JPH03502575A

JPH03502575A - 希土類クリプテート及びその製造方法とその合成中間体とその蛍光トレーサーとしての利用方法

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Publication number: JPH03502575A
Application number: JP1500761A
Authority: JP
Inventors: ラン　ジャン‐マリ; マチス　ジェラール; アルファ　ベアトリック; デュシュノー　ロベール; ジォル　エティエンヌ　ジャン‐ピエール
Original assignee: コンパニュ　オリス　インダストリ　エス　アー
Priority date: 1987-12-18
Filing date: 1988-12-16
Publication date: 1991-06-13
Anticipated expiration: 2014-03-08
Also published as: FI92698C; AU2908889A; ES2043874T3; CA1334026C; FI92698B; ATE76410T1; EP0321353B1; JP2866419B2; KR0133732B1; FR2624862B1; EP0321353A1; RU2074859C1; WO1989005813A1; DE3871353D1; FR2624862A1; KR900700489A; FI902981A0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】希土類クルプテート及びその製造方法とその合成中間体とその蛍光トレーサーとしての利用方法本発明は、ストラスバーブのルイバスッール大学でジエイ。

エム、レーン（Ｊ、　Ｍ、　ＬＥＨＮ）と彼の研究チームとの共同で行われた研究結果であり、蛍光物質の技術分野に関し、特に免疫学的測定における蛍光トレーサーとして使用するに適した巨大多環式希土類錯体あるいは希土類クリプテートに関する。

フランス特許出願第８４１４７９９号は、一般式、をもつ巨大多環式化合物によって錯化された少なくとも１つの希土類塩より成る巨大多環式希土類錯体を開示している。斯かる構造式Ｉにおいて、Ａは三価または四価原子、Ｒはなにも無いこと、あるいは、水素ヒドロキシル基、アミノ基または炭化水素基をあられし、二価の基である　■、■、■　は互いに独立的な炭化水素鎖であって、１個以上のへテロ原子を含んでも含まなくてもよいし、ヘテロ巨大環によって妨害されてもされなくでもよく、基　■、■、Ｏの少なくとも１つは少なくとも１つの分子単位を含むか、あるいは、実質的に分子単位から成り、上記分子単位は錯化された希土類イオンの発光レベルより大きい三重項（ｔｒｉｐｌｅｔ）エネルギーを有する。

これらのクリブテートは、免疫学的検出法及び蛍光測定法における生物学的生成物のためのトレーサーとして特に適している。

これらの希土類クリプテートを用いて、共有結合によって生物学的分子を特異的に標識化する場合、クリブテートの１つ以上の構成成分分子単位を、生物学的反応性に通する操作条件下で生物学的分子と共有結合可能の、１つ以上の分子単位を有する充分に接近可能の置換体によって置換することができる。

これらの分子単位のなかであげられる非制限的例は、アルキルアミノ、アリルアミノ、イソチオシアノ、シアノ、イソシアノ５チオシアノ、カルボキシル、ヒドロキシル、メルカプト。

フェノール、イミダゾール、アルデヒド、エポキシド、ハライド、チオニル、スルホニル、ニトロベンゾイル、カルボニル。

トリアゾ、スクシンイミド、無水物、ハロゲン酢酸、ヒドラジノ、ジハロゲノトリアジニル及びその他の基である（Ｂｉｏｌ。

ｃｌｅＩＩ＋、　２４５巻３０５９ページ、　（１９７０））　、クリプテートを問題の生物学的分子に結合させるアームの長さは、例えば原子１個から２０個までに変化し得る。そして炭素原子のみならず、Ｎ。

ｏ、ｓ、ｐなどのへテロ原子も含有することができる。

生物学的分子のための蛍光トレーサーとして用い得る官能化希土類クリプテートの二系統が現在見出されている。

本発明は、さらに、このような希土類クリプテートの製造方法及び合成中間体に関する。

さらに、このような希土類クリブテートを生物学的物質のための蛍光トレーサーとして使用する希土類クリプテートの利用方法にも関する。

本発明に係る希土類クリプテートは、下記の構造式Ｉ及び■のうちの１つであられされる巨大多環式化合物によって錯化された少なくとも１つの希土類塩より成る。

ここで、構造式：下記の環（１）及び（２）のうちの一つである。

そして、上述において、Ｙは、１個以上の二重結合を含むかまたは含まず、および／または、１個以上のへテロ原子、例えば、酸素、窒素９硫黄または燐によって妨害されるかまたはされない、線状または枝分かれＣ１からＣ１Ｏまでのアルキレン基、ＣｓＣｓ　シクロアルキレン基またはＣ４からＣ１４までのアリレン基から選択される二価の有機基より成るスペーサー基あるいはアームで、上記アルキレン基、シクロアルキレン基またはアリレン基は未置換であるかまたはアルキル基、アリル基またはスルホネート基によって置換されたものとされ、Ｚは、生物学的物質と共有結合可能の官能基であり、Ｒは、メチル基または基− Ｙ−２であり、Ｒ″は、水素または基−ＣＯＯＲ”であって、Ｒ”がＣ８からＣＩｏまでのアルキル基で、より好ましくはメチル、エチルまたは第三ブチル基をあられすもの、もしくは、基−Ｇｏ−ＮＨ−Ｙ−Ｚである。

なお、本発明の説明において、“生物学的物質と共有結合可能の官能基“という表現は、直接、または、活性化後、天然に存在する、または、人工的に上記生物学的物質に導入された官能基の少なくとも１つと共有結合できるあらゆる官能基を意味する。このような官能基は、特に、ＮＨ！　、Ｃ０ＯＨ，ＳＨまたはＯ）（基である。このような基は、ティシュセン（Ｐ、　Ｔｉｊｓｓｅｎ）によって、′酵素免疫測定法の実際と理論（Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ａｎｄＴｈｅｏｒｙ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｍｅ　Ｉａ＋ｍｕｎｏａｓｓａｙｓ）”、エルセヴイール１９８５゜に詳細に記されており、この文献における記載事項の−・部が、本発明の説明のためここに引例されている。

本発明の目的に通した官能基の例として、特にあげられるのは、アミノ、チオ、シアノ、イソシアノ、イソチオシアノ、チオシアノ、カルボキシル、ヒドロキシル、マレイミド、スクシンイミド、メルカプト、フェノール、イミダゾール、アルデヒＦ、　ｘホ＋シト、ハライド、チオニル、スルホニル、ニトロベンゾイル、カルボニル、トリアゾ、無水物、ハロゲン酢酸、ヒドラジノ、アクリジン、その他の基である。

特に好ましい基は、アミノ５チオ及びカルボキシル基（これらは生物学的物質に共有結合する前に活性化することが必要である）、及び、マレイミド、スクシンイミド及びイソチオシアナート基（これらは直接生物学的物質と結合できる）である。

概して、本発明によるクリブテートは、次のどちらかの方法によって得られる。

■環：６．６“−ジハロゲノメチル−２，２”−ビピリジンと縮合させ、その後、基− ＮＨ−Ｙ−Ｚまたは基−Ｙ−２によって置換し、生成した巨大多環式化合物を希土類塩によって錯化させる方法。

■環：ここで、Ｘはハロゲン基、Ｒｏは炭素原子１〜１０個を含むあるいは、４．４” 位置を置換した（二置換）６．６’−ジアミノメチル−２，２′−ビピリジン１分子と４．４゛位置を置換した（二置換）６．６゛−ジハロゲノメチル−２，２゛−ビピリジン２分子と縮合させ、その後、基−ＮＨ−Ｙ−Ｚまたは基−Ｙ−Ｚによって置換し、生成した巨大多環式化合物を希土類塩によって錯化させる方法。

上記の方法においては、希土類塩による錯化は、置換段階の前に行うことが好ましい。

以下、本発明によりクリブテートを得る種々の方法を詳細に述べる。

方法−へ上リブテートに転化し得る。

アルキル基で、より好ましくはメチル、エチルまたは第三ブチル基である。

この方法においては、ハロゲン化ビピリジン誘導体上を巨大環−２−と縮合させる。

この反応は、無水有機溶媒、例えば、アセトニトリル中で、アルカリ金属炭酸塩のような塩基（例、炭酸ナトリウム、または、炭酸リチウム）の存在下で、溶媒の還流温度で好都合に行われる。得られた巨大環主は、そのとき使用アルカリ金属イオンのクリブテートの形、例えば、ナトリウムクリブテートの形である。

巨大多環式化合物主はそれから、構造式Ｈ２Ｎ−Ｙ−Ｚをもつアミンとの反応によりアミツリシスにかけられる。ここでＹ及びＺは上で定めたとおりであり、官能基Ｚは必要ならば一般的方法によって遮蔽される。

反応は窒素気流下、室温で好都合に行われる０反応が完了したとき、過剰のアミンは適当な手段で除去され、構造式土のクリブテートが一般的方法によって回収される。

この方法で得られた化合物はその後イオン交換によって希土類クリブテートに転化される。巨大多環式化合物互のアルカリ金属クリブテートのメタノール溶液を、通しているならばクロロホルムの存在下で、希土類ハライド・メタノール溶液と共に還流せしめる。

前述のように、アルカリ金属クリブテート主は、アミノ基分解の前に、上記の操作法によるイオン交換によって、希土類り巨大二環式化合物ユは、発明のクリプテート合成のための重要な中間体である。この中間体はアルカリ金属クリプテートまたは希土類クリブテートの形をとり得る。これは本発明のもう一つの目的である。本発明の目的のための特に好ましい中間体は、構造式１をもち、ここでＲ８がＣＨｚ　、Ｃｚ　ＨｓまたはｔＣ＜Ｈｑの基である化合物である。

この方法を実施するための他の実施態様においては、アルカリ金属クリブテートを先ず第一に、過剰の硝酸銀と反応させることによって対応する銀クリブテートに転化し、次にこれをＨ，Ｓで処理するという方法で、アルカリ金属クリプテートを説話体化することができる［Ｈｅ１ｖｅｔｉｃａ　Ｃｈｉｎｉｃａ　Ａｃｔａ６７巻。

（１９８４）　２２６４〜２２６９ページ〕。

構造式（１）または（ＩＩ）であられされ、Ｚがアミノ基以外のものであるクリブテートは、熟練せる当業者には公知の一般的方法によって、構造式（１）または（ｆ［）をもち、Ｚがアミノ基であるクリブテートから得られることがわかる。

プ１Ｌ−に− ｉ　　　　　　　　　　　　　旦この方法においては、２分子のノ１０ゲン化誘導体旦を１分子のアミノ誘導体立と縮合させる。この縮合は、方法Ａの第一段階と同じ条件下で、即ち、アセトニトリルのような無水有機溶媒中で、アルカリ金属炭酸塩のような塩基（例、炭酸ナトリウムまたは炭酸リチウム）の存在下で良好に行われる。この反応は溶媒の還流温度で行われる。巨大多環式化合物ユが得られる。

これは本発明によるクリプテートの合成のための重要な中間体であり、これも本発明の枠内に入る。この巨大多環式錯化化合物はアルカリ金属クリブテートの形であり、これはアミノ基置換の前に、上記の操作法によって好都合に希土類クリブテートに転化される。方法Ａに関していえば、アルカリ金属クリプテート１を、本性の実施にあたっての他の実施態様において脱錯体化し、対応する巨大多環式化合物１または遊離クリブタンを生成せしめる。これをその後再諸化し、希土類クリブテートを得る。

化合物１を、その後上記の操作法によるアミノ基置換を行うと巨大多環式化合物、即ち、本発明による構造式Ｉのクリプテートが生成される。

一巨大環であり、Ｙ、Ｚ、Ｒ’　は上に定めたとおりのものである。

方法Ｂにおいて原材料として使用されるアミノ誘導体ｉは、ハロゲン化誘導体上をテトラヒドロフランのような有機溶媒中で還流しなからＮａＮｚと反応させることによって対応するアジド化合物に転化し、生成したアジド化合物を、還元触媒、例えば、炭素上パラジウムの存在下で水素気流下で室温で還元することによって得られる。

去１一旦工Ｒｚ＝ＨまたはＣＨ。

この方法によれば、適切に置換されたハロゲン化ビピリジン誘導体−９−を先ず最初に巨大環Ｉと縮合させる。この反応は、アセトニトリルのような無水有機溶媒中で、アルカリ金属炭酸塩のような塩基（例、炭酸ナトリウムまたは炭酸リチウム）の存在下で好都合に行われる。この結果、巨大多環式化合物王立がアルカリ金属クリブテートの形で生成する反応は溶媒の還流温度で行うのが好ましい。

巨大多環式化合物二をそれから構造式ＸＹＺのハライドとの反応によって置換する。Ｚ及びＹは上で定めたもの、Ｘはハライドイオンである。

Ｚがシアノ基である場合、それは一般的還元剤による還元によってアミノ基に転化し得る。

得られた化合物１土はその後、例えば、上記の操作法によって、イオン交換により希土類クリプテートに転化される。希土類ハライドをメタノールに溶解し、アルカリ金属クリプテートーメタノール溶液を必要ならば少量のクロロホルムと共に加えると好都合である。その混合物を不活性ガス下で還流せしめ、アルカリ金属クリブテートの消失後、薄層クロマトグラフィーを行う。

本性を実施するにあたっての他の実施！Ｊ様においては、アルカリ金属クリブテートを上で明確に示した操作法（方法Ａ参照）によって脱措体化し、所望の希土類クリプテートに転化させる。

反応が完了したとき、希土類クリプテートを一般的方法によって反応媒体から分離する。それは結晶性固体の形状を示す。

上記の方法に用いたハロゲン化ビピリジン誘導体豆は下記の反応図式によって示される方法によって得られる。

構造式ユの６，６”−ジメチル−４３４゛−ジ（ｐ−メトキシフェニル）−２，２’−ビピリジンは、′合成（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　）　”　１巻記載のクレーンケ（Ｋｒｏｈｎｋｅ）の方法によって１．６−ジ（ｐ−メトキシフェニル）ヘキサ−１，５−ジエン−３，４−ジオンから得られる。

化合物１主は、クロロホルムのような溶媒中で化合物上ｌをｍ−クロロ過安息香酸と反応させることによって得られる。

誘導体土工はその化合物１主の無水酢酸懸濁液を還流させることによってつくられる。　　　゛化合物１土の溶液を、ヒドロハリツク酸−酢酸溶液と共に還流すると、化合物度が生成される。ここでＲ８はＨまたはＣＨ３゜基Ｒ２の少なくとも１つは水素である。

構造式■の化合物は発明の化合物を生成するための重要な中間体であり、発明のもう一つの目的となる。

安定な希土類クリブテートである本発明による化合物は、水及び二、三の有機溶媒、例えば、メタノールまたはＤＭＳＯに以下、本発明における例証的実施例について詳細に述べる。

り１プーート構造式ｎ１Ｒ−ＣＨ，；Ｙ＝ＣＨｚ　ＣＨＩ　　；Ｚ−ＮＨ２ｉＬ二旦旦ユ乏ヱ（化合物１２）クレーンケの方法〔“合成”（１９７６）　）によってつくられた１゜６−ジ（ｐ−メトキシフェニル）ヘキサ−１，５−ジエン−３，４−ジオン（３，０７ｇ　、　９．５ｍｍｏｌ）と、等量のピリジンと１−クロロアセトンとの混合によって得られた１、１−ピリジニオプロパン−２−１塩化物（３，２７ｇ　、　１９．１＋Ｉｌａ＋ｏｌ）と、ＣＨ３０Ｈ９５，５中酢酸アンモニウム（１９ｇ）とから成る混合物を窒素下で３８時間還流させる。

反応混合物が室温にまで冷めた後、生成したクリーム色の沈澱を濾別し、ＣＨｓ　ＯＨで洗う、その粗生成物を、それ以上精製することなく用いる。それは、ＣＨｚＣ１ｚ／ヘキサンから結晶化し得るものである。

収率　ニア０％ＴＬＣ＋Ｒｆ−０，５（シリカ、　　ＣＨｚ　Ｃｉ！ｚ　／　ＣＲ３０Ｈ。

ＭＳ　　：　　３９６（Ｍ’　）、３８１（Ｍ”　−ＣＨ３）、３６５（Ｍ”− ２ＣＨ，）　、　　３５３　（Ｍ”　−ＣＨ３−Ｃｏ）　、　３３８（Ｍ”　− ２ＣＨｓ−Ｃｏ）、　　１９８　（Ｍ”　／２）Ｂ−”−ジ　Ｎ−オキシ゛　− ６６°−ジ　　ルー４４゛−ジＣＨＣ／！３　３６０ｄ中ｌ−クロロ過安息香酸（６ｇ、　３４．８ｏ＋ｍｏｆ）溶液を、０°ＣでＣＨＣｌ　３　８００ｄ中上、７　（３，４５ｇ、　８゜７＋＊ｍｏｊ２）溶液に滴下する。混合物を一晩室温で攪拌する。その後これをｐＨがアルカリ性になるまでＮ　ａ　ＨＣＯ３飽和溶液で洗う。有機相を分離し、濃縮する。ヘキサン添加により化合物の沈澱がおこる。沈澱を濾別し、ＣＨ２Ｃｌ□／ＣＨ３０Ｈ混合物（９０／１０）に再溶解し、２Ｎ水酸化ナトリウム溶液で洗う、化合物１主を含む有機相を濾別し、溶媒を溜去する。別の操作で沈澱の結果生成する濾液も２Ｎ水酸化ナトリウム溶液で洗い、濃縮し、アルミナカラム上でクロマトトゲラフイーを行う、溶出液としてＣＨ，Ｃｆ□を用いる。

収率　：８０％　　　　　　　Ｍ、ｐ、＞２５０℃ＴＬＣ：Ｒｆ−０．５　　（アルミナ、ＣＨ，（ｌ□／ＣＨ，ＯＨ。

ＭＳ　　：　　４２９（ＭＨ”　）、　　４１１（Ｍ”−Ｈ，Ｏ）無水酢酸１８ｍ１中土３　（１，２１ｇ、　２．８２　ｍｍｏｊり懸濁液を１時間３０分還流する。得られた溶液を濃縮する。Ｈ，０５ｄとＣＨＩ　Ｃ１ｚ　２０ｊｄをこのペースト状残留物に加え、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液でメジウムを塩基性にする。

有機相を濾別し、水相を３０Ｊｄｌ　ＣＨｚＣ１！ｚで２回抽出する。生成した有機相をＮａ、Ｓｏ、上で乾燥し、溶媒を溜去する。粗生成物をアルミナ力うム上でクロマトグラフィーにかける。溶出液としてＣＨＩＣ／！□を用いる。

収率　：９０％　　　　　　　Ｍ、　　ｐ、　＝１４０−１４１°ＣＴＬＣ：Ｒｆ＝０．９　（アルミナ、ｃＨｚ　ｃｚｚ　／ＣＨ３０Ｈ。

ＭＳ　　：　　５１３（ＭＨ”　）、　　４６９（Ｍ”　−Ｃ（０）ＣＨ３）。

４５３（Ｍ”　　　ＣＨ３ＣＯ０Ｈ）、　　２５６（Ｍ”／２）Ｄ−ｕ−ジブロモ　　ルー　９−ジ　　−メ　キシフェニル）−２゛−ビビ１ジン（化合物９ａ　：Ｒ１＝ＣＨ３）６６゛−ジブロモメチル−４−−メトキシフェニル−４′− −ヒドロキシフェニル−２２′−ビピ１ジン（化合１）Ｊ９ｂ：基Ｒ２の一つはＨで、他はＣＨ，である）３３％　ＨＢｒ／ＡｃＯＨ５−中土工（０，３１ｇ、　０．６０ｍｍｏｆ）溶液を１２〜１３時間還流する。その溶液にＨ，０２０ｄとＣＨＣｌ５　６０ｍ１ｌを室温で加える。その混合物をｐＨが中性になるまでＮａＨＣＯ３飽和溶液で洗う、有機相を濾別し、水相をＣＨｚ　Ｃ（ｌｘ　２０Ｉｎｌで２回抽出する。生成した有機相から溶媒を溜去し、残留別をアルミナカラム上で、溶出液とＣ，ＣＨ，Ｃ１，及びその後ＣＨ，Ｃ／！□／ＣＨ３０Ｈ（９５１５）を用いてクロマトグラフィーにかける。

化合物９　ａ　：　Ｒｔ　＝ＣＨｘ収率　：１６％分解　：　２１０−２１５°ＣＴＬＣ：　Ｒｆ＞０．９　（７／１．ミナ、ＣＨ，Ｃ１，／ＣＨ，ＯＨ。

ＭＳ　　　：　　５５６．　５５５．　５５３　　（ＭＨ”　　）、　　５５６．　５５４．　５５２（Ｍｌ。

４７５　、　４７３　　（Ｍ”−Ｂｒ）、３９４　　（Ｍ”　　−２Ｂｒ）化合物９ｂ：基Ｒ２の一つはＨである。

収率　：３５％ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．４　（アルミナ、ＣＨ，Ｃ１□／ＣＨ２０Ｈ。

ＭＳ　　：　５４２．５４０．５３８　　（Ｍ”　）、　　４６１．４５９　　（Ｍ”　−Ｂｒ）、３８０　　（Ｍ”　−２８ｒ）Ｅ　−２２（−０ＣＨ−ＯＨｄｉＰｈｂ　　　　の　　１ウムー久Ｊじ一運二」 −（化合物１０）無水ＣＨ３ＣＮ　　６００　ｄ中（２２）巨大環（０，２６２ｇ、　　１　ｍ＋ｍｏｆ）及びＮａｔ　ＣＯ３（１，０５ｇ、　　１０　ｍｍｏｆ）混合物を窒素下で３０分間還流する。それから無水ＣＨ：＋　ＣＮ　　４５０　ｄ中化合物９ｂ　（０，５４ｇ、　　１　＋ｍｍｏｊ２）　Ｑ濁液を加える。混合物を窒素下で２０時間還流する。得られた溶液を熱いうちに濾別し、溶媒を溜去する。粗生成物をアルミナ上で溶出液としてＣＨ，Ｃｆ□／ＣＨ，ＯＨ（９５１５）を用いてクロマトグラフィーにかける。

収率　：６０−６５％ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．６　　（アルミナ、ｃＨｚ　Ｃｆ、／ＣＨ，ＯＨ。

ＭＳ　　：　　６６３（Ｍ’　）、　　６４０（Ｍ”−Ｎａ）、　６２５　　（Ｍ”　−Ｎａ　　ＣＨ３）、６０９　　（Ｍ９　Ｎａ　　０ＣＨｓ　）。

５９５　　（Ｍ’″−Ｎａ　　０ＣＨｘ　　０Ｈ）Ｆ−−−ＣＨＣＮ　ｄｉＰｈｂのマ　ム　Ｉ　−一　（化合物１１ａ）；Ｚ＝ＣＮ；Ｙ＝ＣＨ，ｉＲりＣＨｆｆ最小量のＣＨ，ＣＮに化合物上皇のナトリウムクリブテート（０，０４２ｇ、　　０．０６６　ｍｍｏｆ）を溶かした溶液に、窒素下で過剰のＮａＨ（粉末状）を加える。混合物を窒素下で１時間還流する。その溶液を室温まで冷し、ブロモアセトニトリル（１，２当量）を加える。混合物を窒素下で室温で一晩攪拌する。Ｈｔ０２０ｄ及びＣＨｔ　Ｃ１ｚ　　１０−を加える。メジウムをＮａ　ＨＣＯ３飽和溶液で中和する。有機相を濾別し、水相をＣＨ，ＣＬ２０−で２回抽出する。生成した有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾かし、溶媒を溜去する。粗生成物をアルミナカラム上で、溶出液としてＣＨ，Ｃｊ！ｚ　／ＣＨ３０Ｈ（９６／４）を用いてクロマトグラフィーにかける。

収率　ニア５％ＴＬＣ：Ｒｆ−０，５（青紫色のスポット）、アルミナ、ＣＨｚＣｊｌ！、　／ＣＨｓ　ＯＨ，９２，５／７．５　）ＭＳ　　：　　７０２（Ｍ”　）、　　６７９（Ｍ”−Ｎａ）、　６６３　　（Ｍ”　−Ｎａ　　ＨＣＨｓ）、６５４　　（ＭＨ”　　Ｎａ　　ＣＮ）。

６４０　　（ＭＨ”　　Ｎａ　　ＣＨｚ　ＣＮ）Ｇ−−ＯＣＨ−ＯＣＨリ辻、ｙＨｄｉＰｈｂ辺」二五ＩＬムクーＬ１主二上（化合物１１　ｂ　；　Ｚ＝ＮＨ，；Ｙ＝　ＣＨｔ　　　ＣＨｚ　、　（ｓｔｃ）；　Ｒ＝ＣＨｘ　）Ｂｔ　Ｈ６２ｄ　（ＴｈＦ中ＬＭ）と、その他にＴＨＦ　　５ｄとを８ｄ無水ＴＨＦ中上上ａ　（０，０７ｇ、　０．１ｍｍｏＡ）懸濁液に加える。混合物を室温で一晩攪拌する。ＣＨ，ＯＨ１０ｄを加え、混合物を２０乃至３０分間攪拌する。溶媒を溜去する。Ｈ２０／ｆｉＨ（ｌ　　混液（１：１）２０−をこの残留物に加える。

黄色法Ｒ物とガス発生が認められる。徐々に溶解がおこる。溶媒を溜去し、得られた残留物をＮａＯＨ水溶液（６Ｎ）で処理する。アミンｍがＣＨｔ　Ｃ／！、　　　２５ｄで抽出される。収量は定量的である。化合物の生成は、’Ｈ−ＮＭＲによって証明Ｌ　ｎ　Ｃ１２ｚ　、　ｘ　Ｈｚ　Ｏ（０，１ｍｍｏＩ！、）を２５ｍＩ　ＣＨ３０Ｈに溶解し、前に得たナトリウムクリブチ−）　（０，０６ＩｎＩＩｏｊ２）をＣＨＣｊ！ｓ　　４−８ｍ　（最小量）に溶かした溶液を加える。混合物を窒素気流下で還流する（使用したナトリウムクリプテートによって、６時間乃至４日間）、ナトリウムクリブテートの消失後ＴＬＣを行う（アルミナ、ＣＨ２ＣＬ　／ＣＨ，ＯＨ，９０／１０）。反応が完了したとき、もし必要ならば反応混合物を濾過し、溶媒を溜去する。残留別を１５−２０ａｔｆ！　　ＣＨ，ＯＨに再溶解し、混濁が存続するまでエーテルを加える（５−乃至２５ −３０ｄ）。生成した希土類クリプテートは、そのクリブテートの性質によって非常に速く、あるいは、数時間後に結晶化または沈澱する。クリプテートの生成は’Ｈ−ＮＭＲ及びＵＶ／可視部スペクトロスコピーによって証明される。

この方法は構造式上上のユーロビウムクリブテート及びチルビラムクリブテートを夫々与える。これらは次の分光学的特性を有する；ユーロピウムク１ブー−：ＵＶ／可視、ＣＨ３０Ｈ中２８０ｎｍマキシマムｉ　２９２ｎｍショルダー、　３２０ｎｍマキシマムールビウムク１ブーート　：ＵＶ／可視、Ｈ２０中２８２ｎｍ　　；３１０ｎｍ　ショルダー裏宛五−１ｂ　　、ｂ　　　−ＯＣＨ−ＯＣＨＣＨＮＨｄｉＰｈｂ）　　の　　　りＩブーートＲ＝ＣＨ＊　　；Ｙ＝　　ＣＨｔ　　ＣＨｚ　　　；Ｚ＝ＮＨｚ　　；Ｒ’ 　＝１ウムク１ブーー　（化合物１０）無水ＣＨ，ＣＮ　４８０ｄ中のとスービピリジン巨大環（０，４８ｇ　。

１、’２１　ａａｍｏｌ　）とＮａｇ　Ｃｏ３（１，１６ｇ、　　１１　ｏ＋ｎ＋ｏｊ２）との混合物を窒素下で３０分間還流する。予め製造した６、６゛−ジブロモメチル−４−ｐ−メトキシフェニル−４“−Ｐ−ヒドロキシフェニル−２，２“−ビピリジン（実施例１．Ｄ部参照）　　（０，６５ｇ。

１．２０　ｍｍｏｌ、　）をＣＨ，ＣＮ　３４０ｄに懸濁させた液を加える。生成した溶液を窒素下で２４時間還流させる。室温に冷した後、反応混合物を濾過し、溶媒を溜去する。粗生成物をアルミナカラム上で溶出液としてＣＨ，Ｃｆｔ　／ＣＨ，ＯＨ（９８／２）を用いてクロマトグラフィーにかげる。

収率　：４５％ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．４　　（アルミナ、　　ＣＨ２Ｃ１ｚ　／　ＣＨ３０Ｈ。

紫色スポット（２５４ｎｏ＋　）　、緑色スポット（３６６ｎｍ　）ＭＳ　　：　ａ）ＣＩ　　（ＮＨ３）：　　７９５（Ｍ”　）、　　７７３（ＭＨ’−Ｎａ）ｂ）ＦＡＢ”　　（チオグリセロール）　　：８７５（ＭＢ　ｒ”　）＋７９５　　（Ｍ”　）得られたクリプテートを、実施例ＩＨに記載の方法によってチルビラムクリプテートに転化した。このクリプテートは下記の分光学的特性を有する。

・ＵＶ／可視、ＨｚＯ中、２４４ｎｍ　　（マキシマム）　　；３０３ｎｍ　　（マキシマム）・ＵＶ／可視、ＣＨ，ＯＨ中、２４４ｎｏ＋　　（マキシマム）　　；３０１ｎｍ　　（マキシマム）　　；３１８ｎｍ　　（シＮａＯＨ−ＣＨ，ＯＨ溶液（２ｄ中１．５当量）を二のナトリウムクリプテート（０，２１ｇ　、　０．２４　ｍｔａｏｌ　）をＣＨ，Ｃ／！、１２ｉ及びＣＨｚＯＨ１２Ｉ１１に熔かした溶液に加える。混合物を窒素下で１時間３０分還流させる。室温に冷やした後、溶媒を溜去する；反応中に生成した水を、トルエンとの共滑蒸留によって除去する。この方法で得られた生成物を滑り羽根型回転ポンプで一晩乾燥する。得られた明橙化合物をＴＨＦ　　３５ｄに溶解する（溶液は混濁する）。ブロモアセトニトリル（３０μｆ、１．８当ｉＦ）を加えると直ちに溶液は澄明になる。−晩。

室温、窒素下で攪拌しながら反応を続行させる。Ｈ１０２０−とＣＨ，Ｃ１□約１０ｄを加える。メジウムをＮａＨＣＯコ飽和溶液で中和する。有機相を分離し、水相をＣＨ，ＣＬ　２０−で２回抽出する。生成した有機相をＮａ、Ｓｏ、上で乾燥し、溶媒を溜去する。粗生成物をアルミナカラム上でクロマトグラフィーにかける。溶出液としてＣＨｚ　Ｃ１ｚ　／ＣＨ３０Ｈ（９５１５）を用いる。

収率　；９２％ＭＳ　　：ＦＡＢ”　　：　　８３４（Ｍ”　）得られたナトリウムクリプテートを、実施例】に記載された方法によって対応するチルビラムクリブテートに転化した。このクリプテートは下記の分光学的特性を有する。

−ＵＶ／可視、ＣＨｚ　ＯＨ中ＨｔＯ中：　３００ｎａ＋　　（マキシマム）；　３１４ｎｍ　　（シ、／Ｌ／ダー）ｃ−ｂｂ、−ｏ工」ニー肛」ど−す−ユニり及辻ＬｄｉＰｈｂ　　　　　　の　　　　　り’Ｊｌｊ＝二上−上起上−上記化合物クリブテートは実施例１．Ｇの部に記載された方法によって得られる。

車止■−１ｍλ二ｌＵユ」カニニジ　アミ′エ　レンー　ミンーＬＱ三二Ｓピウムク丁ブー −の！（方法Ａ）構造式■の化合物：　Ｚ＝ＮＨ２；Ｙ＝−ＣＨ２−ＣＨｌ　− ；土：」野ΣＬ腹構造式Ｉ　（ｓｉｃ）であられされ、Ｒ，＝ＣＨ３である化合物ビス−ビピリジン巨大環０．３００ｇ　（７，６１，ＩＯ−’ｍｏｆ）とＮ　ａ　ｚＣｏｘ　　１．１０ｇ　（１０，４，１０”３ｍｏｌ）との混合物をＣＨ，ＣＮ４５０−中で３０分間還流させる。６，６゛−ジブロモメチル−（４゜４゛−ｐ−ジメトキシカルボニル）−２，２”−ビピリジン（ｓｉｃ）（化合物１　；　Ｘ　＝　Ｂ　ｒ　）　０．３５０　ｇ　（７，６４，１０−’１ｌｏｌ”）をＣＨ。

ＯＮ３７５ｍに溶かした溶液を、よく攪拌しながら６０分間に亙って添加した。

反応混合物を還流下でさらに１８時間撹拌する。

その後室温まで冷し、濾過する。真空下１回転医発器上で溶媒を除去する。得られた固体をＣＨＣｆ！、に溶解し、アルミナカラム（最上部に少量のシリカを含む）上で溶出液としてＣＨＣｆ３　／ＣＨｚ　ＯＨ（９Ｂ／２）を用いてクロマトグラフィーを行う、真空下で溶媒を除去すると期待の錯体が０．２３０ｇ　（３８％）得られる。これは下記の物理科学的特性を有する。

Ｍ、Ｐ、＞２４０°Ｃ ’ＨＮＭＲ（ＣＤ３　００）　　：３．８９　　（Ｓ、　　８Ｈ，ＣＨｚ　　　　ｂｐｙ）；３゜９８　（Ｓ、　　４Ｈ，ＣＨｚ　　ｂｐｙ　ｄｉＥ）　　；４．０３　（Ｓ、　　６Ｈ，Ｃ００ＣＨａ　　）　　；７．４２　（ｄ、　　Ｊ＝７．４　　Ｈｚ、　　４Ｈｂｐｙ　　）　　；７．９２（ｔ−Ｊ＝１．４　　Ｈｚ、　　４Ｈ−ｂｐｙ　）　　；７．９６　（ｄ、　　Ｊ　−１，２Ｈｚ。

２Ｈ−ｂｐｙ　ｄｉＥ）　　；８．１０　（ｄ、　　Ｊ＝７．４　　Ｈｚ、　　４Ｈ−ｂｐｙ　）　　；８．６９　（ｄ、　Ｊ＝１．２　Ｈｚ、　　２Ｈ−ｂｐｙ　ｄｉＥ）　　（ｄｔＥ−ジエステル）１３ｃｍＮＭＲ（ＣＤＣＩ！３　）　；５２．９．５９．５．１１９．７．１２０．４．１２３．４．１２４．１．１３８．２．１３９．７．１５５．２．１５５．７．１５８．３．１６０．４．１６４．９Ｃ４１１Ｈ２４ＮＩ　０４　Ｎ　ａ　Ｂ　ｒ、　４　Ｈｚ　Ｏ（８６５，７１）理論値（％）　　：　Ｃ５５，４９ｉ　Ｈ４，８９；　Ｎ　１２．９４分析値（％）　　：　Ｃ５５，４４；　Ｈ４，３３；　Ｎ　１３．１０Ｂ−量　Ｉ　　− 一　の　（）ｉシス上で得られたクリブテート（０，１００ｇ、　１．２６．１０−’ｍｏｆ　）を、予めＫＯＨ上で蒸留して９０°Ｃに加熱したエチレンジアミン４ｄに少しずつ加えることによって、クリプテートのアミツリシスを行った。得られた反応混合物を１時間攪拌し、それから室温にまで冷やした。過剰のエチレンジアミンを真空下で除去し、油を得る。これをＣＨＣＬ　／ＣＨ：Ｉ　ＯＨ混液（２／１）　２ｉＲ１中にとる。これはこれで真空下で除去される。精製を５回繰り返すと、期待の錯体が収率８９％で得られる。

〔（ビス−ｂｐｙ）　　（ｂｐｙ−ジー（アミドエチレンアミン）〕のユーロビウムクリプテートを、実施例１．Ｈの部に記載された方法によって得た；それは下記の分光学的特性をもっている。

・ＵＶ／可視、Ｈ２ＯＯ２４０ｎ　　；　３０３ｎｍ　　（７キシマム）実ｍ−± ビス−ｂ　　　ｂ　−ジ　　ミ゛エチレン　ミン構造式Ｉの化合物：　Ｚ＝ＮＨｚ　　；　Ｙ＝　　ＣＨｘ　　ＣＨｚ　　　ｉり１ブーートの先行実施例への部で得られたナトリウムクリプテート（０，１０ａ＋ｎｏ　１　）をＣＨＣｊ！３　８Ｊｄに溶解し、ＣＨ３０Ｈ４０ｍ中のＥｕＣ１ｘ　、６Ｈｚ　Ｏ溶液（０，１５ｍｍｏｆ　）に加える。ナトリウムクリプテートが消失するまで、その溶液を還流温度で窒素下で攪拌する（ＴＬＣ，酸化アルミニウム、溶出液：ＣＨ２Ｃｌ、／ＣＨ，ＯＨ（９０／１０））、反応時間は４８時間の桁である０反応混合物を室温にまで冷し、混濁があれば濾過する。

溶媒を回転蒸発器上で除去し、残渣をＣＨ，ＯＨ２０−２５−中に再溶解する。

エチルエーテルを一滴づつ加え、非常にわづかな混濁が持続するまで加える。このやり方によりユーロビウムクリプテートが室温で結晶する。溶媒をピペットで除去し、クリブテートを乾燥する。収率：約４０％（第一結晶化）。濾液を濃縮して乾燥させ、この操作を繰り返す。

得られた生成物は次の物理化学的特性を有する。

’Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２０．　ｒｅｆ　＝ｔ−ＢｕＯＨ）　　：１０．５１　　（２Ｈ。

Ｓ、　　ＣＨ（ｂｐｙ　ｄｉＥ）　、　８．６６　（２Ｈ，Ｓ、　　ＣＨ−ｂｐｙ　ｄｉＥ）　　ｉ８．０６　（４Ｈ，ｔ、　　ＣＨ−ｂｐｙ　）　；７．０８　（４Ｈ，ｄ、　　ＣＨ−ｂｐｙ）。

６．７４　（４Ｈ，ｄ、　　ＣＨｂｐｙ　）　、　４．６６　（６Ｈ，Ｓ、　０ＣＨ３）。

０．９　　（８Ｈ，Ｓ、　　ＣＨ，−ｂｐｙ）、　０．７８　（４Ｈ，Ｓ、　　ＣＨ，−ｂｐｙｄｉＥ）Ｃ，、Ｈ３，Ｎ、Ｏ，ＥｕＣｊ！ｚ　ＮａＣｊ！、９／２Ｈ２Ｏ（１０８８，５８）理論値％：　Ｃ４４，１３；　Ｈ３，９８；　　Ｎ　１０．２９分析イ直％　：　　Ｃ４３，９３；　　Ｈ３，７９、Ｎ　　９．８８Ｃ４４，０６；　Ｈ３，７０、Ｎ　１０．０３Ｂ−ユーロピウム　１ブー−のアミツリシス上で得られたユーロピウムクリブテート（４０■）を予めＫＯＨ上で蒸留したエチレンジアミン４０ｄに少しつづ加える。澄明な溶液を窒素下、室温で３時間撹拌する。回転蒸発器上で真空下、エチレンジアミンを除去する。残留側を数ミリリットルのＣＨｚ　Ｃ１ｚ　／ＭｅＯＨ（２／１）にとり、溶媒を真空下で除去する。この操作を５回繰り返すと完全な固体化合物が得られる。得られたクリブテートを滑り羽根型回転ポンプによる真空下で２４時間乾燥する。

Ｍ、　　ｐ、　−１６８−１７０°にのユロービウムクリブテートは先行実施例で得られるユーロビウムクリプテートと同じ特性を有する。従って、これら二実施例は、希土類イオンによるアルカリ金属クリプテートの錯化が置換前か置換後に行われることを示している。

皇施■−工（２２）　ｂ　　　　ジ　アミ　エ　レンアミン　　のユーロピウム”たは−ルビウムク１　°−一　のＺ　＝　Ｎ　Ｈ２；　Ｙ　＝　　ＣＨｚ　　ＣＨｚ−Ａ−２２）ｂ　　　ジェスール　の　　ｉラム　１ブー−の炭（２２）巨大環０．１１４　ｇ　（４，３７，１０”ｍｏｌ）とＮａｇ　ＣＯ３０，４６０ｇ　（４，３４，１０−”　　ｍｏｌ　）との混合物をＣＨ３ＣＮ　１３０１１ｆ！に加えて３０分間還流する。　ＣＨ３ＣＮ　２２０１１１１！中に化合物１０．２００ｇ　（４，３７，１０−’Ｉｌｏ　ｊ２　）を溶かした溶液を強く攪拌しながら６０分間に亙って加える０反応混合物を還流下でさらに１５時間攪拌する０回転蒸発器上で真空下で溶媒を除去し、その後室温にまで冷して濾過する。回転蒸発器上で真空下で溶媒を除去する。

得られた固体をＣＨ２Ｃ１，□に溶解し、アルミナカラム（最上部に少量のシリカを含む）上でクロマトグラフィーを行うことによって精製する。先ず最初に不純物をｃＨｇ　ｃｘｚで溶出する。次に、生成した巨大環をＣＨ，ＣＬ　／ＣＨ，ＯＨ（９８／２）で溶出する。溶媒を真空下で除去すると巨大環０．１３５ｇ（６１％）が得られる。

Ｂ−ｂ　　ジェスール　のユーロピウム−たは−ルビウムク１ブー−の（（２２）　ｂｐ　Ｘ　　ジエステル〕のユーロピウム及びチルビラムクリブテートを実施例ＩＨに記載の方法によって得た。それらは次の分光学的特性を有する。

−ユーロピウムクリブテート：Ｕ■／可視、ＣＨ，ＯＨ中２４２ｎｍ及び３２４ｎｍ　（マキシマム） −テルビウムクリブテート：ＩＪＶ／可視、ＣＨ，ＯＨ中２４２ｎｍ及び３２５ｎ＋＋＋　（マキシマム）ｃ−２２ｂ　　ジ　アミドエチレンジアミン　　のユーロビウムク１ブーートの上で得られたユーロビウムクリブテート（０，１００ｇ、　１．４３．１０−’ ｍｏｆ）を予めＫＯＨ上で蒸留して９０°Ｃに加熱したエチレンジアミン５　ｍｌに少しづつ加える０反応混合物を１時間撹拌し、それから室温にまでさます。

過剰のエチレンジアミンを真空下で除去すると油が得られる。これをＣＨＣｊ２ｓ　２ｄ中にとり後者はこれはこれで真空下で除去される。この精製を３回繰り返すとユーロビウムクリプテート９３■（９０％）が得られる。このクリブテートは下記の分光学的特性を示す。

・ＵＶ／可視２　Ｈ２Ｃ中、２４０及び３１５ｎ＋ｏ　　（マキシマム）Ｂの部で得られたチルビラムクリプテートを同し方法でアミツリシスにかける。

尖施五一旦ｂ　　ジカルボン　キシ　　　の　ト１ウムク１ブー−の　　　　　　　　Ｂはビス−ビピリジン巨大環である。

Ａ−°−ジカルポメ　キシ−６”−ジアチ゛メチル−”−ビピｉジンのム４．４°−ジカルボメトキシー６，６゛−ジブロモメチル−２，２°−ビピリジン（０，５０ｇ、　１．１０．１０−３ｍｏｆｆ）とＮａＮ３　　（１−Ｏｇ。

１５．４．１０−３ｍｏｊ２　）との混合物を、ＴＨＦ　１５ｄ中で３６時間還流させる。この２反、８混合物を室温に先ず冷し、セライト上で濾過し、濃縮乾燥する。残留側をＣＨＣ／！３に溶解し、シリカカラム上で、溶出液としてＣＨＣｆ３を用いてクロマトグラフィーにかける。

溶媒を蒸発すると期待の化合物０．４０　ｇ　（９５％）が得られる。これは下記の物理化学的性質を有する。

Ｍ、　　Ｐ、　＝１６８−１７０℃ ’　ＨＮＭＲＣＣＤＣｌ５　）；　　４．０２　　（Ｓ、６Ｈ，Ｃ００ＣＨｓ）；４．６３　（Ｓ、４Ｈ，ＣＨｚ−Ｈ，）；　　７．９４　　（ｄ、Ｊ＝１．３　Ｈｚ。

２Ｈ）ｉ　　８．９６　　（ｄ、Ｊ＝　１．３Ｈｚ、２Ｈ）Ｉ３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｆｚ　　）　　ｉ　　５２．７　、　５５．１；　　１２０．０；　　１２１．５；　　１３９．７；　　１５６．０．　１５６．８　　；　　１６５．３゜ＩＲ（ＫＢｒ）　　；１７１５ｃｉ−’　（エステル）　、　２０９０Ｃ！１１す（アジド）ＭＳ　：　　３８３　（（ＭＨ）　　”　　）Ｃ，Ｈ，、Ｎ、　　 ○、　　（３８２，３４）理論値％：　Ｃ５０，２７；　Ｈ３，６９ｉ　　Ｎ　２９．３１分析イ直％　：　　Ｃ５０，３７ｉ　　Ｈ３，５１；　　　Ｎ　　２７．６９Ｂ−゛−ジカルボメ　キシ−６゛−ジアミ　メ　ルー　゛一旦旦ユ図ｚ夏金底（化合物５）Ａによって得られた化合物（０，１２６ｇ、　３．３０．１０−’ｍｏｆ）と１０％　Ｐｄ／Ｃ１２，６■との混合物をＣＨｚ　Ｃｊ！　ｔ　／　ＣＨｚＯＨ（２／１）３８ＩＲ１中で室温、水素気流下で１２時間攪拌する。

反応混合物をセライト上で濾過し、溶媒を除去すると期待の化合物が０．１００ｇ　（９２％）得られる。これは精製せずに次の段階に用いられる。

Ｃ−利並エージ力ルボメ　キシ　　の　　！　ム　１　−一企丘底（化合物１）６　（Ｒ’　＝ＯＣＨＨ３；　Ｘ＝Ｂ　ｒ　）　　（０，２８０ｇ、　６．１１．１０−’ａａｏｌ）とＮａ、　Ｃ０３（０，６５ｇ、　６．１３．１０−３１＋ｏｆ）の混合物をＣＨ，ＣＮ　　５００　ｄ中で還流温度に加熱する。ｉ　　０．１００ｇ（３，０３，１０−’ｍｏｌ　）を加えて、反応混合物を還流下でさらに４８時間攪拌する。反応混合物を室温にまで冷し、濾過する。真空下で溶媒を除去する。残留物をＣＨＣｆ、中にとり、アルミナカラム（最上部に少量のシリカを含む）上で溶出液としてＣＨＣＩ！、３　／　Ｍ　ｅ　ＯＨ（９８／　２　）を用いてクロマトグラフィーを行う。溶媒を蒸発すると巨大環１０．１３２ｇ　（４０％）が得られる。　（Ｒ”＝Ｒ’　　＝ＯＣＨｓ　）Ｍ、ｐ、＞２５０°Ｃ ’Ｈ−ＮＭＲＣＣＤＣｌ３　）；　　４．０２　　（Ｓ、１８Ｈ，ＣＯＯＣＨ３）；　　４．０８　　（Ｓ、１２Ｈ，ＣＨＩ）ｉ　　７．９６　　（ｄ、Ｊ＝１゜２　Ｈｚ、６Ｈ）；　　８．４９　　（ｄ、Ｊ＝　１．２Ｈｚ、６Ｈ）夏ユ　Ｃ−ＮＭＲＣＣＤＣｌ３　　）　　；　　５３．２　　、　５９．２；　　１２０．０；　　１２３．８；　　１３９．９；　　１５５．６；　　１５９．９；　　１６４．８ＣａｍＨａｚＮａ　０１２．　Ｎａ　Ｂ　ｒ、　３　Ｈｚ　Ｏ（１０７９，８４）理論値％：　Ｃ５３，３９；　Ｈ４，４８、Ｎ　１０．３８分析値％：　Ｃ５３，４０；　Ｈ４，４０；　　Ｎ　９．７５上で得たクリプテートは、先行実施例に記載された方法によって、エチレンジアミンによるアミツリシスを行うことができる。これは概して、ＣＯ−Ｎ　ＨＣＨｚ　　ＣＨｚ　　Ｎ　Ｈｚ基による一置換りリプテートと、二Ｗ換ないし水置換クリブテートとの混合物を与える。これらの化合物は一般的方法によって分離できる。

実［ビス−ｂ　　ジカルボキシブトキシ　　ｂ　−ジアミ゛エチレンアミン　のユーロビウムク１ブー−の構造式１＝Ｙ＝　　ＣＨ２−ＣＨ２；　Ｚ＝ＮＨ２；はビス−ビピリジン巨大環；　Ｒ’　＝　ｔ　−Ｂ　ｕ　（ｔｅｒｔ−ブチルまたボキシ　　キシ　の　　１　ム　１−一　の構造式ユのナトリウムクリブテート〔Ｒ”−Ｃｏｏ　（ｔ−Ｃ４Ｈｑ　）；　Ｒ”　＝Ｃ０ＯＣＨ３）を、実施例６に記載の方法によって、上記実施例Ｂの部で得られる化合物ｌと、化合物−６（Ｒ ’−Ｃｏｏ　Ｄ−Ｃ，Ｈ−）；Ｘ＝Ｂｒ）とを用いて得た。これは下記の物理科学的特性を有する。

Ｍ、　　ｐ、　＞２２０°Ｃ ’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｆｆｆ　）；　　１．６０　　（Ｓ、３６Ｈ，Ｃ００Ｂｕ ’　）　；　　３．９９　；　４．０２；　４．０６　（３Ｓ、　　１８Ｈ，ＣＨｚ　　ｂｐｙｄｉｃＯＯＭｅ＋ｃＨｚ　　ｂｐｙｄｉｃＯＯＢｕ’＋−ＣＯＯＣＨ３）ニア、８１　（Ｓ、　　４Ｈ，ｂｐｙ　ｄｉｃＯＯＢｕ’　）　；　　７．９５　　（Ｓ、　　２Ｈ。

ｂｐｙ　ｄｉｃＯＯＭｅ）　；　　８．３６　　（Ｓ、　　４Ｈ，ｂｐｙ　ｄｉｃＯＯＢｕ’　）；８．４５　（Ｓ、　　２Ｈ，ｂｐｙ　ｄｉｃＯＯＭｅ）　　 ”Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｆｆｆ　）　　ｉ　　２８．０　　；５３．１；　５９．１　　；　　８３．４　ｉ　　１１９．８；　　１１９．９；　　１２３．４；　　１２３．７；　　１３９．８；　　１４１．７Ｃ，＋Ｈ＆６ＮＩ　Ｏ＋ｚ、　Ｎａ　Ｂ　ｒ、　　３　Ｈ２０（１２４８，１８）理論値％：　Ｃ５７，７３；　Ｈ５，８１；　　Ｎ　８．９８分析値％：　Ｃ５７，９９ｉ　Ｈ５，３１；　　Ｎ　９．０３このナトリウムクリプテートを前述の方法によって対応するユーロピウムクリプテートに転化した。

その後これに対してエチレンジアミンによるアミノ基１換を行った。

他の実施態様においては、上記化合物１を先ず最初にアミツリシスにかけ、次に、生成したナトリウムクリブテートを前述の方法によって対応するユーロビウムクリブテートに転化することができる。

゛　トレーサーとしての　人　の１既述のように本発明の化合物は、生物学的物質を標識化する作用物質としての使用に通している。斯かる使用にあたっては、本発明の化合物を共有結合によって測定または検出すべき生物学的物質と結合せしめる。この結合は、この分野で用いられる一Ｓ的カップリング法、例えば、ＳＭＣＣ／５ＰＤＰまたはカルボジイミド法によって行われる〔ティシュセン（Ｐ、　Ｔｉｊｓｓｅｎ）著“生化学及び分子生物学における実験室的方法−酵素−及び免疫測定法における理論と実際（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ−Ｐｒａｃｔｉｓｅ　ａｎｄ　Ｔｈｅｏｒｙｏｎ　Ｅｎｚｙ＋ｎｅ　−ａｎｄｌＩＩＩｍｕｎｏａｓｓａｙｓ（ｓｉｃ）　）　”　Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、第１版。

１９８５、参照〕。

本発明によるクリブテートは、均質相または不均質相において生物学的物質を測定または検出するためのあらゆる種類の方法、特に、所謂競合または過剰による測定法における蛍光トレーサーとして通している。これらの方法は熟練せる当業者には公知であり、ラントン（Ｌａｎｄｏｎ）（Ａｎｎ、Ｃｌ１ｎ、Ｂｉｏｃｈｅｌｌ、１９８１＋　１８巻２５３ページ）及びソイ−１−（Ｓｏｉｎｉ）　（ＣＩｉｎ、Ｃｈｅｉｉ、　２５巻、３５３ページ。

１９７９）が詳しく説明している。それらは均質相におけるルミネッセンスによる検出及び／又は定量法にも用いられる。これは国際特許出願ＷＯ３７１００９２７号に記載されている。

検出または定量される生物学的物質は、例えば抗体、抗原。

毒素、酵素、蛋白質、ホルモンレセプター、ステロイド、アビジン、ビオチン、ストレプトアビジン、微生物、ハブテン、核ａ、ＤＮＡ及びＲＮ　Ａ断片、脂質、炭水化物などである。このような物質の例は欧州特許出願第１７９０８号の説明に記されており、斯かる記載の一部は本発明についての説明のためここに引用されている。

蛍光トレーサーとしての発明の化合物の利用を下記に５つの実験によって説明する。

試薬５ＰＤＰ及びスルボーＳＭＣＣを下記の実験Ａ、Ｄ及び已に用いた、上記試薬は夫々“Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ビリジルチオ）プロピオネート”及び“スルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１ −カルボキシレート”である。

１止２０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７）にスルホ−３ＭＣＣを１３．１ｍｇ／ｄ溶かし、その溶液５０μ２をこのクリブテートの溶液（同じ緩衝液中１．５に／ｄ）　５００μｌに加える。

混合物を室温で３０分間インキュベートし、ジオルテックス上で５分間攪拌する。溶液を遠沈して沈澱物をとる。

緩衝液Ａ：燐酸塩２０ｍＭ　　ｐＨ７＋１０％ＤＭＦと、緩衝液Ｂ：燐酸塩２０ｍＭ　　ｐ）１７＋１０％ＤＭＦ＋１ｎ＋ｏｌａｒａＣＡとの間に勾配を形成するファーマシアーモノＱ−イオン交換カラムを通過させることによってこれを精製する。

クリブテートは３０７ｔ＋ｎ＋の吸収の測定によって検出される（ε＝２５．ＯＯＯＭ−’ｃｍ−’、　３０７ｎｍ）。

活性化クリプテートはｄｅａｄνｏｌｕｍｅにあられれる。

過剰のスルホ−３ＭＣＣは勾配中に溶出される。

２）扱誂ユ１且−化。

使用したモノクローナル抗体Ｅ１は、オリスーインダストリー社（Ｏｒｉｓ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅ）によって製造されたプロラクチン放射免疫測定キット（“ＥＬＳＡ　ＰＲＯＬ”という名称で知られる）に含まれる抗プロラクチン抗体である。

無水エタノール中３０ｍ１ｌ　　５ＰＤＰ溶液　３０μ！を、１５０１Ｍ　　ＮａＣ１を含む５０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７，１）に抗体Ｅ１を１４．８ｍｇ／− 熔かした溶液１．２　ｄに加える。

混合物を攪拌しながら室温で３０分間インキュベートする。

溶液を、同じ燐酸緩衝液で平衡させたファーマシアＧ２５ゲルガルムを通過させる。（ｔ　−２１０，０００Ｍ−’ｃｍ−’、　２８０ｎＩＩｌ）ｄｅａｄ　ｖｏｌｕＩｌｌｅに）容出するフラクションを回収する。

Ｐ、ＭＨ街液中４００ｒｎＭ　ＤＴＴ　（ジチオスレイトロール（ｓｊｃ）　）溶液６０μｌを加える。

混合物を攪拌下で室温で１５分間インキュベートし、燐酸緩衝液で平衡化しているＧ２５カルムを通過後　ｄｅａｄ　ｖｏｌｕｍｅに出現するフラクションを回収する。

３）ゞ　　　　　　：　　　　１　−一　　〇力・・　１ング２００　ｕｃａｏｌ　／　ｆ！のクリプテート５０μ２を、濃度２．６ｍｇ／ｄＦ８酸緩衝液の活性化抗体６０μβに加える。それにより得られる混合液は、室温のもとに１２時間インキュベートされるとともに、遠心分離処理がなされる。そして、上澄液を５０ｎ＋Ｍ燐酸緩衝液ｐＨ７，４に対して透析する。

裏肢旦：カルボジイミ′による　　−りＴプーートー　人（ＣＯｎ′ｕａｔｅの１）　　のスクシニル１／３　　ＤＭＳＯ２／３　１００ｍＭ硼酸塩、ｐＨ９，中に無水スクシン酸５０■／ｄ含む溶液８３μｌを３回に分けて、融解しつつある水中に浸した、１００＋ＩＩＭ硼酸塩、ｐＨ９，中９．４■／ｊｔｌ！の抗体Ｅ１を含む溶液４４０ μｌに加える。

ｐＨは水酸化ナトリウム溶液で９に保たれる。反応は０℃で３０分間行われる。

２）■ これはＴＳＫ３０００　　ＳＷ　　ゲル濾過カラム上で高圧クロマトグラフィーによって行われる。溶出液は５０ｍＭ燐酸緩衝液、ｐＨ７，４，である。

流速：１ｔｎｌｌ／ｍｉｎスクシニル化抗体は３ｄ回収される。これをｆｉ縮して３７０μ４、１３３５μ ｌと混ぜる。

溶液２：同じ緩衝液中にストホーＮ−ヒドロキシスクシンイミド５０■／ｄ　（２２２，７μβ中１４．７■）溶液３：同じ緩衝液中に実施例３によるクリブテート０．９６■／ｄ下記のものを室温で１時間反応させる。

スクシニル化抗体溶液１７５μ！溶液３４８０μ！溶液１　７２．５μ！溶液２１０μ！５０ｍＭ燐酸緩衝液、　ｐＨ７，４、に対して徹底的に透析を行った後、性成物をアミコン円錐上で濃縮し、結合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）０．８６■／−を得る。

性成物を、ヒト血漿アルブミン（ＩＳＡ）　　１■／ｄを含む緩衝液中で冷凍する。

監果：１旦立り土ｌ還足ＥＬＳＡ−ＰＲＯＬプロラクチン測定用キットの試薬を用いる。

ＥＬＳＡ固体相を含む各チューブに下記のものを加える。

標準　１００μｌ実験ＡまたはＢによって得られたＥ、−クリブテートー結合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を、ＩＳＡ　　１ｍｇ／ＩＩ＋１を含む５０ａ＋Ｍ燐酸緩衝液。

ｐＨ７，４，に溶かした液、３００　μ！。

混液を３７°Ｃで３時間インキュベートする。

固体相をＨ，０３ｄで２回洗う。

ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）　　５　ｍｍｏ　ｌ　／　４２を含む緩衝液４００μ２を加える。

この溶液３００μ２をＡＲＣＵＳ　　ＬＫＢ装置に移し蛍光を測定する。

得られた結果を添付の第１図に示す、この図面では、蛍光強度を縦軸に、プロラクチン量（μＵ／ｄ）を横軸にプロットした。

これらの結果は、発明によるクリプテートが免疫測定法における蛍光トレーサーとして適していることを示している。

下記の実験Ｃは、国際特許出願ＷＯ３７１００９２７による均質法における発明によるクリプテートの利用を説明するものである。

抗プロラクチンーモノクローナル抗体Ｇ２をウッド試薬（Ｗｏｏｄ’ｓ　ｒｅａｇｅｎｔ）で標識化する〔合成（ｓｉｃ）　Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｗ、　６９巻、　３３９−３４９ページ、　（１９７５）に記載〕。

ウッド試薬２．９３■を０．５Ｎ　水酸化ナトリウム溶液４０ｕ１に溶解する。

２００　ｍＭ炭酸緩衝液、　ｐ！（９，３、４００ｕ　４１！を加える。

１００　ｍＭ炭酸緩衝液、　ｐＨ９，３，中　抗体Ｇ２溶液（１０ｍｇ／ｄ）　２００μｌをこの溶液に加え、混合物を３０°Ｃで１７時間インキュベートする。

これをファーマシアＰＤＩＯカラムで、１００　ｍＭ炭酸緩衝液。

ＰＨ９，３、で精製する。

ｄｅａｄ　ｖｏｌｕｍｅに溶出するフラクションを集める。この結合体（ｃｏｎｊ　ｕｇａ　ｔｅ）は、次のような３２０及び２８ＯｎＩｌにおける光学密度比によって特徴づけられる。

その濃度は、抗体の９０％が回収されるという仮定に基づいて推定される。係合体は部分に分けられ、−２０℃で保存される。

Ｂ−プロラクチン２１　ゝ　　ｉＡＯ，１５，３０，６０，１５０ｎｇ／−のプロラクチン標準を用いる。測定はＥＦＬＡＢ１２−ウエルーストリップス（カタログ番号９６０２１０？）で行われる。

次のものを順次加える。

標準　１００μｉウッドＧ：抗体（５μｆ／ｄ）１００μｌ実験Ａの結合体Ｅ　＋　（０，３７５ｔｔ　１　／　！！１ＩＨＯＯｕ　１　（ｓｉｃ）混合物を室温で１５分間インキュベートする。

結果をＡＲＣＵＳ装置で読む。

標準値の関数としてのΔＦ値をプロットすることによって標準曲線が引かれる。

（第２図）（曲線Ｂ）である。

Ｅ　Ｌ　Ｓ　Ａ　−Ｐ　ＲＬ　（ｓｉｃ）キット（オリス社）を用い、次のものをＥＬＳＡチューブに加える。

放射性トレーサー　　３００μ！標準　　　　　　　１００μｌ攪拌後、混合物を３７°Ｃで３時間インキュベートする。

チューブを水で２回洗う。

チューブを計数管で計数する。

各標準でＢ／Ｔ値をプロットする（第２図）、ここで、Ｂは、標準で計数された放射能Ｔは、放射性トレーサー３００μ！で計数された放射能である。

得られた結果（第２図参照）は、本発明によるクリプテートが国際特許圧ｅＷＯ８７／１００９２７による均質法におけるトレーサーとして適していることを示す０本発明によるクリプテートによって、この均質法は、はるかにより長いインキュベーション時間、洗浄段階及び放射性元素の取り扱いを必要とする放射性元素使用の測定法に比較的特に有利である。

裏肢旦：ＳＭＣＣ５ＰＤＰによるＤＮＡ−り１ブー−−立生立生底１／　ＤＮＡ　　　ＤＮＡ−ＮＨノカルビオケム（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）が推薦する方法を用いて、変形ヌクレオチット、５−アミノ（１２）　ｄ　ＵＴ　Ｐ　（カルビオケムから市販されている製品）をニック−トランスレーション（ｎｉｃｋｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ　）によって、与えられているＤＮＡに挿入する。

アミン化ＤＮＡはその後、“セントリコン（Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ　）　”フィルター（アミコン社から市販）上で１０ａ＋Ｍ燐酸緩衝液、ｐＨ７，４，で連続３回洗浄される。

２／　　ＤＮＡ−ＮＨ５ＰＤＰ　　の力・・ブ１ン０．１Ｍ硼酸緩衝液、ｐＨ９，０中にＤＮＡ−ＮＨｚ　９μｓ　　（Ｕｖによる測定）を含む溶Ｈ，５５ｕｌ＠、２０１Ｍ　　５ＰＤＰ？８液５μ！に加える０反応は４５°Ｃで４時間続く。“セントリコン”上で５０ｍＭ燐酸緩衝液、ｐＨ７，０，で３回洗うことによって未反応５ＰＤＰを除去する。

ＤＮＡ−３ＰＤＰ　　６μｇ（光学密度により推定）を含む５０　ａ＋Ｍ燐酸緩衝液、　　Ｐ　Ｈ７，０，９０、！／　ｆｆｉを同じ緩衝液中の１０ｍＭＤＴＴ溶液１０μ２と結合（ｃｏｕｐｌｉｎｇ　）させる直前に処理する。

脱防御は室温で２０分間続く、その後の結合（ｃｏｕｐｌｉｎｇ）を阻害するＤＴＴは、“セントリコン”上で前記の燐酸緩衝液で３回洗浄することによって除去される。ＤＮＡ−５Ｈ溶液を“セントリコン”上で最終審１ｉ９０ｔ！ｆになるまで濃縮する。

ＤＮＡ−３Ｈ溶液９０μ２を、実験Ａ、第１部に記載のようにＳＭＣＣで活性化した実施例３のユーロピウムクリプテートを、１０％ＤＭＦを含む２０ｍＭｆｉ酸緩衝液、ｐＨ７，０，に溶かした（１４ｍＭ）溶液５０μ！と接触させる。温度３０°Ｃのもとで１時間に亙ってカップリング状態となる。ＤＮＡ−クリプテート結合体はエタノールで連続的に３回沈澱させることによって精製される。結合程度は２６０ｎｍの吸収及び６２０ｒ＋ｍの蛍光の測定によって評価される。

４／　この方法でクリプテートと結合したＤＮＡプローブを用いて、マチユース（Ｊ、　Ｍａｔｔｈｅｗｓ　）らの”ＤＮＡプローブ使用のための分析的戦略（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ｓｔｒａｔｅｇｊｅｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｕｓｅ　ｏｆＤＮＡ　ｐｒｏｂｅｓ）”と題する調査（Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　１６９巻、　１−２５頁（１９８８）　３に記載されている戦略の一つに従って相補性核酸配列の検出及び成分定量を行うことができる。

０．５　Ｍ炭酸緩衝液、ＰＨ９，５，中２０ｒａＭ　　５ＰＤＰ溶液２０μβを同し緩衝液にストレプトアビジン１■を含む溶液１８０μＥに加える０反応は室温で１時間続く。゛セントリコン“上で０．１ＭＷ酸ｔｌｉ衝Ｈ；　ｐ　Ｈ７，４テ連続４回洗浄して過剰（７）ＳＰＤＰを除去する。

２／　ストレプトアビジン　ｓｉｃ　　−Ｓ　Ｐ　Ｄ　Ｐの　防御及びり１ブー −の力・・フ町ン０．１Ｍ燐酸緩衝液、ｐＨ７，４＋中１００＋ｎＭ　　Ｄ　Ｔ　Ｔ溶液４０ｕ１を、同じ緩衝液中ストレプトアビジン−５ＰＤＰ　（ｚ１■）溶液３６０　μ２に加える。

反応は攪拌下、室温で１５分間続く。その後反応混合物を“°セントリコン″” 上で前記緩衝液で３回洗う。

０．１Ｍ燐酸暴衝液、　　ｐ　Ｈ７，４，６２５μ２中のストレプトアビジン− ＳＨ（Ｚｌｍｇ）を、１０％ＤＭＦ含有２０ｍＭ燐酸緩衝液。

ｐＨ７，１７５μｌ中に含まれる、実験Ａ、１０部に記載のようにＳＭＣＣで活性化された実施例３のユーロピウムクリブテート４３μｇと結合させる。そのカップリングは室温で２時間３０分続く。“セントリコン”上で０．１　Ｍ燐酸緩衝液、ＰＨ７，４゜で４回洗浄することによって未反応のクリブテートＳＭＣＣを除去する。

カップリング程度は、２８Ｏｒ＋ｌｆｌの吸収及び６２０ｒ＋ｍの蛍光の測定によって推定される。得られた結合体は、ＴＳＫＧ　　３０００ＳＷカラム上で０．１％ＴＦＡを含むＩＭ　　ＮａＣｊ２緩衝液を用いるゲル濾過によって精製される。検出は、２８０ｎｍの吸収及び６２０ｒ＋ｍの蛍光の測定によって行われる。

３／　この種のストレプトアビジン〜クリブテート結合体はビオチニル化分子（核酸、オリゴヌクレオチット、抗体、抗原。

ハプテンまたはその他の生物学的物質）に対する蛍光トレーサーとして用いられ、これら自身が、混合物中でこれらが大きい親和性を有するバイオ分子を一般的成分定量または検出法によって識別する。

へ国際調査報告国際調査報告国際調査報告　　　ＦＲ８８００６２０

Claims

【特許請求の範囲】

１．下記の構造式Ｉ及びＩＩ： ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩのうちの一つであらわされ、 ▲数式、化学式、表等があります▼ としてあわらされる環が下記の環（１）及び（２）：１）▲数式、化学式、表等があります▼（ｎ＝０または１〔Ｈ２Ｏ４〕巨大環または（２２）環〔Ｎ２Ｏ３〕巨大環または（２１）環）２）▲数式、化学式、表等があります▼ （ビス−ビピリジ巨大環）のうちの一つであって、Ｙが、線状または枝分かれＣ１からＣ２０までのアルキレン基であって、二重結合を含んでも含まなくてもよいもの、あるいは、例えば、酸素，窒素，硫黄または燐などの１個以上のヘテロ原子によって妨害されてもされなくてもよいアルキレン基と、Ｃ５からＣ８までのシクロアルキレン基と、Ｃ６からＣ１４までのアリレン基とから選択された二価有機基から成るスペーサー基またはアームであり、上記アルキレン，シクロアルキレンまたはアリレン基はアルキル，アリルまたはスルホネート基によって置換され、あるいは、置換されないものであり、Ｚが、生物学的物質と共有結合可能な官能基であり、Ｒが、メチル基あるいは基−Ｙ −Ｚであり、Ｒ′が、水素または基−ＣＯＯＲ′′であって、Ｒ′′Ｃ１からＣ１０までのアルキル基、より好ましくはメチル，エチルまたは第三ブチル基をあらわすもの、あるいは、基−ＣＯ−ＮＨ−Ｙ−Ｚである、巨大多環式化合物によって錯化された少なくとも一つの希土類塩より成る希土類クリプテート。
２．構造式Ｉによりあらわされ、Ｙが−ＣＨ２−ＣＨ２−であり、Ｚが−ＮＨ２ −（ｓｉｃ）である請求項１記載の希土類クリプテート。
３．▲数式、化学式、表等があります▼としてあらわされる環が、ビス−ビピリジン巨体環である請求項１または２記載の希土類クリプテート。
４．構造式ＩＩによりあらわされ、Ｙが−ＣＨ２−であり、ＺがＣＮであり、Ｒがメチル基である請求項１記載の希土類クリプテート。
５．構造式ＩＩによりあらわされ、Ｙが−ＣＨ２−ＣＨ２−であり、ＺがＮＨであり、Ｒがメチル基である請求項１記載の希土類クリプテート。
６．構造式： ▲数式、化学式、表等があります▼３であらわされ、Ｒ１がＣ１−Ｃ１０アルキレン基である化合物に対しての、構造式：ＮＨ２−Ｙ−Ｚであらわされ、Ｙ及びＺが、請求項１において定義されたものである、アミンとの反応によるアミノ基置換を室温下における窒素雰囲気のもとで行い、得られる生成化合物をイオン交換によって希土類クリプテートに転化することにより、構造式Ｉによりによってあらわされる請求項１記載の希土類クリプテートを得る希土類クリプテートの製造方法。
７．▲数式、化学式、表等があります▼としてあらわされる環が、ビス−ビピリジ巨大環であり、構造式： ▲数式、化学式、表等があります▼５によってあらわされ、Ｒ′′が請求項１において定義されたもののである化合物の１分子と、構造式：Ｒ▲数式、化学式、表等があります▼６によってあらわされ、Ｒ′が請求項１において定義されたものであり、Ｘがハライドイオンである化合物の２分子とを、無水有機溶媒中において核溶媒の還流温度のもとで行わせることによって、構造式３によりあらわされる化合物を生成する請求項６記載の希土類クリプテートの製造方法。
８．構造式： ▲数式、化学式、表等があります▼９によりあらわされるハロゲン化合物と、▲数式、化学式、表等があります▼としてあらわされる巨大環とを、無水有機溶媒溶液中において該溶媒の還流温度のもとで反応させて、構造式：▲数式、化学式、表等があります▼１０によりあらわされる巨大多環式錯体を生成し、該巨大多環錯体を、構造式：ＸＹＺによりあらわされ、Ｙ及びＺが請求項１において定義されたものであり、Ｘがハライドイオンであるハロゲン化化合物で処理することにより、構造式ＩＩによってあらわされる請求項１記載の希土類クルプテートを得る希土類クリプテートの製造方法。
９．構造式： ▲数式、化学式、表等があります▼３によりあらわされ、Ｒ１及び▲数式、化学式、表等があります▼としてあらわされる環が請求項１及び請求項６において定義されたものである合成中間体としての巨大多環式錯体。
１０．構造式： ▲数式、化学式、表等があります▼１０によってあらわされ、 ▲数式、化学式、表等があります▼としてあらわされる環が、請求項１において定義されたものであり、Ｒ２がＨあるいはＣＨ３である合成中間体としての化合物。
１１．遊離クリプタント（ｓｉｃ）の形で得られる請求項９または請求項１０記載の合成中間体。
１２．アルカリ金属クリプテートあるいは希土類クリプテート（ｓｉｃ）の形で得られる請求項９または請求項１０記載の合成中間体。
１３．請求項１乃至５のいずれかに記載の希土類クリプテートを蛍光トレーサーとして使用する希土類クリプテートの利用方法。
１４．請求項１乃至５のいずれかに記載の希土類クリプテートを、特に均質ルミネッセンス法による生物学的物質の検出および／または測定用の蛍光トレーサーとしての使用する希土類クリプテートの利用方法。