JPH03502198A - 魚の薬物治療のための投薬用成形物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 魚の薬物治療のための投薬用成形物 本発明は魚の薬物治療に関し、そして特にそのための投薬用成形物に関する。

１豆Ω１１ 魚に給餌し、投薬治療する際に多くの問題に遭遇する。

給餌に際しての魚の挙動は給餌時の条件によって強く左右される。このような条 件の中には、例えば水温及び水の酸性度、水中の溶解硝酸塩及び他の諸物質の濃 度、食餌の性等とが含まれる。

魚の薬物治療の公知の方法は魚の食餌に薬剤を混合することを含む、この方式に よる薬剤の経口投与は、はとんどの薬剤が食餌の味覚にマイナスの影響を与える 傾向があって魚に受は入れられなくなるために複雑である。また、多くの公知の 型の薬剤はペレットの形で製造される。薬剤、また特に抗生物質は薬物調合の製 剤的観点からの考慮なく乾燥食餌ベレットの中に混合され、そして急用の薬剤入 りベレットとして市販されている。これらのベレットはその薬剤物質が生物体に よる摂取性が悪いという特徴がある。

更にまたこれらベレットは魚によって摂取されるためにはあまりにも急速に沈降 してしまう、この薬剤入りの食餌の利用されなかった部分は魚飼育設備又はその ような薬剤入り食餌が排出される他の環境の中の汚染源となる。

多くの急用治療薬は高い濃度では毒性を示す、すなわち治療薬を被覆した食餌を 取り扱うことは人にとって有害である。「温和に」治療薬を含有させた給餌を用 いる魚飼育業者は一般にこの治療薬入りの食餌を、そのあたりで手に入る給餌飼 料と治療薬とを混合することによって作っている。このような工業的でない混合 方法はその給餌中の活性い、生物学的に活性の物質を大量に混合することは魚飼 育業者に健康上の危険をもたらす、砕かれた食餌や担体からの治療薬の水中への 分散は環境の追加的汚染源となり、或いは直接の危害を生ずる。

魚への給餌をよりよく魚に受は入れられるようにし、或いはよりよく魚に近づき 得るようにするためにいくつかの方法が提案されている。米国特許第４，４１３ ，０１４　　号公報は魚類の好む液体で飽和させた食用可能な固体の多孔質穀物 材料よりなる食餌又は餌材料を開示している。このものは固体の餌物質の芯を用 いて作られ、そして固体の食用可能な材料で被覆されていてもよい。

米国特許第４，３９３，０８７　　号及び同２．３５８．３２０　　号公報は餌 の浮揚特性に影響を与えることによって急用の餌が魚によってより摂取され易く なるような方法を開示している。

最初にあげた特許は膨張させた穀物粒を含んでいて、その膨張穀物粒がそのベレ ットに水中での浮力を与えることな含む、魚肉と蛋白質含有物質との組み合わせ から形成される浮遊性食餌ペレットの製造方法を開示している。米国特許第２． ３５８．３２０　　号は水より比重が高いけれどもその材料を中空のペレットに 形成することによって水中で浮遊性を示すようになった材料よりなる急用食餌を 開示している。

国際特許出願第１０８５７０５０１５　　号は食餌を魚にとってより魅力あるも のにする方法を記述している０例えばアルギン酸塩、グアーガム、トラガカント ガム、ペプチン又はゼラチンのような硬化可能なゲル物質の表厘被覆を用いて柔 らかな生地を有するペレットが形成される。これらのペレットには種々異なった 浮遊性を与えることができる。

上に記述した各参照文献は興味あるものではあるけれども、それらは治療薬剤を 含む投薬用成形物を記述しておらず、またそれらの参照文献のいずれも魚に治療 薬を経口投与する際に生じ得る問題を対象とはしていない。

スウェーデンのＳδｄｅｒｔＭｌｊｅのＥＷＯＳ　ＡＢ　　によって製造されて いる「オキシテトラサイクリンＶｅｔ、　ＥＷＯＳ　ＩＯＧ／ＫＧ魚用治療薬ペ レット−９Ｐ」（以下、「成品Ａ」と呼ぶ）は加圧ペレット化法により魚の給餌 の中に医薬を混合し、引き続いて乾燥することにより製造される。このような方 法に従い作られる医薬入り給餌は浮遊性がなく、より急速に沈降し、それによっ てこれが魚により摂取される機会を少なくし、そして環境の汚染を増大させる。

その上にこのような給餌は、実際に魚により取り入れられる医薬の量の制御が殆 どできず、そしてその医薬の生体中への吸収性が悪いという結果をもたらす。

ノルウェーのＳｔａｖａｎｇｅｒ　　のＴ、　Ｓｋｒｅｔｔｉｎｇ　Ａ／Ｓによ って製造されている「急用のＳｋｒｅｔｔｉｎｇ　Ｔｅ５ｓ　　医薬ベレット（ ７，５ｇ　ＯＴＣ／ｋｇ）　Ｊ　　（以下これを「成品Ｂ」と呼ぶ）は乾燥した 急用給餌の表面への医薬の被覆を施すことによって作られている。その医薬は油 の中に懸濁させてその飼料の表面上にスプレーされる。その医薬の大きな部分は 食餌ペレットの表面上に留まるけれども、残部は食餌の内部に油とともに吸収さ れる。

このようにして作られた医薬入り食餌はその食餌の表面上に沈着させた医薬の味 や臭気ために魚にとっては嗜好性が悪いという問題がある０例えばスルホンアミ ド類やニフラゾリドンのような特有の味や刺激的味を有する医薬の場合には魚に よって取り入れられる度合いは特に低い、その医薬が主として食餌の表面上に存 在しているために、魚の栽培業者や作業員はそれに曝される。その上にこのよう な食餌では投薬の精度は本来貧弱である。

従って本発明の目的は上述のような欠点を除き、同時に魚への効果的投与を許容 するような、魚の医薬治療のための投薬用成形物を提供することである。

１豆立星力 このような目的を達成するために、魚に対する生物学的に活性な薬剤の投与のた めの投薬用成形物が提供される。

この投薬用成形物は実質的に水及びその活性薬剤に対して不透過性の外側層を含 む、この外側層は動物性物質と、植物性物質と、及び水産物質からの水性抽出物 との群から選ばれる少なくとも１つ以上の物質よりなる。少なくとも１種以上の 活性薬剤の入れられている少なくとも１つ以上の室がこの外側層によって囲まれ ている。　　　。

動物性物質は好ましくは魚肉よりなる。その外側層は更に好ましくはそれら動物 性物質又は植物性物質のためのバインダーを含む。

内側の上記室は、共押し出しにより、部分的に補助薬、吸収促進剤、又は担体を 含む粘稠な懸濁液の中の生物学的に活性な薬剤の調剤で満たされていて、この活 性薬剤の生物体による摂取の可能性及び安定性が改善されている。この内側室は また、ガス又は好ましくは空気のようなガス混合物等の流体で部分的に満たされ ていてもよい０例えば窒素ガスのような不活性ガスも使用することができる。こ の投薬用成形物の水中での浮力はこの内側室の容積を調節することによって調節 することができる。浮力はまた、この室を満たすのに用いた流体を選ぶことによ っても調節することができる。すなわちこの室はこの投薬用成形物の水中での浮 力を選択的に調節する手段として有効に機能する。

本発明によれば、投薬用成形物の形で魚に少なくとも１種類の生物学的に活性の 薬剤を投薬することによって、発病した魚を治療するための方法、及び魚を予防 のために処置する方法が提供される。

ここでｒ生物学的に活性の薬剤」又は「活性の薬剤」とは、魚が罹患する疾病又 は疾患を処置し、予防するための調剤物質を意味するのみならず、例えば成長促 進又は成長制御物質のような、魚の飼育又は魚の看護において用いられる他の、 生物体に影響を与える種々の物質も意味することとする。更に、生物学的に活性 の１種類以上の薬剤を本発明に従う投薬用成形物の中に含有させることも意図す るものである。従って特に言及しない限り、本願明細書及びその請求の範囲にお いて用いられる「生物学的に活性の薬剤」とはその投薬用成形物の中に複数種の 活性薬剤をも含むことをも包含するものと理解すべきである。

「実質的に水及びその活性薬剤に対して不透過性」とは通常の使用条件のもとて この投薬用成形物の外側層が実質的にもとの状態のままに留まっているかぎりこ れが水の内側室中への透過や内側室からの活性薬剤の放出に対して抵抗性を有す るということを意味する。

「動物性物質」とは全ての動物の生体または死体の全ての部分において本発明の 投薬用成形物の外側層を形成するのに適した形で準備される部分を意味する。こ のような物質はその最も基本的な形態において動物界の単細胞又は多細胞の動物 からの種々の細胞又は細胞成分よりなる。特にこの動物性物質は魚又は他の水生 動物から導かれた物質を含むことができる。

「植物性物質」とは本発明の投薬用成形物の外側層を形成するのに適した形で準 備することのできる植物の全ての部分を意味する。その最も基本的な形において そのようなそのような物質は植物界の単細胞又は多細胞生物からの細胞又は細胞 成分よりなる。

「魚肉」とは水産物質の原材料又は加工によって形成された食餌成品を意味する 。典型的な魚肉製造方法によれば以下に記述するような原料水産物質は任意に水 で蒸煮し、そしてプレスケーキとして知られるケーキの形にプレスされる。この ケーキから圧縮して押し出される液体物質は油成分及び水性成分、すなわち「絞 り水」よりなる、この絞り水は例えば混合によってプレスケーキと組み合わせ、 そして水分は蒸発させる。得られた製品は「魚肉」の一つの形態よりなる。

「水産物質からの水性抽出物」又は「水産物質水性抽出物」の語は、魚肉製造の 副生物である水性の絞り水を意味する。この絞り水、すなわちこのものがバイン ダーとしての性質を有することがら「湖水」とノルウェー語から直訳することの できる物質は、原料水産物質の種々の水溶性化合物の水性抽出物よりなる。この ような化合物には、例えば蛋白質、ペプチド、アミノ酸類及びヌクレオチドが含 まれる。これらは栽培される魚の嗜好促進剤及び刺激剤の役目をする味覚化合物 となる。このものの嗜好促進性及び刺激性に加えて、この抽出物はまた優れたバ インダーとしての性質を示す。

この「水産物質からの水性抽出物」又は「水産物質水性抽出物」の語の範囲に含 まれるものとしては、これが魚肉製造過程からの副生物として作り出されるとき の、その抽出物自身のみならず、この水性抽出物に基づく更に精製された種々の 製品も包含される０例えば、種々の海産物からの水性抽出物を酵素的に加水分解 させて蛋白質及びペプチドを分解させてそれにより高濃度のアミノ酸を製造し、 そして改善された味覚を作り出すことが知られている。更にこの水性抽出物は固 体や農耕溶液の形で種々の味覚成分で富化させることができる。

の、　な！日 第１図は本発明の投薬用成形物の１具体例の断面図を示す。

第２図はそれぞれ市販で入手できる医薬入り飼料ペレット成品Ａ及び成品Ｂから ４℃において海水中に放出される塩酸オキシテトラサイクリン（以下、ｒＯＴｃ −ＨＣＩ　Ｊと表わす）の放出量を、本発明に従い作られた投薬用成形物（以下 、「アクワファーマカ」と呼ぶ）からの０ＴＣ−ＨＣＩ　　の放出と比較して示 す。

第３図は同じ投薬用成形物の放出速度を比較するが、但しこの場合は水温１８℃ での結果である。

第４図は２つの市販で入手される医薬入り飼料ペレット及び本発明の「アクワフ ァーマカ」の投薬用成形物で飼育された魚の血漿のＯＴＣ濃度を比較するグラフ である。

第５図は市販で入手できる２つの医薬入り飼料ペレットと本発明の「アクワファ ーマカ」の投薬用成形物で飼育された魚の筋肉中ＯＴＣ！ＩＡ度を比較するグラ フである。

第６図は４℃における「アクワファーマカ」投薬用成形物（フルームキンを０． ４％含む）からのフルームキンの放出速度と成品Ａ（オキソリニン酸を０．５　 　％含む）からのオキソリニン酸の放出速度とを比較したグラフである。

第７図は第６図と同じ投薬用成形物の放出速度を水温１８℃において比較したも のである。　　　　　　−第８図はそれぞれ０．２　　％、０．５％（１０日間 飼育）及び０．５　　％°　（５日間飼育）を含む「アクワファーマカ」で飼育 した場合及び０．５　　％のオキソリニン酸を含む成品Ａで飼育した場合の魚の 血漿中活性薬剤濃度を比較したグラフである。

第９図は第８図におけると同じ投薬用成形物で飼育した魚の筋肉中の活性薬剤濃 度を比較したグラフである。

日の詳細を言日 第１図を参照して説明するならば、本発明に従う投薬用成形物の一つは、外側層 １及び内側室２とを有し、この中に活性薬剤３が含まれている。この薬剤は場合 により担体物質中に含まれている。

すなわち本発明の１具体例においてその投薬用成形物は「クッション」の形をな している。外側層は動物性又は植物性物質（好ましくは魚肉及び／又は水産物質 からの水性抽出物を含み、更に場合によって濃厚化された味覚成分及び任意のバ インダー物質を含む、外側層の各成分はその製品の摂取を刺激するような味覚や 匂いを確保するように選ぶことができる。この層は内側室中に含まれている活性 薬剤の味を効果的に遮断する０例えば、この外側層は重量で６０％の、例えば各 線、たら、かわさぎ等のような新鮮な魚からの低部技術により作られた微粉砕魚 肉等と、３５％の、例えば鯨、たら、蛸廃物（かなわち人の食用に用いられない 動物部分）、魚体廃物、海老廃物等からの水性抽出物と、及び約５％のバインダ ーとからなることができる。

このバインダーは必ずしもそれに限定されるものではないが、例えば改質された ヒドロキシプロビルジスターチホスフェートのような、１種以上の改質された澱 粉誘導体よりなることができる。

外側層又はその一部をなすことのできる臓物性物質には例えば、大豆粉、馬鈴薯 澱粉及び澱粉誘導体、小麦粉、ラクトース等が含まれる。

水産物質水性抽出物は有利には約３０−４０重量％の乾燥物質含有量を有し、そ して好ましくは種々の水産物質の水性抽出物によって作られる。水性抽出物は可 溶化された形で、及び乾燥された形で存在することができる。

投薬用成形物の外側層の中で、バインダー物質は約５％から約２０％までの範囲 、好ましくはその投薬用成形物の重量について約１０％の濃度で存在することが できる。このバインター物質は好ましくは水産物質水性抽出物のバインダーとし ての性質と相互作用して外側層の物理的強度を高めるのがよい。

投薬用成形物は内側室中の物質と外側層とを共押し出しすることによって製造す ることができる。外側層は有利には約１５−３０％、好ましくは約２０％の水分 含量で押し出され、次いで約１０−２０％、好ましくは１３％の水分含量まで乾 燥される。

内側室２の容積は例えば薬剤３の容積の１０倍の容積であることができる。当業 者には他の種々の容積比も可能であることは自明であろう、室２は投薬用成形物 の重量について約１０−２０％までの、共押し出しされた医薬含有混合物で満た されることができる０本発明の好ましい具体例の一つにおいて、その投薬用成形 物の外直径と内直径との比は約２：１である。

前に述べたように、本発明の投薬用成形物は有利には内側物質、すなわち活性薬 剤を含む物質を取り囲んで外側層を共押し出しすることによって製造される。こ の投薬用成形物は浮揚性をもたらすために１つ以上の室を備えるように成形され る。このような構造によってこの投薬用成形物は優れた貯蔵安定性を示すばかり でなく、水中で安定である。外側層の不透過性のためにその活性薬剤は回りの水 の中に過早に放出されることはない、活性成分はこの投薬用成形物の内部に化学 的に安定に保たれる。外側層の主成分を形成する動物性又は植物性物質は魚の胃 の中で容易に消化することができ、それによってその室内の活性薬剤は魚の消化 域に放出される。

活性薬剤が含まれることに加えて、この室は流体、好ましくはガス又は例えば空 気のようなガス混合物で満たされることができる。窒素ガスのような不活性ガス をこの内側室中の薬剤の酸化を防ぐために使用することができる。

活性薬剤は魚の飼育や看護に使用できる全ての生物学的活性薬剤よりなることが できる。このような薬剤は例えばテトラサイクリン類、好ましくはオキシテトラ サイクリン（ＯＴＣ）又はその塩、フルームキン及びオキソリン酸のような抗生 物質や抗寄生虫化合物を含む、維持用は例示のために上げただけであって、それ らに限定する意味ではない。

医薬以外の物質もこの投薬用成形物の上記室に加えることができる。このような 物質としては例えばビタミン類、ミネラル類等が含まれる。

本発明によれば、この投薬用成形物は活性物質含有位置３についての多数の具体 例を考えることができる０例えば活性物質は純粋な、又は濃縮された形で存在す ることができ、或いはまたそれらは１種以上の補助剤又は担体で稀釈されてその 薬剤の生物活性や安定性を改善することができる。好ましい具体例の一つによれ ば、この型中に含まれる生物学的活性薬剤はその活性薬剤を例えば脂肪物質のエ マルジョンのような乳化液又は懸濁液中に懸濁させ、或いは溶解させることによ り形成される。このようなエマルジョンに適した脂肪物質としては約０℃におい て液体であるような、脂肪又はリピド類が含まれる。この活性薬剤はそのエマル ジョンの中に懸濁され、乳化され、分散され、又は溶解されていることができる 。もしさもなければ容易に加水分解されるような種々の活性薬剤がそのようにし て安定化される。他の種々の添加剤又は担体もそれらが押し出し可能であるかぎ り、この活性薬剤とともに含まれることができる０例えば、そのような押し出し 可能な担体はこの投薬用成形物の貯蔵の間に活性薬剤が酸化するのを防ぐための 酸化防止剤よりなることができる。

活性薬剤は水性のゲル形成物質から形成されるゲルの母材からなる担体中に含ま れていることができる１このような物質は例えばナトリウムカルボキシメチルセ ルローズ、ミクロ結晶性セルローズ、ポリビニルピロリドン、例えばＢ、Ｆ、　 Ｇｏｏｄｒｉｃｈから入手できるＣａｒｂｏｐｏｌ■９４０　　のようなカルボ キシポリメチレン等が含まれる。このような担体はフルームキンの改善された吸 収性を有する本発明に従うフルームキン含有の種々の投薬用成形物を調製するの に特に有用である。

本発明の投薬用成形物が市販で得られる医薬入り飼料ペレットの成品Ａ及び成品 Ｂに比しての進歩性を更に説明するために以下の比較実験を行った。特に、本発 明の投薬用成形物はこれが魚に取り入れられる以前に周囲の環境中にその活性薬 剤が過早に放出されるのに抵抗性を示すことが認められる。すなわち従来技術の 成品と異なり、本発明の投薬用成形物は活性薬剤による環境の汚染を防止する。

”　　　　　　　　−ＯＴＣ 成品Ａ、成品Ｂ及び本発明に従う「アクワファーマカ」としてあげた投薬用成形 物（全て０ＴＣ−Ｈ（：ｌ　　を含む）のそれぞれの６単位づつを新鮮な海水８ ００ｍβの入ったガラスビーカー中に入れた。各試験物の中のＯＴＣ濃度は１％ であり、そして各投薬単位当たりのＯＴＣの重量は約０．８ｇであった。各ペレ ットからの周囲の海水中への　ＯＴＣの放出を異なった２つの海水温度、すなわ ち４℃（第２図）及び１８℃（第３図）において測定した。各５ｍβの海水試料 をそれぞれのビーカーから３０分毎に５時間にわたって（又はペレットが崩れて しまうまで）採取した。稀釈した後でこの海水試料中のＯＴＣの濃度を高性能液 体クロマジグラフイー（ＨＰＬＣ）によって測定した。ＨＰＬＣによる測定はメ タノール４．００　ｍβに２．００ｍＩ２の試料を加えることによって行った。

この海水／メタノールの混合物をフリーザ中に１０分間置き、その後で更に１０ 分間遠心分離した。得られた溶液を直接ＨＰＬＣ装置の中に注入したが、これは Ｃｍ−Ｂｒｏｗｎｌｅｅ、　５ｐｈｅｒｉ−５，ＭＰＬＣカラム（１０ｃｍ　ｘ 　４．６　ｍｍ　、　３　ｃ＋ｎ　ｘ　４．６　＋ｎｍ　）　と、Ｃ＋ａ−Ｃｏ ｒｓａｉｌの３７−５０μのプレカラムと、移動相の０．０２Ｍ蓚酸（ｐＨ２） 及びアセトニトリルの８００／１２０　（容積／容積）混合物＋５％ジメチルホ ルムアミドとよりなるものであった。

ＯＴＣは１０μ注入（自動式、２０’Ｃ）により液体速度１．０ｍｌ／ｍｉｎを 用いて２８０ｎｍにおいて検出した。実験した６単位の平均から、時間あたりの 水中に溶解したＯＴＣ存在量を求めた。データは第２及び第３図に示す。

第２及び第３図はＯＴＣが従来技術の成品Ａ及びＢから放出されたことを示す、 同じ条件のもとて本発明の投薬系からは実質的になんらの放出も存在しなかった 。温度の上昇も本発明の投薬用成形物からの　活性薬剤の放出に実質的な影響を 与えなかった。

各ペレットの崩壊時間も海水中に浸漬したペレットが底部の直径２ｍｍの網を通 過するのに要する時間、又はペレットが完全に崩壊してしまうまでに要した時間 を測定することによって求めた。崩壊時間は６回の測定の平均として求めた。デ ータはそれぞれ４℃及び１８℃の海水に浸漬した場合について下記第１表にあげ る。

第１表 註：＊：ペレットは殆ど完全に摩耗していて非常に脆かった 第１表は本発明の投薬用成形物が５時間以上にわたって安定であり、崩壊しなか ったことを示している。

例」。

活性薬剤放出実験−フルームキン 及びオキソリン酸 例１の操作を繰り返して本発明に従うフルームキン含有の「アクワファーマカ」 及びオキソリン酸含有の成品Ａの薬剤放出を比較した。それら２つの実験した投 薬用成形物は異なった医薬を含んでいるけれども、両方の活性薬剤は水溶性であ り、従ってこれらの薬剤の一方又は両方が周囲の海水中に存在することは各投薬 用成形物からの漏洩を示すものである。各「アクワファーマカ」ペレットは０． ４％のフルームキンを含んでいた。それらは約６ｍｍの寸法及び約０．２５　ｇ の重量を有していた。成品Ａの各ペレットは０．５％のオキソリン酸を含んでい た。それらは６ｍｍの寸法とそれぞれ約０．３７　ｇの重量とを有していた６例 １におけると同じ装置及び操作を用い、そして各ペレットからの活性薬剤の周囲 の海水中への放出を４℃及び１８℃において求めた。各３０分ごとに５時間にわ たり、又はペレットが崩壊してしまうまでそれぞれ５ｍＪ２の海水試料を採取し た。成品Ａを含有するビーカー（オキソリンＭ）から採取した各試料を０．０１ 　Ｎ　ＮａＯＨで１＝１の割合に稀釈した。

この稀釈した試料を４０００ｒｐｍにおいて５分間遠心分離した６次に両方のビ ーカーからの各海水試料を４０００ｒｐｍにおいて５分間遠心分離した。フルー ムキン及びオキソリン酸の濃度は例１におけると同様にＨＰＬＣによって測定し た。結果を第６図（４℃）及び第７図（１８℃）にあげる。

第６及び第７図は本発明の投薬用成形物である「アクワファーマカ」からの活性 薬剤の漏洩が成品Ａからのオキソリン酸の漏洩よりも極めて低いということを示 している。

４℃においては５時間の後にこの「アクワファーマカ」投薬用成形物の周囲の海 水中にフルームキンの存在は認めらめられなかった。１８℃においては「アクワ ファーマカ」の漏洩は３．５　　時間の後に開始された。４．５　　時間口に、 フルームキンの９０％が海水中に溶解し、そしてペレットは崩壊した。一方成品 Ａのペレットからのオキソリン酸の溶解は４℃及び１８℃の両方ともにただちに 開始された。

４時間後には成品Ａからのオキソリン酸の１００％が周囲の海水中に溶解してペ レットは完全に侵食された。

これらの結果から、本発明に従う「アクワファーマカ」のペレットは市販で入手 される成品Ａよりも極めて良好に周囲の媒質中への抗生物質の漏洩を効果的に防 ぐことがわかる０本発明の投薬用成形物の構造は実際に４℃と１８℃との間の海 水中で少なくとも３．５　　時間以上維持される。

このことば給餌の数時間後にのみこの投薬用成形物から過剰の医薬が除去される ということを示す、そのようにして魚の飼育域の回りの環境の汚染は最小限にな る。

本発明の「アクワファーマカ」のペレット及び成品Ａは上記の実験において異な った活性薬剤（フルームキン及びオキソリン酸）を含んでいたけれども、両方の 薬剤は下記第２表に示すように種々のバクテリアに対して類似の最低抗菌濃度を 示すという点で両省は類似の抗生物質である。

第２表 例」。

′　　　　二　　−０ＴＣ 本発明の投薬用成形物からの活性物質の吸収を成品Ａ及び同Ｂの活性物質の吸収 と比較した。吸収量は１．２　　重量％のＯＴＣを含む「アクワファーマカＪ　 、　１．０重量％のＯＴＣを含む成品Ａ及び１．２　　重量％のＯＴＣを含む成 品Ｂをそれぞれ給餌した魚からの血漿及び筋肉組織中のＯＴＣ濃度を測定するこ とによって求めた。従って魚に第０８目に５−７℃の海水温度において「アクワ ファーマカ」、成品Ａ又は成品Ｂを４時間給餌した。血液及び筋肉組織の試料を 第１．２．３．４．７．１４．２１及び第５０日月にそれぞれ採取した。それら の試料を下記の手順によりＯＴＣ濃度について調製し、分析した。

ＯＴＣｈの すり潰した魚の組織（筋肉１０ｍｇ又は肝臓５ｍｇ）を０．１Ｍ　のエチレンジ ニトリロテトラ酢酸ジナトリウム塩の含まれたｐＨ４，２（７）、０．０℃Ｍ　 　ｔ１４ａ塩ＦＪｆｆｙ液中テ３回均質混合した。脂肪分をヘキサンとジクロロ メタンとの混合物の添加によって抽出した。蛋白質性残留物を、固体の食塩を添 加し、次いで４８℃に暖めてフリーザの中で急速に冷却することによって沈殿さ せた。遠心分離の後でその抽出物をＣ８固相５ｅｐｒａｌｙｔｅ　　＠　　抽出 カラム（Ａｎａｌｙ−ｔｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ製）の上で精製 した。　ＯＴＣをアセトン中５％の水の溶離剤で、そしてその後でアセトン中１ ０％の水の溶離剤でこのカラムから溶離させた。窒素ガスでアセトンを蒸発させ た。残渣を移動相中で稀釈して０τＣ定量用の内部標準とてしデメクロサイクリ ンを用いてＨＰＬＣにより分析した。

ＯＴＣの゛ 各血漿試料　（１００−１０００ｕ　ｆｌ）をトリフルオロ酢酸で処理して血漿 蛋白質を沈殿させた。３７℃に加熱した後、残りの溶液を遠心分離してＨＰＬＣ により上述のように分析した。血漿中及び筋肉組織中のＯＴＣ濃度の測定の結果 は第４及び第５図にそれぞれあげる。各測定の最大値を第３表にあげる。

第３表 供試品　　　血漿中　　　日　　筋肉中　　　日豊高濃度　　　　　最高濃度 （μｇ／ｎｌ）　　　　　　（μｇ／ｍｌ）アクワ　　　０．４３±０．０４　 　３　　０．８４±０．３２フアーマカ 成品Ａ　　　　０．２３±０．０３　　１　　０．３４ｆ０．０８　３成品Ｂ　 　　　Ｏ，２ａ±０．０４　　２　　０．４６±０．０６　４＝血漿及び筋肉中 への薬剤吸収試験は、実験した従来技術の成品と比べて本発明の投薬用成形物か らの活性薬剤の受容性及び吸収性が優れていることを示す。

匠Ａ ゛　薬剤　′　　−フルームキン びオ　ソ１ン 「アクワファーマカ」　（フルームキン含有）成品Ａ（オキソリン酸含有）によ る魚の処置における活性薬剤の筋肉中の濃度の測定実験を行った。それぞれ０． ２　　及び０．５重量％のフルームキンを含む「アクワファーマカ」のペレット を０．５　　％のオキソリン酸の含まれた成品Ａのペレットと比較した。この０ ．２　　％「アクワファーマカ」のペレットをｌＯ日日間わたり魚体重量に対し て毎日０．８６％の給餌率で１群の魚に投薬した。０．５％「アクワファーマカ 」ペレットは５日間にわたり０．８６％の給餌率で１群の魚に同様に投薬し、そ して別の群の魚に１０日間にわたり投薬した。成品Ａめオキソリン酸０．５　　 ％を含むペレットは８日間にわたり毎日０．４３％の給餌率で更に別の群の魚に 投薬した（成品Ａの製造業者の指導書によればペレットを０．２０−０．５０　 　％の給餌率で１０日間給餌することが推奨されている）、ペレットは全て自動 給餌機によって給餌した。この給餌機の出力は１日当たり８−１２時間にわたっ て１又は２分間の間に２０ないし５０個のペレットの量であった。医薬入りペレ ットの投薬の全期間の間中全ての群の魚の食欲は良好であった。処置期間の最後 においてそれら魚を空の囲いに移し、そして成育飼料を給餌した。

投薬のデータを第４表にあげる。

成品Ａ　　　　２３　　８　　　１０６　　　２０　　１６０（０，５％） 供試品の投薬の第１８目の終り及びそれぞれ第２．４．７．９．１２．１９．２ ６及び４１日口の終りに各ベレット橿ごとに１２匹の魚試料を採取した。各群か ら血漿試料と筋肉試料とを採取した。血液試料（２−１０ｍｌ）は仙骨静脈から 採取した。血漿はこの血液を４００Ｏｒｐｍにおいて１０分間遠心分離すること により分離した。血漿及び組織の試料（全部、魚体一方側の切り身、及び腎臓） はただちに冷凍して分析まで−７０”Ｃにおいて貯蔵した。全ての血漿試料及び ４個の筋肉試料は血漿値が各群の平均値近くにある魚から選んだ。

の　　　゛　　　　　の゛ 魚の血漿中のフルームキン又はオキソリン酸の量を次のようにして求めた。

各血漿試料を固体相抽出によって清浄化した。２５０μβの血漿及び内部標準を 適用するに先立ってＣｍ　ＢｏｎｄＥｌｕｔ　（商標）カラムをメタノール及び 燐酸（ＩＭ）でコンディショニングした。フルームキンを分析するときは内部標 準としてオキソリン酸を用い、その反対のときは逆にした。カラムを水及び燐酸 　（ＩＭ）で洗浄した後、その被分析物及び内部標準を２５０μ２のアセトニト リル−メタノール−１Ｍ燐酸（８０：１０：１０）で溶離させた。この溶離液を 、ポリスチレンジビニルベンゼンを充填したカラム（ＰＬＰＲ−Ｓ、５　ＬＬｍ ）を用いてＨＰＬＣにより、また蛍光分析（エミッション：３８０ｎｍ、励起： ２６２ｎ　ｍ　）によって分析した。移動相はアセトニトリルーテトラヒドｏフ ラン−０，００２ｙ　　燐酸（２０：１５：６５）であり、これを０．７　ｍｌ ／ｓｉｎの流量で流した。

Ａ−２・の 筋肉試料（１０−２０ｇ）をすり潰して３ｍｌのＮａＯＨ（ＩＭ）と２０ｍ１と の配合物を混合した。内部標準は血漿試料の分析におけると同様に加えた。遠心 分離ののちに、均質化混合を２回繰り返した。酸性化し、捕集した上澄み液をク ロロホルムで抽出した。クロロホルムは小容積まで蒸発させた。それ以上の精製 をクロロホルムと酸性／塩基性水溶液との間の液／液抽出によって行った。クロ ロホルム溶液を蒸発干固させ、そして乾燥残渣を移動相中に溶解した。ＨＰＬＣ 分析を血漿試料について行ったと同様に実施した。このようにして全部で３４２ 個の血漿試料と１３４個の筋肉試料とを分析した。血漿中のフルームキン又はオ キソリン酸の平均濃度についての曲線を第８図に示す、筋肉中のフルームキン又 はオキソリン酸の平均濃度についての曲線は第９図に示す。

「アクワファーマカ」０．５％と記した曲線は１０日間の処置期間から得られた ものである。「アクワファーマカ」０．５％゛で示した曲線は５日間の処置期間 から得られたものである。

第３及び第４表、並びに第４．５％８及び９図のデータは鮭のある大きな群れに 薬剤入りペレットを投薬した大規模実験の結果を示すものであるが、これらから 、本発明に従う投薬用成形物からの活性薬剤の好ましい吸収性が確認される。特 に、本発明の投薬用成形物によれば、投薬の第１日月から魚体中の高いフルーム キン濃度に達することが可能である。

試験した各投薬用成形物からのフルームキン及びオキソリン酸の生体による摂取 性の範囲は第８及び第９図の曲線（ＡＵＧ）の下の面積を考慮することにより評 価される。

下記の第５表にあげるように投薬価あたりのこの曲線下の面積を比較したときに 「アクワファーマカ」０．２　　％のベレットの中のフルームキンは成品Ａの薬 剤入り給餌中のオキソリン酸よりも血漿の結果については活性薬剤の生体摂取性 が３．５　倍大きいことが見られる。筋肉のデータについては本発明の投薬用成 形物中のフルームキンは生体摂取性が成品Ａのベレット中のオキソリン酸よりも １．４　　倍良好である。

第５表 成品Ａ　　　　２１７　　０．１１　　４５　　　　０．２８（０，５％） ４二 娼」鯵１胆 本発明に従う、活性薬剤としてフルームキンを含む「アクワファーマカ」投薬用 成形物、又はオキソリン酸を含む成品Ａを、１２０−５００ｇの体重の大西洋鮭 （Ｓａｌｍ。

５ａｌａｒ）に投薬した。魚は循環海水を入れたガラスファイバーの水槽の中に 維持した。各点を０．１ｍｌの接種材料の腹腔内注射によりバクテリア懸濁液で 実験的に感染させた。

予備実験によってその説種密度をあらかじめ求め、死亡率が計算した基準以内と なるようにした６強制感染に先立って各点は１　：　１０００に稀釈した３０％ クロロブタノール中で麻酔した。次にその魚に規則正しい間隔で１日３回投薬し た。水温は毎日測定した。魚の食欲及び志望した魚の数を試験期間中毎日記録し た。各試験群にフルムキンを含む本発明の「アクワファーマカ」ベレットか、又 はオキソリン酸を含む成品Ａの薬剤入り飼料を投与した。各投薬群中の全ての死 亡魚はそれぞれの疾病についてスクリーニングした。死亡原因は特異的又は非特 異的として記録した。

実験の結果を以下に総括する。

実験１ この実験においては大西洋娃をエルシニアｒｕｃｋｅｒｉ　　に感染させた。こ の細菌接種材料を接種した１日後にその試験群に「アクワファーマカ」０．４　 　％か、又は成品Ａの医薬入り飼料０．５％　かのいずれかを１０日間にわたっ て投与した。この投薬は１日当たり体重１ｋｇにつき薬剤２０ｍｇであった。両 医薬ともに１ｍｌ当たり１０１個の細胞の強制感染においてエルリニア症を制御 するのに有効であった。医薬治療開始の１２日後に０．４％「アクワファーマカ 」投与群の死亡率は２２％であり、０．５％　の医薬入り成品Ａの飼料を与えた 群のそれは３０％であった。コントロール群（医薬治療を行わないもの）は４８ ％の死亡率を示した。薬物治療の第１０日月までは両医薬の間に死亡率の違いは なかった。医薬治療開始後筒１０８目と第２０８目との間の期間においては「ア クワファーマ力」群では８％死亡率が低かった。この結果は本発明に従う「アク ワファーマカ」投薬用成形物がせいひんＡの医薬入り飼料よりも所期の発病時期 においてエルリニア症の暴発を停止させることができることを示す。

実験２ この実験においてはエルシニアｒｕｃｋｅｒｉ　　に感染させる３日前から医薬 投与を開始した。この医薬治療は合計１０日間、すなわち接種材料で感染させる 前の３日間と、その後の７日間とにわたって継続させた。フルームキンの投薬（ 「アクワファーマカ」０．４％）及びオキソリン酸（成品Ａの０．５％　薬剤の 飼料）の投与量は２０ｋｇ／ｍｇ／日であった。感染に先立って医薬処理を開始 することによりベレットの摂取は最適でありな０本発明に従う投薬用成形物を投 与した群では死亡は観測されなかったが、一方成品Ａを摂取した群においては１ ５％の死亡が生じた。コントロール群の死亡率は１００％であった。

実験３ この実験においては「アクワファーマカ」０．４　　％及び「アクワファーマカ 」０．５　　％の発病予防効果を、０．５％の成品Ａの医薬入り給餌の場合と比 較した。医薬は全てエルシニアｒｕｃｋｅｒｉ　　に感染させるに先立りて投与 した。バクテリア接種材料で感染させる１日前に「アクワファーマカ」０．５％ として５０ｍｇ／ｋｇを投与したときに死亡は全く観測されなかった。コントロ ール群の死亡率は９６％であった。成品Ａとしてオキソリン酸（６０ｍｇ／ｋｇ ）を投与した場合には６％の死亡率が生じた。２０ｍｇ／ｋｇの投与を個別に２ 回行った場合に比して最適の効果は５０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇのフルームキン投 与を１回行った場合に得られた。すなわちエルリニア症の処置のために適当な投 与量は５０ｍｇフルームキン／ｋｇである。上記の結果は、本発明の投与用成形 物が魚の種々の病気の治療処置および予防処置において市販で入手できる医薬入 り急用飼料よりも良好な結果をもたらすということを示している。これらの結果 は本発明の投与用成形物が市販で得られるベレットよりも、栽培魚による摂取率 及びこの調剤からの活性物質の吸取率が優れていることを証明している。

本発明に従う投与用成形物を食餌として魚に投与する個とに依って魚を効果的に 薬剤治療することができる０個の投与用成形物はサルモニ種の微生物に対する治 療薬を投与する際に特に好ましい。

本発明はその性質と本質的貢献分野から逸脱することなく他の種々の形態で具体 化することができ、従って以上の明細書の記述よりは添付の請求の範囲をこの発 明の範囲を示すものとして参照すべきである。

Ｔｏ弓Ｅ（）ＩＯＵＰＳ） １００７　　　　　　　　　ＦＩＧ、　３　（１８０ｃ）Ｔｌｌ−ＩＥ　（ＨＯ ＵＰＳ） ０　　　　５　　　１０　　１５　　　２０　　２５、　　３０　　３５　　　 　＜０　　４５　　　５０　　５５ＡＹＳ ＤＩＳＳＯＬＶＥＤ　ニー＋＝ｃ＋ｃＡＬ（Ｚ）ＤＡＹＳ ＤＡＹＳ 補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８） 平成２年１２月１４日 特許庁長官　　植　松　　　敏　　殿　　　　　　　　　直１、　国際出願番号 ＰＣＴ／ＮＯ８９１０Ｏ０５９ λ　発明の名称 魚の薬物治療のための投薬用成形物 ３、　特許出願人 ４、代理人　　〒１０７ （１）　　補正書の翻訳文　　　　　　　　　　１通請求の範囲（補正） １、魚に生物学的活性薬剤を投与するための調剤投与用成形物においてこれが 水及び上記活性薬剤に対して実質的に不透過性の、動物性物質、植物性物質及び 水産物質から水性抽出物の群から選ばれた１つ以上の物質を含む外側層と、及び 上記外側層によって囲まれた、少なくとも１種以上の活性薬剤を含む少なくとも １つ以上の室とよりなる、上記調剤投与用成形物 ２、外側層を形成する動物性物質を含み、この動物性物質が魚肉よりなる、請求 の範囲１に従う調剤投与用成形物。

３、外側層が更に、この調剤投与用成形物の重量の約５％から約２０％までのバ インダー物質を含む、請求の範囲２に従う調剤投与用成形物。

４、バインダー物質がこの調剤投与用成形物の約１０％を占める、請求の範囲６ に従う調剤投与用成形物。

５、内側室が外側層と一緒に共押し出しされて活性薬剤のための担体物質を含ん でいる、請求の範囲１に従う調剤投与用成形物。

６、担体物質が約０℃以下の温度において固化する押し出し可能な媒質よりなる 、請求の範囲５に従う調剤投与用成形物。

７、担体物質が水性のゲル形成性物質よりなる、請求の範囲５に従う調剤投与用 成形物。

国際調査報告 ＋呻−…帰師＋　ａ＊ｍｃａ＋ｍ　Ｎａ、　　Ｐ　ＣＴ　／〜０８９１０００５ ９

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. １．魚に生物学的活性薬剤を投与するための調剤投与用成形物においてこれが 水及び上記活性薬剤に対して実質的に不透過性の、動物性物質、植物性物質及び 水産物質から水性抽出物の群から選ばれた１つ以上の物質を含む外側層と、及び 上記外側層によって囲まれた、少なくとも１種以上の活性薬剤を含む少なくとも １つ以上の室とよりなる、上記調剤投与用成形物
2. ２．外側層を形成する動物性物質を含み、この動物性物質が魚肉よりなる、請求 の範囲１に従う調剤投与用成形物。
3. ３．活性薬剤がオキシテトラサイクリン又はその塩を含む、請求の範囲２に従う 調剤投与用成形物。
4. ４．活性薬剤がフルームキンを含む、請求の範囲２に従う調剤投与用成形物。
5. ５．医薬がオキソリン酸を含む、請求の範囲２に従う調剤投与用成形物。
6. ６．外側層が更に、この調剤投与用成形物の重量の約５％から約２０％までのバ インダー物質を含む、請求の範囲２に従う調剤投与用成形物。
7. ７．バインダー物質がこの調剤投与用成形物の約１０％を占める、請求の範囲６ に従う調剤投与用成形物。
8. ８．内側室が外側層と一緒に共押し出しされて活性薬剤のための担体物質を含ん でいる、請求の範囲１に従う調剤投与用成形物。
9. ９．担体物質が約０℃以下の温度において固化する押し出し可能な媒質よりなる 、請求の範囲８に従う調剤投与用成形物。
10. １０．活性薬剤がオキシテトラサイクリン塩酸塩である、請求の範囲５に従う調 剤投与用成形物。
11. １１．担体が水性ゲル形成性物質よりなる、請求の範囲８に従うう調剤投与用成 形物。
12. １２．活性薬剤がフルームキンよりなる、請求の範囲１１に従うう調剤投与用成 形物。
13. １３．魚に生物学的活性薬剤を投与する方法において、上記魚に給餌するために 請求の範囲１に従う調剤投与用成形物を投与することよりなる、上記方法。
14. １４．魚に生物学的活性薬剤を投与する方法において、上記魚に給餌するために 請求の範囲２に従う調剤投与用成形物を投与することよりなる、上記方法。
15. １５．魚に生物学的活性薬剤を投与する方法において、上記魚に給餌するために 請求の範囲３に従う調剤投与用成形物を投与することよりなる、上記方法。
16. １６．魚に生物学的活性薬剤を投与する方法において、上記魚に給餌するために 請求の範囲４に従う調剤投与用成形物を投与することよりなる、上記方法。
17. １７．魚に生物学的活性薬剤を投与する方法において、上記魚に給餌するために 請求の範囲５に従う調剤投与用成形物を投与することよりなる、上記方法。
18. １８．魚がサルモニフォームス目の魚である、請求の範囲１３に従う方法。
19. １９．魚に請求の範囲１ないし１２のいずれかに従う調剤投与用成形物の形で少 なくとも１種類の生物学的活性薬剤を投与することにより罹患した魚を処置する 方法。
20. ２０．魚に請求の範囲１ないし１２のいずれかに従う調剤投与用成形物の形で少 なくとも１種類の生物学的活性薬剤を投与することにより罹患した魚を予防する 方法。