JPH03503773A - 窒素含有アンブルチシン類、その製造方法、およびその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 窒素含有アンプルチジン類、その製造方法、およびその使用本発明は、新規な窒 素含有アンプルチジン類（ａｍｂｒｕｔｉｃｉｎｓ）　、ソランギウム（ポリア ンギウム）・セルロスムＳｏ　ｃｅ　１０　（ＤＳＭ　　５３８６）　　［Ｓｏ ｒａｎｇｉｕｍ　（Ｐｏｌｙ−ａｎｇｉｕｓ）　ｅｅｌｌｕｌｏｓｕｍ　Ｓｏ　 ｅｅ　１０　（ＤＳＭ　　５３８６）　］からのそれらの製造、およびヒトおよ び動物における真菌類感染を抑制するための、または農作物保護剤としてのそれ らの使用に関する。完全をきすために、本発明によるアンプルチジン類は他の微 生物からも得られることに言及すべきである。

１９７０年頃、窒素非含有のシクロプロビルボリエンビラニツタ・アシドが粘液 細菌の一種ポリアンギウム・セルロスム・パル・フルブム（Ｐｏｌｙａｎｇｉｕ ｍ　ｃｅｌｌｕｌｏｓ−ｕｓ　ｖａｒ、　ｆｕｌｖｕｓ）　　［米国特許第３． ６５１．２１６号、　ワーナー・ランバート（Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｓｂｅｒｔ） ］から単離された。この酸はアンプルチジンと命名され、インビトロの静真菌作 用および弱い抗菌作用を示す［リンゲルら（Ｓ、　Ｍ、　Ｒｉｎｇｅｌ　ｅｔ　 ａｌ、）、ｊ。

ｏｒ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　３０．３？１　（１９７７）］。

作用スペクトルが既知化合物のものと異なる新規な殺真菌性または静翼菌性物質 を発見することは、一般的に非常に重要である。こうした物質は、広範囲の真菌 感染を抑制するための現代医療に有用な薬剤の範囲を拡大し、従って耐性獲得の 危険性をも減少させる。これらはまた、他の阻害効果に基づく農作物保護剤とし ての使用も興味深い。

メキシコからの土壌標本から粘液細菌目の１菌株ソランギウム（ポリアンギウム ）・セルロスムＳｏ　ｃｅ　１０　（ＤＳＭ　　５３８６）を単離することが可 能となり、この菌株はアンプルチジン類の一群から新規化合物を産生ずる。これ らは、植物病原性真菌およびヒトに対して病原性のある真菌［例えば、皮膚糸状 菌（ｄｅｒｍａｔｏｍｙｃｅ−ｔｅｓ）やアスペルギルス０ニガー（Ａｓｐｅｒ ｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ）を含む叢生菌（ｈｙｐｏａｙｃｅｔｅｓ）〕、およ びいくつかの酵母類に対して、非常に有効なインビトロの作用を示すが、抗菌作 用はない。また、殺虫作用を示す徴候もある。

従って本発明は、下記： （ａ）ソランギウム（ポリアンギウム）・セルロスムＳｏ　ｃｅ　１Ｇ　（ＤＳ Ｍ　　５３８６）を、吸着樹脂の存在下炭素源および窒素源並びに無機塩類を含 む培地中で対数増殖期から定常増殖期の間好気的に培養し、 （ｂ）吸着樹脂を次に培養液から除去して水で洗浄し、（ｃ）吸着樹脂に吸着さ せたアンプルチジン類を、ｃ＋−３−アルカノールで洗浄することにより除去し 、 （ｄ）溶出液を濃縮して凍結乾燥し、 （ｅ）残渣をＣ７−１−アルカノール（ｓｉｃ）に溶解させ、（ｆ）溶液を濾過 し、濾液をセファデックス（５ｅｐｈａｄｅｘ）のクロマトグラフにかけ、そし て （ｇ）アンプルチジン（ｓｉｃ）含有画分を濃縮し、そして、必要に応じて、こ うして得たアンプルチジン類を（ｈ）クロマトグラフィーによって分離し、そし て／または（ｉ）薬学的に許容される塩に変換する、に特徴づけられる窒素含有 アンプルチジン類とそれらの薬学的および農薬学的に許容される塩を提供する。

さらに本発明は、下記： （ａ）ソランギウム（ポリアンギウム）・セルロスムＳｏ　ｃｅ　１０　（ＤＳ Ｍ　　５３８６）を、吸着樹脂の存在下炭素源および窒素源並びに無機塩類を含 む培地中で対数増殖期から定常増殖期の間好気的に培養し、 （ｂ）吸着樹脂を次に培養液から除去して水で洗浄し、（Ｃ）吸着樹脂に吸着さ せたアンプルチジン類を、Ｃ，、−アルカノールで洗浄スることにより除去し、 （ｄ）溶出液を濃縮して凍結乾燥し、 （ｅ）残渣をＣｌ−２−アルカノール（ｓｉｃ）に溶解させ、（ｒ）溶液を濾過 し、濾液をセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）のクロマトグラフにかけ、そし て （ｇ）アンプルチジン含有画分を濃縮し、そして、必要に応じて、こうして得た アンプルチジン類を（ｈ）クロマトグラフィーによって分離し、そして／または （ｉ）ｉｔｉ学的に許容される塩に変換する、に特徴づけられる、これらの化合 物の調製過程を提供する。

本発明によれば、例えばヒトおよび動物における真菌感染の治療のためおよび農 作物保護剤として、アンプルチジン類は単独であるいは適当な賦形剤との混合物 として使用しうる。

下記の情報は本発明を例示する。

ラム亜目、ポリアンギウム科に属する。産生菌株ソランギウム・セルロスム５Ｏ ｃｅ　１０はイスラ・ムジェレス（Ｉｓｌａ　Ｍｕｊｅｒｅｓ）、ユカタン、メ キシコからの土壌標本から１９７８年５月にジー・ビー・エフ（ｔｈｅ　ＧＢＦ ）で単離された。これはセルロース分解細菌である。この菌株はドイツ微生物寄 託機関（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ　Ｓａａｌ　ｕｎｇｖａｎ　　Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎ ｉｓｍｅｎ）　　（ＤＳＭ）に番号５３８６として寄託された。

株培養および形態学的記述二株培養は、イースト寒天培地ＶＹ／２−アガー：０ ．５％ブルーアーズ・イースト（ｂｒｅｗｅｒ’ｓ　ｙｅａｓｔ）　、生体重量 ；０．１％　ＣａＣＩｔ　：　　１．５％寒天；　　ｐＨ７，２、あるいは５Ｔ ２１寒天培地［０，１％　ＫＩＩＯｓ；　　０．１％　Ｍｇ５Ｏａ　Ｘ　７１１ 、Ｏ：　　Ｏ，＋％　ＣａＣ１ｔ　：　　０．１％に、ＨＰＯ，；　　０．０１ ％　ｌ！ｎ５Ｏ４Ｘ　７１１ｔＯ：　０．０２％　ｐｅモhｓ ；　０．００２％酵母エキス；　標準微量元素溶液、例えばドルーズの微量元素 　（Ｇ。

Ｄｒｅｓｓ’ｓ　ｔｒａｃｅ　ｅｌｅｍｅｎｔｓ）、微生物実験室実習（Ｍｉｋ ｒｏｂｉｏｌｏｇｉｓｃｈｅｓ　Ｐｒａｋｔｉｋｕｍ）、ベルリン：スプリンガ ー出版（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　Ｖｅｒｌａｇ）　；　１％寒天］上の濾紙で行う。

プレートは３０℃で培養する。

無機塩寒天培地またはイースト寒天培地（ＹＹ／２アガー）上の濾紙の上に、菌 株は多数の黄橙色から黒褐色の子実体（ｆｒｕｉｔｉｎｇ　ｂｏｄｉｅｓ）と共 に大きい明橙色の遊走性コロニーを形成する。子実体は直径１５−２０μ園の小 さな小胞子嚢（ｓｐｏ−ｒａｎｇｉｏｌｅｓ）からなり、これが種々の大きさの 山伏（大部分の山は直径５０から１５０μ−の間である）に密に重なっている。

休止期の桿菌（ｒｏｄｓ）はソランギウムに典型的な形状（位相差顕微鏡下で暗 く見える比較的きめの粗い円筒形桿菌）をとり、幅広く丸みを帯びた先端を有し 、平均して長さは３−６　μ転摩さ約１　μＩである。液体培地での成育に長期 間適応させた後は、菌株は均一な細胞懸濁液のかたちで成育する。

菌株“Ｓｏ　ｃｅ　１０”の生物学的性質グルコース分解：陽性 セルロース分解：陽性 でんぷん分解：陽性 Ｎ源としてのＮ１１．°：陽性 Ｎ源としてのＮＯｘ−：陽性 法熊：菌株Ｓｏ　ｃｅ　ＩＯは、化学的観点から密接に関連し、かつ多数の真菌 および酵母の成育を阻害するいくつかの化合物を産生ずる。活性物質は試験した 全細菌に対し無効であった。活性物質は細胞と培養上清の両者から分離しつる。

活性物質の産生：活性物質は対数増殖期から定常増殖期までの間産生される。

典型的な発酵は下記のように行われる：　１００１の発酵槽しジオバノラ（Ｇｉ ｏｖａ−ｎｏｌａ）、モンテイ（Ｍｏｎｔｈｅｙ）、スイス］を６３１の培地［ ０，５％でんぷん、０．５％大豆ミール、０．０５％Ｍｇ５Ｏ４Ｘ　ＩＨｔＯｌ ｏ、０５％ＣａＣ１ｔ　ｘ　２１１ｔＯ１１％（容量に基づく）ローム・アンド ＋ハース（Ｒｏｈｍ　ａｎｄ　Ｈａａｓ）吸着樹脂ＸＡＤ−１１８０、Ｐｈ７． ４］で満たす。振とうワラスフ中で同一培地で確立した前培養７１を接種する。

発酵は、３２℃、回転速度４００　ｒｐｗｒ、通気０．２Ｎ＋ｓ’／時間で実施 する。泡形成はシリコン消泡剤２０−１の添加によって防止する。発酵は４日後 に完了する。

活性物質は吸着樹脂に定量的に結合しており、吸着樹脂は発酵器の内容物をメツ シュサイズ０．２＋＋＋−のスクリーンで篩分けることによって得られる。

メタノールに溶解させた活性物質の濃度は、直径６ＩＩ１１の試験ディスク当り ｌμｇであった。寒天の容量は直径９　ｃ＋ｅのペトリ皿当り１０−１であった 。２つの主成分の作用スペクトルは一致している。

カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）　　　　　　　 　　　　　９ネマトスボラ・コリリ（Ｎｅｍａｔｏｓｐｏｒａ　ｃｏｒｙｌｉ） 　　　　　　　　　　　　−ビチア・メンプラナファシェンス（Ｐｉｃｈｉａ　 ｍｅｍｂｒａｎａｅｒａｃｉｅｎｓ）　　　　１０デバリオミセス・へンセニ（ Ｄｅｂａｒｙｏｓｙｃｅｓ　ｈａｎｓｅｎｉｉ）　　　　　　　　１１０−ドト ルラ・グルチニス（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｇｌｕｔｉｎｉｓ）　　　　　　 　　　−トルロプシス・ゲラブラタ（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ　ｇｌａｂｒａｔａ ）　　　　　　　　　−サツカロミセス０セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃ ｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）　　　　　−ハ７セヌラΦアノマラ（Ｈａｎｓｅ ｎｕｌａ　ａｎｏｍａｌａ）　　　　　　　　　　　　１０．６シゾサツカロミ セス０ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｐｏｍｂｅ）　　　 　　−ナドソニア・フルベセンス（Ｎａｄｓｏｎｉａ　ｒｕｌｖｅｓｃｅｎｓ） 　　　　　　　　　−戟生菌： ムコール・ヒエマリス（Ｍｕｃｏｒ　ｈｉｅｍａｌｉｓ）　　　　　　　　　　 　　　１０．８ピチウム・デバリアヌム（ＰｙＬｈｉｕｍ　ｄｅｂａｒｙａｎｕ ｌｌ）　　　　　　　　　　　１３．２パーテイシラム・アルボ−アトラム（Ｖ ｅｒｔｉｃｉｌｌｕｓ＋　ａｌｂｏ−ａＬｒｕａ＋）　　　＋５リゾプス・スペ シーズ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ　ｓｐ、）　　　　　　　　　　　　　　　１８ボト リチス・シネラ（ＢｏｔｒｙＬｉｓ　ｃｉｎｅｒｅａ）　　　　　　　　　　　 　　　　９．２カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ） 　　　　　　　　　　　　１デバリオミセス・ハンセ＝　（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙ ｃｅｓ　ｈａｎｓｅｎｉｉ）　　　　　　　　０．５ムコール・ヒエマリス（Ｍ ｕｃｏｒ　ｈｉｅｓａｌ　ｉｓ）　　　　　　　　　　　　　０．１この結果は 、これらの化合物がヒトに対して病原性のある真菌および植物病原性真菌に対し て良好なインビトロの活性を示すことを実証している。

閣」別話存在下での化合物ＶＳ−１、−３、−４、−５の調製発酵の終了時に、 吸着樹脂［例、アンバーライト（＾ｍｂｅｒｌｉｔｅ）　ＸＡＤ−１１８０１を 篩分け、水で洗浄してガラス製のカラムに流し込む。カラム容量の３倍のメタノ ールで３時間かけて溶出する。溶出液を水相が現れるまで真空下で濃縮し、続い て凍結乾燥する。この過程で残渣として１５ｇの粘性のある暗色油状物が得られ 、これをメタノール２００　ｍｌに溶解し、溶液を濾過して濾液をセファデック ス（Ｓｅ−ｐｈａｄｅｘ）　１．１１−２０のクロマトグラフに３回に分けてか ける（カラムの直径５　ｃｅａ、長さ７０　ｃｔａ、溶離液メタノール、検出− ２５４ｎｍおよび薄層クロマトグラフィー）。

成分ＶＳ−１、−３、−４、−５は、幅広の重なりあったピークの一群の最後の ピーク中に大部分共に溶出する。対応画分を蒸発乾固すると、活性物質複合体は 淡黄色固体（４，２ｇ）として残る。この組成は発酵条件による；一般に、ＶＳ −３がＶＳ−４と共に主要成分であり、ＶＳ−１およびＶＳ−５が少量である。

成分の分離 活性物質複合体０．１３ｇをｌＩＤ−５ｉ　１−１８−３０−６０のクロマトグ ラフにかける（溶離液勾配−メタノール／水８５：１５から１００：０５両溶離 液は０．０１Ｍ酢酸アンモニウムを含む、ｐＨ４，９）。ＶＳ−３および−４の 成分は分離したピークとして、初めにＶＳ−４、次にＶＳ−３が溶出する。メタ ノールを対応画分から真空下蒸発によって除去する：水性残渣を凍結乾燥すると 、無色の非晶固体として３４　ｗｌｇのＶＳ−４および３８　ｔａｇのＶＳ−３ が得られる。ＶＳ−５およびＶＳ−１は、予備および最終画分から調製用薄層ク ロマトグラフィー［ＰＬＣ塗布済プレートシリカゲル６０　Ｆ２５４、厚さ１　 ａｍ、メルク（Ｍｅｒｃｋ）、溶離液メタノール／氷酢酸９９：１、検出２５４ 　ｎｍ］によってそれぞれ収ｊ１３＋ａｇおよび６　ｔａｇで得られる。

本発明によるアンプルチジン類は下記：アンプルチシ７ＶＳ−Ｉ　　　Ｒ＝Ｎ（ ＣＨ，）ｌ。

ＶＳ−３Ｒ＝Ｎｌｌ（ＣＩ−）＊’ ＶＳ−４Ｒ＝　Ｎ１１ｔＣＩＩ＊　” ＶＳ−５Ｒ＝　Ｎ１１．。

の構造を有する。

アンプルチジン類は下記： の立体配置をとることが好ましいが、光または熱の作用によって生じうるすべて の配置異性体も本発明に含まれる。

アンプルチジンＶＳ−１の化学的特性 実験式：　Ｃｓ１１１４−ＮＯｓ　　　　　　　分子量：５１５無色非晶質 ＵＶ（メタノール）　末端吸収 ＭＳ　（ＦＡＢ、マトリックス　ｍ−ニトロベンジルアルコール、陽イオン’） 　＝５１６（Ｍ＋Ｈ）” 高分解能 計算値：　５１６．３６７６ 実測値：　５１６．３６７８ ’ｌ−ＩＮＭＲ：表１ １コＣＮＭＲ：　表２ 薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣアルミニウムホイル６０　Ｆ−ｓ４、メルク； 溶離液：　）９　／　−に／氷酢酸９９：］）　Ｒｒ＝ｏ、＋ｓバニリン／硫酸 試薬を噴霧し、１２０℃に加熱することによって検出（灰青色のス実験式：Ｃ２ ゜ｌ＋、？ＮＯ＆　　　　　　　分子量：５０１無色非晶質 ［α］　［）”＝９０．５°　（メタノール；ｃ＝２．５）ＵＶ（メタノール） 　末端吸収 ＭＳ　（ＦＡＢ、マトリックス　―−ニトロベンジルアルコール、陰イオン）　 −５００（Ｍ−Ｈ）− 高分解能 計算値：　５００．３３６４ 実測値：　５００．３３７８ ’ＨＮＭＲ：表１ ”ＣＮＭＲ：表２ 薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣアルミニウムホイル６０Ｆ□４、メルク：溶離 液：メタノール／氷酢酸９９：１）　Ｒｒ＝０．３２バニリン／硫酸試薬を噴霧 し、１２０”Ｃに加熱することによって検出（灰青色のス実験式：　Ｃ，、ｌ！ 、、ＮＯ，分子量：４８７無色非晶質 ［α］　Ｄ”＝１０１．４°　（メタノール；ｃ＝１．５）ＵＶ（メタノール） 　末端吸収 ＭＳ　（ＦＡＢ、マトリックス　禦−ニトロベンジルアルコール、陰イオン’） 　＝４８６計算値：　４ｇ６．３２０８ 実測値：　４８６．３２３９ 薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣアルミニウムホイル６０Ｆ□１、メルク；溶離 液：メタノール／氷酢酸９９：Ｉ）　Ｒｆ＝０．５１バニリン／硫酸試薬を噴霧 し、１２０℃に加熱することによって検出（灰青色のス実験式：　Ｃ，、ｌ＋、 ３ＮＯ，分子量＝４７３無色非晶質 ＵＶ（メタノール）　末端吸収 ＭＳ　（ＦＡＢ、マトリックス　−一二トロベンジルアルコール、陰イオン）　 ＝４７２（Ｍ−Ｈ）− 高分解能 計算値：　４７２．３０５２ 実測値：　４７２．３０５１ ’）（ＮＭＲ：表１ ”ＣＮＭＲ：表２ 薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣアルミニウムホイル６０　Ｆｔｓ４、メルり； 溶離液：メタノール／氷酢酸９９：ｌ）　Ｒｆ＝０．７０バニリン／硫酸試薬を 噴霧し、１２０°Ｃに加熱すること１こよって検出（灰青色のスポ、、Ｉト） 表１　　［Ｄ、］メタノール中のアンプルチジン類Ｖｓの’ＨＮＭＲスペクトル 法データ ＭＳ４　　　　　　ＶＳ−３ＶＳ−４ＶＳ−５Ｎ−Ｍｅ　　　　３．２５　ｇ　 　　２．１１３　ｇ　　　２．７２　ｇ　　　　−表２　　［Ｄ、］メタノール 中のアンプルチジン類ｖＳのＩ３Ｃ化学シフトＶＳ４　　　　　　ＶＳ−３ＶＳ −４ 炭素原子　　　　　　　　＆　（ｐｐｍ）１　　　　　　１７８．７＊　　　　 １７Ｂ、Ｏ☆　　　　−★２　　　　　４４．９　　　４４．８　　　４４．８ ３　　　　　７４．７　　　７４．７　　　７４．５４　　　　　３３．０　　 　３０．８　　　３３．６５　　　　　７６．４６Ｂ、６　　　６２．５Ｎ−Ｈ ａ　　　　　５３．７　　　４０．３　　　３１．６６　　　　　　　７２．０ 　　　　　７０．４　　　　７２．４７　　　　　　Ｂ２．７　　　　Ｂ２．４ 　　　８２．３８　　　　　　　　　　　　　１２５．４１２　　　　　　　　 　　　　　　　２９．８１３　　　　　　　　　　　　　　１２６．８１６　　 　　　　　　　　　　　　　１３０．７２０　　　　　　　　　　　　　　　　 １２２．０２８　　　　　　　　　　　　　　　　１９．０＊　交換（ｅｘｃｈ ａｎｇｅ）のために幅広、あるいは観察できな〜）。

使用略語の索引 セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）　Ｌｌｌ−２０付属書類［ファルマシア（ Ｐｈａｒｍａｚｉａ）コＨＤ−３ｉ　ｌ−１８−３０−６０付属書類参照［クロ ンワルド（Ｋｒｏｎ−ｖａｌｄ）　］ アンバーライト（＾ａｂｅｒｌｉＬｅ）　ＸＡＤ−１１８０４を属書類寥照［ロ ーム・アンド・ハース　（Ｒｏｈｍ　　ａｎｄ　　Ｈａａｓ）　　］ＰＬ（４布 済プレートシリカゲル６０　Ｆ２５４付属書類参照［メルクＣＭｅｒｃｋ）　］ 本明細書は付属小冊子も含む。

国際調査報告

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. １．下記の一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ ［式中，ＲはＮ（ＣＨ３）３＋、ＮＨ（ＣＨ３）２＋、ＮＨ２ＣＨ３＋またはＮ Ｈ３＋を意味する］の窒素含有アンブルチシン類（ｓｉｃ）、およびそれらの薬 学的および農薬学的に許容される塩。
2. ２．下記の式： ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩに示された立体配置を有する、請求の範 囲第１項記載の窒素含有アンブルチシン類およびそれらの薬学的および農薬学的 に許容される塩。
3. ３．下記： （ａ）ソランギウム（ポリアンギウム）・セルロスムＳｏｃｅ１０［Ｓｏｒａｎ ｇｉｕｍ（Ｐｏｌｙ−ａｎｇｉｕｍ）ｃｅｌｌｕｌｏｓｕｍＳｏｃｅ１０］（Ｄ ＳＭ５３８６）を、吸着樹脂の存在下炭素源および窒素源並びに無機塩類を含む 培地中で対数増殖期から定常増殖期の間好気的に培養し、 （ｂ）その吸着樹脂を次に培養液から除去して水で洗浄し、（ｃ）その吸着樹脂 に吸着させたアンブルチシン類を、Ｃ１−３−アルカノールで洗浄することによ り除去し、 （ｄ）溶出液を濃縮して凍結乾燥し、 （ｅ）残渣をＣ１−３−アルカノールに溶解させ、（ｆ）溶液を濾過し、濾液を セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）のクロマトグラフにかけ、そして （ｇ）アンブルチシン（ｓｊｃ）含有画分を濃縮し、そして、必要に応じて、こ うして得たアンブルチシン類を（ｈ）クロマトグラフィーによって分離し、そし て／または（ｉ）薬学的に許容される塩に変換する、ことを特徴とする、窒素含 有アンブルチシン類とそれらの薬学的に許容される塩の製造方法。
4. ４．（ｈ）に従ったクロマトグラフィーによる分離を下記：（ｈ１）アンブルチ シン画分をメタノール／水を溶離液として用いてＨＤ−Ｓｉｌ−１８−３０−６ ０のクロマトグラフにかけ、 （ｈ２）アンブルチシン類ＶＳ−４（Ｒ＝ＮＨ２ＣＨ３）およびＶＳ−３（Ｒ＝ ＮＨ（ＣＨ３）２）を含む画分をメタノールから遊離させ、そして （ｈ３）どの場合においても水性残渣を凍結乾燥させ、そして／または（ｈ２′ ）シリカゲルの調製用薄層クロマトグラフィーによって予備および最終画分から アンブルチシン類ＶＳ−５（Ｒ＝ＮＨ３）およびＶＳ−１（Ｒ＝Ｎ（ＣＨ３）３ ）を単離する、ことによって実施することを特徴とする、請求の範囲第２項記載 の製造方法。
5. ５．ヒトおよび動物における真菌感染を治療するための、単独でまたは適当な賦 形剤との混合物としての、請求の範囲第１項ないし第３項のいずれか１項に記載 の窒素含有アンブルチシン類あるいはそれらの薬学的に許容される塩の使用。
6. ６．農作物保護剤としての、単独でまたは適当な担体との混合物としての、請求 の範囲第１項ないし第３項のいずれか１項に記載の窒素含有アンブルチシン類あ るいはそれらの薬学的に許容される塩の使用。