JPH03504331A

JPH03504331A - Novel lymphokine/cytokine genes

Info

Publication number: JPH03504331A
Application number: JP2501582A
Authority: JP
Inventors: シーベンリスト，ウルリッヒ; ジフェル，ペーター　エフ．; ケリー，キャサリン　アール．; アーヴィング，ステブン　ジー．; ナポリタノ，モニカ; レオナルド，ワレン　ジェー．
Original assignee: United States Department of Commerce
Current assignee: United States Department of Commerce
Priority date: 1988-12-16
Filing date: 1989-12-15
Publication date: 1991-09-26
Also published as: WO1990007009A1; IL92685A0; CA2005639A1; AU626369B2; AU4816090A; DK113491A; EP0449956A4; EP0449956A1; DK113491D0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。 (57) [Summary] This bulletin contains application data before electronic filing, so abstract data is not recorded.

Description

【発明の詳細な説明】４、ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質の生産法であって、該タンパク質が生産されるような条件下で請求項３記載の該細胞を培養しそして該タンパク質を単離することを包含する生産法。５、請求項４に記載の該細胞を培養することを包含するヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質の生産法であって；該タンパク質が該細胞から分泌される生産法。６、Ｍ求項４に記載の生産法により製造できるヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質。７、請求項５に記載の生産法により製造できるヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質。８、ヒトのリンホカイン／サイト力イン様タンパク質のアミノ酸配列を包含するペプチドにより誘導される抗体であって；該タンパク質がＡｃｔ−２のｃＤＮＡのほぼ完全な長さのクローンおよびＩ）ＡＴ　　７４４のｃＤＮＡのクローンからの翻訳生産物から成る群から選択されている抗体。９、ｉ）マイトジェン活性化を生起する条件下にＴ細胞を置き；ｉｉ）該Ｔ細胞からｍＲＮＡを単離し：そしてｆｆ１）　ＤＮＡ試料へのハイブリッド形成によりリンホカイン／サイトカイン様タンパク質のための遺伝子のマイトジェン活性化のレベルを定量する段階を包含するバイオアッセイであって；該試料が請求項１記載のＤＮＡ断片に含有されるＤＮＡ断片を包含するバイオアッセイ。１０、ｉ）その中でＴ細胞を培養した液体を取得し；そして　ｈ）請求項８に記載の抗体との反応によりヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質のレベルを定量する段階を包含するバイオアッセイ。１１、ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質をコードしているＤＮＡ断片であって；該タンパク質がｐＡＴ　　７４４のｃＤＮＡのクローンの翻訳生産物であるＤＮＡ断片。１２、請求項１１記載のＤＮＡ断片とベクターを包含する組換えＤＮＡ分子。１３、請求項１２記載の該組換えＤＮＡ分子で形質転換された細胞の培養。１４、ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質の生産法であって、該タンパク質が生産されるような条件下で請求項１３記載の該細胞を培養しそして該タンパク質を単離することを包含する生産法。１５、請求項１４に記載の該細胞を培養することを包含するヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質の生産法であって；該タンパク質が該細胞から分泌される生産法。１６、請求項１４に記載の生産法により製造できるヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質。１７、請求項１５に記載の生産法により製造できるヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質。１８、ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質のアミノ酸配列を包含するペプチドにより誘導される抗体であって；該タンパク質がｐＡＴ　　７４４のｃＤＮＡのクローンからの翻訳生産物から選択されている抗体。１９、　　ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質をコードしているＤＮＡ断片であって；該タンパク質が下記のｃＤＮＡクローンのいずれかの翻訳生産物から成る群から選択されているＤＮＡ断片：ｐＡＴ　　１２０；ｐＡＴ　　１２５：ｐＡＴ　　１２７゜ｐＡＴ　　１２９；ｐＡＴ　　１３３；ｐＡＴ　　１３９；ｐＡＴ　　１４０Ｓ；ｐＡＴ　　１４０Ｌ；ＰＡＴ　　１５４：ｐＡＴ　　１５８；ｐＡＴ　　１８９；ｐＡＴ　　２０１；ｐＡＴ　　２０４；ｐＡＴ　　２２５；ｐＡＴ　　２２９；ｐＡＴ　　２（２Ｓ；ｐＡＴ　　２３２Ｌ；ｐＡＴ　　２３７；ｐＡＴ　　　２３９；ｐＡＴ　　　２４３；ｐＡＴ　　　２７０；ｐＡＴ　　　２７６；ｐＡＴ　　　２８１；ｐＡＴ　　　３８３；ｐＡＴ　　　４０２：ｐＡＴ　　　４０７．ｐＡＴ　　　４１６；ｐＡＴ　　　４２８；Ｉ）ＡＴ　　　４６６；ｐＡＴ　　　４７８；ｐＡＴ　　　４８３；ｐＡＴ　　　４８５；　ｐ、ＡＴ　　　４９６；ｐＡＴ　　　５１８；ｐＡＴ　　　５４２；ｐＡＴ　　　５６３：ｐＡＴ　　　５９１．ｐＡＴ　　　５９４；ｐＡＴ　　　６０３；ｐＡＴ　　６０７．ｐＡＴ　　６２０．およびｐＡＴ’　　７３０゜２０、請求項１９記載のＤＮＡ断片とベクターを包含する組換えＤＮＡ分子。２１、請求項２０記載の該組換えＤＮＡ分子で形質転換された細胞の培養。２２、ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質の生産法であって、該タンパク質が生産されるような条件下で請求項２１記載の該細胞を培養しそして該タンパク質を単離することを包含する生産法。２３、請求項２２に記載の該細胞を培養することを包含するヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質の生産法であって；該タンパク質が該細胞から分泌される生産法。２４、請求項２２に記載の生産法により製造できるヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質。２５、請求項２３に記載の生産法により製造できるヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質。２６、ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質のアミノ酸配列を包含するペプチドにより誘導される抗体であって；該タンパク質が下記のｃＤＮＡクローンのいずれかの翻訳生産物から成る群から選択されている抗体：ｐＡＴ　　１２０；ｐＡＴ　　１２５；ｐＡＴ　　１２７；ｐＡＴ　　１２９；ｐＡＴ　　１３３；ｐＡＴ　　１３９；ｐＡＴ　　１４０８；ｐＡＴ　　１４０Ｌ；ｐＡＴ　　１５４；１）ＡＴ　　１５８；ｐＡＴ　　１８９；ｐＡＴ　　２０１゜ｐＡＴ　　２０４；ｐＡＴ　　２２５；ｐＡＴ　　２２９；ｐＡＴ　　２３２Ｓ；ｐＡＴ　　２８２Ｌ；ｐＡＴ　　２８７；ｐＡＴ　　２！３９；ｐＡＴ　　２４３；ｐＡＴ　　２７０゜ｐＡＴ　　２７６；ｐＡＴ　　２８１；ｐＡＴ　　ａｓ３；ｐＡＴ　　４０２：ｐＡＴ　　４０７；ｐＡＴ　　４１６；ｐＡＴ　　４２８；ｐＡＴ　　４６６；ｐＡＴ　　４７８；ｐＡＴ　　４８３；ｐＡＴ　　４８５；ｐＡＴ　　４９６；１）ＡＴ　　５１８；ｐＡＴ　　５４２：ｐＡＴ　　５６３；ｐＡＴ　　５９１：ｐＡＴ　　５９４；ｐＡＴ　　８０３；ｐＡＴ　　６０７；ｐＡＴ　　６２０；およびｐＡＴ　　７３０゜２７、ｉ）マイトジェン活性化を生起する条件下にＴ細胞を置き；ｉｉ）該Ｔ細胞からｍＲＮＡを単離し；そしてｍ）ＤＮＡ試料へのハイブリッド形成によりリンホカイン／サイトカイン様タンパク質のための遺伝子のマイトジェン活性化のレベルを定量する段階を包含するバイオアッセイであって；該試料が請求項１９記載のＤＮＡ断片に含有されるＤＮＡ断片を包含するバイオアッセイ。２８、ｉ）その中でＴ細胞を培養した液体を取得し；そして　ｉｉ）請求項２６に記載の抗体を使用してヒトのリンホカイン／サイト力イン様タンパク質のレベルを定量する段階を包含するバイオアッセイ。明　　　細　　　書新規なリンホカイン／サイト力イン遺伝子発明の分野本発明は、免疫細胞のマイトジェン刺戟により活性化される遺伝子に、特に、リンホカインとサイトカインーを包含する分泌因子類に類似のポリペプチドをコードしている遺伝子に関する。本発明は、組換え細胞によるこのような免疫活性化遺伝子の生産物の合成にも、そしてこれらの因子をコードしているＤＮＡの確認とクローニングにより可能になったある種の新規の生産物の製造と使用にも関する。発明の背景休止期の未分化の１９２３球は、特定の細胞の遺伝子の活性化により抗原とマイトジェンの刺戟に対して応答し；この特定の遺伝子は、細胞増殖と分化表現型の発現に至らしめる事象を調節していると考えられている。活性化応答の部分として、Ｔ細胞は免疫反応に関与している多（の細胞の成長と分化のために重要である多種、多数の因子を生産する。更に特定すると、リンパ球の増殖とエフェクター機能は細胞表面受容体への抗体／マイトジェンおよびリンホカインの結合により調節される。このような細胞外リガンドの結合は、細胞内生化学的事象のカスケードを生起しく下記の参考文献、実験の部ＩＩのＩ［−４４と１１−４５を参照）、このカスケードは最終的には活性化に関連した成長と分化機能の発現のための遺伝子プログラムの発動をするに至る。か（して、休止期のＴ細胞は、休止期細胞の活性化に続いて連続的に依存、指令された転写事象を連続して行い、これはＤＮＡ合成の開始においては約２４時間後に最高潮に達する。それらの初期の速度論と初期のタンパク質合成への依存の欠如により限定されている、初期の遺伝子転写事象は、プロト−ガン遺伝子（ｐｒｏｏｎｃｏｇｅｎｅｓ）　（例えば、Ｃ−ｍｙｃおよびｃ−ｆｏｓ）、リンホカイン〔例えば、ＩＬ −２、γＩＮＦＳＧＭ−Ｃ３Ｆ　（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）〕、および細細胞開面ンホカイン受容体ＣＩＬ−２受容体）（参照、ＩＩ−６、ｌｌ−９、ｌｌ−１２、ＩＩ−１７，１１−２７、■−３６、Ｉ［−４４）を包含し、これらの全ては、Ｔ細胞の免疫応答の増殖および／または調節に重大な影響を及ぼす。すぐに誘導される遺伝子のあるものは、マイトジェン活性化に続（分子的事象のカスケードの発動そしてか（して調節における役目を担うと期待されている。このような遺伝子は、腫瘍原事象の標的にも似ている。例えば、多（のデータは、マイトジェン誘導性遺伝子のｃ−ｍｙｃが不適当に発現された時に非調節の成長が起こると言う概念を支持している（ＩＩ〜１１．１１−２６　’）。現在、Ｔ細胞中で初期の誘導された遺伝子の限定数が記述されている。過去には、Ｔ細胞中に誘導された遺伝子、例えばＩＬ−２とＩＬ−２受容体は、頻繁にそれらがコードしているタンパク質を基礎にして確認されていた。しかし、Ｔ細胞の転写応答は今まで報告されてきたより複雑であるようである（ＩＩ−２，１１ −４、ｌＩ−１５、ｌｌ−２３，１１−２８、Ｉｌ−３２、ｌｌ−４２）。従って、誘導遺伝子の最大数をクローニングすることにより、活性化に対するＴ細胞の初期の応答を充分に特徴付ける必要があった。かくして、分化発現の特性に基づいた、先入観のない取組が、新規の、マイトジェン誘導遺伝子をクローニングするのに要求された。幾つかの理由のために、活性化を研究するためのモデルとしてヒトの末梢血（ＰＢ）Ｔ細胞がこの発明の発展に使用された。第１に、ＰＢ　　Ｔ細胞は培地中の成長のために採取するのには選択されていない根本的な休止期の細胞であって、それらはｉｎ　　ｖｉｔｒｏではポリクローナルに刺激され得る。第２に、Ｔ細胞は、活性化により、免疫応答の進行中に重要な役目をするいろいろな分化機能を発現する。例えば、新規のリンホカイン／サイト力インは誘導遺伝子の一群内に包含されると期待されてもよいだろう；というのは、活性化に続＜ＰＢ　　Ｔ細胞の根本的機能は、最後に多数の生理的機能をもたらす溶解性因子を分泌することだからである（ＩＩ−５、ＩＩ−６、ｌｌ−９、ｌｌ−１３）。第３に、活性化に対する遺伝子応答を研究することにおける重要な見方は、遺伝子調節の機構を確認することである。Ｔ細胞に作用する免疫抑制薬のシクロスポリンＡ（Ｃ３Ａ）の使用は、誘導遺伝子の調節領域を初期に切断するための道具を提供する。Ｃ３Ａは、他の経路を無傷にした侭、−個または数個の初期のＴ細胞の活性化の経路を破壊するように見える（ＩＩ−１６，１１−２４、ＩＩ−２９）。最終的に、Ｔ細胞系は、Ｔ細胞の発達と機能に関与していると考えられているいろいろの異なった表面分子を通してメジエートする活性化の必要条件を破壊そして対照するのを可能にする。ヒト末梢血子細胞を、ＰＨＡ　（植物凝集素）とＰＭＡ（ホルボールミリステートアセテート）のマイトジェン組み合わせで処理することは、ｉｎ　　ｖｉｖｏにおける抗原と抗原提示細胞の効果を疑似しているように見える。この２種の薬剤は、細胞周期を通ずる進行に重要である遺伝子の発現を誘導するので知られており；これら遺伝子はｃ−ｆｏｓおよびＣ−ｍｙｃのガン遺伝子（オンコゲン）、ＩＬ−２成長因子遺伝子およびＩＬ−２受容体遺伝子を包含する（参照、下記の実験の部ＩＶ中の文献、［Ｖ−１、ＩＶ−２）。ＩＬ−２に加えて、この方法でＴ細胞は多数のリンホカイン／サイト力インを生成しこれら力イン類はいろいろの細胞に影響を及ぼす。これら力イン類は、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−６、ＧＭ−Ｃ３Ｆ　（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）、γＩＮＦ（ガンマ−インターフェロ：／）、ＴＮＦ（腫瘍壊死因子）およびＬＴ　（ＩＶ−３−ＩＶ−９）およびよくは定義されていない他の若干数（ＩＶ−１０−Ｉｖ−１３）のような因子を包含する。このような因子の若干数は、Ｔ細胞中の特定の調節機構の支配下にあるかも知れない；というのは、免疫抑制薬のシクロスポリン八がそれらの活性化を破壊するように見えるからである。上述したように、この薬はＴ細胞の活性化の初期相の間に作用し、ＩＬ−２、Ｉ　Ｌ　−３、およびγ−インターフェロンの生産を阻害する（ＩＶ−１４−［Ｖ −１７）。この阻害作用は特異的である；というのは、ｃ−ｆｏｓおよびＨ３Ｐのような他の誘導遺伝子が影響を受けないからである（ＩＶ−１５）。本発明は、小さい、分泌型のタンパク質の新規に出現する一群と類似しているアミノ酸配列をコードしているＤＮＡ断片に関する（実験の部ＩＶのＩＶ−６図を参照）。この構造的に類似している一群は、血小板因子４　（ＰＦ−４）（ＩＶ−１，８）、血小板基本因子（ＰＢＰ）とそのプロセスド型（ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ　ｆｏｒｍ）のβ−スロムボグロプリン（β−ＴＧ）と結合組織活性化ペプチド［、ＩＩ　　（ＣＴＡＰ）（ＩＶ−１９、ＩＶ−２０）、ガンマイン９’−７ｚロン誘導タンパク質（ＩＰ−１０）（［Ｖ−２１）、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）（ＩＶ−２２）、好中球走化性因子［３−１０Ｃ，ＭＤＮＣＦ　（単細胞誘導好中球走化性因子）、ＮＡＦ（好中球活性化因子）コ（ＩＶ−２３、ＩＶ−２４、ＩＶ−２５）、および繊維芽細胞により生産される因子、ヒトの成長に関連するタンパク質（Ｈ−ｇｒｏ）（ＩＶ−２６）を包含する。これが決められる範囲内では、この一群員はある種の炎症応答および／またはマイトジェン活性をメジエートするように見える。炎症および傷害−回復／組織修復は、多（の異なる細胞を巻き込む非常に複雑な過程である。いろいろな細胞の機能の協調は、細胞間を連絡するのに必要とされるいろいろな分泌因子の多数で反復しているように見える。一つの共通の起源的遺伝子から誘導されたかも知れないこの遺伝子の一群は、このような協調関係を確立するのによく機能しているかも知れない。炎症と修復をメジエートするために、この一群の若干数のために示したように、各々の因子は多数の機能を持っているのであろう（下記参照、実験の部［Ｖ、サブセクションの議論）。これらのタンパク質の間で保持されている機能は、保持されている受容体素子との相互関係を示しているだろう。上述したように、このタンパク質の一群員は、組織の特異性の顕著な多様性をはっきりと示している。因子間の区別は、活性化される細胞型に依存する免疫反応が進行する間に要求される特異的な機能を決めるであろう。炎症の、そして炎症と共にもしくは炎症に続いて起こるかも知れない傷害回復と組織修復の過程の複雑さから見て；炎症の機構に関する知識と分析法の改善を可能にする方法、組成物およびバイオアッセイに対する需要；そして最終的にはそれらに包含される新規の診断法と治療法に対する需要があったことは明瞭である。本発明は、このような需要を満たすための、並びに炎症と細胞成長過程に関係しているように見え、かつ他の方法では生産できなかったある種のタンパク質因子の生産手段を開発するための組換えＤＮＡ技術の適用法も考慮しである。本発明は、炎症と回復過程に関連するこれらの因子の分子機構の適用も考慮しである。発明の概観本発明は、その他のタンパク質因子を含まない新規のリンホカイン様またはサイト力イン様のタンパク質の生産を包含する組換えＤＮＡ技術の開発に関する。新規のＤＮＡ断片、ＲＮＡ、およびバイオアッセイ法も包含する。特に、本発明は、部分的に、Ｔ細胞で誘導されるリンホカイン／サイトカインに関するような分子の、構造的および／または機能的特徴を持つｍＲＮＡおよび／またはタンパク質をコードするＤＮＡ断片に関する。これらのタンパク質の特徴的な基は、分泌型タンパク質の嫌水性のＮ−末端リーダーもしくはシグナルペプチドの特徴を持ち、仮定的リーダーペプチドが切断した後で約８ｋＤ（キロダルトン）の予想される大きさを持ち、そして炎症応答に伴って機能を発揮することおよび／またはマイトジェン活性を持つことが示されている分泌型因子の新しく出現する一群と同じ重要なアミノ酸配列も持つ。本発明の一つの実施態様の実施においては、これらのＤＮＡ断片は適当な宿主で発現させることができ、この宿主によりリンホカイン様またはサイト力イン様タンパク質を生産する。本発明は、この発明のＤＮＡ断片のセンス鎖（ｓｅｎｓｅ　５ｔｒａｎｄ）の転写の結果生産されるｍＲＮＡにも関係する。本発明は、更に、いろいろなマイトジェン成分の、本発明のＤ　Ｎ　Ａ断片に関係する遺伝子から生産されるｍＲＮＡとタンパク質のヒト細胞内における発現に与える影響を定量するための新規のバイオアッセイ法も包含する。基本的な実施態様では、本発明はリンホカイン様つまたはサイト力イン様タンパク質をコードするＤＮＡ断片を包含するものであって；それらＤＮＡは下記のＤＮＡから成る群から選択される・Ａｃｔ−２［例えば、活性化した末梢血単核細胞（ＰＢ　Ｍ　Ｃ）のｍＲＮＡ、Ｎｏ、２のほぼ完全な長さく一〇、７ｋｂ）のｃＤＮＡクローン；以下、「完全な長さのＡｃｔ−２」という。」　：活性化したＴ細胞のｍＲＮＡのヒトのｃＤＮＡクローン、ｐａＴ　　７４４およびＰＡＴ　　４６４．並びに上述のヒトＤＮＡ断片の何れかへのハイブリッド形成により検出できる関連ＤＮＡ断片であって、その関連断片が関連しているリンホカイン様またはサイト力イン様タンパク質をコードしている断片。他の実施態様では、この発明は、本発明のＤＮＡのＲＮ人転写に関係する。これらのＲＮＡ転写物がコードしたリンホカイン様またはサイト力イン様タンパク質の完全分子を生産するために翻訳され得るのが好ましい。他の実施態様では、本発明はベクターと本発明のＤＮＡを包含する組換えＤＮＡ分子に関する。これらの組換え分子は完全な長さのＤＮＡと下記のベクターＤＮＡ類のいずれかを包含する分子を含む：バキュロウイルスーベクター（Ａｃ−核多角体病ウィルスの誘導体のようなもの：へｃＮＰＶ）：バクテリオファージスベクター（ｇｔｌＯ）；Ｍ１３　　バクテリオファージベクター：またはＲＮＡ転写ベクターｐＯＥＭ−１゜この発明の組換えＤＮＡは、クローンｐａＴ７４４のＤＮＡまたはクローンｐａＴ４６４のＤＮＡ、および下記のベクターＤＮＡ類のいずれかを包含する組換え分子も包含するニラムダ（ＧｔｌＯ）；およびＭ１３のベクター；および哺乳動物の細胞（例えば、Ｃ０３）中に挿入したＤＮＡ類を発現できる哺乳類の発現ベクター（ＣＤＭ−８またはＰＭＴ２−２のようなもの）。更に、他の実施態様では、本発明は本発明のＤＮＡで形質転換した細胞、好ましくは哺乳動物または虫の細胞を包含する。更に本発明は、本発明のＤＮＡ類で形質転換した酵母る。本発明の別の実施態様によると、形質転換するＤＮＡは細胞中で発現することができ、これにより細胞中に、このＤＮＡによりコードされているリンホカイン／サイトカイン様タンパク質を増やすことができる。本発明のこの見方の最も好ましい実施態様では、本発明のＤＮＡにより形質転換した細胞は、活性化Ｔ細胞により分泌される（不完全）型でのそのＤＮＡによりコードされたタンパク質を分泌する。更に別に、本発明は本発明のＤＮへの発現により、または本発明のＲＮＡの翻訳により製造される新規のリンホカイン／サイト力イン様タンパク質を包含する。これらのタンパク質は、分泌型であるのが好ましい（換言すれば、明白なシグナル配列を欠いているもの）。これらのタンパク質は、機能的研究のめに使用でき、そして定性的または定量的受容体結合検定のような別の生化学的および機能的分析のために精製できる。本発明のこの実施態様によれば、新規のリンホカイン／サイト力イン様タンパク質は本発明の未修飾のＤＮＡ類とｍＲＮＡ類のタンパク質生産物であるであろう；そしてそして修飾したまたは遺伝子工学的に処理したタンパク質生産物であろう。ＤＮＡ配列における遺伝子工学的変異の結果、修飾したリンホカイン／サイト力イン様タンパク質は、該当する自然発生の「野性型」とはアミノ酸配列で１または１箇所以上の相違点を持つであろう。本発明は、本発明のＤＮＡ断片によりコードされているペプチドに対して作製された新規の抗体を包含する。本発明のこの実施態様では、抗体はこのようなペプチドの配列を包含するリンホカイン／サイトカイン様タンパク質に特異的に結合するだろう；そしてそのタンパク質がその本来の（生理的に活性のある）構造をとる時のが好ましい。これらの抗体は、タンパク質因子の検出と精製に使用できる。更に、本発明は、本発明のＤＮＡ類に関係する遺伝子の発現を検出するための新規のバイオアッセイ法を包含する。一つのこのような実施態様によると、本発明のＤＮＡ類は関係するｍＲＮＡ類の、定常状態のレベルまたは誘導速度を定量するための試料として使用され得るだろう。このようなバイオアッセイは、例えば腫瘍細胞のいろいろな種類の同定のためにまたは炎症応答での遺伝子的欠損の確認のために役立つだろう。本発明のＤＮＡ類に関係する遺伝子は、Ｔ細胞中で（そして他のある種の造血細胞中でも）免疫活性化に対して非常に速く発現されるので、免疫系の活性化の非常に速い時期の標識として役立つ。かくして、本発明のこの観点に従うと、例えば組織が移植の結果拒絶されているかどうかを追跡するために、本発明のタンパク質因子に対する抗体を使用して、いろいろの種類の体液を、ルーチン的に試験できるだろう。Ｆｉｇ、Ｉ−１は、いろいろな型のヒト細胞から取り出した１ａｐ−標識した完全な長さのＣＤＮ試料とＲＮＡを使用したノーザンプロットを示しており、これは主にある種のマイトジェン刺戟した免疫細胞における、完全な長さの遺伝子発現の特異性を説明している。Ｆｉｇ、Ｉ−２は、正常Ｔおよび８９２３球類および半球類の活性化におけるｍＲＮＡの時制の発現を特徴付けており（ノーサンプロット法による）、Ａｃｔ− ２遺伝子の発現は、マイトジェンに応答して速やかに誘導されそして終了するの両方をすることを説明している。Ｆｉｇ、Ｉ−３は、配列決定の戦略、ＤＮＡ配列、並びに９２個のアミノ酸に該当する２７６個の塩基対の読み取り枠を含むＡ、　ｃ　ｔ　−２のｍＲＮＡの一〇、　　７ｋｂ　（キロ塩基）ｃＤＮＡクローンの推論したアミノ酸配列を描写している。Ｆｉｇ、Ｉ−４は、推論したアミノ酸配列から計算したカイトーヅーリトル（Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉ　ｔｔｌｅ）の嫌水性ブｏ−。トを提示しており、これはいわゆるリーダーまたはシグナルペプチドであるように見える極端に嫌水性のＮ末端を明らかにしている。Ｆｉｇ、Ｉ−５は、無細胞系で完全な長さのＡＣｔ−２のｃＤＮＡから生産されたＲＮＡ種の翻訳を示しており、計算分子量１０，１９９ダルトンに類似の見かけのＭｒ約１１，０００のの生産物を示しており、この生産物は分泌タンパク質がするように明らかにミクロゾーム壁内に移行している。Ｆｉｇ、１−６は、ヒトＤＮＡのゲノムのサザーンプロット法を行うために完全な長さのＡｃｔ−２ｃＤＮＡを使用した結果を描いており：ＡＣｔ−２と非常に合致している、比較簡単な切断パターンは単独コピー数または低コピー数の遺伝子を表している。Ｆｉｇ、Ｉ−７は、Ａｃｔ〜２の発現の時間経過を、他の２種の細胞の増殖における役目をするので知られている遺伝子：ｃ−ｆｏｓ、およびＣ−ｆｎｙｓと直接に比較したものであり；Ａｃｔ−２のｍＲＮＡはｃ−ｆｏｓと一緒に誘導され、その最高の発現時期はＣ−ｍ）’Ｓのそれと一致することを示している。表（Ｔａｂｌｅ）Ｉ−１は、１６ｓ−メチオニンまたはシスティンで放射線標識したＡｃｔ−２タンパク質のＮ末端アミノ酸配列の結果を示している。実験の部ＩＩＦｉｇ、ｌｌ−１は、ヒト末梢血Ｔリンパ球のマイトジェン刺戟で直ちに誘導された遺伝子を単離するのに利用した手順の概観を示している。Ｆｉｇ、ｌｌ−２は、休止期のヒト血液Ｔ細胞の刺戟で選ばれた４種の誘導遺伝子のｍＲＮＡ誘導の速度（ノーザンプロットとｃＤＮＡ試料による）を説明している。Ｆｉｇ、Ｉｔ−３は、ヒトヘルパーＴ細胞系のジャーカットにおける選択されたｃＤＮＡのいろいろな発現と調節を描いている。Ｆｉｇ、［１−４は、ヒト繊維芽細胞における選択されたｃＤＮＡの発現の（ノーザンプロット）分析を示している。表１１−１は、ｃＤＮＡクローニング研究により確認した、Ｔｍ胞のいろいろのマイトジェン−誘導遺伝子の特徴を纏めている。表（Ｉ−２は、ヘルパーＴ細胞系ジャーカットにおｊｊるおよびヒト繊維芽細胞におけるＴ細胞の誘導遺伝子の発現の分析を示している。実験の部ＩＩＩＦｉｇ、ｌｌｌ−１は、試料として選択したｃＤＮＡクローンを使用する末梢血Ｔ細胞におけるマイトジェン誘導遺伝子の（ノーザンプロット）分析を示している。Ｆｉｇ、　ｌｌｌ−２は、植物凝集素の不在下または存在下で、抗−ＣＤ２８モノクロナ一ル抗体またはイオノマイシンのどちらかで刺戟したＣＤ２８Ｄ　　Ｔ細胞におけるマイトジェン誘導遺伝子の（ノーザンプロット）分析を説明している。Ｆｉｇ、　ｌｌｌ−３は、シクロキシミドの不在下または存在下で、ジオクタタノイルーグリセリンまたはイオノマイシンで刺戟したＴ細胞系ジャーカットにおけるマイトジェン誘導遺伝子のＣノーザンプロット）分析を描いている。表１１１−１は、Ｆｉｇ、　ＩＩＩ　−１−３で使用した薬剤に対する応答におけるマイトジェン誘導遺伝子のためのｍＲＮＡ分析（ノーザンプロットデータ）を纏めている。実験の部１■ Ｆ’ｉｇ、ＩＶ−１は、無刺戟（対照）の細胞またはシクロへキシミドまたはシクロスポリンで処理した細胞のいずれかのヒト末梢血Ｔ細胞におけるｃＤＮＡクローンｐＡＴ　　４８４およびｐＡ’ｒ　　７４４のＲＮＡのノーザン分析を描いている。Ｆｉｇ、Ｏ７−２は、無刺戟（対照）の細胞または示した薬剤で処理した細胞のいずれかのジャーカット細胞におけるｐＡＴ　　４６４およびｐＡＴ　　７４４のＲＮＡのノーザン分析を描いている。Ｆｉｇ、ＩＶ−３は、配列決定の戦略、ヌクレオチド配列、並びに９２個のアミノ酸に該当する２７６個の塩基対の読み取り枠を含むｐＡＴ　　４６４のための予想されるアミノ酸配列を説明している。Ｐｉｇ、ＩＶ−４は、配列決定の戦略、ヌクレオチド配列、並びに９２個のアミノ酸に該当する読み取り枠を含むｐＡＴ　　７４４のための予想されるアミノ酸配列を説明している。Ｆｉｇ、ＩＶ−５は、ｐＡＴ　　７４４のためＤＮＡ配列のプライマー伸長分析を示していて；ヒト末梢Ｔ細胞からのＲＮＡにアニールしたｐＡＴ　　７４４の配列の１３５ないし１５２の位置に相補的なオリゴヌクレオチドを使用したのものである。Ｆ　ｉ　ｇ、　Ｉｖ　−６ハ、ｐＡＴ　　４６４、ｐＡＴ　　７４４によりコードされたタンパク質および構造的に関連するタンパク質のアミノ酸配列間の比較を示している。Ｆｉｇ、ＩＶ−７は、若干数の制限酵素で切断したヒト胎盤ＤＮＡにおけるｐＡＴ　　４６４とｐＡＴ　　７４４のサザーンプロット分析を示している。Ｆｉｇ、１Ｖ−８は、前骨髄（ＨＬ６０）細胞およびヒト扁桃腺Ｂ細胞におけるｐＡＴ　　４６４とｐＡＴ　　７４４のｍＲＮＡの発現を説明している（ノーサンプロット法による。）。Ｆｆｇ、ＪＶ−９は、いろいろな発現ベクターにおけるｐＡＴ　　４６４およびｐＡＴ　　７４４のＤＮＡで形質転換した哺乳動物（ＣＯ３）細胞における適当な分泌タンパク質の発現を示している（タンパク質の５ｉＳ−システィン標識による）。Ｆｉｇ、［Ｖ−１０は、いろいろな発現ベクターにおけるｐＡＴ　　４６４のＤＮＡで形質転換した哺乳動物（ＣＯ８）細胞における適当な分泌タンパク質の発現を示している（タンパク質の１６３−システィン標識による）。Ｆｉｇ、ＩＶ−１１は、ｐＡＴ　　７４４（７）ＤＮＡ７−形質転換したＣＯ８細胞培養物の上澄液中の分泌タンパク質を検出するために、ｐＡＴ　　７４４のペプチドのＣ−末端１２のアミノ酸に対して生じたウサギの抗体（Ｎ。、？２１）の使用を示している（ウェスターンプロット法）。Ｆｉｇ、１Ｖ−１２は、ｐＡＴ　　７４４のＤＮＡで形質転換したＣＯ８細胞培養物の上澄液中の分泌タンパク質を検出するために、ｐＡ’ｒ　　７４４のペプチドのＣ〜末端の１２のアミノ酸に対して生じたウサギの抗体（Ｎ。、７２２）の活性を示している（ウェスターンプロット法）。Ｆｉｇ、ＩＶ−１３は、ｐＡＴ　　４６４（７）ＤＮＡで形質転換したＣＯ８細胞培養物の上澄液中の分泌タンパク質を検出するために、ｐＡＴ　　４６４ペプチドのＣ−末端の１２のアミノ酸に対して起こしたウサギの抗体（Ｎ。、７２０）の使用を示している。Ｆ　ｉ　ｇ、　ＩＶ　−１４ｆｔ、ｐＡＴ　　４６４（７）ＤＮＡで形質転換したＣＯ３細胞培養物の上澄液中の分泌タンパク質との反応におけるｐＡＴ　　４６４ペプチドのＣ−末端の１２のアミノ酸に対して起こした２番目のウサギの抗体（Ｎｏ、７１９）の結果を示している。Ｆｉｇ、ＩＶ−１５は、マイトジェンで活性化したヒト末梢血Ｔ細胞がｐＡＴ　　４６４タンパク質を分泌することを示している（抗−ペプチド抗体によるウニスターンプロット法による。）。好ましい実施態様の詳細な説明本発明のＤＮＡは、ここで引用するＤＮＡにより例示される：完全な長さのＡｃｔ−２［即ち、−０，７ｋｂの活性化した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のｃＤＮＡ、Ｎｏ、　　２のクローン］：ｐＡＴ　　７４４またはｐＡＴ　　４６４のＤＮＡのクローン；およびこれらのＤＮＡ断片へのハイブリッド形成により検出できる関連ＤＮＡ断片。本発明の他のＤＮＡ群は下記のｃＤＮＡクローンを包含する：ｐＡＴ　　１２０；ｐＡＴ　　１２５；ｐＡＴ　　１２７；ｐＡＴ　　１２９；ｐＡＴ　　１３３；ｐＡＴ　　１３９；ｐＡＴ　　１４０Ｓ；ｐＡＴ　　１４０Ｌ；ｐＡＴ　　１５４゜ｐＡＴ　　１５８：ｐＡＴ　　１８９；ｐＡＴ　　２θ １；ｐＡＴ　　２０４；ｐＡＴ　　２２５；ｐＡＴ　　２２９゜ｐＡＴ　　２３２Ｓ、ｐＡＴ　　２３２Ｌ；ｐＡＴ　　２３７゜ｐＡＴ　　２３９；ｐＡＴ　　２４３；１）ＡＴ　　２７０゜ｐＡＴ　　２７６；ｐＡＴ　　２８１；ｐＡＴ　　３８３；ｐＡＴ　　４０２；ｐＡＴ　　４θ７；ｐＡＴ　　４１６：ｐＡＴ　　４２８；ｐＡＴ　　４６６；１）ＡＴ　　４７８；ｐＡＴ　　４８３：ｐＡＴ　　４８５；ｐＡＴ　　４９６；ｐＡＴ　　５１６；ｐＡＴ　　５４２；ｐＡＴ　　５６３；ｐＡＴ　　５９１：ｐＡＴ　　５９４；ｐＡＴ　　６０３；ｐＡＴ　　６０７；ｐＡＴ　　６２０．およびｐＡＴ　　７３０゜この発明のＤＮＡ類は、下記のものを包含する組換え分子も含む：完全な長さのＡｃｔ−２ＤＮＡおよびバキュロウィルス−ベクターＤＮＡ　（プラスミドｐＡｃ−Ａｃｔ２、および組換えバキュロウィルス、ｖＡｃ−ＡＣｔ２により例示される。）；完全な長さのＡｃｔ−２のＤＮＡまたはｐＡＴ　　７４４またはｐＡＴ　　４６４のＤＮＡおよびバクテリオファ−９ス完全な長さのＡｃｔ−２のＤＮＡまたはｐＡＴ　　７４４またはｐＡＴ　　４６４のＤＮＡおよびＭ１３バクテリオファージ（Ｍｌ　３ｍｐ　１　９により例示される）；完全な長さのＡＣｔ−２のＤＮＡおよびＲＮＡ転写ベクターｐＧＥＭ −１；およびｐＡＴ　　７４４またはｐＡＴ　　４６４のＤＮＡおよびＣＯ８細胞中で挿入したＤＮＡ類を発現できる哺乳動物発現ベクター（ＣＤＭ− ８またはＰＭＴ２−２により例示される）。センス鎖ＤＮＡヌクレオチド配列、およびコードされている予想した最初の（ｐｒｉｍａｒｙ）タンパク質配列は、完全な長さのＡ　Ｃ　’ｔ　−　２のＤＮＡのためにＦｉｇ．Ｉ−３に示しである。実験の部Ｉに示しであるように、約−０、７ｋｂの同じ大きさの挿入部を持つ４個のクローンを確認した。それらの全ては同じ０，９ｋｂｍＲＮＡにハイブリッド形成する。使用した配列決定の戦略、得られたヌクレオチドの配列およびコードしたタンパク質のための予想アミノ酸配列を、ｐＡＴ　　７４４のためにＦｉｇ．ＩＶ−４にモしてｐＡＴ　　４３４（７）ためニＦ　ｉ　ｇ．　ＩＶ　−　８　ニ示シテある。これらのＤＮＡ類、完全な長さのＡｃｔ−２（　　０。７ｋｂ）、およびｐＡＴ　　７４４およびｐＡＴ　　４６４クローンはこの発明の最も好ましいＤＮＡである。完全な長さのＡｃｔ−２のｃＤＮＡおよびｐＡＴ　　７４４のｃＤＮＡは根本的に同じ遺伝子から誘導されているように見える。もっと特定していうと、２個のｃＤＮ八配列配列覚的に検討すると、タンパク質をコードしている領域内ではたった２個の塩基配列のみが異なっているのみであって、換言すれば：完全な長さのＡｃｔ−２（Ｆｉｇ．Ｉ−３を参照）では塩基Ｎｏ．１６７はＣであり、そして１７１はＧである。一方、該当するｐＡＴ７４４配列（Ｆｉｇ．ｌＶ〜４）では塩基１８１はＴでありそして１３５は八である。これらの違いは、予想されるアミノ酸番号２０は完全な長さのＡｃｔ−２とｐＡＴ７４４、各々、においてＰｒｏとＬｅｕであるようにし、一方他の塩基の変化はアミノ酸配列を変更させない。このような相違がクローンが取られた２種の異なる個体の遺伝子における遺伝性変異（換言すれば、多型性）に由来するということはあり得る。ビオネット（Ｂｉｏｎｅｔ）（最近発売された）を使用するコンピュータ検索は、Ｉ）ＡＴ　　４６４に非常に似ているクローンは、刺戟したヒト扁桃腺リンパ球から以前に単離されており（ＩＶ−４１）　、ｐＬＤ７８と呼ばれている。クローンｐＬＤ７８は、クローンｐＡＴ　　４６４より更に５′から７ヌクレオチド伸長しておりそして配列の比較は両方のクローンの間の５ヌクレオチドの相違を示しているが、そのどれもがアミノ酸の予測配列に影響していない。ヌクレオチド配列におけるこれらの違いは異なるドナーの遺伝子間の多型性を反映させるだろう。ｐＡＴ　　７４４とｐＡＴ　　４６４のための配列の比較は、ヌクレオチドレベルで驚（べき類似性（４５％）およびアミノ酸レベルでのより高い相同性（５６％、Ｆｉｇ、　ＩＶ−６Ａ）をすら示している。共通の調節特異性に加えて、これらの一つの遺伝子は共通の祖先遺伝子から誘導されたのであろう；そしてそれらがコードしているタンパク質は機能的に同し役目をするのであろう。完全な長さのＡｃｔ−２、ｐＡＴ　　７４４またはｐＡＴ　４６４クローンから誘導された試料を使用するゲノムのヒトＤＮＡ類のサザーンプロット分析は（各々、Ｆｉｇ、ｌ−１６、ＩＶ−７およびＩＶ６）は、Ａｃｔ−２／ｐＡＴ　　７４４およびｐＡＴ　　４６４と非常に合致している、比較簡単な切断パターンは単独コピー数または低コピー数の遺伝子を示している。明らかに、ｐＡＴ　　４６４と７４４は、それらの顕著な類似性に係わらず、互いにクロス−ハイブリッド形成をしない。か（して、ハイブリッド形成法に本発明のＤＮＡ類またはＲＮＡ類、特にここで掲げた最も好ましいＤＮＡ類を使用することにより、この技術の熟練者は、不当な実験をすることなしに、本発明の範囲内に・入る他のリンホカイン／サイト力イン様タンパク質を探すためにゲノムのまたはｃＤＮＡライブラリーをスクリーンできる。ベクターと本発明の他のＤＮＡ類を包含する組換えＤＮＡ分子も、本発明の範囲内に入る。好ましい組換え分子は、完全な長さのＡｃｔ−２のＤＮＡおよびと下記のＤＮＡ類のいずれかを含む分子を包含する：バクテリオファージスベクター（ｇｔｌＯ）；Ｍ１３バクテリオファージのベクター：またはＲＮＡ転写ベクターｐＯＥＭ −１゜この発明の好ましい組換えＤＮＡ類は、クローンｐＡＴ　７４４またはｐＡＴ　　４６４のＤＮＡおよび下記のいずれかのベクターＤＮＡ類を含む組換え分子も包含する：λベクター（例えば、ｇｔｌＯ）；Ｍ１３ベクター。この発明の最も好ましい組換え分子は：完全な長さのＡｃｔ−２のＤＮＡと下記のベクターＤＮＡのいずれかを含む分子：バキュロウィルスベクター（ｐＡｃ− Ａｃｔ２、多角プラスミドｐＡｃ　３７３から誘導されたプラスミド；ｐＡｃ− Ａｃｔ２から誘導された組換えバキュロウィルス、ｖＡｃ−Ａｃｔ２および野性型ＡｃＮＰＶ株Ｅ２　ＤＮＡを含む）：を包含する。他の最も好ましい組換え分子は、ｐＡＴ　　７４４またはｐＡＴ　　４６４のＤＮＡおよび哺乳動物細胞（例えば、Ｃ０５）中に挿入したＤＮＡ類を発現できる哺乳動物発現ベクター（ＣＤＭ−８またはＰＭＴ２−２）を包含するそれらである。完全な長さのＡｃｔ−２ヒトｃＤＮＡは、実験の部Ｉに記述したように、合成され、クローンされそして単離される。完全な長さのＤＮＡを確認するために、λ ｇｔ１０（１−１４）中に組み立てたＨＵＴ−１０２Ｂ２ｃＤＮＡライブラリーからの１０＠個のファージプラークを、ランダムブライミング法（ｒａｎｄｏｍ　ｐｒｉｍｉｎｇ　ｒｎｅｔｈｏｄ’）（１−１５）を使用して、標識した部分長（−０，４ｋｂ）のＡｃｔ−２のｃＤＮＡ挿入でスクリーンした。完全な長さく−０，７ｋｂ）のＤＮＡ配列は、９２個のアミノ酸に該当する２７６個の塩基対の読み取り枠を含有する。この読み取り枠は、５’ＡＵＧをもっとも利用しており、これは真核生物の翻訳の開始に概して利用されるものである。更に、第１のＡＵＧの領域は、真核生物の開始部位のために決められる共通配列と高い相同性を持つ（Ｉ−１７）、このｃＤＮＡはｍＲＮＡの３′末端へ伸長しているように見える。というのは、これは古典的なＡＡＵＡＡＡポリアデニル化シグナル（１−１８）とポリＡ末端の開始を持つからである。本発明のヒトＤＮＡ類は、合成され、クローンされそして実験の部ＩＩに記載しであるように、活性化したＴ細胞からのｍＲＮＡを使用する「引抜き」（ｓｕｂｔｒａｃｔｉｏｎ）クローニングとハイブリッド形成の工程により単離した。この戦略はＦｉｇ、ｌｌ−１に纏めて記載しである。ヒト末梢血Ｔｍ胞を、マイトジェンである植物凝集素（ＰＨＡ）およびホルボール　１２−ミリステート　１３−アセテ−）　（ＰＭＡ）並びにタンパク質合成阻害剤であるシクロへキシミドの存在下、４．５時間にわたりポリクローナルに活性化する。この方法は、タンパク質新規合成に依存しないで誘導されるそれらの遺伝子によって限定される初期応答の分析に焦点を当てるものである。現在まで、引き抜かれたλｇｔｌＯのｃＤＮＡライブラリーの約４０％が、引き抜かれた試料でスクリーニングされた。引き抜かれた試料にハイブリッド形成した精製ファージは、活性化したおよび休止期のＴ細胞ｍＲＮＡから合成したｃＤＮＡ試料がファージの二重のフィルターに使用される確認スクリーンにかけられる。最後に、引抜きと確認スクリーニングの両方法により誘導ｃＤＮＡを持っていると判断された５２８フアージが選別された。実験の部ＩＩに記載したように、更に分析して６６個の特異的ｃＤＮＡクローンを確認した。それらの大多数が別個の遺伝子を表しているように見える（表１１ −１の脚注を参照）。新規の誘導遺伝子クローンの４４個を更に検討した（実験の部１１）。この発明のＤＮＡ類を例示するこれらのクローンは：ｐＡＴ　　１２０；ｐＡＴ　　１２５；ｐＡＴ　　１２７：ｐＡＴ　　１２９；ｐＡＴ　　１３３．ｐＡＴ　　１４０３；ｐＡＴ　　１４０Ｌ：ｐＡＴ　　１５４：　　ｐＡＴ　　１５８゜ｐＡＴ　　１８９；ｐＡＴ　　２０１；　　ｐＡＴ　　２０４；ｐＡＴ　　２２５：ｐＡＴ　　２２９；１）ＡＴ　　２３２Ｓ；ｐＡＴ　　２３２Ｌ；ｐＡＴ　　２３７．ｐＡＴ　　２１９゜ｐＡＴ　　２４３；ｐＡＴ　　２７０：ｐＡＴ　　２７６；ｐＡＴ　　２８１．ｐＡＴ　　３８３；ｐＡＴ　　４０２；ｐＡＴ　　４０７．ｐＡＴ　　４１６；ｐＡＴ　　４２８：ｐＡＴ　　４６４；ｐＡＴ　　４６６；ｐＡＴ　　４７８；ｐＡＴ　　４８３；ｐＡＴ　　４８５．ｐＡＴ　　４９６゜ｐＡＴ　　５１６；ｐＡＴ　　５４２：ｐＡＴ　　５６３；ｐＡＴ　　５９１；ｐＡＴ　　５９４；ｐＡＴ　　６０３；ｐＡＴ　　６０７；ｐＡＴ　　６２０；ｐＡＴ　　７３０およびｐＡＴ　　７４４を包含する。いろいろのＴ細胞活性化剤に応答して誘導される９個の新規のマイトジェン誘導遺伝子を、そのような遺伝子を調節する経路の多様性を評価するために、検討した（実験の部ＩＩＩ　）。これらの９個の遺伝子は、ｐＡＴ２３７；ｐＡＴ　　５６３；ｐＡＴ　　２２９；ｐＡＴ　　１２０；ｐＡＴ　　１５４：ｐＡＴ　　２２５；ｐＡＴ　　４１６であり、それらはこの発明の好ましいＤＮＡであり、そしてｐＡＴ　　７４４とｐＡＴ　　４６４であり、これらは本発明の最も好ましいＤＮＡである。引き抜いたｃＤＮＡライブラリーを起源にして誘導したクローンｐＡＴ　　４６４とｐＡＴ　　７４４を、更に詳しく特徴付けた（実験の部ＩＩを参照）。はぼ完全な長さのｃＤＮＡクローンをｃＤＮＡライブラリーから単離した。そしてこのライブラリーは、シクロへキシミドの存在下、ＰＨＡ−ＰとＰＭＡで４．５時間にわたり刺戟したヒト末梢血子細胞から抽出したＲＮＡから誘導したものである。このｃＤＮＡライブラリーは、記述したように（ＩＶ−２９）オリゴｄＴブライミング（ｐｒｉｍｉｎｇ）で構成し、続いてλｇｔｌＯにクローンした（ＩＶ−３０）。クローンｐＡＴ　　４６４は、７９３ヌクレオチド長であり、そしてクローンｐＡＴ　　７４４は６５９ヌクレオチド長である（５′末端におけるＥｃｏ　　Ｒ１リンカ−を含む。）。ｐＡＴ　　７４４のためブライマー伸長分析は、単離したクローンは殆ど完全な長さのｃＤＮＡを表していることを確証した（Ｆ　ｉ　ｇ、　１ｖ−５）。真実のｍＲＮＡ配列の５′末端の約１０のヌクレオチドがこのｃＤＮＡクローンに欠けていることを確定できる。最初のＡＴＧは、ｐＡＴ　　４６４およびｐＡＴ　　７４４では各々８４と７４の位置にある。各々の場合について、９２個のアミノ酸の読み取り枠が続く。１）ＯＥＭ−１ベクターにおける完全な長さのＡＣｔ−２ＲＮＡの転写のためのＤＮＡ鋳型を、下記のようにして製造した（実験の部工を参照）ニー０．７ｋｂの完全な長さのＡｃｔ−２のｃＤＮＡをＡｖａＩで切断し、クレノーウとｄＮＴＰｓで充填し、次いでＥｃｏ　　Ｒ１で切断して、はぼ完全な長さの断片を生成せしめ、それから人工の５’　Ｇ−Ｃ末端を取り除いた。この断片を、Ｓｍａ　　ＩとＥｃｏ　　Ｒ１で切断しておいたＰＧＥＭ−１〔プロメガ　バイオチック（Ｐｒｏｍｅｇａ　Ｂｉｏｔｅｃ））中にサブクローンした。完全な長さのＡｃｔ−２のｃＤＮＡを含むバキュロウィルスベクターの構成物は、ｐＡｃ−Ａｃｔ２を生成するためにバキュロウィルス多角プラスミドｐＡｃ　３７３（１−１６ａ）のＢａｍＨ１部位中に一〇、７ｋｂのＡｃｔ−２のｃＤＮＡをクローニングすることにより、この０．７ｋｂのｃＤＮＡから製造した。それによって、完全な長さのＡｃｔ−２のｃＤＮＡを多角プロモーターの支配下に置いた（実験の部工も参照）。ＳＦ９細胞を、ｐＡｃ−Ａｃｔ２および野性型ＡｃＮＰＶ株ＥＩ　ＤＮＡで共トランスフェクションした。組換えしたバキュロウィルスのｖＡｃ−Ａｃ　ｔ　２を単離し、プラークハイブリッド形成の連続的な繰り返しの手順により精製した（Ｉ−１６ａ）。ｐＡＴ　　４６４またはｐＡＴ　　７４４のＤＮＡと哺乳動物の発現ベクター（ＣＤＭ−８またはＰＭＴ　２−２により例示される）を含み、挿入したＤＮＡをＣＯ８細胞中で発現できる組換えＤＮＡの構成は、実験の部ｔＶに記載されている。組換え体は、下記のいずれかのベクターＤＮＡを含んでいた：ＣＤＭ−８［マサチューセッツ州、ポストン市、マサチューセラツ一般病院におけるブライアン種から得られた、モしてビー、シード。Ｎａｔｕｒｅ　　３２９，８４０−８４２（１９８７）に記載されているコ　；またはＰＭＴ２−Ｔ［マサチューセッツ州、ケムブリッジ、遺伝研究所から取得；このベクターの関連するそれ以前の変換は、ニーチャン　ヤング本発明のＤＮＡとセンス鎖（ｓｅｎｓｅ　５ｔｒａｎｄ）ＲＮ　Ａは、本発明のタンパク質生産法と組み合わせて、実質的に純粋なリンホカイン／サイト力イン様タンパク質の大量を生産するために、使用できる。更に、かくして生産した実質的に前駆体のリンホカイン／サイト力イン様タンパク質は、よく知られている技術を使用して、いろいろな体液と組織試料中のこれらのタンパク質のための受容体の存在を確認するために診断的検定で使用できる。か（して、本発明は細胞、好ましくは哺乳動物または虫の細胞であって、本発明のＤＮＡにより形質転換されており、かつその細胞中でその形質転換するＤＮＡが発現できる細胞も包含する。本発明のこの観点の最も好ましい実施態様では、本発明のＤＮＡにより形質転換された細胞は、そのＤＮＡによりコードされているタンパク質を、活性化したＴ細胞により分泌される（不完全な）型で分泌する。本発明は、本発明のＤＮＡの発現により、または本発明のＲＮＡの翻訳により生成する新規のリンホカイン／サイト力イン様タンパク質も包含する。好ましくは、これらのタンパク質は分泌型（換言すれば、明らかなシグナル配列を欠如している。）であるだろう。これらのタンパク質因子は機能の研究に使用でき、定性的および定量的受容体結合検定のような別の生化学的および機能的分析のために精製することもできる。完全な長さのＡ、　Ｃｔ　−２のＤＮＡを含む組換え分子で形質転換した虫の細胞は実験の部Ｉに記載したようにして製造した。簡単に述べると、精製した、組換えバキュロウィルス、ｖＡｃ−Ａｃ　ｔ　２のプラークは、標準法に従ってＳＦ９の細胞を感染するのに使用される。組換えした完全な長さのＡｃｔ−２／バキユロウイルスベクターを、ＳＦ９細胞内に発現させて、上澄液中に豊富なＡＣｔ−２タンパク質を生産する。更に、放射線標識したタンパク質のＮ−末端配列は、予想とおりにシグナルペプチドが切断したことを示している。ｐＡＴ　　７４４またはｐＡＴ　　４６４のＤＮＡで形質転換し、且つｐＡＴ　　７４４またはｐＡＴ　　４６４のタンパク質を分泌する哺乳動物細胞は、実験の部ＩＶに記載されている。簡単に述べると：　ＣＯＳ細胞を、ＣＤＭ−８またはＰＭＴ２−Ｔのいずれかの発現部位に挿入したｃＤＮＡクローンで、標準ＤＥＡＥ−デキストラン法を使用してトランスフェクションした。新規のタンパク質は、標準の、よく知られた方法を使用してＤＮＡ構成をトランスフェクションした後の細胞のＢｓ５−システ °イン標識化により視覚化した。タンパク質生産物の大きさは、リーダーペプチドが切断した後はｃＤＮ人配列配列予測されるように適当である。この発明は、本発明のＤＮＡ断片によりコードされているペプチドに対して作られた新規の抗体も包含する。本発明のこの実施態様は、ｃＤＮＡ配列により予想されるようなペプチドの配列を含有するｐＡＴ　　７４４またはｐＡＴ　　４６４−リンホカイン／サイトカイン様タンパク質に特異的に結合する抗体を含むウサギの抗血清により例示され、この抗体はｐＡＴ　　７４４およびｐＡＴ４６４タンパク質の両者の末端の１２個のアミノ酸を表す合成ペプチドに対して起こった。これは、ペプチド免疫学の標準法に従い、化学的にペプチドを合成し、それらを担体（ＫＬＨ）に結合し、そしてこの　担体＋ペプチド　をウサギに注射することにより行われた。これらの抗体は、タンパク質因子の検出または精製に使用できる。Ｆｉｇ、ＩＶ −１１とＩＶ−１２は、ｐＡＴ７４４ペプチドに対して発生した２種の異なるウサギの抗体（７２１と７２２）のウェスタンプロットにおける使用を示している。ｐＡＴ　　４６４に対する抗体を使用する類似の研究を、Ｆｉｇ、ＩＶ−１３とＩＶ−１４に示した。これらの図（Ｆｉｇ、）から明らかなように、適当な分泌因子は、合成ペプチドにより免疫化したウサギからの抗血清により検出される。更に、この発明は、本発明のＤＮＡに関する遺伝子の発現を検出するための新規のバイオアッセイ法を包含する。ある模範的実施態様では、本発明のＤＮＡは、関連するｍＲＮＡの、定常状態レベルもしくは誘導の速度を定量するための試料として使用された。完全な長さのＡｃｔ−２を使用するか、またはｐＡＴ７４４もしくはｐＡＴ　　４６４のＤＮＡを使用する本発明のこれらのバイオアッセイのための方法、および標準ノーザンプロット技術は、各々、実験の部■、または１１−　ＩＶに詳細に記述されている。この技術における熟練者は、このような方法が、不当な実験なしに、単離した細胞中のまたはいろいろの組織中のいずれかにおける、リンホカイン／サイト力イン様タンパク質のための遺伝子発現の分析に容易に適用できることを理解するであろう。このようなバイオアッセイは、例えば、腫瘍細胞のいろいろな種類の同定のためにまたは炎症応答での遺伝子的欠損の確認のために役立つだろう。更に詳細を追加することなしに、前出の記述、そして下記の実験の部の方法を使用すれば、本発明をその一杯の範囲迄利用できる。実験の部に開示した材料は、特に断りのない限り説明の目的のために開示されたちであり、従って添付した請求の範囲を如何なる方法でも限定するように構成されてはいない。実験の部Ｉ新規の免疫活性化遺伝子の確認、クローニング、および特徴付けＡｃｔ−２と表示した新規の免疫活性化遺伝子を、活性化Ｔ細胞ライブラリーの分別（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ）　ハイブリッド形成スクリーニングにより確認した。遺伝子は、植物凝集素によるＴ細胞の活性化、ブドウ状球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）　Ｃｏ　ｗ　ａ　ｎ　　ＩによるＢ細胞の活性化、およびリボ多糖による半球の活性化に続いて急速に含まれる。完全な長さをコードしている領域を含むｃＤＮＡを単離した。推論されたアミノ酸配列は、重量マトリックス評点法（ｗｅｉｇｈｔ　ｍａｔｒｉｘ　５ｃｏｒｅ）　　によりシグナルペプチドと予測される非常に嫌水性のＮ−末端を含む、９２個のアミノ酸の読み取り枠を予測する。バキュロウィルスの発現系を使用して、この遺伝子は分泌タンパク質をコードしていることが証明された。従って、Ａｃｔ−２は新規のサイト力インを表現していることは可能である。Ａｃｔ−２と実質的に同等の遺伝子から誘導された他のｃＤＮＡクローンも単離され、特徴付けされた（参照：下記の実験の部１１　ＩＩＩおよび１ｖ）。このクローンはｐＡＴ　　７４４と呼ばれる。序論Ｔ細胞は、免疫応答の調節とエフェクター機能において重要な役目をする。抗原またはマイトジェンレクチンによる刺戟の結果、細胞内のカルシウムの増加、タンパク質のリン酸化、そしてホスホイノシトールのターンオーバーの増加を含む一連の生化学的事象が起こる（参照；Ｉ−１、ｌ−２）。これら事象は、細胞遺伝子の活性化および休止期の細胞により発現されないかまたは非常に弱くしか発現されない細胞タンパク質の生産に至るシグナルを発生する。これらの誘導タンパク質は、ヘルパー、サプレッサー、または細胞毒のＴ細胞機能をメジニーとするエフェクターＴ細胞の増殖と分化のために重要である。マイトジェン刺戟に応答して誘導されるＴリンパ球中の新規の遺伝子を特徴付けする需要があり、この需要は、その特徴付けの結果として、それらの機能的遺伝子の生産物を確認し、Ｔ細胞機能と免疫応答のメジエートにおけるそれらの役目を特徴付けすることを目標としている。マイトジェン刺戟により活性化された遺伝子を確認するために成功できる手法は、分別（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ）ハイブリッド形成の技術を使用することである（１−３−１−８）。この方法の成功は、休止期のおよび活性化された細胞中で発現される遺伝子の間には広範囲の重複があるというものの；各々の状態は、個々の活性化状態の特徴あるタンパク質をコードしているかなり豊富にあるｍＲＮＡの少数により特徴付けられることに依存している。この部は、ｃＤＮへのクローニング、配列決定（ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）、および活性化した正常Ｔ細胞ｃＤＮＡライブラリーの分別スクリーニングにより確認された、そしてＡＣｔ−２と表示した新規の遺伝子の特徴付けを記ＢＭＣ）を健康な志願者から採取し、ファイコル−ハイパキュ（Ｐｉｃｏｌ　１（ｙｐａｑｕｅ）　　Ｃｘルエスエム、リットン　バイオネチックス（ＬＳＭ、Ｌｉｔｔｏｎ　Ｂｉｏｎｅｔｉｃｓ）の勾配遠心分離により単離した。細胞は、概して、１０％の胎児ウシの血清（ＦＢＳ）　、Ｌ−グルタミン、および抗生物質を含有するＲＰＭ１１６４０培地中、１−２Ｘ１０＠細胞／ｍ１で培養した。特に指示のない限り、植物凝集素〔Ｅ−ＰＨＡ、ブーロー−ウェルカム（Ｂｕｒｒｏｕｇｈｓ −１ｉ１ｅｌ　ｌｃｏｍｅ）〕およびホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ。シグマ社）を各々、５μｇ／ｍｌおよび５０ｎｇ／ｍｌで使用した。８９２８球は、臭化２−アミノエチルイソ−チウロニウムで処理したヒツジの赤血球と共にＰＢＭＣ（４％の非特異的エステラーゼ陽性細胞）を培養し、ロゼツトが集中した細胞を除くことにより精製した。ある実験では、半球類をプラスチックの粘着により消尽した。このような細胞は、８０％表面１ｇ陽性、ラテックス非摂取性であり、それらをフドウ状球菌（Ｓｔａ　ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　　ａｕｒｅｕｓ）　Ｃｏｗａｎ　　Ｉ　　（ＳＡＣ。カルビオケミーベーリング社（Ｃａｒｂｉｏｃｈｅｍ−ＢｅｈｒｉｎｇＣａｒｐ、　））の１：１０，０００の希釈液の存在下、３０分ないし７２時間培養した。半球類は、ＰＢＭＣのエルトリエージタン（ｅｌｕｔｒｊａｔｉｏｎ）により製造し、ギムザ染色法とフローサイトメトリーにより９５％の純度であった。細胞を、１０ｕｇ／ｍｇのリボ多糖（Ｌ　Ｐ　Ｓ　、　　シグマ社）の存在下培養した。細胞系、Ｔ細胞系（ジャーカット、ＨＵＴ−１０２Ｂ２、Ｍｏ　１　ｔ−４，ＣＥＭ、およびＨＵＴ−７８）　、Ｂ細胞系（Ｒａｊｉ、Ｓ３．Ｎａ１ｌ−１，８３９２，０Ｍ４６７２．Ｕ２６６、および５ＵＤＨＬ−６）　、および骨髄細胞系（Ｋ５６２およびＵ９３７）を、１０％のＦＢＳを含有するＲＰＭＩ　　１６４０中に保持した。繊維芽細胞系４３１２および４４２９　（１−９）、および骨肉腫細胞系５８８７（１−９）は１５％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ中１こ保持した。ヒト胎児の繊維芽細胞ＨＦＬ−１細胞を、１０％ＦＢＳを含有するＤＨＥＭの２５ｍ１中で、１７’５ａｎ”の細胞培養フラスコ当り、約ｌＸｌ０’の密度になるように通過せしめ、３７℃で７日の期間にわたり合流（ｃｏｎｆ　１ｕｅｎｃｅ）するようにして生育した。消尽した培地を除くことにより細胞を刺戟し、それを２０％のＦＢＳを含有する新鮮なりＥＭで置換した。初期通過（ｅａｒｌｙ　ｐａｓｓａｇｅ）のＨＦＬ−１細胞を全ての試験に使用した。活性化したＰＢＭＣからのｃＤＮＡライブラリーの作製、　前に記述したように（１−１０）　、ＰＨＡとＰＭＡでＰＭＢＳを活性化し、全ての細胞ＲＮＡを抽出しく１−１１）、そしてｍＲＮＡをオリゴ（ｄＴ）セルロースクロマトグラフィーにより単離した。二重鎖のｃＤＮＡをオカヤマおよびバーブ（１−１０，ｌ −１２）の手順に準じて作製した。ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング、　誘導のまたは非誘導のＰＢＭＣのいずれもから誘導した、′２Ｐ−標識しである初めのｃＤＮＡを使用して、グルンスタインとホグネス（１−１３）の方法で、ライブラリーを２回スクリーニングした。ニトロセルロースの繊維を、０．１ＭのＮａＨｔ　ＰＯ４ｐＨ６，８，０，８５ＭのＮａＣ１，１ｍＭのＥＤＴＡ、１０Ｘ　（デンハルト（Ｄｅｎｈａｒｄｔ’　ｓ）溶液）、０．１％のＳＤ３．１００μｇ／ｍｌの鮭精子ＤＮＡおよび１０ｕ　ｇ／ｍ　１のポリ（ｒＡ）（ハイブリッド形成の前の溶液）中で６５ ℃で３時間保持した。次いで、ろ液を、１０％のデキストランスルヘートと放射活性の試料を含有する新鮮なハイブリッド形成前の溶液を使用して、ハイブリッド形成した。濾紙を、２ＸＳＳＣ，０，５％ＳＤＳ中６５℃で２０分間にわたり４回洗浄しそして０．１ＸＳＳＣ，０，１％ＳＤＳを使用して６５℃で３０分間にわたり２回洗浄しそしてオートラジオグラフィーした。ＨＵＴ−１０２Ｂ２のｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング、　完全な長さのｃＤＮＡを確認するために、λｇｔ　１０　（Ｉ−１４）に組み込んだＨＵＴ− １０２Ｂ２からのｃＤＮＡライブラリーからの１０’個のファージ・プラークを、ランダムブライミング法（ｒａｎｄｏｍ　ｐｒｉｍｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ）　　（１−１５）を使用して標識した部分長のＡｃｔ−２のｃＤＮＡ挿入部でスクリーンした（１−１５）。ファージのＤＮＡをニトロセルロースに結合せしめ、５０％のホルムアミド、５ ×〔ボンハルト（Ｄｅｎｈａｒｄｔ’　ｓ）溶液）、５ｘＳＳＰＥ、Ｏ１１％ＳＤＳおよび１００μｇ／ｍｌ鮭精子ＤＮＡ中、４２℃に一夜保ってハイブリッド形成した。濾紙を、２ＸＳＳＣ，０，１％ＳＤＳ中２０分間にわたるので３回そして０．ｌＸ５ＳＣ，０゜１％ＳＤＳを使用して５６℃で３０分間にわたるので２回洗浄しそしてオートラジオグラフィーした。ＤＮＡの配列決定（ｓｅｑｕｅｎｃｉｇ）　、配列決定は、Ｍ１３ファージＤＮＡとシークエナーゼ（Ｓｅｑｕｅｎａｓｅ＞　　Ｃ米国、バイオケミカル・コーポレーション〕を使用し、製造者の推薦に従って、ジチオキンチェーンターミネータ−法（ｄｉｄｅｏｘｙ　ｃｈａｉｎ　ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ）により行った〇ノーザンプロット分析、　　ホルムアルデヒドゲル上、全細胞のＲＮＡ（１０ａｇ）またはポリΔ＋ＲＮＡ　（４−５μｇ）を電気泳動し、ニトロセルロースの濾紙〔シュライヒエル　アンド　シュエル（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ　ａｎｄ　５ｃｈｕｅｌｌ）に移動し、そしてｔｆｆｉｐ−標識したＡｃｔ−２のｃＤＮＡにハイブリッド形成した。ゲノムのサザーンプロット、　　Ｕ９３７または４２８細胞からの１０ａｇのＤＮＡを、示した酵素で切断し、１％アガロースゲル上で分析し、そして下記の製造者のプロトコールに従って、「遺伝子スクリーン・プラス・ナイロンＭ（Ｇｅｎｅ　５ｃｒｅｅｎ　Ｐｌｕｓ　ｎｙｌｏｎ　ｍｅｍｂｒａｎｅｓ）　（シュボン社製）」に移してからハイブリッド形成した。ｉｎ　　ｖｉｔｒｏ転写と無細胞翻訳、　　−０，７ｋｂのＡｃｔ−２のｃＤＮＡを、Ａｖａ　　Ｉで切断し、クレノーとｄＮＴＰｓで充填し、そしてＥｃｏ　　ＲＩで消化して、人工の５’　Ｇ−Ｃ末端を除いであるほぼ完全な長さの断片（挿入部の３′末端を通して２７塩基）を得た。この断片を、Ｓｍａ　　ＩとＥｃｏ　　Ｒ１で切断ししであるｐＧＥＭ−１（プロメガ・バイオチック（ＰｒｏｍｅｇａＢｉｏｔｅｃ））にサブクローンした。ＲＮＡを、プロメガ・バイオチック（Ｐｒｏｍｅｇａ　Ｂｉｏｔｅｃ）からの指示に従って、ＳＦ３またはＴ７プロモーターを使用して両方の鎖から転写した。この転写反応は、ＤＮＡ鋳型をＲＮＡ　ａ　ｓ　ｅのないＤＮＡａ　ｓ　ｅで分解することにより終わりとした。そして、ＲＮＡをフェノール／クロロホルムで抽出し、エタノールで沈積した。ＲＮＡは、ｍ５３−システィン（＞６００　　Ｃｉ／ｍｍｏ１．　アメ−ジャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ））を使用する、ウサギの網状赤血球とコムギ胚芽の溶解物〔プロメガ・バイオチック（Ｐｒ’ｏｍｅｇａ　Ｂｉｏｔｅｃ）かアメ−ジャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）のいずれかから購入〕を使用して翻訳した。ある種の翻訳は、イヌの膵臓のミクロゾーム膜の存在下行った。翻訳生成物を１５％ポリアクリルアミドゲル上分析した。Ａｃｔ−２のｃＤＮＡの発現、　　　ｐＡｃ−Ａｃｔ２を生成するために、−０，７ｋｂのＡｃｔ−２のｃ　ＤＮＡを、バキュロウィルス多角プラスミドｐＡｃ３７３　（１−１６ａ）のＢａｍＨ１部位中にクローニングした。それによって、Ａｃｔ−２のｃＤＮＡを多角プロモーターの支配下に置いた。ＳＦ９細胞を、ｐＡｃ−Ａｃｔ２および野性型ＡｃＮＰＶ株Ｅ、ＤＮＡで共トランスフェクションした。組換えしたバキュロウィルスのｖＡｃ　−ＡＣｔ２を単離し、プラークハイブリッド形成の連続的な繰り返しの手順により精製した（Ｉ−１６ａ）。プラーク精製した組換えウィルスを得たら、ＳＦ９細胞を感染し、１Ｓ−標識したシスティンとメチオニンで生化学的に標識した。細胞の上澄液中に分泌された放射線標識したタンパク質は、ＳＤＳゲル上で単離し、抽出型４７７を使用した。）上で製造者により供給されたＡＴＺプログラムに従って、連続的エドマン分解に処した。フラクションを液体シンチレーションにより計数した。結果Ａｃｔ−２のｃＤＮＡの確認、　活性化したＰ　ＢＭＣのｃＤＮＡライブラリーからの１０，０００の細菌のクローンを、特別に誘導したｃＤＮＡ配列があるかどうかのためにスクリーニングにかけた。活性化したまたは休止期のＰＢＭＣからのＲＮＡから誘導した最初の鎖のＣＤＮＡ試料を使用して、ニトロセルロース濾紙上２回スクリーニングした。コロニーの約１％だけが、誘導した鎖にハイブリッド形成した。ＡＣｔ−２は、誘導試料だけに選択的かつ強固にハイブリッド形成する約０．４ｋｂのｃＤＮＡクローンであった。この発見を、未刺戟のＰＢＭＣ，ＰＭＡまたはＰＨＡのいずれかで１６時間にわたり活性化したＰＢＭＣｌおよびＨＵＴ−１０２Ｂ２細胞、ＨＴＬＶ−１で形質転換したＴ細胞系からのＲＮＡのノーザンプロットにより確定した（Ｆ　ｉ　ｇ、　　Ｉ　−ＩＡ）。休止期ＰＢＭＣには検出できるシグナルはなく、ＰＭＡまたはＰＨＡのいずれかで活性化したＰＢＭＣには約０．９ｋｂのバンドが検出された。より弱いシグナルはＨＵＴ−１０２Ｂ２のｍＲＮＡを表す列（ｌａｎｅ）には検出された。細胞特異性、Ａｃｔ−２遺伝子を発現する細胞の型を決めるために、Ｔ細胞、Ｂ細胞、そして非リンパ球系を、ノーザンプロット分析を使用して検討した（Ｆｉｇ、１−ＩＢ）、既に述べたように、Ａｃｔ−２はＨＵＴ−１０２Ｂ２細胞（列（ｌａｎｅ）１）では発現したが、ＭＯＬＴ−４またはＣＥＭＴ細胞では発現しなかった（提示せず）。Ａｃｔ−２に特異的なｍＲＮＡは、同様にＨｅＬａまたはに５６２細胞（列２，３）に検出されず、Ｓ■で形質転換した繊維芽細胞系４３１２および４４２９のいずれにも、骨細胞系５８８７　（データを提示しなかった）のいずれにも検出されなかった。Ａｃｔ−２のｍ　ＲＮ　Ａは、Ｒａｊｉ（列４）、０Ｍ５４６７２　（列５）、ＳＢ　（列８）、およびＥＰＶで感染したＢ細胞系８３９２　（列９）で僅かに検出される（これは、オートラジオグラムの原板でよ（理解される。）が、その検出はＮａ１ｌ−１（前Ｂ細胞、列７）　、５ＵＤＨＬ−６（列１０）中に、または多発性骨髄腫細胞系Ｕ２６６（列１１）または８６６２　（列６）中に見出せなかった。面白いことに、ＰＭＡ−刺戟したＵ９３７細胞（ヒトの組織球リンパ腫から誘導したが、単球様の特性を維持している。Ｆｉｇ、Ｉ−Ｃ）がするように、ジャーカットＴ細胞は、ＰＨＡとＰＭＡとで一緒に誘導するとＡｃｔ−２を発現するが、いずれかの薬剤で別々に誘導すると発現しない。正常のリンパ球の活性化におけるＡｃｔ−２のｍＲＮへの時制の発現を更に特徴付けるために、ＰＨＡで活性化した新規に単離した、ＰＢＭＣ中でＡｃｔ−２のｍＲＮＡの発現の時間経過を検討した（Ｆｉｇ、ｌ−２Ａ）。八ｃｔ−２のｍＲＮＡは、休止期のＰＢＭＣでは低いまたは検出できないレベルで発現するが、マイトジェン刺戟に応答すると急速かつ劇的に増加する。最高のレベルは、約４時間で発生し、そしてその後、刺戟後２４時間までに無視できるレベルに迄急速に減少した。かくして、Ａｃｔ−２の発現は、ＰＨＡに応答して速やかに誘導されそして終了するの両方をすることを説明している。ブドウ状球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）　Ｃｏ　ｗ　ａ　ｎｌ　（ＳＡＣ，Ｆｉｇ、ｌ−２Ｂ）により活性化されたＢ細胞の類似の検討も、Ａｃｔ−２のｍＲＮＡの急速な誘導と消失を示した。同様に検査したのは、休止期の単球類とＡｃｔ−２の発現のためにリボ多糖（ＬＰＳ）で８時間にわたり刺戟した単球類であった（Ｆｉｇ、ｌ−２）。八ｃｔ−２のｍＲＮＡは、未刺戟の細胞には無いが、ＬＰＳで誘導した半球では容易に検出された。マイトジェンの刺戟に曝された若干数の異なる正常の細胞の型においてＡｃｔ− ２が発現されるということを観察すると、活性化に続く全ての正常細胞においてＡｃｔ−２が発現されて細胞周期を妨害する可能性を提起した。マイトジェンに対する休止期のリンパ球の、モしてｃ−ｍｙ　ｃ発現に係わる成長因子に対する休止期の繊維芽細胞の繁殖応答の間にある平行関係を観察するに、正常のヒト胎児の肺（ＨＦＬ−１）の繊維芽細胞の休止期のそして血漿で刺戟した初期の培地におけるＡｃｔ−２発現を検討した。しかしながら、ｃ−ｍｙｃとは対照的に、血漿はＡＣｔ−２のｍＲＮＡの発現を誘導できなかった（データを提示しなかった。）完全な長さの八Ｃｔ−２のｃＤＮＡの確認と配列決定。ｃＤＮＡの長さとノーサンプロット上に検出されたバンドの間の大きさに違いがあるので、次に進めることはもっと長いｃＤＮＡを単離することである。試料として、０．４ｋｂのＡｃｔ−２のｃＤＮＡを使用して、増幅したＨＵＴ−１０２Ｂ２のｃＤＮＡライブラリーからの１０６個のλｇｔｌＯプラークをスクリーニングした（１−１４）。約−０，７ｋｂの同様の大きさの４個のクローンを確認し、それらの全てを、０．４ｋｂのｃＤＮＡにより確認した同じ０．９ｋｂのｍＲＮＡにハイブリッド形成した。配列決定の戦略、ＤＮＡ配列、および推定したアミノ酸配列をＦｉｇ、Ｉ−３に示した。配列の顕著な特徴を下記のように纏めることができる（１）Ａｃｔ−２は新規な遺伝子を表す。ＤＮＡとタンパク質相同検索プログラムを使用することによる、ＤＮＡ配列と予想されるアミノ酸配列の比較は、最近の遺伝子パンク（ＧｅｎＢａｎｋ）　（５５版、１９８８年３月３１日版）とＮＢＲＦ　（１６版と３４版、１９８８年３月３１日版）のデータベースにある公開の配列と同一のものを見出せなかった。゛（２）このＤＮＡ配列は、９２個のアミノ酸に該当する２７６個の塩基対の読み取り枠を含む。この読み取り枠は、５’ＡＵＧを最も利用しており、これは真核生物の翻訳の開始に概して利用されるものである。更に、第１のＡＵＧの領域は、真核生物の開始部位のために決められた共通配列と高い相同性を持つ　（１− １７）。（３）このｃＤＮＡはｍＲＮＡの３′末端へ伸長しているように見える。というのは、これは古典的なＡＡＵＡＡＡポリアデニル化シグナル（１−１８）とポリＡ末端の開始を持つからである。３′の非翻訳領域もＡ−Ｔが豊富なドメインを含む（枠内、議論を参照）。（４）強力なＮ−結合したグリコジル化部位（Ａｓｎ−に−３ｅｒ／Ｔｈｒ）がない。（５）６個のシスティン基がある：かくして、分子内または分子間のジスルフィド結合が形成される可能性がある。（６）推定するアミノ酸配列から発生するカイトーヅーリトル（Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ）の嫌水性プロット（Ｆｉｇ。 ■−４）を検討すると、極端に嫌水性のＮ−末端基が明瞭になってくる。ヘイイン（Ｈｅｉ　ｊｎｅ）の重量マトリックス分析法（ｗｅｉｇｈｔ　ｍａｔｒｉｘ　ａｎａｌｙｓｉｓ）を使用すると、これはシグナルペプチドであるように見られ（１１，３の計算評点から）、その切断点は５ｅｒ２３とＡ１ａ２４の間であると予測される（１−１９）。切断部位はサイトカイン類のＩＬ−２（１−２０）、ＩＬ−３（１−２１）、ＧＭ−ＣＳＦ　（１−２２）でも利用されている。Ａｃｔ−２が機能的ｍＲＮＡをコードしていることを証明するために、次に、ｃＤＮＡをｐＧＢＭ−１中にサブクローンし、センス鎖とアンチ−センス鎖の両方をＳＦ３およびＴ７プロモーターを利用して転写した。得られたＲＮＡ種をコムギの胚芽と網状赤血球の溶解物中翻訳した（Ｆｉｇ、ｌ−５）。センス鎖〔列（ｌａｎｅ）Ｂ）は検出され得る生産物中に出たが、アンチ−センス鎖〔列（ｌａｎｅ）Ａ）は出なかった。この検出できる生産物は、１０，１９９ダルトンの計算分子量に類似した約１１，０００ダルトンの見かけのＭｗで移行した。運悪く、網状赤血球の溶解物中の翻訳では、グロビンに伴った人工物がＡｃｔ−２の初期の翻訳生産物と共に移行した（提示しなかった）が、コムギの胚芽の溶解物は明瞭な結果を与えた。推定上のシグナルペプチドの切断と小胞体のルーメン（］、ｕｍｅｎ）中への移行を評価するために、イヌのミクロゾーム膜を使用して、次の実験を行った。ミクロゾーム膜は、網状赤血球の溶解物の系中よりは、往々にしてより効果的である。かくして、このような翻訳を伴う移動／切断実験は、網状赤血球溶解物の系を使用し、次いで膜類を３１，０００×ｇでベレットにし、そしてそれを１０ｍＭｔｒｉｓ、０．１５ＮａＣ１，０，２Ｍ砂糖、ｐＨ７，５で洗浄することにより行われた。次いで、膜を検体の緩衝液中で煮沸し、ＳＤＳゲル上分析した。この方法では、汚染するグロビンは膜フラクションから除くことができた。初期の翻訳生産物は膜のフラクションと連合しておりＣ列（ｌａｎｅ）Ｃ）、これはＮ〜末端がシグナルペプチドのように機能していることを暗示している。配列に基づ（と、もしも推定上のシグナルペプチドか切断しているとするならば、２３９１ダルトンの変化が期待された；しかじ、顕著な変化が認め゛られなかったことは、推定上のシグナルペプチドが切断していないだろうことを暗示していた。トリトンＸＸ１００の不在下または存在下でのプロテナーゼＫによる、列Ｃに見られる膜と連合するバンドの処理は、界面活性剤の存在下非常により多くの完全な分解を起こした。これらのデータは、タンパク質は膜類に結合するがシグナルペプチドの切断は証明出来なかったことを示している。完全な長さのＡｃｔ−２のｃＤＮＡが分泌型の生産物をコードしているかどうかそしてシグナルペプチドは切断したかどうかの重要な問題を解決するために、Ａｃｔ−２の−０，７ｋｂのクローンを、ＳＦ９細胞中胸中換えバキュロウィルスとして発現させた（準備中の原稿）。細胞を５ｓ３−メチオニンとシスティンで生化学的に標識化し、上澄液を回収し、ＳＤＳゲル上で電気泳動に処し、そして各々の標識物について、特徴付けのＡＣｔ−２のタンパク質のバンドを切り取った。物質を水中に抽出してそして配列を決定して、推定上のシグナルペプチドが切断したことを証明した（表ｉ−１を参照）。サイクル３におけるメチオニンそしてサイクル１１と１２におけるシスティンの検出は、初期の翻訳生産物の５ｅｒ−２３とａｌａ−２４の間で切断が起こることを確証した（Ｆ　ｉ　ｇ、　　Ｉ　−３を参照）。次に、ゲノムのサザーンプロット法を行うのにｃＤＮＡを利用した（Ｆｉｇ、ｌ −６）。切断の比較的簡単なパターンが得られた。同じプロットをインターロイキン−２（ＩＬ−２）受容体ｃＤＮＡ　（ＩＬ−２受容体はシングルコピー遺伝子によりコードされている）と７１イブリツド形成した。そして類似した強さのバンドを確認した（提示しなかった。）。これらのデータは、シングルコピーまたは低コピー数遺伝子を表すＡｃｔ−２と殆ど一致している。最後に、ＰＨＡまたはＰＨＡ＋ＰＭＡで刺激したＰＢＭＣにおけるＡｃｔ−２、ｃ−ｆｏｓ、およびＣ−ｍ）’Ｓの発現の時間経過を直接に比較した。そして、Ａｃｔ＝２のｍ　ＲＮ　Ａはｃ−ｆｏｓと協同して誘導されることそしてその最高の発現はｃ−ｍｙｃのそれと一致することを見出した（Ｆｉｇ、ｌ−７）。Ｎ　ｏ　、　　　　　　　　ｃｐｍ　　　　　　　　　　　　　　ｃｐｍ〔サイクル３におけるメチオニンのためのサイクル４における、そして位置１１と１２におけるシスティンからのサイクル１３と１４における（実験２を参照）〕高いキャリオーバーは、連続的エドマン分解で非能率的に切断する成熟タンパク質（Ｆ　ｉ　ｇ、　　Ｉ−４を参照）の位置２，７．および８におけるプロリンの存在に因ると期待された。議論この研究は、正常の活性化したＰＢＭＣからのｍＲＮＡから作成したｃＤＮパライブラリ−中の、Ａ、　ｃ　ｔ−２と表示した（活性化ＰＢＭＣのｃＤＮＡ、Ｎｏ、２）新規の活性化遺伝子を確認し、特徴付けした。Ａｃｔ−２は、９２アミノ酸の読み取り枠をコードしている。ヘイイン（Ｈｅｉｊｎｅ）の重量マトリックス分析法（ｗｅｉｇｈｔ　ｍａｔｒｉｘ　ａｎａｌｙｓｉｓ）により、シグナルペプチドであると強く予測される非常に嫌水性のＮ− 末端基を含有する。ｉｎ　　ｖｉｔｒｏの翻訳分析はシグナルペプチドの切断を証明できなかったが、組換えＡｃｔ−２／バキュロウィルス−ベクターは虫網胸中では発現され、上澄液にＡｃｔ−２タンパク質が豊富にあることが見出された。更に、放射線標識したタンパク質のＮ−末端配列決定は、シグナルペプチドが予測されたように切断することを示している。Ａｃｔ−２が膜に連合した形でも存在する興味ある可能性が残っている。最近、正常の活性化したヒトリンパ球中で生産されたＡｃｔ−２タンパク質の分布を直接に確認することが可能になるように抗体が生産されている。３′非翻訳領域も、それがＡ−Ｔ豊富であり、共通配列ＡＴＴＴ八（１−２３）とＴＴＡＴＴＴＡＴ　（１−２４）を含有し、この共通配列は原ガン遺伝子、および腫瘍壊死因子、リンホトキシン、ＩＬ−１（αとβの両方）、多数のインターフェロン、そしてＧＭ−ＣＳＦを包含する分泌因子の多数において共通配列として確認されているということで顕著な興味がある。共通のＴＴＡＴＴＴＡＴは、概して、哺乳動物のｍＲＮＡには共通して見出されないが、炎症応答に関連するタンパク質をコードしているｍＲＮＡ　（１−２４）には特に広く見出される：かくしてＡｃｔ−２中にこの配列があるということは、この遺伝子が新規のサイトカインを表現しているかも知れないという考えを支持している。これらの配列はｍＲＮＡの比較的な不安定性と相関しく１−２３）、誘導されたｍＲＮＡの最高レベルから速やかに減退することと一致している。この遺伝子は、活性化の速やかな時間経過の観点で特に興味がある。休止期のヒトのＰＢＭＣは、生理的に静止の状態の正常の細胞を表している（Ｇ、）（１− ２５、ｌ−２６）。抗原またはマイトジェンによる活性化の結果；細胞の増大、およびＲＮＡの含有量、新規遺伝子の転写および新規タンパク質の合成の増加がある。それにより細胞には、細胞増殖を促進するＩＬ−２（Ｉ−２７）のような別のシグナルに対する感受性が付与される。マイトジェン刺激に対する応答におけるＡｃｔ−２発現の早い誘導とｃ−ｆｏｓおよびｃ−ｍｙｓとのその協調的発現は、Ａｃｔ−２が細胞成長と繁殖において初期の強力な重要な役目をしているかも知れない可能性と一致する。Ａｃｔ−２は、休止期のＰＢＭＣ中では、極小に発現されるか発現されない。しかしこれは、ＰＨＡまたはＰＭＡによるＴ細胞の、ＳＡＣによるＢ細胞の、またはＰＰＳによる単球類の活性化の俊速やかに誘導された。しかし、ＨｅＬａのに５２細胞における非発現、そして静止しているヒト繊維芽細胞の血漿刺激に対する応答においてのそれの不成功により明白であるように、Ａｃｔ−２は全ての活発に成長している細胞中では発現されない。　この部で記述した実験は、本発明の最も重要な実施態様の若干数を説明したものであり、完全な長さのＡｃｔ−２のｃＤＮＡはこのＤＮＡで形質転換した虫の細胞中で発現でき、そして適当にプロセス（ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ）した生産物がこれらの形質転換した細胞から分泌されることを示している。刊行物 ■−１，ヴアイス、ニー９．インボデン、ジエー。バーディ、ケイ０．マンガー、ビー、およびストール。ジｘ　−、＋　　（１９８６）＋　Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　４．５９３−６１９゜ｌ−２，アシュマン、アール、ニス、（１９８４）「　基礎免疫学（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）　Ｊ　＋　ラヴアン　プレス、ニューヨーク　ｐｌｌ、２６７−３００゜■−３，グレイ、ビー、ダブリユウ、、ラング、ディー、ダブリュー９．ナシヤリアン、アール０．シモンセンシー、シー０．プリンク、アール９．シェルウッド、ビー。ジェー、、ワラツク、ディ、エム０．ベルガー、ニス、エルレビンソン、ニー、ディ、及びゲデル、ディ、ブイ。（１９８２）、ｒネイチ−？　−（Ｎａｔｕｒｅ）ロンドン２９５゜５０３−５０８゜Ｉ−４，コクラン、ビー、エイチ、、リフエル、ニーシー８．およびスチレス、シー、デー（１９８３）ｒ細胞（Ｃｅｌｌ）　Ｊ　３３．９３９−９４７゜■− ５，ヒルスコホルン、アール、アール、ｌアルラー、ビー１．ユアン１．ゼット、ニー１．ギプソン、シー。ダブリユウ、及びバゼルガ、アール、（１９８４）、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８１，６００４−６００８゜■−６，ヤナギ、ワイ、、ヨシカイ、ワイ、、レゲット。ケー、、クラーク、ニス、ビー１．アレキサングー、アイ。及びマック、ティー、ダブリュー、　　（１９８４）　、Ｎａｔｕｒｅ　　ロンドン３０８．１４５−１４９■−７，ロー、エル、エフ０．及びナサンズ、ディー（１９８５）　、　ＢＭＢＯＪ、　４．３１４５−３１５１■−８，ロベ、シー、ジー９．ハベル、シー、及びブリックリー、７−ル、シー、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、Ｓｏｃ、［ＪＳＡ８３、１４４８−１４５２１−９．　　　　）ネレ、シー６．デマルス、アール、及びロング、イー、オー、　　（１９８５）　１１！ＭＢＯＪ、　４．２８３９−２８４７゜１−１０．　　　チャング、エヌ、ティー１．タム、ニス、エイチ、、クング、ビー、シー、及びチャング、ティー、ダブリュー、　　（１９８４）　、　Ｍａｌ、Ｂｉｏｌ、Ｍｅｄ、　２，１６１−１６５、■〜１１．　　チルギン、ジュー。エム１．ブリッピラ。ニー、イー１．マクドナルド、アール、リュー、及びクツター。ダブリュー、リュー、（１９７９）、ｒ生化学１１８、５２９４−５２９９．１−１２．　　オクヤマ、エイチ、及びベルグ、ビー３（１９８２）　、　Ｍｏ１．　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、２．１６１−１７０１−１３．　　　グランスティン、エム、及びホグネス、ディー、ニス、　　（１９７５）　、　Ｐｒａｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、５ｏｃ５．ＵＳＡ７２、　３９６１−３９６５゜１−１４．　　　レオナルト、ダブり二一、ジェー、、デッパー、ジエイ、エム３．クラブツリー、ジー、アール０．ルデイコフ、ニス１．パンプレイ、ジエイ、、ロブ、アール、ジェイ１．クロンケ、エム１．スベトリック、ビー、ビー１．ペファー、エヌ、ジェイ、、ワルドマン、ティー、ニー、及びグリーン、ダブリュー９　シー、　　（１９８４）　Ｎａｔｕｒｅ３１１．６２６−６１０゜ｌ−１５，フェインベルり、ニー、ビー、及びフ才ゲルステイン、ビー、　　（１９８３）　Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　１３２゜スチレス、シー、ディー、及びレーダー、ビー、（１９８３）　、　Ｃｅ１ｌ　３５，６０３−６１０　。ｌ−１ｅａ、エム、ディー、サマー及びジー、イー、スミス「バクロビールス　ベクターおよび昆虫細胞培養操作の手引（Ａ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　Ｂａｃｕｌｏｖｊｒｕｓ　Ｖｅｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　Ｉｎ５ｅｃｔ　Ｃｅ１ｌ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ　）　Ｊテキサス　アグリカルテャル　エックスベリメント　ステーション　ブレチンｎｏｉ５５５．　ｔ９８７．１−１７．　　　コザク、エム、　　（１９８７）　Ｎｕｃ、Ａｃ１ｄｓ　ｒｅｓ、　１５．８１２５−８１４８゜１−１８．　　　ブロードフット、エヌ、ジエー及びブラウンリー、ジー、ジー、　　（ｆ　９７６　）　Ｎａｔｕｒｅ　２６３，２１１−２１４゜ｌ−１９，フォノ　ヘイシネ、ジー、（１９８６）Ｎｕｃ、　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、　１４．４６８３−４６９０１−２０．　　　タニグチ、ティー０．マツイ、エイチ、、フジタウティー１．タカ才力、シー、ｌカシ７．エフ。ヨシモトアール、及びハム口、ジェ−（１９８３）　Ｎａｔｕｒｅ　３０２゜３０５　−３１０゜］−２１，ヤング、ソイ。シー９．カレッタ、ニー、ビー０．テンプル、ビー、ニー０．チュング、エム、ビー０．コバシク、ニス、゛、ウイテックーギアノチ、ジエー、ニス。、リャリー、ニー、シー０．クリツ、アール８．ドナウ、アール、イー９．ロング、ジー、ジー、及びクラーク、ニス。シー、　　（１９８６）　Ｃｅ１ｌ　４７．３−１０゜ｌ−２２，ウヲング、ワイ、シー９．　カレッタ、ニー。ビー、テンプル、ビー、ニー、ｌウィルケンス、チー。エム０．リャリー、ニー、シー２．ルクセンベルグ、ディー。ビー０．ジョンズ、ニス、ニス０．ブラウン、イー、エル。、カイ、アール、エム、ｌオル、イー、−シー９．シヨマーカー、シー１．ゴルデ、ディー、ダブリュー９．カウフマン。アール、リュー２．ヒユイツク、アール、エム０．ロング。イー、ニー、及びクラーク、ニス、シー、（１９８５）　５ｃｉｅｎｃｅ　２２８．８１０−８１５１−２３．　　　シャウ、ジー、及びカメン、アール、（１９８６）　　Ｃｅ１ｌ　４７，３−１０゜１−２４．　　　キャブト、ディー６．ボイトラー、ビー０．ハルトング、ケー、、サーヤー、アール１．ブラウン− シマー。ニス、及びセラミ、ニー、　　（１９８６）　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ。ＳＯＣ，ＵＳＡ　　８３．１６７０　−１６７４゜１−２５．　　　カクザマレク、エル８．カラベレッタ、ビー、及びバセルガ、アール、　　（１９８５）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ　８２．５３７５−５３７９゜１−２８．　　　リード、ジュー。シー０．アルバー、シェープイー、ノウエル、ビー、シー、及びフーバー、アール。ジー、　　（１９８６）　　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ｓｏｃ、　［ＪＳＡ　８３，３９８２−３９８６゜１−２７．　　ステルン、ジエー、ビー、及びスミス、チー。ニー、５ｃｉｅｎｃｅ　２３３．２０３−２０６゜丈］ＬＱ」Ｌ巳ヒトＴ細胞のマイトジェン活性に対する初期の転写反応の複雑さこの章は６０（ｉｌより多い新規なｃＤＮＡクローンの分離および特徴付けを記載する。これらはマイトジェン活性に続いてヒト末梢血Ｔ細胞のままにあるという即時転写反応の部分より成る。この初期の反応は誘導遺伝子の絶対数において並びにその規則の多様性においても大変複雑である。活性化Ｔ細胞と発現される大部分の遺伝子は正常なヒト繊維芽細胞の活性化反応を分担するけれども、相当数のものかそれらの組織特異性においてより制限されかつ従って活性化Ｔ細胞の分化された機能をエンコードするかまたは影響を与える。さらに活性化遺伝子はその誘導の速度論、シクロヘキシミドに対するその反応並びに免疫阻害薬シクロスポリンＡに対する感受性に基いて分化することかできる。この後者の医薬は１０個より多い誘導遺伝子の発現を阻害することに留意すべきてあり、このことはこの作用物質の作用について広範な遺伝子機構を示唆する。１紅又ｌ」１糺庭亙１　　ヒト末梢血Ｔ細胞は健康な志願者から得そしてＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ勾配のナイロンウールカラムに通して分離した。生成した細胞製剤は、ａｎｔｉ　−ＣＤ　３染色により判断すると、−貫して９０％以上Ｔ細胞てあった。ＰＢＴ細胞はｌＯ％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含有するＲＰＭＩ　　１６４０中において２ｘ１０６細胞／　ｍ　１の濃度にて培養した。ＰＢＴ細胞は種々の期間の時間の間Ｐ　ＨＡ　Ｐ　（１ｇ　ｇ　／　ｍ　１　；　Ｂｕｒｒｏｕｇｈｓ−Ｗｅｌｃｏｍｅ　Ｃｏ、）およびＰＭＡ　（２ｏｎｇ／ｍｌ）で、シクロヘキシミド（１０μｇ　７ｍ　１　）を用いてまたは用いずに刺激した。ジャーカット細胞系はに、　Ｈａｒｄｙより提供を受けた。ジャーカット細胞は１０％ＦＣＳおよび２５＃Ｌｇ／ｍｌゲンタマイシンで補充したＲＰＭＩ　　１６４０中に生存させた。シャーカット細胞は種々の期間の時間の間ＰＨＡ−Ｐ（Ｉｇｇ／ｍｌ）およびＰＭＡ　（２０ｎ　ｇ／ｍ　１　）で、シクロスポリン、６．　（１４ｇ　７ｍ　１　；　５ａｎｄｏｚ）を用いてまたは用いずに刺激した。ヒト繊維芽細胞系、ＣＣＤ　−１１ＬＵおよびＷ　Ｉ　３Ｂはアメリカンタイプカルチャーコレクションより得た。繊維芽細胞は１０％ＦＣＳを含むＭＥＭ中に集めて成長させそしてその後０．２５％ＦＣ３を含むＭＥＭ中におい−て３ないし５日の間生存させた。ｍ長を再開始するために、使い尽くした培地を、２０％ＦＣ８を補充しシクロヘキシミド（１０ｐ−ｇ　／　ｍ　１　）て含みまたは含まないＭＥＭに置き換えた。クローニン　およ　ハ　　１・・　　　　ＰＢＴ細胞を上記したように分離しかつ培養した。ＲＮＡを（Ｔｌ−８）て記載したように未刺激細胞からまたはＰＨＡ−ＰおよびＰＭＡで、シクロヘキシミドの存在下４．５時間の間細胞を刺激した後に分離した。　ｐｏｌｙ＾＋　ＲＮＡをｏｌｉｇｏ−ｄＴカラム（ＩＩ−３）を通る一回の通過により精製した。ｏｌｉｇｏ−ｄＴ　ｐｒｉｚｉｎｇ　（１８）を利用して活性化Ｔ細胞からの２０４　ｇ　ｐｏｌｙ　Ａ＋　　ＲＮＡよりｃＤＮＡを合成した。該ＲＮＡの加水分解後に、このｃＤＮＡを未刺激細胞からハイブリッド形成して１０倍過剰のｐｏｌｙ　Ａ＋　　ＲＮＡを持つ２０００モルｘ　ｓ／１のｃｏｔ値とした。その後−末鎖分子を二本鎖ｃＤＮＡ　：　ｍＲＮＡハイブリッドからヒドロキシアパタイトカラム（ＩＩ−１４、ＩＩ−２０＞を使用したクロマトグラフィーにより分離した。最初のラウンドの引き抜きの後、カウントの分布より判断するに、１５％の分子が一本鎖フラクションに３いてみられた。このフラクションを再び未刺激細胞からハイブリッド形成して１０倍過剰のｍＲＮＡとし、そしてこの二回目ラウンドの引き抜きにより約９０％の一本鎖材料を得た。　５ｅｐｈａｒｏｓｅ　ＣＬ−６８カラム上でのサイズフラクション化に続いて、サイズにおいて４００個のヌクレオチドより大きいｃＤＮＡ分子は、第二の鎖合成のためにＤ　Ｎ　Ａ　　Ｐｏ１ｙ■ｅｒａｓｅ　Ｉにより鋳型とされて使用した。続いて二本鎖ＤＮＡは標準手順（ＩＩ−１２）に従ってｌａｍｂｄａ　ｇｔ　１０の中にクローン化した。　４５，０００個の個々のクローンのベースを持つライブラリーを得た。約４０％の引き抜きｃＤＮＡライブラリーを上記の通り合成された引き抜きｃＤＮＡプローブで、例外として高い特異活性（５ｘ　　１０８ｃｐｓ／ｕｇ）に標識化しそしてたった一回　ＩＩ−引き抜きされたプローブで、スクリーニングした。引き抜きプローブを用いた三回目のスクリーニングおよびプラーク精製に続いて、異なるスクリーニングを行なった。二重濾過物を、活性化細胞ｍＲＮＡから調整したｃＤＮＡプローブおよび未刺激細胞ｍＲＮＡから誘導したｃＤＮＡプローブにハイブリッドした。５２３通りに分化したハイブリッド化クローンを得た。４乙ユ、ヅ≦乙ｊＬ折　　全細胞のＲＮＡをグアニジンイソチオシアナートて抽出しそして　５．７　　Ｍ　ＣｓＣ］　（ＩＴ−８）に通して遠心分離により精製し、ホルムアルデヒド−アガロース　ゲル中で電気泳動して、遺伝子スクリーン膜フィルター（ＮＥＮ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）上に斑点を付け、モして３２ｐ−標識ｃＤＮＡ挿入物にハイブリッドした。ＲＮＡの定量負荷をβ−２ミクログロブリンプローブへのハイブリッド形成により測定した（データは図示せず、）。Ｌ三二ｊ　プローブは以下の個人および団体より供給を受けた。　　：　ＧＭ　 −ＣＳ　Ｆ　　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ；　Ｔ　−インターフェロン　Ｍｅｌｏｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；　ｃ　−ｆ　ｏ　ｓＤｒ、Ｔ、Ｃｕｒｒａｎ；　Ｉ　Ｌ　−２レセプター　Ｄｒｌ、Ｇｒｅｅｎｅ　；　Ｉ　Ｌ −３Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ’；　Ｍｅｔ−及びＬｅｕ−プレプロエンケファリン（ｐｒｅｐｒｏｅｎｋｅｐｈａｌｉｎ）　Ｄｒ、Ｓ、５ａｂｏｌ　；ヒトＩＬ−４ＡＴＣＣ：ｐ５３　　Ｄｒ、Ｄ、Ｇｉｖｏｌ；リンフォトキシン　Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ　；　Ｉ　Ｌ　−５Ｄｒ、に、Ａｒ１ａ（ＤＮＡＸ）　；オルニチン−デカルボキシラーゼ　Ｄｒ、Ｄ、Ｎａｔｈａｎｓ　；　ｂ　ｃ　１−２Ｄｒ、Ａ、Ｂａｋｈｓｈｉ　；　Ｉ　Ｌ　−６Ｄｒ、Ｈ，Ｇｏ、Ｉｄｓｔｅｉｎ　；　ｃ　−ｍ　ｙ　ｂＤｒ、Ｆ、Ｍｕｓｈｉｎｓｋｉ　；　ＨＳ　Ｐ　７０及び非巻きＡＴＰａｓｅＤｒ、Ｒ，Ｍｏｒｉｍｏｔｏ　ＩＩＤｒ、Ｍ、５ｐｏｒｎはニックトランスレーション化ＴＧＦ−ベータプローブを提供した。 ■ ；　゛　　　の　　　　クローニン　　　マイトジェン活性化Ｔ細胸中のクローン即時誘導遺伝子に、この仕事には引き抜きｃＤＮＡクローニングの方法を用いて、引き抜きプローブハイブリッド形成に続いて、これら技術通りにその成熟ｍＲＮＡか低いレベルて活性化か現われるところの遺伝子（ＩＩ−１４、１１−２０）でさえ検出するのに最も大きい感度を与えた。この手順は図Ｉｌｌに要約して示す、ヒト末梢血Ｔ細胞はマイトジェン植ｅｆｆ凝集素（ＰＨＡ）およびホルボール１２−ミリステート　１３−アセテート（ＰＭＡ）並びにタンパク質合威阻害剤シクロヘキシミドの存在下て４．５時間の間多クローン的に活性化した。後者の作用物質は多くの成長関連遺伝子（ＩＩ−１，ＩＩ−２７、ＩＩ−３０、１１−３４）を超誘導（５ｕｐｅｒｉｎｄｕｃｅ）することか知られている。加えて、シクロヘキシミドはＩＬ−２およびＩＬ−２レセプタ一合成および相互作用の後に起きるｍＲＮＡｕ導を防止する。このことは、活性化細胞の初期反応についての分析を焦点にして、新しいタンパク質合成に独立して誘導されるそれら遺伝子により定まる。これまで、およそ４０％の引き抜きｌａｍｂｄａｇｔｌＯｃＤＮＡライフラリ−を引き抜きプローブてスクリーニングした。引き抜きプローブにハイブリ・ントした精製フｑ−ジを、さらに、活性化されそして生存しているＴ細胞ｍＲＮＡから合成されたｃＤＮＡプローブかファージの二重フィルター上て使用されるところの異なるスクリーンにかけた。最後に、引き抜き方法論および異種スクリーニング方法論の双方により判断した通りに、誘導ｃＤＮＡをしみ付けしたところの５２８個のファージクローンを選択した。これら　５２８個のファージクローンの中からはつきりした遺伝子の数を決定するために、次の段階はサックローン化ｃＤＮＡ挿入物を　５２８個のファージて交差ハイブリッドすることとした。この方法において、６６個の特有ＣＤＮＡクローンを同定し、その大部分ははっきりした遺伝子を表現すると思われる。限られた数の群は同じｍＲＮＡのおこなるセグメントから誘導することかでき、よって個々の遺伝子の過大な評価に導く。しかしながら、５２８個のファージのうちの　１２０個はこれまてに試験された選択されたｃＤＮＡ挿入物にハイブリッドされなかったのて、特有の誘導遺伝子の数は６６個を越えないであろう、交差ハイブリッドを経て与えられた群に属する分離されたファージクローンの数は相畠に変動しそして工ないし８６個程度のファージクローンの範囲にある（参照表１１−２　　説明文）、４４個の新規な誘導遺伝子クローンはさらに研究した（下記参照）、ノーザンブロツ１−分析により全てを誘導可能にそして、二重の例外を除き、一本サイズのメツセージにハイフリットした（表１ｌ−１）。さらに、ｃＤＮＡ挿入物のうち反復性配列を含むものは無かったか、サザンプロット分析により測定したところ、二重のものは小さいマルチ−遺伝予科のメンバーであることが明らかとなった（表１ｌ−１）。引き抜きライブラリーおよび５２８個の選択されたファージクローンか既に記載した誘導遺伝子を表わすところの程度を評価するために、双方を、■細胞中て誘導しうると知られた多くの遺伝子を用いた交差ハイブリット分析に受けさせた。引き抜きライブラリーの組成はＩＬ−２、ＧＭ−Ｃ３Ｆ、ｇａｇ＋ｍａ−Ｉ　ＦＮ、ｃ−ｍｙｃおよびＣ−ｆｏｓをエンコードするクローンについて豐富化により測定したところ、典型的な活性化Ｔ細胞表現型を表わすことを示し、その後者はＴ細胞中でシクロヘキシミドの存在下４．５時間舗道したが、Ｃ−ｍ　ｙ　ｃ　（ｌｌ−３６）よりもずっと小さい程度にまで誘導された。５２８個の選択ファージの中でいくつかのｃ−ｍｙｃの分離物か検出された。加えて、　５２８個のファージはＩＬ−２レセプター、ＩＬ３およびＩＬ−４成長因子そしてＭｅｔ −及びＬｅｕ−プレプロエンケファリン（ＴＩ−４６、１１−４７、ｌｌ−４９）に類似したｃＤＮＡを含む（表１ｌ−１）　、分離された５２８個のファージの中で、分析は、ＩＬ−２、ＧＭ−Ｃ３Ｆ。 −ＩＦＮ、ｃ−ｆｏｓ、ｐ５３、オルニチン−デカルボキシラーゼ、ｂｃｌ−２，リンフォトキシン、ＴＧＦ−ベータ、ｃ−ｍｙｂ、インターロイキン５及び６、熱衝撃遺伝子７０、及び非巻きＡＴＰａｇｅ（１１−６，１１−９゜１１−１３　、１１−２１　、　ｌｌ−２５、ｌｌ−３５、１１−３６、ｌｌ−３８、１１−４８）の存在を除外し、多くの新規遺伝子か分離されたことを確認する。公知の遺伝子の検出は分離した。引き抜きｃＤＮＡプローブて選択された５２８個のファージにおいて存在しないというライブラリー中の公知遺伝子（例えばＩＬ −２）の検出はニックトランスレーション対不均質ｃＤＮＡプローブにより生しるずっと強い信号からかけ離れているという結果になった。加えて、誘導期間の長さく４．５時間）は大多数の遺伝子にとって最適であるけれども、相対的に遅れた速度論を発現するところの遺伝子にとっては最適でなかった。にもかかわらず、ハイツリット形成データは、　５２８個の選択ファージは予測された遺伝子を多くだが全てでなく包含し、そして引き抜きライブラリーは分析された公知の誘導遺伝子を含むことを示す。ツ　゛　　の　　　およ　シクロスギ１ンＡに　　る５ＬＩｆ　　　分離された誘導遺伝子についての発現の不均質性を評価するために、多くの遺伝子についてｍＲＮＡレベルの速度論分析を行なった１図ｒ＋−ｚは４個の新規な誘導遺伝子についての典型的なノーザン分析を示す０発現の一つのパターンはｐＡＴ２４９により例示してなるが、ＰＨＡおよびＰＭＳによるＴ細胞の活性化の後に大変速く、即ち３０分またはそれより速く、現われることを示している。ｐＡＴ４６４について示される他の普通のパターンはわずか２ないし４時間後のｍＲＮＡ発現を特徴とする。別のｍＲＮＡ種（例えば　ｐＡＴ１２９及びｐＡＴ１３９、図１ｌ−２）は中間の時間て誘導した。発現の開始と期間の双方に関してＨ察された速度論の差は、表１１−１に要約して示すか、初期の反応の高い逆規則性を示唆するものである。およそ７０％の遺伝子（参照表１ｌ−１）はシクロヘキシミドにより超誘導されそして残りのものは影響を及ばさないかまたは最小にしか及ぼさない、シクロヘキシミドの使用は速く誘導された遺伝子の分離にとって、その多くか遷移的に発現しそしてタンパク質合成阻害剤（例えばＰＡＴ１２９およびｐ　Ａ　Ｔ　２４９）の存在下てのみ４．５時間で検出可能となるので、批判的なものてあった。シクロヘキシミド単独ではこれら遺伝子の発現を引き起こさなかったが（図１ｌ−２）　、その多くは転写的に規則化されていることを示している。９個の新しく分離された遺伝子の発現にとって詳細な必要条件は添付の用紙（実験の部　１■１．下記）においてアドレスされている。ヒトＣＤ４◆ヘルパー細胞系ジヤーカツトはリンフ才力インＩＬ−２およびガンマ−インターフェロン並びに■Ｌ−２レセプター（１１−１１９、ｌｌ−３７、１１−４５）を含め、いくつかの遺伝子の誘導可能性を保つことか知られている０本発明者は　多くの分離された遺伝子をこの腫瘍線におけるその発現および規則性について、並びに免疫阻害剤シクロスポリンＡ　（ＣｓＡ）に対するその感度について試験した。活性化Ｔ細胞から苦心して作られた多くのリンフ才力インは転写的誘導（Ｉ＋−１６、ｌｌ−３７、ｌｌ−３９）すると思われるところのこの作用物質により抑圧されることか知られている。図１１−３に示しかつ表１１２に要約したように、４つの異なるパターンの発現は識別された。試験した３５個の新しいクローン化遺伝子のうちで、２２種の発現はシャーカット細胞においてＰＨＡおよびＰＭＡを用いた処理の後に誘導した。これらのうちの１１種において、誘導はＣｓＡにより本質的に影響されなかった（例えばｐＡＴ６０２、図１ｌ−３）　、　Ｌ、かじながら、驚くべきことに大多数の遺伝子の誘導は、２２のうちの１１．ＣｓＡにより抑圧された（例えばｐＡ７４６４、図１ｌ−３）　、これは、ＣｓＡは全く大きい群の遺伝子（多分多くのリンフ才力インおよびサイトカインを含む、）に対して普通であるところの活性化の間の段階に影響を及ぼすことを意味し、またこれは、はっきりした活性化バスがこの遺伝子の座のために必要とされることをさらに示唆するものである。試験した残りの１３個の遺伝子はジャーカット細胞において誘導しなかった。誘導に続く時間点の数で測定したところ（データ図示せず、）、これらのうち１０個（例えばｐ　Ａ　Ｔ　　１３３．図１ｌ−３）はジャーカット細胞においていかなるメツセージへのハイブリッド形成にも失敗している。たぶん、これらメツセージはジャーカットと区別される細胞型、例えばＣＤ８◆Ｔ細胞に存在する。あるいは、ジャーカット細胞は形質転換しそして喪失もしくは変質したこれら遺伝子またはそれらのｍＲＮＡを誘導するのに必要なシグナル機械類を有する。最後の群の遺伝子のメンバー（３５個のうちの３（１１）はジャーカット細胞において本質的に発現した（例えばｐＡＴ１２９、図１１３）、これら遺伝子はこの腫瘍線の未制御成長に寄与しつる（ディスカッジョン参照）。表ユ上」速度論挿入　＠ＲＮＡ　　５ＲＮＡクローン　　　　頻度群１　　　サイズ　　　号イス　　　の　誘導　　　ＣＨＸ　　　　　遺伝組織’　　　　　　　　［ｂｐｌ　　［核］　【分】６　効果０　子型ｐＡＴ１２０　　５　　１６００２０００　　６０／６０　　　Ｓ　　　ＦｐＡＴ１２５　　４　　４００　３５００　　６０／６０　　　Ｓ　　　５ｐＡＴ１２７　　５　　９００　２０００　　３０／６０　　　Ｓ　　　ＭｐＡＴ１２９　　２　　６００　２０００　　６０／６０　　　Ｓ　　　ＭｐＡＴ１３３　　　　　２　　　　　６００　　　２０口０　　　１２０／２４０　　　　Ｓ　　　　　　５ｐＡＴ１３９　　３　　８００　２５００　　６０／１２０　　Ｓ　　　−ｐＡＴ１４０Ｓ　　　Ｉ　　　ＺＯＯ２６００２７０／２７０　　Ｓ　　　５ｐＡＴ１４０Ｌ　　　２　　３００　２６００　２４０／２７０　　Ｓ　　　５ｐＡＴ１５４　　５　　８００　３４００　　３０／１２０　　Ｓ　　　５ｐＡＴ１５８　　３　　１０００３４００　　　＋　　　　−５ｐＡＴ１８９　　１　　１１００３０００　　　＋　　　　Ｓ　　　ＭｐＡＴ２０１　　３　　３５０　３５００　　　＋　　　　−−ｐＡＴ２０４　　３　　３６０　２７００　　　＋　　　　−５ｐＡＴ２２５　　　Ｓ　　　６００　３９００　　３０／６０　　　Ｓ　　　５ｐＡＴ２２９　　３　　６００　６７００　２４０／２４０”　　Ｓ　　　５ｐＡＴ２３２ｓ　　　１　　４００　２６００　１２Ｇ／１２０　　Ｓ　　　ＭｐＡＴ２３２Ｌ　　　４　　９００　１９００　　６０／２７０”　　Ｓ　　　ＭｐＡ７２３７　　５　　１８００　２０００　　３Ｇ／１２０　　Ｓ　　　５ｐＡＴ２コ９　　　　　１　　　　　４００　　　８１００　　　　　　＋　　　　　　　　−ＳｐＡＴ２４３　　　　４　　　　１３００４５００　　　６０／４２０　　　　Ｓ　　　　　５ｐＡＴ２７０　　　　３　　　　１２００　　２１００　　　　　＋　　　　　　　−−ｐＡＴ２７ｆｉ　　　　　３　　　　８００　　　３３００　　　　　＋　　　　　　　−−ｐＡＴ２８］　　　　　１　　　　９００　　９００　　　　３０／４２０　　　ＮＥ　　　　５ｐＡＴ３８３　　　　４　　　　３００　　２０００” 　　　１２０／２７０’　　　Ｓ　　　　　ＭｐＡＴ４０２　　　　２　　　　５００　　２７００　　　　　＋　　　　　　Ｓ　　　　　ＦｐＡＴ４０７　　　　１　　　　８００　　２３００　　　６（１／６０（ｌ　　　ＮＥ　　　　５ｐＡＴ４１６　　　　３　　　　６００　　２４００　　　６０／１２０　　　Ｓ　　　　　５ｐＡＴ４２８　　　　３　　　　５００　　５８００　　　　　＋　　　　　　−５ｐＡＴ４６４　　　　　３　　　　　９００　　　９００　　　　１２０／４２０　　　ＮＥ　　　　　ＦｐＡ丁４６６　　　　　１　　　　　９００　　　１４５０　　　　　　＋　　　　　　　　−５ｐＡＴ４７８　　　　２　　　　４００　　２２００　　　　　＋　　　　　　ＮＥ　　　　５ｐＡＴ４８３　　　　１　　　　３００　　１８００　　　　　＋　　　　　　−５ｐＡＴ４８５　　　　２　　　　７００　　６８００　　２４０／２４０　　　Ｓ　　　　　５ｐＡＴ４９６　　　　１　　　　４００　　２０００　　　　　＋　　　　　　−５ｐＡＴ５１６　　　　　　２　　　　　　４５０　　　　１３００’　　　　　　十　　　　　　　　　−−ｐＡＴ５４２　　　　３　　　　５００　　６８００’　　　　＋　　　　　　Ｓ　　　　　−ｐＡＴ５６３　　　　３　　　　１８００　２４００ｈ　２７０／４２０　　　Ｓ　　　　　ＦｐＡ丁５９］　　　　　　２　　　　　５００　　　３５００　　　　６０／４２０　　　　Ｓ　　　　　　−ｐＡＴ５９４　　　　２　　　　５００　　２０００　　１２０／２７０　　　ＮＥ　　　　５ｐＡＴ６０３　　　　　］　　　　　：Ｉ００　　４８００　　　　　＋　　　　　　ＮＥ　　　　５ｐＡＴ６０７　　　　　］　　　　　１１００　　　：ｌ］００　　　　　＋　　　　　　−−ｐＡＴ６２０　　　　３　　　　３００　　１２５０　　２４０／４２０　　　ＨＥ　　　　−ρＡＴ７３０　　　　　２　　　　　５５０　　　］９００　　　　　　＋　　　　　　　ＮＥ　　　　　−ｐＡＴ７４４　　　　４　　　　８００　　８００　　　１２０／４２０　　　ＮＥ　　　　Ｓｃ−ｍｙｃ　　　　　　　２　　　　　　　　　　２４００　　　　５０／１２０　　　　Ｓ　　　　　５ＩＬ−３１−８００＋　　　　　　　　　　　　５ＩＬ−４２ −７００＋　　　　　　　　　　　　５ＩＬ−２Ｒ］、　　　　　　　　　　　３５００　　　　　　＋　　　　　　　　　　　　５ＰＰＥ　　　　　　　　　　　　　　２　　　　　−１３００　　　　　＋　　　　　　　　　　　　　３表−口二」　　マイトジェン−誘導遺伝子特性１頻度群は分離された　５２８個のクローンの中で、ファージクローンを交差パイプリットした数を示し、これは掲げたサブクローン化挿入物により検出される。：１＝１個の交差ハイブリットファージクローン：２＝２ないし５ｇＭの交差ハイブリットファージクローン；３＝６ないし１０個の交差ハイブリッドファージクローン；　　４＝＋１ないし２５個の交差ハイブリッドファージクローン、これまでに分離された全ての６６個の異なるクローンのうちで、頻度分布は　１＝２２クローン；　　２＝１７クローン、　　３＝１６クローン；４＝６クローンであった。ｍＲＮＡサイズ（ヌクレオチド中）はホルムアルデヒド−アガロースゲル上ての２８　Ｓおよび１８Ｓ　　ｒＲＮＡの移行に関して測定した。５時間（分）は誘導ｍＲＮＡ種か末梢血（ＰＢ）Ｔ細胞のＰＨＡ　（ｉ　ｐ−ｇ／ｍ　１　）およびＰＭＡ　（２０ｎ　ｇ／ｍ１）刺激に続いて最初に検出した詩を表わす、二番目の数は最大の定常状態ｍＲＮＡレベルが認められた時間（分）を示す、この欄における＊はｍＲＮＡかシクロヘキシミド（１０ｕ−ｇ　／　ｍ　１　）かＰＨＡ／ＰＭＡ刺激中に含まれたときにのみ検出てきることを示す。、＋は、ざらに進んだ研究は行なわれていないけれども、ＰＨＡ、ＰＭＡおよびシクロヘキシミドの組合せに対する反応における遺伝子誘導を示す。０はＰＢ　　Ｔ細胞中のＰＨＡ／ＰＭＡ誘導された定常状態ｍ　ＲＮ　Ａレベルについての、ＰＨＡ／ＰＭＡ単独て得たレベルに対する。シクロヘキシミドの効果を表わす。：Ｓ　＃５誘導、　ＮＥ　　シクロヘキシミドの効果無しまたは最低の効果；− 効果測定せず。 ’　Ｂａｍ　　Ｈｌ、Ｅｃｏ　　Ｒ１またはＳｓｔ　　Ｉのうち何れかで消化したヒト胸１１１ＤＮＡのサザンプロットで検出されたバンドの数：Ｓ　全て三つの消化において４個より少ないバンド；Ｆ　少なくとも二つの消化において４個またはそれ以上のハンド：Ｍ　全て三つの消化において５個またはそれ以上のハンド；−ゲノム組織測定せず。ｅｐＡ７３８３はまたシクロヘキシミドにより影響されない　９００個のヌクレオチドの本質的に発現するｍ　ＲＮ　Ａ種を検出した。 ’ｐＡＴ５１６はまた１７００個のヌクレオチドの木質的に発現するｍＲＮＡを検出した。 ’ｐＡＴ５４２はまた６８００個のヌクレオチドの優勢種と対等に発現する４６００個のヌクレオチドのｍ　ＲＮ　Ａ種を検出した。 ’ＰＡＴ５６３はまた優勢な２４００側のヌクレオチド種と対等に発現する３６００個、４１００個および８５００個のヌクレオチドのｍＲＮＡ種を検出した。１　　　ヘルパー■細胞系ジャーカットおよびヒト繊維芽細胞におけるＴ細胞誘導遺伝子の発現分析、実験の詳細は図１１−３および図１１−４に記載した通っである。Ｙ−血清を用いた休止期ヒト繊維芽細胞（ＨＦ）の刺激の際の誘導。Ｎ−休止期または血清刺激のヒト繊維芽細胞において発現無し。ＮＤ−測定せず。ａ−９００個のヌクレオチドの木質的に発現するｍＲＮＡ種（参照表１ｌ−１）についての発現データを示す。ｂ−２０００個のヌクレオチドの誘導ｍＲＮＡ種（参照表１ｌ−１）についての発現データを示す。Ｔ　　　で宝゛された゛　　の　　　　　　　マイトジェン誘導遺伝子の反応性の初期特性における重大な疑問は転写活性化プロセスの組織特異性である。異なる組織に由来する細胞は大きい分担の活性化反応を示すのかあるいはそれらはマイトジェン作用物質のためのレセプターが一般に組織特異性であるということを与えないのか？正常なヒト肺繊維芽細胞ＷＩ３８およびＣＣＤ　−１１ＬＵ　（ＴＩ−２）の活性化は研究された。これらの細胞は成長に続いて休止期に肺って集りそしてその後０．２５％血清中での培養となり、またそれらは多数の成長促進活性を含む高濃度のウシ胎児血清の存在下細胞周期を再開するように刺激されつる。三つの代表的な誘導遺伝子の分析は図４に示し、その中では休止期の繊維芽細胞を２０％血清で様々な時間の間、シクロヘキシミドを用いてまたは用いずに、刺激した０個々のマイトジェン誘導遺伝子について発現の速度論はＴ細胞および繊維芽細胞におけるのと相対的に似ている（図１１４および表１１−１と比較）、興味のあることに、シクロヘキシミドだけを用いたｍＲＮＡの誘導は多様な遺伝子について繊維芽細胞中においてしばしば起きるが、■細胞中においては起きない（図ｌｌ−２および図１１−４を比較）、かかる結果は、ヒト肺繊維芽細胞、例えばここで利用されたものが活性化細胞の背景を含むか、あるいは休止期の間遺伝子発現を抑圧する機構が二つの細胞型において異なるかもしれないことを示唆する６表１１−２に要約して示すように、ここで分析されたおよそ８０％の新規なＴ細胞誘導遺伝子はノーザン分析により繊維芽細胞において検出できたてあろう。従って、初期反応は完全に区別される細胞型において大変類似しているとみえるけれども、遺伝子のうちのいくつかはその組織特異性においてより制限されそして従ってリンパ球またはＴ細胞の分化した機能をエンコードまたは発揮するらしい。これまでに、組織特異性において制限を示す四つの全ての遺伝子はその誘導においてＣｓＡにより阻害されている。興味のあることに、両方の組織により発現したいくつかの誘導遺伝子はＴ細胞においてＣｓＡにより抑圧される（参照表１ｌ−２）　、但し、ＣｓＡの作用の組織特異性をアドレスする原糸を除く。 −スカ・・ジョンこの章で示したように、Ｔ細胞の活性化に対する初期の転写反応は大変複雑てあり、非常にはっきりしたパターンの規則性と発現をもった大多数の新規遺伝子を包含する。細胞周期を通しての進行と増殖に対する拘留に関係する機能に加えて、これら遺伝子は他の機能例えば免疫系の調節をエンコードすることができる。とりわけ、発現の限られた組織分布を示す遺伝子は、活性化Ｔ細胞の分化した機能においてかかる役割を演じると予測される。確かに、これら遺伝子のうちの二つ、　ＰＡＴ　４６４とＰＡＴ７４４は連続しておりそして予想された親木性リーダーペプチドと公知のシークレット化タンパク質との構造類似性を示し、これは潜在的リンフ才力インとしての同定を示唆する（実験の部ＩＶ　）　。種々のＴ細胞製剤、細胞系またはクローン（＋１２、ｌｌ−４、ｌｌ−ｌ５　、　ｌｌ−２３、１１−２８、ｌｌ−３２、１＋−４１）において誘導されたことを基に既に分離された一定数の遺伝子を越えて、より進んだ研究をマウス３Ｔ３繊維芽細胞における崩清誘導活性化プロセスについて行なってきた。即時活性可能な遺伝子をクローン化した以前の研究によりここて発見した数よりもずっと少ない数のものを得ている（　１１−１０　、１＋−３０）　、　Ｌ、かじ、マウス３Ｔ３繊維芽細胞系を利用する最近の研究は、７０個より多い遺伝子が誘導されるとの結論を下しており、ヒト末梢血Ｔ細胞（ＩＩ−１）についての本発明者の研究と一致している。ここて示すように、大部分の誘導遺伝子はヒト繊維芽細胞およびリンパ球の双方において同様に発現される。かかる観察は、マイトジェンに対する早期即時反応の複雑さか主に分化した機能の誘導の結果として生ずるものでないことを示唆する。むしろ、至る所で発現する活性化遺伝子がおそらくは細胞代謝の維持面における役割例えばＤＮＡ合成のための細胞に呼び水を与えることを演じる。これまで繊維芽細胞から分離した誘導遺伝子の中で特に興味をそそるものは、ＤＮＡ結合タンパク質なエンコードてきるいくつかのものであり（Ｔｌ−７、ｌｌ−３３、ｌｌ−４０、１＋−４３”）　、これはいくつかの早期誘導遺伝子が多形質発現性調節の役割に仕えるという仮定を支持する。繊維芽細胞およびリンパ球において発現するところの二つの遺伝子、いわゆるＥｇｒ−１（またはＮＧＦ　Ｉ　−ＡＡ）およびＫｒｏｘ２０は結合ＤＮＡ（＋１７、Ｉ＋−３：ｌ　。Ｉ＋−４２、１１−４３）に包含するところの三つの亜鉛フィンガー結合領域を含む一級アミノ酸構造を予測する。誘導された多数の遺伝子に加えて、ＰＢ　　Ｔ細胞のマイトジェン刺激に続いて誘導遺伝子の中て観察された速度論パターンの多様性はその規則性における相当な相違を示唆する０発現の一つの普通のパターン（表１ｌ−１）は、　ｃ　−ｆ　ｏ　ｓ　（ｌｌ−３４）および繊維芽細胞において誘導された多くの遺伝子（Ｉｌｌ、１ｌ−３１）と同様に急速かつ遷移的現われを示す、一つの可能性として、かかる遺伝子が細胞周期の中でＧＯからＧｌへの遷移を創始するのに重要な役割を演しるのかもしれず、またその連続した存在が必ずしもＧを経る別の進行のために必要としないかもしれない、より遅いオンセットおよび／または持続発現を示す別の速度論パターンは他の遺伝子についてＨ察された（図７１−２および表ｌ１ｌ）。ここての遺伝子研究の中で調節群を多様に仕向けることの別の証拠は遺伝子誘導の際のＣＳＡの様々な効果である。ＣＳＡは転写の開始の前にまたはその際誘導遺伝子発現を妨げると思われる（１１−１６　）　、従って、本発明者は、Ｃ３Ａ阻害可能な遺伝子はこれら遺伝子のために分担する調節モチーフに反映しうるところの誘導に必要な普通の活性化成分を分担すると予想する。加えて、予測しない大部分の遺伝子についてこの作用物質の広範な特表千３−５０４３３１　（２２）効果はその免疫抑圧作用かごく少数の遺伝子、例えばＩＬ−２の抑圧以上のものによるてあろうと信じさせるものである。研究された誘導遺伝子のうちの７０％の中で観察された普通の特徴はシクロヘキシミドによるメツセージレベルの超誘導てあった。加えて、シクロヘキシミドの存在下で多くの遷移的発現した遺伝子はますます持続する発現速度論を示した。従って、多くの誘導遺伝子は動揺性タンパク質により媒介される調節機構に、細胞内のメツセージレベルの調整のために最大の適応性を備える系に受けやすいと思われる。ｍａｔｒ芽細胞においてシクロヘキシミドが転写の遮断とｍＲＮＡ安定性の増加との双方を阻害するという証拠が示され、それは動揺性転写レセプターの連累と誘導遺伝子発現の調節において酵素を退化させること（１１−１，１ｌ−３１）を示唆する。ここで記載した遺伝子のサブユニ・ントはプログラムされた細胞成長において役割を演じるであろう。マイトジェン活性化の後だけ正常に発現するという三個の遺伝子のシャーカット腫瘍細胞における木質的発現に注目せよ（［］　ｌｌ−３および表１ｌ−２）。かかる遺伝子の発現は、この腫瘍由来の細胞系の未制御成長に寄与することかできる。したかって、この章は、いくつかの公知のリンフオカイン／サイトカインタンパク質遺伝子の特性と同様に、■細胞活性化において早期に誘導されたｍ　ＲＮ　Ａの機部的かつ構造的特徴を有するところの本発明のｃＤＮＡクローンの分離を説明する。刊行物１１−１．　　　　アルメンドユラル、ジェー、エム。（Ａｌｍｅｎｄｒａｌ、　Ｊ、Ｍ、　）、ディー、ツマ−（Ｄ、Ｓｏｍｍｅｒ）、　ｘイチ。マドナルドーブラヴｔ　（Ｈ，Ｍａｃｄｏｎａｌｄ−Ｂｒａｖｏ）　、　　ジェー。プルツクハルト（Ｊ、　Ｂｕｒｃｋｈａｒｄｔ）、　ジエー、ペレラ（Ｊ、　Ｐｅｒｒｅｒａ）およびアール、ブラヴｔ　（Ｒ，Ｂｒａｖｏ）　、　　（１９８８）ｒマウス繊維芽細胞中の成長因子への早期遺伝反応の複雑さくＣｏｍｐｌｅｘｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅａｒｌｙ　ｇｅｎｅ目Ｃｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｉｎ　ｍｏｕｓｅ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ）Ｊ　。Ｍｏ１．　Ｃｅ１１．　Ｂｆｏｌ、　８：２１４０−２１４８ＩＩ　−２，アロンソ、エム、エイ、　（Ａｌｏｎｓａ、Ｍ、Ａ、）およびニス、エム、ワイスマン（Ｓ、Ｍ、Ｗｅｉｓｓｍａｎ）、　　（１９８７）、ｒヒトＴ細胞の分化に関連するＭＡＬ、疎水性タンパク質のｃＤＮＡクローニング及びシーフェンス（ＣＤＮＡ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ＭＡＬ、　ａ　ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｐｒｏｔｅｉｎ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｈｕｍａｎ　Ｔ−ｃｅｌｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ−ｉａｔｉｏｎ）　Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８４：１９９７−２００１１１−３．　　　　アヴイヴ、エイチ（Ａｖｆｖ、　Ｈ，）およびビー。レダー（Ｐ、Ｌｅｄｅｒ）　、　　（１９７２）　、　　ｒオリゴチミジル酸− セルロースにおけるクロマトグラフィによる生物学的活性グロブリンメツセンジャーＲＮＡの精製（Ｐｕｒｆ−ｆｊｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ　ａｃｔｉｖｅ　ｇｌｏｂｉｎ　ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ　ＲＮＡ　ｂｙ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｏｎ　ｏｌｉｇｏｔｈｙｍｉｄｙｆｉｃ　ａｃｉｄ −ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　６９：１４０８−１４１１−４．　　　バード、ビー、アール、　（Ｂｕｒｄ、　Ｐ、　Ｒ，）　＋ジー、ジュー。フリーマン（Ｇ、Ｊ、Ｆｒｅｅｍａｎ）　、ニス、ディー、ウィルソン（Ｓ、Ｄ、Ｗｉｌｓｏｎ）、　ｘム、ベルマン（Ｍ、　Ｂｅｒｍａｎ）、　７−ル、デクリュフ（Ｒ９ＤｅＫｒｕｙｆｆ）、　　ビー、アール。ビリンゲス（Ｐ、　Ｒ，ＢｉｌＢｌｌｌｉｎおよびエム、イー、ドルフ（Ｍ。Ｂ、Ｄｏｒｆ）、　　（１９８７）　、　　ｒ新規なＴ細胞活性化遺伝子のクローニング及び特徴付け（Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒ−ｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｇｅｎｅ）Ｊ　ｒＪ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　１３９：３１２６−３１３１１１−５．　　　　カントレル、ディー、エイ、　　（Ｃａｎｔｒｅｌｌ。Ｄ、　Ａ、　）およびケイ、エイ、スミス（Ｋ、Ａ、Ｓｍ１ｔｈ）　、（１９８４）「インターロイキン−２Ｔ細胞系：新規な細胞成長モデル（Ｔｈｅ　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２Ｔ　ｃｅｌｌ　ｓｙｓｔｅｍ：　ａ　ｎｅｗｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｍｏｄｅｌ）　Ｊ　、　５ｃｉｅｎｃｅ　２２４：１３１２−１３１６１１−６．　　　　チャン、ジエー、ワイ−（Ｃｈａｎ、　Ｊ、Ｙ−）　。ディー、ジェー、スラモン（Ｄ、　Ｊ、　Ｓｌａｍｏｎ）、ニス、ディー。二ｖ　−（Ｓ、　Ｄ、　Ｎｉｍｅｒ）　＋　ディー、ダブリュー、ゴールデ（Ｄ。Ｗ、　Ｇｏｌｄｅ）およびジュー。シー、ガツソン（Ｊ、Ｃ，Ｇａ５５ｏｎ）。（１９８６）、ｒヒト顆粒球／マクロファージ　コロニー刺激因子の発現調節（Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ／ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ）Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８３：８６６９−８６７３１１−７．　　　　チャブリアー、ビー、　（Ｃｈａｖｒｉｅｒ、Ｐ、）　ｒエム、ゼリアル（Ｍ、　Ｚｅｒｉａｌ）、　　ビー、レマイレ（Ｐ、Ｌｅｍａｉｒｅ）　＋　　ジェー、アルメンドユラル（Ｊ、Ａｌｍｅｎｄｒａｌ）　ｌ　アール、ブラヴオ（Ｒ，Ｂｒａｖｏ）およびビー、チャルネイ（Ｐ、Ｃｈａｒｎａｙ）　、　　（１９８８）　、　　ｒ亜鉛フィンガーを持つタンパク質を暗号化する遺伝子は培養された細胞中、ＧＯ／Ｇｌ）ランジションの間、活性化される（Ａ　ｇｅｎｅ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ａ　ｐｒｏｔｅｆｎ　ｗｉｔｈ　ｚｉｎｃ　Ｌｉｎｇｅｒｓ　ｉｓ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｄｕｒｉｎｇ　ＧＯ／Ｇｌ　ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ　ｆｎ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｃｅｌｌｓ）」、　Ｅ！ＭＢＯＪ。７：２９−３５１１−８．　　　　チルグウィン、ジェー、エム、　（Ｃｈｉｒｇｗｆｎ、Ｊ、Ｍ、）　、エイ、イー、ブリジビラ（Ａ、　Ｂ、　Ｐｒｚｙｂｙｌａ）、アール、エフ、マクドナルド（Ｒ９Ｆ、　ＭｃＤｏｎａｌｄ）およびダブリュー、ジェー、ルター（Ｗ、Ｊ、Ｒｕｔｔｅｒ）、　　（１９７９）　。「リボヌクレアーゼ中の豊富な源からの生物的活性リボ核酸の単離（Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ　ａｃｔｉｖｅ　ｒｉｂｏ−ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄ　ｆｒｏｍ　５ｏｕｒｃｅｓ　ｅｎｒｉｃｈｅｄ　ｉｎ　ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ）　Ｊ　、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　１８：５２９４−５２９９１１−９．　　　　クリスマス、ニス、イー、　（Ｃｈｒｉｓｔｍａｓ、Ｓ。Ｅ、）、エイ、メガ−（Ａ、　Ｍｅａｇｅｒ）およびエム、モアー（Ｍ、　Ｍｏｏｒｅ）、（１９８７）、ｒクローン化されたヒト天然細胞毒性リンパ球およびＴ細胞によるインターフェロンおよび腫瘍壊死因子の製造（Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　１ｎｔｅｒｆｅｒｏｎａｎｄ　ｔｕｍ＋ｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ　ｂｙ　ｃｌｏｎｅｄ　ｈｕｍａｎ　ｎａｔｕｒａｌｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　Ｔ　ｃｅｌｌｓ）　Ｊ　、　Ｃｌ１ｎ、　ＢＩＰ。Ｉｍｍｕｎｏｌ、　６９：４４１−４５０ＩＩ−１０，：ｆｆチャラン、ビー、エイチ、　（Ｃｏｃｈｒａｎ、　Ｂ。Ｈｏ）、　エイ、シー、レフエル（Ａ、Ｃ１Ｒｅｆｆｅｌ）およびシー。エイチ、スチレス（Ｃ，Ｈ，５ｔｉｌｅｓ）、　　（１９８３）　、　　ｒ血小板誘導性成長因子により調節された遺伝子シーフェンスの分子クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ｇｅｎｅ　５ｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ）Ｊ　、　Ｃｅ１ｌ　３３：９３９−９４７ＩＩ−１１，コール、エム、ディー、　（Ｃｏｌｅ、Ｍ、Ｄ、）　。（１９８６）、ｒｍｙｃオンコジーン：形質転換および分化におけるその役割（Ｔｈｅ　ｍｙｃ　ｏｎｃｏｇｅｎｅ：　ｉｔｓ　ｒｏｌｅ　ｉｎｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆａｔｉｏｎ）Ｊ　ｒ　Ａｎｎ、　Ｒｅｖ＋Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　２０：３６１−３８４ＩＩ−１２，クリストファロ、ヴイー、ジエー。（Ｃｒｉｓｔｏｆａｌｏ、　Ｖ、　Ｊ、　）およびビー、ビー、シャレフ（Ｂ、　Ｂ、　５ｈａｒｆ）　、　　（１９７３）　、　　ｒ細胞質の老化およびＤＮＡ合成（Ｃｅｌｌｕｌａｒ　５ｅｎｅｓｃｅｎｃｅ　ａｎｄ　ＤＮＡ　５ｙｎｔｈｅｓｆｓ）　Ｊ　＋　Ｂｘｐ。Ｃｅ１ｌ　Ｒｅｓ、　６：４１９−４２７１１−１３．　　　ダブリ　エム、シー、　（Ｃｕｔｕｒｉ　Ｍ、Ｃ，）　＊エム、ムルフィ−（Ｍ、　ＭｕｒｌｌｈＹ）、エム、ビー、コスタージオミ（Ｍ、Ｐ、Ｃｏｓｔａ−Ｇｉｏｍｉ）　＋　アール、ワインマン（Ｒ，Ｗｅｉｎｍａｎｎ）、　　ビー、ベルッシア（Ｂ、　Ｐｅｒｕｓｓｆａ）およびジー、トリンチェリ（Ｇ、Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉ）、　　（１９８７）　ｒ　　ｒヒト末梢血リンパ球による腫瘍壊死因子およびリンフォトキシンの製造の個々の調整（Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆｔｕｍｏｒ　　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　　ｆａｃｔｏｒ　　ａｎｄ　　ｌｙｍｐｈｏｔｏｘｆｎ　　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙ　ｈｕｍａｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｊ　ｂｌｏｏｄ　Ｉｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）Ｊ　＋　Ｊ、Ｂｘｐ、Ｍｅｄ、１６５：１５８１−１５９４Ｉｔ−１４，デビス、エム、エム、　（Ｄａｖｉｓ、　Ｍ、　Ｍ、　）＋（１９８６）、ｒ負のｃＤＮＡハイブリッド形成およびＴ細胞レセプター遺伝子（Ｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅ　ｃＤＮＡ　ｈｙｂｒｉｄ−ｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｇｅｎｅｓ）Ｊ　＋　Ｈａｎｄｂｏｏｋｏｆ　ａｘｐｅｒｔｍｅｒ＋ｔａｔ　１ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、　Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、　０ｘｆｏｒｄ、　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｋｉｎｇｄｏｍ、　７６：１−１３ＩＩ−１５，ゲルジエンフェルト、エイチ、ケイ。（Ｇｅｒｓｈｅｎｆｅｌｄ、　Ｈ，Ｋ、　）およびアイ、エル、エアイスマン（［、Ｌ、Ｗｅｆｓｓｍａｎ）、　　（１９８６）　、　　ｒ細胞毒性Ｔリンパ球からのＴ細胞に特異的なセリンプロテアーゼのためのＣＤＮＡクローニング（Ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ａ　ｃＤＮＡ　ｆｏｒ　ａ　Ｔ　ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ　５ｅｒｉｎｅ　ｐｒｏｔｅａｓｅ　ｆｒｏｍ　ａ　ｃｙｔｏｔｏｘｆｃ　Ｔｌｙｍｐｂｏｃｙｔｅ）　Ｊ　、　５ｃｉｅｎｃｅ　２３２：８５４−８５８Ｉ！−１６，グラネリービペルノ、エイ、　（Ｇｒａｎｅｌｌｉ−Ｐｉｐｅｒｎｏ、Ａ、）　ｒ　エル、アンドルス（Ｌ、　Ａｎｄｒｕｓ）およびアール、エム、スティンマン（Ｒ，Ｍ、Ｓｔｅｉｎｍａｎｎ）　ｌ　　（１９８６）、「刺激されたヒトＴ細胞におけるリンホカイン及びノンリンホカイン　ｍＲＮＡ濃度（Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ　ａｎｄｎｏｎｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ　ｍＲＮＡ　１ｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｈｕｍａｎ　Ｔｃｅｌｌｓ）　Ｊ　、　Ｊ、Ｂｘｐ、Ｍｅｄ、　１６８：９２２−９３７１１−１７．　　　グリーン、ダブり二一、シー、（Ｇｒｅｅｎｅ。Ｗ、　Ｃ，＞およびダブり二一、ジュー。レオナルト（Ｗ、Ｊ。しｅｏｎａｒｄ）、　　（１９８６）　ｌ　　ｒヒト　インターロイキン−２レセプター（Ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２ｒｅｃｅｐｔｏｒ）　Ｊ　。Ａｎｎ、　　Ｒｅｖ、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　４：６９−９５ＩＬ　−１８，グブラー、　、：Ｌ−、（Ｇｕｂｌｅｒ、　Ｕ、　）およびビー、ジェー、ロフマンＣＢ、Ｊ、Ｈｏｆｆｍａｎ）、　　（１９８３）　。ｒｃＤＮＡライブラリーを生ずるための単純およびかなり有効な方法（Ａ　ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｖｅｒｙ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄｆｏｒ　ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ　ｃＤＮＡ　１ｉｂｒａｒｉｅｓ）　Ｊ　、　Ｇｅｎｅ　２５：２６３−２６ｌｌ−１９，バーディ、ケイ、ジ：ｒ−−、（Ｈａｒｄｙ、　Ｋ、　Ｊ、　）。ビー、マンゴ−（Ｂ、Ｍａｎｇｅｒ）、　エム、ニュートン（Ｍ、　Ｎｅｗｔ。ｎ）およびジュー。ディー、ストボ（Ｊ、Ｄ、５ｔｏｂｏ）　、　　（１９８７）、ｒＴ細胞の活性化の間、分子発生は調整ヒトインターフェロン　ガンマ遺伝子発現を含む（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｅｖｅｎｔｓ　１ｎｖｏｌｖｅｄ　ｔｎ　ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ｈｕｍａｎ　１ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ｇａｍｍａ　　ｇｅｎｅ　　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　　ｄｕｒｉｎｇ　　Ｔ　　ｃｅｌｌ　　ａｃｔｆｖａｔｉｏｎ）　　Ｊ　　ｒＪ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３８：２３５３−２３５８ＩＩ−２０，ヘトリック、ニス、エム、　（Ｈｅｄｒｆｃｋ、Ｓ、Ｍ。）、ディー、アイ、コヘン（Ｄ、１．Ｃｏｈｅｎ）　、イー、エイ。ニールマン（Ｂ、Ａ、　Ｎ１ｅｌｓｏｎ）およびエム、エム、ディビス（Ｍ、Ｍ、ＤａｖｔＳ）　、　　（１９８４）　、　　ｒＴ細胞−特異的播く結合タンパク質を暗号化するｃＤＮＡクローンの単離（ＩｓｏｌａＨｏｎ　ｏｆ　ｃＤＮＡ　ｃｌｏｎｅｓ　ｅｎｃｏｄｉＢ　Ｔ　ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃｍｅｍｂｒａｎｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ）Ｊ　、　Ｎａｔｕｒｅ　３０８：１４９−１１１−２１．　　　ヒラノ、ティー、（旧ｒａｎｏ、　Ｔ）　、　ケイ。ヤスカワ（Ｋ、　Ｙａｓｕｋａｗａ）、エイチ、ハラダ（Ｈ，Ｈａｒａｄａ）、ティー、タガ（Ｔ、　Ｔａｇａ）、　　クイ。ワタナベ（Ｙ、　Ｗａｔａｎａｂｅ）、ティー、マツダ（Ｔ、Ｍａｔｓｕｄａ）　ｒ　ニス、カシワムラ（Ｓ、Ｋａｓｈｉｗａｍｕｒａ）　、ケイ、ナカジマ（Ｋ、Ｎａｋａｊｉｍａ）、ケイ、コヤマ（Ｋ、Ｋｏｙａｍａ）、　：ｘ、イ、イワマツ（Ａ、　ＩＷａｍａｔ＆＋、）、　ｘ　ス、ツナサワ（Ｓ、Ｔｓｕｎａｓａｗａ）　、　ｘフ、サキャマ（Ｐ、Ｓａ＋、＋ｙａｍａ）、　＋Ｔ−イチ、マツイ（Ｈ，Ｍａｔｓｕｆ）、　　ライ。タカハラ（Ｙ、’Ｉ　・ｋａｈａｒａ）。ティー、タニグチ（Ｔ、　Ｔａｎｉｇｕｃ旧）およびティー、キシモ）（Ｔ、Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ）　＋　　（１９８６）　、　　ｒ免疫グロブリンヲ作るための８９２８球を誘発する新規なヒト　インターロイキン（ＢＳＦ−２）のための相補ＤＮＡ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ　ＤＮＡ　ｆｏｒ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｈｕｍａｎ　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ（ＢＳＰ−２）　　ｔｈａｔ　１ｎｄｕｃｅｓ　Ｂ　Ｉｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｔｏ　ｐｒｏｄｕｃｅｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ　）　Ｊ　、　Ｎａｔｕｒｅ　３２４ニア３−７６１１−２２．　　　ヒュイン、ティー、ケイ＋、　（Ｈｕｙｎｈ、Ｔ、Ｖ。）、アール、エイ、ヤング（Ｒ，Ａ、　Ｙｏｕｎｇ）およびアール。ダブリュー、ディビス（Ｒ，Ｗ、Ｄａｖｉｓ）　、　　（１９８５）　。「ラムダｇｔｌＯ及びラムダｇｔｌｌ中のｃＤＮＡライブラリーの建設およびスクリーニング（Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇ　ａｎｄ　　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｃＤＮＡ　１ｉｂｒａｒｉｅｓ　ｉｎ　ｌａｍｂｄａ　ｇｔｌＯａｎｄｌａｍｂｄａ　ｇｔｌｌ）Ｊ　、　ＤＮＡ　ｃｌｏｎｉｎｇ：　Ａ　ｐｒａｃＮｃａｌ　ａｐｐｒｏａｃｈ。Ｄ、Ｇｌｏｖｅｒ、（ｅｄ、）　ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ、０ｘｆｏｒｄ、Ｌｌｎｉｔｅｄ　ＫｊｎｇｄｏｍＩＩ−２３，ジョンストラ、ジｘ−，（Ｊｏｎｇｓｔｒａ、Ｊ、）、ティー、ジェー、シャル（Ｔ、　Ｊ、　５ｃｈａｌｌ）、　　ビー、リュー。ダイア−（Ｂ、　Ｊ、　Ｄｙｅｒ）、　　シー、クレイベルガ−（Ｃ，Ｃｌａｙｂｅｒｇｅｒ）、　ジェー、ジョルゲンセン（Ｊ、Ｊｏ「ｇｅｎｓｅｎ）　、エム。エム、ディビス（Ｍ、　Ｍ、　Ｄａｖｉｓ）およびエイ、エム、クレンスキイ（Ａ、Ｍ、Ｋｒｅｎｓｋｙ）　、　　ｒヒト機能性Ｔ細胞列の新規な遺伝子の単離およびシーフェンス（Ｔｈｅ　ｊｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｇｅｎｅ　ｆｒｏｍ　ａ　ｈｕｍａｎ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　Ｔｃｅｌｌ　１ｉｎｅ）Ｊ　；　Ｊ、　Ｅ！ｘ１１．　Ｍｅｄ、　１６５：６０１−６１４ＩＩ−２４，シュン、シー、ダイア、　（Ｊｕｎｅ、　Ｃ，Ｈ，）　ｒリュー、エイ、レッドペター（Ｊ、Ａ、Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ）　、　エム。エム、ギレスビエ（Ｍ、　Ｍ、　Ｇ目１ｅｓｐｉｅ）　、ティー、リントスチン（Ｔ、　Ｌｉｎｄｓｔｅｎ）およびシー、ビー、トンプソン（Ｃ，Ｂ。Ｔｈｏｍｐｓｏｎ）　、　　（１９８７）　、　　ｒＣＤ　２　Ｂ経路を含むＴ細胞増殖は、シクロスポリン耐性　インターロイキン−２遺伝子発現と関連する（Ｔ　ｃｅｌｌ　ｐｒｏＨｆｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ　ａ　ＣＤ２８　ｐａｔｈｗａｙ　ｉｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ−ｒｅｓｊｓｔａｎｔ　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｆｎ−２ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）Ｊ　、　Ｍｏ１．　Ｃｅ１１、　Ｒｉｏｌ、　７：４４７２− ４４８１１Ｉ−２５，ケール、ジェー、エイチ、　（Ｋｅｈｒｌ、Ｊ、Ｈ，）。エル、エム、ワケフィールド（Ｌ、Ｍ、Ｗａｋｅｆｉｅｌｄ）　＊　エイ。アール、ロバーツ（Ａ、ＲｌＲｏｂｅｒｔｓ）　、ニス、ジャコリュー（Ｓ、Ｊａｋｏｗｌｅｗ）、　＋Ｉ＋ム、アルヴアレッツーモン（Ｍ、　Ａｌｖａｒｅｚ −Ｍａｎ）　、アール、プリンク（Ｒ，Ｄｅｒｙｎｃｋ）　、　ｘム、ビー。スボルン（Ｍ、　Ｂ、　５ｐｏｒｎ）およびエイ、ニス、ファウシ（Ａ、　Ｓ。Ｆａｕｃｆ）　、　　（１９８６）　、　　ｒヒトＴリンパ球による形質転換成長因子ベータの製造およびＴ細胞成長の調節におけるその潜在的な役割（Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｂｅｔａ　ｂｙ　ｈｕｍａｎ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｐ。ｔｅｎｔｉａｌ　ｒｏｌｅ　ｆｎ　ｔｈｅ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ）Ｊ　ｒＪ、　　ＩＥｘｐ、Ｍｅｄ、　　１６３：１０３７−１０５０ＩＩ−２６，ケリー、ケイ、　（Ｋｅｌｌｙ、　Ｋ、　）およびニー。シーベンリスト（Ｕ、５ｉｅｂｅｎｌｉｓｔ）、　　（１９８６）　、　　ｒ標準および悪性の細胞でのｃ−ｍｙｃの調節及び発現（Ｔｈｅ　「ｅｇｕｌａｔｆｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉａｎ　ｏｆ　ｃ−ｍｙｃ　ｆｎ　ｎｏｒｍａｌ　ａｎｄ　ｒｎａｌｉｇｎａｎｔ　ｃｅｌｌｓ）Ｊ　ｒ　Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　４：３１７−４３８ＩＩ−２７，ケリー、ケイ、　（Ｋｅｌｌｙ、に、）、　　　ビー、エイチ、コツチャラン（Ｂ、Ｈ，Ｃｏｃｈｒａｎ）　＋　　シー、ディー、スタイルス（Ｃ，Ｄ、５ｔｉｌｅＳ）およびビー、レダー（Ｐ、Ｌｅｄｅｒ）　＋（１９８３）、ｒリンパ球マイトゲンおよび血小板誘導性成長因子によるｃ−ｍｙｃ遺伝子の細胞特異性調節（Ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃ−ｍｙｃ　ｇｅｎｅ　ｂｙＩｙｔｎｐｈｏｃｙｔｅ　ｔｎｉｔａｇｅｎｓ　ａｎｄ　ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ）Ｊ　、　Ｃｅ１ｌ　３５：６０３−６１０ＩＩ−２８，クウオン、ビー、ニス、　（Ｋｗｏｎ、Ｂ、Ｓ、）　ｒジー、ニス、キム（Ｇ、Ｓ、Ｋｉｍ）　ｌ　エム、ビー、ブリストウスキー（Ｍ、　Ｂ、　Ｐｒｙｓｔｏｗｓｋｙ）、ディー、ダブリュー、ランキ（Ｄ、　Ｗ、　Ｌａｎｃｋｉ）、ディー、イー、サバス（Ｄ、　Ｂ、　５ａｂａｔｈ）、ジュー。パン（Ｊ、　Ｐａｎ）およびニス、エム、ワイスマン（Ｓ、Ｍ。Ｗｅｔｓｓｍａｎ）、　　（１９８７）　＋　　ｒ多種のＴリンパ球サブセすトｃＤＮＡクローンの単離および第一の特徴付け（Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　１ｎｉｔｉａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｕｌｔｉ−ｐｌｅ　５ｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　Ｔ−１ｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　５ｕｂｓｅｔ　ｃＤＮＡ　ｃｌｏｎｅｓ）　Ｊ　。Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８４：２８９６−２９００ＩＩ−２９，ラルッソン、イー、エル、　（Ｌａｒｓｓｏｎ、Ｂ、Ｌ。）、（１９８０）、ｒシクロスギ９２人およびデキサメタシンは、引金となる方法の異なる部位で選択的に作用することによりＴ細胞反応を抑制する（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ　Ａ　ａｎｄ　ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ　５ｕｐｐｒｅｓｓ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｂｙ　５ｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ　ａｃｔｉｎｇ　ａｔ　ｄｉｓｔｉｎｃｔ　５ｉｔｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓ）　Ｊ　、　Ｊ、ｒｍｍｕｎｏｌ、　１２４：２８２８− ２８３３ＩＩ−３０，ラウ、エル、エフ、　ＣＬａｕ；　Ｌ、　Ｐ、　）およびディー、ナタンス（Ｄ、Ｎａｔｈａｎｓ）　、　　（１９８５）　、　　ｒ培養されたマウス細胞のＧＯ／Ｇｌ）ランジションの間、発現された一群の遺伝子の同定（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　５ｅｔｏｆ　ｇｅｎｅｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　Ｇｏ／Ｇｌ　ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ　ｏｆｃｕｌｔｕｒｅｄ　　ｍｏｕｓｅ　　ｃｅｌｌｓ）Ｊ　　、　　　ＢＭＢＯＪ、　　４　二３１４５−３１５１１Ｉ−３１，ラウ、エル、エフ、　（Ｌａｕ、Ｌ、Ｐ、）およびディー、ナタンス（Ｄ、Ｎａｔｈａｎｓ）　、　　（１９８７）　、　　ｒＢＡＬＢ／ｃ　　３Ｔ３細胞中での成長に関連する中間の初期遺伝子の一群の発現：ｃ−ｆｏｓ及びｃ−ｍｙｃでの同等の調節（Ｂｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｓｅｔ　ｏｆ　ｇｒｏｗｔｈ−ｒｅｌａｔｅｄ　ｉｍｍｅｄｉａｔｅ　　ｅａｒｌｙ　　ｇｅｎｅｓ　　ｉｎ　　ＢＡＬＢ／ｃ　　３Ｔ３　　ｃｅｌｌｓ：　　Ｃｏｏｒｄｔｎａｔｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｃ−ｆｏｓ　ａｎｄ　ｃ−ｍｙｃ）　Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ＋Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８４：１１８２−１１８６ＩＩ−３２，ロベ、ディー、ジー、（Ｌｏｂｅ、　Ｄ、　Ｇ、　）　ｒ　　シー、ハヴエレ（Ｃ，Ｈａｖｅｌｅ）およびアール、シー、プレツクレイ（Ｒ，Ｃ，Ｂｌｅａｃｋｌｅｙ）　、　　（１９８８）　、　　ｒ活性化された細胞毒性Ｔリンパ球で特異的に発現された２個の遺伝子のクローニング（Ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｇｅｎｅｓ　ｔｈａｔ　ａｒｅ　５ｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ　　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　　ｉｎ　　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　　Ｔ　　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）　　Ｊ　　、　　Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ　８３：１４４８−１４５２ＩＩ−３３，ミルプラント、ジー、　（Ｍｉｌｂｒａｎｄｔ、　Ｇ、　ＩＬ（１９８７）、ｒ神経成長因子を誘発する遺伝子は、可能な転写調節因子を暗号化する（Ａ　ｎｅｒｖｅ−ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ　ｇｅｎｅ　ｅｎｃｏｄｅｓ　ａ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ）　Ｊ　、　５ｃｉｅｎｃｅ　２３８ニア９７−７９９ＩＩ−３４，ミュラー、アール、　（Ｍｕｌｌｅｒ、　Ｒ，）＋　アール、ブラダｔ　（Ｒ，Ｂｒａｖｏ）　、　　ジュー。プルツクハルト（Ｊ、　Ｂｕｒｃｋｌ＋ａｒｄｔ）およびティー、クラン（Ｔ、Ｃｕｒｒａｎ）、　　（１９８４）、ｒｅ−ｍｙｃの活性化より先に起きる成長因子によるｃ−ｆｏｓ及びタンパク質の誘発（Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃ−ｆｏｓ　ｇｅｎｅ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｂｙ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｐｒｅｃｅｄｅｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃ−ｍｙｃ）　Ｊ　、　Ｎａｔｕｒｅ　３１２ニア１６−７２０ＩＩ−３５，ムステリン、ティー、　（Ｍｕｓｔｅｌｉｎ、Ｔ、）　。エイチ、ボッ（Ｈ，Ｐｏ５ｏ）、ニス、ビー、ラビンジョキ（Ｓ、　Ｐ。Ｌａｐｉｎｊｏｋｉ）　＋　ジエー、ギンサー（Ｊ、Ｇｙｎｔｈｅｒ）およびエル、シー、アンダーソン（Ｌ、Ｃ，Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ）　、　　（１９８７）、「成長暗号の形質導入ニホスファチジルイノシトールの分解の間の共有結合オルニチンデカルボキシラーゼの迅速な活性（Ｇｒｏｗｔｈ　ｓｉｇｎａｌ　ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ：　Ｒａｐｉｄａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ　ｂｏｕｎｄ　ｏｒｎｉｔｈｉｎｅ　ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ　ｄｕｒｉｎｇ　ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙＨｎｏｓｉｔｏｌ　ｂｒｅａｋｄｏｗｎ）Ｊ　、　Ｃｅ１１４９：１７１−１７６ＩＩ−３６，リード、ジュー。シー、　　（Ｒｅｅｄ、　Ｊ、　Ｃ，）。ジュー。ディー、アルバース（Ｊ、　Ｄ、　Ａｌｐｅｒｓ）　Ｔ　　ビー、シー、ノウエル（Ｐ、　Ｃ８Ｎｏｗｅｌｌ）およびアール、ジー、ホープｙ　−（Ｒ，Ｇ、Ｈｏｏｖｅｒ）　、　　（１９８６）　、　　ｒ標準のヒトリンパ球のレクチン刺激性細胞分裂の促一時の原潰瘍遺伝子の連続発現（Ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ｌｅｃｔｉｎ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｍｉｔｏｇｅｎｅｓｆｓ　ｏｆｎｏｒｍａｌ　ｈｕｍａｎ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）　Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ　　８３：３９８２−３９８６ＩＩ−３７，リード、ジュー。シー、（Ｒｅｅｄ、　Ｊ、　Ｃ，）　ｒエイ、エイチ、アビディ（Ａ、Ｈ，Ａｂｉｄｉ）　、　　ジュー。ディー。アルバース（Ｊ、　Ｄ、　Ａｌｐｅｒｓ）、アール、ジー、ホープ７−（Ｒ。Ｇ、　Ｈｏｏｖｅｒ）、アール、ジー、ロブ（Ｒ，Ｊ、　Ｒｏｂｂ）およびビー。シー、ノウエル（Ｐ、Ｃ，Ｎｏｗｅｌｌ）、　　（１９８６）　　ｒインタロイキン　２　レセプター遺伝子の発現におけるシロスポリン人及びデキサメタシンの効果（Ｂｆｆｅｃｔ　ｏｆｃｙｌｏｓｐｏｒｉｎ　Ａ　ａｎｄ　ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ　ｏｎ　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　２ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）Ｊ　＋　Ｊ、Ｉｍ＋ｎｕｎｏ１．１９７：１５０− １ＴＩ−３８，リード、ジュー。シー、　　（Ｒｅｅｄ、Ｊ、Ｃ，）　。ワイ、ツジモト（Ｙ、Ｔｓｕｊｉｍｏｔｏ）　、ジュー。ディー、アルバース（Ｊ、　Ｄ、　Ａｌｐｅｒｓ）、　　シー、エム、クロス（Ｃ，Ｍ、　Ｃｒｏｓｅ）およびビー、シー、ノウエル（Ｐ、Ｃ，Ｎｏｗｅｌｌ）、　　（１９８７）［標準のヒトリンパ球増殖の間のｂｃｌ−２プロト−オンコジーン発現の調節（Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｃｌ−２ｐｒｏｔｏ−ｏｎｎｃｏｇｅｎｅ　　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　　ｄｕｒｉｎｇ　　ｎｏｒ＋ｎａｌ　　ｈｕｍａｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）Ｊ　　、　　５ｃｉｅｎｃｅ　２３６：１２９５−１２９ｌｌ−３９，リーム、ジー、エイチ（Ｒｅｅｍ、　Ｇ、　Ｈ，）　ｒ　エル、エイ、タック（Ｌ、　Ａ、　Ｃｏｏｋ）およびジエー、ヴイルセク（Ｊ、Ｖｆｌｃｅｋ）、　　（１９８３）　、　　ｒシクロスギ９２人によって阻害されたヒト胸腺細胞及びＴリンパ球のガンマインターフェロンの合成（Ｇａｍｍａ　１ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｂｙｈｕｍａｎ　ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｆｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｂｙｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ　Ａ）　Ｊ　、５ｃｉｅｎｃｅ　２２１：６３−６５ＩＩ−４０，リーダー、ケイ、　（Ｒｙｄｅｒ、　Ｋ、　）、− １−ル６エフ、ラウ（Ｌ、　Ｆ、　Ｌａｕ）およびディー、ナサンス（Ｄ、ＮａｔｈａｎＳ）、「成長因子により活性化された遺伝子はオンコジーンｖ−Ｊｕｎに関連する（Ａ　ｇｅｎｅ　ａｃ目ｖａｔｅｄ　ｂｙ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｉｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｏｎｃｏｇｅｎｅ　ｖ−ｊｕｎ）　Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｅｉ、　ＵＳＡ　８５：１４８７−１４９１１Ｉ−４１，シュミット、ジェ−、（Ｓｃｈｍｉｄ、　Ｊ、　）およびシー５　ワイスマン（Ｃ，Ｗｅｉｓｓｍａｎ）、　　（１９８７）　＊　　ｒマイトゲン刺激性ヒト白血球におけるセリンプロテアーゼ及びベータースロンボグロプリン様タンパク質のためのｍＲＮＡの誘導（Ｉｎｄｕｅｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍＲＮＡ　ｆｏｒ　ａ　５ｅｒｉｎｅｐｒｏｔｅａｓｅ　ａｎｄ　ａ　ｂｅｔａ−ｔｈｒｏｍｂｏｇｌｏｂｕｌｉｎ−１ｉｋｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｉｎ　ｍｉｔｏｇｅｎ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｈｕｍａｎ　１ｅｕｋｏｃｙｔｅｓ）　Ｊ　。Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３９：２５０−２５６ＩＩ−４２，スハトメ、ヴイー、ビー、　（Ｓｕｋｈａｔｍｅ、Ｖ。ｐ、）、ｚス、カルサ（Ｓ、　Ｋａｒｔｈａ）、エフ、ジー、ドパツク（Ｐ、　Ｇ、　Ｔｏｂａｃｋ）、アール、シー、タウブ（ＲｏＣ，Ｔａｕｂ）、アール、ジー、ホープ−ｒ　（Ｒ，Ｇ、　Ｈｏｏｖｅｒ）およびシー、サイーモリス（Ｃ，Ｔｓａｆ−Ｍｏｒｒｊｓ）　、　　（１９８７）　、　　ｒ繊維芽、上皮細胞およびリンパ球マイトジェンにより素早く誘発された新規な式成長反応遺伝子（Ａ　ｎｏｖｅｌ　ｅａｒｌｙ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　　ｇｅｎｅ　　ｒａｐｉｄｌｙ　　１ｎｄｕｃｅｄ　　ｂｙ　　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ、　　ｅｐｉｔｈｅｌｆａｌ　ｃｅｌｌ　ａｎｄ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｍｉｔｏｇｅｎｓ）　Ｊ　ｒ　Ｏｎｃｏｇｅｎｅ　Ｒｅｓ。１：３４３−３５５ＩＩ−４３，スハトメ、ニス、ビー、　（Ｓｕｋｈａｔｍｅ、　Ｓ、　Ｐ。）、エックス、カオ（Ｘ、Ｃａｏ）　、　ｘル、シー、チヤツク（Ｌ。Ｃ，Ｃｈａｎｇ）　、　　シー、エイチ、サイーモリス（Ｃ，Ｈ，Ｔｓａｉ−Ｍ。ｒｒｉｓ）　、ディー、スタメンコヴイック（Ｄ、　Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃｈ）。ビー、シー、ビー、フエレイラ（Ｐ、　Ｃ，Ｐ、　Ｐｅｒｒｅｉｒａ）、　ディー、アール、コヘン（Ｄ、Ｒ，Ｃｏｈｅ、ｎ）　、　ｘス、エイ、ニドワード（Ｓ、Ａ、Ｂｄｗａｒｄｓ）　、　　ティー、ビー、ショウ（Ｔ、　Ｂ、　ＳｈｏｗＳ）、ティー、クラン（Ｔ、Ｃｕｒｒａｎ）、、　エム、エム、し　ヒユ（Ｍ、Ｍ、Ｌｅ　Ｂｅａｕ）およびイー、ディー、アダムソン（Ｂ。Ｄ、Ａｄａｍｓｏｎ）　、　　（１９８８）　、　　ｒ成長および分化の間、及び細胞の脱分極の後、ｃ−ｆｏｓで相互にｉ１１節された亜鉛フィンガー暗号遺伝子（Ａ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ−ｅｎｃｏｄｉｎｇｇｅｎｅ　ｃｏｒｅｇｕｌａｔｅｄ　＊ｉｔｈ　ｃ−ｆｏｓ　ｄｕｒｊｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄｄｊｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ、　ａｎｄ　ａｆｔｅｒ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｄｅｐｏｌａｒｉｚａｔｉ。ｎ）Ｊ　、　Ｃｅ１１．５３：３７−４３ＩＩ−４４，ワイス、エイ、　（Ｗｅｉｓｓ、Ａ、）、アール、シールド（Ｒ，５ｈｉｅｌｄｓ）　、　エム、＝、− １ン（Ｍ、　Ｎｅｗｔｏｎ）、　　ビー、マンゴ−（ＢｌＭａｎｇｅｒ）およびジェー、インボデン（Ｊ、　Ｉｍｂｏｄｅｎ）　＋　　（１９８７）　、　　ｒインターロイキン　２　遺伝子の活性を拘束するのに要するリガンド−レセプター相互作用（Ｌｉｇａｎｄ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ　１ｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ　ｒｅｑｕｉｒｅｄ　ｆｏｒｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔ　　ｔｏ　　ｔｈｅ　　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　　ｏ、ｆ　　ｔｈｅ　　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　　２ｇｅｎｅ）Ｊ　、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３８：２１６９−２１７６ＩＩ−４５，ワイス、エイ、　（Ｗｅｉｓｓ、Ａ、）およびリュー。ビー、インボデン（Ｊ、Ｂ、Ｉｍｂｏｄｅｎ）　、　　（１９８７）　、　　ｒ細胞表面分子および初期の発生はヒトＴリンパ球活性中に含まれる（Ｃｅｌｌ　５ｕｒｆａｃｅ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　ａｎｄ　ｅａｒｌｙ　ｅｖｅｎｔｓ　１ｎｖａｌｖｅｄ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ａｃｔｊｖａｔｊｏｎ）　Ｊ　ｒ　Ａｄｖ。Ｉｍｍｕｎｏｌ、　４１：１−３８ＩＶ−４６、ヤング、ライ。シー、　　（Ｙａｎｇ、　Ｙ、　Ｃ，）　＊エイ、ビー、レアシッタ（Ａ、　Ｂ、　Ｃ１ａｒｌｅｔｔａ）、　　ビー、エイ。テンプル（Ｐ、Ａ、Ｔｅｍｐｌｅ）　、　エム、ビー、チヤツク（Ｍ、　Ｐ。Ｃｈｕｎｇ　）　、　ｘス、コヴアシック（Ｓ、　Ｋｏｖａｃｉｃ）、　リュー。ニス、ウィテクージアノッチ（Ｊ、　Ｓ、　Ｗｉ　ｔｅｋ−Ｇｉａｎｎｏｔｔｉ）。エイ、シー、レアシー（Ａ、　Ｃ，Ｌｅａｒｙ）、　　アーＪｋ、りｒ）’）（Ｒ，Ｋｒ１ｚ）　、アール、イー、ドナヒユー　（Ｒ，ｆ！、Ｄｏｎａｈｕｅ）。ジー、ジー、ウォング（Ｇ、　Ｇ、　ＩＩｌｏｎｇ）およびニス、シー。クラーク（Ｓ、Ｃ，Ｃ１ａｒｋ）、　　（１９８６）　、　　ｒヒト　ＩＬ−３＝ネズミのＩＬ−３に関連した新規な血液成長因子の発現クローニングによる同定（Ｈｕｍａｎ　ＩＬ−３（Ｍｕｌｔｉ−ＣＳＦ）：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｊｃ　　ｇｒｏｗｔｈ　　ｆａｃｔｏｒ　　ｒｅｌａｔｅｄ　　ｔｏ　　ｍｕｒｉｎｅ　　ＩＬ−３）Ｊ　　、　　Ｃｅ１ｌ　　４７：３−１０ＩＶ−４７，ヨコタ、ティ、　　（Ｙｏｋｏｔａ、Ｔ）　、ティー。オツ力（Ｔ、　０ｔｓｕｋａ）　、ティー、モスマン（Ｔ、　Ｍｏｓｍａｎｎ）。ジュー。パンチェリュー　（Ｊ、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ）　、ティー、デフランス（Ｔ、　ＤｅＰｒａｎｃｅ）　、ディー、ブランチヤード（Ｄ。Ｂｌａｎｃｈａｒｄ）、ジュー。イー、デ　ブリ：ｆ−ス（Ｊ、　Ｂ、　ＤｅＶｒｉｅｓ）　、エフ、シー（Ｆ、　Ｌｅｅ）およびケイ、アイ、アライ（Ｋ、１．Ａｒａｉ）　＋　　（１９８６）　＋　　’Ｂ細胞及びＴｉ胞刺激活性を発現するマウスＢ細胞刺激因子１と同族のヒトインターロイキンｃＤＮＡクローンの単離および特徴付け（ｌ５ｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ目ｏｎ　ｏｆ　ａ　ｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　　ｃＤＮＡ　　ｃｌｏｎｅ、　　ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ　　ｔｏ　　ｍｏｕｓｅ　　Ｂ−ｃｅｌｌｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ　１．　ｔｈａｔ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｓ　Ｂ −ｃｅｌｌ　ａｎｄＴ−ｃｅｌｌ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　ａｃ口ｖｉｔｉｅｓ）Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。Ｓｅｔ、　ＵＳＡ　８３：５８９４−５８９８ＩＩ−４８，ヨコタ、ティー　、　　（Ｙｏｋｏｔａ、　Ｔ）　ｒ　アール。エル、コッフマン（Ｒ，Ｌ、　Ｃｏｆｆｍａｎ）、　ｘイチ、ハギヮラ（Ｈ０Ｈａｇｉ＊ａｒａ）　ｒ　ディー、エム、シーック（Ｄ、Ｍ。Ｒｅｎｎ１ｃｋ）、　ワイ、タケベ（Ｙ、　Ｔａｋｅｂｅ）　、ケイ、ヨコタ（に、Ｙｏｋｏｔａ）　、　ｘル、テンプル（Ｌ、　Ｇｅｍｍｅｌｌ）、　　ビー、シュレイダ−（Ｂ、５ｈｒａｄｅｒ）　、　　ジー、ヤング（Ｇ、　Ｙａｎｇ）、　　ビー。メイヤーソン（Ｐ、　Ｍｅｙｅｒｓｏｎ）、ジュー。ルー（Ｊ、Ｌｕｈ）　、　ビー、ホイ（Ｐ、）ｔｏｙ）　、　　ジュー。ペン（Ｊ、Ｐｅｎｅ）、エフ、ブリニレ（Ｐ、Ｂｒ１ｅｒｅ）、　ｘイチ、スピッツ（Ｈ，５ｐｉｔｓ）　、　リュー。パンチェリュー　ティー　−（Ｊ、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ　Ｔ、　）　＋　　ジュー。イー、デ　ヴリエス（Ｊ、Ｅ、　Ｄｅ　Ｖｒｉｅｓ　）　、　エフ、ディー、シー（Ｐ、　Ｄ、　Ｌｅｅ）、エヌ、アライ（Ｎ、　Ａｒａｆ）およびケイ、アイ、アライ（Ｋ、［、Ａｒａｉ）　、　　（Ｌ　９８７）　、　　ｒマウス及びヒト　ＩｇＡ増強因子及び好酸球コロニー刺激因子活性を暗号化するリンフォカインｃＤＮＡクローンノ単離および特徴付け：インターロイキン５との関係Ｃ１ｓ。１ａｔｊｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａ− ｃｔｅｒｊｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｙｍｐｈｋｆｎｅ　ｃＤＮＡ　ｃｌｏｎｅｓ　ｅｎｃｏｄｉｎｇｍｏｕｓｅ　ａｎｄ　ｈｕｍａｎ　ＩｇＡ−ｅｎｈａｎｃｆｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ａｎｄｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ　ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ：Ｒｅ１ａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｔｏ　１ｎｔｅｌｅｕｋｉｎ　５）　Ｊ　＋　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ。Ｓｃｊ、ｔｌＳＡ　８４ニア３８８−７３９２ＩＩ−４９，ズラスキ、ジー、　（Ｚｕｒａｗｓｋｆ、Ｇ、）　、　エム。ベネディク（Ｍ、Ｂｅｎｅｄｆｋ）　＋　　ビー、ジェー、カンブ（１３，Ｊ、　Ｋａｍｂ）、　ジュー。ニス、アブラム（Ｊ、　Ｓ、　Ａｂｒａｍｓ）、　ｘ　ｘ　、　エム、ズラスキ（Ｓ、　Ｍ、　ＺｕｒａｗｓｋＤおよびフランク　ディー。シー（Ｐｒａｎｋ　Ｄ、　Ｌｅｅ）、　　（１９８６）　、　　ｒｖウスＴヘルパー細胞の活性は、豊富なプレプロエンケファリン　ｍＲＮＡ合成を誘発する（Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｏｕｓｅ　Ｔ　ｈｅｌｐｅｒ　ｃｅＩＩｓ　（ｎｄｕｃｅｓ　ａｂｕｎｄａｎｔ　ｐｒｅｐｒｏｅｎｋｅｐｈａｌｉｎ　ｍＲＮＡ５ｙｎｔｈｅｓｉｓ）　Ｊ　Ｉ　５ｃｉｅｎｃｅ　２３２ニア７２−７７５実験の部ＩＩＩマイトジェン誘導遺伝子はＴ細胞活性化の初期段階において複数の調節経路に従う。幾つかの細胞表面分子のどれかを経由するＴ細胞へのマイトジェンシグナルの伝送は、多様な細胞内応答を引き出し、その幾つかまたは全部はその後の遺伝子発現出来事を調節する。そのような遺伝子を調節する経路の多様性を評価するために、９種の新規なマイトジェン誘導遺伝子の発現が、種々のＴ細胞活性化剤に応じて試験された。別個の第２シグナルの、個々のまたは共同してのマイトジェン刺激遺伝子誘導に対する相対的な貢献、および、異なる細胞表面構造から発生する時々異なるシグナルに対する個々の遺伝子の応答能力は、ここに説明されている。マイトジェンモノクローナル抗体でのＴ細胞の活性化は、ＣＤ２またはＣＤ３細胞表面分子に、またはＰＨＡと共に誘導された全９種の遺伝子に対して向けられている。かくして、細胞表面結合特性とは無関係に充分に有糸分裂させる薬剤（ｆｕｌｌｙ　ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ　ａｇｅｎｔ）による刺激は、ここで研究する全ての遺伝子の発現に関連している。しかしながら、５種の調節種類（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｃ］ａｓｓｅｓ）を包含する不均等な遺伝子発現パターンは、ＰＭＡ、カルシウム　イオノフォレ（ｃａｌｃｉｕｍ　１ｏｎｏｐｈｏｒｅ）および抗−ＣＤ２８モノクロ一ナル抗体、細胞内出来事のサブセット（ｓｕｂｓｅｔ）のみを仲介する薬剤の使用、およびこうした不完全マイトジェンシグナルによって解明された。ＩＬ−２および２種の新規リンホキン（ｌｕｍｐｈｏｋｉｎｅ）は、他のマイトジェン誘導遺伝子に係るユニークな転写活性化シグナルを必要とすると見られる一つの調節種類を表している。前記の実験の部で示したように、マイトジェン刺激に対するＴ細胞の迅速な転写応答は全く複雑であり、既述したものを越えた多（の遺伝子を含んでいる。さらに、これら９種の遺伝子のうちの幾つかの調節表現型の区別は、シグナル経路の複雑さが細胞表面から転写レベルに広がっていることを示唆している。イントロダクション前記の実験の部には、後にＰＨＡおよびＰＭＡによる静止ヒト末梢血（ＰＢ）Ｔ細胞のマイトジェン活性化へと誘導される迅速早期ｍＲＮＡ種に由来した６０を越える異なる新規ｃＤＮＡクローンの単離が記載されている。それらのデータは、Ｔ細胞に伝送された刺激への初期生化学的応答が非常に複雑で、数多くの直接に誘導された遺伝子を含んでいることを示唆している。独特の第２シグナルにより仲介される（ｍｅｄｉａｔｅａ）異なる経路は、この大−族（ｌａｒｇｅ　ｆａｍｉｌｙ）の遺伝子群を誘導することを予期させる。実際に、ここに提示されている重要な疑問は、増殖を導くそれらの刺激により引き出される誘導遺伝子応答の均等性または不均等性に関する。細胞周期進行（ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）において本質的な役割を担う遺伝子は、どのようなマイトジェン応答中にも開始剤とは無関係に不均等に発現されると予期される。さらに、誘導遺伝子の潜在的な調節種類を定義することは、与えられた種類についての調節基調特性を最終的に明瞭にする上で重要である。本研究は、異なる第２シグナルに影響を与えると知られている様々なマイトジェンおよびコミトジエン薬剤の使用による、９種の新規マイトジェン誘導遺伝子の活性化要求の詳細な特性付けに関する。これら９種の遺伝子は、さらに研究のために、前記の部（セクション）に記載の大きい方の群から選択されるが、その理由は、それらの発現がリンパ球細胞に限定されているか、または一方で、それらが免疫抑制薬シクロスポリンＡによる誘導阻害のような興味深い調節特性を示すからである。ここで研究された作用薬剤（ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　ａｇｅｎｔ）には、異なる理学的にＴ細胞表面分子に関連の無いＣＤ２．ＣＤ３またはＣＤ２８に向うモノクローナル抗体（ｍＡｂ）、レクチン　フィトへマグルチコン（ｌｅｃｔｉｎ　ｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ：　ＰＨＡ）　、カルシウム　イオノフオレ（ｃａｌｃｉｕｍｉｏｎｏｐｈｏｒｅ）、フォルボール　１２ −ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）　、およびジオクタノイルグリセロール（Ｉ）ｔｃ’りが含まれる。抗原またはｍＡｂの、Ｔ細胞受容体またはＴ細胞の関連ＣＤ３錯体への結合は、Ｔ細胞（１１■−２、ｌｌｌ−１８、ｌｌｌ−２３）の活性化を開始させる。ＰＨＡ仲介刺激（ＰＨＡ−ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ）は、選択された表面損失突然変異体（ｓｕｒｆａｃｅ　１ｏｓｓ　ｍｕｔａｎｔｓ）　（ｌｌｌ−２０）での研究により断定されたように、抗体受容体コンプレックスまたは対等発現分子（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｌｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｍｏｌｅｃｕｌｅ）を必要とするとみられる。ＣＤ２錯体（Ｅロゼツト受容体）を含めＴ細胞活性化の抗原独立経路（ａｎＬｔｇｅｎ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｐａｔｈｗａｙ）もまた記載されている（ｉｌｉｌ　９）、Ｔ細胞上の細胞表面受容体への上記マイトジェンの結合は、イノシトール　１．４．５−　トリホスフェートの生産、増加した細胞内カルシニウム濃度（（Ｃａ”ｉ））　、プロティン　キナー七Ｃ（ＰＫＣ）の膜トランスローケーション（ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）およびその後の増殖を生じさせる（Ｉ［１６、ｌｌｌ− ９、ｌ１ｌ−１３、ｌｌｌ−１５、Ｉｌｌ−２２、ｌｌｌ−２５）。対照的に、抗−ＣＤ２８による刺激がサイクリックＧＭＰ濃度の上昇を導き、（Ｃａ”）を増加させたり、ＰＫＣ（１１１１２、ｌｌｌ−１４、ｌｌｌ−２２、目１−２６）を活性化したりしないので、ＣＤ２８により伝送されたシグナルは、ＣＤ２またはＣＤ３のそれとは基本的に異なると思われる。さらに、ＣＤ２８により開始されたＩＬ−２生産は、ＣＤ３またはカルシウム　イオノ７ｔしおよびＰＭＡ　（ＩＩＩ−８）により誘導されるそれに比べ、シクロスポリンへの効果に抵抗性である。さらに抗−ＣＤ２８単独は、Ｔ細胞の増殖を刺激しないが、コミトジェン、例えばＰＭＡ　（Ｉｌｌ−７，ｌｌｌ−８）の同時存在を必要とする。Ｔ細胞はまた、細胞表面相互反応をバイパスし、ＰＭＡまたはＤｉＣ８に加えての続くカルシウム　イオノフォレでの処理によっても活性化され得る；後者の二つの薬剤は、プロティンキナーゼＣ（［Ｉ［−１６，１１１２１）を刺激することにより、少な（とも一部で作用する。イオノフォレで仲介された（Ｃａ”）の増加は、ＤｉＣ３またはＰＭＡと相乗的に作用して増殖を、また精製ＰＢ　　Ｔ細胞における誘導遺伝子発現とＴ細胞系ジャーカット（Ｉｌｌ−１６）におけるリンホカインを含めた幾つかの誘導遺伝子発現を刺激する。細胞は白血球永動法（Ｉｅｕｋｏｐｈｏｒｅｓｆｓ）により通常の健康な提供者から得られ、そしてＰＢリンパ球は、リンパ球分離媒体を通しての密度勾配遠心分離、続いてのナイロンウールカラム通過による接着細胞（単球およびＢ細胞）の除去により単離された。得られた細胞は、ＦＡＣ３による測定では、１％のＢ細胞と１％以下の半球を有していた。Ｔ細胞は、１０％加熱−不活性化ウシ胎子血清を含むＲＰＭＩ−１６４０培地中、２Ｘ１０’／ｍｌで培養され、以下の薬剤：１０ｎｇ／ｍｌで使用される抗−ＣＤ３　（ｍＡｂ　　０ＫＴ３．０ｒｔｈｏ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ　）　　；３　ｕ　ｇ／ｍ　１で使用されるＰ　ＨＡ　−Ｐ　（Ｂｕｒｒｏｕｇｈ、ｓ−Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）　；抗−ＣＤ２　（参照ｌｌｌ−１９：抗−Ｔ１１２および抗−Ｔ１１３腹水、Ｂ、　Ｒｅ１ｎｈｅｒｚより入手）の一つで刺激された；各腹水は１　：　２００の希釈比で使用された。ＰＢＴ細胞のピーク増殖の刺激能またはジャーカット細胞によるＩＬ−２産生により評価される最適濃度を決定するために全試薬が滴定された。培養時、シクロヘキシイミド（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）がｌｏμｇ／ｍｌで使用された。各薬剤の増殖刺激能は、４日後に分析される！Ｈ−チミジン組み込み（”Ｈ−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ　１ｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）にり測定された。代表的な実験では培地単独で１．００３ｃｐｍ、ＰＨＡで１８４，５６７　ｃｐｍ　、抗−ＣＤ２で１０７，９０８　ｃｐｍそして抗−ＣＤ３で１，２４８　ｃｐｍを示した。ＰＢ　　Ｔ細胞内の抗−ＣＤ３への応答の欠如は、同一提供者からの未分画ＰＢＬが１２７，７６０　ｃｌ）ｍを与えるので半球喪失によると見られる。ＣＤ２８＋ＰＢ　　Ｔ細胞の培養および活性化ＰＢ　　Ｔ細胞の約８０％はＣＤ２８＋を表わし、従って応答するＣＤ２８＋細胞による最大応答を確実にし、ＣＤ２８＋およびＣＤ２８＋集団（ｐｏｐｕ］ａｔｆｏｎｓ）の潜在的な相互作用（ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）を除くために、ＣＤ２８＋細胞は前述のように精製された（ＩＩＩ−８）。細胞は概して上記のごと（培養され、１１００ｎ／ｍｌでの抗−ＣＤ　２８　ｍ　Ａ　ｂ　９　、　３　（Ｊ、Ａ、Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒより入手）、１３３ｎＭｍでのイオノマイシン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ　；　Ｄ　Ｍ　Ｓ　Ｏ中に溶解）および０．３ｎｇ／ｍｌでのＰＨＡ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｊｃａｌ　Ｃｏ、　；　ＤＭ　Ｓ　Ｏ中に溶解）で４時間刺激された。予備実験は、全遺伝子が４時間で最大に誘導されることを示していた。ＰＭＡ濃度は、抗−Ｃ０２Ｂまたはそれ自身まだ分裂誘起性でないイオノマイシンのいずれかとで最大に相乗作用させるべ（、ｓＨ−チミジン組み込み（ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）により測定された。各々の薬剤のマイトジェン活性は、刺激３日後のｓＨ−チミジン組み込みで分析された。代表的な実験では、培地単独で１２１ｃｐｍ、ＰＭＡで４８８ｃｐｍ　ＳｍＡｂ　９．８単独で２３６ｃｐｍ　、　ｍＡｂ　９．　３とＰＭＡで５８，５９０ＣＩ）ＩＩＩ、イオノマイシン単独で１８６ｃｐｍ、イオノマイシンとＰＭＡで４４．７６０ｃｐｍそして固定化抗− ＣＤ３で６９，３９０ｃｐｍを示した。　　ジャーカット細胞（Ｊｕｒｋａｔ　ｃｅｌｌｓ）の培養および活性化：ジャーカット細胞は、ウシ胎子血清を２Ｘ１０’／ｍｌないし８×１ｏ値／ｍｌの密度で含むＲＰＭＩ−１６４０培地中に保持した。細胞の新鮮な部分試料を約６週間緩解した。細胞を４Ｘ１０’／ｍ】で、１種またはそれ以上の次の薬剤で刺激した：１゜０８ＭでのＤ　ｉ　Ｃ３（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｐｒｏｂｅｓ、　Ｉｎｃ、、Ｂｕｇｅｎ、ＯＲ；無水エタノール中に溶解）、５００ｎＭでのイオノマイシン、１０μ／ｍｌでのシクロヘキシイミド。ＤｉＣ３およびイオノマイシン濃度は、単独で使用されるとどちらも全＜ＩＬ−２を産生じないけれども、相互で最大限に相乗作用させるため、Ｔ細胞系ＧＴＬＬに依存するＩＬ−２に基づいて評価されるＩＬ−２産生により測定した。ノーザン（ＲＮＡプロット）分析：指示された時点間の培養に続いて、全細胞のＲＮＡをキニジンチオシアネートで抽出し、５．７Ｍ−ＣｓＣ］　　（夏１ｌ− ３）のクッションを通す遠心分離により精製した。ＲＮＡ（ＸＯμｇ／レーン）をホルムアルデヒド−アガロースゲル中の電気泳動により分離し、遺伝子スクリーン膜フィルタ（ＮＢＮ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｐｒｏｄｕｃｔ）上にプロットし、ニック翻訳（ｎｉｃｋ−ｔｒａｎｓｌａｔｊｏｎ＞によりＷＲ製される１ｍｐ −ラベル化精製ｃＤＮＡインサートにハイブリット化した。結果初期実験において、９種の新規マイトジェン誘導遺伝子の発現は、ＰＢナイロンウール非接着Ｔ細胞で試験された。細胞は、様々に変えられた時間、（ｉ）ＯＫＴ３゜ＣＤ３錯体（１）の非多型性鎖に結合するモノクローナル抗体：　（ｉｉ）ＣＤ　２分子（ＩＩＩ−１９）に向う２種のｍＡｂマイトジェン組合せ；および（ｆｉｔ）　ＰＨＡ　；で刺激され、９種の遺伝子の堅固状態（ｓｔｅａｄｙ　ｓｔａｔｅ）ｍ　ＲＮ　Ａレベルが測定された。図１１１−１は各遺伝子にとって、ＰＨＡ、抗−ＣＤ２および抗−ＣＤ３刺激が同様な応答結果に終ったことを示している。ｍＲＮＡ発現の相対的なレベルが低レベルの誘導性（ｐＡＴ　　２２９）から強誘導性（ｐＡＴ　　４６４）まで等板付けされ得るヒエラルキー（ｂｉｅｒａｒｃｈｙ）は３種のマイトジェンのいずれにも応答すると見ることができる。ＰＨＡ、　　または抗−ＣＤ２または抗 −ＣＤ３ｍＡｂのどれによっても、試験された９種の遺伝子のうち２つは強（誘導され（ｐＡＴ　　４６４．図１１１−１　：　ｐＡＴ　　７４４．データは図示せず）、２つは適度なレベルに誘導され（ｐＡＴ　　５６３．図１１１−１　：　ｐＡＴ　　１２０．データは図示せず）、２つは低いレベルに誘導され（ｐＡＴ　　４１６．図１１ｉ１　：　ｐＡＴ　　２３７．データは図示せず）、そして３つは弱く誘導された（ｐ　ＡＴ２２９、図１１１−１　：　ｐＡＴ　　１５４およびｐＡＴ　　２２５、データは図示せず）。ＰＭＡの存在下における上記マイトジェンのいずれかでの刺激は、ＰＨＡ、抗−ＣＤ２または抗−ＣＤ３ｍＡｂ単独と比較して、全遺伝子にとってそ高められた応答を導（（データは図示せず）。さらに、ｍＲＮＡ蓄積の動力学（ｋｉｎｅｔｉｃｓ）は各遺伝子にとってユニークであるけれども、これらの動力学は使用される刺激に係りなく、各遺伝子にとって相対的に同質である。タンパク質合成の中断が遺伝子の発現に影響するかどうかを決定するために、細胞はシクロヘキシイミドの不在下または存在下で刺激された；以前の研究は、多くの誘導遺伝子のｍＲＮＡレベルがこれらの条件（１１１４，１１１−１０、ｌｌｌ−１１）で高められることを示している。マイトジェン薬剤へのシクロヘキシイミド添加の相対的な効果は、ｍＲＮＡレベルの変調に係るシクロヘキシイミドのマグネチュードが遺伝子間で実質的に検知できないほどから１０倍以上まで異なるけれども、試験された各遺伝子にとって種々の刺激の間で一定であった。上記結果（表１１１−１にまとめた）は、これらの新規遺伝子が、研究用のＲＮへの製造（実験の部ＩＩ）に使用されるものよりもマイトジェン薬剤によって誘導されることを示している。重要なことに、抗原結合受容体（ＣＤ３）内の一つの鎖に結合しているｍＡｂを経由する刺激は、ここで研究された新規遺伝子の発現を誘導する。このように、Ｔ細胞がＣＤ２またはＣＤ３細胞表面受容体を通じて或はＰＨＡで活性化される時、この誘導遺伝子のパネルにおける各遺伝子は、一定の動力学パターンと、これらシグナルを発生させるのに使用された薬剤に係りの無い発現レベルを示す。表１１１−１　：　　図１１１−１−３に使用されている薬剤に応答してマイトジェン誘導された遺伝子についてのノーザンプロットデータの概要、記号：＋、ラベル化プローブへのｍＲＮＡハイブリッド化；−１非ハイブリッド化；十／− １弱いハイブリッド化；Ａｂ、ＤｉＣ８−およびイノマイシン仲介発現の廃棄（ａｂｒｏｇａｔｉｏｎ）　；　Ｉ　ｎ　ｃ　ｒ　ｒＤｉＣ８−およびイノマイシン仲介発現の増加レベル；ＮＤ、実験を行なわず。　異なる細胞表面受容体への結合にも拘らず、上記マイトジェンの各々は同様で迅速な細胞内応答を発生させることを示し、その一部または全部は回目ｒ−１中の試験された９種の遺伝子の活性化を必要とするかもしれない。しかしながら、この実験で用いられた条件は、用いられた３種の刺激の一つについては結果として増殖を生じさせないので、これらの９種の遺伝子の発現は、ＤＮＡ合成を開始させるのには不十分である。　さらに、９種の遺伝子の誘導要求が一族に（ｆａｍｉｌｉｅｓ）にグループされ得るかを問うために、高精製Ｔ細胞が、異なる生化学的シグナルを発生するコミトジェン薬剤で刺激された。これらの薬剤には、カルシウム　イオノフォレ、ＰＫＣ活性活性末剤は抗−ＣＤ２８ｍＡｂが含まれており、そのどれもが精製Ｔ細胞内のＤＮＡ合成を刺激しない（ＩＩＩ−８、ｌｌｌ−１６、［１１２４およびｌｌ１−２６に再掲）。それに対し、精製Ｔ細胞は、カルシウム　イオノフォレまたは抗−ＣＤ２８ｍＡｂとＰＭＡ　（材料および方法参照）とを組み合わせて処理した後、増殖した。ＰＭＡ、抗−ＣＤ２８ｍＡｂ９．３．イオノマイシン、ＰＭＡ＋抗−ＣＤ２８＋ＰＢおよびＰＭＡ＋イオノマイシンでＣＤ２８＋Ｔ細胞を刺激して得られた堅固状態ｍＲＮＡレベルはＩｇｒｌｌ−２中に示されている。ＣＤ２またはＣＤ３経由の刺激とは異なるように、それらは全９種のマイトジェン誘導遺伝子からグレード化された応答を導き、ＣＤ２８を通じた活性化は明らかに９種の新規遺伝子を異なるグループに区別した（図１１１−２および表１１１−１）。ｐＡＴ　　４１６（図１１１−２）によって例示される、ｐＡＴ　　１２０、ｐＡＴ　　１５４、ｐＡＴ　　２２５およびｐＡＴ　　２２９（データは示さず）を含む一つグループは、抗−ＣＤ２８に応答を示さなかった。この遺伝子群はＰＭＡ単独に可変の応答性を示すが、抗−ＣＤ２８によるＰＭＡシグナルの増強作用（ｐｏｔｅｎｔｉａＨｏｎ）は如何なる場合も観察されなかった。ＣＤ４．ＣＤ８またはＣＤ４５に結合しているコントロールｍＡｂでの刺激は、堅固状態ｍＲＮＡレベルに影響しなかった。しかしながら、ＰＭＡ単独で観察された堅固状態ｍＲＮＡレベルは、ＰＨＡとＰＭＡの共同刺激により高められた（データは示さず）。第２の遺伝子群において、抗−ＣＤ２８応答性は、４種の遺伝子（ｐＡＴ　　２３７およびｐＡＴ　　４６４．図１１１−２　＋　ｐＡＴ　　５６３およびｐＡＴ７４４、データは示さず）についておよびＩＬ−２（Ｉ［ｉ８、データは示さず）について、ｍＡｂ９．３とＰＭＡの間で相乗作用として観察された。ＰＭＡ単独では可変の発現レベルを誘導できないけれども、水溶性または架橋化ｍＡｂ９．３での遺伝子誘導は、この群には見られなかった。それに対し、ＩＬ−２ｍＲＮＡはＰＭＡ単独で誘導されなかったが、ＰＭＡとｍＡｂ９．３の相乗的組合せに応答して誘導された。全９種のマイトジェン誘導遺伝子は、固定化された抗− ＣＤ３ｍＡｂに応答しくデータは示さず）、ＣＤ２８＋ＰＢ　　Ｔ細胞における遺伝子発現パターンが図ｆｌｉｔ中に掲げられたより少量の厳格精製ＰＢ　　Ｔ細胞に匹敵することを示した。これらの結果は、図１１１−１に示されているデータを広げ、また、代わりのＰＢ　　Ｔ細胞活性化手段を用いることによってＰＨＡ、抗−ＣＤ２または抗−ＣＤ３仲介シグナルに全て応答する９種のマイトジェン誘導遺伝子が明らかにＣＤ２８誘導シグナルに応答するグループ（ＰＭＡの存在下）と、そのようなシグナルに応答しないグループとに区別できることを示している（表１１１−８参照）。ｍＡｂ９．８処理に応答する遺伝子のため、ＣＤ２８、ＣＤ３およびＣＤ２− 仲介活性化に共通するシグナルのどれもが、これら遺伝子の幾つかを調節できるか、またはｍＡｂ９．８が、代わりのメカニズムで幾つかの遺伝子の発現を誘導できる新規シグナルを伝送する。コミトジェンＰＭＡおよびｍＡｂ９．３の効果を他のコミトジェンＣａ　ｆｉ４イオノフｔしと比較するために、ＰＭＡの不在下または存在下で細胞ｔ・イオマイシンで処理した。興味深いことに、ｍＡｂ９．３とＰＭＡ間に相乗作用を観察させるための遺伝子の４種のうちの３種は、イオノマイシンとＰＭＡ間に強い相乗作用を発揮させ（ｐＡＴ　　２３７．ｐＡＴ　　４６４．図１１！−２；　ｐ　ＡＴ７４４、データ示さず）、そしてｍＡｂ９．３非応答性遺伝子は同様にイオノマイシンにより影響されない。ｍＡｂ９．３が（Ｃａ　”）　　ｉ　（ＩＩＩ−２４）に影響を与えるかは不明である。このことは、ｐＡＴ　　５６３がＰＭＡ（表１１１−３）の存在下で抗−ＣＤ２８とイオマイシンにより異なって調節されることの観察と合わせて、これら２種の部分的マイトジェン薬剤がＰＭＡと相乗作用するメカニズムが同様に異なることを示唆している。マイトジェン誘導遺伝子の調節−族をさらに定義するために、Ｔ細胞系ジャーカット中の遺伝子誘導におけるイオノマイシンおよびＤｉＣ８−仲介ＰＫＣ活性化の分離および併合効果を試験した。ＤｉＣ８は、ＰＫＣ（ＩＩｒ−５、＋１１１６、ｌｌｌ−１７）を逆転可能に活性化することにより内因性ＤＣの効果をまねる細胞透過性合成ジアシルグリセロール（ＤＧ）である。以前の研究は、上記のように分析された休止Ｔ細胞中の９種のマイトジェン誘導遺伝子のうちの８種が、ＰＨＡとＰＭＡの併合添加でジャーカット中で誘導性であることを示している；ｐＡＴ　　５６８は構造的に低レベルで発現される（データは示さず）。シクロヘキシイミドの存在下または不在下におけるイオノマイシンおよび／またはＤｉＣ８でのジャーカット細胞の処理は、３種の遺伝子調節種類が定義できることを示している。発見された第１の種類は、図［１１３中のｐＡＴ　　２３７により代表され、ＰＫＣ誘導性であるが、（Ｃａ”）ｉシグナルで可変的な僅かの相乗作用を示すかまたは相乗作用を全（示さない遺伝子を含む（ｐＡＴ　　２３７．図１１１−８　：　ｐＡＴ　　１２０．　ｐＡＴ　　１５４．ｐＡＴ　　２２５およびｐＡＴ　　４１６゜データは示さず）。この種類の遺伝子について、イノマイシン単独への応答は発見されなかった。これら遺伝子の全てはＰＢ　　Ｔ細胞中で、ＰＭＡ仲介ＫＰＣ活性化により同様に誘導され、ジャーカット中のＰＭＡ応答における遺伝子発現パターンは、ここでＤｉＣ８として表されているそれと同一であった（データは示さず）。ｐＡＴ　２２９を含む第２の種類はＫＢＣ誘導性であり、〔Ｃａ”）ｉシグナルにより増強され得る。この点に関しｐＡＴ　　２２９はＩＬ−２Ｒに似ている（データは示さず）が、ｐＡＴ　　２２９が増加した（Ｃａ’◆〕　ｉレベル単独で誘導されることにおいてＩＬ−２Ｒとは異なっている（図１１１−３）。これらの細胞で観察された最後の種類には、ｐＡＴ４６４（データは示さず）およびｐＡＴ　　７４４並びにＩＬ−２（図１１１−３）が含まれ、その誘導は、この実験で評価された両シグナルの必要性を示した。加えて、ジャーカット細胞中の種々の遺伝子の、シクロヘキシイミドの存在下での誘導剤に対する応答は、ＩＬ−２，ｐＡＴ　４６４およびｐＡＴ　　７４４を他の遺伝子から区別する付加的な相互関係を示した。特に活性化剤と同時に加えられたシクロヘキシイミドは完全にＩＬ−２，ｐＡＴ７４４（図１１１−３）およびｐＡＴ　　４６４ｍＲＮＡの蓄積を防止し、新しく合成されたタンパク質を必要とする遺伝子誘導メカニズムを意味している。対照的にシクロヘキシイミド処理は他の二つのグループにおいてｍＲＮＡレベルを高めた（図１［１−３，データは示さず）。ディスカッジョン９種の新規マイトジェン誘導遺伝子のパネルを誘導する能力に関して異なるシグナル経路の効果は表１１１−１にまとめられている。ここで研究された遺伝子の大部分はＰＫＧ単独活性化にある程度の応答性を示す。しかしながら、このシグナルは、ＰＨＡおよび抗−ＣＤ３または抗−ＣＤ２ｍＡｂがＰＢ　　Ｔ細胞中の全ての遺伝子についてＰＭＡの効果を高める（データは示さず）ので、評価したどの遺伝子についても最大応答性が不十分であり、一方、抗−ＣＤ２８およびイオマイシン（図１１１２、データは示さず）は、ＰＭＡと一緒になってＰＢＴ細胞中胸中れら遺伝子のサブセットのために相乗作用を示す。ＰＨＡ、抗−ＣＤ３または抗−ＣＤ２ｍＡｂに応答する各遺伝子のための明らかな発現パターンの均等性は、質的に類似する一連の細胞内生化学的出来事が、これら薬剤でＴ細胞を活性化したことに由来することを反映するのかも知れない。様々な誘導剤に応じた遺伝子発現の共通パターンは、シグナル経路の数多（のレベルで潜在的に仲介され得る。シグナル発生のレベルで、細胞内メツセンジャーの類似する一群が発生するか、または代わりにこれら遺伝子の転写または後転写の調節におけるそれらの効果に近い点で様々なシグナルを伝達する分子の集合が起こる。これら遺伝子をコントロールする異なる調節基調（ｄｉｓｔｉｎｃｔ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｍｏｔｉｆｓ）は、転写に正の効果（ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ）を発生するにもかかわらず異なるシグナルに応答性であろう。ＰＨＡまたは抗−ＣＤ３および抗−ＣＤ２ｍＡｂでの刺激に対するＰＢ　　Ｔ細胞応答の明瞭な均等性にも拘らず、誘導遺伝子のための調節差異は、そのシステムを、上記のもの（ＩＩＩ−２４）および抗−ＣＤ２８ｍＡｂに関連するシグナルのサブセットを発生させると見られるイオノマイシンで探査することによって暴かれ、それが異なる第２のシグナルを発生することは明らかである（Ｉｆ■− ８，！ｆｉｌ　２．　ｌｌｌ−１４，ｌｌｌ−２２，ｌｌｌ−２６）　、イオノマイシンおよび抗−ＣＤ２８に非応答性である種類■遺伝子（表１１１−１）は、Ｔ細胞中の前記マイトジェン誘導遺伝子の大分部に比較して新規である。さらに、ジャーカット細胞系における膜−バイパス刺激の効果を分析することにより不均等性が観察された。５種の調節種類が９種のマイトジェン−誘導遺伝子のこの相対的に小さな群を職別できるという事実は、このＴ細胞マイトジェン刺激の段階で作用する調節メカニズムの複雑さを示している。遺伝子誘導の要求は一般的に休止Ｔ細胞およびジャーカット細胞においてパラレルであるが、成る遺伝子の調節において差異が見られた。特に刺激性のシクロヘキシイミドの添加は、ジャーカットにおいてはｐＡＴ　　４６４、ｐＡＴ　　７４４およびＩＬ−２のマイトジェン誘導を廃止させる（図１１１−３、データは示さず）がＰＢ　　Ｔ細胞においてはこれら遺伝子のためのｍＲＮＡレベルを僅かに高めた（図１０−１、データは示さず）。第二にイオノマイシンは、ＰＢ　　Ｔ細胞中のｐＡＴ　　２３７ｍＲＮＡレベルを高めることにＰＭＡで相乗作用を示すが、ジャーカット細胞では示さず、一方、ｐＡＴ　　２２９はＰＢ　　Ｔ細胞中でイオノマイシンに応答しないが、ジャーカット中ではそうする。これらの不均衡は、ＰＢＴ細胞が集団サブタイプに関して不均等であるという事実に、または静止した非形質転換細胞と環化癌細胞との間の基本的な活性化状態における差異に由来しているかもしれない。それとは別に、ジャーカット細胞は、成る遺伝子誘導出来事に必要な特異調節成分を異常に高発生または低発生するかもしれない。本研究は、ｐＡＴ　　４６４およびｐＡＴ　　７４４の調節における目立つ相互関係をＩＬ−２のそれと共に示した。事実、ｐＡＴ　　４６４およびｐＡＴ　　７４４のＤＮＡ配列は、リーダーペプチドを示している誘導アミノ酸配列と、１種のリンホキナーゼの特性を示す特異位置でのアミノ酸の保存を生じさせる。この遺伝子の調節種類は、ＰＢ　　Ｔ細胞中のＣＤ２およびＣＤ３に加えて、ＣＤ２８を通して仲介されたシグナルに応答し、ジャーカット細胞における二つのシグナルの必要を示し、そしてそれらの誘導はジャーカット細胞におけるシクロヘキシイミド処理により完全に廃止させられる。ジャーカット細胞におけるｍＲＮＡ誘導を進行するタンパク質合成の必要は、ここで研究された多くの他のマイトジェン誘導遺伝子にくらべ、この種類の遺伝子にはユニークであると見られ、そして一方では、これらのための新規な保存された調節メカニズムと最もありそうな他の他のリンホキナーゼを示唆している。この章は、Ｔ細胞のマイトジェン刺激に横たわっている遺伝子の活性化メカニズムを解明するための本発明のＤＮＡ５の用途を示しており、従って炎症および／または成長および修復における早期出来事に係る遺伝子誘導のための生化学分析を含む本発明の具体例を示している。刊行物１１１−１．　　　ポルスト、ジェー、　（Ｂｏｒｓｔ、　Ｊ、　）、ニス。アレキサンダー（Ｓ、ＡＩｅｘａｎｄｅｒ）　、ジュー。エルダー（Ｊ。Ｂｌｄｅｒ）およびジー、テルホルスト（Ｇ、Ｔｅｒｈｏｒｓｔ）＋　　（１９８３）、ｒヒトＴリンパ球上のＴ８コンプレックスは４個の構造の異なる糖蛋白（Ｔｈｅ　Ｔ３　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｏｎ　ｈｕｍａｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　１ｎｂｏｌｖｅｓ　ｆｏｕｒ　５ｔｒｕｃｔｕｒａｌｌｙ　ｄｉｓＮｎｃｔｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ）Ｊ　、　Ｊ、　Ｂｉｏ、　Ｃｈｅｍ、　２５８：５１３５，５１４１１１１−２．　　チャング、ティー、ダブリ−Ｌ−、（Ｃｈａｎｇ。Ｔ、　Ｗ、　）、　　ビー、シー、クング（Ｐ、Ｃ，Ｋｕｎｇ）、　ｘス、ビー。ギングラス（Ｓ、　Ｐ、　Ｇｊｎｇｒａｓ）およびジー、ボルドスタイン（Ｇ、Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ）　、　　（１９８１）　、　　ｒＯＫＴ　３モノクロナル抗体は、ヒトＴ細胞上で抗原認識構造体と反応するか？　（Ｄｏｓｅ　０ＫＴ３　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｒｅａｃｔ　ｗＨｈ　ａｎａｎｔｉｇｅｎ　ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　Ｔ　ｃｅｌｌｓ？）Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｆ、ＵＳＡ　７８：１８０５．１８０８１１Ｔ−３，チルグウィン、ジエー、エム、　（Ｃｈｉｒｇｗｉｎ、　Ｊ、　Ｍ、　）　、エイ、イー、ブリジビラ（Ａ、　Ｂ、　Ｐｒｚｙｂｙｌａ）。アール、エフ、マクドナルド（Ｒ，Ｆ、　ＭｃＤｏｎａｌｄ）およびダブリュー、ジエー、ルター（Ｗ、Ｊ、Ｒｕｔｔｅｒ）、　　（１９７９）　。「リボヌクレアーゼ中の豊富な源からの生物的活性リボ核酸の単離（Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｊｏｌｏｇｆｃａｌｌｙ　ａｃｔｉｖｅ　ｒｉｂｏ−ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄ　ｆｒｏｍ　５ｏｕｒｃｅｓ　ｅｎｒｉｃｈｅｄ　ｉｎ　ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ）　Ｊ　、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　１８：５２９４−５２９９ＩＩＩ−４，コチャラン、ビー、エイチ、　（Ｃｏｃｈｒａｎ、　Ｂ。Ｈｏ）、エイ、シー、レフエル（Ａ、Ｃ，Ｒｅｆｆｅｌ）およびシー。エイチ、スチレス（Ｃ，Ｈ，５ｔｉｌｅｓ）、　　（１９８３）　、　　ｒ血小板誘導性成長因子により調節された遺伝子シーフェンスの分子クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ｇｅｎｅ　５ｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｒＢｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔ。ｒ）　Ｊ　、　Ｃｅ１ｌ　３３：９３９−９４７１１１−５．　ディビス、アール、ジｚ　−、（Ｄａｖｆｓ、　Ｒ，Ｊ。）、ビー、アール、ガノン（Ｂ、　Ｒ，Ｇａｎｏｎｇ）、アール、エム。ベル（Ｒ，Ｍ、　Ｂｅ１ｌ）およびエム、ビー、ゼク（Ｍ、　Ｐ　−Ｃｚｅｃｈ）　＋（１９８５）、ｒｓｎ−１，２−ジオクタノニルグリセロール。表皮細胞成長因子レセプターおよび細胞分裂促進に於いてホルボールジエステル作用の挙動をする細胞−透過性ジアシルグリセロール（ｓｎ−１，２−Ｄｉｏｃｔａｎｏｎｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ、　Ａ　ｃｅｌｌ−ｐｅｒｍｅａｂｌｅ　ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ　ｔｈａｔ　ｍ１ｍ１ｃｓ　ｐｈｏｒｂｏｌ　ｄｉｅｓｔｅｒ　ａｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｎｄ　ｍｉｔｏｇｅｎＢｉｓ）Ｊ　＋　Ｊ、　Ｂｉｏｌ。Ｃｈｅｒａ、　２６０：１５６２．１５６６１１１−６．　　　ファラー、ダブリュー、エル、　（Ｆａｒｒａｒ、Ｗ、Ｌ、）およびエフ、ダブリュー、ルスチェツチ（Ｆ、　Ｗ。Ｒｕ５ｃｅｔｔｉ）、　　（１９８６）　、　　ｒ　Ｉ　Ｌ　２レセプターの発現とプロティンキナーゼＧ活性の関係（Ａｓｓｏｃ］ｔａｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　　ｋｉｎａｓｅ　　Ｇ　　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　　ｗｉｔｈ　　ＩＬ　　２　　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）」ｌ　Ｊ、［ｍｍｕｎｏｌ、　１３６：１２６６−１２７３１１１−７．　　ハラ、ティー、　（Ｈａｒａ、Ｔ、）　、ニス、エム。フ（Ｓ、　Ｍ、　Ｐｕ）およびジュー。エイ、ハナエン（Ｊ、　Ａ、　Ｈａｎａｅｎ）＋（１９８５）、ｒヒトＴ細胞活性１１．４４キロダルトンのポリペプチド（９，３抗原）のダイマーに結合したヂスルフィドを介して、主なＴ細胞集団により使用された新規活性経路（Ｈｕｍａｎ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ａｃｔｉｖａ目ｏｎ　Ｉｌ、　Ａ　ｎｅｗａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｐａｔｈｗａｙ　ｕｓｅｄ　ｂｙ　ａ　ｍａｊｏｒ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｖｉａ　ａ　ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ　ｂｏｎｄｅｄ　ｊｉｍｅｒ　ｏｆ　ａ　４４　ｋｉｌｏｄａＩｔｏｎ　１）ＯＩＹｐｅｐｔｉｄｅ　（９，３ａｎｔｉｇｅｎ））Ｊ　、　Ｊ、　Ｂｘｏ８Ｍｅｄ。１６１：１５１３−１５２４１１１−８．　　　シュン、ジー、エイチ、　（Ｊｕｎｅ、Ｇ、Ｈ，）　＋シｘ −，：Ｌイ、　　Ｌ／フッドター（Ｊ、Ａ、Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ）　、エム。エム、ギレスビ−ｒ−（Ｍ、Ｍ、Ｇ１１ｌｅｓｐｉｅ）　、ティー、リントスチン（Ｔ、　Ｌｉｎｄｓｔｅｎ）およびシー、ビー、トンプソン（Ｃ，Ｂ。Ｔｈｏｍｐｓｏｎ）　、　　（１９８７）　、　　ｒＣＤ　２８経路を含むＴ細胞増殖は、シクロスポリン耐性　インターロイキン−２遺伝子発現と関連する（Ｔ　ｃｅｌｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎｖｏｌｖｆｎｇ　ａ　ＣＤ２８　ｐａｔｈｗａｙ　ｉｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）Ｊ　＊　Ｍｏ１、　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、　７：４４７２− ４４８１１１１−９．　　　シュン、ジー、エイチ、　（Ｊｕｎｅ、Ｇ、Ｈ，）　１ジェー、エイ、レッドペター（Ｊ、Ａ、Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ）　ｒ　　ビー。ニス、ラビノヴイッチ（Ｐ、Ｓ、　Ｒａｂｉｎｏｖｔｔｃｈ）　ｌ　　ビー、ジエー、マルチン（Ｐ、Ｊ、Ｍａｒｔｆｎ）、　　ビー、ジー、ベテイ−（Ｐ、Ｇ。Ｂｅａｔｔｙ）およびジュー。エイ、ハンセン（Ｊ、Ａ、　Ｈａｎｓｅｎ）。（１９８６）、ｒ分化抗原クラスター２　（Ｅロゼツトレセプター）またはヒトリンパ球の３（Ｔ！３）刺激の後の、カルシウム誘拐および細胞内カルシウム起動の異なるパターン（Ｄｉｓｔｉｎｃｔ　ｐａｔｔｅｒｎｓ　ｏｆ　ｃａｌｃｉｕｍｕ　ｆｌｕｘ　ａｎｄｆｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｅａｌｃｉｕｍｕ　ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ａｆｔｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｆｏｎ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｃｌｕｓｔｅｒ　２　（Ｂ　ｒｏｓｅｔｔｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ）ｏｒ　３（Ｔ３）　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　１ｙａ＋ｐｈｏｃｙｔｅｓ）　Ｊ　＊　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　７７：１２２４．１２３２ＩＩＩ−１０，ケリー、ケイ、　（Ｋｅｌｌｙ、　Ｋ、　）、　　　ビー。エイチ、コツチャラン（Ｂ、Ｈ，Ｃｏｃｈｒａｎ）　、　　シー、ディー。スタイルス（Ｃ，Ｄ、　５ｔｉｌｅｓ）およびビー、レダー（Ｐ、　Ｌｅｄｅｒ）、（１９８３）、ｒリンパ球マイトゲンおよび血小板誘導性成長因子によるｃ　−ｍ　ｙ　ｃ遺伝子の細胞特異性調節（Ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃ−ｍｙｃ　ｇｅｎｅ　ｂｙｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｍｉｔｏｇｅｎｓ　ａｎｄ　ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ）Ｊ　、　Ｃｅ１ｌ　３５：６０３−６１０ＩＩＩ−１１，ラウ、エル、エフ、　（Ｌａｕ、Ｌ、Ｆ、）およびディー、ナタンス（Ｄ、Ｎａｔｈａｎｓ）　、　　（，１９８５）　、　　ｒ培養されたマウス細胞のＧｏ／Ｇｌ）ランジションの間、発現された一群の遺伝子の同定（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｓｅｔ　ｏｆ　ｇｅｎｅｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ＧＯ／Ｇｌ　ｔｒａｎｓｉ目０ｎｏｆ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｍｏｕｓｅ　ｃｅｌｌｓ）Ｊ　＋　ＢＭＢＯＪ、　４：３１４５−３１５１１ＩＩ−１２，レッドペター、ジュー。エイ、　（Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ、　Ｊ、Ａ、　）＋　　シー、エイチ、シュン（Ｃ，Ｈ，Ｊｕｎｅ）、　エル。ニス、グロスマイアー（Ｌ、　Ｓ、　Ｇｒｏｓｍａｉｒｅ）およびビー、ニス、ラビノビッチ（Ｐ、Ｓ、Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ）　＋　　（１９８７）　＋「表面抗原のクロスリンクはＴリンパ球中で細胞内イオン化カルシウムの起動を生じる（Ｃｒｏｓｓ−１ｉｎｋｉｎｇ　ｏｆ　５ｕｒｆａｃｅ　ａｎｔｉｇｅｎｓ　ｃａｕｓｅｓ　ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　１ｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｆｏｎｉｚｅｄ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｉｎ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｃｔｅｓ）　Ｊ　＊　Ｐｒａｃ、　Ｎａｔｌ。Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８４：１３８４．１３８８ＩＩＩ−１３，レッドペター、ジュー。エイ、　（Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ、　Ｊ、　Ａ、　）＋　　ジー、エイチ、シュン（Ｃ，Ｈ，Ｊｕｎｅ）、　　ビー。ジェー、マルチン（Ｐ、Ｊ、Ｍａｒｔｉｎ）＋　ジー、イー、スブーナ−（Ｇ、Ｂ、５ｐｏｏｎｅｒ）　、　　ジュー。エイ、ハンセン（Ｊ、　Ａ、　Ｈａｎｓｅｎ）およびケイ、イー、メイアー（Ｋ、Ｂ、Ｍｅｉｅｒ）　、　　（１９８６）、ｒＣＤ３結合の価数およびＣＤ３細胞表面錯体の内面化は、第二の暗号に対するＴ細胞反応を′Ｉ４節するニブロチインキナーゼＣ１細胞質フリーカルシウムでの硬化の違い、及び増殖（Ｖａｌｅｎｃｙ　ｏｆ　ＣＤ３　ｂｉｎｄｉｎｇ　ａｎｄｊｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｆｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＣＤ３　ｃｅｌｌ　５ｕｒｆａｃｅ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｃｏｎｔｒｏｌ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｔｏ　５ｅｃｏｎｄ　ｓｊｇｎａｌｓ：　＋Ｎ５ｔｉｎｃＮｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　Ｃ，ｃｙｔ。ｐｌａｓｍｉｃ　ｆｒｅｅ　ｃａｌｃｆｕｍ、　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）　Ｊ　、　Ｊ。Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３６：３９４５−３９５２ＩＩＩ−１４，レッドペター、ジュー。エイ、　（Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ＋Ｊ−Ａ−）＋　エム、バーソンズ、　（Ｍ、Ｐａｒｓｏｎｓ）　ｒ　　ビー。ジュー９マルチン（Ｐ、　Ｊ、　Ｍａｒｔｉｎ）、　ジュー。エイ、ハンセン（Ｊ、　Ａ、　Ｈａｎｓｅｎ）およびビー、ニス、ラビノヴイッチ（Ｐ、　Ｓ。Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ、　）及びシー、エイチ、シュン（Ｃ，Ｈ，Ｊｕｎｅ）　（１９８６）　、　　ｒＣＤ５　（Ｔｐ６７）及びＴｐ４４細胞表面分子に対する抗体接着：環状ニウクレチドについての効果、細胞質フリーカルシウム及びｃＡＭＰ、仲介抑制Ｊ　、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３７：３２９９．３９５２２１１−１５．　　　マイノ、ブイ、シー８．エム、ジェーハイマンおよびエム、ジュー。クリンプトン（１９７５）、［ホスファチジルイノシトールの増強された代謝回転とマイトジェンによるリンパ球活性との間の関係」。Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、　１４６：２４７−２５２ＩＩＩ−１６，マンガー、ビー９．ニー、ワイス、ジェー、インボデン、ティー、レイングおよびジュー。ディー、ストボ（１９８７）、ｒＴ細胞抗原レセプターコンブレタスにより標識化されたトランスメンブランにおけるプロティンキナーゼＣの役割Ｊ　、　Ｊ、　ｒｍｍｕｎｏｌ、　　１３９：２７５５−２７６０ＩＩＩ−１７，メイ５　ダブリユウ、ニス２．イー、ジーラベチナ及びビー、ガトレカサス（１９８６）、ｒプロティンキナーゼＣの細胞内活性化及びジアシルグリセロールによる表面トランスフェリン　レセプターの調節はホスハチジル酸の急速な形成と関連する自発的な可逆プロセスである。Ｊ　＊　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｉｃ、　ＵＳＡ　８３：１２８１−１２８４゜ｌｌｌ−１８，ミューアー、ニス、ジー１．ジエイ、ジー、ホジドン、アール、イー、フッセイ、ジエイ、ビーブロテンチス、ニス、エフ、シュロスマン及びい −、エル、ラインヘルツ（１９８ｔ）、ｒヒトＴｍ胞りローン上のレセプターを指揮するモノクロナル抗体の抗原様効果Ｊ　、　Ｊ、　Ｂｘｐ、Ｍｅｄ、　１５８：９８８−９９３゜ＩＩＩ−１９，ミュウアー、ニス、ジー、アール、イー、フッセイ、エム、ファビー、ディー、フｔクス、オー、アキュート、ケー、ニー、フィッガラルド、ジェーシー、ホジドン、ジュー。ビー、プロテンチス、ニス。エフ、シュロスマン及びイー、エル、ラインハルト（１９８４）、ｒＴ細胞活性化の代替経路：５０ｋｄＴ１１羊赤血球レセプタープロティンに対する機能的な役割」。Ｃｅ１ｌ　３６：８９７−９０６ＩＩＩ−２０，モレツタ、ニー１．ニー、ボギー、ディー、オリーブ、ジー、ボッチーノ、ジー、フォルチスジー、パンタレオ及びエル、モレツタ（１９８７）。「Ｔ細胞活性化を含む分子を欠くＴ細胞変種（ＴＩ　　Ｔ。細胞レセプター、Ｔ４４およびＴｌ　１）の選択と特徴付：異なる活性化経路中の機能的な関係の分析Ｊ　、　ｐｒｏｃ。Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、ｓｏｃ、　ＵＳＡ　８４：１６５４−１６５８ＩＩＩ−２１，ニシザ牛、ワイ、（１９８４）、ｒ細胞表面シグナル形質導入と腫瘍促進に於けるプロティンキナーゼの役割Ｊ　、　Ｎａｔｕｒｅ、３０８：６９３−６９７ＩＩＩ−２２，バンタレオ、ジー５．ディー、オリーブ、ニー、ボギー、ダブリウ、ジェー、クズンボ、エル。モレツタ及びニー、モレツタ（１９８７）、ｒヒトＴ細胞活性化のＴｌ１−依存経路を介して標識化されるトランスメンブラン。　　１．２−ジアシルグリセロール及びイノシトールホスフェートの包含にたいする事実Ｊ、Ｂｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍ＋ｎｏｎｏ１．１７：５５−６０ＩＩＩ−２３，サイト−、ティー及びアール、エフ。ゲルメイン（１９８６）、ｒＴ細胞レパートリ−の発生と選択。　Ｔ細胞認識の分子ベースの研究からの洞察」。［ｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ＲｅｖｉｅｗｓＩＩＩ−２４，トルネー、ニー１．エフ、アルバート。ビー、ジルステイン及びニーエム、シュミット　Ｖ　ｅｒｈｕｌｓｔ、　（１９８５）　、　　ｒカルシウム　イオノホレス及びホルボールエステル間の相乗作用により迂回するリンパ球活性化の初期段階Ｊ　、　Ｎａｔｕｒｅ　３１３：３１８．３２０ＩＩＩ−２５，ヴアイス、ニー１．ジェー、インボデン、ディー、ショバック及びジエー、ストボ　（１９８４）、「ヒトＴ細胞活性化に於ける１３表面分子の役割：細胞質フリーカルシウムの増加でもたらされるＴ−３依存活性化Ｊ　＋　Ｐｒｏｃｅ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８１：４１６９−４１７３゜１１１−２８．　　　ヴアイス、ニー、及びジュー。ビー。インボデン、（１９８７）、ｒ細胞表面粒子及びヒトＴリンパ球活性を含む初期事実Ｊ　ｒ　Ａｄｖ、　ＩＩＩｌｍｕｎｏｌ、　４１：１゜３８゜実験の部■ ヒトＴ細胞のマイトジェン活性化は構造的類似性と分泌因子の新規ファミリーとをあわせもつ２種の密接に関連した遺伝子を誘導する相当するｍＲＮＡがヒト末梢血子細胞中のマイトジェン活性化により誘導される約６０種の新規ｃＤＮＡクローンが予め単離された（実験の部■参照）。ここには、新規リンホカイン／サイトカインをコード化する２種のクローンｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４の一次構造および調節が記載されている。ＩＬ−２と同様に、両方の遺伝子は薬剤の相乗作用、例えば最適発現のためにＰＨＡおよびＰＭＡを必要とし、そしてさらに、両方の誘導は免疫抑制剤シクロスポリンＡに感受性である。２種の遺伝子はＴ細胞、Ｂ細胞および前骨髄球細胞系ＨＬ６０中で発現され得るが、しかしヒト繊維芽細胞中で発現されない。このことはそれらの発現が造血系統に限定されていることを示菅する。これらの２種のクローンによりコード化される予測ペプチドは、分泌タンパク質に特存の疎水性Ｎ末端リーダーの特徴を示す。両方のタンパク質の予測された大きさは推定上のリーダーペプチドの切断に基づいて約８ｋＤである。ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４ＤＮＡで形質転換された哺乳類（ＣＯＳ）Ｊｌ胞は、リーダーペプチドが切除された後に、ｃＤＮＡ配列から期待される大きさの新規タンパク質を分泌した。ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４の両方の予測Ｃ末端アミノ酸に対して生起させたウサギ抗血清は形質転換されたＣＯ３細胞から分泌された生成物およびマイトジェン活性化されたヒト末梢血子細胞により分泌された同じ大きさの生成物と反応した。ｐへＴ４６４およびｐＡＴ７４４は互いに類似しており、そしていくつかの重要なアミノ酸配列類似性と分泌因子の新たに出現するファミリーとをあわせもつ。該因子は結合組織活性化因子ＩＩＩ　（ＣＴＡＰＩ［［）　、血小板因子４（ＰＦ４）、インターフェロン−ガンマ誘導化因子（ＩＰ−１０）、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）および好中球への走化性因子（３−１０Ｃ，ＭＤＮＣＦ、ＮＡＦ）を包含する。これらの因子のいくつかは炎症性応答と関連した機能を示し、および／またはマイトジェン活性を有する。まとめると、ここに提示されたデータは、ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４は新規なリンホカイン／サイト力インをコード化し、該リンホカイン／サイト力インはこれと構造的に関連した因子によるものと同様の免疫応答の間に役割を果たす。ｐＡＴ７４４と実質的に同一の遺伝子から誘導されたｃＤＮＡクローンは上記実験の部工で特徴づけられた。そのクローンはＡｃｔ−２と呼ばれる。導入休止Ｔ細胞の活性化で開始される遺伝プログラムを分析する必要がある。この目的のために、マイトジェンによりヒト末梢血子細胞細胞中に誘導される６０以上の遺伝子が単離された（実験の部■参照）。新規リンホカインをコード化し得るこのコレクションの中からそれらの遺伝子を選択するために、単離された遺伝子は因子をコード化する公知遺伝子により示される調節特性が試験された。ここには、その遺伝子が多くの調節特性とシクロスポリン八に対する全体の感受性を包含するＩＬ−２遺伝子とをあわせもつ２種のｃＤＮＡクローンｐＡＴ４６４およびＩ）ＡＴ７４４の一次構造が記載されている。それらのヌクレオチド配列は分泌タンパク質の疎水性リーダーペプチド特性を予測する。アミノ酸配列類似性は、両方の遺伝子がある種の炎症性応答を仲介し、および／またはマイトジェン活性を示すようにみえる小さい分泌タンパク質の新たに出現するファミリーの構成員であるヒト末梢血子細胞は健康なヒト供血者からフェンウを一ル（Ｐｅｎｗａｌｌ）　ＣＳ　３０００またはＩＢＭコープ（Ｃｏｂｅ）２９９７装置でのリンホホレシスにより得られた。リンパ球が富化された血液を引続きフィコール・ハイバーク・グラジェントおよびナイロン・ウール・カラム上で精製した。抗ＣＤ８染色により判断されるように、これらの細胞調製物は９０％より高いＴ細胞から常に構成されヒト末梢血子細胞、ジャーカット細胞およびＨＬ６０細胞は、１０％熱不活性化ウシつ児血清、ペニシリン、ストレプトマイシンおよびゲンタマイシンを補足したＲＰＭ１１６４０中に、ヒトＴ細胞に対して２Ｘ１０＠細胞／ −１またはジャーカット細胞に対して５×１０６細胞／−の細胞密度でそれぞれ維持された。細胞は以下の薬剤：植物性血球凝集素ＣＰＨＡ−Ｐニブローズ・ウェルカム）最終濃度１μｇ／ｄ、ホルボル１２−ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）　２０　ｎ　ｇ／ｍｌ、シクロヘキシミド１０μｇ／ｄ、およびシクロスポリンＡ１μｇ／−の１種または組合せのいずれかで処理された。一部を異なる時間に採取し、細胞をＲＰＭ１１６４０中で洗浄し、そして全体の細胞のＲＮＡを単離した。ＲＮＡ単離およびノーザン分析全体の細胞のＲＮＡを■−２７に記載のようにグアニジウムイソチオシアネート法により単離し、そして８μｇ（ヒト末梢血子細胞）または１０μｇ（ジャーカット細胞）の全体の細胞のＲＮ　Ａをホルムアルデヒドアガロースゲル上で分離し、そして続いて１ｏｘｓｓｃを有するニトロセルロース（シュライヒャー・アンド・シューエル）に移した。ニックトランスレーションおよびハイブリダイゼーショｃＤＮＡ挿入物をニックトランスレーションしく１’Ｖ−２８）、そして４０％ホルムアルデヒド、４ＸＳＳＣ。１０％デキストラン硫酸およびＩＸＸシンルト溶液中４２℃でのハイブリダイゼーションのためのプローブとして使用した。１０−１８時間のハイブリダイゼーションの後、フィルターをＯ，ｌＸ５ＳＣの最終強度、６０”Ｃで洗浄した。全長ｃＤＮＡクローンの単離クローンｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４がサブストラクト化ｃＤＮＡライブラリィ（上記実験の部■）から誘導された。はぼ全長のｃＤＮＡクローンがシクロへキシミドの存在下でＰＨＡ−ＰおよびＰＭＡで４，５時間刺激したヒト末梢血子細胞から抽出されたＲＮＡから誘導された。このｃＤＮＡライブラリィは■− ２９に記載されたようにオリゴｄＴブライミングを用いて構築され、そして次にラムダｇｔｌＯ（ＩＶ−３０）内にクローン化ヒト胎盤ＤＮへ（１０μｇ）をＥｃａＲＩ　、Ｒａｍ）＋７　またはＳＳｔ［で消化し、０．８％アガロースゲル中で電気泳動し、そしてニトロセルロースフィルターに移した。ニックトランスレーションしたｃＤＮＤＮＡ挿入物ハイブリダイゼーシヨンの後、フィルターをｏ、１ｘｓｓｃの最終強度、５５℃で洗浄した。ｃＤＮＡクローンの配列分析最長のｃＤＮＡ挿入物がＭ２Ｓ　　ＲＦ１９内にクローン化され、そしてシーケナーゼ（ＵＢＳ）　、ｄＡＴＰ（α−５ｓＳ）および種々のオリゴヌクレオチドブライマーを用いるジデオキシ鎖停止法（ＩＶ−３１）により配列決定された。配列決定反応のためのブライマーは１７ｍｅｒｓとしてオリゴヌクレオチドシンセサイザーモデル３８０Ａ（アプライド・バイオシステムズ）で供給者のプロトコルに従って合成された。全てのオリゴヌクレオチドが２０％アクリルアミドゲル上で使用前に精製された。ｃＤＮＡ配列および予測タンパク質配列の両方がコンピュータデータバンク（バイオネット、カレントリリース）と比較された。ブライマー伸長ｐＡＴ７４４配列のヌクレオチド１３５−１５２に相補的なオリゴヌクレオチド（図ＩＶ−４Ｂ）がシクロへキシミドの存在下ＰＨＡおよびＰＭＡで４，５時間刺激されたヒト末梢血子細胞からのＲＮＡ２０μｇにアニーリングされた。アニーリングは１００ｍＭ　　ＫＣｌ中で行われ、そして逆転写反応はアニーリングされたブライマー（１００μｇ　／　ｄ　）を伸長するために逆転写酵素（セイカゲイク）を用いて■−２９に記載されたように行われた。パイグリッドを等量のフェノール／クロロホルムで抽出し、次にエタノールに沈殿させた。最終反応生成物は８％変性ポリアクリルアミドゲル上で分析された。ＤＮＡ配列ラダーはサイズマーカーとして作用した。哺乳類（ＣＯ３）細胞中のｃＤＮＡクローンの発現ＣＯ８細胞は標準ＤＥＡＥテキストラン方法論を用いて、以下のベクターＤＮＡ　：　ＣＤＭ−８（マサチューセブッ、ボストン、マサチューセッツ・ゼネラル・ホスとタルのブライアン・シードから得られ；そしてＢ、　５ｅｅｄ。Ｎａｔｕｒｅ　３２９　、８４０−８４２　（１９８７）に記載〕　；またはＰＭＴ２−Ｔ〔マサチューセッツ、ケンブリッジにあるジェネティックス・インスティチュートから得られ；　Ｙｕ−ＣｈｕｎｇＹａｎｇ等、　Ｃｅ１ｌ　４７　、３−１０　（１９８６）　ニ記載されタヘクターの関連初期バージョン〕のいずれかの発現部位内に挿入されたｃＤＮ八クワクローンってトランスフェクショＴリンパ球中の２種のｃＤＮＡクローンの単離および調節アプローチはヒト末梢血子細胞のマイトジェン刺激と同時に誘導される遺伝子を単離するために前もって（実験の部■参照）記載された。６０を越える遺伝子が誘導化配列で高度に富化されたサブストラクト化ｃＤＮＡライブラリィから単離された。Ｔ細胞の刺激に続いて、これらの遺伝子の多くではあるが、全てでないものが急速に、そして３０分ないし１時間以内の一時的に誘導され、そしてそれらの誘導レベルはタンパク質合成阻害剤シクロヘキシミドの存在下で高められた（本明細書の上記実験の部■参照）。９種の新規マイトジェン誘導化遺伝子の発現および調節はより詳細に研究され、そしてこれらの遺伝子が種々のＴ細胞特異的活性化剤に異なる応答を示したので、異なる調節クラスであることが明確にされた。（上記実験の部■参照）。ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４と命名されたｃＤＮ人のこのコレクシジンからの２種の遺伝子は、調節特性とＩＬ−２リンホカイン遺伝子（実験の部■）とをあわせもつことが見出された。ＩＬ−２と同様に、これらの遺伝子は高度に精製されたＴ細胞中での最適発現のためのイノマイシンおよびＰＭＡにより開始されるシグナルの結合された作用を絶対的に必要とした。さらにｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４のためのｍＲＮＡは２時間以内に誘導され、そして少なくとも２４時間高レベルに、単離された遺伝子の大部分に見られたものとは異なる力学を維持した（実験の部■）。これらの調節特徴が与えられ、２種の遺伝子はさらに特徴づけられた。ヒト末梢血子細胞調製物のＰＨＡおよびＰＭＡ両方との処理により、ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４の両方のための高レベルのメツセージが得られた（図ＩＶ−１）。ＰＨＡは単独でこれらの遺伝子を誘導したが、より低い程度であり、そしてＰＭＡ単独ではほとんど効果がないか、または全く効果がなかった（図■−１）。従って、不完全精製Ｔ細胞調製物との場合も、２種のシグナルが最適発現に要求された。免疫抑制剤シクロスポリン人は血液Ｔ細胞においてＰＨＡおよびＰＭＡによるｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４の誘導を完全に阻害した（図ＩＶ−１）。この薬剤の同様に劇的な作用はＩＬ−２遺伝子とで生じることが知られている（ＩＶ−３２）。図ＩＶ−１に示されるように、タンパク質合成阻害剤シクロへキシミドの存在は活性化の間に誘導化レベルを明瞭には変化させなかった。２種のｃＤＮＡクローンとＩＬ−２遺伝子の間の発現の類似性をさらに調べるために、それらの調節はＣＤｄ＋ヘルパー細胞系ジャーカットにおいて分析された。ＩＬ−２の誘導の必要条件はこの腫瘍系において十分に特徴づけられている（ＩＶ−３２，ＩＶ−３３）。図■に示されように、ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４に必要とされる誘導の力学と活性化シグナルは、末梢血Ｔ細胞において見られるものに匹敵した。最初に、両方の遺伝子のためのメツセージはＰＨＡおよびＰＭＡでの刺激に続いて約２時間で現れ、そしてそれらのレベルは少なくとも２４時間維持された。第２に、ＰＭＡ単独ではこれらの遺伝子を誘導せず、モしてＰＨＡ単独では低い程度にしか誘導しないので、両方のＰＨＡおよびＰＭＡが２種のｃＤＮＡの最適刺激に要求された。第３に、シクロスポリン人はここで分析された２４時間の刺激期間の間、ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４の発現を停止させた。末梢血Ｔ細胞において観察されたこととは異なり、ＰＨＡおよびＰＭＡでの活性化の間のシクロヘキシミド内包は発現の顕著な阻害を引き起こした。これは、シクロヘキシミドが２つの異なる活性化剤、イオノマイシンおよび合成ジアシルグリセロールＤｉＣ３（実験の部■）と−緒に添加されたときの場合だった。ＩＬ −２遺伝子がジャーカット細胞中でのシクロヘキシミドによる同様の阻害に正確に曝されるので（ＩＶ−３２）、これらのデータはＩＬ−２、ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４の調節における類似性を示す。シクロへキシミドがジャーカット細胞中ではこれらの遺伝子のメツセージ誘導を阻害するが、末梢血Ｔ細胞中では阻害しない理由は知られていない。ジャーカット細胞活性化の直後に誘導されたタンパク質はＩＬ−２ｉ１１節領域への根因子の結合に必要とされるように考えられる（ＩＶ−３４，ＩＶ−３５）。ＡＴ４６４および　ＡＴ７４４のヌクレオチド配列ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４のためのほぼ全長のｃＤＮＡクローンのヌクレオチド配列は決定された（材料および方法の項参照）。使用された配列決定ストラテジー、生成するヌクレオチド配列およびコード化されるタンパク質の予測アミノ酸がｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４に対してそれぞれ図ＩＶ−３およびＩＶ−４に示されている。クローンｐＡＴ４６４は７９３のヌクレオチド長であり、そしてクローンｐＡＴ７４４は６５９ヌクレオチド長である（５′末端にあるＥｃｏＲＩ　リンカ−を含めて）。ｍＲＮＡがより長いポリ八尾部を含むであろうから、両方のｃＤＮＡサイズは８５０ヌクレオチド（ｐＡＴ４６４）および７５０ヌクレオチド（ｐＡＴ７４４）の見積もられたｍＲＮＡと良好な一致を示す。ｐＡＴ７４４のブライマー伸長分析は、単離されたクローンがほぼ全長のｃＤＮＡを表すことを裏づけた（図■−５）。ｐＡＴ７４４配列のヌクレオチド１３５ −１５２（図■−４）に相補的なオリゴヌクレオチドを逆転写酵素のブライマー（材料および方法の項参照）として用いて、約１５５ヌクレオチドの大きさの断片を生じた（合成されたｃＤＮＡ１３８ヌクレオチドおよびブライマー１７ヌクレオチド）。ｐＡＴ７４４のための配列決定されたクローンの５′末端にある最初の７個のヌクレオチドはｆ！ｃｏＲＩ　リンカ−から誘導されるので、実際のｍＲＮＡ配列の５′末端の約１０ヌクレオチドがこのｃＤＮＡクローンにおいて失われていることが結論づけられ得る。ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４の最初のＡＴＧはそれぞれ８４位および７４位である。各々の場合において、９２個のアミノ酸の読み枠が続く。これらの読み枠は２つのクローンに見出される最長のものである。ｐＡＴ７４４に対して種々の読み停止コドンが第１のＡＴＧの前に位置する。両方のクローンのための翻訳の予測された開始部位の周囲のヌクレオチド配列は公知の翻訳開始部位から誘導されたコンセンサス配列と良好な一致を示す（ＩＶ−３６）。これらのデータは、両方のｃＤＮＡが９２個のアミノ酸のペプチドをコード化することを強く示唆する。１）ＡＴ４６４および７４４両方に予測されたペプチドの親水性分析は、分泌タンパク質のシグナルペプチドには典型的な疎水性Ｎ末端領域を明らかにした。シグナルペプチド切断の基準によれば（ＩＶ−３７，ＩＶ−３８）、リーダー配列の最初の２３個のアミノ酸は両方のタンノ（り質において切除され、その結果大きさが６９個のアミノ酸の成熟分泌タンパク質を生じるであろう。潜在的なＭ連結グリコジル化部位はいずれのペプチド中に現れない。２つのクローン化遺伝子の８′非翻訳領域は、調節機能を表し得る種々の要素を含む。リンホカインメツセージ（ＩＶ−３９）の不安定さに関連したＡＴＴＴＡモチーフ（図■−３およびＩＶ−４において下線を付した）はクローンｐＡ７４６４では４回、そしてクローンｐＡＴ７４４では２回現れる。さらに、ｐＡＴ７４４および４６４は、炎症応答（ＩＶ−４０）の間に誘導される多（の異なるｍＲＮＡの３′非翻訳領域に存在するオクタマーモチーフＴＴＡＴＴＴＡＴ　（ＡＴＴＴＡモチーフのサブセット）を含む。この要素はｐＡＴ４６４の５２７位およびｐＡＴ７４４の５２６位に位置している。両方のｃＤＮＡクローンはポリＡストレッチに先行するポリＡ付加シグナル（図ＩＶ−３．ＩＶ−４中で四角で囲まれている）を有する。ｐＡＴ７４４および４６４に対する配列の比較は、ヌクレオチドレベルで顕著な類似性（４５％）およびアミノ酸レベルでのより高い相同性（５６％１図ＩＶ− ６Ａ）を示した。共通の調節特徴の他に、これらの２つの遺伝子は共通の先祖の遺伝子から誘導されてもよく、そしてそれらのコード化されたタンパク質は機能的に関連した役割を演じ得る。より高いアミノ酸の類似性は、機能の保存を示唆し、モしてｃＤＮＡクローン中の読み枠から予測されたコード化タンパク質構造をさらに強化させる（下のその他のタンパク質との比較も参照せよ）。特に、２つのタンパク質の推定される分泌部分は高度の類似性を示し、一方、それらのＮ末端リーダーペプチドは疎水性の他は共通性をもたない。２つのタンパク質の親水性プロットはほとんど重ね合わせることができ、その他のそれらの構造の関連性を裏づける（データは示されていない）。ｐＡＴ４６４および７４４によりコード化されるタンパク質の一次構造は、その中のいくつかが分泌タンパク質として検出されていた多くのその他のタンパク質との顕著な類似性を示す。タンパク質のこのファミリーのいくつかの構成員は炎症応答およびマイトジェン性との関連を示すことがわかっていた（考察の項参照）。特に、この類似性は、このファミリーの全てのタンパク質に存在する、４個のほとんど同一の配置のシスティン残基と１個のプロリン残基に基づいている（図■〜６Ｂ）。これらの高度に保存されたアミノ酸はタンパク質の構造において重要な役割を演じると考えられる（考察の項参照）。この保存に加えて、多くのその他のアミノ酸はこのファミリニの種々の構成員間に共有されている。ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４自体がより高度に関連する遺伝子のファミリーの構成員であるか否かを決定するために、ゲノムＤＮＡがこれら２つの遺伝子と共に調べられた。ヒト胎盤ＤＮＡは種々の制限酵素で消化され、そして２つの遺伝子に対するｃＤＮＡ挿入物から誘導された放射性プローブとのサザン分析に供された。図ＩＶ、−７におけるデータは２つのプローブに対して異なるパターンで断片をハイブリッド形成する限定された構成員であることを証明した。明らかに、ｐＡＴ４６４および７４４は、それらの顕著な類似性にもかかわらず、容易には互いに交差ハイブリッド形成しない。このことは、ｐＡＴ４６４および７４４に対して作成されたプラスミド誘導化ｃＤＮＡプローブでサブトラクティブライブラリィから単離されたｃＤＮＡファージをスクリーニングして以前に示されていた。２つのクローンが繰り返し要素を含まず、そして密接に関連した配列の大きなファミリーに属さないことも結論づけられる。遺伝子が単一のコピー遺伝子であるか、または高度に類似する配列の小さいファミリーに属するかを決定することは今回能ではない。発現の組織および細胞型特異性予め決定されたように、ｐＡＴ４６４および７４４は休止または血清刺激された通常のヒト繊維芽細胞中に発現されない。ここではＴ細胞以外の造血細胞が発現のために分析された。前骨髄球ＨＬ６０細胞はマクロファージまたは顆粒球に最終的に分化され得る。ｐＡＴ４６４もｐＡＴ７４４も未分化６０４ｉＩ＋胞中に発現されないが、両者はＰＭＡを存するマクロファージへの分化の誘導により誘導された（図ＩＶ−８Ａ）。対照的に、ＨＬ６０細胞を顆粒球に分化させるためにＤＭＳＯを用いると、それらのｍＲＮＡの誘導は何ら生じなかった。おもしろいことに、ＰＭＡはｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４に対するＲＮＡを末梢血Ｔ細胞またはジャーカット細胞中に誘導しなかった。それ故に、ＨＬ６０細胞中のこれらの遺伝子の誘導はこれらの細胞の特定の分化状態により説明されなければならない。ｐＡＴ４６４および７４４はヒトＢ細胞中にも誘導された。刺激されていないヒト扁桃腺の小さいＢ細胞において、メツセージはいずれの遺伝子に対しても検出し得なかったが、ｐＡＴ７４４に対するｍＲＮＡはＳＡＣでの刺激４時間で誘導され（図■−８Ｂ）、ｐＡＴ４６４に対するｍＲＮＡはＳＡＣおよびシクロへキシミドだけので明らかに検出できた（データは示されていない）。さらに、種々のＥＢＶ形質転換Ｂ細胞系は、ＨＴＬＶＩが抗原特異的Ｔ細胞細胞クローンを形質転換したように、これら遺伝子のｍＲＮＡを構造的に合成した。それ故に、ｐＡＴｊ６４およびｐＡＴ７４４は、ウィルス形質転換を包含するいくつかの方法で活性化されて、多（の異なる造血細胞により発現され得る。ＣＯ３細胞における分泌タンパク　の発現ＤＮＡ配列から予測されたように（図ＩＶ−９および■−１０参照）、ｐＡＴＪ８４またはｐＡＴ７４４ｃＤＮ人をコード化する種々の発現ベクターで形質転換したＣｏＳ細胞がタンパク質生成物を分泌することが見出された。これらのタンパク質は製造され、そして陰性の対照構築物が使用されるときでなく、適当な発現ベクター構築物がトランスフェクションしたときのみｃｏｓｍ胞から分泌される。新規タンパク質は、よく知られた標準法を用いてＤＮＡ構築物のトランスフェクションの後、細胞のＩＩＳシスティン標識により可視化された。タンパク質生成物の大きさは、リーダーペプチドが切除された後に、ｃＤＮＡ配列から予測されるものにあてはまる。予測アミノ酸配列に対する抗体ｃＤＮＡ配列により予測されるように、ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４の両方のＣ末端の１２個のアミノ酸を表す合成ペプチドに対してウサギ抗血清を生起させた。これはペプチドを化学的に合成し、それらをキャリヤー（ＫＬＨ）に連結し、そしてキャリーおよびペプチドをウサギに注射することにより、ペプチド免疫学の標準法に従って行われた。図ＩＶ−１１ＡおよびＢはｐＡＴ７４４ペプチドに対して生起させた２つの異なるウサギ抗体（７２１および７２２）のウェスタンプロット試験における使用を示し、図ＩＶ−１２ＡおよびＩＶ−Ｂは同様にｐＡＴ４６４ペプチドに対する２つの抗体（７１９および７２０）を説明する。すべての場合において、種々の発現ベクター構築物でトランスフェクションさせたＣｏＳ細胞の上澄みが抗血清で分析された。図から明らかなように、適当な分泌された因子は合成ペプチドで免疫感作されたウサギからの抗血清により検出され、ペプチドでの免疫感作の前に同一ウサギから採取した血清試料により検出されなかった。それ故に、これらの結果は、ｐ人Ｔ４６４およびｐＡＴ７４４の両方の予測されたタンパク質の配列から誘導された合成ペプチドが適当なｃＤＮＡクローンで形質転換させたＣＯ８細胞により分泌された因子に対する抗体を生起させることを示す。図ｍＶ−１３は抗−ｐＡＴ４６４抗体を用いるＰＨＡ／ＰＭＡで培養液において活性化させたヒトＴ細胞細胞からの上澄みのウェスタンプロットを示す。抗体は適当な大きさの分泌物を検出する。同様の結果が抗−ｐＡＴ７４４抗体で得られた（データは示されていない）。それ故に、ヒトＴ細胞はマイトジェン刺激で大量のｐＡＴ４６４およびｐ人Ｔ７４４ｍＲＮＡだけでなく（上記参照）、これらのクローンのｃＤＮＡ配列から予測される分泌形態のタンパク質因子をも産生ずる。考察マイトジェン活性化でＴ細胞中に誘導可能な大多数の遺伝子が前もって単離された（上記実験の部■参照）。この項は２つの誘導性遺伝子、クローンｐＡＴ４８４（またはｐＬＤ７８、結果の項参照）およびｐＡＴ７４４の調節およびヌクレオチド配列を記載する。これらの２つの遺伝子は新規なリンホカイン／サイト力インをコード化すると考えられる。各々のｃＤＮＡクローンに対するヌクレオチド配列は、分泌タンパク質には共通のＮ末端疎水性リーダーペプチドを存する９２個のコード化されたタンパク質を予測する。ｐＡＴ４６４および７４４は、特にその予想された分泌された部分において互いに非常に相同である。このことは機能の保存を示唆する。両方の遺伝子産物はまた、重要なアミノ酸残基とタンパク質のファミリーとを共存し、その機能は理解されていないか、または部分的にしか理解されていない：これらのタンパク質のいくつかは分泌因子として検出されていた（以下参照）。ｐＡＴ４８４およびｐＡＴ７４４は、ＩＬ−２またはガンマ−ＩＦＮのようないくつかの十分に規定された免疫調節性因子を有する重要なアミノ酸相同性をもたないけれども、それらは調節要素とこれらの遺伝子とをあわせもつ。これらのリンホカインのように、ｐＡＴ４６４およびｐ人Ｔ７４４は最適発現のために２つの誘導性シグナル（例えばＰＨＡおよびＰＭＡ）を必要とし、それらはＴ細胞細胞の刺激の２時間後出現し、それらは免疫抑制剤シクロスポリンＡの阻害作用に対して非常に感受性であり、そしてそれらの活性化はシクロへキシミドの存在下でジャーットＴ細胞細胞中で完全に抑制される。ｐＡＴ４６４および７４４によりコード化されるタンパク質の一次アミノ酸構造は分泌因子の新たに出現するファミリーと重要な相同性を示す。相同性は４個のシスティン残基（ＩＶ−２３，ＩＶ−４２，ＩＶ−４３参照）および１個のプロリン残基（図ＩＶ−６Ｂ中で四角で囲まれている）に主に基づいている。これらのアミノ酸はここで示されているタンパク質全てに見出されており、そしてペプチドは図ＩＶ−６Ｂに並べられている。システィンは共通の構造を付与するように考えられる。このファミリーの構成員の１つであるβ−トロンボグロブリン（ＰＢＰのプロセシングされた形態、以下参照）に対して、これらのシスティンはジスルフィド結合を形成することが示された（ＩＶ−４４）。アミノ末端から出発して、システィン】および３ならびにシスティン２および４はそのような結合を形成する。完全に保存されたアミノ酸の他に、多くのその他の残基が種々の残基間に共有されている。例えば、アミノ酸Ｔｒｐ　　Ｖａ　Ｉ　　Ｇｉｎ　（ＷＶＱ）（またはＷＶ）（図ＩＶ−６Ｂ中で四角で囲まれている）は、４個の保存されたシスティンの最後から６残基下流で、８個の因子に見出される。図■−６Ｂに挙げた遺伝子は２つの基本的グループにさらに分割され得る：最初の２個のシスティンが、Ｃｙｓ　（Ｃ）のように互いに隣接するか、またはＣＸＣのように１個のアミノ酸により分断されているか、２通りのうちの１つで位置している。この変化と一致して、種々の位置は、一方の群または他方の群とは異なる明らかなアミノ酸優位を示す。さらに’　ｃｃ’群について挙げると、保存されたプロリン（図ＩＶ−８Ｂ中で四角で囲まれているプロリン）に続く７番目の残基は常にＴｙｒ（Ｙ）であり、第４のシスティンに先行する９番目の残基はＰｈｅ　（Ｆ）であり、そしてこの最後の保存されたシスティンに直接続く残基はＡｌａ（Ａ）である。 ’　ｃｘｃ’群において、保存されたプロリンに続く第３および第６番目の残基はそれぞれ１ｉｅ（１）またはＬｅｕ（Ｌ）およびＬまたはＶａｌ（Ｖ）であり、そして第４のシスティンに直接続（残基は常にＬである。しかしながら、多くのその他の部位において、異なる種類が可能であり、これらの２つの遺伝子間の区別をあいまいにする。図ＩＶ−６Ｂに挙げたｐＡＴ４６４、ｐＡＴ７４４および全ての付加的なタンパク質の間の相同性は機能のいくつかの保存を示し得る。種々のこれらの因子は炎症応答の間発現されるか、もしくは該応答を引起し、および／または炎症の間の役割と一致した機能を示すことが見出された。タンパク質のいくつかはまた、傷治療および組織修復、炎症と一緒に、または引き続いて起こり得るプロセスにに寄与可能に、マイトジェン的に作用する。３−ｔｏｃ（Ｎ−２３）または単球誘導化好中球走化性因子（ＭＤＮＣＦ）（ＩＶ−４３）または好中球活性化因子（ＮＡＦ）（ＩＶ−２５）は、試験管内で顆粒球に対して走化性を有するヒト因子であり（ＩＶ−２４，］Ｖ−４５゜ＩＶ−４６）、試験管内でまたは生体内での全身注射で急速に顆粒球を誘導し、そして局部注射で皮膚反応を引き起こす（ＩＩＶ−４６，ＩＶ−４７）。誘導性発現は薬剤、例えばＬＰＳＳ　ＩＬ−１またはＴＮＦ　（ＩＶ−２４，ＩＶ〜４６）またはＣｏｎＡ（ＩＶ−４６）により単球／マクロファージに、およびスタフィロコッカスエントロトキシンによりＴ細胞（ＩＶ−２３）に示された。マクロファージ炎症タンパク質（ＭＩＰ）はマウスマクロファージによりＬＰＳ刺激で合成される因子である（ＩＶ−２２，ＩＶ −４８）。それは好中球走化性を存し、いくつかの過酸化水素産生を引起し、そして皮下投与された場合に局部炎症を導＜　（ＩＶ−２２，ＩＶ−４８）。Ｉｐ−１ｏ　（ＩＶ−２１）はツベルクリンの形態またはγ−Ｉ　ＦＮ　（ＩＶ −４９）により刺激された遅延型過敏反応の間に発現されるインターフェロン誘導化タンパク質問子である。それは、内皮細胞、半球、繊維芽細胞および角質細胞を包含する種々の細胞型で発現され得る（■−４９．ＩＶ−５０）。血小板因子４　（ＰＦ−４）は傷害の間に血小板中にα−顆粒から放出され、そして単球、中性域および繊維芽細胞に対して走化性を存する（ＩＶ−５１，ＩＶ −５２）。付加的な活性はコラゲナーゼの阻害（ＩＶ−５３）および免疫調節作用（ＩＶ− ５４）である。血小板はまた、血小板塩基性タンパク質（Ｐ　Ｂ　Ｐ）、β−トロンボグロブリン（β−ＴＧ）および結合組織活性化ペプチドＩ［（ＣＴＡＰＩ［Ｉ）（低親和性因子−４としても知られている）を放出する。後者の２つ、ＣＴＡＰ■および β−ＴＧは、図ＩＶ−６Ｂに示されるように、ＰＢＢの連続的にＮ末端がプロセシングされた形態を表す。ＣＴＡＰＩ［［はヒト真皮繊維芽細胞（ＩＶ−５５）およびヒト結合組繊細胞に対してマイトジェン的に作用し、モして解糖、グリコサミノグリカン合成、ｃＡＭＰレベルおよびブラスミノーゲンアクチベーターの放出を刺激する（ＩＶ−２０，ＩＶ−５６）。β−ＴＧは繊維芽細胞に対して走化性であると考えられる（ＩＶ−５１）。上記のうち残りの因子は全て誘導性または分化発現に基づいてクローン化された。ＲＡＮＴＥＳ　（ＩＶ−４２）およびＴＣ人−３（ＩＶ−５７）はその機能がまだ解明されていないＴ細胞誘導化遺伝子である。両者の発現は、活性化１時間以内に出現するマウスＴＣＡ−３ｍＲＮＡ（Ｎ−５７）および１日以内にヒトＲＡＮＴＥＳｍＲＮＡ（■−４２）とともに、抗原およびマイトジェンにより誘導される。ヒトＨ−Ｇｒｏ遺伝子、マウスＪＥ遺伝子およびニワトリ９Ｅ３遺伝子は全て繊維芽細胞により発現される。ＪＥ遺伝子は、血清およびＩＬ−１を含む３Ｔ３細胞中の種々の薬剤により誘導される（ＩＶ−５８）。９Ｅ３遺伝子はロウス・ザルコーマ・ウィルスとの形質転換により活性化され、そして成長抑制細胞中で抑制される（ＩＶ−５９）。Ｈ−Ｇｒｏ遺伝子はハムスターＨ−Ｇｒｏ遺伝子のヒト相当物であり、その構造性発現は非腫瘍形成性チャイニーズ・ハムスター繊維芽細胞（ＣＨＥＦ）の腫瘍形成性変種と相互に関連する（ＩＶ−２６）。Ｇｒｏは非腫瘍形成性ＣＨＥＦ細胞中の血清により一時的に誘導される。この遺伝子の発現は腫瘍形成状懇と関連した表現型の誘導のためには明らかに十分ではない。上で考察された遺伝子のための発現データは、炎症および／または組織修復と関連したマイトジェン性の同の役割と一致している。このことは、示された種々の機能から、これらの遺伝子を誘導する薬剤から、そして包含される細胞型から推論される。それ故にｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４は、特にｐＡＴ４６４遺伝子がマウスＭＩＰ遺伝子のヒト相同物を示すように考えられるので、同様の機能を発揮することが期待される。炎症および傷害治療／組繊修復は、多くの異なる細胞を包含する非常に複雑なプロセスである。種々の細胞の機能の調和した組合せは、細胞間を連絡するのに必要な多数の分泌因子に反映されるように思われる。１つの共通の先祖遺伝子から誘導されてもよい遺伝子のこのファミリーはそのようなネットワークを確立するのに十分に作用し得る。炎症および修復を仲介するために、このファミリーの構成員のいくつかに対して示されるように（上記参照）、個々の因子は多数の機能を有し得る。これらのタンパク質問の保存された類似性は保存されたレセプター要素との相互作用を示し得る。上に説明されたように、タンパク質のこのファミリーの構成員は組織特異性の顕著な変化を示す。ｐＡ７４８４およびｐＡＴ７４４はＴ細胞およびその他の造血細胞に発現されるが、しかし繊維芽細胞では発現されない。因子間でのこの区別は活性化された細胞型による免疫反応の間に要求されるユニークな機能を決定し得る。この項では本発明の最も好ましい組換え分子のい（つか、すなわちｐＡＴ７４４またはｐＡＴ４６４ＤＮＡおよび哺乳類（例えばＣ０３）細胞中に挿入されたＤＮＡを発現し得る哺乳類発現ベクター（ＣＤＭ−８またはＰＭＴ２−２）を含むものを記載してきた。それは、これらのＤＮＡにより形質転換された好ましい細胞を立証し、そしてリーダーペプチドが切除された後のｃＤＮＡ配列から予測されるように適当な大きさのタンパク質の上記細胞による分泌を立証する。さらに、この項では本発明のＤＮＡ断片によりコード化されたペプチドに対して製造され、そして該ペプチドの配列を含むｐＡＴ７４４またはｐＡＴ４６４リンホカイン／サイトカイン様タンパク質に特異的に結合し得る本発明の新規抗体について説明した。刊行物Ｔ　Ｖ　−１，リード、ジュー。シー、　　（Ｒｅｅｄ、　Ｊ、　Ｃ，）＋ジュー。ディー、アルパース（Ｊ、Ｄ、ＡＩｐｅｒｓ）　、　　ビー、シー、ノウエル（Ｐ、Ｃ，Ｎｏｗｅｌｌ）およびアール、ジー、ホープｙ　−（Ｒ，Ｇ、Ｈｏｏｖｅｒ）　、　　（１９８６）　、　　ｒ標準のヒトリンパ球のレクチン刺激性細胞分裂の促進時の原潰瘍遺伝子の連続発現（Ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｔ。ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ　ｄｕｒｉｎｇ　１ｅｃｔｉｎ−８口ｍｕｌａｔｅｄ　ｍｉｔｏｇｅｎｅｓｊｓ　ｏｆｎｏｒｍａｌ　ｈｕｍａｎ　］ｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）　Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。Ｓ＋ｊ、　ＵＳＡ　８３：３９８２ＴＶ−２，グリーン、ダブり二一、シー、　　（Ｇｒｅｅｎｅ。Ｗ、　Ｃ，）およびダブりニー９　ジュー。レオナルト（Ｗ、　Ｊ。Ｌｅｏｎａｒｄ）、　　（１９８６）　、　　ｒヒト　インターロイキン−２レセプター（Ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ　ｊｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２ｒｅｃｅｐｔｏｒ）　Ｊ　。Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　４：６９ＩＶ−３，ヤング、ソイ。シー、　　（Ｙａｎｇ、　Ｙ、Ｃ，）　＋エイ、ビー、レアシッタ（Ａ、　Ｂ、　Ｃ１ａｒｌｅｔｔａ）、　　ビー、エイ。テンプル（Ｐ、　Ａ、　Ｔｅｍｐｌｅ）　、エム、ビー、チャンク（Ｍ、　Ｐ。Ｃｈｕｎｇ　）　＋　ニス、コヴアシック（Ｓ、　Ｋｏｖａｃｉｃ）、　　リュー。ニス、ウィテクージアノッチ（Ｊ、　Ｓ、　Ｗｉ　ｔｅｋ−Ｇｉａｎｎｏｔｔｉ）。エイ、シー、レアシー（Ａ、　Ｃ，Ｌｅａｒｙ）、　　アール、クリツ（Ｒ，Ｋｒ１ｚ）　、アール、イー、ドナヒ、：Ｌ　−（Ｒ，Ｅ、　Ｄｏｎａｈｕｅ）。ジー、ジー、ウォング（Ｇ、　Ｇ、　Ｗｏｎｇ）およびニス、シー。クラーク（Ｓ、Ｃ，Ｃ］ａｒｋ）、　　（１９８６）　、　　ｒヒト　ＩＬ−３：ネズミのＩＬ−３に関連した新規な血液成長因子の発現クローニングによる同定（Ｈｕｍａｎ　ＩＬ−３（Ｍｕ］ｔｉ−ＣＳＰ）：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅＮｃ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｍｕｒｉｎｅ　ＩＬ−３）Ｊ　、　Ｃｅ１ｌ　４７：３ＩＶ−４，ヨコタ、ティー　、　　（Ｙｏｋｏｔａ、　Ｔ）　、ティー。オツ力（Ｔ、　０ｔｓｕｋａ）　、ティー、モスマン（Ｔ、　Ｍｏｓｍａｎｎ）。ジュー。パンチェリュー　（Ｊ、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ）　、ティー、デフランス（Ｔ、　ＤｅＰｒａｎｃｅ）　、ディー、ブランチヤード（Ｄ。Ｂｌａｎｃｈａｒｄ）、ジュー。イー、デ　ヴリエス（Ｊ、　Ｅ、口ｅＶｒｉｅｓ）　＋　エフ、シー（Ｐ、　Ｌｅｅ）およびケイ、アイ、アライ（Ｋ、１．Ａｒａｉ）　、　　（１９８６）　、　　ｒＢ細胞及びＴ細胞刺激活性を発現するマウスＢ細胞刺激因子１と同族のヒトインターロイキンｃＤＮＡクローンの単離および特徴付け（ｌ５ｏｌａＮｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　ｃＤＮＡ　ａｌｏｎｅ、　ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ　ｔｏ　ｍｏｕｓｅ　Ｂ−ｃｅｌｌｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ　１．　　ｔｈａｔ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｓ　Ｂ−ｃｅｌｌ−ａｎｄＴ−ｃｅｌｌ−ｓｔｉｍｕｌａｔｊｎｇ　ａｃｔｆｖｉｔｉｅｓ）Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。ＳｃＬ　ＵＳＡ　８３：５８９４ＩＶ−５，ヨコタ、ティー、　　（Ｙｏｋｏｔａ、Ｔ）　、アール。エル、コッフマン（Ｒ，Ｌ、　Ｃｏｆｆｍａｎ）、　ｘイチ、ハギワラ（Ｈ，Ｈａｇｊｗａｒａ）　、ディー、エム、レニック（Ｄ、　Ｍ。Ｒｅｎｎ１ｃｋ）、ワイ、タケベ（Ｙ、　Ｔａｋｅｂｅ）　！　ケイ、ヨコタ（Ｋ、Ｙｏｋｏｔａ）　、エル、テンプル（Ｌ、　Ｇｅｍｍｅｌｌ）、　　ビー、シュレイシー（Ｂ、５ｈｒａｄｅｒ）　、　　ジー、ヤング（Ｇ、　Ｙａｎｇ）、　　ビー。メイヤーソン（Ｐ、Ｍｅｙｅｒｓｏｎ）＋　ジュー。ルー（Ｊ、Ｌｕｈ）　、　　ビー、ホイ（Ｐ、Ｈｏｙ）　、　　ジュー。ペン（Ｊ、　Ｐｅｎｅ）＋　エフ、ブリニレ（Ｐ、　Ｂｒ１ｅｒｅ）、エイチ、スピッツ（Ｈ，５ｐｉｔｓ）　、　リュー。パンチェリュー　（Ｊ、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ）　、　ジェー、デ　ヴリエス（Ｊ、　Ｄｅ　Ｖｒｉｅｓ　）　、−ｒ−フ、ディー、リ−（Ｐ、　Ｄ、　Ｌｅｅ）。エフ、アライ（Ｎ、Ａｒａｉ）およびケイ、アイ、アライ（Ｋ、［。Ａｒａｊ）、（１９８７）、ｒｖウス及びヒト　ＩｇＡ増強因子及び好酸球コロニー刺激因子活性を暗号化するリンフォカインｃＤＮＡクローンの単離および特徴付け：インターロイキン５との関係（Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａ−ｃｔｅｒｊｚａＨｏｎ　ｏｆ　Ｉｙｍｐｈｋｊｎｅ　ｃＤＮＡ　ｃｌｏｎｅｓ　ｅｎｃｏｄｉｎｇｍｏｕｓｅ　ａｎｄ　ｈｕｍａｎ　ＩｇＡ−ｅｎｈａｎｃｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ａｎｄｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ　ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ：Ｒｅ１ａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｔｏ　１ｎｔｅｌｅｕｋｊｎ　５）　Ｊ　＋　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。Ｓｃｊ、ＵＳＡ　８４ニア３８８ＩＶ−６，ヒラノ、ティー、（旧ｒａｎｏ、Ｔ）　、ケイ。ヤスカワ（Ｋ、Ｙａｓｕｋａｗａ）、　ｘイチ、ハラダ（Ｈ，Ｈａｒａｄａ）、ティー、タガ（Ｔ、　Ｔａｇａ）、　ソイ。ワタナベ（Ｙ、　Ｗａｔａｎａｂｅ）、ティー、マツダ（Ｔ、Ｍａｔｓｕｄａ）　、　ｘス、カシワムラ（Ｓ、　Ｋａｓｈｉｗａｍｕｒａ）　、ケイ、ナカジマ（Ｋ、　Ｎａｋａ　ｊｊｍａ）、ケイ、コヤマ（Ｋ、　Ｋｏｙａｍａ）、エイ、イワマツ（Ａ、　Ｉｗａｍａｔｓｕ）、ニス、ツナサワ（Ｓ、Ｔｓｕｎａｓａｗａ）　、　ｘフ、サキャマ（Ｆ、　Ｓａｋｉｙａｍａ）、　ｘイチ、マツイ（Ｈ，Ｍａｔｓｕｊ）、　クイ。タカハラ（Ｙ、　Ｔａｋａｈａｒａ）。ティー、タニグチ（Ｔ、　Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ）およびティー、キシモ）　（Ｔ、Ｋｊｓｈｉｍｏｔｏ）　＋　　（１９８６）　、　　ｒ免疫グロブリンを作るためのＢリンパ球を誘発する新規なヒト　インターロイキン（ＢＳＦ−２）のための相補Ｄ　Ｎ　Ａ　（Ｃｏｍｐｌｅ−ｍｅｎｔａｒｙ　ＤＮＡ　　ｆｏｒ　ａ　ｎｏｖｅｌ　　ｈｕｍａｎ　　ｊｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　　（ＢＳＰ−２）　　ｔｈａｔ　　１ｎｄｕｃｅｓ　　Ｂ　　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　　ｔｏ　　ｐｒｏｄｕｃｅ　　ｉｍｍｕｎｏ−ｇｌｏｂｕｌｉｎ）Ｊ　　、Ｎａｔｕｒｅ　　３２４ニア３ＩＶ−７，ウォング、ジー、ジー、　（Ｗｏｎｇ、Ｇ、Ｇ、）　＊ジ、　＋、　ニス、ライチク（Ｊ、Ｓ、Ｗｉｔｅｋ）　、　　ビー、エイ、テンプル（Ｐ、Ａ、Ｔｅｍｐｌｅ）、ケイ、エム、ウィルケンス（Ｋ、　Ｍ、　Ｗｉｌｋｅｎｓ）　＊−１−イ、シー、レアシー（Ａ、Ｃ，Ｌｅａｒｙ）　、ディー。ビー、ル’）セ’、ｔブルク（Ｄ、Ｐ、Ｌｕｘｅｎｂｅｒｇ）　、ニス、ニス。ジジーンズ（Ｓ、Ｓ、Ｊｏｎｅｓ）　、イー、エル、ブラウン（Ｂ、　Ｌ、　Ｂｒｏｗｎ）　、アール、エム、カイ（Ｒ，Ｍ、Ｋａｙ）　、イー、シー。オール（Ｂ、Ｃ，０ｒｒ）　、シー、シューメイカ−（Ｃ，Ｓｈｏｅｍａｋｅ「）、ディー、ダブリュー、ゴールデ（Ｄ、Ｗ、Ｇｏｌｄｅ）　、アール、ジュー。カウフマン（Ｒ，Ｊ、Ｋａｕｆｍａｎ）　、アール、エム、ヘライック（Ｒ，Ｍ、　Ｈｅｗｉｃｋ）、イー、エイ、ウアング（Ｂ。Ａ、　Ｗａｎｇ）およびニス、シー、クラーク（Ｓ、Ｃ，Ｃ１ａｒｋ）　。（１９８５）、ｒヒト　ＧＭ−Ｃ３Ｆ：相補ＤＮＡの分子クローニング、及び天然および組み換えタンパク質の精１（Ｈｕｍａｎ　ＧＭ−ＣＳＦ：　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｍ−ｐｌｅａ＋ｅｎｔａｒｙ　ＤＮＡ　ａｎｄ　ｐｕｒＨｉｃａＮｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｎａｔｕｒａｌ　ａｎｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　）　Ｊ　、　５ｃｉｅｎｃｅ　２２８：８１０ＩＶ−８，ダブリ　エム、シー、　（Ｃｕｔｕｒｉ　Ｍ、Ｃ，）　ｒエム、ムルフィ−（Ｍ、　Ｍｕｒｐｈｙ）、エム、ビー０コスタージオミ（Ｍ、Ｐ、Ｃｏｓｔａ−Ｇｉｏｍｊ）　、アール、ワインマン（Ｒ，Ｗｅｉｎｍａｎｎ）、　　ビー、ベルッシア（Ｂ、　Ｐｅｒｕｓｓｉａ）およびジ−、トリンチェリ（Ｇ、Ｔｒｊｎｃｈｉｅｒ＋）、　　（＋　９８７　）　、　　ｒヒト末梢血リンパ球による腫瘍壊死因子およびリンフォトキシンの製造の個々の調整（Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｒｅｇｕｌａ口ｏｎ　ｏｆｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ　ａｎｄ　Ｉｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙ　　ｈｕｍａｎ　　ｐｅＢｐｈｅｒｓｌ　　ｂｌｏｏｄ　　Ｉｙｍｐｈａｃｙｔｅｓ）Ｊ　　、　　Ｊ、Ｂｘｐ、Ｍｅｄ、　１６５：１５８］ＩＶ−９，グルニー、エム、イー、　（Ｇｕｒｎｅｙ、　Ｍ、　Ｂ、　）、ビー、アール、アバトフ（Ｂ、Ｒ，ＡＩ）ａｔｏｆｆ）　、　　ジー、ティー、スペア（Ｇ、Ｔ、５ｐｅａｒ）　、　エム、ジェー、バウメル（Ｍ、　Ｊ。Ｂａｕｍｅｌ）、　　ジュー。ビー、アンタル（Ｊ、Ｐ、Ａｎｔａｌ）　、　− ７−ム。ブラウン　バニア（ｌＪ、Ｂｒｏｗｎ　Ｂａｎ１ａ）およびエイ、ティー。レダー（＾。Ｔ、Ｒｅｄｅｒ）　＋　　（１，９８６）　、　　ｒ＝ユ−ロロイキン：レクチン刺激性Ｔ細胞のリンフｔカイン生成物（Ｎｅｕｒｏｌｅｕｋｉｎ：Ａ　Ｉｙｍｐｈｏｋｉｎｅ　ｐｒｏｄｕｃｔ　ｏｆ　ｌｅｃｔｉｎ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　Ｔ　ｃｅｌｌｓ）　Ｊ　、　５ｃｉｅｎｃｅ　２３４：５７４ＴＶ−１０，アロンソ、エム、エイ、　（Ａｌｏｎｓａ、Ｍ、Ａ、）およびニス、エム。ワイスマン（Ｓ、ｌＪ、Ｗｅｊｓｓｍａｎ）、　　（１９８７）、ｒヒトＴ細胞の分化に関連するＭＡＬ、疎水性タンパク質のＣＤＮＡクローニング及びシーフェンス（ＣＤＮＡ　　ｃｌｏｎｉｎｇ　　ａｎｄ　　５ｅｑｕｅｎｃｅ　　ｏｆ　　ＭＡＬ、　　ａ　　ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ　　ｐｒ。ｔｅｔｎ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｈｕｍａｎ　Ｔ−ｃｅｌｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎ口ａｔｉｏｎ’）Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８４：１９９７ＩＶ−１１，クウォン、ビー、ニス、　（Ｋｗａｎ、　Ｂ、　Ｓ、　）　＋ジー、ニス、キム（Ｇ、Ｓ、Ｋｉｍ）　、エム、ビー、ブリストウスキー（Ｍ、　Ｂ、　Ｐｒｙｓｔｏｗｓｋｙ）、ディー、ダブリュー、ランキ（Ｄ、　Ｗ、　Ｌａｎｃｋ　ｉ　）＋ディー、イー、サバス（Ｄ、　Ｂ、　５ａｂａｔｈ）、ジュー。パン（Ｊ、　Ｐａｎ）およびニス、エム６　ワイスマン（Ｓ、Ｍ。Ｗｅｉｓｓｍａｎ）＋　　（１９８７）　、　　ｒ多種のＴリンパ球すブセットｃＤＮＡクローンの単離および第一の特徴付け（ｌｓｏｌａｔｆｏｎ　ａｎｄ　１ｎｉｔｉａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｕｌｔｆ−ｐｌｅ　５ｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　Ｔ−１ｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　５ｕｂｓｅｔ　ｃＤＮＡ　ｃｌｏｎｅｓ）　Ｊ　。Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８４：２８９６ＴＶ− １２，ゲルジエンフェルト、エイチ、ケイ。（Ｇｅｒｓｈｅｎｆｅｌｄ、　Ｈ，Ｋ、　）およびアイ、エル、エアイスマン（［、Ｌ、Ｗｅｉｓｓｍａｎ）、　　（１９８６）　、　　ｒ細胞毒性Ｔリンパ球からのＴ細胞に特異的なセリンプロテアーゼのためのＣＤＮＡクローニング（Ｃｌｏｎｔｎｇ　ｏｆ　ａ　ｃＤＮＡ　ｆｏｒ　ａ　Ｔ　ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｊｆｉｃ　５ｅｒｉｎｅ　ｐｒｏｔｅａｓｅ　ｆｒｏｍ　ａ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　Ｔｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）　Ｊ　、　５ｃｉｅｎｃｅ　２３２：８５４ＩＶ−１３，ｔｆｆべ、シー、ジー、　（Ｌｏｂｅ、　Ｃ，Ｇ、　）　ｒ　　シー。ハヴエレ（Ｃ，Ｈａｖｅｌｅ）およびアール、シー、プレツクレイ（［？、Ｃ，Ｂ１ｅａｃｋｌｅｙ）　、　　（１９８６）　、　　ｒ活性化された細胞毒性１９２８球において特異的に発現される２個の遺伝子のクローニング（ＣＩｏｎｊＢ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｇｅｎｅｎｓ　ｔｂａｔ　ａｒｅ　５ｐｅｃｊｆｉｃａｌｌｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　ａｃｔｉＶａｔｅｄ　ｃｙｔｏｔｏｘｔｃ　Ｔｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８３：１４４８ＩＶ−１４，リード、ジュー。シー、（Ｒｅｅｄ、　Ｊ−Ｃ１）　。エイ、エイチ、アビディ（Ａ、Ｈ，Ａｂｉｄｉ）　、　　ジュー。ディー。アルバース（Ｊ、　Ｄ、　Ａｌｐｅｒｓ）、アール、ジー、ホープｙ　　（Ｒ。Ｇ、　Ｈｏｏｖｅｒ）、アール、ジー、ロブ（Ｒ，Ｊ、　Ｒｏｂｂ）およびビー。シー、ノウエル（Ｐ、Ｃ，Ｎｏｗｅｌｌ）、　　（１９８６）　　ｒインタロイキン　２　レセプター遺伝子の発現におけるシクロスポリンＡ及びデキサメタシンの効果（ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ　Ａ　ａｎｄ　ｃｌｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ　ｏｎ　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　２ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）　Ｊ　、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３７：１５０ＩＶ−１５，グラネリービペルノ、エイ、　（Ｇｒａｎｅｌｌｉ−Ｐｊｐｅｒｎｏ、Ａ、）　ｌ　エル、アンドルス（Ｌ、　Ａｎｄｒｕｓ）およびアール、エム、スティンマン（Ｒ，Ｍ、Ｓｔｅｉｎｍａｎｎ）　、　　（１９８６）、［刺激されたヒトＴ細胞におけるリンホカイン及びノンリンホカイン　ｍＲＮＡ濃度（Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ　ａｎｄｎｏｎｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ　ｍＲＮＡ　１ｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｓｉｍｕｌａｔｅｄ　ｈｕｍａｎ　Ｔｃｅｌｌｓ）　Ｊ　、　Ｊ、Ｂｘｐ、Ｍｅｄ、　１９６３：９２２ＩＶ−１６，リーム、ジー、アール（Ｒｅｅｍ、Ｇ、Ｒ，）　、　ｚル、エイ、タック（Ｌ、＾、　Ｃｏｏｋ）およびジェー、ヴイルセク（Ｊ、Ｖｉｌｃｅｋ）、　　（１９８ｇ　）　、　　ｒシクロスポリンＡによって阻害されたヒト胸腺細胞及びＴリンパ球のガンマインターフェロンの合成（Ｇａｍｍａ　１ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｂｙｈｕｍａｎ　ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　１ｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｂｙｃｙｃｌｏｓｐｏｒｊｎ　Ａ）　Ｊ　、　５ｃｉｅｎｃｅ　２２１：６３ＩＶ−１７，レロルド、ケイ、シー、　（Ｒｅｒｏｌｄ、に、Ｃ，）、ディー、ダブリュー、ランキ（Ｄ、Ｗ、Ｌａｎｋｉ）　、アール。エル、モルトイン（Ｒ，Ｌ、　Ｍｏｌｄｗｉｎ）およびエフ、ダブリュー、ツイツチ（Ｐ、Ｗ、Ｐｉｔｃｈ）　、　　（１９８８）　、　　ｒクローン化されたＴ細胞上のシクロスポリンの免疫抑制効果（［ｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ　　ｅｆｆｅｃｔｓ　　ｏｆ　　ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ　　Ａ　　ｏｎｃｌｏｎｅｄ　　Ｔ　　ｃｅｌｌｓ）Ｊ　　、　　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　１３６：１３１５ＩＶ−１８，デュエル、ティー、エフ、　（Ｄｅｕｅｌ、　Ｔ、Ｆ。）、ビー、ニス、ケイム（Ｐ、　Ｓ、　Ｋｅｉｍ）、エム、ファーマー（Ｍ、　Ｆａｒｍｅｒ）およびアール、エル、ハインリクソン（Ｒ，Ｌ。）１ｅｉｎｒｉｋｓｏｎ）　＋　　（Ｌ　９７７）　＋　　ｒヒト血小板因子４のアミノ酸シークエンス（Ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｐｉａｔｅｌｅｔ　ｆａｃｔｏｒ　４）Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　７４：２ＩＶ−１９，ロルト、ジ！−，シー、　（Ｒｏｌｔ、Ｊ、Ｃ０）　。エム、イー、ハリス（Ｍ、Ｅ、Ｈａｒｒ４ｓ）、　エイ、エム、ボルト（Ａ、Ｍ、Ｈｏ１ｔ）、イー、ランノ（Ｅ、Ｌａｎｇｅ）　、　エイ、レンジエン（Ａ、　Ｒｅｎ５ｃｈｅｎ）およびニス、ニスイアロスキー（Ｓ、　Ｎｉｅｗｉａｒｏｗｓｋｉ）、　　（１９８６）　、　　ｒヒト血小板基本タンパク質、低親和性血小板因子４の前駆体形態、及びベータースロンボグロプリンの特徴付け（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎｐｌａｔｅｌｅｔ　ｂａｓｉｃ　ｐｒｏｔｅｉｎ、　ａ　ｐｒｅｅＵｒ８０ｒ　ｆｏｒｌｌ　ｏｆ　ｌｏｗ− ａｆＨｎｉｔｙ　ｐｌａｔｅｌｅｔ　ｆａｃｔｏｒ　４　ａｎｄ　ｂｅｔａ−ｔｈｒｏｍｂｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）　Ｊ　、　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　２５：１９８８ＩＶ−２０，カスター、シー、ダブり二一、　（Ｃａｓｔｏｒ、　ｃ。Ｗ、）、ジュー。ダブリュー、ミラー（Ｊ、Ｗ、旧１１ｅｒ）およびディー、エイ、ワルツ（Ｄ、Ａｉａｌｚ）、　　（１９８８）　、　　ｒ結合組織活性化ペプチド（ＣＴＡＰ−１１１）、主にヒト血小板から誘導された成長因子の構造的および生物的特徴付け（Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆ　ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ　１ｓｓｕｅ　ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　ｐｅｐ口ｄｅ（ＣＴＡＰ−ＩＩ＋）。ａ　　ｍａｊｏｒ　　ｈｖｒｎａｎ　　ｐｌａｔｅｌｅｔ　　ｄｅｒｉｖｅｄ　　ｇｒｏｙｔｔｈ　　ｆａｃｔｏｒ）　　Ｊ　　ｒＰｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　　８０ニア６５ＩＶ−２１，ルスター、エイ、ディー、　（Ｌｕｓｔｅｒ、Ａ、Ｄ。）、ジュー。シー、ウンケレス（Ｊ、　Ｃ，Ｕｎｋｅｌｅｓｓ）およびジェー、ヴイー、ラヴ工”）チ（Ｊ、Ｖ、Ｒａｖｅｔｃｈ）　、　　（１９８５）、「ガンマ−インターフェロンは同族の血小板タンパク質を含む早期反応性遺伝子を転写しながら調整する（Ｇａｍｍａ−ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ｔｒａｎｓｃｒｊｐｔｉｏｎａｌｌｙ　ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　ａｎｅａｒｌｙ−ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｇｅｎｅ　ｅｏｎｔａｊｎｉｇ　ｈｏｍｏｌｏｇｙ　ｔｏ　ｐｌａｔｅｌｅｔｐｒｏｔｅｉｎｓ　）　Ｊ　、　Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）　３１５：６７２ＴＶ−２２，ダヴアテリス、ジー、　（Ｄａｖａｔｅｌｊｓ、Ｇ、）。ビー、テカンブーオルソン（Ｐ、　Ｔｅｋａｍｐ−０１ｓｏｎ）、ニス、ディー、ウォルペ（Ｓ、Ｄｌｏｌｐｅ）　、ケイ、ヘルムセン（Ｋ、　Ｈｅｒｍｓｅｎ）　、シー、ロイケ（Ｃ，Ｌｕｅｄｋｅ）、　　シー、ガレゴス（Ｃ，Ｇａｌｌｅｇｏｓ）、ディー、コイト（Ｄ、　Ｃｏ１ｔ）、　　ジュー。メリーウェザ− （Ｊ、Ｍｅｒｒｙｗｅａｔｈｅｒ）およびエイ、セラミ（Ａ、　Ｃｅｒａｍｉ）、　　（１９８８）　、　　ｒネズミのマクロファージ炎症性タンパク質、炎症性および化学挙動特性を持つ新規なモノカインのためのｃＤＮＡのクローニングおよび特徴付け（ＣＩｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｃＤＮＡ　ｆｏｒｍｕｒｆｎｅ　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｊｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｐｒｏｔｅｌｎ（ＶＩＰ）、　ａｎｏｖｅｌ　ｍｏｎｏｋｉｎｅ　ｗｉｔｈ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ａｎｄ　ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｔｉｃｐｒｏｐｅｒｔｊｅｓ）Ｊ　、　Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、１６７：１９３９ＩＶ −２３，シュミット、ジエ−，（Ｓｃｈｍｉｄ、Ｊ、）およびシー、ワイスマン（Ｃ，Ｗｅｉｓｓｍａｎ）、　　（１９８７）　ｒ　　ｒマイトゲン刺激性ヒト白血球におけるセリンプロテアーゼ及びベータースロンボグロプリン様タンパク質のためのｍＲＮＡの誘導（Ｉｎｄｕｃ目ｏｎ　ｏｆ　ｍＲＮＡ　ｆｏｒ　ａ　５ｅｒｉｎｅｐｒｏｔｅａｓｅ　ａｎｄ　ａ　ｂｅｔａ−ｔｈｒｏｍｂｏｇｌｏｂｕｌｊｎ−１ｉｋｅ　ｐｒｏｔｅｊｎｉｎ　ｍｉｔｏｇｅｎ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｈｕｍａｎ　Ｉｅｕｋｏｃｙｔｅｓ）　Ｊ　ｒＪ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３９：２５０４ＩＶ−２４，３シムラ、ティ、　（Ｙｏｓｈｉｔｎｕｒａ、　Ｔ、　）、ケイ、マツシフ　（Ｋ、　Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ）、ニス、タナ力（Ｓ、　Ｔａｎａｋａ）。イー、エイ、ロビンソン（Ｂ、　Ａ、　Ｒｏｂｉｎｓｏｎ）、イー、アベラ（Ｂ、Ａｐｐｅｌｌａ）　、ジエー、ジエー、オッペンハイム（Ｊ、　Ｊ、　Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ）およびイー、ジュー。レオナルト（Ｅｌ、　Ｊ。しｅｏｎａｒｄ）、　　（１９８７）　、　　ｒ他の宿主の防御細胞分裂に類似したベプチドシークエンスを持つヒト単球から誘導された好中球化学定性因子の精製（Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｈｕｍａｎ　ｍｏｎｏｃｙｔｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃｆａｃｔｏｒ　ｔｈａｔ　ｈａｓ　ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　５１ｍ１ｌａｒｉｔｙ　ｔ。ｏｔｈｅｒ　ｈｏｓｔ　ｄｅｆｅｎｓｅ　ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ　）　Ｊ　＋　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。Ａｃａｄ、　Ｓｃｊ、ＵＳＡ　８４：９２３３ＩＶ−２５，ワルツ、　　エイ、　（Ｗａｉｚ、Ａ、）　、　　ビー、ベヴエリ（Ｐ、　Ｐｅｖｅｒｉ）、エイチ、アシャウアー（Ｈ，Ａｓｃｈａｕｅｒ）およびエム、バギオリニ（Ｍ、Ｂａｇｇｊｏｌｉｎｉ）、　　（１９８７）　。ｒＮＡＦ、単球から製造された新規な好中球活性化因子の精製およびアミノ酸シークエンス（Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄａｍｆｎｏ　ａｃｉｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｏｆ　ＮＡＰ、　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ−ａｃｔｉｖａＨｎｇ　　ｆａｃｔｏｒ　　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　　ｂｙ　　ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ）Ｊ　　＋Ｂｉｏｅｈｅｍ、　　Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍ、　　１４９ニア５５Ｉ　Ｖ−２６，アニソウィック、エイ、　（Ａｎｉｓｏｗｉｃｚ、　Ａ、　）。エル、パルドウエル（Ｌ、　Ｂａｒｄｗｅｌｌ）およびアール、サガー（Ｒ，Ｓａｇｅｒ）　、　　（１９８７）　、　　ｒ形質転換されたチャイニーズハムスターおよびヒト細胞における成長調整された遺伝子の本質的な過剰発現（Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ　ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｆｏｎ　ｏｆ　ａ　ｇｒｏｗｔｈ −ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｃｈｉｎｅｓｅ　ｔｅａｍｓｔｅｒ　ａｎｄ　ｈｕｍａｎ　ｃｅｌｌｓ）　Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。Ａｅａｄ、　Ｓｃｊ、ＵＳＡ　８４ニア１８ＢＩＶ−２７，チルグウィン、ジエー、エム、　（Ｃｈｉｒｇｗｉｎ、Ｊ、Ｍ、）　、　ｘイ、イー、ブリジビラ（Ａ、　Ｂ、　Ｐｒｚｙｂｙｌａ）、アール、エフ、マクドナルド（Ｒ，Ｆ、　ＭａｃＤｏｎａｌｄ）およびダブリュー、ジェー、ルター（Ｗ、Ｊ、Ｒｕｔｔｅｒ）、　　（１９７９）　。「リボヌクレアーゼ中の豊富な源からの生物的活性リボ核酸の単離（ＩｓｏｌａＮｏｎ　ｏｆ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ　ａｃ目ｗｅ　ｒｉｂｏ−ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄ　ｆｒｏｍ　５ｏｕｒｃｅｓ　ｅｎｒｉｃｈｅｄ　ｉｎ　ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ）　Ｊ　、　Ｂｉｏｃｈｅ＋ｎｊｓｔｒｙ　１８：５２９４ＩＶ−２８，マ：アチス、ティー、　（Ｍａｎｉａｔｉｓ、Ｔ、）　＋イー、エフ、フリッチ（Ｅ、Ｐ、Ｐｒ１ｔｓｃｈ）　、ジュー。サンブロック（Ｊ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ）、　　（１９８２）　、　　ｒ分子クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃ２ｏｎｆｎｇ）　Ｊ　、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　ＬａｂｏｒｔｏｒｙＩ　Ｖ−２９，ダブ、　−、ニー、　（Ｇｕｂｌｅｒ、Ｕ、）およびビー、ジェー、ロフマン（Ｂ、Ｊ、Ｒｏｆｆｍａｎ）　、　　（１９８８）　。ｒｃＤＮＡライブラリーを生ずるための単純およびかなり有効な方法（＾ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｖｅｒｙ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆ。ｒ　ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ　ｃＤＮＡ　１ｉｂｒａｒｉｅｓ）Ｊ　、　Ｇｅｎｅ　２５：２６２ＩＶ−３０，ルイン、ティー、ヴ４−、　（Ｒｕｙｎｈ、Ｔ、Ｖ、）。アール、エイ、ヤング（Ｒ，Ａ、　Ｙｏｕｎｇ）およびアール、ダブリュー、ディビス（Ｒ，Ｗ、Ｄａｖｉｓ）　、　　（１９８５）　、　　ｒラムダｇｔｌｏ及びラムダｇｔｌｌ中のｃＤＮＡライブラリーの建設およびスクリーニング（Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ｃＤＮＡ　１ｉｂｒａｒｉｅｓ　ｉｎ　ｌａｍｂｄａ　ｇｔｌＯａｎｄｌａｍｂｄａ　ｇｔｌｌ、　［ｎ：ＤＮＡ　ｃｌｏｎｉｎｇ：　Ａ　ｐｒａｅｔｉｃａｌ　ａｐｐｒｏａｃｈ。Ｄ、Ｇｌｏｖｅｒ、Ｅｌｄ、　（！ＲＬ　Ｐｒｅｓｓ、０ｘｆｏｒｄ、Ｕｎｉｔｅｄ　Ｋｆｎｇｄｏｍ）　９゜ＩＶ−３１，サンガー、エフ、　（Ｓａｎｇｅｒ、Ｐ、）　、　ｘス。ニックレン（Ｓ、Ｎ１ｃｋｌｅｎ）　ｒ　エイ、アール、コウルソン（Ａ。Ｒ，Ｃｏｕｌｓｏｎ）　、　　（１９７７）　、　　ｒ鎖末端阻害剤を持ツＤＮＡシークエンス（ＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｃｈａｉｎ−ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　１ｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）Ｊ　＋　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｊ、ＵＳＡ　７４：５ＩＶ−１２，ワイス、エイ、　（Ｗｅｉｓｓ、　Ａ、　）、アール、シールド（Ｒ，５ｈｊｅｌｄｓ）　、エム、ニュートン（Ｍ、　Ｎｅｗｔｏｎ）、　　ビー、マンゴ−（１３，Ｍａｎｇｅｒ）およびジエー、インボデン（Ｊ、　１ｍｂｏｄｅｎ）　、　　（１９８７）　、　　ｒインターロイキン　２　遺伝子の活性を拘束するのに要するリガンド−レセプター相互作用（Ｌｉｇａｎｄ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｊｎｔｅｒａｃｔｆｏｎｓ　ｒｅｑｕｉｒｅｄ　ｆｏｒｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔ　ｔｏ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖａＨｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　１ｎｔｅｒ１ｅｕｋ４ｎ　２ｇｅｎｅ）Ｊ　　、　　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３８：２１６９ＩＶ−８８，バーディ、ケイ、ジエ＋、　（Ｈａｒｆｙ、に、　Ｊ、　）。ビー、マンゴ−（Ｂ、Ｍａｎｇｅｒ）、　ｘム、−１−ニー）ン（Ｍ、　Ｎｅｗｔ。ｎ）およびジュー。ディー、ストロボ（Ｊ、口、５ｔｒｏｂｏ）＋　　（１９８７）、ｒＴ細胞の活性化の間、分子発生は調整ヒトインターフェロン　ガンマ遺伝子発現を含む（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｅｖｅｎｔｓ　１ｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ｈｕｍａｎ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｇａｍｍａ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｄｕｒｉｎｇＴ　ｃｅｌｌ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）　Ｊ　。Ｊ、［ｍｍｕｎｏｌ、　１３８：２３５３ＩＶ−３４，シャウ、ジェー、ビー、　　（Ｓｈａｗ、Ｊ、Ｐ、）　ｒビー、ジェー、ウツ（Ｐ、Ｊ、Ｕｔｚ）　、ディー、ビー、デュランド（Ｄ、　Ｂ、　Ｄｕｒａｎｄ）、　ジェー、ジェー、トール（Ｊ、　Ｊ、　Ｔｏｏｌｅ）　ｒ　イー、エイ、エメルＣＥ、　Ａ、　Ｂｍｍｅｌ）およびジー、アール、クラブツリー（Ｇ、Ｒ，Ｃｒａｂｔｒｅｅ）、　　（１９８８）　。「早期Ｔ細胞活性化遺伝子の推定される調整剤の同定（■ｄｅｎｔｆＮｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｐｕｔａｔｉｖｅ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒ　ｏｆ　ｅａｒｌｙ　Ｔ　ｃｅｌｌ　　ａｃｔｊｖａ　口ｏｎ　　ｇｅｎｅｓ）　　Ｊ　　、　　　５ｃｉｅｎｃｅ　　２４１　二２０２ＩＶ−３５，ブルンワンド、エム−ダブリュー、　（Ｂｒｕｎｗａｎｄ、ＩＪ−Ｗ、）　、　　エイ、ジー、シュミット（Ａ、　Ｇ、　Ｓｅｔ＋ｍ１ｄｔ）およびニー、シベンリスト（Ｕ、５ｉｅｂｅｎｌｉｓｔ）、　　（１９８８）、「インターロイキン−２遺伝子のマイトジェン反応性調整部位と相互に作用する根因子（Ｎｕｃｌｅａｒ　ｆａｃｔ。ｒｓ　１ｎｔｅｒａｃ口ｎｇ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｍＨｏｇｅｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｊｎ−２ｇｅｎｅ）　Ｊ　＋　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　、印刷中ＩＶ−１６，：ｌザック、エム、（Ｋｏｚａｋ、Ｍ、）＋　　（１９８７）　、　　ｒ６９　’ａ　　を推動物のメツセンジャーＲＮＡの５′　−コードされないシーフェンスの分析（Ａｎ　ａｎａｌｙｓｉｓｏｆ　５’−ｎｏｎｃｏｃｆｆｎｇ　５ｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｆｒｏｍ　６９９　ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ　ｔｏｅｓｓｅｎｇｅｒ　ＲＮＡ５）Ｊ　、　Ｎｕｃｌ、Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、　１５：８１２５ＩＶ−３７，７ｒン　ヘイジン、ジー、　（Ｖａｎ　Ｈｅ１ｊｎｅ。Ｇ、）、（１９８５）、、ｒ暗号シーフェンス、変異の制限（Ｓｉｇｎａｌ　５ｅｑｕｅｎｃｅｓ、　Ｔｈｅ　１１ｍ１ｔｓ　ｏｆ　ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ）Ｊ　、　Ｊ。Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、１８４：９９ＩＶ−３８，フォノ　ヘイジン、ジー、　（Ｙｏｎ　Ｈｅｆｊｎｅ。Ｇ、）、（１９８６）、ｒ暗号シーフェンスの分裂−を良くするための新しい方法（Ａ　ｎｅｗ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇｓｉｇｎａｌ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｃｌｅａｖａｇｅ　５ｉｔｅｓ）Ｊ　＋　Ｎｕｃｌ、Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ。１４：４６８３ＩＶ−３９，シャウ、ジー、　（Ｓｈａｗ、　Ｇ、）およびアール。カメン（Ｒ，Ｋａｍｅｎ）　、　　（１９８６）　、　　ｒ選択的ｍＲＮＡ分解を媒介する０ＭＣ３Ｆ　　ｍＲＮＡの３′−翻訳されない部位からの保存されたへＵシークエンス（Ａ　ｃｏｎｓｅｒｖｅｄＡＵ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　３’−ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄ　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　ＧＭＣＳＦ　ｍＲＮＡ　ｍｅ＋Ｈａｔｅｓ　５ｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｍＲＮＡ　ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）　Ｊ　。Ｃｅ１ｌ　　４６：６５９ＩＶ−４０，カプト、ディー、　（Ｃａｐｕｔ、Ｄ、）およびビー。ビュッラ−（Ｂ、Ｂｅｕｔｌｅｒ）　、ケイ、バードグ（Ｋ、　Ｈａｒｔｏｇ）。アール、ティア−（Ｒ，Ｔｈａｙｅｒ）、ニス、ブラウンシマー（Ｓ。ＢｒｏｗｎＳｈｉｍｅｒ）およびエイ、セラミ（Ａ、Ｃｅｒａｍｉ）、　　（１９８６）、ｒ炎症性のメディエータ−を明記するｍＲＡＮ分子の３′　−翻訳されていない部分での共通のヌクレオチドシーフェンスの同定（Ｉｄｅｎｔｊｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｃｏ＋Ｉｍｏｎｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　３’−ｕｎｔｒａｓｌａｔｅｄ　ｒｅｇｉｏｎ　。ｆ　ｍＲＮＡ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　ｓｐｅｃｉｆｙｉｎｇ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｍｅｄｉａｔｏｒｓ）　Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８３：１６７０ＩＶ−４１，オバル、ケイ、　（Ｏｂａｒｕ、に、）、−ｒ−ム、フクダ（Ｍ、Ｐｕｋｕｄａ）、　ｘス、マエダ（Ｓ、　Ｍａｅｄａ）およびケイ、シマダ（Ｋ、Ｓｈｉｍａｄａ）　、　　（１９８６）　　ｒ腫瘍ブＣｌモータによってヒト扁桃腺リンパ球中で誘発されうるｍＲＮＡを研究するのに使用されるｃＤＮＡクローン（Ａ　ｃＤＮＡ　Ｃ１ｏｎｅｕｓｅｄ　ｔｏ　５ｔｕｄｙ　ｍＲＮＡ　ｊｎｄｕｃｉｂｌｅ　ｉｎ　ｈｕａ＋ａｎ　ｔｏｎｓＨｌａｒ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｂｙ　ａ　ｔｕｍｏｒ　ｐｒｏｍｏｔｅｒ）　　Ｊ　、　Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　９９：ＩＶ−４２，シャルウティー、ジｘ−，（Ｓｃｈａｌｌ、Ｔ、Ｊ。）、ジエー、ジョンストラ（Ｊ、　Ｊｏｎｇｓｔｒａ）、　　ビー、リュー。ダイシー（Ｂ、　Ｊ、　Ｄｙｅｒ）、　ジエー、ジョルゲンセン（Ｊ、　Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ）　、　　シー、クライベルガー（Ｃ，ＣＩａｙｂｅｒｇｅｒ）、　ｘム。エム、デビット（Ｍ、　Ｍ、　Ｄａνｊｓ）およびエイ、エム、クレンスキイ（Ａ、Ｍ、Ｋｒｅｎｓｋｙ）　、　　（１９８Ｂ　）　、　　ｒヒトＴｍ胞−特異分子は新遺伝子ファミリーの一員（Ａ　ｈｕｍａｎ　Ｔ　ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｍｏｌｅｃｕｌｅ　ｉＢ　ａ　ｍｅｔｎｂｅｒ　ｏｆ　ａ　ｎｅｗ　ｇｅｎｅ　ｆａｔｎｉＩＹ）　Ｊ　、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１４１＋１０１８ＩＶ−４３，？ツシマ、ケイ、　（Ｍａｔｓｕｓｈｊｍａ、　Ｋ）、ケイ。モリシタ（Ｋ、Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ）　、ティー、ヨシムラ（Ｔ、　Ｙｏｓｈｆｍｕｒａ）　、　ｘス、　ラヴ（Ｓ、　Ｌａｖｕ）、　ソイ。コバヤシ（Ｙ、　ＫｏｂａｙａｓｈＤ　、ダブリュー、リュウ（Ｗ、Ｌｅｗ）　、イー、アペラ（Ｂ、Ａｐｐｅｌｌａ）　、エイチ、エフ、クング（Ｈ，Ｆ、　Ｋｕｎｇ）、イー、ジュー。レオナルト（Ｂ、　Ｊ、　Ｌｅｏｎａｒｄ）およびジェー、ジェー。オペンヘイム（Ｊ、Ｊ、Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ）　、　　（１９８８）　、　　ｒヒト単球誘導性好中球の化学定性因子（ＭＤＮＣＦ）の分子クローニング、およびインターロイキン１及び腫瘍壊死因子によるＭＤＮＣＦｍＲＮＡの誘発（ＩＪｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ａ　ｈｕｍａｎ　ｍｏｎｏｃｙｔｅ −ｄｅｒｉｖｅｄ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｅ　ｆａｃｔｏｒ（ＭＤＮＣＰ）　ａｎｄ　ｔｈｅ　１ｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＭＤＮＣＦ　ｍＲＮＡｂｙ　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　１　ａｎｄ　ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ）　Ｊ　、　Ｊ。Ｅｌｘｐ、Ｍｅｄ、　１６７：１８８３ＴＶ−４４，ベグ、ジー、ニス、　（Ｂｅｇｇ、Ｇ、Ｓ、）　、ディー、ニス、ベラバー（口、　Ｓ、　Ｐｅｐｐｅｒ）、　シー、エア。チェスターマン（Ｃ，Ｎ、　Ｃｈｅｓｔｅｒｍａｎ）およびエフ、リュー０モルガン（Ｆ、、１Ｍｏｒｇａｎ）、　　（１９７８）　、　　ｒヒト　ベータースロンボグロプリンの完全な共有結合構造（Ｃｏａ＋ｐｌｅｔｅ　ｃｏｖａｌｅｎｔ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｂｅｔａ−ｔｈｒｏｍｂｏｇｌｏｂｕｌｊｎ）　Ｊ　ｒ旧ｏｃｈｅｍｊｓｔｒｙ　１７：１７３９ＩＶ−４５，ヨシムラ、ティ、　（Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ、Ｔ、）、ケイ、マツシマ（に、Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ）、ジェー、ジエー、オッペンハイム（Ｊ、　Ｊ、　０ｐｐｅｎｈｅｉａ＋）およびイー、ジエ、レオナルト（Ｂ、Ｊ、Ｌｅｏｎａｒｄ）　＋　　（１９８８）　、　　ｒリボ多糖類に刺激されるヒト血液単球白血球により作られる好中球の化学定性因子：インターロイキン１からの部分的な特徴付けおよび単離（Ｎｅｕｔｒｏｐｈｊｌ　ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ　ｆａｃｔｏｒ　ｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙ　　１ｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒａｉｄｅ　　（ＬＰＳ）−ｓｔｊｍｕｌａｔｅｄ　　ｈｕｍａｎｂｌｏｏｄ　　ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ　　Ｉｅｕｋｏｃｙｔｅｓ：Ｐａｒｔｉａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｆｚａｔｉｏｎ　　ａｎｄ　　５ｅｐａｒａＮｏｎ　　ｆｒｏｍ　　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１　　（ＩＬ−１））Ｊ　　、　　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　１３９ニア８８ＩＶ−４６，ヴアン　ジーメ、ジェー、　（ｖａｎ　Ｄａｍｍｅ、Ｊ。）、ジエー、ヴアン　ビラメン（Ｊ、ｖａｎ　Ｂｅｅｕｍｅｎ）　、　　ジー。オープナツカ−（Ｇ、０ｐｄｅｎａｋｋｅｒ）およびエイ、ビリアラ（Ａ。Ｂ１１１ｉａｕ）　、　　（１９８８）　、　　ｒ好中球の化学定性、皮膚反応性および顆粒球促進活性を持つ、新規なＮＨ”−末端シーフェンスで特徴付けられたヒト　モノカイン（Ａ　ｎｏｖｅｌ、ＮＯｘ−ｔｅｒｍｉｎａｌ　５ｅｑｕｅｎｃｅ−ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ　ｈｕｍａｎ　ｍｏｎｏｋｌｎｅ　ｐｏｓｓｅｓｓｉｎｇ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　ｃｈｅｍｏｔａｃ口ｃ、　５ｋｊｎ −ｒｅａｃｔｉｖｅ、　ａｎｄ　ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｏｓｉｓ−ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ）　　Ｊ　＋Ｊ、Ｂｘｐ、Ｍｅｄ、　１６７：１３６４ＩＶ−４７，ベヴエリ、ビー、　（Ｐｅｖｅｒｉ、Ｐ、）　、　−７−イ。ワルツ（Ａ、Ｗａｌｚ）、　　ビー、デワルド（Ｂ、　Ｄｅｗａｌｄ）およびエム。バギオリニ（Ｍ、Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ）、　　（１９８８）　、　　ｒヒト　単核性食細胞によって作られた新規な好中球活性因子（Ａ　ｎｏｖｅｌ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ−ａｃｔｊｖａｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｈｕｍａｎ　ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ　ｐｈａｇｏｃｙｔｅｓ）　Ｊ　、　Ｊ、Ｂｘｐ、Ｍｅｄ、　１６７：１５４７ＩＶ−４８，ウォルペ、ニス、ディー、　（Ｗｏｌｐｅ、　Ｓ、　Ｄ、　）。ジー、ダヴアテリス（Ｇ、Ｄａｖａｔｅｌｉｓ）　、　　ビー、シェリー（Ｂ。５ｈｅｒｒｙ）、　　ビー、ビュツラ−（Ｂ、Ｂｅｕｔｌｅｒ）　ｒ　ディー、ジー、レッセ（Ｄ、Ｇ、Ｒｅ５ｓｅ）　、　ｘイチ、ティー、シュエン（Ｈ。Ｔ、Ｎｇｕｙｅｎ）、　ｘル、アイ、モルダワ−（Ｌ、　１Ｍｏｌｄａｗｅｒ）＋シー、エフ、ラタン（Ｃ，Ｆ、　Ｒａｔｈａｎ）、　ｘ　ス、　ｘフ、ローリ −（Ｓ、　Ｐ、　Ｌｏｗｒｙ）およびエイ、セラミ（Ａ、Ｃｅｒａｍｉ）、　　（１９８８）、ｒマクロファージは、炎症性および好中球化学走性特性をもつ新規なヘパリン結合タンパク質を分泌する（Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ　５ｅｃｒｅｔｅ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｈｅｐａｒｉｎ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒ。ｔｅｉｎ　ｗｉｔｈ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ａｎｄ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｔｉｃｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）Ｊ　、　Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、　１６７：５７０ＩＶ−４９，カブラン、ジー、　　（Ｋａｐｌａｎ、Ｇ、）　、　ｘイ。ディー、ルスター（Ａ、　Ｄ、　Ｌｕ５ｔｅｒ）＋　　ジー、ハンコック（Ｇ、　Ｈａｎｃｏｃｋ）およびゼット、エイ、コーン（Ｚ、Ａ、Ｃｏ１ｎ）、　　（１９８７）、ｒヒトの皮膚の遅延免疫反応におけるガンマ−インターフェロンに誘発されるタンパク質の発現（Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｇａｍｍａ　１ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ（ＩＰＩＯ）　ｉｎ　ｄｅｌａｙｅｄ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　５ｋｉｎ）Ｊ　、　Ｊ、Ｂｘｐ、Ｍｅｄ、　１６６：１０９ＢＩＶ−５０，ルスター、エイ、ディ、　（Ｌｕｓｔｅｒ、＾、Ｄ。）およびジェー、ヴイー・ラヴエッチ（Ｊ、Ｖ、Ｒａｖｅｔｃｈ）　。（１９８７）、ｒガンマ−インターフェロンに誘発されるサイトカインの生化学的特徴付け（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｊｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｇａｍｍａ　］ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　５ｙｔｏｋｉｎｅ（ＩＰ−１０））Ｊ　、　Ｊ、８ｘｐ、Ｍｅｄ、　１６６：１０８４ＩＶ −５１，シニア、アール、エム、　（Ｓｅｎｉｏｒ、Ｒ，Ｍ、）、ジー、エル、グリフイン（Ｇ、Ｌ、Ｇｒｉｆｆｉｎ）　ｒ　ジュー。ニス、ヒュアング（Ｊ、Ｓ、Ｈｕａｎｇ）　、ディー、エイ、ワルツ（Ｄ。Ａ、Ｗａｌｚ）およびティー、エフ、デュエル（Ｔ、Ｐ、Ｄｅｕｅｌ）　＋（１９８３）、ｒ繊維芽細胞のための血小板アルファ顆粒タンパク質の化学走性（Ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｐｌａｔｅｌｅｔ　ａｌｐｈａ　ｇｒａｎｕｌｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｆｏｒ　Ｎｂｒｏｂｌａｓｔｓ）　Ｊ　。Ｊ、Ｃｅ１１．Ｂｊｏｌ、　９６：３８２ＩＶ−５２，オスターマン、ディー、ジー、　（Ｏｓｔｅｒｍａｎｎ、　Ｄ、　Ｇ、　）＋　　ジー、エル、グリフイン（Ｇ、Ｌ、Ｇｒｉｆｆｉｎ）　、　アール、エム、シニア−（Ｒ，Ｍ、　５ｅｎｉｏｒ）、イー、ティー、カイザー（Ｂ、Ｔ、Ｋａｉｓｅｒ）およびティー、エフ、デュエル（Ｔ、　Ｆ。Ｄｅｕｅｌ）　、　　（１９８２）　、　　ｒ血小板因子４のカルボキシル末端トリデカペプチドは単球に対する強力な化学走性剤（Ｔｈｅ　ｃａｒｂｏｘｙｌ −ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｔｒｉｄｅｃａｐｅｐｔｉｄａ　ｏｆ　ｐｌａｔｅｌｅｔ　ｆａｃｔｏｒ　４　ｉｓ　ａ　ｐｏｔｅｎｔ　ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ　ａｇｅｎｔ　ｆｏｒ　ｌｌ１ｏｎｏｃｙｔｅｓ）　Ｊ　、　Ｂｊｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｌ１１．１０７：１８０ＩＶ−５８，ヒットーラルパー、ジ、−，（ｌｉｔ−Ｒａｒｐｅｒ、Ｊ、）＋　エイチ５ウオール（Ｈ，Ｗｏｈｌ）およびイー、ハルバー（８，Ｈａｒｐｅｒ）、　　（１９７８）　、　　ｒ血小板因子４：コラゲナーゼの阻害剤（Ｐｌａｔｅｌｅｔ　Ｐａｃｔｏｒｅ　４：Ａｎ　ｒｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｆＣｏｌｌａｎｇｅｎａｓｅ）　Ｊ　、　５ｃｉｅｎｃｅ　１９９：９９１１Ｖ−５４，カッツ、アイ、アール、　（Ｋａｔｚ、　１．Ｒ３）　ｒジー、ジュー。ツルベック（Ｇ、Ｊ、Ｔｈｏｒｂｅｃｋｅ）　ｒ　エム、ケイ、ベル（Ｍ、　Ｋ、　Ｂｅ１ｌ）、　ジュー。ゼット、イン（Ｊ、　Ｚ、　Ｙｆｎ）、ディー、クラーク（Ｄ、　Ｃ１ａｒｋｅ）およびエム、ビー、ズチャ−（Ｍ、Ｂ、Ｚｕｃｈｅｒ）、　　（１９８６）　、　　ｒ血小板因子４のプロテアーゼで誘発される免疫調整活性（Ｐｒｏｔｅａｓｅ−ｆｎｄｕｃｅｄ　　ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　　ｐｌａｔｅｌｅｔ　　ｆａｃｔｏｒ　　４）Ｊ　　、　　Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　　８３：３４９１１Ｖ−５５，ムレンバッハ、ジー、ティ、　（Ｍｕｌｌｅｎｂａｃｈ、Ｇ、Ｔ、）　、　ｘイ、タブリジ（Ａ、Ｔａｂｒｉｚｉ）　ｒ　アール、ダブリュー、ブラチャ−（Ｒ，Ｗ、　Ｂｌａｃｈｅｒ）およびケイ、ニス。スタイマー（Ｋ、Ｓ、Ｓｔｅｉｍｅｒ）　＋　　（１９８６）　、　　ｒ結合組織を活性化するペプチドを暗号化する遺伝子の酵母における化学合成および発現１１１　（Ｃｈｅｍｉｃａｌ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｙｅａｓｔ　ｏｆ　ａ　ｇｅｎｅ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅＬｉｓｓｕｅ　ａｃｔｉｖａｔｆｎｇ　ｐｅｐｔｉｄｅ、ＩＩＩ）Ｊ　、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　２６１ニア１９ＩＶ−５６，ラグスジール、シー、ジー、（Ｒａｇｓｄａｌｅ。Ｃ，Ｇ、）、　　シー、ダブり二一、カスター（Ｃ，Ｗ、Ｃａ５ｔｏｒ）＋　ディー、ジェー、ロバーツ（Ｄ、　Ｊ、　Ｒｏｂｅｒｔｓ）およびケイ、アール、スワルタ（Ｋ、Ｒ，Ｓｗａｒｔａ）、　　（１９８４）　、　　ｒ滑液の繊維芽細胞によるプラスミノーゲン活性の合成および分泌を誘発する結合組織活性化ペプチドＩ　Ｉ　Ｉ　（Ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ口５ｓｕｅ　ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ＩＩＩ　１ｎｄｕｃ目ｏｎ　ｏｆ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　５ｅｃｒｅｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ　ｂｙ　５ｙｎｏｖｉａｌ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ）Ｊ　、　Ａｒｔｈｒｉ目ｓ　Ｒｈｅｕｍ　２７：６６３ＩＶ−５７，バード、ビー、アール、　（Ｂｕｒｄ＋Ｐ、Ｒ，）　ｒジー、ジュー。フリーマン（Ｇ、、１．Ｐｒｅｅｍａｎ）　、　ｘス、ディー、ウィルソン（Ｓ、　Ｄ、　Ｗｉ　ｌ５ｏｎ）＋　エム、ベルマン（Ｍ、　Ｂｅｒｍａｎ）＋　アール、デクリュフ（Ｒ，ＤｅＫｒｕｙｆｆ）、　　ビー、アール。ビリンゲス（Ｐ、　Ｒ，Ｂ目１ｉｎｇｓ）およびエム、イー、ドルフ（Ｍ。Ｂ、Ｄｏｒｆ）、　　（１９８７）　、　　ｒ新規なＴ細胞活性化遺伝子のクローニング及び特徴付け（Ｃｌｏｇｎｊｎｇ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｊｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ａｃ目ｖａｔｉｏｎ　ｇｅｎｅ）　Ｊ　、　Ｊ、Ｉｍｔｎｕｎａｌａｇｙ　１３９：３１２６ＩＶ−５８，ｌ：ｌリンス、ビー、ジｘ−，（Ｒｏｌｌｊｎｓ、Ｂｌ。）、イー、ディー、モリソン（Ｂ、　Ｄ、　Ｍｏｒｒｉｓｏｎ）およびシー。ディー、スタイルス（Ｃ，Ｄ、５ｔｉｌｅｓ）、　　（１９８８）　、　　ｒＪＥ１血小板誘導性成長因子により誘発され、その生成物がサイト力イン様の特性を持つ遺伝子のクローニング及び発現（ＣＩｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＪＢ、　ａ　ｇｅｎｅ　１ｎｄｕｃｉｂｌｅ　ｂｙ　ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄ８ｒｉＶｅｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒａｃｔｏｒ　ａｎｄ　ｗｈｏｓｅ　ｐｒｏｄｕｃｔ　ｈａｓ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ−１ｊｋｅ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）　Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８５：３７３８ＴＶ−５９，スガノ、ニス、（Ｓｕｇａｎｏ、Ｓ、＞　ｒ　：ｒ−ム、ワイ、ストックル（ＩＪ、　Ｙ、　５ｔｏｅｃｋｌｅ）およびアール、ハナフサ（Ｒ，ｔ（ａｎａｆｕｓａ）、　　（１９８７）　、　　ｒｏウス　サルコマ　　ウィルスによる形質転換は細胞分裂促進性血小板タンパク質と同族の新規な遺伝子を誘発する（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｊｏｎ　ｂｙＲａｕｓ　ｓａｒｃｏｍａ　ｖｉｒｕｓ　４ｎｄｕｃｅｓ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｇｅｎｅ　ｗｉｔｔ＋　ｈｏｍ。１ｏｇｙ　ｔｏ　ａ　ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ　ｐｌａｔｅｌｅｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ）　Ｊ　、　Ｃｅ１ｌ　４９：背景の記載および本発明の明細書を終える目的のために、この明細書で同一と認められた発行論文、特許およびこれまでの特許１１）願のそれぞれが、明細書中で参照されてものがここに導入される。前記の発明は、明白に理解することを目的として詳細に記載される。種々の組み合わせの形態および詳細は本発明の範囲からはずれることがないことも明らかである。２、べｃ）Ｓｃ４１■■−ヒ１−■■冒　１ｈ　ＰＨＡ＋ＰＭＡＰＢＭＣ−〇ＦＩＧ、ｌ−３ＴＴＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣｅＣＣ（ｉｃｃｌ：ＧＡＧＣＡＣＡＧＧＡ（：ＡＣＡＯＣＴＯＧＧＴＴＣＴＣＡＡＧＣＴＴＣU０ｃｃａｒｆｉ工区乎ｅＴＴＴＡ々Ｘ戸！少ＴＧＣ＾ＧＡＣ＾ＧＴＴ＾＾＾＾＾＾＾＾ム＾＾＾＾＾＾＾　　　　　　７１１ＦｆＧ、Ｉ−５ＦＩＧ、Ｉ−６ｌ−６Ｂａ　　ＥｃｏＲＩ　　　Ｈｉｎｄｌｌｌ　　ＸｂａｌＦＩＧ、Ｉ−７大きさの分取２木目の鎖の合成（ＤＮＡポリメラーゼ　Ｉ）λｇｔｌＯ中へのクローニングｐＡＴ　１２９　　　　ｐＡＴ１３３　　　　ρＡＴ６０２　　　　ｐＡＴ４６４ＦＩＧ、Ｉｎ−３・−＠　　ｐＡＴ　１５４ｅ　　＠ＩＩ　　＠１ＩｌｐＡＴ２２５ＩＮＩ＠Ｉ　　＠　　ＰＡ”４１６ＦＩＧ、ｎ−４ＦｆＧ、Ｉ［ｌ−１ｐＡ７４１６　　ｍ　　儀　− ２・ｐＡＴ４６４ラ　−　― ＩＬ−２−− β２ＭＧＩｉ−− ＦｉＧ、ＩＩＩ−２刺戟物　　　　　　　　夕％、、に　　　　　　　Ｄｉｃｅ　　　　　　　　イオノでイシン　　　　　　　イオノマイシン　十〇ｉＣ８時間（ｈｒ）　　　０４　　１４　　４　　１４　　４　　１４　　４ｐＡＴ７４４　　　　　　　　　　　　　　　＠　。ＦｆＧ、ニー３＝４．５ｈ−−１−４．５トーコ［−１龜・−ｐＡＴ４６４、■閣−、、、ｐＡＴ７４４、′、“””ＭＡ−■駆Ｅ　　１）ＡＴ樹ＦＩＧ、バト２５°ＵＲＯＲＦ　　　　　　　　　　　　　　　３°０ＲＦＩＧ、　ｆｆ　’５　（Ａ）ＦＩＧ、　ＥＩ３（Ｂ）１００　ｂｐＦＩＧ、　ＴＸ４　（Ａ）ＯＡＡＴＴｅｅＣＣＴｌａＴＴ（ＴＣ入Ａ　　ＣｅｆｒｅＴ’Ｃ＾Ｇ丁　丁ｃｔａｅ＾ＧＣＣＴ−Ｃ＾ｆｆ丁Ｃ＾Ｃ入入＾＾Ｃｅ丁ＣＴ丁　sテｅｃ＾ＣＣ入Ａ丁　＾ＣｅＦＩＧ、工４　（Ｂ）ＦＩＧ、ＴｓＬ−５ＦＩＧ、　ｆｆ　６（Ｂ）ｐａＴｔ４４　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋＋＋　試　ｔｃｖｔｖｔｔｔｔ＊ｔｖ　＾　＾　ｒｅｇｔ＊ｔ　官ｌO　− ｐａＴ　ａ＠Ｉ　　　　　　　　　　　　　　　Ｎ　Ｑ　Ｖ　Ｓ丁＾＾Ｌ＾ＶＬＬｅＴＮ＾ｔｃｗ６ｒｔ＾ＩＳ−−、、ｉ−、’　　　　；　　　＝国際調査報告１ｎ＋１トｒ響〜＋＋ｍ＋ｍ＾・−−−１【＃Ｉ＃＋−−禰し■コ（’Ｔ）−＋！！；ｌｌＱ１０％０１[Detailed description of the invention] 4. A method for producing human lymphokine/cytokine-like proteins, the method comprising: The cell according to claim 3 is cultured under conditions such that the protein is produced, and the protein is produced. A production method comprising isolating protein. 5. A human lymphokine/sample comprising culturing the cell according to claim 4. A method for producing itkine-like protein, comprising; A production method in which the protein is secreted from the cell. 6. Human lymphokine/cytokine that can be produced by the production method described in M. N-like protein. 7. Human lymphokine/cytokine that can be produced by the production method according to claim 5 N-like protein. 8. Contains the amino acid sequence of human lymphokine/cytokine-like protein An antibody induced by a peptide, comprising; The protein is a nearly full-length clone of Act-2 cDNA and I) A selected from the group consisting of translation products from the cDNA clone of T. Antibodies. 9.i) placing the T cells under conditions that cause mitogenic activation; ii) Isolate mRNA from the T cells: and ff1) Hive to DNA sample Gene mapping for lymphokine/cytokine-like proteins by lid formation A bioassay comprising the step of quantifying the level of itogen activation; The sample contains a DNA fragment contained in the DNA fragment according to claim 1. Yes. 10. i) obtaining the liquid in which the T cells were cultured; and h) as claimed in claim 8. The level of lymphokine/cytokine-like proteins in humans is A bioassay that involves the step of quantifying 11. DNA encoding human lymphokine/cytokine-like proteins a fragment; the protein is a translation product of a cDNA clone of pAT 744; The product is a DNA fragment. 12. A recombinant DNA molecule comprising the DNA fragment according to claim 11 and a vector. 13. Cultivation of cells transformed with the recombinant DNA molecule according to claim 12. 14. A method for producing human lymphokine/cytokine-like proteins, the method comprising: 14. Cultivating said cell according to claim 13 under conditions such that protein is produced and said A production method comprising isolating the protein. 15. A human lymphokine comprising culturing the cell according to claim 14. /A method for producing a cytokine-like protein, the method comprising; A production method in which the protein is secreted from the cell. 16. Human lymphokine/site that can be produced by the production method according to claim 14 Cain-like protein. 17. Human lymphokine/site that can be produced by the production method according to claim 15 Cain-like protein. 18, including amino acid sequences of human lymphokine/cytokine-like proteins. An antibody induced by a peptide comprising; The protein was selected from the translation products from the pAT744 cDNA clone. Antibodies selected. 19. D encoding human lymphokine/cytokine-like protein an NA fragment; the protein is a translation product of any of the following cDNA clones; DNA fragment selected from the group consisting of products: pAT 120; pAT 125: pAT 127゜pAT 129; pAT 133; pAT 139; pAT 140S; pAT 140L; PAT 154: pAT 158; pAT 189; pAT 201; pAT 204; pAT 225; pAT 229; pAT 2 (2S; pAT 232L; p AT 237; pAT 239; pAT 243; pAT 27 0; pAT 276; pAT 281; pAT 383; pAT 402:pAT 407. pAT 416; pAT 428; I) AT 466; pAT 478; pAT 483; pAT 485; p, AT 496; pAT 518; pAT 542 ; pAT 563: pAT 591. pAT 594; pAT 603; pAT 607. pAT　620. and pAT'　730゜ 20. A recombinant DNA molecule comprising the DNA fragment according to claim 19 and a vector. 21. Cultivation of cells transformed with the recombinant DNA molecule of claim 20. 22. A method for producing human lymphokine/cytokine-like proteins, the method comprising: 22. Cultivating said cell according to claim 21 under conditions such that protein is produced and said A production method comprising isolating the protein. 23. A human lymphokine comprising culturing the cell according to claim 22. /A method for producing a cytokine-like protein, the method comprising; A production method in which the protein is secreted from the cell. 24. Human lymphokine/site that can be produced by the production method according to claim 22 Cain-like protein. 25. Human lymphokine/site that can be produced by the production method according to claim 23 Cain-like protein. 26, including amino acid sequences of human lymphokine/cytokine-like proteins. An antibody induced by a peptide comprising; The protein is from the group consisting of translation products of any of the following cDNA clones: Selected antibodies: pAT 120; pAT 125; pAT 127 ; pAT 129; pAT 133; pAT 139; pAT 140 8; pAT 140L; pAT 154; 1) AT 158; pAT 189; pAT 201゜pAT 204; pAT 225; pAT 229; pAT 232S; pAT 282L; pAT 287; pAT 2!39; pAT 243; pAT 270゜pAT 276; pA T 281; pAT as3; pAT 402: pAT 407; pA T 416; pAT 428; pAT 466; pAT 478; pA T 483; pAT 485; pAT 496; 1) AT 518; p AT 542: pAT 563; pAT 591: pAT 594; p AT 803; pAT 607; pAT 620; and pAT 73 0° 27, i) placing the T cells under conditions that cause mitogenic activation; ii) isolating mRNA from said T cells; and m) hybridizing to a DNA sample. Genetic mitosis for lymphokine/cytokine-like proteins by formation A bioassay comprising: quantifying the level of gene activation; A biomolecule in which the sample contains a DNA fragment contained in the DNA fragment according to claim 19. Assay. 28, i) obtaining a liquid in which the T cells were cultured; and ii) claim 26. Levels of lymphokine/cytokine-like proteins in humans using antibodies described in A bioassay that involves the step of quantifying Specification Field of novel lymphokine/cytokine gene inventions The present invention particularly relates to genes activated by mitogenic stimulation of immune cells. It encodes polypeptides similar to secreted factors, including lymphokines and cytokines. Regarding the genes that are present. The present invention provides such immune activation by recombinant cells. Synthesis of gene products and identification of DNA encoding these factors and the production and use of certain new products made possible by cloning. Ru. Background of the invention The resting, undifferentiated 1923 spheres interact with antigens and myelin through the activation of specific cell genes. responds to togenic stimulation; this particular gene is responsible for cell proliferation and differentiation phenotype. It is thought to regulate the events that lead to its expression. As part of the activation response, T cells stimulate the growth and growth of cells involved in the immune response. It produces a wide variety of factors that are important for differentiation. More specifically, lymphocyte proliferation and effector function are dependent on antibodies to cell surface receptors. /regulated by mitogen and lymphokine binding. Binding of such extracellular ligands triggers a cascade of intracellular biochemical events. Please refer to the following references, Experimental Part II, I [see -44 and 11-45], and this case. The cades ultimately produce gene proteins for the expression of growth and differentiation functions associated with activation. This led to the activation of Gram. (i.e., resting T cells are continuously dependent on, directed by, following activation of resting cells. The transcription events are carried out sequentially, which is approximately 24 hours at the beginning of DNA synthesis. It will reach its climax later. Limited by their early kinetics and lack of dependence on early protein synthesis Early gene transcription events include proto-oncogenes (proto-oncogenes). s) (e.g. C-myc and c-fos), lymphokines [e.g. IL -2, γINFSGM-C3F (granulocyte macrophage colony stimulating factor)] , and cell-opened lymphokine receptor CIL-2 receptor) (see II-6, l Including l-9, ll-12, II-17, 11-27, ■-36, I[-44) However, all of these have a significant impact on the proliferation and/or regulation of T cell immune responses. effect. Some genes are readily induced following mitogen activation (molecular events). It is expected to play a role in the activation and regulation of the cascade. Such genes also resemble targets of pro-oncogenic events. For example, the data for polymorphism indicate that the mitogen-inducible gene c-myc is inappropriately expressed. supports the concept that unregulated growth occurs when 1 1-26’). Currently, a limited number of early induced genes in T cells have been described. in the past , genes induced in T cells, such as IL-2 and IL-2 receptor, are frequently They were identified based on the proteins they encode. However, T cells The transcriptional response of -4, 1I-15, 11-23, 11-28, 11-32, 11-42). follow By cloning the maximum number of inducible genes, It was necessary to fully characterize the initial response of Thus, based on the characteristics of differentiation A new, unbiased approach clones a novel, mitogen-inducible gene was required to do so. For several reasons, human peripheral blood (P B) T cells were used in the development of this invention. First, PB T cells are not selected for harvesting for growth in culture. cells in a fundamentally resting phase, and they are polyclonal in vitro. Can be stimulated by naru. Second, upon activation, T cells play a variety of important roles during the progression of the immune response. Expresses various differentiation functions. For example, novel lymphokines/cytokines can induce might be expected to be included within a group of genes; <PB　The fundamental function of T cells is the soluble factors that ultimately bring about numerous physiological functions. This is because it secretes offspring (II-5, II-6, ll-9, ll-13) . Third, an important perspective in studying gene responses to activation is that genetic The purpose is to confirm the mechanism of child adjustment. The use of cyclosporine A (C3A), an immunosuppressive drug that acts on T cells, Provides a tool for initial cutting of the child's accommodative region. C3A nullifies other routes. Injury - appears to disrupt one or more early T cell activation pathways. (II-16, 11-24, II-29). Finally, the T cell lineage is thought to be involved in T cell development and function. destroys the activation requirements and mediates through a variety of different surface molecules. make it possible to compare Human peripheral blood cells were treated with PHA (plant agglutinin) and PMA (phorbol myristase). Treatment with a mitogenic combination of appears to mimic the effects of antigens and antigen-presenting cells in These two drugs induce the expression of genes important for progression through the cell cycle. These genes are known as c-fos and C-myc oncogenes ( oncogen), including the IL-2 growth factor gene and the IL-2 receptor gene (See references in Experimental Part IV below, [V-1, IV-2). In addition to IL-2 In this way, T cells produce a large number of lymphokines/cytokines and these forces These substances affect a variety of cells. These drugs include IL-3, IL-4, IL-5 and IL-6, GM-C3 F (granulocyte-macrophage colony-stimulating factor), γINF (gamma interferon) Ferro:/), TNF (tumor necrosis factor) and LT (IV-3-IV-9) and some other factors that are not well defined (IV-10-Iv-13). Contains children. Some of these factors may be under the control of specific regulatory mechanisms in T cells. No, because the immunosuppressive drug cyclosporine destroys their activation. This is because it looks like this. As mentioned above, this drug acts during the early phase of T cell activation and stimulates IL-2, I Inhibits the production of L-3 and γ-interferon (IV-14-[V -17). This inhibitory effect is specific; because c-fos and H3P (IV-15). The present invention is directed to a newly emerging group of small, secreted proteins and analogous proteins. Regarding DNA fragments encoding amino acid sequences (see Figure IV-6 in Experimental Part IV) reference). This structurally similar group includes platelet factor 4 (PF-4) (IV-1,8 ), platelet basic factor (PBP) and its processed form (processed fo rm) and β-thromboglobulin (β-TG) and connective tissue activating peptide [,I I (CTAP) (IV-19, IV-20), Gamma Mine 9'-7z Ronin protein (IP-10) ([V-21), macrophage inflammatory protein (MIP) (IV-22), neutrophil chemotactic factor [3-10C, MDNCF (single cell-induced neutrophil chemoattractant), NAF (neutrophil activating factor) (IV-23, I V-24, IV-25) and factors produced by fibroblasts, human growth (H-gro) (IV-26). This is what I decided To the extent that members of this group are associated with certain inflammatory responses and/or mitogenic activities, It appears to mediate gender. Inflammation and injury-recovery/tissue repair is a highly complex process involving many different cells. It's a process. Coordination of various cellular functions is required for communication between cells. It appears to be repeated in a large number of different secreted factors. This group of genes, which may have been derived from one common origin gene, It may work well in establishing cooperative relationships like this. As shown for some of this group, to mediate inflammation and repair, Each factor may have multiple functions (see below, experimental part [V, section discussion). The conserved functions among these proteins are This may indicate a mutual relationship with the receptor element being used. As mentioned above, this Members of the protein family clearly exhibit remarkable diversity in tissue specificity. Distinctions between factors are required during the progression of the immune response depending on the cell type activated. will determine the specific functions to be used. inflammation and injury recovery that may occur with or following inflammation. Given the complexity of the tissue repair process; knowledge of the mechanisms of inflammation and improvements in analytical methods are available. demand for methods, compositions and bioassays that enable It is clear that there was a need for new diagnostic and therapeutic methods encompassed by these . The present invention seeks to meet these needs and to address inflammation and cell growth processes. certain protein factors that appear to be present and cannot be produced in any other way Consideration is also given to the application of recombinant DNA technology to develop means of production. present invention The application of the molecular mechanisms of these factors related to inflammation and recovery processes is also considered. Overview of the invention The present invention provides novel lymphokine-like or cytokine-like proteins that do not contain other protein factors. This invention relates to the development of recombinant DNA technology involving the production of tolyin-like proteins. new Also included are conventional DNA fragments, RNA, and bioassays. In particular, the present invention relates, in part, to lymphokine/cytokine induced in T cells. mRNA and/or structural and/or functional characteristics of molecules such as Or it relates to a DNA fragment encoding a protein. The characteristic groups of these proteins are the hydrophobic N-terminal lead of secreted proteins. has the characteristics of a leader or signal peptide, and the hypothetical leader peptide is cleaved. It has an expected size of approximately 8 kD (kilodaltons) and is associated with an inflammatory response. It has been shown that the compound exerts a function associated with it and/or has mitogenic activity. It also has the same important amino acid sequence as a newly emerging group of secreted factors. In practicing one embodiment of the invention, these DNA fragments are placed in a suitable host. This host allows expression of lymphokine-like or cytokine-like proteins. Produce protein. The present invention provides a sense strand of the DNA fragment of the present invention. It is also related to mRNA produced as a result of transcription of 5 tran. The present invention In addition, genes related to the DNA fragment of the present invention of various mitogenic components The effect on the expression of mRNA and protein produced in human cells in human cells. Novel bioassay methods for quantification are also included. In a basic embodiment, the invention provides lymphokine-like or cytokine-like proteins. contains DNA fragments encoding protein; these DNAs are the following D selected from the group consisting of NA・ Act-2 [e.g., activated peripheral blood mononuclear cell (PBMC) mRNA, No. 2 cDNA clone with almost complete length (10.7 kb); hereinafter referred to as "complete It is called ``Act-2'' with a long length. ”: Human cD of activated T cell mRNA NA clones, paT 744 and PAT 464. and a related DNA fragment detectable by hybridization to any of the human DNA fragments described above, the lymphokine-like or cytokine-like protein with which the related fragment is associated. A fragment that encodes quality. In other embodiments, the invention relates to RNA human transcription of the DNA of the invention. this Preferably, the RNA transcripts can be translated to produce a complete molecule of the encoded lymphokine-like or cytokine-like protein. In other embodiments, the invention relates to recombinant DNA molecules comprising vectors and the DNA of the invention. These recombinant molecules include molecules containing full-length DNA and any of the following vector DNA classes: Baculovirus-vectors (Ac-such as derivatives of nuclear polyhedrosis virus: cNPV) ): Bacteriophage vector (gtlO); M13 Bacterium Theriophage vector: or RNA transcription vector pOEM-1 The recombinant DNA of this invention is a recombinant molecule that also includes the DNA of clone paT744 or the DNA of clone paT464, and any of the following vector DNAs. (GtlO); and M13 vector; and mammalian mammalian expression vectors capable of expressing the inserted DNA in human cells (e.g., C03); vector (such as CDM-8 or PMT2-2). Furthermore, in another embodiment, the invention provides cells transformed with the DNA of the invention, preferably or mammalian or insect cells. Furthermore, the present invention includes yeast transformed with the DNAs of the present invention. According to another embodiment of the invention, the transforming DNA can be expressed in the cell, thereby increasing the lymphokine/cytokine-like protein encoded by the DNA in the cell. In the most preferred embodiment of this aspect of the invention, cells transformed with the DNA of the invention secrete the protein encoded by the DNA in the (incomplete) form secreted by activated T cells. Furthermore, the invention encompasses novel lymphokine/cytokine-like proteins produced by expression into the DN of the invention or by translation of the RNA of the invention. These proteins are preferably secreted (in other words, they do not have an obvious signal). (which lacks a file array). These proteins can be used for functional studies and purified for other biochemical and functional analyzes such as qualitative or quantitative receptor binding assays. According to this embodiment of the invention, a novel lymphokine/cytokine-like protein The quality will be the unmodified DNA and mRNA protein products of the invention; and the modified or genetically engineered protein products. cormorant. Modified lymphokines/cytogenes as a result of genetically engineered mutations in the DNA sequence. A toryin-like protein will have one or more differences in its amino acid sequence from the corresponding naturally occurring "wild type" protein. The present invention provides for the production of peptides encoded by the DNA fragments of the present invention. This includes new antibodies developed by the researchers. In this embodiment of the invention, the antibody is a lymphocyte comprising a sequence of such peptides. will specifically bind to cytokine/cytokine-like proteins; Preferably, the protein assumes its original (physiologically active) structure. These antibodies can be used for detection and purification of protein factors. Furthermore, the present invention provides novel methods for detecting the expression of genes related to the DNAs of the present invention. This includes standard bioassay methods. According to one such embodiment, the DNAs of the invention are used to quantify the steady state level or rate of induction of the mRNAs of interest. It could be used as a sample for Such bioassays can be used, for example, for the identification of different types of tumor cells or for the confirmation of genetic defects in the inflammatory response. It will be useful for recognition. The genes associated with the DNAs of the invention are found in T cells (and in certain other hematopoietic cells). It is expressed very rapidly in response to immune activation (even in cells), so it is highly expressed in response to immune activation. Always serves as a beacon of fast times. Thus, according to this aspect of the invention, e.g. The proteins of the present invention can be used to track whether tissue is being rejected as a result of transplantation. Various types of body fluids could be routinely tested using antibodies against the proteinaceous factors. Fig. I-1 shows 1ap-labeled complete cells isolated from various types of human cells. Northern blots are shown using full-length CDN samples and RNA, which primarily indicates full-length gene expression in certain mitogen-stimulated immune cells. This explains the current peculiarities. Fig. I-2 characterizes the expression of the mRNA tense in normal T and 8923 spheres and hemispheres (by Northen plot method) and shows that Act-2 gene expression is responsive to mitogens. It explains that the process is both quickly induced and terminated. Fig. I-3 shows the sequencing strategy, the DNA sequence, and the 92 amino acids. The deduced amino acid sequence of an 10,7 kb (kilobase) cDNA clone of A, ct-2 mRNA containing the corresponding 276 base pair open reading frame is depicted. Fig. I-4 shows the hydrophobic boolean of Kyte-Doolittle calculated from the deduced amino acid sequence. A sample is presented, which reveals an extremely hydrophobic N-terminus that appears to be a so-called leader or signal peptide. Figure I-5 shows the translation of an RNA species produced from the full-length ACt-2 cDNA in a cell-free system, with a similar appearance to the calculated molecular weight of 10,199 Daltons. The results show a product of about 11,000 Mr, which is clearly translocated into the microsomal wall as secreted proteins do. Figures 1-6 depict the results of using the full-length Act-2 cDNA to perform a Southern plot of the human DNA genome: Cleavage pattern is single copy number or low copy number inheritance represents a child. Fig. I-7 shows the time course of Act~2 expression in relation to the proliferation of the other two types of cells. Genes known to play a role in: c-fos and C-fnys. A direct comparison shows that Act-2 mRNA is co-induced with c-fos and its peak expression coincides with that of C-m)'S. Table I-1 shows the results of the N-terminal amino acid sequence of Act-2 protein radiolabeled with 16s-methionine or cysteine. Experimental Part II Fig. ll-1 was immediately induced by mitogen stimulation of human peripheral blood T lymphocytes. An overview of the procedures used to isolate the identified genes is provided. Fig. ll-2 shows four types of induced genes selected by stimulation of resting human blood T cells. The rate of offspring mRNA induction (by Northern blot and cDNA samples) is illustrated. Fig. It-3 depicts the various expression and regulation of selected cDNAs in the human helper T cell line Jurkat. Fig. [1-4] shows the expression of selected cDNAs in human fibroblasts. -Zanplot) analysis is shown. Table 11-1 summarizes the characteristics of various mitogen-induced genes of Tm cells as confirmed by cDNA cloning studies. Table (I-2) shows the analysis of the expression of T cell induced genes in the helper T cell line Jurkat and human fibroblasts. (Northern blot) analysis of mitogen-induced genes in peripheral blood T cells using selected cDNA clones. Ru. FIG. Describes (Northern blot) analysis of mitogen-induced genes in CD28D T cells stimulated with either noclonal antibodies or ionomycin. Ru. Fig. lll-3 shows dioctata in the absence or presence of cycloximide. T cell line Jurkat stimulated with neuroglycerin or ionomycin C Northern plot) analysis of mitogen-inducible genes. Table 111-1 shows the responses to the drugs used in Fig. III-1-3. We are compiling mRNA analysis (Northern blot data) for mitogen-inducible genes. Experimental part 1F'ig, IV-1 was performed using unstimulated (control) cells or cycloheximide or cycloheximide. cDNA clusters in human peripheral blood T cells of either crossporin-treated cells. Northern analysis of RNA of loans pAT 484 and pA'r 744 is depicted. I'm there. FIG. 07-2 depicts Northern analysis of pAT 464 and pAT 744 RNA in Jurkat cells, either unstimulated (control) or treated with the indicated drugs. Fig. IV-3 shows the sequencing strategy, nucleotide sequence, and 92 amino acids. The predicted amino acid sequence for pAT 464, which contains an open reading frame of 276 base pairs corresponding to amino acids. Pig, IV-4 has a sequencing strategy, nucleotide sequence, and 92 amino acids. The predicted amino acid sequence for pAT 744, including the open reading frame corresponding to amino acids. Fig. IV-5 shows primer extension analysis of the DNA sequence for pAT 744; using oligonucleotides complementary to positions 135 to 152 of the sequence of pAT 744 annealed to RNA from human peripheral T cells. What I did was It is. Fig. Iv-6, pAT 464, coded by pAT 744. Comparisons between amino acid sequences of coded and structurally related proteins are shown. FIG. IV-7 shows Southern plot analysis of pAT 464 and pAT 744 in human placental DNA cut with several restriction enzymes. Fig. 1V-8 illustrates the expression of pAT 464 and pAT 744 mRNA in promyeloid (HL60) cells and human tonsil B cells (Nosa By plot method. ). Ffg, JV-9 shows expression of the appropriate secreted proteins in mammalian (CO3) cells transformed with pAT 464 and pAT 744 DNA in various expression vectors (5iS-cysteine tag on the protein). evening). Fig. [V-10 shows the expression of appropriate secreted proteins in mammalian (CO8) cells transformed with pAT 464 DNA in various expression vectors. (by 163-cysteine labeling of the protein). FIG. (Western blotting method). Fig. 1V-12 shows CO8 cell culture transformed with pAT 744 DNA. To detect secreted proteins in the supernatant of nutrients, pA'r 744 was The activity of a rabbit antibody (N., 722) raised against the C-terminal 12 amino acids of Tide is shown (Western plot method). Fig. IV-13 shows CO8 cells transformed with pAT464(7) DNA. To detect secreted proteins in the supernatant of cell cultures, pAT 464 pep The use of a rabbit antibody (N., 720) raised against the C-terminal 12 amino acids of Tide is shown. Transformed with FIG. IV-14ft, pAT 464(7) DNA. A second rabbit antibody raised against the C-terminal 12 amino acids of the pAT464 peptide in reaction with secreted proteins in the supernatants of CO3 cell cultures. The results for the body (No. 719) are shown. FIG. IV-15 shows that mitogen-activated human peripheral blood T cells secrete pAT 464 protein (by Unistarne blotting with anti-peptide antibodies). DETAILED DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS The DNA of the invention is exemplified by the DNA cited herein: full length Act-2 [i.e. -0.7 kb activated peripheral blood mononuclear cells (PBMC ) cDNA, No. 2 clone]: pAT 744 or pAT 464 DNA clone; and can be detected by hybridization to these DNA fragments. related DNA fragments. Other DNA groups of the invention include the following cDNA clones: pAT 120; pAT 125; pAT 127; pAT 129; pAT 133; pAT 139; pAT 140S; pAT 140 L; pAT 154° pAT 158: pAT 189; pAT 2θ 1; pAT 204; pAT 225; pAT 229° pAT 23 2S, pAT 232L; pAT 237° pAT 239; pAT 243; 1) AT 270° pAT 276; pAT 281; pAT 383; pAT 40 2; pAT 4θ7; pAT 416: pAT 428; pAT 466; 1) AT 478; pAT 483: pAT 485; pAT 496; pAT 516; pAT 542; pAT 563; pAT 591: pAT 594; pAT 603; pAT 607; pAT 620. and pAT　730゜ The DNAs of this invention also include recombinant molecules that include: Act-2 DNA and baculovirus-vector DNA (plasmid pA c-Act2, and exemplified by the recombinant baculovirus, vAc-ACt2. It will be done. ); full length Act-2 DNA or pAT 744 or pA T 464 DNA and bacteriophage 9 Full length Act-2 DNA or pAT 744 or pAT 46 4 DNA and M13 bacteriophage (exemplified by Ml3mp19) ); full-length ACt-2 DNA and RNA transcription vector pGEM -1; and pAT 744 or pAT 464 DNA and A mammalian expression vector (CDM- 8 or PMT2-2). The sense strand DNA nucleotide sequence and the predicted first (p primary) protein sequence is the full length A C't-2 DNA For Fig. It is shown in I-3. As shown in experimental part I, about −0 , four clones with inserts of the same size of 7 kb were identified. all of them hybridizes to the same 0.9 kb mRNA. The sequencing strategy used, the resulting nucleotide sequence and the encoded protein. The predicted amino acid sequence for pAT744 is shown in Fig. IV-4 pAT 434(7) for 2 F i g. IV-8 be. These DNAs, full-length Act-2 (　0. 7 kb), and pAT 744 and pAT 464 clones are is the most preferred DNA. Full-length Act-2 cDNA and pAT744 cDNA are fundamental appear to be derived from the same gene. To be more specific, two Visually examining the eight cDNA sequences, it appears that within the protein-coding region there are only two differ only in the two base sequences, in other words: the complete length Act-2 (Fig. I-3), base No. 167 is C and 171 is G. On the other hand, the corresponding pAT744 sequence (Fig. lV~4) base 181 is T and 135 is eight. These differences are expected Amino acid number 20 is P in full-length Act-2 and pAT744, respectively. ro and Leu, while other base changes do not change the amino acid sequence. stomach. Such differences may be due to genetic inheritance of the two different cloned individuals. It is possible that it is derived from inherited variation (in other words, polymorphism). Computer searches using Bionet (recently released) , I) A clone very similar to AT 464 was found in stimulated human tonsil lymph. (IV-41) and was designated pLD78. Clone pLD78 has an additional 7 nucleotides from 5' than clone pAT464. sequence extension and sequence comparison shows a 5 nucleotide difference between both clones. However, none of them affect the predicted sequence of amino acids. Nucle These differences in octide sequences may reflect polymorphisms between different donor genes. It will be. Sequence comparisons for pAT 744 and pAT 464 were performed at the nucleotide level. remarkable similarity (45%) and higher homology at the amino acid level (56 %, Fig, IV-6A). In addition to common regulatory specificity, this One of these genes would have been derived from a common ancestral gene; It is likely that the proteins encoded by these two perform the same functional role. Full length Act-2, from pAT 744 or pAT 464 clones Southern plot analysis of genomic human DNA using derived samples (each Figs. 1-16, IV-7 and IV6) are Act-2/pAT 7 A comparatively simple cleavage pattern that is highly consistent with 44 and pAT 464 is Single or low copy number genes are shown. Clearly, pAT 464 and 744 are not interchangeable, despite their striking similarities. Do not cross-hybridize. (Thus, the DNAs or RNAs of the present invention, particularly herein, are used in the hybridization method. By using the most preferred DNAs listed, those skilled in the art can Other lymphokines/sites that fall within the scope of the present invention without further experimentation. Screening genomic or cDNA libraries for In-like proteins You can Recombinant DNA molecules comprising vectors and other DNAs of the invention are also within the scope of the invention. Go inside. Preferred recombinant molecules include full-length Act-2 DNA and Bacteriophage vectors (gtlO ); M13 bacteriophage vector: or RNA transcription vector pOEM -1° Preferred recombinant DNAs of this invention are clone pAT744 or pAT 464 DNA and any of the vector DNAs listed below. Includes: λ vectors (eg, gtlO); M13 vectors. The most preferred recombinant molecules of this invention are: full length Act-2 DNA and A molecule containing any of the vector DNAs of: baculovirus vector (pAc- Act2, plasmid derived from polygonal plasmid pAc 373; pAc- Recombinant baculovirus derived from Act2, vAc-Act2 and wild Type AcNPV strain E2 (containing DNA): Other most preferred recombinant molecules are pAT 744 or pAT 464 D capable of expressing inserted DNAs in NA and mammalian cells (e.g., C05) Those that include mammalian expression vectors (CDM-8 or PMT2-2) Ru. The full-length Act-2 human cDNA was synthesized as described in Experimental Part I. cloned and isolated. To confirm full length DNA, λ HUT-102B2 cDNA library assembled in gt10(1-14) 10@ phage plaques from priming method) (1-15) to label the labeled part. A long (-0.4 kb) Act-2 cDNA insert was screened. The complete length -0,7 kb) DNA sequence consists of 27 amino acids corresponding to 92 amino acids. Contains an open reading frame of 6 base pairs. This open reading frame makes the most use of the 5'AUG, which is the most important for eukaryotic translation. It is generally used to initiate Furthermore, the first AUG region is (I-17), which has high homology to the consensus sequence determined for the start site of The cDNA appears to extend to the 3' end of the mRNA. This is because is the classical AAUAAA polyadenylation signal (1-18) and the polyA-terminal opening. This is because it has a beginning. The human DNAs of the invention were synthesized, cloned and described in Experimental Part II. “subtraction” using mRNA from activated T cells, as in traction) cloning and hybridization steps. child The strategies are summarized in Fig. 11-1. Human peripheral blood Tm cells were treated with the mitogens phytoagglutinin (PHA) and phorbo. 12-myristate (13-acetate) (PMA) and protein synthesis 4. In the presence of the inhibitor cycloheximide. Polyclonal for 5 hours Activate. This method does not depend on de novo protein synthesis to induce The focus is on the analysis of the early response, which is limited by the genes of Currently Approximately 40% of the extracted λgtlO cDNA library was extracted. The samples were screened. Purification hybridized to pulled samples Phages are cDNA samples synthesized from activated and resting T cell mRNA. The sample is subjected to a verification screen used for double phage filtering. Finally, we have derived cDNA by both extraction and confirmatory screening methods. 528 Phage was selected. Further analysis identified 66 specific cDNA clones as described in Experimental Part II. It was confirmed. The majority of them appear to represent distinct genes (Table 11 -1 footnote). 44 new induced gene clones were further investigated (experimental Part 11). These clones exemplifying the DNAs of this invention are: pAT 120; pAT 125; pAT 127: pAT 129; pAT　133. pAT 1403; pAT 140L: pAT 15 4: pAT 158゜pAT 189; pAT 201; pAT 204; pAT 225: pAT 229; 1) AT 232S; p AT 232L; pAT 237. pAT　219゜pAT　243; pAT 270: pAT 276; pAT 281. pAT 383; pAT 402; pAT 407. pAT 416; pAT 428: pAT 464; pAT 466; pAT 478; pAT 483; pAT　485. pAT　496゜pAT　516; pAT　542: pAT 563; pAT 591; pAT 594; pAT 603; pAT 607; pAT 620; pAT 730 and pAT 74 Includes 4. Nine novel mitogens induced in response to various T cell activators genes, to assess the diversity of pathways that regulate such genes. (Experimental Part III). These nine genes are pAT237; pAT 563; pAT 229; pAT 120; pAT 154: pAT 225; pAT 416, which are the preferred DNAs of this invention, and pAT 744 and pAT 464, which are the most preferred of the present invention. It is a new DNA. Clone pAT 46 derived from the extracted cDNA library 4 and pAT744 were characterized in more detail (see Experimental Part II). A full length cDNA clone was isolated from the cDNA library. stop The lever library was prepared using PHA-P and PMA in the presence of cycloheximide in 4. Derived from RNA extracted from human peripheral blood cells stimulated for 5 hours It is. This cDNA library was constructed using oligo d as described (IV-29). constructed by T priming and subsequently cloned into λgtlO (IV-30). Clone pAT 464 is 793 nucleotides long and AT 744 is 659 nucleotides long (Eco R at the 5' end 1 linker. ). Brimer extension analysis for pAT 744 isolated It was confirmed that the obtained clones represented almost full-length cDNAs (Fi g, 1v-5). Approximately 10 nucleotides at the 5' end of the authentic mRNA sequence are present in this cDNA clone. It can be determined that there is a lack of The first ATG is pAT 464 and pA T744 is located at positions 84 and 74, respectively. For each case, 92 The amino acid reading frame follows. 1) For transcription of full length ACt-2 RNA in OEM-1 vector DNA templates were prepared as follows (see Experimental Parts). 7kb The full-length Act-2 cDNA was cut with AvaI, and Klenow and dNT Filled with Ps and then cut with Eco R1 to generate nearly full length fragments. The artificial 5' G-C terminus was then removed. This fragment, Sma I and Eco PGEM-1 [Promega Biotic] cut with R1 (Promega Biotec)). The baculovirus vector construct containing the full-length Act-2 cDNA is , baculovirus polygonal plasmid pAc to generate pAc-Act2. 10.7 kb of Act-2 cDNA in the BamH1 site of 373 (1-16a) By cloning A, this 0. It was produced from a 7kb cDNA. So This puts the full-length Act-2 cDNA under the control of a polygonal promoter. (See also Experimental Section). SF9 cells were co-incubated with pAc-Act2 and wild-type AcNPV strain EI DNA. transfected. Recombinant baculovirus vAc-Act2 was isolated and purified by a sequential iterative procedure of plaque hybridization. (I-16a). pAT　464 or pAT　744 DNA and mammalian expression vector ( CDM-8 or PMT 2-2) and the inserted DNA. The construction of recombinant DNA that can be expressed in CO8 cells is described in the experimental section tV. Ru. Recombinants contained vector DNA of either: CDM-8 [ Briar at Massachusetts General Hospital, Poston, Massachusetts Seeds obtained from seeds. Nature 329, 840-842 (1987); or PMT2-T [obtained from the Institute of Genetics, Cambridge, MA; ; related earlier transformations of this vector are Nie Chan Young DN of the present invention. A and sense strand (sense 5 strand) RN A are protein products of the present invention. In combination with production methods, virtually pure lymphokine/cytokine-like proteins It can be used to produce large quantities of. Furthermore, the substantially precursor thus produced lymphokine/cytokine-like proteins using well-known techniques. and the presence of receptors for these proteins in various body fluids and tissue samples. Can be used in diagnostic assays to confirm. (Thus, the present invention relates to cells, preferably mammalian or insect cells, and the transforming DNA in the cell. It also includes cells capable of expressing. In a most preferred embodiment of this aspect of the invention, the DNA of the invention transforms The cells that have been treated with activated T protein encoded by their DNA. Secreted in the (incomplete) form secreted by the cell. The present invention is produced by the expression of the DNA of the present invention or by the translation of the RNA of the present invention. It also encompasses novel lymphokine/cytokine-like proteins. Preferably , these proteins are secreted (in other words, lacking an obvious signal sequence). There is. ) would be. These protein factors can be used for functional studies and qualitative For different biochemical and functional analyzes such as quantitative and quantitative receptor binding assays It can also be purified. Insect cells transformed with recombinant molecules containing full-length A, Ct-2 DNA. Cells were prepared as described in Experimental Part I. Simply put, purified, assembled Plaques of the recombinant baculovirus, vAc-Act2, were prepared by S used to infect F9 cells. Recombinant full-length Act-2/virus The Kyurovirus vector was expressed in SF9 cells, and AC abundant in the supernatant was obtained. produces t-2 protein. Furthermore, the N-terminal sequence of the radiolabeled protein indicates that the signal peptide was cleaved as expected. Transformed with pAT 744 or pAT 464 DNA, and pAT Mammalian cells secreting 744 or pAT464 proteins were Part IV. Briefly: COS cells were cultured with either CDM-8 or PMT2-T. cDNA clone inserted into the expression site using standard DEAE-dextran method and transfection. Novel proteins can be compared to standard, well-known Bs5-system of cells after transfection with DNA constructs using Visualized by °in labeling. The size of the protein product is determined by the leader peptide After cDNA cleavage, the cDNA sequence is suitable as predicted. This invention provides for the preparation of peptides encoded by the DNA fragments of the present invention. It also encompasses novel antibodies developed by researchers. This embodiment of the invention provides that the sequence of the peptide as predicted by the cDNA sequence pAT　744 or pAT　464-lymphokine/cytokine containing exemplified by a rabbit antiserum containing antibodies that specifically bind to In-like proteins. , this antibody targets the terminal 1 of both pAT744 and pAT464 proteins. This occurred for a synthetic peptide representing two amino acids. This is peptide immunology Chemically synthesize the peptides and conjugate them to the carrier (KLH) according to standard methods. , and this was carried out by injecting this carrier + peptide into rabbits. These antibodies can be used to detect or purify protein factors. Fig, IV -11 and IV-12 are two different viruses generated against the pAT744 peptide. Showing the use of heron antibodies (721 and 722) in Western blots. . Similar studies using antibodies against pAT464 were performed in Fig. IV-13. and shown in IV-14. As is clear from these figures (Fig.), appropriate amounts of Secreted factors are detected by antiserum from rabbits immunized with synthetic peptides. . Furthermore, the present invention provides a novel method for detecting the expression of genes related to the DNA of the present invention. This includes bioassay methods. In an exemplary embodiment, the DNA of the invention is Samples for quantifying steady-state levels or rates of induction of relevant mRNAs was used as. Use full length Act-2 or pAT744 or pAT Methods for these bioassays of the invention using 464 DNA; and standard Northern blot techniques are detailed in Experimental Section ① or 11-IV, respectively. It is described in Those skilled in the art will appreciate that such methods can be used to isolate isolated samples without undue experimentation. lymphokine/cytokines, either in cells or in various tissues. understand that it can be easily applied to the analysis of gene expression for protein-like proteins. Probably. Such bioassays can be used, for example, to test different types of tumor cells at the same time. This may be useful for determining genetic defects in the inflammatory response or for identifying genetic defects in the inflammatory response. Without adding further details, using the previous description and the methods in the experimental section below. If used, the present invention can be utilized to its fullest extent. The materials disclosed in the experimental section are Unless otherwise noted, the disclosures are for illustrative purposes and are therefore included in the attached request. It is not construed to limit the scope of the request in any way. Experiment part I Identification, cloning, and characterization of novel immune activation genes A novel immune activation gene, designated Act-2, was added to an activated T cell library. Differential: Confirmed by hybridization screening. Approved. The genes are associated with activation of T cells by phytoagglutinins, staphylococci (Stap hylococcus aureus) Cow an I activation, and is rapidly included following hemispheric activation by ribopolysaccharides. Complete A cDNA containing the length encoding region was isolated. Deduced amino acid sequence is weight matrix scoring method (weight matrix 5 core) 92 peptides, including a highly hydrophobic N-terminus predicted to be a signal peptide by Predict the open reading frame of amino acids. Using the baculovirus expression system, this gene encodes a secreted protein. It has been proven that Therefore, Act-2 expresses the new site power-in. It is possible to exist. Other cDNA clones derived from genes substantially equivalent to Act-2 were also isolated. and characterized (see: Experimental Part 11 III and 1v below). this The clone is called pAT744. Introduction T cells play an important role in the regulation of immune responses and effector functions. antigen Or as a result of stimulation with mitogen lectins, an increase in intracellular calcium, including protein phosphorylation and increased phosphoinositol turnover A series of biochemical events occur (see; I-1, I-2). These events involve activation of cellular genes and or generate signals that lead to the production of cellular proteins that are only expressed very weakly. Ru. These induced proteins act as helper, suppressor, or cytotoxic T cell machinery. It is important for the proliferation and differentiation of effector T cells, which have megeny potential. Characterizing novel genes in T lymphocytes induced in response to mitogenic stimulation There is a demand for Identify the products of offspring and their role in mediating T cell function and immune responses The goal is to characterize the What are the methods that can be used successfully to identify genes activated by mitogenic stimulation? , by using the technique of differential hybridization. Yes (1-3-1-8). The success of this method is due to the difference between genes expressed in resting and activated cells. Although there is extensive overlap in the Characterized by a small number of fairly abundant mRNAs that code for a protein dependent on being kicked. This section covers cloning into cDNA, sequencing, and Confirmed by differential screening of activated normal T cell cDNA library We describe the characterization of a novel gene, designated as ACt-2, in BMC). Picol 1 (ypaqu) was collected from healthy volunteers. e) Cx LSM, Litton Bionetics (LSM, Litton Isolated by gradient centrifugation (Bionetics). The cells are generally 10 Contains % Fetal Bovine Serum (FBS), L-Glutamine, and Antibiotics Cultured at 1-2X10@cells/ml in RPM11640 medium. No particular instructions Phytoagglutinin [E-PHA, Burroughs -1ilel　lcome)] and phorbol myristate acetate (PM A. Sigma) were used at 5 μg/ml and 50 ng/ml, respectively. 8928 balls with sheep red blood cells treated with 2-aminoethyliso-thiuronium bromide. PBMC (4% non-specific esterase positive cells) were cultured and rosettes were concentrated. It was purified by removing the cells. In one experiment, hemispheres were placed in a plastic adhesive. It was exhausted. Such cells are 80% surface 1g positive and non-latex uptake. and they are classified as Staphylococcus aureus. s) Cowan I (SAC. Carbiochem-Behring Carp , )) was cultured for 30 minutes to 72 hours in the presence of a 1:10,000 dilution of . Hemispheres were made from PBMC elutrjation. The purity was 95% as determined by Giemsa staining and flow cytometry. cell was cultured in the presence of 10 ug/mg ribopolysaccharide (LPS, Sigma). Ta. Cell line, T cell line (Jurkat, HUT-102B2, Mo 1 t-4, C EM, and HUT-78), B cell lines (Raji, S3. Na1l-1,8 392,0M4672. U266, and 5UDHL-6), and bone marrow cells systems (K562 and U937) in RPMI 16 containing 10% FBS. It was kept at 40. fibroblast cell lines 4312 and 4429 (1-9), and Osteosarcoma cell line 5887 (1-9) was maintained in DMEM containing 15% FBS. did. Human fetal fibroblast HFL-1 cells were incubated with DHE containing 10% FBS. In 25 ml of M, approximately 1X10' density per 17'5an' cell culture flask. The confluence (conf 1 u ence). Stimulate cells by removing exhausted medium and replaced it with fresh EM containing 20% FBS. Early passage (ea HFL-1 cells (rly passage) were used for all tests. Generation of cDNA libraries from activated PBMCs, as described previously. (1-10), activate PMBS with PHA and PMA and extract all cellular RNA. 1-11), and the mRNA was analyzed using an oligo(dT) cellulose chromatograph. It was isolated by Double-stranded cDNA was isolated from Okayama and Barb (1-10, l It was produced according to the procedure of -12). Screening of cDNA libraries, induced or uninduced PBMC Using the '2P-labeled initial cDNA derived from both Screen the library twice using the method of Stein and Hogness (1-13). did. Nitrocellulose fibers were mixed with 0. 1M NaHt PO4 pH 6,8,0 , 85M NaCl, 1mM EDTA, 10X (Denhar dt's) solution), 0. 1% SD3. 100 μg/ml salmon sperm DNA and and 10 u g/m 1 of poly(rA) (solution before hybridization). It was kept at ℃ for 3 hours. The filtrate was then treated with 10% dextran sulfate and irradiated. Perform hybridization using fresh pre-hybridization solution containing active sample. It was formed. The filter paper was soaked in 2X SSC, 0.5% SDS for 20 minutes at 65°C. Washed 4 times and 0. 30 min at 65°C using 1XSSC, 0.1% SDS Washed twice and autoradiographed. Screening of HUT-102B2 cDNA library, complete length To confirm the cDNA, HUT- 10' phage plaques from cDNA library from 102B2 , random priming method (1-15) with a partial-length Act-2 cDNA insert labeled using Lean (1-15). Phage DNA was bound to nitrocellulose and treated with 50% formamide, 5 × [Denhardt's solution), 5xSSPE, O11%S Hybridize in DS and 100 μg/ml salmon sperm DNA overnight at 42°C. Formed. Soak the filter paper in 2X SSC, 0.1% SDS three times for 20 minutes. Then 0. 1X5SC, 0° for 30 min at 56°C using 1% SDS. Washed twice and autoradiographed. DNA sequencing, sequencing was performed using M13 phage DNA A and Sequenase (Sequenase>C Biochemical Co., USA) poration] and dithioquine chain termination according to the manufacturer's recommendations. Dideoxy chain termination method Northern blot analysis performed by d), on formaldehyde gel, whole cell electrophoresing the cell RNA (10ag) or polyΔ+RNA (4-5μg), Nitrocellulose filter paper [Schleich & Schleic] her and 5chuell) and tffip-labeled Ac t-2 cDNA. Southern plot of the genome, D of 10ag from U937 or 428 cells NA was cut with the indicated enzymes, analyzed on a 1% agarose gel, and prepared as described below. According to the manufacturer's protocol, “GeneScreen Plus Nylon M (Ge ne 5clean Plus nylon membranes) Hybridization was carried out after transferring the cells to a 100% microorganism (manufactured by N. Co., Ltd.). In vitro transcription and cell-free translation, -0.7 kb Act-2 cDNA A was cut with Ava I, filled with Klenow and dNTPs, and Eco Almost full length fragment digested with RI to remove the artificial 5' GC terminus (27 bases through the 3' end of the insert) was obtained. This fragment, Sma I and E pGEM-1 (Promega Biotic (Pro megaBiotec)). RNA, Promega Biochi SF3 or T7 according to instructions from Promega Biotec The promoter was used to transcribe from both strands. This transcription reaction uses the DNA template as It was finished by decomposing it with DNAase, which has no RNAase. . RNA was then extracted with phenol/chloroform and precipitated with ethanol. RNA was m53-cysteine (>600 Ci/mmo1. Ame-jam Lysate of rabbit reticulocytes and wheat germ using (Amersham) [Pr’omega Biotec or Ame-Jam (Purchased either from Amersham)]. Certain translations were performed in the presence of canine pancreatic microsomal membranes. 1 translation product Analyzed on a 5% polyacrylamide gel. Expression of Act-2 cDNA, -0 to generate pAc-Act2 , 7kb of Act-2 cDNA was transferred to the baculovirus polygonal plasmid pAc 373 (1-16a) into the BamH1 site. Thereby , placed the Act-2 cDNA under the control of a polygonal promoter. SF9 cells, Co-transfection with pAc-Act2 and wild-type AcNPV strain E, DNA I turned on. Recombinant baculovirus vAc-ACt2 was isolated and plaque Purified by a sequential iterative procedure of hybridization (I-16a). Once the plaque-purified recombinant virus was obtained, SF9 cells were infected and 1S-labeled. biochemically labeled with cysteine and methionine. secreted into the supernatant of the cells Radiolabeled proteins were isolated on SDS gels and extracted using form 477. . ) according to the ATZ program supplied by the manufacturer on consecutive Edman minutes. The case was resolved. Fractions were counted by liquid scintillation. result Confirmation of Act-2 cDNA, activated P BMC cDNA library Is there a cDNA sequence that was specifically derived from 10,000 bacterial clones from I had it screened for what it was. Activated or resting PBMC? Using first strand CDNA samples derived from RNA from Screened twice on filter paper. Only about 1% of colonies hive on the induced strands. Lid formed. ACt-2 selectively and robustly hybridizes only to induced samples. Approximately 0. It was a 4kb cDNA clone. This discovery was made by an unspoiled PB. PBMCl activated for 16 hours with either MC, PMA or PHA and HUT-102B2 cells, R from a T cell line transformed with HTLV-1. Confirmed by Northern blot of NA (FIg, I-IA). pause There is no detectable signal in stage PBMCs, indicating that they are active with either PMA or PHA. Sexualized PBMCs have approximately 0. A 9kb band was detected. the weaker signal is It was detected in the lane representing HUT-102B2 mRNA. To determine cell specificity, the type of cells that express the Act-2 gene, T cells, B Cells and non-lymphoid lineages were examined using Northern blot analysis (Fi g, 1-IB), and as previously mentioned, Act-2 was applied to HUT-102B2 cells (column (lane) 1), but not in MOLT-4 or CEMT cells. There was no (not presented). Act-2-specific mRNA was similarly expressed in HeLa or Fibroblast cell line 4 transformed with S■ was not detected in Hani562 cells (rows 2, 3). Both 312 and 4429 include bone cell line 5887 (no data presented). It was not detected in any of the following cases. mRN A of Act-2 is Raji (column 4), 0M54672 (column 5), SB (column 8), and slightly in the EPV-infected B cell line 8392 (column 9). detected (this is understood to be the original plate of the autoradiogram), but its Detection was performed in Na1l-1 (pre-B cells, row 7), 5UDHL-6 (row 10), or found in multiple myeloma cell lines U266 (column 11) or 8662 (column 6) I couldn't. Interestingly, PMA-stimulated U937 cells (human histiocytic lymphocytes) Although derived from a tumor, it maintains monocyte-like characteristics. Fig, I-C) will do it. In addition, Jurkat T cells induce Act-2 when co-induced with PHA and PMA. , but not when induced separately with either drug. Further characterizing the expression of Act-2 mRNA in normal lymphocyte activation To attach, Act-2 was activated in newly isolated PBMCs activated with PHA. The time course of mRNA expression was examined (Fig, l-2A). oct-2 mRNA is at low or undetectable levels in resting PBMCs. but increases rapidly and dramatically in response to mitogenic stimulation. the best Levels occur in about 4 hours and are then negligible by 24 hours after stimulation. level rapidly decreased. Thus, Act-2 expression is increased in response to PHA. It describes both prompt induction and termination. Staphylococcus aureus Cow a Similar study of B cells activated by nl (SAC, Fig, l-2B) also showed rapid induction and disappearance of Act-2 mRNA. Similarly, we tested for 8 hours with ribopolysaccharide (LPS) for resting monocytes and Act-2 expression. It was a highly stimulated monocyte (Fig. 1-2). oct-2 mRNA is unpierced. Although it was absent in the tori cells, it was easily detected in the LPS-induced hemisphere. Act- 2 is expressed in all normal cells following activation. This raised the possibility that Act-2 is expressed and interferes with the cell cycle. to mitogen On the other hand, lymphocytes in the resting phase respond to growth factors related to c-myc expression. We observe a parallel relationship between the reproductive responses of quiescent fibroblasts in normal human embryos. Resting and plasma-stimulated initial medium of infant lung (HFL-1) fibroblasts. The expression of Act-2 was investigated. However, in contrast to c-myc, Plasma was unable to induce ACt-2 mRNA expression (data not shown). Ta. ) Confirmation and sequencing of the full-length 8Ct-2 cDNA. There is a difference in size between the length of the cDNA and the bands detected on the Northam plot. Therefore, the next step is to isolate longer cDNAs. sample and Then, 0. HUT-102 amplified using 4kb Act-2 cDNA Screening of 106 λgtlO plaques from the B2 cDNA library (1-14). Four clones of similar size of approximately -0.7kb were confirmed. and set all of them to 0. The same 0.4 kb cDNA was confirmed. 9kb m Hybridized to RNA. Sequencing strategy, DNA sequence, and estimated The amino acid sequence is shown in Fig. I-3. The salient features of the sequence can be summarized as follows: (1) Act-2 is a novel Represents a gene. By using DNA and protein homology search programs, Comparison of the DNA sequence and the predicted amino acid sequence is based on the recent gene punch (GenB ank) (55th edition, March 31, 1988 edition) and NBRF (16th edition and 34th edition) , published on March 31, 1988). I couldn't get it out.゛ (2) This DNA sequence has a reading of 276 base pairs corresponding to 92 amino acids. Including frame. This open reading frame makes the most use of the 5'AUG, which is eukaryotic. It is commonly used to initiate translation in living organisms. Furthermore, the area of the first AUG is , has high homology with the consensus sequence determined for eukaryotic initiation sites (1- 17). (3) This cDNA appears to extend to the 3' end of the mRNA. That's called The reason is that this is the classical AAUAAA polyadenylation signal (1-18) and the polyadenylation signal (1-18). This is because it has an A-terminal start. The 3′ untranslated region also contains an A-T rich domain. Including (boxed, see discussion). (4) A strong N-linked glycosylation site (Asn- to -3er/Thr) do not have. (5) There are six cysteine groups: thus intramolecular or intermolecular disulfide bond may be formed. (6) Kyte-Do Little (Kyte-Do) generated from the deduced amino acid sequence hydrophobic plot (Fig. When examining ①-4), the extremely hydrophobic N-terminal group becomes clear. Hey hey weight matrix analysis method analysis), this appears to be a signal peptide. (from the calculated score of 11,3), and the cut point is between 5er23 and A1a24. It is predicted that (1-19) The cleavage site is the cytokine IL-2 (1-20 ), IL-3 (1-21), and GM-CSF (1-22). To prove that Act-2 encodes a functional mRNA, we next The DNA was subcloned into pGBM-1 and both the sense and anti-sense strands were was transcribed using SF3 and T7 promoters. The obtained RNA species are Translated in a lysate of Japanese germ and reticulocytes (Fig. 1-5). The sense strand (lane B) appeared in the detectable product, but the anti-sense strand No traces (lane A) appeared. This detectable product is 10,19 It migrates with an apparent Mw of about 11,000 Daltons, similar to the calculated molecular weight of 9 Daltons. I went. Unfortunately, in translation in reticulocyte lysates, artifacts associated with globin migrated with the early translation products of Act-2 (not shown), but in wheat Embryo lysates gave clear results. Cleavage of putative signal peptides and translocation into the lumen of the endoplasmic reticulum (], umen) To evaluate the line, we performed the following experiments using canine microsomal membranes. Mi Closomal membranes are often more effective than in reticulocyte lysate systems. Ru. Thus, transfer/cleavage experiments involving such translation can be performed using the reticulocyte lysate system. the membranes were pelleted at 31,000 ris, 0. Performed by washing with 15NaCl 1,0,2M sugar, pH 7,5. I was disappointed. The membranes were then boiled in analyte buffer and analyzed on an SDS gel. This person In this method, contaminating globins could be removed from the membrane fraction. The early translation products are associated with a fraction of the membrane called lane C). This suggests that the N-terminus functions like a signal peptide. Based on the sequence (and if the putative signal peptide is cleaved) , a change of 2391 Daltons was expected; however, no significant change was observed. , implying that the putative signal peptide would not have been cleaved. there was. See column C with proteinase K in the absence or presence of Triton XX100. The processing of the bands associated with the membrane becomes much more complete in the presence of surfactants. caused a decomposition. These data indicate that the protein binds to membranes but not the signal. This indicates that peptide cleavage could not be demonstrated. Whether the full-length Act-2 cDNA encodes a secreted product. In order to solve the important question of whether the signal peptide was cleaved, A The -0.7 kb clone of ct-2 was transformed into SF9 cell mesothoracic baculovirus. (manuscript in preparation). Cells were biochemically labeled with 5s3-methionine and cysteine, and the supernatant was collected. , subjected to electrophoresis on an SDS gel, and for each label, a characterization of A The Ct-2 protein band was cut out. Extracting the substance into water and arraying it was determined to prove that the putative signal peptide was cleaved (see Table i-1). reference). methionine in cycle 3 and cysteine in cycles 11 and 12. Detection indicates that cleavage occurs between 5er-23 and ala-24 of the early translation product. (see F i g, I-3). Next, cDNA was used to perform a genomic Southern plot method (Fig. -6). A relatively simple pattern of cutting was obtained. Interroy the same plot Kin-2 (IL-2) receptor cDNA (IL-2 receptor is a single-copy genetic (encoded by a child) and formed 71 hybrids. and of similar strength The band was confirmed (but not presented). These data can be single-copied or or Act-2, which represents a low copy number gene. Finally, Act-2 in PBMCs stimulated with PHA or PHA+PMA, The time courses of expression of c-fos and C-m)'S were directly compared. and, mRNA with Act=2 is induced in cooperation with c-fos and its maximum The expression of c-myc was found to be consistent with that of c-myc (Fig, l-7). No, cpm in cycle 4 for methionine in cycle 3 and in positions 11 and 12 (see Experiment 2) in cycles 13 and 14 from cysteine in Carryover occurs when mature proteins ( F i g, see I-4) positions 2, 7 . and the presence of proline in 8 It was expected that this would depend on the current situation. discussion This study used cDNA parameters generated from mRNA from normal and activated PBMC. In the library, A, ct-2 (activated PBMC cDNA, N o, 2) Novel activated genes were identified and characterized. Act-2 encodes an open reading frame of 92 amino acids. Heiin jne) weight matrix analysis method (weight matrix analysis) sis), a highly hydrophobic N- Contains terminal groups. In vitro translation analysis detects signal peptide cleavage Although it was not possible to prove that the recombinant Act-2/baculovirus-vector Act-2 protein was found to be abundant in the supernatant. . Additionally, N-terminal sequencing of radiolabeled proteins indicates that the signal peptide is It shows cutting as expected. Even when Act-2 is associated with the membrane, There remains an interesting possibility that it exists. Recently, in normal activated human lymphocytes It will be possible to directly confirm the distribution of Act-2 protein produced in Sea urchin antibodies are being produced. The 3' untranslated region is also rich in A-T and the consensus sequence ATTT8(1-23) and TTATTTAT (1-24), and this common sequence is associated with proto-oncogenes, and tumor necrosis factor, lymphotoxin, IL-1 (both alpha and beta), and numerous proteins. -feron, and a common sequence in many secreted factors, including GM-CSF. There is significant interest in the fact that this has been confirmed. The common TTATTTAT is generally found commonly in mammalian mRNAs. However, mRNA encoding proteins related to inflammatory responses (1-24 ) is particularly widely found: thus the presence of this sequence in Act-2. proposed that this gene might express a novel cytokine. I support it. These sequences correlate with the relative instability of mRNA1-23) and are induced by This is consistent with a rapid decline from the highest levels of mRNA. This gene is of particular interest in view of its rapid time course of activation. telogen PBMCs represent normal cells in a physiologically quiescent state (G,) (1- 25, l-26). As a result of activation by antigens or mitogens; cell expansion; and increased RNA content, transcription of new genes and synthesis of new proteins. be. As a result, cells are given the opportunity to produce proteins such as IL-2 (I-27), which promote cell proliferation. Sensitivity to other signals is conferred. Early induction of Act-2 expression and c-fos in response to mitogenic stimulation and its cooperative expression with c-mys indicates that Act-2 plays a role in cell growth and reproduction. This is consistent with the possibility that it may play a strong early important role. Act-2 is minimally or not expressed in resting PBMCs. death However, this is true for T cells by PHA or PMA, B cells by SAC, and was rapidly induced in the activation of monocytes by PPS. However, no expression in HeLa 52 cells, and quiescent human fibroblasts. As evidenced by its failure in responding to plasma stimulation of cells, Act-2 is not expressed in all actively growing cells. In this section The experiments described illustrate some of the most important embodiments of the invention and are not complete. The full-length Act-2 cDNA is expressed in insect cells transformed with this DNA. and properly processed products exhibit these traits. This indicates that it is secreted from transformed cells. Publications ■-1, Vaice, Knee 9. Imboden, J.E. Birdie, Kay 0. Munger, Bee, and Stoll. Ji x-, + (1986) + Ann, Rev, Immunol, 4 ．． 593-619゜ l-2, Ashman, R., Niss, (1984) “Basic Immunology (Funda mental Immunology) J + Lavuan Press, Newyo -k pll, 267-300゜■-3, gray, bee, doubleyu,, lang , D, W9. Nasiyarian, R0. Simon Sensei, Sea 0. Prink, Earl 9. Shelwood, Bee. J,, Waratuku, D, M0. Berger, Niss, Ellevinson, Nie; Di, and Guedel, Di, Bui. (1982), rNach-? -(Nature) London 295°503-5 08° I-4, Cochrane, B.H., Rihuel, Niecy 8. and steeleth, C, D (1983) Cell J 33. 939-947゜■- 5, Hirskohorn, Earl, Earl, lAllar, Bee 1. Yuan 1. Z , knee 1. Gipson, C. D., & Baselga, R. (1984), Proc. Natl., A. cad, Sci, USA 81, 6004-6008゜■-6, Willow, Wy ,, Yoshikai, Wai,, Leggett. K., Clark, Nis., B1. Alexangou, I. and Mac, T.W., (1984), Nature, Ron. Don 308. 145-149■-7, Ro, L, F0. and Nathans, D. - (1985), BMBOJ, 4. 3145-3151■-8, Robe, Shi -, G9. Havel, C., and Brickley, 7-L., C., Proc, N. atl, Acad, Soc, [JSA83, 1448-1452 1-9. 　　　　) Nelle, C6. Demarus, R., and Long, E. O. , (1985) 11! MBOJ, 4. 2839-2847° 1-10. 　　　Chang, N, Tee 1. Tam, Nis, H,, Kung, B.C. and Chang, T.W. (1984), Ma. l, Biol, Med, 2, 161-165, ■~11. Chilgin, Ju -. M1. Brippira. Ni, E1. MacDonald, Earl, Liu, and Kutter. Double, Re Liu, (1979), R Biochemistry 118, 5294-5299. 1-12. Okuyama, H., and Berg, B. (1982), Mo. 1. Ce11. Biol, 2. 161-1701-13. Granste Inn, M., and Hogness, D., Niss, (1975), Prac. Natl, Acad, 5oc5. USA72, 3961-3965° 1-14. 　　　Leonard, Daburi 21, J, Depper, JE, M 3. Crabtree, G., R. 0. Rudeikov, Nis 1. Panplay, JE ,,Rob, Earl, Jay1. Kroenke, M 1. Subetrik, bee, bee 1 ．． Peffer, N., J., Waldman, T., N., and Green, Dove. Liu 9 C. (1984) Nature 311. 626-610° l-15, Feinberg, Ni, Bee, and Fusai Gerstein, Bee, ( 1983) Anal, Biochem, 132°Styrene, C, D, and Rader, B. (1983), Ce1l 35, 603-610. l-1ea, M, D, Summer and G, E, Smith “Baclovirus” A Manual of Method for Vector and Insect Cell Culture Operations ds for Baculovjrus Vectors and In5ec t Ce1l Culture Procedures) J Texas Ag Recartial XVeriment Station Bulletin noi555. 　 t987. 1-17. Kozak, M. (1987) Nuc, Ac1 ds res, 15. 8125-8148° 1-18. Broadfoot, N.G. and Brownlee, G.G. , (f 976) Nature 263, 211-214゜ l-19, Phono Heishine, G. (1986) Nuc, Ac1ds Re s, 14. 4683-46901-20. Taniguchi, Tee 0. Matsui , H,, Fujitau Tea 1. hawk talent, sea, l kashi 7. F. Yoshimotoa Hall, and Hamguchi, J. (1983) Nature 302°305-3 10° ]-21, Young, Soi. C9. Caretta, Knee, Bee 0. Temple, Bee, Knee 0. Chung, M, B 0. Kobasik, varnish, ゛, witekugianochi , Jie, Varnish. , Lyary, Nee, C0. Crit, Earl 8. Danube, Earl, E9. Ron Gu, G., G., and Clark, Nis. C. (1986) Ce1l 47. 3-10゜l-22, Wong, Wa I, C9. Caretta, knee. Bee, Temple, Bee, Nee, l Wilkens, Chee. M0. Lyary, Nee , C2. Luxenberg, Dee. Bee 0. Johns, varnish, varnish 0. Brown, E. L. ,Kai,R,M,lOr,E,-C9. Shyo Marker, Sea 1. Gol De, Dee, W9. Kaufman. Earl, Liu 2. Hiyutsuku, R, M0. long. E., N., and Clark, N., C. (1985) 5science 22 8. 810-8151-23. Shaw, G., and Kamen, R. (1 986) Ce1l 47,3-10°1-24. Cabto, Dee 6 ．． Beutler, B0. Hartung, K., Thayer, R. 1. Brown- Shimmer. Nis, and Cerami, Nie, (1986) Proc, Natl, Acad. SOC, USA 83. 1670　-1674゜1-25. Kakuzamare 8. Calaveretta, B., & Baselga, R. (1985) Proc, Natl. Acad, Sci, USA 82. 5375-5379°1-28. 　　 Reed, Ju. Sea 0. Alvar, shapeee, nowell, bee, sea, and Hoover, Earl. Gee, (1986) Proc, Natl, Soc, [JSA 8 3,3982-3986° 1-27. 　　Stern, Jie, B., & Smith, Qi. knee, 5cien ce　233. 203-206゜Length] LQ" L Snake Mitogenic activity of human T cells The complexity of the early transcriptional response to This chapter describes the isolation and characterization of more than 60 novel cDNA clones. I will post it. These remain human peripheral blood T cells following mitogenic activity. It consists of the immediate transcription reaction part. This initial response is significant in terms of the absolute number of induced genes. It is also very complex in terms of the diversity of its rules. expressed with activated T cells Although most genes participate in the activation response of normal human fibroblasts, those of activated T cells are more restricted in their tissue specificity and therefore activated T cells. Encode or influence differentiated functions. Furthermore, activated genes The kinetics of its induction, its response to cycloheximide as well as the immune inhibitor cycloheximide They can be differentiated based on their sensitivity to sporin A. This latter medicine is 1 It should be noted that the expression of more than 0 induced genes is inhibited; A broad genetic mechanism for the action of this agent is suggested. 1 Kurimata l'1 Wataru Tadaba 1 Human peripheral blood T cells were obtained from healthy volunteers and Ficoll-Hy It was separated through a paque gradient nylon wool column. The generated cell preparation is , as judged by anti-CD3 staining, - consistently over 90% of T cells It was. PBT cells were incubated in RPMI 16 containing lO% fetal calf serum (FCS). The cells were cultured at a concentration of 2x106 cells/m1 in 40ml. PBT cells are seeds During the time of each period P HA P (1 g g / m1; Burrou ghs-Welcome Co.) and PMA (2ong/ml). Stimulation was performed with or without loheximide (10 μg 7ml). The Jurkat cell line was kindly provided by Hardy. Jurkat cells are RPMI 1 supplemented with 10% FCS and 25 #Lg/ml gentamicin 640 years old. Sherkat cells were incubated with PHA-P (Igg/ml) and PHA-P (Igg/ml) for various periods of time. MA (20 n g/m 1), cyclosporine, 6. (14g 7m 1; 5andoz) with or without stimulation. human fibroblast cell line, CCD-11LU and WI3B are American Type Culture Collection Obtained from the Fibroblasts were collected and grown in MEM containing 10% FCS. and then 0. Survive for 3 to 5 days in MEM containing 25% FC3. Ta. To restart m-length, the exhausted medium was supplemented with 20% FC8 and filtered. Place in MEM with or without loheximide (10 p-g/m1) I changed it. Cronin and Ha 1... PBT cells were isolated as described above. One was cultured. RNA was obtained from unstimulated cells (Tl-8) or from PH as described above. 4. AP and PMA in the presence of cycloheximide. Stimulate cells for 5 hours It was then separated. Poly＾+ RNA was transferred to an oligo-dT column (II-3 ). oligo-dT prizing (1 8) from 204 g poly A+ RNA from activated T cells. cDNA was synthesized. After hydrolysis of the RNA, this cDNA was extracted from unstimulated cells. 2000 hybridized moles with a 10-fold excess of polyA+ RNA The cot value was set to xs/1. Then convert the terminal strand molecule into double-stranded cDNA: mR From NA hybrid to hydroxyapatite column (II-14, II-20> Separated by chromatography using . After the first round of withdrawal , 15% of the molecules are in the single-stranded fraction, judging from the count distribution. It was seen. This fraction was hybridized again from unstimulated cells and 10x This second round of extraction removes about 90% of the excess mRNA. A main chain material was obtained. Size frac on 5epharose CL-68 column Following conversion, cDNAs larger in size than 400 nucleotides The molecule is processed by DNA Poly erase I for second strand synthesis. It was used as a mold. Double-stranded DNA was then extracted according to standard procedures (II-12). It was cloned into lambda gt10. 45,000 individual blocks Got a library with a loan base. Approximately 40% extracted cDNA live The library was prepared using a pull-out cDNA probe synthesized as described above with exceptionally high specificity. Labeled with different activity (5x 108 cps/ug) and subjected to only one II-pulling Screening was performed using the excised probe. Three times using a pull-out probe Following eye screening and plaque purification, different screens are performed. It was. The double filtrate was treated with a cDNA probe prepared from activated cell mRNA and It was hybridized to a cDNA probe derived from unstimulated cell mRNA. 523 Successfully differentiated hybridized clones were obtained. 4. Extract whole cell RNA with guanidine isothiocyanate. Take it out and 5. 7 M CsC] (IT-8) and purified by centrifugation. Gene screening was performed by electrophoresis in formaldehyde-agarose gel. spots on the NEN membrane filter (NEN Re5search Products). The cells were then hybridized to the 32p-labeled cDNA insert. Quantitative loading of RNA was performed by hybridization to a β-2 microglobulin probe. (data not shown). The L32j probe was supplied by the following individuals and organizations. : GM -CS　F　Genetics　In5titute;　T　-Interface Ron Meloy Laboratories;c-f　osDr.T. Curran; IL-2 receptor Drl, Greene; IL -3Genetics In5titute’; Met- and Leu-prep Preproenkephalin Dr, S, 5abo l; Human IL-4ATCC: p53 Dr, D, Givol; Lymphokki Shin Genentech; IL-5Dr, Ni, Ar1a (DNAX) ; Ornithine-decarboxylase Dr, D, Nathans ; b c 1-2 Dr, A, Bakhshi; IL-6 Dr, H, Go, Ids tein; c-m y bDr, F, Mushinski; HS P 70 and unwound ATPaseDr, R, Morimoto IIDr, M, 5 porn provided the nick-translated TGF-beta probe. ■ ；゛　　　　　　　Cronin　　Clo in the mitogen-activated T narrow chest For this task, we used the method of pull-out cDNA cloning to generate immediately inducible genes. Then, following pull-out probe hybridization, its maturation m as per these techniques. Genes that are activated at low levels of RNA (II-14, 11-2) 0) gave the greatest sensitivity for detection. This procedure is summarized in Figure Ill. Human peripheral blood T cells, shown in Fig. Ball 12-myristate 13-acetate (PMA) and protein synthesis 4. In the presence of the inhibitor cycloheximide. Polyclonally activated for 5 hours. The latter agent targets many growth-related genes (II-1, II-27, II-30, 11-34) is known to superinduce (5uperinduce). Canada Furthermore, cycloheximide inhibits IL-2 and IL-2 receptor monosynthesis and interaction. Prevents mRNA Au induction that occurs after use. This suggests that the initial response of activated cells We focused our analysis on those that are independently induced into new protein synthesis. Determined by genes. To date, approximately 40% withdrawal lambdagtlO The cDNA library was extracted and screened using probes. pull out pro The purified phage hybridized to the tube is further activated and viable. cDNA probe synthesized from T cell mRNA or phage double filter - and applied to different screens where it is used. Finally, the extraction methodology induced cDNA as determined by both and heterologous screening methodologies. 528 phage clones were selected from the blotting. The number of identified genes was determined from among these 528 phage clones. The next step was to transfer the cloned cDNA insert to 528 phages. I decided to do a cross-hybrid. In this method, 66 unique CDNA clusters We identified loans, the majority of which appear to express distinct genes. limited This number of groups can be derived from the same mRNA segment, and thus leading to overestimation of individual genes. However, out of 528 phages Of these, 120 were hybridized to selected cDNA inserts tested so far. The number of uniquely induced genes would not exceed 66 if no cross-over The number of isolated phage clones belonging to a given group via hybridization is phage clones and ranges from 1 to 86 phage clones (see Table 1). 1-2 Explanation), 44 new induced gene clones were further studied (see below). ), Northern blot 1 - all inducible by analysis and double exceptions was removed and high fritted into single-sized messages (Table 1l-1). moreover, Southern blot analysis to determine whether any of the cDNA inserts contained repetitive sequences. The doubles are members of a small multi-genetic family, as measured by This became clear (Table 1l-1). Drawn library and 528 selected phage clones already described To assess the extent to which induced genes are expressed, both were induced in cells. A cross-hybrid analysis was performed using a number of genes known to be able to induce the disease. The composition of the extraction library is IL-2, GM-C3F, gag+ma-IF Clones encoding N, c-myc and C-fos were measurements showed that the latter exhibited a typical activated T cell phenotype; 4. in the presence of cycloheximide in T cells. I walked on the pavement for 5 hours, but C-m y c (ll-36) was induced to a much smaller extent. 528 selections Several isolates of c-myc were detected among the phages. In addition, 528 pieces The phages contain the IL-2 receptor, IL3 and IL-4 growth factors and Met - and Leu-preproenkephalin (TI-46, 11-47, ll-49 ) (Table 1l-1), 528 phages isolated Among them, IL-2, GM-C3F were analyzed. -IFN, c-fos, p53, ornithine-decarboxylase, bcl-2 , lymphotoxin, TGF-beta, c-myb, interleukin 5 and 6 , heat shock gene 70, and unrolled ATPage (11-6, 11-9°11-1 3, 11-21, ll-25, ll-35, 11-36, ll-38, 1 1-48) and confirmed that many new genes were isolated. public Detection of knowledge genes was isolated. 528 samples selected using extracted cDNA probes Genes known in the library that are not present in phages (e.g. IL -2) detection is achieved by nick translation versus heterogeneous cDNA probes. The result was a far cry from the much stronger signal. In addition, the induction period Length 4. 5 hours) is optimal for the majority of genes, but is relatively slow. It was not optimal for the gene to express the kinetics. In spite of that First, the Hytulit formation data showed that 528 selected phages had predicted genes. contains many, but not all, of the analysed, well-known Indicates that it contains an induced gene. The 5LIf of Tsu and Cyclosgi 1 A were separated. For many genes, to assess expression heterogeneity for induced genes. Kinetic analysis of mRNA level was performed in Figure 1 r+-z shows four novel induced genes. One pattern of 0 expression showing a typical Northern analysis for pAT249 As illustrated by, after activation of T cells by PHA and PMS, It shows that it appears quickly, i.e. in 30 minutes or faster. pAT464 Another common pattern shown for mRNA expression after only 2 to 4 hours It is characterized by Another mRNA species (e.g. pAT129 and pAT139, Figure 1 1-2) was induced at an intermediate time. H was detected regarding both the onset and duration of expression. Differences in kinetics are summarized in Table 11-1 or suggest a high inverse regularity of the initial reaction. It is something to do. Approximately 70% of genes (reference table 1l-1) are cycloheximide are superinduced by and the rest have no or only minimal effect. However, the use of cycloheximide is useful for fast isolation of induced genes. Many are transiently expressed and protein synthesis inhibitors (e.g. PAT129 and 4. only in the presence of p AT 249). Detectable in 5 hours, critical There was something there. Cycloheximide alone does not cause expression of these genes. (Fig. 1l-2), indicating that many of them are transcriptionally ordered. There is. Detailed requirements for expression of the nine newly isolated genes are provided in the attached document. Paper (Experiment part 1■1. (below). The human CD4◆helper cell line is a lymphoid protein in IL-2 and cancer. interferon and ■L-2 receptor (11-119, ll-37, 11-45) is known to preserve the inducibility of several genes. 0 The present inventor has identified many isolated genes and their expression and regulation in this tumor line. about the regulation and its sensitivity to the immune inhibitor cyclosporin A (CsA) tested for degree. A large number of lymphocytes have been painstakingly created from activated T cells. is thought to be transcriptionally induced (I+-16, ll-37, ll-39). It is known that this agent suppresses this effect. Shown in Figure 11-3 and Table 1 Four different patterns of expression were identified, as summarized in 12. Of the 35 newly cloned genes tested, the expression of 22 was The cells were induced after treatment with PHA and PMA in human cells. Of these In 11 species, induction was essentially unaffected by CsA (e.g. pA T602, Figure 1l-3), L, surprisingly, the majority of genes The induction is 11 out of 22. repressed by CsA (e.g. pA7464, Figure 1l-3), which means that CsA is a completely large group of genes (possibly many lymphoid genes). during activation, which is common for (including cytokines) This means that a distinct activation bus will affect this stage. This further suggests that it is required for the locus of the gene. The tested residue Thirteen genes were not induced in Jurkat cells. Following the induction As measured by the number of intervening points (data not shown), 10 of these (e.g. p A T 133. Fig. 1l-3) shows how many types of meth are present in Jurkat cells. It has also failed to hybridize to sage. Maybe these messages are It is present in cell types that are distinct from CD8◆T cells, such as CD8♦T cells. Alternatively, Jurkat cells may be transformed and have lost or altered these genes. It has the signal machinery necessary to direct the genes or their mRNAs. most Members of the latter group of genes (3 (11) of 35 are found in Jurkat cells) (e.g. pAT129, Figure 113), these genes Vine that contributes to the uncontrolled growth of tumor lines (see Discussion). "On the table" kinetics Insert @RNA 5RNA Clone Frequency Group 1 Size Chair No. Induction CH X genetic tissue '[BPL [nuclear] [minutes] 6 effect 0 Child type pAT120 5 16002000 60/60 S FpAT125 4 400 3500 60/60 S 5 pAT127 5 900 2000 30/60 S MpA T129 2 600 2000 60/60 S MpAT1 33 2 600 20 units 0 120/240 S 5pAT139 3 800 2500 60/120 S -pAT140S I ZOO2600270/270 S 5pAT140L 2 300 2600 240/270 S 5pAT154 5 800 3400 30/120 S 5pAT158 3 10003400 + -5pAT 189 1 11003000 + S MpAT201 3 350 3500 + − pAT204 3 360 2700 + -5pAT225 S 600 3900 30/60 S 5pAT229 3 600 6700 2 40/240” S 5pAT232s 1 400 2600 12G/120 S MpAT232L 4 900 1900 60/270” S MpA7237 5 1800 2000 3G/120 S 5p AT2 9 1 400 8100 + + -SpAT243 4 13004500 60/420 S 5pAT270 3 1200 2100 + + pAT 27fi 3 800 3300 + + --pAT28] 1 900 900 30/42 0 NE 5pAT383 4 300 2000” 120/270' S MpAT402 2 500 2700 + S FpAT407 1 800 2300 6 (1/60 (l) NE 5pAT416 3 600 2400 60/120 S 5pAT428 3 500 5800 + + -5pAT464 3 900 900 120/420 NE 466 FpA 1 900 1450 + + -5pAT478 2 400 2200 ＋ NE 5pAT483 1 300 1800 + + -5pAT485 2 700 6800 240/240 S S 5pAT496 1 400 2000 + + -5pAT516 2 450 1300' 10 --pAT542 3 500 6800' + S -pAT5 63 3 1800 2400h 270/420 S FpA 59] 2 500 3500 6 0/420 S - pAT594 2 500 2000 120/270 NE 5pAT603] :I00 4800 + 5pA T607 1100 :l] 00 + + --pAT620 3 300 1250 240/4 20 HE -ρAT730 2 550 900 + + NE -pAT744 4 800 800 120/420 NE Sc-my c 2400 50/120 S 5IL-31-800+ 5IL-42 -700+ 5IL-2R], 3500 + 5PPE 2 2 -1300 ＋ 3 Table - Kuchi 2 Mitogen-induced gene characteristics 1 frequency group was separated 528 shows the number of cross-pipelited phage clones among the clones of Detected by the listed subcloned inserts. :1=1 crossed hybrid Phage clone: 2 = 2 to 5 gM cross-hybrid phage clone; 3 = 6 to 10 cross-hybrid phage clones; 4 = +1 to 25 cross-hybrid phage clones, all 66 isolated to date Among the different clones, the frequency distribution is 1 = 22 clones; 2 = 17 clones. loan, 3 = 16 clones; 4 = 6 clones. mRNA size (nu cleotide) on formaldehyde-agarose gels. The transfer of S rRNA was measured. For 5 hours (min), the induced mRNA species or PHA of peripheral blood (PB) T cells (ip-g /m1) and PMA (20ng/m1) stimulation following initial detection. The second number represents the time (minutes) at which maximum steady-state mRNA levels were observed. ), * in this column indicates mRNA or cycloheximide (10u-g/ m1) indicates that it is detected only when it is included in PHA/PMA stimulation. . , + has not been extensively studied, but PHA, PMA and Figure 2 shows gene induction in response to the combination of cycloheximide and cycloheximide. 0 is PHA/PMA-induced steady-state mRN A level in PB T cells , relative to the levels obtained with PHA/PMA alone. Effect of cycloheximide express the fruit. :S #5 induction, NE No effect or minimal effect of cycloheximide;- No effect measurement. Digest with either Bam Hl, Eco R1 or Sst I. Number of bands detected in Southern blot of human breast 111 DNA: S All three F less than 4 bands in at least two digests; F 4 bands in at least two digests or more hands: M 5 or more hands in all 3 digests - Genome organization not measured. epA7383 also contains 900 nuclei unaffected by cycloheximide. The constitutively expressed mRNA species of Otide was detected. 'pAT516 also contains a 1700 nucleotide woody expressed mRNA. Detected. 'pAT542 is also expressed equally with a predominant species of 6800 nucleotides46 An mRNA species of 00 nucleotides was detected. 'PAT563 is also expressed equally with the predominant 2400 nucleotide species36 00, 4100 and 8500 nucleotide mRNA species were detected. 1 Helper ■ T cell attraction in cell lines Jurkat and human fibroblasts The details of the transgene expression analysis and experiment are as described in Figures 11-3 and 11-4. It is. Induction upon stimulation of resting human fibroblasts (HF) with Y-serum. N-No expression in resting or serum-stimulated human fibroblasts. ND - Not measured. a - woody expressed mRNA species of 900 nucleotides (Reference Table 1l-1) Expression data for . b - for the derived mRNA species of 2000 nucleotides (Reference Table 1l-1) Expression data is shown. Responsiveness of mitogen-induced genes of T A critical question in the initial characteristics of CKD is the tissue specificity of the transcriptional activation process. different Do cells derived from these tissues exhibit a large share of the activation response, or do they have a central role? that receptors for agonists are generally tissue specific. Will you not give it? Normal human lung fibroblasts WI38 and CCD-11LU ( TI-2) activation was studied. Following growth, these cells enter the resting phase of the lungs. Gathering and then 0. Cultured in 25% serum, they also contain a number of growth-promoting agents. stimulated to restart the cell cycle in the presence of high concentrations of fetal bovine serum containing stimulatory activity. Vine. Analysis of three representative induced genes is shown in Figure 4, in which telogen Blasts were incubated with 20% serum for various times with or without cycloheximide. The kinetics of expression for each mitogen-induced gene stimulated by T cells and and fibroblasts (compared to Figure 114 and Table 11-1). Interestingly, the induction of mRNA using cycloheximide alone was variable. This often occurs in fibroblasts, but in cells such as (compare Figure 11-2 and Figure 11-4), such a result indicates that human lung fibroblasts The cells, e.g. those utilized here, contain a background of activated cells or resting cells. It is important to note that the mechanisms that repress gene expression during this period may differ in the two cell types. The approximately 80 cases analyzed here are summarized in Table 11-2. % of novel T cell-inducing genes could be detected in fibroblasts by Northern analysis. It will stand up. Therefore, the initial responses are very similar in completely distinct cell types. However, some of the genes are more distinct in their tissue specificity. restricted and thus encode the differentiated functions of lymphocytes or T cells or It seems to be effective. To date, all four genes have shown limitations in tissue specificity. The offspring are inhibited in their induction by CsA. Interestingly, both Some induced genes expressed by tissues are repressed by CsA in T cells. (Reference Table 1l-2), however, the factors that address the tissue specificity of CsA action Exclude thread. -Ska John As shown in this chapter, the early transcriptional response to T cell activation is very complex. has discovered a large number of novel genes with very distinct patterns of regularity and expression. include. In addition to functions related to progression through the cell cycle and arrest against proliferation , these genes may encode other functions, such as regulation of the immune system. In particular, genes with limited tissue distribution of expression are important for the differentiated mechanisms of activated T cells. It is predicted that he will play such a role in Noh. Indeed, two of these genes First, PAT 464 and PAT 744 are contiguous and have the expected parentage relationship. This shows the structural similarity between the encoder peptide and known secreted proteins. suggests its identification as a potential lymphoid (Experimental Part IV). Various T cell preparations, cell lines or clones (+12, ll-4, ll-l5, ll-23, 11-28, ll-32, 1+-41) Based on the mouse 3T3, more advanced research is being carried out beyond a certain number of genes that have already been isolated. I have been studying the disintegration-induced activation process in fibroblasts. Can be activated immediately The numbers are much smaller than what we found here in previous studies that cloned functional genes. Obtaining a number that does not exist (11-10, 1+-30), L, rudder, mouse Recent studies utilizing the ST3T3 fibroblast cell line have shown that more than 70 genes are induced. The present inventor concluded that human peripheral blood T cells (II-1) This is consistent with research. As shown here, most of the induced genes are found in human fibroblasts. It is similarly expressed in both cells and lymphocytes. Such observations are arises primarily as a result of the complexity of the early immediate response to It suggests that it is not a thing. Rather, ubiquitously expressed activated genes are probably plays a role in maintaining cell metabolism, for example, priming cells for DNA synthesis. act out something. Among the inducible genes isolated from fibroblasts so far, we are particularly interested in The enticement is that some things are encoded by DNA-binding proteins. (Tl-7, ll-33, ll-40, 1+-43”), this is some early We support the hypothesis that phase-induced genes serve a polyphenotypic regulatory role. Two genes, the so-called E, are expressed in fibroblasts and lymphocytes. gr-1 (or NGF I-AA) and Krox20 bind DNA (+1 7, I+-3:l. I+-42, 11-43). Predict the structure of primary amino acids containing In addition to the large number of genes induced, following mitogenic stimulation of PB T cells, The diversity of kinetic patterns observed among induced genes is significant in their regularity. One common pattern of 0 expression (Table 1l-1) suggesting significant differences is c-f os (ll-34) and many genes induced in fibroblasts ( One possibility is that it shows a rapid and transitional appearance similar to Ill, 1l-31). Therefore, such genes are important for initiating the transition from GO to Gl during the cell cycle. It may play a role, and its continuous existence is not necessarily a different progression through G. slower onset and/or sustained onset that may not be needed for Other kinetic patterns indicating the and table l1l). Another piece of evidence for the diversification of regulatory groups in recent genetic studies is gene induction. These are the various effects of CSA during CSA is induced before or during the initiation of transcription C3 appears to interfere with gene expression (11-16), therefore, the inventors A-inhibitable genes may reflect regulatory motifs shared by these genes. However, it is expected that it will share the common activation components necessary for induction. In addition, predict There is no extensive list of this agent for most genes. 22) The effect is more than its immunosuppressive effect or suppression of only a few genes, such as IL-2. It makes me believe that it is due to the fact that A common feature observed in 70% of the induced genes studied was cyclohexyl There was a message level super guidance by Simid. In addition, cycloheximide In the presence of many transiently expressed genes, they showed increasingly sustained expression kinetics. Therefore, many inducible genes are dependent on regulatory mechanisms mediated by perturbatory proteins. Amenable to systems with maximum adaptability for regulation of intracellular message levels Seem. Cycloheximide blocks transcription and lowers mRNA levels in matr blast cells. There is evidence that it inhibits both the increase in degenerate enzymes in the regulation of inducible gene expression (11-1, 1 1-31). The gene subunits described here play a role in programmed cell growth. It will play a big role. Three proteins that are normally expressed only after mitogen activation Note the woody expression of the gene in Sherkat tumor cells ([]ll-3 and Table 1l-2). Expression of such genes is due to unregulated formation of cell lines derived from this tumor. You can contribute to the long term. Therefore, this chapter will focus on some known lymphokine/cytokine proteins. Similar to the characteristics of protein genes, ■ mRN induced early in cell activation. Isolation of cDNA clones of the present invention having mechanical and structural characteristics of A. explain. Publications 11-1. 　　　Almendo Yural, J.M. (Almendral, J, M,), D, Sommer , x one. McDonald-Bravo (H, Macdonald-Bravo), Je -. Burckhardt (J, Burckhardt), J., Perera (J, P errera) and R, Bravo, (198 8) Complexity of early genetic responses to growth factors in mouse fibroblastsComplete xity of the early generation Cresponse to growth factors in mouse fibroblasts) J. Mo1. Ce11. Bfol, 8:2140-2148II-2, Allo Alonsa, M. A. and Niss, M. Weissma. Weissman, S. M. (1987), on the differentiation of human T cells. Related MAL, hydrophobic protein cDNA cloning and sea fence (C DNA cloning and 5 sequences of MAL, a h hydrophobic protein associated with hu man T-cell different-iation) J, Pro c, Natl, Acad, Sci, USA 84:1997-20011 1-3. Avfv, H, and B. Leder (P, Leder), (1972), oligothymidylic acid- Biologically active globulin synthesis by chromatography on cellulose purification of biological ly active globin messenger RNA by ch romatography on oligothymidyfic acid -cellulose) J, Proc, Natl, Acad, Sci , USA 69:1408-1411-4. Bird, Bee, Earl, ( Burd, P, R,) + Gee, Joo. Freeman (G, J, Free an), Niss, D. Wilson (S, D. Wilson), xmu, Bell M, Berman, 7-Le, DeKruyff (R9DeKruyff) ,　　B, R. Billinges (P., R., BilBllin and M.E., Dolph (M.). B, Dorf), (1987), Cloning of a novel T cell activation gene. Cloning and character-iza tion of a novel T cell activation ge ne) J rJ, Immunol, 139:3126-313111-5. Cantrell, Dee, A. D, A, ) and K, A, Smith (K, A, Sm1th), (198 4) “Interleukin-2T cell line: a novel cell growth model (The 1nt erleukin-2T cell system: a new cell g rowth model) J, 5science 224:1312-13 1611-6. Chan, J, Y-. D, J, Slamon (D, J, Slamon), Nis, Dee. 2v - (S, D, Nimer) + Dee, Double, Golde (D . W., Golde) and Zhu. C., Gatson (J, C, Ga55on). (1986), regulation of human granulocyte/macrophage colony-stimulating factor expression ( Regulation of expression of human gr anulocyte/macrophage colony-stimulator ing factor) J, Proc, Natl, Acad, Sci , USA 83:8669-867311-7. 　　　　　　　　　　Chabria, B (Chavrier, P,) r M, Zerial (M, Zerial), B, Lemaire (P, Lemaire) + J, Almendo Jural ( J, Almendral) R, Bravo (R, Bravo) and Bi -, Charnay, P. (1988), Genes encoding proteins with fingers are GO/Gl in cultured cells. ) is activated during the transition (A gene encoding ap rotefn with zinc Lingers is activated d during GO/Gl transition fn culture d cells)”, E! M.B.O.J. 7:29-35 11-8. Chirgwfn, J.M. M, ), A, E, Przybyla (A, B, Przybyla), R , F, McDonald (R9F, McDonald) and W, J. -, W. J. Rutter, (1979). “Isolation of Biologically Active Ribonucleic Acids from Abundant Sources in Ribonucleases” (Isola tion of biologically active ribo-nuc leic Ac1d from 5 sources enriched in r ibonuclease) J, Biochem, 18:5294-52 9911-9. Christmas, Varnish, Yi, (Christmas, S . E, ), A, Meager and M, Mo ore), (1987), cloned human natural cytotoxic lymphocytes and Production of interferon and tumor necrosis factor by T cells n of 1nterferonand tum+or necrosis f actor by cloned human naturalcytotox ic lymphocytes and T cells) J, Cl1n , BIP. Immunol, 69:441-450II-10,:ff Charan, B. H, (Cochran, B. Ho), A, C1Reffel and C1Reffel. H, Steeles (C, H, 5tiles), (1983), r Blood Small Molecular cloning of the gene Seafens regulated by plate-inducible growth factors (M Olecular cloning of gene 5equences elated by platelet-derived growth factor) J, Ce1l 33:939-947II-11, Cole, M, D, (Cole, M, D,). (1986), rmyc oncogene: its role in transformation and differentiation ( The myc oncogene: its role intratransfo rmation and differentfation) J　Ann, Rev+Genetics 20:361-384II-12, Christopher Lo, vie, je. (Cristofalo, V, J,) and B, B, Shalev (B, B, 5harf), (1973), rCytoplasmic aging and DN A synthesis (Cellular 5enescence and DNA 5ynt hesfs) J + Bxp. Ce1l Res, 6:419-42711-13. 　　　Dublication M, S -, (Cuturi M, C,) *M, Murllh - (M, Murllh Y), M, B, Costa-Giomi (M, P, Costa-Giomi) + R, Weinmann (R, Weinmann), B, Bellussia (B, Perussfa) and Trinchieri, G. (1987) r Tumor necrosis factor and phosphorus by human peripheral blood lymphocytes Independent regulation of photoxin production on aftertumor necrosis factor and l ymphotoxfn production by human perip heraj blood Iymphocytes) J + J, Bxp, Me d, 165:1581-1594 It-14, Davis, M, M, (Davis, M, M,) + (19 86), r negative cDNA hybridization and T cell receptor gene (Su btractive cDNA hybrid-ization and th e T cell receptor genes) J + Handbook of axpertmer+tat 1mmunology, Blackwe ll 5 scientific Publications, 0xford, U nited Kingdom, 76:1-13II-15, Gersienfel T, H, K. (Gershenfeld, H, K,) and I, L, Eisman ( [, L. Wefssman), (1986), rcytotoxic T lymphocytes CDNA cloning for a T cell-specific serine protease from loning of a cDNA for a T cell-specific ic 5erine protease from a cytotoxfc Tlympbocyte) J, 5science 232:854-858 I! -16, Granelli-Piperno, Stingray, (Granelli-Pipern o, A,) r L, Andrus (L, Andrus) and R, M , Steinmann, R.M. (1986), “Stimulus Lymphokine and non-lymphokine mRNA concentrations in human T cells ( Lymphokine and nonlymphokine mRNA 1ev els in stimulated human Tcells) J, J, Bxp, Med, 168:922-93711-17. 　　　Green, Double 21, Sea, (Green. W, C, > and Duburi 21, Zhu. Leonard (W, J. Leonard), (1986) Human interleukin-2 Scepter (The human 1nterleukin-2receptor ) J. Ann, Rev. Immunol, 4:69-95IL-18, Gubler, :L-, (Gubler, U, ) and B, J, Roff. Mann CB, J. Hoffman), (1983). A simple and highly effective method for generating rcDNA libraries (Asi simple and very efficient method for ge nerating cDNA 1 libraries) J, Gene 25 :263-26ll-19, Birdy, Kay, Ji:r--, (Hardy, K , J, ). B, Manger, M, Newt. n) and ju. D, Stobo (J, D, 5tobo), (1987 ), during rT cell activation, molecular development is regulated human interferon gamma gene Contains child expression (Molecular events 1nvolved tnr egulating human 1nterferon gamma ge ne expression during T cell act fvation) J rJ, Immunol, 138:2353-23 58II-20, Hetrick, Nis, M. (Hedrfck, S.M. ), D, I, Kohen (D, 1. Cohen), E, E. Neeleman (B, A, N1elson) and M, M, Davis (M, M , DavtS), (1984), rT cell-specific seeding binding protein. IsolaHon of cDNA Isolation clones encodiB T cell-specific member ane-associated proteins) J, Nature 3 08:149-111-21. Hirano, T, (formerly rano, T) , Kay. Yasukawa (K, Yasukawa), H, Harada (H, Harada), Tee, Taga (T, Taga), Qui. Watanabe (Y, Watanab e), Tea, Matsuda (T, Matsuda) r Varnish, Kashiwamura (S, K ashiwamura), Kei, Nakajima (K, Nakajima), Kei, Koyama (K, Koyama), :x, I, Iwamat&+ ,), x, Tsunasawa (S, Tsunasawa), xfu, Sakyama ( P, Sa+, +yama), +T-ichi, Matsui (H, Matsuf), Lai. Takahara (Y, 'I　・kahara). Tea, Taniguchi (T, former Taniguc) and Tea, Kisimo) (T, K ishimoto) + (1986), r To make immunoglobulin For a novel human interleukin (BSF-2) that induces 8928 spheres of Complementary DNA for a novel human 1nterleukin (BSP-2) that 1nduc es B Iymphocytes to produce immunoglo bulin) J, Nature 324 Near 3-7611-22. 　　 Huynh, T, K+, (Huynh, T, V. ), R, A. Young and R. Davis, R.W. (1985). “Construction and scanning of cDNA libraries in lambda gtlO and lambda gtll” Cleaning (Constructing and screening c) DNA 1 libraries in lambda gtlOandlambd a gtll) J, DNA cloning: A pracNcal a pproach. D. Glover, (ed,) IRL Press, Oxford, Llni ted Kjngdom II-23, John Stra, Ji x-, (Jongstr a, J,), T, J, Shall (T, J, 5chall), B , Liu. Dyer (B, J, Dyer), Clay Berger (C, Clay) berger), J. J. Jorgensen (J. Mu. M, Davis (M, M, Davis) and A, M, Krensky ( A, M, Krensky), r Isolation of a novel gene of human functional T cell line and sea fence (The jsolation and 5equence of a novel gene from a human functi onal Tcell 1ine) J; J, E! x11. Med, 1 65:601-614II-24, Shun, Shi, Dia, (June, C , H,) Ryu, A, Ledbetter (J, A, Ledbetter), M. M, Gilesbie (M, M, G eyes 1 espie), Tee, Lintostin (T. Lindsten) and C.B. Thompson (C.B.). Thompson), (1987), rCD 2 T containing B pathway Cell proliferation is associated with cyclosporine resistance and interleukin-2 gene expression (T cell proHferation involving a CD2 8 pathway is associated with cyclosp orin-resjstant 1interleukfn-2gene exp reaction) J, Mo1. Ce11, Riol, 7:4472- 44811I-25, Kehrl, J.H. L, M, Wakefield (L, M, Wakefield) * A. Earl, Roberts (A, Rl Roberts), Nis, Jacorieu (S, J akowlew), +I+MU, Alvarezmon (M, Alvarez -Man), R, Derynck, xM, Be. Suborn (M, B, 5porn) and Ei, Nis, Fauci (A, S. Faucf), (1986), Transformation with human T lymphocytes Production of long factor beta and its potential role in regulating T cell growth (Pro duction of transforming growth facto r beta by human T lymphocytes and it s p. tential role fn the regulation of T cell growth) J rJ, IExp, Med, 163:10 37-1050II-26, Kelly, K. and knee. Siebenlist (U, 5iebenlist), (1986), r mark Regulation and expression of c-myc in sub- and malignant cells (The “egulatf”) on and expressian of c-myc fn normal and rnalignant cells) J Ann, Rev, Immunol, 4:317-438II-27, Kelley, Kay. ly, ni,), B, H, Cochran (B, H, Cochran) + C, D, Styles (C, D, 5tileS) and B, Leda - (P, Leder) + (1983), r-lymphocyte mitogen and platelet attraction. Cell-specific regulation of the c-myc gene by conducting growth factors fic regulation of the c-myc gene byI ytnphocyte tnitagens and platelet-de growth factor) J, Ce1l 35:603-6 10II-28, Kwon, B, S, (Kwon, B, S,) r. Nis, Kim (G, S, Kim) l M, B, Brystowski (M, B , Prystowski), Dee, W, Ranki (D, W, La ncki), Dee, E, Sabbath (D, B, 5abath), Ju. pa Pan, J. and Niss, M. and Weissman, S.M. Wetssman), (1987) + Various T lymphocyte subsets Isolation and first characterization of cDNA clones 1nitial characterization of multi-pl e 5pecies of T-1ymphocyte 5ubset cDN A clones) J. Proc, Natl, Acad, Sci, USA 84:2896-29 00II-29, Larsson, B, L. ), (1980), 92 people with cyclocedar and dexamethacin are the trigger It suppresses T cell responses by selectively acting at different sites of the method (Cycl osporin A and dexamethasone 5uppress T cell responses by 5electively act ing at distinct 5ites of the trigger ingprocess) J, J, rmmunol, 124:2828- 2833II-30, Lau, L, F, CLau; L, P, ) and D, Nathans (1985), r culture A group of genes expressed during the GO/Gl) transition in mouse cells Identification of genes xpressed during the Go/Gl transition ofcultured mouse cells)J, BMB OJ, 4 23145-31511I-31, Lau, El, F, (La u, L, P, ) and D, Nathans, (19 87), rBALB/c, an intermediate stage associated with growth in 3T3 cells. Expression of a group of genes: equivalent regulation in c-fos and c-myc (Bxpres sion of a set of growth-related imme diate early genes in BALB/c 3T3 　　cells:　　Coordtnate regulation　with c-fos and c-myc) J, Proc, Natl+Acad , Sci, USA 84:1182-1186II-32, Robbe, D. G, (Lobe, D, G,) r C, Haveel e) and R, C, Bleackley, (1988), specifically expressed in activated cytotoxic T lymphocytes. Cloning of two genes that are 5specifically expressed in activated cytotoxic T lymphocyt es) J, Proc, Natl, Acad, Sci, USA 83:1448-1452II-33, Millplant, G. ( Milbrandt, G., IL (1987), Genes that induce r nerve growth factor. The gene encodes a possible transcriptional regulator (A nerve-growth f actor-induced gene encodes a possible e transcriptional regulating factor) J, 5science 238 Near 97-799II-34, Muller, Art Le, (Muller, R,) + R, Bravo (R, Bravo) ,　　Jew. Burckhardt (J, Burckl+ardt) and T. , Curran, T. (1984), activation of re-myc. Induction of c-fos and protein by growth factors that occurs first n of c-fos gene and protein by grow h factors precedes activation of c-my c) J, Nature 312 Near 16-720II-35, Musterin , Tee, (Mustelin, T.). H, Bo (H, Po5o), Nis, B, Rabinjoki (S, P. Lapinjoki) + J, Gynther and E. L, C, Andersson (1987) , “Transduction of the Growth Code Covalent Oxygen During the Degradation of Niphosphatidylinositol” Rapid activity of lunitin decarboxylase (Growth signal tr ansduction: Rapid activation of coval entry bound ornithine decarboxylase during PhosphatidyHnositol breakdown ) J, Ce1149:171-176 II-36, Reed, J.W. C, (Reed, J, C,). Ju. D, Alpers (J, D, Alpers) T B, C , Nowell (P, C8Nowell) and R, G, Hope y - (R , G., Hoover), (1986), Standard Human Lymphocyte Level Sequential expression of protoulcer genes during promotion of cutin-stimulated cell division (Sequentia l expression of proto-oncogenes duri ng lectin-stimulated mitogenesfs ofn oral human lymphocytes) J, Proc, Na tl, Acad. Sci, USA 83:3982-3986II-37, Reed, J. . C, (Reed, J, C,) r A, H, Abidi (A, H, A bidi), ju. Dee. Alpers (J, D, Alpers), R.G., Hope 7- (R. G, Hoover), R, J, Robb and B . C., Nowell (1986) r interloy Cylosporin and dexamethacin in the expression of Kin2 receptor gene Effect of cylosporin A and dexame thasone on 1interleukin 2receptor gen e expression) J+J, Im+nuno1. 197:150- 1TI-38, Reed, Jew. C. (Reed, J.C.). Y, Tsujimoto (Y, Tsujimoto), Ju. Dee, Albers ( J, D, Alpers), C, M, Cross (C, M, Crose) ) and P. C. Nowell (1987) [ Regulation of bcl-2 proto-oncogene expression during normal human lymphocyte proliferation (R egulation of bcl-2proto-onncogene e xpression during nor+nal humanlym phocyte proliferation) J, 5science 236:1295-129ll-39, Reem, G. G, H,) r L, A, Tuck (L, A, Cook) and J. , Vflcek (J, Vflcek), (1983), r Cycloscegi 9 Gamma interferon in human thymocytes and T lymphocytes inhibited by Synthesis of Gamma 1nterferon 5synthesis byhum an thymocytes and T lymphocytes fnhi bited bycyclosporin A) J, 5science 22 1:63-65II-40, Ryder, K., - 1-6F, Lau (L, F, Lau) and Dee, Nathans (D, Na thanS), “Genes activated by growth factors are oncogene v-Jun related to (A gene vated by growth fact ors is related to the oncogene v-jun ) J, Proc, Natl, Acad, Sei, USA 85: 1487-14911I-41, Schmid, J. ) and C, Weissman, (1987) *r Serine protease and beta in mitogen-stimulated human leukocytes Induction of mRNA for thromboglobulin-like protein of mRNA for a 5erine protease and a beta-thromboglobulin-1ike proteinin mitogen-stimulated human 1 eukocytes) J. J, Immunol, 139:250-256II-42, Suhatme, V. , B. (Sukhatme, V. p, ), zs, Kartha (S, Kartha), F, G, Dopatsuk (P, G, Toback), RoC, Taub, R. G, Hope-r (R, G, Hoover) and C, Cy-Morris (C , Tsaf-Morrjs), (1987), r fibroblast, epithelial cell and a novel expression of growth response genes rapidly induced by lymphocyte mitogens ( A novel early growth response gene 　rapidly　　1nduced　by fibroblast, epithelfal cell and lymphocyte mitog ens) Jr Oncogene Res. 1:343-355 II-43, Sukhatme, Nis, Bee, (Sukhatme, S, P. ), X, Cao (X, Cao), x Le, Sea, Chat (L. C, Chang), C, H, Tsai-Morris (C, H, Tsai-M . rris), Dee, Stamenkovic (D, Stamenkovic) ). Bee, see, bee, Perreira (P, C, P, Perreira), Di ー、R、Cohe、n、x、ei、nidoward ( S, A, Bdwards), T, B, Sho wS), T, Curran, M, M, Shihiyu (M , M., Le Beau) and E. D., Adamson (B. D. Adamson), (1988), r during growth and differentiation, and After cell depolarization, zinc finger coding genes intersected with i11 in c-fos. Azinc finger-encoding gene coregu lated *ith c-fos durjng growth anddj fferentiation, and after cellular de polarizati. n) J, Ce11. 53:37-43II-44, Weiss, A. iss, A,), R, shield (R, 5 shields), M, =, - 1 (M, Newton), Bee, Mango (BlManger) and J, Imboden + (1987), r Interleukin 2: Ligand-receptor required to restrict gene activity - Interactions (Ligand-receptor 1 interactions) required forcommitment to the acti vation o, f the 1interleukin 2gene ) J, J, Immunol, 138:2169-2176II-45, Weiss, A. and Liu. B, Imboden (1987), r Cell surface molecules and early development are involved in human T lymphocyte activity (Cell 5 surface molecules and early events 1 nvalved in human T lymphocyte actjva tjon) J　Jr　Adv. Immunol, 41:1-38 IV-46, Young, Rye. C, (Yang, Y, C,) *Ei, Bee, rare shitta (A, B, C1arletta), Bee, A. Temple (P, A, Temple), M, B, Chat (M, P. Chung), xsu, Kovacic (S, Kovacic), Ryu . Witek-Giannotti (J, S, Witek-Giannotti) ). A, C, Leary (A, C, Leary), A Jk, Rir)') R, Kr1z), R, E, Donahue (R, f!, Donahue) . G, G, Wong (G, G, IIlong) and Nis, C. Clark (S, C, C1ark), (1986), r Human IL-3 = Identical results obtained by cloning the expression of a novel blood growth factor related to murine IL-3. Human IL-3 (Multi-CSF): Identificati on by expression cloning of a novel hematopoietjc growth factor relat ed to murine IL-3) J, Ce1l 47: 3-10IV-47, Yokota, T, (Yokota, T), Tee. Otsuriki (T, 0tsuka), Tea, Mosmann (T, Mosmann) . Ju. Banchereau (J, Banchereau), Tea, Defran DePrance (T.), Branchyard (D.). Blanchard), Ju. E, Debris: f-s (J, B, DeV ries), F, Lee (F, Lee) and Kei, Ai, Arai (K, 1 ．． Arai) + (1986) +' Expresses B cell and Ti cell stimulating activity Human interleukin cDNA clone homologous to mouse B cell stimulating factor 1 Isolation and characterization eye on of a human interleukin cDNA clo ne, homologous to mouse B-cellst imulation factor 1. that expresses B -cell and T-cell-stimulating ac mouth vitie s) J, Proc, Natl, Acad. Set, USA 83:5894-5898II-48, Yokota, T. (Yokota, T) R. L, Coffman (R, L, Coffman), xichi, Hagiwara (H0H agi*ara) r　D, M, Seek (D, M. Renn1ck), Y, Takebe (Y, Takebe), Kei, Yokota ( Ni, Yokota), x Le, Temple (L, Gemmell), Bee , Shrader (B, 5shrader), G, Yang (G, Yang ), Bee. Meyerson (P, Meyerson), Zhu. Luh (J, Luh), Bee, Hui (P,)toy), Ju. Pen (J, Pene), F, B Linire (P, Br1ere), xichi, Spitz (H, 5 pits), Ri U. Banchereau Tea - (J, Banchereau T,) + Ji U. E, De Vries (J, E, De Vries), F, D -, C (P, D, Lee), N, Araf (N, Araf) and K , Ai, Arai (K, [, Arai), (L 987), r mouse and lymph encoding human IgA-enhancing factor and eosinophil colony-stimulating factor activity. Isolation and characterization of phokine cDNA clones: relationship with interleukin 5 C1s. 1atjon and chara- cterjzation of lymphkfne cDNA clones encoding mouse and human IgA-enhancf ng factor andeosinophil colony-stimu Rating factor activities:Relationships p to 1nteleukin 5) J + Proc, Natl, Ac ad. Scj, tlSA 84 Near 388-7392II-49, Zuraski, G. (Zurawskf, G.), M. Benedik (M, Benedfk) + B, J, Kambu (13, J, Kamb), Ju. Nis, Abrams (J, S, Abrams), x x, M, Zurawsk (S, M, Zurawsk D and Frank De I. Prank D, Lee, (1986), rv us T Hell Par cell activity induces abundant preproenkephalin mRNA synthesis ( Activation of mouse T helper ceIIs ( nduces Abundant preproenkephalin mRNA A5ynthesis) J I 5science 232 near 72-775 fruit Experimental part III Mitogen-induced genes follow multiple regulatory pathways during the early stages of T cell activation. cormorant. transmission of mitogenic signals to T cells via any of several cell surface molecules delivery elicits diverse intracellular responses, some or all of which influence subsequent gene expression. Adjust current events. to assess the diversity of pathways regulating such genes. In addition, the expression of nine novel mitogen-inducible genes was observed in response to various T cell activators. was tested. Mitogens of separate second signals, individually or jointly. The relative contributions to stimulated gene induction and the differences arising from different cell surface structures. The ability of individual genes to respond to sometimes different signals is described here. Ru. Activation of T cells with mitogenic monoclonal antibodies 3 cell surface molecules or against all 9 genes induced with PHA. It is being Thus, drugs that are fully mitotic independent of cell surface binding properties Stimulation by fully mitogenic agents is studied here. It is associated with the expression of all genes that However, five types of regulation (re The unequal gene expression pattern encompassing PMA, calcium ionophore and anti-CD28 monoclonal antibody, a subset of intracellular events. t) and the use of drugs that only mediate these incomplete mitogenic signals. Therefore, it was clarified. IL-2 and two new lymphokins e) requires unique transcriptional activation signals for other mitogen-induced genes. It represents one type of adjustment that can be seen as essential. As shown in the experimental part above Furthermore, the rapid transcriptional response of T cells to mitogenic stimulation is quite complex and has been previously described. In addition, the gene bags of these nine species The distinction between some of the regulatory phenotypes is that the complexity of signal pathways is This suggests that it has spread to Bell. introduction The experimental part of the above includes the subsequent treatment of quiescent human peripheral blood (PB) with PHA and PMA. 60 derived from rapid early mRNA species that induce mitogenic activation of cells. The isolation of novel cDNA clones that are more than 100% different has been described. These data demonstrate that the initial biochemical response to stimuli delivered to T cells is highly complex. This suggests that it contains many directly induced genes. unique Different pathways mediated by a second signal are It is expected that the gene group of (large family) will be induced. actually , the key questions posed here are those elicited by those stimuli that lead to proliferation. related to the equality or inequality of induced gene responses. Cell cycle progression (cell Genes that play an essential role in cycle progression are , and are expressed unequally during any mitogenic response, independent of the initiator. expected. Furthermore, defining the potential regulatory types of induced genes is This is important in ultimately clarifying the regulatory characteristics of the types of This study investigated various mitogens known to affect different secondary signals. Induction of nine novel mitogen-inducible genes by use of comitogen and comitodiene drugs. Concerning detailed characterization of activation requests. These nine genes are available for further study. selected from the larger group listed in the section above for reasons of This is because their expression is restricted to lymphoid cells or, on the other hand, they exhibits interesting regulatory properties, such as inhibition of induction by the immunosuppressive drug cyclosporin A. It is from. Activating agents studied here CD2., which is a different and physically unrelated T cell surface molecule. CD3 or CD2 Monoclonal antibody (mAb) directed against 8, lectin phytohemaggluticone (l ectin phytohemagglutinin: PHA), calciu Calciumionophore, phorbor 12 -Myristate 13-acetate (PMA) and dioctanoylglycero Includes rule (I) tc'ri. The binding of the antigen or mAb to the T cell receptor or the associated CD3 complex of the T cell is Activation of T cells (11■-2, lll-18, lll-23) is initiated. P HA-mediated stimulation (PHA-mediated stimulation) surface loss mutants ( The antibody receptor complex or or coordinately expressed molecule cule). T including the CD2 complex (E rosette receptor) Antigen-independent pathway of cell activation hway) has also been described (ilil 9), a cell surface receptor on T cells. Binding of the above mitogen to inositol 1. 4. 5- Triphosphate production, increased intracellular calcium concentration ((Ca”i)), protein Membrane translocation of Kinner7C (PKC) nslocation) and subsequent proliferation (I[16, lll- 9, Ill-13, Ill-15, Ill-22, Ill-25). in contrast, Stimulation with anti-CD28 leads to an increase in cyclic GMP concentration, increasing (Ca”) PKC (11112, lll-14, lll-22, 1-26 ), the signal transmitted by CD28 does not activate CD2 or It seems to be fundamentally different from that of CD3. Furthermore, starting with CD28 IL-2 production was stimulated by CD3 or calcium ions and PMA. resistant to the effects of cyclosporine compared to that induced by (III-8) It is. Furthermore, anti-CD28 alone does not stimulate T cell proliferation, but eg PMA (Ill-7, Ill-8). T thin The cells also bypass cell surface interactions, allowing subsequent addition of PMA or DiC8. It can also be activated by treatment with calcium ionophore; the latter two The drug stimulates protein kinase C ([I[-16,11121)] More, less (also works in some cases). Ionophore-mediated (Ca”) increase is synergistic with DiC3 or PMA Induced gene expression in purified PB T cells and T cell lineage Several induced genes including lymphokines in Jurkat (Ill-16) Stimulates child expression. Cells were collected from normal healthy donors by leukocyte perfusion method (Ieukophoresfs). and PB lymphocytes were obtained by density gradient centrifugation through lymphocyte separation media. Adherent cells (monocytes and B cells) by separation followed by passage through a nylon wool column isolated by removal of . The resulting cells contained 1% B as determined by FAC3. It had cells and less than 1% hemisphere. T cells were obtained from 10% heat-inactivated bovine embryos. Cultured at 2X10'/ml in RPMI-1640 medium with serum and the following drugs: Agent: Anti-CD3 (mAb 0KT3. used at 10 ng/ml). 0rth o Diagnostics) ; PH used in 3 u g/m 1 A-P (Burrough, s-Wellcome); anti-CD2 (reference) Terll-19: anti-T112 and anti-T113 ascites, B, Re1nher each ascites was used at a dilution ratio of 1:200. Ta. Ability to stimulate peak proliferation of PBT cells or IL-2 production by Jurkat cells All reagents were titrated to determine the optimal concentration evaluated by biochemistry. During culture, Cloheximide (Sigma Chemical Co,) is loμg/ml used in The ability of each drug to stimulate proliferation is analyzed after 4 days! H-thymidine combination Measured by H-thymidine 1n corporation. Ta. In a typical experiment, the medium alone was used for 1. 003 cpm, 184,567 in PHA cpm, 107,908 cpm for anti-CD2 and 1,248 cpm for anti-CD3 cpm is shown. The lack of response to anti-CD3 in PB T cells is due to the same This is due to hemispheric loss, as unfractionated PBL from a person gives 127,760 cl)m. It is seen as. CD28+PB T cell culture and activation PB Approximately 80% of T cells are CD 28+ and thus ensure maximal response by responding CD28+ cells, Potential interactions of D28+ and CD28+ populations (popu]atons) To remove (interaction), CD28+ cells were purified as described above. (III-8). Cells were generally cultured as above (cultured at 1100 n/ml anti-CD 28 m A b 9, 3 (J, A, Ledbetter ), ionomycin at 133 nMm (Calbiochem; D dissolved in MSO) and 0. PHA at 3 ng/ml (Sigma Ch. emjcal Co, dissolved in DMSO) for 4 hours. Preliminary experiments showed that all genes were maximally induced at 4 hours. PMA thick of anti-C02B or ionomycin, which itself is not yet mitogenic. sH-thymidine incorporation (incorporated ration). The mitogenic activity of each drug was determined after 3 days of stimulation. Later sH-thymidine incorporation was analyzed. In a typical experiment, medium alone was used for 12 1 cpm, 488 cpm with PMA SmAb 9. 8 alone 236 cpm, mAb 9. 3 and PMA with 58,590 CI) III, ionomycin alone 186 cpm, 44. with ionomycin and PMA. 760 cpm and immobilized anti- CD3 showed 69,390 cpm. Jurkat cells Culture and activation of Jurkat cells: Jurkat cells were cultured with 2X1 fetal bovine serum. Maintained in RPMI-1640 medium at a density of 0'/ml to 8 x 1o/ml. I held it. Fresh aliquots of cells were allowed to remit for approximately 6 weeks. cells at 4×10’/m] , stimulated with one or more of the following agents: D i C3 (M olecular Probes, Inc., Bugen, OR; anhydrous ethano ), ionomycin at 500 nM, cyclohexyl at 10 μ/ml Shiimide. DiC3 and ionomycin concentrations are both Although it does not produce total IL-2, in order to maximize the synergistic effect between each other, Measured by IL-2 production assessed based on IL-2 dependent on cell lineage GTLL did. Northern (RNA plot) analysis: analysis of whole cells following culture between indicated time points. 5. Extract RNA with quinidine thiocyanate; 7M-CsC] (Summer 1l- It was purified by centrifugation through a cushion in step 3). RNA (XOμg/lane) were separated by electrophoresis in a formaldehyde-agarose gel, and the genetic script plotted on a thin membrane filter (NBN Re5search Product). , 1mp produced by WR by Nick Translatjon -Hybridized to a labeled purified cDNA insert. result In initial experiments, expression of nine novel mitogen-inducible genes was Tested on wool non-adherent T cells. Cells are shown at various times (i) OK Monoclonal antibody that binds to the non-polymorphic chain of T3゜CD3 complex (1): (ii ) A combination of two mAb mitogens directed against CD 2 molecules (III-19); and stimulated by fit PHA; steady state of nine genes. state)mRNA levels were measured. Figure 111-1 shows that for each gene, PHA, anti-CD2 and anti-CD3 stimulation This shows that the response results were similar. Relative levels of mRNA expression are low from highly inducible (pAT 229) to strongly inducible (pAT 464), etc. The hierarchy that can be laid out is the three types of mitogens. It can be seen that it also responds to deviations. PHA, or anti-CD2 or anti- - Two of the nine genes tested were strongly induced by any of the CD3 mAbs. (pAT 464. Figure 111-1: pAT 744. data is diagram (not shown) and two were induced to moderate levels (pAT 563. Figure 111-1 : pAT 120. data not shown), two were induced to low levels (p AT 416. Figure 11i1: pAT 237. data not shown), and three were weakly induced (pAT229, Figure 111-1: pAT1 54 and pAT 225, data not shown). top in the presence of PMA Stimulation with any of the listed mitogens is PHA, anti-CD2 or anti-CD3m. compared to Ab alone, leading to an enhanced response for all genes (data not shown) without). Furthermore, the kinetics of mRNA accumulation are unique for each gene. However, these dynamics are unique for each gene regardless of the stimulus used. are relatively homogeneous. To determine whether disruption of protein synthesis affects gene expression, cells were stimulated in the absence or presence of cycloheximide; previous studies The mRNA levels of many induced genes under these conditions (1114, 111-10, l ll-11). The relative effectiveness of cycloheximide addition to mitogenic drugs is determined by The magnitude of cycloheximide modulation of For each gene tested, although varying from not much to more than 10 times, was constant between different stimuli. The above results (summarized in Table 111-1) indicate that these novel genes are induced by mitogenic agents than those used in the production (experimental part II). It shows that you will be guided. Importantly, one of the antigen-binding receptors (CD3) Stimulation via mAbs bound to the chains of induce the present. Thus, T cells can Each gene in this panel of inducible genes, when activated by PHA or PHA, related to certain kinetic patterns and the drugs used to generate these signals. It shows a consistent expression level. Table 111-1: Mitosis in response to the drugs used in Figure 111-1-3 Summary of Northern blot data for gene-induced genes, symbols: +, mRNA hybridization to labeled probe; -1 non-hybridization; ten/- 1 Weak hybridization; Ab, DiC8- and discard of inomycin-mediated expression ( abrogation) ; I n c r r DiC8- and Innomy Increased levels of protein-mediated expression; ND, no experiments performed. to different cell surface receptors Despite binding, each of the above mitogens generates similar and rapid intracellular responses. Some or all of the 9 genes tested in round r-1 May require activation. However, the conditions used in this experiment were , since one of the three stimuli used did not result in proliferation. Expression of these nine genes is insufficient to initiate DNA synthesis. Furthermore, the induction requirements for nine types of genes are grouped into families. To ask whether highly purified T cells could produce different biochemical signals, stimulated with mitogenic drugs. These drugs include calcium ionophore, PKC activity active powder contains anti-CD28 mAb, all of which are purified T Does not stimulate intracellular DNA synthesis (III-8, lll-16, [1124 and (Reprinted in 1-26). In contrast, purified T cells contain calcium ionophores. or anti-CD28 mAb in combination with PMA (see Materials and Methods). After treatment, it proliferated. PMA, anti-CD28 mAb9. 3. Ionomycin, PMA+anti-CD28+ Robustness obtained by stimulating CD28+ T cells with PB and PMA+ionomycin Status mRNA levels are shown in Igrll-2. CD2 or CD3 As distinct from the natural stimulation, they are capable of inducing reactions from all nine mitogen-inducible genes. Activation through CD28 led to coded responses and revealed that nine novel genes were classified into different groups (Figure 111-2 and Table 111-1). pAT　 416 (Figure 111-2), pAT 120, pAT 1 54, one containing pAT 225 and pAT 229 (data not shown) The group showed no response to anti-CD28. This gene group is isolated from PMA alone. Although it shows variable responsiveness, the potentiation of PMA signal by anti-CD28 (pot entiaHon) was not observed in any case. CD4. CD8 or Stimulation with a control mAb that binds to CD45 results in robust state mRNA levels. did not affect the file. However, the robust state mRNA observed with PMA alone Levels were increased by co-stimulation of PHA and PMA (data not shown). No. In the 2 gene group, anti-CD28 responsiveness is associated with 4 genes (pAT 23 7 and pAT 464. Figure 111-2 + pAT 563 and pAT 744, data not shown) and IL-2 (I[i8, data not shown) ), mAb9. A synergistic effect was observed between 3 and PMA. PMA single Although unable to induce variable expression levels on its own, water-soluble or cross-linked mAb9 ．． No gene induction with 3 was observed in this group. In contrast, IL-2mR NA was not induced by PMA alone, but by PMA and mAb9. Synergistic combination of 3 induced in response to. All nine mitogen-inducible genes were immobilized with anti- in response to CD3 mAb (data not shown), in CD28+ PB T cells. A smaller amount of strictly purified PB T whose gene expression pattern is listed in the figure flit It was shown to be comparable to cells. These results extend the data shown in Figure 111-1 and also provide an alternative P B PHA, anti-CD2 or anti-C by using T cell activation means Nine mitogen-inducible genes, all responsive to D3-mediated signals, revealed that CD 28 groups that respond to inducing signals (in the presence of PMA) and (See Table 111-8.) . mAb9. 8 treatment-responsive genes such as CD28, CD3 and CD2- Any of the signals common to mediated activation can regulate some of these genes. or mAb9. 8 induces expression of some genes by alternative mechanisms Transmit new signals that are possible. Comitogen PMA and mAb9. 3 effect with other comitogen Ca fi4 To compare with ionophores, cells were incubated with ionophores in the absence or presence of PMA. Treated with isin. Interestingly, mAb9. Observed synergy between 3 and PMA Three of the four genes for ionomycin and PMA To exert a multiplicative effect (pAT　237. pAT　464. Figure 11! -2;p AT744, data not shown), and mAb9. 3 non-responsive genes are similarly Not affected by onomycin. mAb9. 3 is (Ca”) i (II I-24) is unknown. This means that pAT 563 is P differentially regulated by anti-CD28 and iomycin in the presence of MA (Table 111-3). Together with the observation that these two partially mitogenic drugs This suggests that the synergistic mechanisms are similarly different. Regulation of mitogen-inducible genes - To further define the family, the T-cell lineage Jerka Ionomycin and DiC8-mediated PKC activation in gene induction in cells. The separation and merging effects of were tested. DiC8 is PKC (IIr-5, +111 6, lll-17) to mimic the effects of endogenous DCs by reversibly activating It is a cell-permeable synthetic diacylglycerol (DG). Previous studies have shown that the above Eight of the nine mitogen-induced genes in resting T cells analyzed in , shown to be inducible in Jurkat with the combined addition of PHA and PMA. pAT568 is constitutively expressed at low levels (data not shown). Siku Ionomycin and/or D in the presence or absence of loheximide Treatment of Jurkat cells with iC8 allows three types of gene regulation to be defined. It shows. The first type discovered is shown by pAT 237 in Figure [113] It is represented by Contains genes that exhibit synergism or no synergism (pAT　237 ．． Figure 111-8: pAT 120. pAT 154. pAT　　22 5 and pAT 416° (data not shown). Regarding this type of gene, No response to nomycin alone was found. All of these genes are PB In cells, PMA-mediated KPC activation similarly induces P in Jurkat. The gene expression pattern in the MA response is expressed here as DiC8. (data not shown). The second type containing pAT 229 is KB C inducible and can be enhanced by the [Ca”)i signal. In this regard, pA T229 resembles IL-2R (data not shown), but pAT229 increased (Ca'◆). are different (Figure 111-3). The last type observed in these cells included pAT464 (data not shown) and and pAT　744 and IL-2 (Figure 111-3), and its induction is This experiment demonstrated the need for both signals evaluated. In addition, Jurkat cells The response of various genes in the inducing agent in the presence of cycloheximide was Additions that distinguish IL-2, pAT 464 and pAT 744 from other genes showed an additive correlation. Cycloheximide, especially added at the same time as the activator is completely IL-2, pAT744 (Figure 111-3) and pAT464mR Gene induction mechanisms that prevent NA accumulation and require newly synthesized proteins It means ism. In contrast, cycloheximide treatment (Fig. 1 [1-3, data not shown)]. discussion Signs differing in their ability to induce a panel of nine novel mitogen-inducible genes. The effects of the null pathway are summarized in Table 111-1. of the genes studied here Most show some degree of responsiveness to PKG activation alone. However, this signal Null indicates that PHA and anti-CD3 or anti-CD2 mAbs are present in PB T cells. All genes were evaluated because they enhance the effect of PMA (data not shown). Maximal responses were insufficient for any gene, whereas anti-CD28 and Omycin (Fig. 1112, data not shown) was combined with PMA in PBT cells. They exhibit synergistic effects for a subset of genes in the mesothorax. Clearance for each gene in response to PHA, anti-CD3 or anti-CD2 mAbs The homogeneity of expression patterns indicates that a qualitatively similar set of intracellular biochemical events This may reflect the fact that these drugs activate T cells. The common pattern of gene expression in response to various inducers is the result of a large number of signaling pathways. could potentially be mediated by Bell. At the level of signal generation, intracellular metsengers a similar group of genes occurs or alternatively transcription or post-transcription of these genes. A collection of molecules that transmit various signals in close proximity to their effect on the regulation of happen. There are distinct regulatory bases that control these genes. regulatory motifs have a positive effect on transcription. effect) but may be responsive to different signals. PB T cell response to stimulation with PHA or anti-CD3 and anti-CD2 mAbs Despite the apparent homogeneity of cellular responses, regulatory differences for inducible genes suggest that the system Signals related to those mentioned above (III-24) and anti-CD28 mAb. By probing with ionomycin, which appears to generate a subset of revealed, it is clear that it generates a different second signal (If■− 8,! fil　2. lll-14, lll-22, lll-26), iono The types of genes that are non-responsive to mycin and anti-CD28 (Table 111-1) are , is novel compared to most of the mitogen-induced genes in T cells. Sara by analyzing the effects of membrane-bypass stimulation in the Jurkat cell line. Heterogeneity was observed. Five types of regulation account for nine mitogen-induced genes. The fact that this relatively small group of T cell mitogens can be differentiated suggests that this T cell mitogenic stimulation illustrating the complexity of the regulatory mechanisms that operate at this stage. Gene induction requirements are generally parallel in resting T cells and Jurkat cells. However, differences were observed in the regulation of the genes comprising Particularly irritating cyclo In Jurkat, the addition of ximide resulted in pAT 464 and pAT 7. 44 and IL-2 (Figure 111-3, data are (not shown), but in PB T cells, the mRNA levels for these genes are slightly reduced. (Figure 10-1, data not shown). Second, ionomycin is PB Synergistic effect of PMA on increasing pAT 237 mRNA level in T cells , but not in Jurkat cells, whereas pAT 229 shows PB T It does not respond to ionomycin in cells, but it does in Jurkat. these The imbalance is due to the fact that PBT cells are unequal with respect to population subtypes. or in the basal activation state between quiescent non-transformed cells and circularized cancer cells. This may be due to differences in Apart from that, Jurkat cells consist of Specific regulatory components required for gene induction events may be abnormally over- or under-occurred. Not possible. This study shows that there are significant interactions in the regulation of pAT　464 and pAT　744. The relationship is shown together with that of IL-2. In fact, pAT 464 and pAT The DNA sequence of 744 includes a derived amino acid sequence indicating the leader peptide, and 1 This results in the conservation of amino acids at specific positions that are characteristic of lymphokinase species. child In addition to CD2 and CD3 in PB T cells, the type of regulation of genes in Two cells in Jurkat cells respond to signals mediated through 28. phenolics and their induction in Jurkat cells. It is completely abolished by ximide treatment. mRNA in Jurkat cells The requirement for protein synthesis to proceed with A induction is similar to that of many other mitogens studied here. Compared to gene-induced genes, this type of gene appears to be unique; On the one hand, it is most likely a novel conserved regulatory mechanism for these Other lymphokinases have been suggested. This chapter describes the gene activation mechanism underlying mitogenic stimulation of T cells. shows the use of the DNA5 of the present invention to elucidate the inflammation and/or or biochemical analysis for gene induction of early events in growth and repair. A specific example of the present invention including the following is shown. Publications 111-1. Borst, J., Varnish. Alexander (S, AIexander), Ju. Elder (J. Blder) and G, Terhorst + (19 83), The T8 complex on human T lymphocytes consists of four structurally different glycoproteins. (The T3 complex on human lymphocytes 1nvolves four 5structurally disNnctgl ycoproteins) J, J, Bio, Chem, 258:51 35,5141111-2. 　Chan, Tee, Double-L-, (Chan g. T, W,), B, C, Kung (P, C, Kung), xs, B . Gingras (S, P, Gjngras) and G, Boldstein (G, Goldstein), (1981), rOKT 3 monoclonal Do antibodies react with antigen recognition structures on human T cells? (Dose 0KT3 monoclonal antibody react wHh anant igen recognition 5structure on human T cells? )J, Proc, Natl, Acad, Scf, U SA 78:1805. 180811T-3, Chilgwyn, G.M. (Chirgwin, J, M,), A, E, Brizivilla (A, B , Przybyla). R, F, McDonald (R, F, McDonald) and W , W. J. Rutter, (1979). “Isolation of Biologically Active Ribonucleic Acids from Abundant Sources in Ribonucleases” (Isola tion of bjologfcally active ribo-nuc leic Ac1d from 5 sources enriched in r ibonuclease) J, Biochem, 18:5294-52 99III-4, Cochran, B. Ho), A, C, Reffel and C. H, Steeles (C, H, 5tiles), (1983), r Blood Small Molecular cloning of the gene Seafens regulated by plate-inducible growth factors (M Olecular cloning of gene 5equences Bulated by platelet-derived growth f act. r) J, Ce1l 33:939-947111-5. Davis, A Le, J z-, (Davfs, R, J. ), B, R, Ganong (B, R, Ganong), R, M. Bell (R, M, Be1l) and M, B, Zech (M, P-Czech) ) + (1985), rsn-1,2-dioctanonylglycerol. epidermal cells Effects of phorbol diester effects on growth factor receptors and cell division promotion Cell-permeable diacylglycerol (sn-1,2-Dioctano) nylglycerol, A cell-permeable diacyl glycerol that m1m1cs phorbol diester action on the epidermal growth fact or receptor and mitogenBis) J + J, Bi ol. Chera, 260:1562. 1566111-6. 　　　Farah, Dove Liu, L. (Farrar, W.L.) and F., W. Rusuti Etsuchi (F, W. Ru5cetti), (1986), Development of rIL2 receptors Relationship between protein kinase G activity (Assoc) and protein kinase G activity tein Kinase G activation with I L 2 receptor expression)” L J, [mmu nol, 136:1266-1273111-7. Hara, tea, (H ara, T,), varnish, M. Fu (S, M, Pu) and Zhu. A, Hanaen (J, A, Hana en) + (1985), rHuman T cell activity 11. 44 kilodalton polypeptide The main T cell population is A novel activation pathway used by Human T cell activators n Il, A renewal pathway used b y a major T cell population via a di sulfide bonded jimer of a 44 kilodaI ton 1) OIYpeptide (9,3antigen)) J, J, Bxo8Med. 161:1513-1524 111-8. Shun, G, H, (June, G, H,) + Shi x -, :L, L/Hoodter (J, A, Ledbetter), M. M, Gillesby-r- (M, M, G11lespie), T, Lindosti Lindsten, T. and Thompson, C.B. Thompson), (1987), rCD T-species containing 28 routes. Cell proliferation is associated with cyclosporine resistance and interleukin-2 gene expression ( T cell proliferation involvfng a CD2 8 pathway is associated with cyclosp orin-resistant 1interleukin-2gene exp reaction) J * Mo1, Ce11. Biol, 7:4472- 4481111-9. Shun, G, H, (June, G, H,) 1 J, A, Ledbetter (J, A, Ledbetter) r　B . Nis, Rabinovitch (P, S, Rabinovttch) A, Martin (P, J, Martfn), B, G, Betty (P, G) . Beatty) and Ju. A, Hansen (J.A., Hansen). (1986), r differentiation antigen cluster 2 (E rosette receptor) or human Calcium abduction and intracellular calcium activation after 3 (T!3) stimulation of lymphocytes. Distinct patterns of calci umu flux andfntracellular ealciumu obilization after differentiatfon an tigen cluster 2 (B rosette receptor) or 3 (T3) stimulation of human 1ya+ph ocytes) J*J, Cl1n, Invest, 77:1224 ．． 1232III-10, Kelly, K, (Kelly, K,), Bee. H, Cochran (B, H, Cochran), C, D. Styles (C, D, 5tiles) and Bea, Leder (P, Leder) ), (1983), c by lymphocyte mitogen and platelet-induced growth factor. Cell-specific regulation of the -m y c gene (Cell-specific reg ulation of the c-myc gene bylymphocy te mitogens and platelet-derived gro wthfactor) J, Ce1l 35:603-610III-11, Lau, L.F. and D.Na. (thans), (, 1985), Go/ of cultured mouse cells. Gl) Identification of a group of genes expressed during the transition ation of a set of genes expressed du ring the GO/Gl transition 0nof cultured mouse cells) J + BMBOJ, 4:3145-31511I I-12, Redpeter, Jew. A, (Ledbetter, J, A, ) + C, H, Shun (C, H, June), L. Varnish, Grossmaire (L, S, Grosmaire) and Bee, Varnish, Rabinovitch (P, S, Rabinovitch) + (1987) + “ Cross-linking of surface antigens produces activation of intracellular ionized calcium in T lymphocytes. Jiru (Cross-1 inking of 5 surface antigens Causes mobilization of 1ntracellula r phonized calcium in T lymphctes) J *Prac, Natl. Acad, Sci, USA 84:1384. 1388III-13, red Petter, Zhu. A, (Ledbetter, J, A,) + G , H, Shun (C, H, June), B. J, Martin (P, J, Martin) + G, E, Subhunah (G, B, 5pooner), Ju. A, Hans (J, A, Hans en) and K. B. Meier (1986) ), the valency of rCD3 binding and the internalization of CD3 cell surface complexes relative to the second code. Nibrothin kinase C1, which regulates the T cell response to Differences in curing and proliferation (Valency of CD3 binding) andjnternalizatfon of the CD3 cell 5 surface complex control T cell respo nses to 5econd sjgnals: +N5tincNon b etween effects on protein kinase C, c yt. Plasmic free calcfum, and proliferate ion) J, J. Immunol, 136:3945-3952III-14, Redpeter, Ju. A, (Ledbetter+J-A-)+M, Bursons, (M, Parsons) r　bee. Jew 9 Martin (P, J, Martin), Jew. A, Hansen ( J., A. Hansen) and B. Niss, Rabinovitch (P., S.). Rabinovitch, ) and C, H, June (1986), for rCD5 (Tp67) and Tp44 cell surface molecules. Antibody adhesion: Effects on cyclic niucretide, cytoplasmic free calcium and cAMP, mediated inhibition J, J, Immunol, 137:3299. 39 52211-15. Maino, buoy, sea 8. M, J. Heiman and M, Ju. Crimpton (1975), [Increase in phosphatidylinositol] ``The relationship between enhanced turnover and mitogen-induced lymphocyte activation''. Biochem, J, 146:247-252III-16, Munger, B. -9. Nie, Weiss, J, Imboden, Tee, Laing and Zhu. De E., Stobo (1987), labeled with rT cell antigen receptor combretus. The role of protein kinase C in transmembranes J, J, rmmunol, 139:2755-2760 III-17, Mei 5 double, varnish 2. E, Girabetina and B, Ga Trecasas (1986), Intracellular activation of r-protein kinase C and diacyl Regulation of surface transferrin receptors by glycerol is mediated by phosphatidylic acid is a spontaneous, reversible process associated with the rapid formation of J * Proc, Na tl, Acad, Sic, USA 83:1281-1284゜ lll-18, Muir, Nis, G1. G.G., Hodgdon, R. E., Hussey, J.E., B.B.Brotenzis, Niss, F., Schlossmann and I. -, L., Reinhertz (198t), rReceptors on human Tm follicles. Antigen-like effects of directed monoclonal antibodies J, J, Bxp, Med, 15 8:988-993゜III-19, Muir, Nis, G., R., E. Hussey, Em, Faby, Dee, Futx, Oh, Acute, K, Knee , Figgarardo, J.C., Hodgdon, J.U. bee, protentis, varnish . Schlossman, F. and Reinhardt, E.L. (1984) rT cell activity. Alternative pathway for oxidation: functional role". Ce1l　36:897-906 III-20, Moretsuta, Ni 1. Knee, bogey, dee, olive, gee, bo Cchino, G., Fortissey, Pantaleo and L., Moretsuta (1987). . “T-cell variants lacking molecules that involve T-cell activation (TIT). Selection and characterization of cellular receptors, T44 and Tl 1): in different activation pathways Analysis of the functional relationships of J, proc. Natl,^cad,soc,USA 84:1654-1658III-2 1, Nishizagyu, Y. (1984), r-cell surface signal transduction and tumor promotion. The role of protein kinases in J, Nature, 308:693-69 7III-22, Bantaleo, G5. Dee, Olive, Knee, Bogey, Dub Liu, J., Kuzumbo, L. Moretsuta and Nie, Moretsuta (1987), Tl1-dependence of human T cell activation. Transmembrane labeled via pathway. 1. 2-diacylglycero Facts on the inclusion of inositol and inositol phosphates J, Bur, J. Im+nono1. 17:55-60III-23, Site-, Tea and Art Le, F. Germain (1986) Development and selection of the rT cell repertoire. T cell recognition Insights from Molecular-Based Research”. [mmunological Reviews III-24, Tournai, Ny 1 ．． F, Albert. B., Jillstein and N.M., Schmidt V. erhulst, (19 85), synergy between calcium ionophore and phorbol esters Early stages of lymphocyte activation bypassed by use J, Nature 313:3 18. 320III-25, Vuis, Nee 1. J, Imboden, Dee. Schobak and G.I., Stobo (1984), “1 in human T cell activation. Role of 3 surface molecules: T-3 dependent activity brought about by increased cytosolic free calcium Sexualization J + Proce, Natl, Acad, Sci, USA 81: 4169-4173° 111-28. 　　　Vais, Ni, and Ju. Bee. Inboden, (1987), early stages including r cell surface particles and human T lymphocyte activity. Fact Jr Adv, IIIlmunol, 41:1゜38゜ Experiment part■ Mitogenic activation of human T cells involves structural similarities and a novel family of secreted factors. induces two closely related genes that have both The corresponding mRNA is induced by mitogen activation in human peripheral blood cells. Approximately 60 new cDNA clones have been previously isolated (see Experimental Section ①). Here Two clones, pAT46, encode novel lymphokines/cytokines. The primary structure and regulation of pAT744 and pAT744 have been described. Same as IL-2 In addition, both genes are linked to drug synergy, e.g. PHA and PM for optimal expression. A and, in addition, both inductions are sensitive to the immunosuppressant cyclosporine A. It is gender. Two genes are expressed in T cells, B cells and the promyeloid cell line HL60. however, it is not expressed in human fibroblasts. This means that those This shows that this phenomenon is limited to the hematopoietic lineage. With these two clones The predicted peptide encoded is a hydrophobic N-terminal leader unique to secreted proteins. shows the characteristics of The predicted sizes of both proteins are similar to the putative leader peptide. It is approximately 8 kD based on the cleavage of the DNA. With pAT464 and pAT744 DNA Transformed mammalian (COS) Jl cells are produced after the leader peptide is excised. , secreted a novel protein of the size expected from the cDNA sequence. pAT46 Rabbit antibodies raised against the predicted C-terminal amino acids of both pAT744 and pAT744 Serum contains products secreted from transformed CO3 cells and mitogenic activity. reacted with a product of the same size secreted by human peripheral blood cells. pAT464 and pAT744 are similar to each other and have some important differences. combined with significant amino acid sequence similarity and an emerging family of secreted factors. The factors include connective tissue activating factor III (CTAPI [[)], platelet factor 4 (P F4), interferon-gamma inducing factor (IP-10), macrophage Inflammatory protein (MIP) and neutrophil chemotactic factor (3-10C, MDN CF, NAF). Some of these factors are mechanisms associated with inflammatory responses. and/or have mitogenic activity. In summary, presented here The data presented indicate that pAT464 and pAT744 are novel lymphokines/cytogenes. the lymphokine/cytokine is structurally related to this It plays a role during immune responses similar to those caused by other factors. A cDNA clone derived from a gene substantially identical to pAT744 was derived from the above-mentioned plant. It was characterized by the experimental part. The clone is called Act-2. introduction There is a need to analyze the genetic program initiated upon activation of resting T cells. this eye more than 60 cells induced into human peripheral blood cells by mitogens for the purpose of The gene was isolated (see Experimental Section ■). Novel lymphokines may be encoded isolated genes to select those genes from this collection. The regulatory properties exhibited by known genes encoding factors were tested. Here The gene encompasses many regulatory properties and overall sensitivity to cyclosporine. Two cDNA clones, pAT464 and and I) the primary structure of AT744 is described. Their nucleotide sequences are Predict hydrophobic leader peptide properties of secreted proteins. Amino acid sequence similarity is , both genes mediate some type of inflammatory response and/or have mitogenic activity. Organization of a newly emerging family of small secreted proteins that appear to exhibit sex. Human peripheral blood cells, which are human blood cells, are collected from healthy human blood donors. ll) Linking on CS 3000 or IBM Cobe 2997 equipment Obtained by phophoresis. Blood enriched with lymphocytes is then passed through Ficoll Purified on Ibark gradient and nylon wool column. anti-CD These cell preparations contain >90% T cells, as judged by 8 staining. Human peripheral blood cells, Jurkat cells and HL60 cells, are always composed of 1 0% heat-inactivated calf serum, penicillin, streptomycin and gentama 2X10@cells/cells for human T cells in RPM11640 supplemented with icin. -1 or at a cell density of 5 x 106 cells/- for Jurkat cells, respectively. maintained. Cells are treated with the following drugs: Phytohemagglutinin CPHA-P Nibros phorbol 12-myristate 13-acetate, final concentration 1 μg/d (PMA) 20 n g/ml, cycloheximide 10 μg/d, and cycloheximide Treated with either one or a combination of Rosporin A 1 μg/−. Some parts are different cells were washed in RPM 11640, and whole cells were harvested at different times. NA was isolated. RNA isolation and Northern analysis Whole cell RNA was extracted with guanidinium isothiocyanate as described in ■-27. and 8 μg (human peripheral blood cells) or 10 μg (Jerka Separate whole cell RNA on formaldehyde agarose gel and subsequently nitrocellulose with 1oxssc (Schleicher The city was moved to New York, New York. Nick Translation and Hybridization Nick the cDNA insert translation (1'V-28) and 40% formaldehyde, 4X S.S.C. Hybridization at 42°C in 10% dextran sulfate and IXX Synlt solution It was used as a probe for this purpose. Hybridization for 10-18 hours After the reaction, the filters were washed at 60"C with a final strength of O, 1X5SC. Isolation of full-length cDNA clones Clones pAT464 and pAT744 were subtracted from the cDNA library. It was derived from Lee (Experimental section ■ above). Habo full-length cDNA clone is cyclo Human peripheral blood stimulated with PHA-P and PMA for 4,5 hours in the presence of heximide It was derived from RNA extracted from child cells. This cDNA library is ■- constructed using oligo dT brining as described in 29 and then (10 μg) into human placental DN cloned into lambda gtlO (IV-30). Digested with caRI, Ram)+7 or SSt[0. 8% agarose gel and transferred to a nitrocellulose filter. nick trance After hybridization, remove the filter from the inserted cDNA. o, final strength of 1xssc, washed at 55°C. Sequence analysis of cDNA clones The longest cDNA insert was cloned into M2S RF19 and sequenced. enzyme (UBS), dATP (α-5sS) and various oligonucleotides Sequenced by the dideoxy chain termination method (IV-31) using primer. Brimers for sequencing reactions are oligonucleotide synthases as 17mers. Supplier's Prototype with Sesizer Model 380A (Applied Biosystems) Synthesized according to Coll. All oligonucleotides are 20% acrylamide purified before use on a tube. Both the cDNA sequence and the predicted protein sequence are It was compared with the computer data bank (Bionet, Current Release). Brimer extension Oligonucleotide complementary to nucleotides 135-152 of the pAT744 sequence (Figure IV-4B) in PHA and PMA in the presence of cycloheximide for 4.5 hours. Annealed to 20 μg of RNA from stimulated human peripheral blood cells. Ani Annealing was performed in 100mM KCl, and the reverse transcription reaction was annealing. Reverse transcriptase (seiculase) was used to elongate the brimer (100 μg/d). The test was carried out as described in 1-29 using the following method. Equal amounts of pie grids of phenol/chloroform and then precipitated into ethanol. final reaction Products were analyzed on an 8% denaturing polyacrylamide gel. A DNA sequence ladder served as a size marker. Expression of cDNA clones in mammalian (CO3) cells CO8 cells were expressed using standard DEAE techniques. Using the Kytran methodology, the following vector DNA: CDM-8 (Masachu - Seb, Boston, Massachusetts General Hoss and Brian Brian Obtained from seeds; and B, 5eed. Nature 329, 840-842 (1987); or P MT2-T [Genetics Institute, Cambridge, Massachusetts] Obtained from Titute; Yu-Chung Yang et al., Ce1l 47 , 3-10 (1986). A cDNA Yakku clone inserted into either expression site is transfected. Isolation and regulation of two cDNA clones in T lymphocytes The approach is to identify genes that are induced simultaneously with mitogen stimulation of human peripheral blood cells. previously described (see Experimental Section ■) for isolation. Over 60 genes Isolated from a subtracted cDNA library highly enriched with derivatized sequences It was done. Following T cell stimulation, many, but not all, of these genes The substance is induced rapidly and temporarily within 30 minutes to 1 hour, and The level of induction was enhanced in the presence of the protein synthesis inhibitor cycloheximide. (See Experimental Section ① above in this specification). Expression of nine novel mitogen-induced genes The expression and regulation of these genes have been studied in more detail, and these genes have been linked to various T cell specificities. showed different responses to activators, clearly indicating different regulatory classes. It was. (See Experiment section ■ above). From this coleccidin cDNAs named pAT464 and pAT744 The two genes have regulatory properties and the IL-2 lymphokine gene (experimental part ■). It was also discovered that Similar to IL-2, these genes are highly purified Initiated with Inomycin and PMA for optimal expression in T cells The combined effect of these signals was absolutely necessary. Furthermore, pAT464 and mRNA for pAT744 is induced within 2 hours and at least 24 maintain, at high levels of time, dynamics different from those seen in the majority of isolated genes. (Experiment part ■) Given these regulatory characteristics, the two genes were further characterized. human peripheral Treatment of blood cell preparations with both PHA and PMA resulted in pAT464 and High levels of message for both pAT744 were obtained (Figure IV-1). PHA alone induced these genes, but to a lesser extent, and PM A alone had little or no effect (Figure ■-1). subordinate Therefore, even with incompletely purified T cell preparations, two signals are required for optimal expression. It was. Immunosuppressant cyclosporine increases PHA and PMA in blood T cells completely inhibited the induction of pAT464 and pAT744 (Figure IV-1). A similarly dramatic effect of this drug is known to occur with the IL-2 gene ( IV-32). As shown in Figure IV-1, the protein synthesis inhibitor cyclohexyl The presence of cymid did not appreciably change the level of derivatization during activation. To further examine the expression similarities between the two cDNA clones and the IL-2 gene, Therefore, their regulation was analyzed in the CDd+ helper cell line Jurkat. . The requirements for induction of IL-2 are well characterized in this tumor system ( IV-32, IV-33). As shown in Figure ■, pAT464 and pAT7 The induction dynamics and activation signals required for 44 have not been found in peripheral blood T cells. It was comparable to what was going on. Initially, the message for both genes is PHA and appear approximately 2 hours following stimulation with PMA, and their levels are at least 2 It was maintained for 4 hours. Second, PMA alone does not induce these genes; Since PHA alone induces only to a low extent, both PHA and PMA required for optimal stimulation of the species cDNA. Third, the ciclosporinians analyzed here pAT464 and pAT744 expression was stopped during the 24-hour stimulation period. I let it happen. Contrary to what was observed in peripheral blood T cells, activity in PHA and PMA Cycloheximide inclusion during oxidation caused a significant inhibition of expression. This is Cloheximide has two different activators, ionomycin and a synthetic diacylglyceride. This was the case when it was added together with lycerol DiC3 (experimental part ①). IL -2 genes are sensitive to similar inhibition by cycloheximide in Jurkat cells. (IV-32), these data indicate that IL-2, pAT464 and Figure 3 shows similarities in the regulation of pAT744 and pAT744. Cycloheximide is Jurkat In cells, it inhibits the message induction of these genes, but in peripheral blood T cells, The reason for the lack of inhibition is unknown. Induced immediately after Jurkat cell activation The protein appears to be required for root factor binding to the IL-2i11 nodal region. (IV-34, IV-35). Nucleotide sequences of AT464 and AT744 pAT464 and pAT7 The nucleotide sequence of a nearly full-length cDNA clone for 44 was determined (material (See Fees and Methods section). Sequencing strategy used, generated nucleos The sequence and predicted amino acids of the encoded protein are shown in pAT464 and Shown in Figures IV-3 and IV-4 for pAT744, respectively. Black clone pAT464 is 793 nucleotides long and clone pAT74 4 is 659 nucleotides long (including the EcoRI linker at the 5' end). hand). Since the mRNA will contain a longer poly-8 tail, both cDNA sites The sizes are 850 nucleotides (pAT464) and 750 nucleotides (pAT7). 44) shows good agreement with the estimated mRNA. Brimer extension analysis of pAT744 revealed that the isolated clone was an almost full-length cDNA. This confirmed that it represents A (Figure ■-5). Nucleotide 135 of pAT744 sequence -152 (Figure ■-4) as a reverse transcriptase primer. fragments of approximately 155 nucleotides in size (see Materials and Methods). (synthesized cDNA 138 nucleotides and primer 17 nucleotides) leotide). The most recent clone at the 5' end of the sequenced clone for pAT744. The first 7 nucleotides are f! Since it is derived from the coRI linker, the actual Approximately 10 nucleotides at the 5' end of the mRNA sequence are present in this cDNA clone. It can be concluded that it is lost. The first ATG of pAT464 and pAT744 are at positions 84 and 74, respectively. It is. In each case a reading frame of 92 amino acids follows. these readings The frame is the longest found in the two clones. Various for pAT744 A reading stop codon is located before the first ATG. Translation for both clones The nucleotide sequence surrounding the predicted start site of is derived from the known translation start site. (IV-36). These data are , strongly suggesting that both cDNAs encode a 92 amino acid peptide. do. 1) Hydrophilicity analysis of the predicted peptides for both AT464 and 744 shows that the secreted proteins A typical hydrophobic N-terminal region of protein signal peptides was revealed. S According to the criteria for gnal peptide cleavage (IV-37, IV-38), the leader sequence The first 23 amino acids of This will yield a mature secreted protein of 69 amino acids in size. Potential M series No glycosylation sites appear in any of the peptides. The 8′ untranslated regions of the two cloned genes contain various elements that may represent regulatory functions. include. ATTTA associated with instability of lymphokine message (IV-39) The motif (underlined in Figures ■-3 and IV-4) is derived from clone pA74. It appears four times in 64 and twice in clone pAT744. Furthermore, pAT7 44 and 464 are different m The octamer motif TTATTTAT (A TTTA motif). This element is located at position 527 of pAT464. and is located at position 526 of pAT744. Both cDNA clones are polyA PolyA addition signal preceding stretch (Figure IV-3. Boxed in IV-4 ). Sequence comparisons to pAT744 and 464 show significant at the nucleotide level Similarity (45%) and higher homology at the amino acid level (56%1 Figure IV- 6A) was shown. Besides common regulatory features, these two genes share a common ancestral may be derived from genes, and their encoded proteins are functional can play a role related to Higher amino acid similarity suggests conservation of function The encoded protein structure predicted from the reading frame in the cDNA clone (see also comparison with other proteins below). In particular, 2 The putative secreted parts of the two proteins show a high degree of similarity, while their N The terminal leader peptides have nothing in common other than hydrophobicity. Parent of two proteins Most aqueous plots can be superimposed and other their structural relationships (data not shown). The primary structure of the proteins encoded by pAT464 and 744 is that Many other proteins, some of which have been detected as secreted proteins shows a striking similarity to Some members of this family of proteins are was found to be associated with clinical response and mitogenicity (see Discussion section). ). In particular, this similarity extends to the four proteins present in all proteins of this family. is based on an almost identical arrangement of cysteine residues and one proline residue ( Figure ■~6B). These highly conserved amino acids are found in protein structures. considered to play an important role (see Discussion section). In addition to this conservation, many other amino acids are highly variable among the various members of this family. shared by. pAT464 and pAT744 themselves are more highly related families of genes To determine whether the genomic DNA is a member of these two genes, were investigated together. Human placental DNA was digested with various restriction enzymes and two residues were extracted. The gene was subjected to Southern analysis with a radioactive probe derived from the cDNA insert. It was done. The data in Figure IV, -7 shows different patterns for the two probes. proved to be a limited member of hybridizing fragments. clear pAT464 and 744, despite their striking similarities, are easily do not cross-hybridize with each other. This indicates that pAT464 and 74 subtractive with plasmid-derived cDNA probes created for 4. Previously demonstrated screening of cDNA phages isolated from was. The two clones do not contain repeated elements and contain closely related sequences. It can also be concluded that it does not belong to a large family. Single copy inheritance of genes children or belong to a small family of highly similar sequences. That is not Noh this time. Tissue and cell type specificity of expression pAT464 and 744 were resting or serum-stimulated as previously determined. Not expressed in normal human fibroblasts. Hematopoietic cells other than T cells are expressed here. analyzed for. Promyeloid HL60 cells are most commonly converted into macrophages or granulocytes. Can be terminally differentiated. Both pAT464 and pAT744 are present in undifferentiated 604iI+ cells. Although not expressed, both are induced by induction of differentiation into PMA-residing macrophages. (Figure IV-8A). In contrast, to differentiate HL60 cells into granulocytes No induction of these mRNAs occurred when DMSO was used. interesting Particularly, PMA transfers RNA for pAT464 and pAT744 to peripheral blood T. cells or Jurkat cells. Therefore, in HL60 cells The induction of these genes must be explained by the specific differentiation state of these cells. No. pAT464 and 744 were also induced in human B cells. stimulated In the small B cells of human tonsils, which are not However, mRNA for pAT744 could not be detected after stimulation with SAC. (Figure ■-8B), and mRNA for pAT464 was induced in SAC and Cycloheximide alone was clearly detectable (data not shown). difference In addition, various EBV-transformed B cell lines have shown that HTLVI is an antigen-specific T cell clone. The mRNAs of these genes were synthesized constitutively as transformed lawns. So Therefore, pATj64 and pAT744 can be used for several applications involving viral transformation. It can be activated in several ways and expressed by many different hematopoietic cells. As predicted from the expression DNA sequence of the secreted protein in CO3 cells (Fig. IV-9 and ■-10), pATJ84 or pAT744 cDNA CoS cells transformed with various expression vectors that encode protein products was found to be secreted. These proteins are manufactured and negative controls The appropriate expression vector construct is used for transfection, but not when the construct is used. It is secreted from cosm vesicles only when the body is stimulated. The novel protein is a well-known After transfection of the DNA construct using standard methods, the IIS system of the cells was visualized by fin labeling. The size of the protein product depends on the leader peptide This fits what would be expected from the cDNA sequence after the cDNA sequence has been excised. Antibodies against predicted amino acid sequences Both pAT464 and pAT744, as predicted by the cDNA sequences. A rabbit antiserum was raised against a synthetic peptide representing the C-terminal 12 amino acids of I set it. This involves chemically synthesizing peptides, linking them to a carrier (KLH), and of peptide immunology by injecting the carrier and peptide into rabbits. Performed according to standard methods. Figures IV-11A and B are for pAT744 peptide. Western PCR of two different rabbit antibodies (721 and 722) raised using Figures IV-12A and IV-B similarly show the use in lot testing. Two antibodies (719 and 720) against the 464 peptide are described. all In the case of Co transfected with various expression vector constructs, S cell supernatants were analyzed with antiserum. As is clear from the figure, appropriate secretion The factor was detected with antiserum from rabbits immunized with the synthetic peptide; Not detected in serum samples taken from the same rabbit prior to immunization with Ptide. It was. Therefore, these results are consistent with the prediction of both pAT464 and pAT744. Synthetic peptides derived from the measured protein sequences are conjugated to appropriate cDNA clones. raise antibodies against factors secreted by CO8 cells transformed with Show that. Figure mV-13 is in culture medium with PHA/PMA using anti-pAT464 antibody. A Western plot of supernatants from activated human T cell cells is shown. Antibodies are Detect secretions of appropriate size. Similar results were obtained with anti-pAT744 antibody. (data not shown). Therefore, human T cells are greatly stimulated by mitogens. As well as the amount of pAT464 and pT744 mRNA (see above), these It also did not produce the secreted form of the protein factor predicted from the cDNA sequence of the clone. Ru. Consideration The majority of genes inducible into T cells upon mitogen activation have been previously isolated. (See Experimental Section ■ above). This section contains two inducible genes, clone pAT484 (or pLD78, resulting in ) and the regulation and nucleotide sequence of pAT744. this These two genes are thought to encode novel lymphokines/cytokines. It will be done. The nucleotide sequence for each cDNA clone corresponds to the secreted protein. contains 92 encoded proteins that share a common N-terminal hydrophobic leader peptide. Predict quality. pAT464 and 744 are particularly important for their predicted secreted They are very similar in parts to each other. This suggests conservation of function. Both gene products also share important amino acid residues and a family of proteins. exist, but their functions are not or only partially understood: Some of these proteins have been detected as secreted factors (see below). pAT484 and pAT744 are not like IL-2 or gamma-IFN. has significant amino acid homology with several well-defined immunomodulatory factors. Although not, they have regulatory elements and these genes together. These resources Like the lymphokines, pAT464 and pAT744 are two-fold for optimal expression. inducible signals (e.g. PHA and PMA), which induce T cell cells to They appear 2 hours after stimulation of the cysts and are susceptible to the inhibitory effects of the immunosuppressant cyclosporin A. and their activation is in the presence of cycloheximide. completely inhibited in Jat T cells. Primary amino acid structure of proteins encoded by pAT464 and 744 shows significant homology with an emerging family of secreted factors. There are four homologous cysteine residues (see IV-23, IV-42, IV-43) and one protein residue. It is primarily based on phosphorus residues (boxed in Figure IV-6B). these of amino acids are found in all of the proteins shown here, and The tits are arranged in Figure IV-6B. cysteine gives a common structure It can be considered. One of the members of this family, β-thromboglobulin ( For the processed form of PBP (see below), these cysteines It was shown to form disulfide bonds (IV-44). from the amino terminal and cysteine] and 3 and cysteine 2 and 4 are such bonds. form. Besides completely conserved amino acids, many other residues are shared between various residues. It is. For example, the amino acid Trp Va I Gin (WVQ) (also WV) (boxed in Figure IV-6B) are four preserved systems. Six residues downstream from the end of the protein, it is found in eight factors. The remains listed in Figure ■-6B The genes can be further divided into two basic groups: the first two cysteines , adjacent to each other like Cys (C), or one amino acid like CXC. separated by a noic acid or located in one of two ways. This change and Consistently, the various positions are distinct amino acids that differ from one group or the other. Show superiority. Furthermore, regarding the ‘cc’ group, there is a conserved proline (Figure I The seventh residue following the boxed proline in V-8B is always Tyr ( Y), and the 9th residue preceding the 4th cysteine is Phe (F). , and the residue immediately following this last conserved cysteine is Ala (A) . In the 'cxc' group, the third and sixth residues following the conserved proline are 1ie (1) or Leu (L) and L or Val (V), respectively. , and directly connected to the fourth cysteine (the residue is always L. However, many At other sites, different types are possible, and the differences between these two genes blur the distinction. pAT464, pAT744 and all additional proteins listed in Figure IV-6B. Homology between proteins may indicate some conservation of function. Various of these factors expressed during or causes an inflammatory response and/or during an inflammatory response. It was found to exhibit functions consistent with the role. Some of the proteins also treatment and tissue repair, processes that may occur together with or following inflammation. act mitogenically. 3-toc (N-23) or monocyte attraction inducing neutrophil chemotactic factor (MDNCF) (IV-43) or neutrophil activating factor ( NAF) (IV-25) is a human factor that is chemotactic for granulocytes in vitro. (IV-24,]V-45°IV-46), in vitro or in vivo. Systemic injection rapidly induces granulocytes and local injection causes a skin reaction (I IV-46, IV-47). Inducible expression can be induced by drugs such as LPSS, IL-1 or is isolated by TNF (IV-24, IV-46) or ConA (IV-46). cells/macrophages and by staphylococcal entrotoxin. (IV-23). Macrophage inflammatory protein (MIP) It is a factor synthesized by LPS stimulation by macrophages (IV-22, IV -48). It involves neutrophil chemotaxis, causes some hydrogen peroxide production, and (IV-22, IV-48) leads to local inflammation when administered subcutaneously. Ip-1o (IV-21) is a form of tuberculin or γ-I FN (IV Interferon inducer expressed during delayed hypersensitivity response stimulated by -49) It is a guide protein question. It includes endothelial cells, hemispheres, fibroblasts and keratinocytes. can be expressed in a variety of cell types including cells (■-49. IV-50). Platelet factor 4 (PF-4) is released from α-granules into platelets during injury; and has chemotaxis toward monocytes, neutral range cells, and fibroblasts (IV-51, IV -52). Additional activities include collagenase inhibition (IV-53) and immunomodulatory effects (IV-53). 54). Platelets also contain platelet basic protein (PBP), β-thromboglobulin. (β-TG) and connective tissue activating peptide I [(CTAPI[I) (low affinity (also known as sex factor-4). The latter two, CTAP■ and β-TG has a continuous N-terminus of PBB as shown in Figure IV-6B. Represents the shinged form. CTAPI [[[[[[]] is a human dermal fibroblast (IV-55) It acts mitogenically on glycolysis, glycosaminoglycan synthesis, cA stimulates MP levels and release of blasminogen activator (IV-2 0, IV-56). β-TG is thought to be chemotactic for fibroblasts ( IV-51). The remaining factors above were all cloned based on inducible or differentiated expression. . RANTES (IV-42) and TC-3 (IV-57) are This is a T cell induction gene that has not yet been elucidated. The expression of both occurs within 1 hour of activation. Mouse TCA-3 mRNA (N-57) appearing within 1 day and human R Induced by antigen and mitogen along with ANTES mRNA (■-42) be done. Human H-Gro gene, mouse JE gene and chicken 9E3 gene are all expressed by fibroblasts. JE genes include serum and IL-1 Induced by various drugs in 3T3 cells (IV-58). The 9E3 gene is activated by transformation with Rous sarcoma virus, and is suppressed in growth-suppressed cells (IV-59). H-Gro gene is humus is the human equivalent of the Tar H-Gro gene, and its constitutive expression is a non-tumorigenic trait. Correlated with tumorigenic variants of Innies hamster fibroblasts (CHEF) (IV-26). Gro is transiently induced by serum in non-tumorigenic CHEF cells. This legacy Expression of the gene is clearly not sufficient for induction of the phenotype associated with tumorigenicity. do not have. Expression data for the genes discussed above may be associated with inflammation and/or tissue repair. This is consistent with the same role of mitogenicity in combination. This means that the various Inferences can be made from function, from the drugs that induce these genes, and from the cell types involved. discussed. Therefore, pAT464 and pAT744 are particularly useful for the pAT464 gene. It is likely that the offspring exhibits a human homologue of the mouse MIP gene, and therefore a similar function. are expected to demonstrate their abilities. Inflammation and injury treatment/tissue repair can be It is a very complex process involving cells. harmonious combination of functions of various cells This appears to be reflected in the large number of secreted factors required for communication between cells. . This family of genes that may be derived from one common ancestral gene is can work well to establish such networks. mediate inflammation and repair as shown for some members of this family (see above). (see ), individual factors may have multiple functions. These proteins are conserved Similarities may indicate interactions with conserved receptor elements. It was explained above Similarly, members of this family of proteins exhibit marked variations in tissue specificity. pA7484 and pAT744 are expressed on T cells and other hematopoietic cells However, it is not expressed in fibroblasts. This distinction between factors is based on activated details. The unique functions required during the immune response by cell type can be determined. In this section, some of the most preferred recombinant molecules of the invention (i.e. pAT744 or pAT464 DNA and D inserted into mammalian (e.g. C03) cells. Contains a mammalian expression vector (CDM-8 or PMT2-2) capable of expressing NA I have written things down. It is preferred that cells transformed with these DNAs predicted from the cDNA sequence after the leader peptide has been excised. The secretion of proteins of appropriate size by the cells is demonstrated. moreover , in this section, the peptides encoded by the DNA fragments of the present invention will be described. pAT744 or pAT464 lymphocytes containing the sequence of the peptide. Regarding the novel antibodies of the present invention that can specifically bind to cytokine/cytokine-like proteins explained. Publications T V -1, Reed, Jew. C, (Reed, J, C,) + Ju -. D, Alpers (J, D, AIpers), B, C, Nowe P, C, Nowell and R, G, Ho (over), (1986), lectin stimulation of standard human lymphocytes Sequential expression of proto-ulcer genes during promotion of sexual cell division (Sequential exp reaction of prot. oncogenes during 1ectin-8 mulated mi togenesjs of normal human] symphocytes ) J, Proc, Natl, Acad. S+j, USA 83:3982 TV-2, Green, Duburi 21, Sea, (Greene. W, C,) and double knee 9 ju. Leonard (W, J. Leonard), (1986), human interleukin-2 Scepter (The human jinterleukin-2 receptor ) J. Ann, Rev. Immunol, 4:69IV-3, Young, Soi. S -, (Yang, Y, C,) + A, B, Rare shitta (A, B, C1arletta), B, A. Temple (P, A, Temple), M, B, Chunk (M, P. Chung) + Varnish, Kovacic (S, Kovacic), Ryu -. Witek-Giannotti (J, S, Witek-Giannotti) ). A, C, Leary, R, K r1z), R, E, Donahue: L-(R, E, Donahue). G, G, Wong and Nis, C. Clark (S,C,C]ark), (1986), rhuman IL-3 : Expression cloning of a novel blood growth factor related to murine IL-3. Identificati (Human IL-3 (Mu)ti-CSP) on by expression cloning of a novel hematopoieNc growth factor related o murine IL-3) J, Ce1l 47:3 IV-4, Yokota, T, (Yokota, T), Tee. Otsuriki (T, 0tsuka), Tea, Mosmann (T, Mosmann) . Ju. Banchereau (J, Banchereau), Tea, Defran DePrance (T.), Branchyard (D.). Blanchard), Ju. E, de Vries (J, E, mouth eVrie) s) + F, C (P, Lee) and K, Ai, Arai (K, 1. A rai), (1986), expresses rB cell and T cell stimulating activity. Isolation of a human interleukin cDNA clone homologous to mouse B cell stimulating factor 1 and characterization (l5olaNon and characterization n of a human interleukin cDNA alone, homologous to mouse B-cell stimulator y factor 1. that expresses B-cell-andT-cell-stimulation activities) J, Proc. Natl., Acad. ScL USA 83:5894 IV-5, Yokota, T., R. L, Coffman (R, L, Coffman), xichi, Hagiwara (H, Hagiwara), D, M. Renn1ck (D, M. Renn1ck), Y, Takebe (Y, Takebe)! K, Yokota, L, Gemmell, B, Schlacey (B, 5hrader), G, Yang, B. Meyerson (P, Meyerson) + Ju. Luh (J, Luh), Bee, Hoy (P, Hoy), Ju. Pen (J, Pene) + F, Br1ere (P, Br1ere), H, Spitz (H, 5 pits), Liu. J, Banchereau, J, De Vries, P, D, Lee. F, Arai (N, Arai) and K, Ai, Araj (1987), RV mouse and human IgA enhancer and eosinophil colo. Isolation and characterization of lymphokine cDNA clones encoding knee-stimulating factor activity Characterization: Relationship with interleukin-5 andeosinophil colony-stimulating factor activities: Relationship IP to 1nteleukjn 5) J + Proc, Natl, Acad . Scj, USA 84 Near 388 IV-6, Hirano, T. (formerly rano, T), Kay. Yasukawa (K, Yasukawa), xichi, Harada (H, Harada), T, Taga (T, Taga), Soi. Watanabe (Y), T, Matsuda (T, Matsuda), xsu, Kashiwamura (S), Kei, Nakajima (K, Nakajima), Kei I, Koyama (K, Koyama), Ei, Iwamatsu (A, Iwamatsu), Nis, Tsunasawa (S, Tsunasawa), x Fu, Sakiyama (F, Sakiyama), xichi, Matsuj (H, Matsuj), Kui. Takaha La (Y, Takahara). T, Taniguchi (T, Taniguchi) and T, Kjshimoto (1986), A novel human interleukin (BSF-2) that induces B lymphocytes to make r-immunoglobulin. Complementary DNA for a novel human protein (BSP-2) that produces B lymphocytes to produce immunoglobulin ) J, Nature 324 Near 3IV-7, Wong, G. , G,) *J, +, Varnish, Litchiku (J, S, Witek), B, A, Te Temple (P, A, Temple), K, M, Wilkens (K, M, Wilkens) *-1-I, C, Leary (A, C, Leary), Di -. B, le') se', tburg (D, P, Luxenberg), varnish, varnish. Jones (S, S, Jones), E, L, Brown (B, L, Brown), R, M, Kay (R, M, Kay), E, C. All (B, C, 0rr), C, Shoemake (C, Shoemake), D, W, Golde (D, W, Golde), R, J. Kaufman (R, J, Kaufman), R, M, Hewick, R.M., Wang, B.A. and Wang, S.C. (1985), Human GM-C3F: Molecular Cloning of Complementary DNA. , and heaven Human GM-CSF: Molecular cloning of the com-plea+entery DNA and purHicaNon of the natural and recombinant protei ns) J, 5science 228:810IV-8, Dub M, C. (Cuturi M, C ,) R, M, Murphy, M, P, Costa-Giomj, R, Weinmann, B, Perussia, and G. , trin Cherry (G, Trjnchier+), (+987), r human end Independent regulation of tumor necrosis factor and lymphotoxin production by human blood lymphocytes ymphac ytes) J, J, Bxp, Med, 165:158] IV -9, Gurney, M, E, (Gurney, M, B, ), B, R, Abatov (B, R, AI) atoff), G, T, Sp. A (G, T, 5pear), M, J. Baumel (M, J. Baumel), Ju. B, Antal (J, P, Antal) - 7-m. Brown Bania (lJ, Brown Ban1a) and A, Tee. Reder (＾.T, Reder) + (1,986), r=Euroroy Neuroleukin: A lymphokine product of lectin-stimulated T cells J, 5science 234:574T V-10, Alonso, M., Alo. nsa, M, A, ) and Varnish, M. Wejssman, S., J. (1987), CDNA cloning and 5 sequences of MAL, a hydrophobic protein related to human T cell differentiation. Cited with human T -cell differen tion') J, Proc, Natl, Acad, Sci, USA 84:1997IV-11, Kwan, B, S, + Ji, Nis, Kim (G, S , Kim), M, Bi -, B. Prystowski, D. Dubry Yu, Ranki (D, W, Lanck i) + Dee, Yi, Sabbath (D, B, 5abath), Ju. Pan, J. and Weissman, S. M. (1987) Isolation and initial characterization of a diverse set of T lymphocyte cDNA clones. -ple 5pecies of T-lymphocyte 5ubset cDNA clones) J. Proc, Natl, Acad, Sci, USA 84:2896TV-12, Gersienfeld, H, K. (Gershenfeld, H.K.) and I.L., Weissman (1986), cDNA cloning for a T cell-specific serine protease from rcytotoxic T lymphocytes (Clond. (Lobe) , C, G, ) r C. Havele, C. and Bleackley, C. (1986), activated cytotoxicity 1 Cloning of two genes specifically expressed in 928 cells (CIonj B of two genes t bat are 5 pecjficial y expressed in activated cytotoxtc T lymphocytes) J, Proc. , Natl, Acad, Sci, USA 83:1448IV-14, Reed, Jew. (Reed, J-C1). A, H, Abidi (A, H, Abidi), Zhu. Dee. Alpers, J.D., R.G., Hoover, R.J., Robb and B. C., Nowell (1986) Cyclosporin A and Dexamethacyl in the expression of Kin2 receptor gene Effect of cyclosporin A and Clex amethasone on 1terleukin 2receptor gene expression J, J, Immunol, 137: 150IV-15, Granellivi Perno, A, (Granelli-Pjp perno, A,) l El, Andrus (L, Andrus) and R, M, Steinmann, (1986), [Lymphokine and nonlymphokine mRNA levels in stimulated human T cells. uman Tcells) J, J, Bxp , Med, 1963:922IV-16, Reem, G.A. Reem, G, R, zru, ei, tuck (L, ^, Cook) and Vilcek, J. (198g), gamma-inhibition of human thymocytes and T lymphocytes inhibited by cyclosporine A. Synthesis of terferon (Gamma 1nterferon 5ynthesis byhuman thymocytes and T lymphocytes 1inhibited bicyclosporjn A) J, 5cience 221:63IV -17, Rerold, K, C, (Rerold, Ni, C,), Dee, W, Ranki (D, W, Lanki), R. L, Moldwin (R, L, Moldwin) and F, W, Tsui Pitch, W. (1988), Immunosuppressive effects of cyclosporin on cloned T cells, J. Immunol, 136. :1315IV- 18, Deuel, T.F., P.S. Keim, M.Farmer and R.L. Heinrickson. )1einrikson) + (L977) + r Amino acid sequence of human platelet factor 4 (Amino acid 5 sequence of human platelet factor 4) J, Proc, Natl, Acad, Sci, USA 74: 2IV-19, Rolt, Ji! −、S - (Rolt, J, C0). M, E, Harris (M, E, Harr4s), A, M, Bolt (A, M, Holt), E, Lange (E, Lange), A, Renchen (A, Ren5chen) and Niss, Nissiaroski ( (1986) Characterization of human platelet basic protein, low-affinity precursor form of platelet factor 4, and beta-thromboglobulin. r fall of low- afHnity platelet factor 4 and beta-thromboglobulin) J, Biochemistry 25: 1988IV-20, Castor, C.W. W, Miller (J, W, former 11er) and D, E. Aialz, D. (1988), connective tissue activation PE. (CTAP-111), a growth factor primarily derived from human platelets (CTAP-II+). a major hvrnan platelet derived groyth factor) J rProc, Natl, Acad, Sci, USA 80 Near 65IV-21, Luster, A, D., June. C., Unkeless and J. V. Ravetch, (1985). Multi-interferons transduce early-response genes, including their cognate platelet proteins. Adjust while copying (Gamma-interferon transcription tional regulations an early-response gene homology to platelet protein) J , Nature (London) 315:672 TV-22, Davateljs, G. B, Tekamp-01son, Niss, D, Dlolpe, K, Hermsen, C, Luedke, C, Gallegos. ), Dee, Co1t (D, Co1t), Ju. Merryweather, J. and Cerami, A. (1988) Cloning and characterization of the murine macrophage inflammatory protein, cDNA for a novel monokine with inflammatory and chemical behavior properties ( CIoning and characterization of a cDNA formalin macrophage protein (VIP), novel monokine with inflamm Schmid, J., and C, Weissman, (1987) r r Serine proteases and beta-thromboglobulin-like proteins in mitogen-stimulated human leukocytes. Induction of mRNA for a 5erine protease and a beta-thromboglobulin-1 mitogen-stimulated human Ieukocytes) J rJ, Immunol, 139:2504IV-24,3 Shimla, T. (Yoshitnura , T, ), K, Matsushima, Nis, Tanaka (S, Tanaka). E, A, Robinson (B, A, Robinson), E, Abella (B, Appella), J, J, Oppenheim (J, J, Opp enheim) and E, Zhu. El, J. Leonard, (1987) Purification of neutrophil chemoqualitative factors derived from human monocytes with peptide sequences similar to those of other hosts' defensive cell divisions. -derived neutrophil chemotactic factor that has peptide 5equence 51m1larity t. other host defense cytokines) J + Proc, Natl. Acad, Scj, USA 84:9233IV-25, Waiz, A., Peveri, P., Aschauer, H. and Baggjolini, M. (1987). Purification and amino acid sequence of rNAF, a novel neutrophil activating factor produced from monocytes. Purification and acid sequence of NAP, a novel neutrophil-a activating factor produced by mono cytes) J + Bioe hem, Biophys, Res, Comm, 149Nia55I V-26, Anisowicz, A, . L, Bardwell and R, Sager, (1987), Transformed Chinese Hammus constitutive overexpression of a growth-regulated gene in transformedchines and human cells J., Proc., Natl. Aead, Scj, USA 84 Near 18BIV-27, Chilgwyn, Gie Chirgwin, J.M., A.B. Przybyla, R.F., MacDonald and W.J. , Rutter), (1979). "Isolation of biologically active ribonucleic acids from 5 sources enriched in rib onuclease" J, Bi oche+njstry 18:5294 IV-28, Ma: Athis , T, (Maniatis, T,) + E, E F, Fritsch (E, P, Pr1tsch), Zhu. Sambrook, J. (1982), Molecular Cloning J., Cold Spring Harbor Laboratory IV-29, Dove, N., (Gubler, U.) and B.J. -, Roffman, B. J. (1988). A simple and very efficient method for generating cDNA libraries J, Gene 25:262IV-30, Ruin, T., V4-30. ynh, T. V,). R, A, Young and R, W, DE. Davis, R.W. (1985) Construction and screening of cDNA libraries in lambda gtlo and lambda gtll. gtll, [n: DNA cloning: A praetical approach h. D, Glover, Eld, (!RL Press, Oxford, United Kfngdom) 9°IV-31, Sanger, F. (Sanger, P.), x S. Nicklen (S, N1cklen) r A, R. Coulson, A.R. (1977), DNA sequencing with chain-termination inhibitors, J + Proc, Natl, Acad, Sc. j, USA 74:5IV-12 , Weiss, A, (R, 5hjelds), M, New Newton (M, Newton), Bee, Mango (13, Manger) and J., Imboden (1987), Ligand receptors required to constrain the activity of the r-interleukin 2 gene. 138: 2169IV-88, Birdy, K. J.+, (Harfy, J.). Bee, Mango (B, Manger), xmu, -1-neen (M, New t. n) and Ju. D., Strobe (J, Mouth, 5trobo) + (1987), during activation of rT cells, molecular development is regulated by human interferon gamma gene. (Molecular events involved in regulating human interference during T cell activation) J. J, [mmunol, 138:2353IV-34, Shaw, J, B, (Shaw, J, P,) rB, J, Utz (P, J, Utz), De D, B, Durand, J, J, T (1988). "Identification of putative regulators of early T cell activation genes" J, 5 science 2412202IV-35, Brunwand, E. Mudaburu (Brunwand, IJ-W), A, G, Schmidt (A, G, Set+m1dt) and Nie, Siebenlist (1988), “Mitogen reaction of the interleukin-2 gene. Nuclear fact. Biol, Chem, , in press IV-16, :l Zack , M. (Kozak, M.) + (1987), 5'-unencoded 5'-encoded mesenger RNA of r69'a-promoting animals. An analysis of 5'-noncoff ng 5 sequences from 699 vertebrate to ssenger RNA5 J, Nucl, Ac1ds Res, 15: 8125IV-37,7run Van Heilne, G. (1985) ), , Signal 5 sequences, The 11mlts of variations J, J. Mo1. Biol, 184:99 IV-38, Phono Hefjne. G.), (1986), A new way to improve r-cipher sea fence splitting. A new method for predicting signal 5equence cleavage 5ites) J + Nucl, Ac1 ds Res. 14:4683 IV-39, Shaw, G., and R. Kamen (R, Kamen), (1986), r-selective mRNA degradation A conserved protein from the 3'-untranslated region of 0MC3F mRNA that mediates to U sequence (A conserved AU 5 sequence from the 3'-untranslated region of GMCSF mRNA me+Hates 5elective mRNA degree ation) J. Ce1l 46:659 IV-40, Caput, D. and Bee. Beutler (B), Hartog (K) . R, Thayer, varnish, brown shimmer (S. BrownShimmer) and Cerami (A, Cerami), (1 986), the 3'-translation of mRNA molecules that specify r-inflammatory mediators. Identification of common nucleotide sea fences in unidentified regions cation of a co+Imonnucleotide 5equen ce in the 3'-untraslated region. f　mRNA　molecules　specifying　inflamma tory mediators) J, Proc, Natl, Acad , Sci, USA 83:1670IV-41, Obar, K. u, ni,), -r-mu, Fukuda (M, Pukuda), xsu, Maeda (S, Maeda) and K. Shimada (1986) mRNA that can be induced in human tonsil lymphocytes by r tumor Cl motor A cDNA clone used to study d to 5tudy mRNA jnducible in hua+an tonsHlar lymphocytes by a tumor prom oter) J, J, Biochem, 99:IV-42, Sharuute ee, ji x-, (Schall, T, J. ), J. Jongstra, B. Liu. Dyer (B, J, Dyer), J. J. Jorgensen (J, Jor) gensen), CIayberger (C, CIayberger), 　xmu. M, David (M, M, Daνjs) and A, M, Krensky ( A, M, Krensky), (198B), rHuman Tm cell-specific The molecule is a member of a new gene family (A human T cell-speci fic molecule iB a metnber of a new g ene fatniIY) J, J, Immunol, 141+1018 IV-43,? Tsushima, Kei, (Matsushjma, K), Kei. Morishita (K, Morishita), Tea, Yoshimura (T, Yoshf) Mura), x-s, Love (S, Lavu), Soi. Kobayashi (Y, KobayashD, W, Lew, Yi, Apella ( B, Appella), H, F, Kung (H, F, Kung), E , Ju. Leonard (B, J, Leonard) and J, J. Oppenheim (J, J, Oppenheim), (1988), r Molecular cloning of human monocyte-induced neutrophil chemoqualitative factor (MDNCF) and Induction of MDNCF mRNA by interleukin 1 and tumor necrosis factor (IJ Olecular cloning of a human monocyte -derived neutrophil chemotactie fact or(MDNCP) and the 1ndduction of MDNCF 　mRNAby　1nterleukin　1　and　tumor　necr osis factor) J, J. Elxp, Med, 167:1883TV-44, Beg, G., Nis, (B egg, G, S, ), Dee, varnish, bella bar (mouth, S, Pepper) , Sea, Air. Chesterman (C,N) and E. F, Liu 0 Morgan (F,, 1 Morgan), (1978), r Complete covalent structure (Coa+plete) of human beta-thromboglopurin Covalent 5structure of human beta-th romboglobuljn) J　old ochemjstry　17:173 9IV-45, Yoshimura, T, (Yoshimura, T,), Kei, Matsu Shima (ni, Matsushima), J, J, Oppenheim (J, J, 0ppenheia+) and Yi, Jie, Leonard (B, J, Leo nard) + (1988), human blood monomers stimulated by r-ribopolysaccharides. Neutrophil chemoqualitative factor produced by leukocytes: portion from interleukin 1 characterization and isolation (Neutrophil chemotactic f actor produced by 1ipopolysaccharaid e (LPS)-stjmulated humanblood mon onuclear Ieukocytes:Partialcharacter rfzation and 5eparaNon from 1nte rleukin1 (IL-1)) J, J, Immunol, 1 39 Near 88IV-46, van Damme, J. J. ), J. van Beemen, J. Opdenakker (G, Opdenakker) and Ei, Biriala (A. B111iau), (1988), r Chemical characterization of neutrophils, skin reaction Characterized by a novel NH”-terminal sea fence with anti-inflammatory and granulocyte-promoting activity. human monokine (A novel, NOx-terminal 5equ ence-characterized human monoklne po scessing neutrophil chemotac mouth c, 5kjn -reactive, and granulocytosis-promot ing activity) J+J, Bxp, Med, 167:136 4IV-47, Peveri, B. (Peveri, P.), -7-i. Walz (A, Walz), Bee, Dewald (B, Dewald) and E Mu. Baggiolini, M. (1988), human. A novel neutrophil-activating factor produced by mononuclear phagocytes trophil-actjvating factor produced b y human mononuclear phagocytes) J, J, Bxp, Med, 167:1547IV-48, Wolpe, Nis, D. , (Wolpe, S., D.). G, Davatelis (G, Davatelis), B, Sherry (B. 5herry), B, Beutler (B, Beutler) r Dee, G, Re5se (D, G, Re5se), xichi, Tee, Shuen (H. T, Nguyen), + C, F, Rathan (C, F, Rathan), x, x, Lori -(S, P, Lowry) and A, Cerami (A, Cerami), (1988), r-macrophages are novel cells with inflammatory and neutrophil chemotactic properties. Macrophages secrete normal heparin-binding proteins (Macrophages 5ecre) tea novel heparin binding pr. tein with inflammatory and neutrophy l　chemokineticproperties)J,　J,Exp,M ed, 167:570IV-49, Kaplan, G. ,), xi. Dee, Luster (A, D, Lu5ter) + Gee, Hancock (G, Hancock) and Z, A, Co1n (Z, A, Co1n), ( (1987), gamma-interferon in the delayed immune response of human skin. Induced protein expression (The expression of a gam materferon-induced protein (IPIO) in delayed immune responses in human 5kin) J, J, Bxp, Med, 166:109BIV-50, Le Star, A, D, (Luster, ^, D. ) and J.V. Ravetch. (1987), r-gamma-interferon-induced cytokine biochemistry. Biochemical characterization f　a　gamma　]nterferon-inducible　5ytok ine (IP-10)) J, J, 8xp, Med, 166:1084IV -51, Senior, R, M, (Senior, R, M,), G, L, Griffin (G, L, Griffin) r Ju. Varnish, Huang (J, S, Huang), D, A, Waltz (D. A, Walz) and T, F, Duel (T, P, Deuel) + (1 983), platelet alpha granule protein chemotaxis for fibroblasts (C hemotactic activity of platelet alpha a granule proteins for Nbroblasts) J . J, Ce11. Bjol, 96:382IV-52, Osterman, D. G, (Ostermann, D, G,) + G, L, Griffi (G, L, Griffin), R, M, Sr. (R, M, 5e nior), E, T, Kaiser (B, T, Kaiser) and T. F, Duel (T, F. Deuel), (1982), carboxyl terminal of platelet factor 4 Tridecapeptide is a potent chemotactic agent for monocytes (the carboxyl -terminal tridecapeptida of platelet factor 4 is a potent chemotactic ag ent for ll1onocytes) J, Bjochem, Bio phys, Res, Coml11. 107:180IV-58, Hittoralpa -, Ji, -, (lit-Rarper, J,) + H, Wo hl) and Yi, Halber (8, Harper), (1978), rPlatelet factor 4: Collagenase inhibitor (Platelet Pactore) 4: An rnhibitor of collangenase) J, 5 science 199:9911V-54, Katz, I, R, (Kat z, 1. R3) rji, ju. Thorbecke (G, J, Thorbecke ) r M, K, Bell (M, K, Be1l), Jew. Z, In (J, Z, Yfn), Dee, Clark (D, C1arke) and M , M.B. Zucher (1986), r Blood Small Protease-induced immunomodulatory activity of plate factor 4 (Protease-fnd uced immunoregulatory activity of platelet factor 4) J, Proc, Nat l, Acad, Sci, USA 83:34911V-55, Mullen Bach, G, T, (Mullenbach, G, T,), x I, Tab Rizi (A, Tabrizi) r R, W, Bracha (R, W, Blacher) and Kay, Nis. Steimer (K, S, Steimer) + (1986), r combination Chemical synthesis and expression in yeast of genes encoding peptides that activate tissue 111 (Chemical 5 synthesis and expression n in yeast of a gene encoding connec tiveLisue activatfng peptide, III) J , J, Biol, Chem, 261 Near 19 IV-56, Ragsdale. C, G,), C, Duburi 21, Custer (C, W, Ca5tor) + De D. J. Roberts and K. R. K, R, Swarta, (1984), synovial fluid fibroblasts A connective tissue activation enzyme that induces the synthesis and secretion of plasminogen activity by cells. Petit I I I (Connective mouth 5sue activating Peptide III 1st nduc on of 5th synthesis a nd 5 creation of plasminogen activation r by 5ynovial fibroblasts) J, Arthri Eyes Rheum 27:663IV-57, Bird, Bee, Earl, (Bu rd + P, R,) r Gee, Joo. Freeman (G,, 1. Preeman) , xS, D, Wilson (S, D, Wi l5on) + M, B Le Mans (M, Berman) + R, DeKruyff ), B, R. Billinges (P, R, B 1ings) and M, E, Dolph (M. B, Dorf), (1987), Cloning of a novel T cell activation gene. Cloning and Characterization tion of a novel T cell ac vation gen e) J, J, Immunology 139:3126IV-58,l :l Rinse, Bee, Ji x-, (Rolljns, Bl. ), E., D., Morrison (B., D., and C.). D, Stiles (C, D, 5tiles), (1988), rJ It is induced by E1 platelet-induced growth factor and its product has cytokine-like properties. Cloning and expression of genes with sion of JB, a gene 1nducible by plat elet-d8riVed growth tractor and who product has cytokine-1jke property s) J, Proc, Natl. Acad, Sci, USA 85:3738TV-59, Sugano, Varnish, (S ugano, S, > r: r-mu, Y, stockl (IJ, Y, 5to eckle) and R, t (anafusa), (19 87), Transformation by Rous sarcoma virus promotes cell division Induces a novel gene homologous to the transformative platelet protein (Transformat jon by Raus sarcoma virus 4nduces a ovel gene witt+hom. 1ogy to a mitogenic platelet protein ) J, Ce1l 49: Background description and for the purpose of completing the specification of the invention. Therefore, published papers, patents, and previous patents that are recognized as identical in this specification1 1) Each of the applications referenced in the specification is herein incorporated by reference. The foregoing invention has been described in detail for purposes of clarity of understanding. various combinations It is also clear that the form and details of the combination do not depart from the scope of the invention. be. 2. c) Sc 41■■-hi1-■■expansion 1h PHA+PMAPBMC-〇 FIG, l-3 TTCCCCCCCCCCCCCCCCCCC (iccl:GAGCAC AGGA(:ACAOCTOGGTTCTCAAGCTTCU0 ccarfi construction area and eTTTAs! Small TGC^GAC^GTT^^^^^^ ^^Mu^^^^^^^^^ 711FfG, I-5 FIG.I-6 l-6Ba EcoRI Hindll XbalFIG, I-7 size separation Synthesis of second strand (DNA polymerase I) Cloning into λgtlO pAT 129 pAT133 ρAT602 pAT46 4FIG, In-3 ・-@ pAT 154 e @II @1IlpAT225INI@I @PA”416 FIG, n-4 FfG, I[l-1 pA7416　m　　　- 2・pAT464ra - - IL-2-- β2MGIi-- Fig.III-2 Stimulation stuff Ishin with ax Ionomycin 10 iC 8 hours (hr) 0 4 14 4 14 4 14 4pAT744 　　　　　　＠　. FfG, knee 3 =4. 5h--1-4. 5 toco [-1 龜・-pAT464 ,■Kaku-,,,pAT744 ,′,“””MA-■Drive E 1) AT tree FIG, bat 2 5°URORF 3°0RFIG, ff’5 (A) FIG, EI3(B) 100bp FIG, TX4 (A) OAATTeeCCTlaTT (TC enter A CefreT'C^G ding ct ae^GCCT-C^ff C^C entrance^^Ce CT division steec^CC entrance A Ding ＾Ce FIG, Engineering 4 (B) FIG, TsL-5 FIG, ff 6 (B) paTt44　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋＋＋ tcvtvtttt*tv ＾　＾　regt＊t　governmentlO　- paT a@I　　　　　　　　　　　　　　　　　　Q　V　S ＾＾L＾VL LeTN＾tcw6rt＾IS−−,,i−,’　　　　　　; international search report 1n+1 Tor Hibiki~++m+m^・----1 [#I#+--Neshi■ko('T)-+ ! ! ;llQ10%01

Claims

[Claims]

1. DNA fragments encoding human lymphokine/cytokine-like proteins a full-length clone of the Act-2 cDNA; and pAT744 cDNA clone translation products. A DNA fragment.

2. A recombinant DNA molecule comprising the DNA fragment according to claim 1 and a vector.

3. 3. Cultivation of cells transformed with the recombinant DNA molecule of claim 2.

4. A method for producing human lymphokine/cytokine-like proteins, the method comprising: The cell according to claim 3 is cultured under conditions such that the protein is produced, and the protein is produced. A production method comprising isolating protein.

5. A human lymphokine/sample comprising culturing the cell according to claim 4. A method for producing itkine-like protein, comprising; A production method in which the protein is secreted from the cell.

6. Human lymphokine/cytokine that can be produced by the production method according to claim 4 N-like protein.

7. Human lymphokine/cytokine that can be produced by the production method according to claim 5 N-like protein.

8. Contains amino acid sequences of human lymphokine/cytokine-like proteins An antibody induced by a peptide, comprising; The protein is a nearly full-length clone of the Act-2 cDNA and pAT. selected from the group consisting of translation products from 744 cDNA clones antibody.

9. i) placing the T cells under conditions that cause mitogenic activation; ii) isolating mRNA from said T cells; and iii) hybridizing to a DNA sample. Mycoding of genes for lymphokine/cytokine-like proteins by protein formation A bioassay comprising: quantifying the level of togen activation; The sample contains a DNA fragment contained in the DNA fragment according to claim 1. Yes.

10. i) obtaining the liquid in which the T cells were cultured; and ii) as claimed in claim 8. The level of lymphokine/cytokine-like proteins in humans is A bioassay that involves the step of quantifying

11. DNA encoding human lymphokine/cytokine-like proteins A fragment; the protein is a translational production of a cDNA clone of pAT744. A DNA fragment that is a substance.

12. A recombinant DNA molecule comprising the DNA fragment according to claim 11 and a vector.

13. 13. Cultivation of cells transformed with the recombinant DNA molecule of claim 12.

14. A method for producing human lymphokine/cytokine-like proteins, the method comprising: 14. Cultivating said cell according to claim 13 under conditions such that protein is produced and said A production method comprising isolating the protein.

15. A human lymphokine comprising culturing the cell according to claim 14. /A method for producing a cytokine-like protein, the method comprising; A production method in which the protein is secreted from the cell.

16. Human lymphokine/site that can be produced by the production method according to claim 14 Cain-like protein.

17. Human lymphokine/site that can be produced by the production method according to claim 15 Cain-like protein.

18. Contains amino acid sequences of human lymphokine/cytokine-like proteins. An antibody induced by a peptide comprising; The protein was selected from the translation products from the pAT744 cDNA clone. Antibodies that have been

19. DNA encoding human lymphokine/cytokine-like proteins a fragment; the protein is a translation product of any of the following cDNA clones; A DNA fragment selected from the group consisting of: [sequence is present]; and pAT 730.

20. A recombinant DNA molecule comprising the DNA fragment according to claim 19 and a vector.

21. 21. Cultivation of cells transformed with the recombinant DNA molecule of claim 20.

22. A method for producing human lymphokine/cytokine-like proteins, the method comprising: 22. Cultivating said cell according to claim 21 under conditions such that protein is produced and said A production method comprising isolating the protein.

23. A human lymphokine comprising culturing the cell according to claim 22. /A method for producing a cytokine-like protein, the method comprising; A production method in which the protein is secreted from the cell.

24. Human lymphokine/site that can be produced by the production method according to claim 22 Cain-like protein.

25. Human lymphokine/site that can be produced by the production method according to claim 23 Cain-like protein.

26. Contains amino acid sequences of human lymphokine/cytokine-like proteins. An antibody induced by a peptide comprising; The protein is from the group consisting of translation products of any of the following cDNA clones: Selected antibodies: [Sequence available] and pAT 7 30.

27. i) placing the T cells under conditions that cause mitogenic activation; ii) isolating mRNA from said T cells; and iii) hybridizing to a DNA sample. Mycoding of genes for lymphokine/cytokine-like proteins by protein formation A bioassay comprising: quantifying the level of togen activation; A biomolecule in which the sample contains a DNA fragment contained in the DNA fragment according to claim 19. Assay.

28. i) obtaining a liquid in which the T cells were cultured; and ii) according to claim 26. Levels of lymphokine/cytokine-like proteins in humans using the described antibodies A bioassay that involves the step of quantifying.