＮ−γの凝集を、リン酸緩衝液中で処方したこの種のＩＦＮ−γの凝集と比較 したものである。

明を実　する最適の態様 ここに記載する発明がより十分に理解されるべく、以下の詳細な説明を記載する 。

この発明の処方物は、ＩＦＮ−γ、ラクトビオン酸並びにアセテート／グリシン 緩衝液を含有する。また、これらの処方物は、還元剤並びにキャリヤ、防腐剤、 界面活性剤、アミノ酸およびキレート剤のような付加的な要素を含有し得る。

これらの処方物は、加工、保存並びに薬学的投与の目的でＩ　Ｆ　Ｎ−γを安定 化するのに使用し得る。

ＩＦＮ−γ−一この明細書および請求の範囲で使用するように、ＩＦＮ−γは、 例えば天然または組換えＩＦＮ−γ、またはその誘導体のようなＩＦＮ−γの生 物活性を特徴とする全ての蛋白質、ポリペプチド並びにペプチドを包含する。

これらには、天然ＩＦＮ−γ、組換えＩＦＮ−γ、並びに合成または半合成ＩＦ Ｎ−γのような種々の起源に由来するＩＦＮ−γ様化合物が包含される。

例えば、この発明の組成物および方法に有用なＩＦＮ−γには、確立または形質 転換された細胞ラインにより試験管内で構成的に生産される天然ＩＦＮ−γ、お よびインターフェロン・インデューサに応答して種々の、４８１胞により試験管 内で生産される天然ＩＦＮ−γが包含される。また、この発明の組成物および方 法に有用なＩＦＮ−γには、組換えＤＮＡ技術を使用する種々の宿主／ベクタ系 におけるクローン化および発現により生産されるものが包含される。この種のプ ロセスにより生産されるＩＦＮ−γは、従来のろ過またはクロマトグラフ法によ り精製することができる。

この発明の処方物にあっては、ＩＦＮ−γは、好ましくは１０μｇ／ｍ１〜１０ ｍｇ／ｍ１の濃度で存在する。徐放性投与形態のようなＩＦＮ−γの薬学的投与 に使用するこの発明の処方物は、１０ｍｇ／ｍｌを越える濃度のＩＦＮ−γを含 有し得る。

ｉムΣ旦主之ｌ−一ラクトビオン酸は酸性糖誘導体であり、溶液中でこの発明の 処方物中にてＩＦＮ−γに対するカウンターイオンとなり得る。ＩＦＮ−γの生 理的ｐＨにおける強い陽イオン性チャージのなめである。この発明の処方物は、 好ましくは０．０５〜０．５％（重量／容量）の濃度でラクトビオン酸を含有す る。

アセテート／グリシン　街液−一この発明で使用するアセテート／グリシン緩衝 液は、最終ＩＦＮ−γ処方物が０．２〜５．０％（重量／容量）の濃度のグリシ ンおよび好ましくは０．０２〜０．ＩＭの濃度のアセテートを好適に含有するよ うな量で使用する。

ｌ及見−−この発明による組成物は、イオウを含有する穏和な還元剤を同様に含 有し得る。この種の還元剤の存在は、処方されるＩＦＮ−γがそのＮ−末端にＣ ＹＳ−ＴＹＲ−ＣＹＳ配列を有する場合に特にｇ　４しい、この種の末端配列を 有さないＩＦＮ−γ（例えば、デルタ−ＣＹＳのＩ　ＦＮ−γ）を処方する場合 、この種の還元剤を含ませることはそれ程有用ではないが、なおこれらを用いる ことができる。この種の還元剤の濃度は臨界的ではないが、一般に２倍モル過剰 を越えるものとする。この種の還元剤の例は、Ｎ−アセチルシスティンおよびチ オプロニンである。

１皿皿１１−一他の化合物をこの発明の処方物に同様に添加することができる４ 例えば、この発明の処方物をＩＦＮ−γの薬学的投与に使用する場合、この種の 投与形態のものは、ヒト血清アルブミン、ポリビニルピロリドン並びにゼラチン のような薬学的に許容し得るキャリヤを含むことができる。

また、この発明の処方物は、ベンジルアルコール、フェノール並びにソルビン酸 のような防腐剤、トクイーン２０、トウィーン８０、プルロニックＦ−６８、並 びに胆汁酸塩のような界面活性刑、グリシン、アラニン、ロイシン、グルタミン 酸並びにアスパラギン酸のようなアミノ酸、並びにクエン酸、酒石酸、グルコン 酸、糖酸、エチレンジアミン四酢酸並びにアスコルビン酸のようなキレート剤を 含むことができる。

この発明によれば、アセテート／グリシン緩衝液中にてＩＦＮ−γの溶液にラク トビオン酸を添加することによりＩＦＮ−γを好適に処方する。好ましくはイオ ウを含有する還元剤の存在下にＩＦＮ−γの溶液を用い、透析、透過ろ過または ゲルろ過によりアセテート／グリシン緩衝液に対してＩＦＮ−γが現に存する緩 衝液を交換することによりこれを行うことができる。その後、ラクトビオン酸を 含有するアセテート／グリシン緩衝液を用いて、所望のｐＨ（好ましくは６．０ ）および蛋白質濃度を調整する。

前記したように、この発明の処方物を使用して、加工、保存並びに薬学的投与の ためにＩＦＮ−γを安定化することができる。特に、この発明により処方する場 合、ＩＦＮ−７・は、その初発溶液、凍結形態または凍結乾燥粉末並びに再構成 溶液中で安定である。この観点から、本発明により処方したＩＦＮ−γは、当業 者に公知の全ゆる手段により凍結、凍結乾燥または保存用に調製することができ る。リン酸緩衝血清アルブミン処方物と比較すると、ここに記載した処方物を使 用することにより、大量に処方した溶液中のＩＦＮ−γ濃度の上限が増加する。

これにより、１．５ｍｇ／バイアルを越える投与形態の製造を図ることができる 。

更に、この発明による処方物は、ＩＦＮ−γの薬学的投与に直接、または徐放性 運搬体もしくは注入ポンプのような装置を介して使用することができる。この目 的のためには、ＩＦＮ−γは、腫瘍性または新生組織性細胞増殖、悪性血液性全 身系疾患、ウィルス性疾患、リウマチ性疾患、カルシノーマ、ザルコーマ、ミエ ローマ、メラノーマ、リンホーマ、パピローマ、変性疾患、アレルギー性疾患、 喘息並びに乾痛を特徴とするもののような種々の疾患の処置に有用であることが 示された。この種の疾患には、例えば、クローン病、多発性硬化症、筋萎縮側方 硬化症、副腎腫、偽粘液腫、乳腺細胞腫、免疫性細胞腫、ホジキン病、固体性腫 瘍、シュミンケ腫瘍、滑脱ザルコーマ、気管支喘息、食物アレルギー、尋常性乾 癩、肝炎Ｂウィルス感染、パピローマウィルス感染、帯状耳疾患、全身系紅斑性 狼癒、リウマチ性関節炎、進行性全身系堂皮症、皮ＮＢ炎、乾癖関節症、筋肉リ ウマチ、関節周囲上腕肩甲骨炎、節状ひよう痕、節炎、筋硬症、関節炎尿酸症、 軟骨粘結症並びにスチル病が包含される。

この観点から、本発明により処方されるＩＦＮ−γは、薬学的に許容し得る全ゆ る投与形態で患者に投与することができる。これには、患者に対して薬物配送装 置を介して投与し得るものが含まれる１例えば、徐放性投与形態、注入ポンプ、 移植またはリポソーム、静脈内、筋肉内、皮下、皮膚内、関節内、滑脱内、包膜 内、骨膜内、または経口、吸入もしくは局所経由がある。また、この発明により 処方されるＩ　ＦＮ−γを腫瘍内、腫瘍周囲、病巣内または病巣周囲に投与して 、局所的のみならず全身的な治療効果を及ぼすことができる。

ここに記載する発明がより十分に理解されるべく、この発明の処方物の有効性に 関する以下のデータを記載する。これらの例は説明の目的のなめのみであり、如 何なる様式においてもこの発明を限定するよう構成されたものでないことを理解 すべきである。

以下の例において、使用したＩＦＮ−γは、バイオジエン・ニス・ニー、ジュネ ーブにより供給されたＣＹＳ−ＴＹＲ−ＣＹＳ組換えヒトＩＦＮ−γである。こ のバイオジエンの組換えヒトＩＦＮ−γの比活性は、１〜３Ｘ１０’　１．Ｕ。

／ｍｇ蛋白質の範囲であった。

例１ この例は、ＩＦＮ−γの凍結乾燥処方物の再構成に対して、ラクトビオン酸の添 加が与える有効な効果を示す。

処方しなＩＦＮ−γを、１ｍｌの量で３ｍｌのバイアルに分注し、−７０°Ｃで 凍結した。その後バイアルをビルチス凍結乾燥装置に移し、棚温度を一４５℃と した。５０μの真空を作動させ、６時間後に棚温度を６時間に渡って０℃に上げ た１次に、１０時間に渡って温度を２０℃に上げることにより乾燥を行った。サ イクルの完了後、乾燥隔室に酸素を含有しない窒素を満たし、バイアルを封止し な。

分析を行う前に、室温または５０℃に７時間露呈してバイアルを保存した。物理 的にケーキが８現するのを記録した。

その後、凍結乾燥材料を１ｍｌの殺菌水により再構成しな。

再構成時間を記録し、清澄化の程度を目視により測定した。

結果を第工表にまとめる。アセテート／グリシン緩衝液のみにより処方しなＩＦ Ｎ−γの凍結乾燥物と異なり、ラクトビオン酸を用いる全ての処方物は許容し得 るケ１−キを与え、これは良好に再構成され、温度による悪化の影響を受けない ものであった。

第工表 処方物：全てＩＭＧ／ＭＩＪｆｌ換えＩＦＮ−γ９ＪＪＬ３！ｌ　對伍」頃　１ ４すＩ虹　１尺支崖」２±欠上 ０．１Ｍ酢酸ナトリウム／　良好　１２〜２０　清澄かつ２％グリシン綬街液　 幾分かの （緩衝液）　斑点 緩衝液　良好　１２〜２０　濁る （５０℃で７時間） ラクトビオン酸（ＬＢ）による　定イ・緩衝液と０．５％ＬＢ　良好　２０〜４ ０　清澄緩衝液と０．５％ＬＢ　良好　２０〜４０　清澄（５０℃で７時間） 緩衝液、０．５％ＬＢ　良好　２０〜４０　清澄並びに０．０１％ Ｎ−アセチルシスティン 絹？ｆｉ液、０．う％ＬＢ　良好　２０〜４０　清澄並びに０．０１％ Ｎ−アセチルシスティン （５０℃で７時間） 緩衝液、０，５％ＬＢ　良好　２０〜４０　清澄並びに０．０１％ チオブロニン 匠ｌ この例は、ＩＦＮ−γの抗ウィルス活性に対してこの発明の処方物が有する温度 安定化効果を示す。

１ｍｇ／ｍｌのＩＦＮ−γを含有する２つの実験処方物を調製した： ａ）０．０１％チオブロニン、０．２５％ラクトビオン酸、０．５１２５Ｍ酢酸 すｌ・リウム並びに２％グリシン、ｐＨ６，０１ １））０．０１％Ｎ−アセチルシスティン、０．２５％ラクトビオン酸、０．０ ５１２５Ｍ酢酸ナトリウム並びに２％グリシン、ｐＨ６，０゜ これらのサンプルを凍結乾燥し、バイアルを５０’Ｃに温度制御した水浴に置き 、２℃／時間の速度で温度が上昇するようプログラムした。温度が６０゛Ｃ５７ ０℃、８０℃並びに９０℃に達した時にサンプルをとった。その後、サンプルを １ｍｌの脱イオン水中で再構成し、抗ウィルス活性について分析しな。結果を第 ■表にまとめる。全てのサンプルが清澄な溶液に再構成された。９０°Ｃに加熱 したサンプル中にのみ、比活性が低下した証拠が幾分か認められた。

第■表 最大インキニベーシラン　活性 ツニ企二ｊこｎ　１ｆｆｌ（”Ｃ）　（ｘ　１０７　ｇ／ｒｎＱ　）［０，０１ ％チオプロニン　２０（コントロール＋１．０２０．２５％ラクトビオン酸塩　 ５０　１．０９０．５１２５Ｍ酢酸　６０　０．９７ ２％グリシン］　７０　０．９２ ８０　１．０６ ９０　０、　６５ ［０，０１％Ｎ−ア七チルシスティン　２０　（コントトル）１．６８０．２５ ％ラクトビオン酸塩　５０　１，４５０．５１２５Ｍ酢酸　６０　１．３７ ２％グリシン］　７０　１．５０ ９０　０．７５ 形 この例は、再構成ＩＦＮ−γにおける非共有結合的相互作用の存在に対してこの 発明の処方物が有する効果を示す。

ＩＦＮ−γの４次構造の解析により、５０℃に７時間加熱された凍結乾燥粉末か らの再構成に際し、アセテート／グリシン緩衝液のみを用いて処方しなＩＦＮ− γは１５％の二量体物質を与えたのに対し、０．２５％ラクトビオン酸１０．０ １％Ｎ−アセチルシスティン処方物では、７３％の二量体Ｉ　ＦＮ−γが含有さ れていた。更に、第１図は１、温度安定性試験（例２参照）に由来する最終（９ ０″Ｃ）サンアルのセファロース１２ＨＰＬＣトレース、同試験に由来するコン トロール（２０℃）サンプル並びに−２０℃に保存されたリン酸綬街液により処 方されたＩＦＮ−γのサンプルを比較するものである。高次凝集物はラクトビオ ン酸処方物中には検出されず、これは予備加熱の有無に拘らず、顕著な量の高次 凝集物を与えるリン酸綬街液処方物と異なる。この種の高次凝集物は、再構成Ｉ ＦＮ−γ／血清アルブミン処方物においても認められた。

この発明の多数の態様を前記したが、本発明の基本的構成を改変して、この発明 の方法および組成物を利用する他の態様を提供し得るのは明らかである。したが って、この発明の範囲はここに添付する請求の範囲によって規定され、例として 前記した特定の態様によらないことを理解すべきである。

ＦＩＧ、１ 国際調査報告 ［相］Ｉｎｔ、　Ｃ１，’　識別記号　庁内整理番号０発　明　者　サツチャー 、ディピッド　アー　英ル　− 立国、チェシャー、ニスケイ１０４エクステイー、マツクルズフィールド、ジュ ニバー　ライズ　６

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. １．ＩＦＮ−γ、ラクトビオン酸並びにアセテート／グリシン緩衝液からなるこ とを特徴とする組成物。
2. ２．イオウを含有する穏和な還元剤を更に含む請求項１記載の組成物。
3. ３．イオウを含有する穏和な還元剤が、Ｎ−アセチルシステインおよびチオプロ ニンよりなる群から選択される請求項２記載の組成物。
4. ４．防腐剤、キャリヤ、アミノ酸、キレート剤並びに界面活性剤よりなる群から 選択される少くとも１つの化合物を更に含む請求項１、２または３記載の組成物 。
5. ５．ＩＦＮ−γが、天然ＩＦＮ−γ、組換えＩＦＮ−γ並びに合成ＩＦＮ−γよ りなる群から選択される請求項１、２または３記載の組成物。
6. ６．ＩＦＮ−γが、そのＮ−末端にＣＹＳ−ＴＹＲ−ＯＹＳ残基を含有する請求 項１、２または３記載の組成物。
7. ７．約１０μｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌのＩＦＮ−γ、約０．０５％〜０．５％ （重量／容量）のラクトビオン酸、約０．２％〜５．０％（重量／容量）のグリ シン並びに約０．０２Ｍ〜０．１Ｍのアセテートからなることを特徴とする組成 物。
8. ８．２倍モル過剰を越えるイオウを含有する穏和な還元剤を更に含む請求項７記 載の組成物。
9. ９．ラクトビオン酸およびアセテート／グリシン緩衝液の存在下に前記ＩＦＮ− γを処方することによりＩＦＮ−γを安定化することを特徴とする方法。
10. １０．ＩＦＮ−γを、イオウを含有する穏和な還元剤の存在下に同様に処方する 請求項９記載の方法。
11. １１．イオウを含有する穏和な還元剤を、Ｎ−アセチルシステインまたはチオプ ロニンよりなる群から選択する請求項１０記載の方法。
12. １２．ＩＦＮ−γを、防腐剤、キャリヤ、アミノ酸、キレート剤並びに界面活性 剤よりなる群から選択される少くとも１つの化合物の存在下に同様に処方する請 求項９、１０または１１記載の方法。
13. １３．ＩＦＮ−γを、天然ＩＦＮ−γ、組換えＩＦＮ−γ並びに合成ＩＦＮ−γ よりなる群から選択する請求項９、１０または１１記載の方法。
14. １４．ＩＦＮ−γが、そのＮ−末端にＣＹＳ−ＴＹＲ−ＣＹＳ残基を含有する請 求項９、１０または１１記載の方法。
15. １５．腫瘍性または新生組織性細胞増殖、悪性血液性全身系疾患、ウィルス性疾 患、リウマチ性疾患、カルシノーマ、ザルコーマ、ミエローマ、メラノーマ、リ ンホーマ、パピローマ、変性疾患、アレルギー性疾患、喘息並びに乾癬を特徴と する疾患を処置するに際し、薬学的に有効な量のＩＦＮ−γ、ラクトビオン酸並 びにアセテート／グリシン緩衝液からなる薬学的に有効な投与量の組成物を投与 する工程からなることを特徴とする疾患処置方法。
16. １６．組成物が、イオウを含有する穏和な還元剤を更に含む請求項１５記載の方 法。
17. １７．イオウを含有する穏和な還元剤を、Ｎ−アセチルシステインまたはチオプ ロニンよりなる群から選択する請求項１６記載の方法。
18. １８．組成物が、防腐剤、キャリヤ、アミノ酸、キレート剤並びに界面活性剤よ りなる群から選択される少くとも１つの化合物を更に含む請求項１５、１６また は１７記載の方法。
19. １９．ＩＦＮ−γを、天然ＩＦＮ−γ、組換えＩＦＮ−γ並びに合成ＩＦＮ−γ よりなる群から選択する請求項１５、１６また１７記載の方法。
20. ２０．ＩＦＮ−γが、そのＮ−末端にＣＹＳ−ＴＹＲ−ＣＹＳ残基を含有する請 求項１５、１６または１７記載の方法。