JPH03504331A - 新規なリンホカイン／サイトカイン遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ４、ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質の生産法であって、該タン パク質が生産されるような条件下で請求項３記載の該細胞を培養しそして該タン パク質を単離することを包含する生産法。 ５、請求項４に記載の該細胞を培養することを包含するヒトのリンホカイン／サ イトカイン様タンパク質の生産法であって； 該タンパク質が該細胞から分泌される生産法。 ６、Ｍ求項４に記載の生産法により製造できるヒトのリンホカイン／サイトカイ ン様タンパク質。 ７、請求項５に記載の生産法により製造できるヒトのリンホカイン／サイトカイ ン様タンパク質。 ８、ヒトのリンホカイン／サイト力イン様タンパク質のアミノ酸配列を包含する ペプチドにより誘導される抗体であって； 該タンパク質がＡｃｔ−２のｃＤＮＡのほぼ完全な長さのクローンおよびＩ）Ａ Ｔ　　７４４のｃＤＮＡのクローンからの翻訳生産物から成る群から選択されて いる抗体。 ９、ｉ）マイトジェン活性化を生起する条件下にＴ細胞を置き； ｉｉ）該Ｔ細胞からｍＲＮＡを単離し：そしてｆｆ１）　ＤＮＡ試料へのハイブ リッド形成によりリンホカイン／サイトカイン様タンパク質のための遺伝子のマ イトジェン活性化のレベルを定量する段階を包含するバイオアッセイであって； 該試料が請求項１記載のＤＮＡ断片に含有されるＤＮＡ断片を包含するバイオア ッセイ。 １０、ｉ）その中でＴ細胞を培養した液体を取得し；そして　ｈ）請求項８に記 載の抗体との反応によりヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質のレベ ルを定量する段階を包含するバイオアッセイ。 １１、ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質をコードしているＤＮＡ 断片であって；該タンパク質がｐＡＴ　　７４４のｃＤＮＡのクローンの翻訳生 産物であるＤＮＡ断片。 １２、請求項１１記載のＤＮＡ断片とベクターを包含する組換えＤＮＡ分子。 １３、請求項１２記載の該組換えＤＮＡ分子で形質転換された細胞の培養。 １４、ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質の生産法であって、該タ ンパク質が生産されるような条件下で請求項１３記載の該細胞を培養しそして該 タンパク質を単離することを包含する生産法。 １５、請求項１４に記載の該細胞を培養することを包含するヒトのリンホカイン ／サイトカイン様タンパク質の生産法であって； 該タンパク質が該細胞から分泌される生産法。 １６、請求項１４に記載の生産法により製造できるヒトのリンホカイン／サイト カイン様タンパク質。 １７、請求項１５に記載の生産法により製造できるヒトのリンホカイン／サイト カイン様タンパク質。 １８、ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質のアミノ酸配列を包含す るペプチドにより誘導される抗体であって； 該タンパク質がｐＡＴ　　７４４のｃＤＮＡのクローンからの翻訳生産物から選 択されている抗体。 １９、　　ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質をコードしているＤ ＮＡ断片であって；該タンパク質が下記のｃＤＮＡクローンのいずれかの翻訳生 産物から成る群から選択されているＤＮＡ断片：ｐＡＴ　　１２０；ｐＡＴ　　 １２５：ｐＡＴ　　１２７゜ｐＡＴ　　１２９；ｐＡＴ　　１３３；ｐＡＴ　　 １３９；ｐＡＴ　　１４０Ｓ；ｐＡＴ　　１４０Ｌ；ＰＡＴ　　１５４：ｐＡＴ 　　１５８；ｐＡＴ　　１８９；ｐＡＴ　　２０１；ｐＡＴ　　２０４；ｐＡＴ 　　２２５；ｐＡＴ　　２２９；ｐＡＴ　　２（２Ｓ；ｐＡＴ　　２３２Ｌ；ｐ ＡＴ　　２３７；ｐＡＴ　　　２３９；ｐＡＴ　　　２４３；ｐＡＴ　　　２７ ０；ｐＡＴ　　　２７６；ｐＡＴ　　　２８１；ｐＡＴ　　　３８３；ｐＡＴ　 　　４０２：ｐＡＴ　　　４０７．ｐＡＴ　　　４１６；ｐＡＴ　　　４２８； Ｉ）ＡＴ　　　４６６；ｐＡＴ　　　４７８；ｐＡＴ　　　４８３；ｐＡＴ　　 　４８５；　ｐ、ＡＴ　　　４９６；ｐＡＴ　　　５１８；ｐＡＴ　　　５４２ ；ｐＡＴ　　　５６３：ｐＡＴ　　　５９１．ｐＡＴ　　　５９４；ｐＡＴ　　 　６０３；ｐＡＴ　　６０７．ｐＡＴ　　６２０．およびｐＡＴ’　　７３０゜ ２０、請求項１９記載のＤＮＡ断片とベクターを包含する組換えＤＮＡ分子。 ２１、請求項２０記載の該組換えＤＮＡ分子で形質転換された細胞の培養。 ２２、ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質の生産法であって、該タ ンパク質が生産されるような条件下で請求項２１記載の該細胞を培養しそして該 タンパク質を単離することを包含する生産法。 ２３、請求項２２に記載の該細胞を培養することを包含するヒトのリンホカイン ／サイトカイン様タンパク質の生産法であって； 該タンパク質が該細胞から分泌される生産法。 ２４、請求項２２に記載の生産法により製造できるヒトのリンホカイン／サイト カイン様タンパク質。 ２５、請求項２３に記載の生産法により製造できるヒトのリンホカイン／サイト カイン様タンパク質。 ２６、ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質のアミノ酸配列を包含す るペプチドにより誘導される抗体であって； 該タンパク質が下記のｃＤＮＡクローンのいずれかの翻訳生産物から成る群から 選択されている抗体：ｐＡＴ　　１２０；ｐＡＴ　　１２５；ｐＡＴ　　１２７ ；ｐＡＴ　　１２９；ｐＡＴ　　１３３；ｐＡＴ　　１３９；ｐＡＴ　　１４０ ８；ｐＡＴ　　１４０Ｌ；ｐＡＴ　　１５４；１）ＡＴ　　１５８；ｐＡＴ　　 １８９；ｐＡＴ　　２０１゜ｐＡＴ　　２０４；ｐＡＴ　　２２５；ｐＡＴ　　 ２２９；ｐＡＴ　　２３２Ｓ；ｐＡＴ　　２８２Ｌ；ｐＡＴ　　２８７；ｐＡＴ 　　２！３９；ｐＡＴ　　２４３；ｐＡＴ　　２７０゜ｐＡＴ　　２７６；ｐＡ Ｔ　　２８１；ｐＡＴ　　ａｓ３；ｐＡＴ　　４０２：ｐＡＴ　　４０７；ｐＡ Ｔ　　４１６；ｐＡＴ　　４２８；ｐＡＴ　　４６６；ｐＡＴ　　４７８；ｐＡ Ｔ　　４８３；ｐＡＴ　　４８５；ｐＡＴ　　４９６；１）ＡＴ　　５１８；ｐ ＡＴ　　５４２：ｐＡＴ　　５６３；ｐＡＴ　　５９１：ｐＡＴ　　５９４；ｐ ＡＴ　　８０３；ｐＡＴ　　６０７；ｐＡＴ　　６２０；およびｐＡＴ　　７３ ０゜ ２７、ｉ）マイトジェン活性化を生起する条件下にＴ細胞を置き； ｉｉ）該Ｔ細胞からｍＲＮＡを単離し；そしてｍ）ＤＮＡ試料へのハイブリッド 形成によりリンホカイン／サイトカイン様タンパク質のための遺伝子のマイトジ ェン活性化のレベルを定量する段階を包含するバイオアッセイであって； 該試料が請求項１９記載のＤＮＡ断片に含有されるＤＮＡ断片を包含するバイオ アッセイ。 ２８、ｉ）その中でＴ細胞を培養した液体を取得し；そして　ｉｉ）請求項２６ に記載の抗体を使用してヒトのリンホカイン／サイト力イン様タンパク質のレベ ルを定量する段階を包含するバイオアッセイ。 明　　　細　　　書 新規なリンホカイン／サイト力イン遺伝子発明の分野 本発明は、免疫細胞のマイトジェン刺戟により活性化される遺伝子に、特に、リ ンホカインとサイトカインーを包含する分泌因子類に類似のポリペプチドをコー ドしている遺伝子に関する。本発明は、組換え細胞によるこのような免疫活性化 遺伝子の生産物の合成にも、そしてこれらの因子をコードしているＤＮＡの確認 とクローニングにより可能になったある種の新規の生産物の製造と使用にも関す る。 発明の背景 休止期の未分化の１９２３球は、特定の細胞の遺伝子の活性化により抗原とマイ トジェンの刺戟に対して応答し；この特定の遺伝子は、細胞増殖と分化表現型の 発現に至らしめる事象を調節していると考えられている。 活性化応答の部分として、Ｔ細胞は免疫反応に関与している多（の細胞の成長と 分化のために重要である多種、多数の因子を生産する。 更に特定すると、リンパ球の増殖とエフェクター機能は細胞表面受容体への抗体 ／マイトジェンおよびリンホカインの結合により調節される。 このような細胞外リガンドの結合は、細胞内生化学的事象のカスケードを生起し く下記の参考文献、実験の部ＩＩのＩ［−４４と１１−４５を参照）、このカス ケードは最終的には活性化に関連した成長と分化機能の発現のための遺伝子プロ グラムの発動をするに至る。 か（して、休止期のＴ細胞は、休止期細胞の活性化に続いて連続的に依存、指令 された転写事象を連続して行い、これはＤＮＡ合成の開始においては約２４時間 後に最高潮に達する。 それらの初期の速度論と初期のタンパク質合成への依存の欠如により限定されて いる、初期の遺伝子転写事象は、プロト−ガン遺伝子（ｐｒｏｏｎｃｏｇｅｎｅ ｓ）　（例えば、Ｃ−ｍｙｃおよびｃ−ｆｏｓ）、リンホカイン〔例えば、ＩＬ −２、γＩＮＦＳＧＭ−Ｃ３Ｆ　（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）〕 、および細細胞開面ンホカイン受容体ＣＩＬ−２受容体）（参照、ＩＩ−６、ｌ ｌ−９、ｌｌ−１２、ＩＩ−１７，１１−２７、■−３６、Ｉ［−４４）を包含 し、これらの全ては、Ｔ細胞の免疫応答の増殖および／または調節に重大な影響 を及ぼす。 すぐに誘導される遺伝子のあるものは、マイトジェン活性化に続（分子的事象の カスケードの発動そしてか（して調節における役目を担うと期待されている。 このような遺伝子は、腫瘍原事象の標的にも似ている。 例えば、多（のデータは、マイトジェン誘導性遺伝子のｃ−ｍｙｃが不適当に発 現された時に非調節の成長が起こると言う概念を支持している（ＩＩ〜１１．１ １−２６　’）。 現在、Ｔ細胞中で初期の誘導された遺伝子の限定数が記述されている。過去には 、Ｔ細胞中に誘導された遺伝子、例えばＩＬ−２とＩＬ−２受容体は、頻繁にそ れらがコードしているタンパク質を基礎にして確認されていた。しかし、Ｔ細胞 の転写応答は今まで報告されてきたより複雑であるようである（ＩＩ−２，１１ −４、ｌＩ−１５、ｌｌ−２３，１１−２８、Ｉｌ−３２、ｌｌ−４２）。従っ て、誘導遺伝子の最大数をクローニングすることにより、活性化に対するＴ細胞 の初期の応答を充分に特徴付ける必要があった。かくして、分化発現の特性に基 づいた、先入観のない取組が、新規の、マイトジェン誘導遺伝子をクローニング するのに要求された。 幾つかの理由のために、活性化を研究するためのモデルとしてヒトの末梢血（Ｐ Ｂ）Ｔ細胞がこの発明の発展に使用された。 第１に、ＰＢ　　Ｔ細胞は培地中の成長のために採取するのには選択されていな い根本的な休止期の細胞であって、それらはｉｎ　　ｖｉｔｒｏではポリクロー ナルに刺激され得る。 第２に、Ｔ細胞は、活性化により、免疫応答の進行中に重要な役目をするいろい ろな分化機能を発現する。例えば、新規のリンホカイン／サイト力インは誘導遺 伝子の一群内に包含されると期待されてもよいだろう；というのは、活性化に続 ＜ＰＢ　　Ｔ細胞の根本的機能は、最後に多数の生理的機能をもたらす溶解性因 子を分泌することだからである（ＩＩ−５、ＩＩ−６、ｌｌ−９、ｌｌ−１３） 。 第３に、活性化に対する遺伝子応答を研究することにおける重要な見方は、遺伝 子調節の機構を確認することである。 Ｔ細胞に作用する免疫抑制薬のシクロスポリンＡ（Ｃ３Ａ）の使用は、誘導遺伝 子の調節領域を初期に切断するための道具を提供する。Ｃ３Ａは、他の経路を無 傷にした侭、−個または数個の初期のＴ細胞の活性化の経路を破壊するように見 える（ＩＩ−１６，１１−２４、ＩＩ−２９）。 最終的に、Ｔ細胞系は、Ｔ細胞の発達と機能に関与していると考えられているい ろいろの異なった表面分子を通してメジエートする活性化の必要条件を破壊そし て対照するのを可能にする。 ヒト末梢血子細胞を、ＰＨＡ　（植物凝集素）とＰＭＡ（ホルボールミリステー トアセテート）のマイトジェン組み合わせで処理することは、ｉｎ　　ｖｉｖｏ における抗原と抗原提示細胞の効果を疑似しているように見える。 この２種の薬剤は、細胞周期を通ずる進行に重要である遺伝子の発現を誘導する ので知られており；これら遺伝子はｃ−ｆｏｓおよびＣ−ｍｙｃのガン遺伝子（ オンコゲン）、ＩＬ−２成長因子遺伝子およびＩＬ−２受容体遺伝子を包含する （参照、下記の実験の部ＩＶ中の文献、［Ｖ−１、ＩＶ−２）。ＩＬ−２に加え て、この方法でＴ細胞は多数のリンホカイン／サイト力インを生成しこれら力イ ン類はいろいろの細胞に影響を及ぼす。 これら力イン類は、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−６、ＧＭ−Ｃ３ Ｆ　（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）、γＩＮＦ（ガンマ−インター フェロ：／）、ＴＮＦ（腫瘍壊死因子）およびＬＴ　（ＩＶ−３−ＩＶ−９）お よびよくは定義されていない他の若干数（ＩＶ−１０−Ｉｖ−１３）のような因 子を包含する。 このような因子の若干数は、Ｔ細胞中の特定の調節機構の支配下にあるかも知れ ない；というのは、免疫抑制薬のシクロスポリン八がそれらの活性化を破壊する ように見えるからである。 上述したように、この薬はＴ細胞の活性化の初期相の間に作用し、ＩＬ−２、Ｉ 　Ｌ　−３、およびγ−インターフェロンの生産を阻害する（ＩＶ−１４−［Ｖ −１７）。この阻害作用は特異的である；というのは、ｃ−ｆｏｓおよびＨ３Ｐ のような他の誘導遺伝子が影響を受けないからである（ＩＶ−１５）。 本発明は、小さい、分泌型のタンパク質の新規に出現する一群と類似しているア ミノ酸配列をコードしているＤＮＡ断片に関する（実験の部ＩＶのＩＶ−６図を 参照）。 この構造的に類似している一群は、血小板因子４　（ＰＦ−４）（ＩＶ−１，８ ）、血小板基本因子（ＰＢＰ）とそのプロセスド型（ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ　ｆｏ ｒｍ）のβ−スロムボグロプリン（β−ＴＧ）と結合組織活性化ペプチド［、Ｉ Ｉ　　（ＣＴＡＰ）（ＩＶ−１９、ＩＶ−２０）、ガンマイン９’−７ｚロン誘 導タンパク質（ＩＰ−１０）（［Ｖ−２１）、マクロファージ炎症性タンパク質 （ＭＩＰ）（ＩＶ−２２）、好中球走化性因子［３−１０Ｃ，ＭＤＮＣＦ　（単 細胞誘導好中球走化性因子）、ＮＡＦ（好中球活性化因子）コ（ＩＶ−２３、Ｉ Ｖ−２４、ＩＶ−２５）、および繊維芽細胞により生産される因子、ヒトの成長 に関連するタンパク質（Ｈ−ｇｒｏ）（ＩＶ−２６）を包含する。これが決めら れる範囲内では、この一群員はある種の炎症応答および／またはマイトジェン活 性をメジエートするように見える。 炎症および傷害−回復／組織修復は、多（の異なる細胞を巻き込む非常に複雑な 過程である。いろいろな細胞の機能の協調は、細胞間を連絡するのに必要とされ るいろいろな分泌因子の多数で反復しているように見える。 一つの共通の起源的遺伝子から誘導されたかも知れないこの遺伝子の一群は、こ のような協調関係を確立するのによく機能しているかも知れない。 炎症と修復をメジエートするために、この一群の若干数のために示したように、 各々の因子は多数の機能を持っているのであろう（下記参照、実験の部［Ｖ、サ ブセクションの議論）。これらのタンパク質の間で保持されている機能は、保持 されている受容体素子との相互関係を示しているだろう。上述したように、この タンパク質の一群員は、組織の特異性の顕著な多様性をはっきりと示している。 因子間の区別は、活性化される細胞型に依存する免疫反応が進行する間に要求さ れる特異的な機能を決めるであろう。 炎症の、そして炎症と共にもしくは炎症に続いて起こるかも知れない傷害回復と 組織修復の過程の複雑さから見て；炎症の機構に関する知識と分析法の改善を可 能にする方法、組成物およびバイオアッセイに対する需要；そして最終的にはそ れらに包含される新規の診断法と治療法に対する需要があったことは明瞭である 。 本発明は、このような需要を満たすための、並びに炎症と細胞成長過程に関係し ているように見え、かつ他の方法では生産できなかったある種のタンパク質因子 の生産手段を開発するための組換えＤＮＡ技術の適用法も考慮しである。本発明 は、炎症と回復過程に関連するこれらの因子の分子機構の適用も考慮しである。 発明の概観 本発明は、その他のタンパク質因子を含まない新規のリンホカイン様またはサイ ト力イン様のタンパク質の生産を包含する組換えＤＮＡ技術の開発に関する。新 規のＤＮＡ断片、ＲＮＡ、およびバイオアッセイ法も包含する。 特に、本発明は、部分的に、Ｔ細胞で誘導されるリンホカイン／サイトカインに 関するような分子の、構造的および／または機能的特徴を持つｍＲＮＡおよび／ またはタンパク質をコードするＤＮＡ断片に関する。 これらのタンパク質の特徴的な基は、分泌型タンパク質の嫌水性のＮ−末端リー ダーもしくはシグナルペプチドの特徴を持ち、仮定的リーダーペプチドが切断し た後で約８ｋＤ（キロダルトン）の予想される大きさを持ち、そして炎症応答に 伴って機能を発揮することおよび／またはマイトジェン活性を持つことが示され ている分泌型因子の新しく出現する一群と同じ重要なアミノ酸配列も持つ。 本発明の一つの実施態様の実施においては、これらのＤＮＡ断片は適当な宿主で 発現させることができ、この宿主によりリンホカイン様またはサイト力イン様タ ンパク質を生産する。本発明は、この発明のＤＮＡ断片のセンス鎖（ｓｅｎｓｅ 　５ｔｒａｎｄ）の転写の結果生産されるｍＲＮＡにも関係する。本発明は、更 に、いろいろなマイトジェン成分の、本発明のＤ　Ｎ　Ａ断片に関係する遺伝子 から生産されるｍＲＮＡとタンパク質のヒト細胞内における発現に与える影響を 定量するための新規のバイオアッセイ法も包含する。 基本的な実施態様では、本発明はリンホカイン様つまたはサイト力イン様タンパ ク質をコードするＤＮＡ断片を包含するものであって；それらＤＮＡは下記のＤ ＮＡから成る群から選択される・ Ａｃｔ−２［例えば、活性化した末梢血単核細胞（ＰＢ　Ｍ　Ｃ）のｍＲＮＡ、 Ｎｏ、２のほぼ完全な長さく一〇、７ｋｂ）のｃＤＮＡクローン；以下、「完全 な長さのＡｃｔ−２」という。」　：活性化したＴ細胞のｍＲＮＡのヒトのｃＤ ＮＡクローン、ｐａＴ　　７４４およびＰＡＴ　　４６４．並びに上述のヒトＤ ＮＡ断片の何れかへのハイブリッド形成により検出できる関連ＤＮＡ断片であっ て、その関連断片が関連しているリンホカイン様またはサイト力イン様タンパク 質をコードしている断片。 他の実施態様では、この発明は、本発明のＤＮＡのＲＮ人転写に関係する。これ らのＲＮＡ転写物がコードしたリンホカイン様またはサイト力イン様タンパク質 の完全分子を生産するために翻訳され得るのが好ましい。 他の実施態様では、本発明はベクターと本発明のＤＮＡを包含する組換えＤＮＡ 分子に関する。これらの組換え分子は完全な長さのＤＮＡと下記のベクターＤＮ Ａ類のいずれかを包含する分子を含む： バキュロウイルスーベクター（Ａｃ−核多角体病ウィルスの誘導体のようなもの ：へｃＮＰＶ）：バクテリオファージスベクター（ｇｔｌＯ）；Ｍ１３　　バク テリオファージベクター：またはＲＮＡ転写ベクターｐＯＥＭ−１゜ この発明の組換えＤＮＡは、クローンｐａＴ７４４のＤＮＡまたはクローンｐａ Ｔ４６４のＤＮＡ、および下記のベクターＤＮＡ類のいずれかを包含する組換え 分子も包含するニラムダ（ＧｔｌＯ）；およびＭ１３のベクター；および哺乳動 物の細胞（例えば、Ｃ０３）中に挿入したＤＮＡ類を発現できる哺乳類の発現ベ クター（ＣＤＭ−８またはＰＭＴ２−２のようなもの）。 更に、他の実施態様では、本発明は本発明のＤＮＡで形質転換した細胞、好まし くは哺乳動物または虫の細胞を包含する。 更に本発明は、本発明のＤＮＡ類で形質転換した酵母る。 本発明の別の実施態様によると、形質転換するＤＮＡは細胞中で発現することが でき、これにより細胞中に、このＤＮＡによりコードされているリンホカイン／ サイトカイン様タンパク質を増やすことができる。 本発明のこの見方の最も好ましい実施態様では、本発明のＤＮＡにより形質転換 した細胞は、活性化Ｔ細胞により分泌される（不完全）型でのそのＤＮＡにより コードされたタンパク質を分泌する。 更に別に、本発明は本発明のＤＮへの発現により、または本発明のＲＮＡの翻訳 により製造される新規のリンホカイン／サイト力イン様タンパク質を包含する。 これらのタンパク質は、分泌型であるのが好ましい（換言すれば、明白なシグナ ル配列を欠いているもの）。 これらのタンパク質は、機能的研究のめに使用でき、そして定性的または定量的 受容体結合検定のような別の生化学的および機能的分析のために精製できる。 本発明のこの実施態様によれば、新規のリンホカイン／サイト力イン様タンパク 質は本発明の未修飾のＤＮＡ類とｍＲＮＡ類のタンパク質生産物であるであろう ；そしてそして修飾したまたは遺伝子工学的に処理したタンパク質生産物であろ う。ＤＮＡ配列における遺伝子工学的変異の結果、修飾したリンホカイン／サイ ト力イン様タンパク質は、該当する自然発生の「野性型」とはアミノ酸配列で１ または１箇所以上の相違点を持つであろう。 本発明は、本発明のＤＮＡ断片によりコードされているペプチドに対して作製さ れた新規の抗体を包含する。 本発明のこの実施態様では、抗体はこのようなペプチドの配列を包含するリンホ カイン／サイトカイン様タンパク質に特異的に結合するだろう；そしてそのタン パク質がその本来の（生理的に活性のある）構造をとる時のが好ましい。これら の抗体は、タンパク質因子の検出と精製に使用できる。 更に、本発明は、本発明のＤＮＡ類に関係する遺伝子の発現を検出するための新 規のバイオアッセイ法を包含する。一つのこのような実施態様によると、本発明 のＤＮＡ類は関係するｍＲＮＡ類の、定常状態のレベルまたは誘導速度を定量す るための試料として使用され得るだろう。このようなバイオアッセイは、例えば 腫瘍細胞のいろいろな種類の同定のためにまたは炎症応答での遺伝子的欠損の確 認のために役立つだろう。 本発明のＤＮＡ類に関係する遺伝子は、Ｔ細胞中で（そして他のある種の造血細 胞中でも）免疫活性化に対して非常に速く発現されるので、免疫系の活性化の非 常に速い時期の標識として役立つ。かくして、本発明のこの観点に従うと、例え ば組織が移植の結果拒絶されているかどうかを追跡するために、本発明のタンパ ク質因子に対する抗体を使用して、いろいろの種類の体液を、ルーチン的に試験 できるだろう。 Ｆｉｇ、Ｉ−１は、いろいろな型のヒト細胞から取り出した１ａｐ−標識した完 全な長さのＣＤＮ試料とＲＮＡを使用したノーザンプロットを示しており、これ は主にある種のマイトジェン刺戟した免疫細胞における、完全な長さの遺伝子発 現の特異性を説明している。 Ｆｉｇ、Ｉ−２は、正常Ｔおよび８９２３球類および半球類の活性化におけるｍ ＲＮＡの時制の発現を特徴付けており（ノーサンプロット法による）、Ａｃｔ− ２遺伝子の発現は、マイトジェンに応答して速やかに誘導されそして終了するの 両方をすることを説明している。 Ｆｉｇ、Ｉ−３は、配列決定の戦略、ＤＮＡ配列、並びに９２個のアミノ酸に該 当する２７６個の塩基対の読み取り枠を含むＡ、　ｃ　ｔ　−２のｍＲＮＡの一 〇、　　７ｋｂ　（キロ塩基）ｃＤＮＡクローンの推論したアミノ酸配列を描写 している。 Ｆｉｇ、Ｉ−４は、推論したアミノ酸配列から計算したカイトーヅーリトル（Ｋ ｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉ　ｔｔｌｅ）の嫌水性ブｏ−。 トを提示しており、これはいわゆるリーダーまたはシグナルペプチドであるよう に見える極端に嫌水性のＮ末端を明らかにしている。 Ｆｉｇ、Ｉ−５は、無細胞系で完全な長さのＡＣｔ−２のｃＤＮＡから生産され たＲＮＡ種の翻訳を示しており、計算分子量１０，１９９ダルトンに類似の見か けのＭｒ約１１，０００のの生産物を示しており、この生産物は分泌タンパク質 がするように明らかにミクロゾーム壁内に移行している。 Ｆｉｇ、１−６は、ヒトＤＮＡのゲノムのサザーンプロット法を行うために完全 な長さのＡｃｔ−２ｃＤＮＡを使用した結果を描いており：ＡＣｔ−２と非常に 合致している、比較簡単な切断パターンは単独コピー数または低コピー数の遺伝 子を表している。 Ｆｉｇ、Ｉ−７は、Ａｃｔ〜２の発現の時間経過を、他の２種の細胞の増殖にお ける役目をするので知られている遺伝子：ｃ−ｆｏｓ、およびＣ−ｆｎｙｓと直 接に比較したものであり；Ａｃｔ−２のｍＲＮＡはｃ−ｆｏｓと一緒に誘導され 、その最高の発現時期はＣ−ｍ）’Ｓのそれと一致することを示している。 表（Ｔａｂｌｅ）Ｉ−１は、１６ｓ−メチオニンまたはシスティンで放射線標識 したＡｃｔ−２タンパク質のＮ末端アミノ酸配列の結果を示している。 実験の部ＩＩ Ｆｉｇ、ｌｌ−１は、ヒト末梢血Ｔリンパ球のマイトジェン刺戟で直ちに誘導さ れた遺伝子を単離するのに利用した手順の概観を示している。 Ｆｉｇ、ｌｌ−２は、休止期のヒト血液Ｔ細胞の刺戟で選ばれた４種の誘導遺伝 子のｍＲＮＡ誘導の速度（ノーザンプロットとｃＤＮＡ試料による）を説明して いる。 Ｆｉｇ、Ｉｔ−３は、ヒトヘルパーＴ細胞系のジャーカットにおける選択された ｃＤＮＡのいろいろな発現と調節を描いている。 Ｆｉｇ、［１−４は、ヒト繊維芽細胞における選択されたｃＤＮＡの発現の（ノ ーザンプロット）分析を示している。 表１１−１は、ｃＤＮＡクローニング研究により確認した、Ｔｍ胞のいろいろの マイトジェン−誘導遺伝子の特徴を纏めている。 表（Ｉ−２は、ヘルパーＴ細胞系ジャーカットにおｊｊるおよびヒト繊維芽細胞 におけるＴ細胞の誘導遺伝子の発現の分析を示している。 実験の部ＩＩＩ Ｆｉｇ、ｌｌｌ−１は、試料として選択したｃＤＮＡクローンを使用する末梢血 Ｔ細胞におけるマイトジェン誘導遺伝子の（ノーザンプロット）分析を示してい る。 Ｆｉｇ、　ｌｌｌ−２は、植物凝集素の不在下または存在下で、抗−ＣＤ２８モ ノクロナ一ル抗体またはイオノマイシンのどちらかで刺戟したＣＤ２８Ｄ　　Ｔ 細胞におけるマイトジェン誘導遺伝子の（ノーザンプロット）分析を説明してい る。 Ｆｉｇ、　ｌｌｌ−３は、シクロキシミドの不在下または存在下で、ジオクタタ ノイルーグリセリンまたはイオノマイシンで刺戟したＴ細胞系ジャーカットにお けるマイトジェン誘導遺伝子のＣノーザンプロット）分析を描いている。 表１１１−１は、Ｆｉｇ、　ＩＩＩ　−１−３で使用した薬剤に対する応答にお けるマイトジェン誘導遺伝子のためのｍＲＮＡ分析（ノーザンプロットデータ） を纏めている。 実験の部１■ Ｆ’ｉｇ、ＩＶ−１は、無刺戟（対照）の細胞またはシクロへキシミドまたはシ クロスポリンで処理した細胞のいずれかのヒト末梢血Ｔ細胞におけるｃＤＮＡク ローンｐＡＴ　　４８４およびｐＡ’ｒ　　７４４のＲＮＡのノーザン分析を描 いている。 Ｆｉｇ、Ｏ７−２は、無刺戟（対照）の細胞または示した薬剤で処理した細胞の いずれかのジャーカット細胞におけるｐＡＴ　　４６４およびｐＡＴ　　７４４ のＲＮＡのノーザン分析を描いている。 Ｆｉｇ、ＩＶ−３は、配列決定の戦略、ヌクレオチド配列、並びに９２個のアミ ノ酸に該当する２７６個の塩基対の読み取り枠を含むｐＡＴ　　４６４のための 予想されるアミノ酸配列を説明している。 Ｐｉｇ、ＩＶ−４は、配列決定の戦略、ヌクレオチド配列、並びに９２個のアミ ノ酸に該当する読み取り枠を含むｐＡＴ　　７４４のための予想されるアミノ酸 配列を説明している。 Ｆｉｇ、ＩＶ−５は、ｐＡＴ　　７４４のためＤＮＡ配列のプライマー伸長分析 を示していて；ヒト末梢Ｔ細胞からのＲＮＡにアニールしたｐＡＴ　　７４４の 配列の１３５ないし１５２の位置に相補的なオリゴヌクレオチドを使用したのも のである。 Ｆ　ｉ　ｇ、　Ｉｖ　−６ハ、ｐＡＴ　　４６４、ｐＡＴ　　７４４によりコー ドされたタンパク質および構造的に関連するタンパク質のアミノ酸配列間の比較 を示している。 Ｆｉｇ、ＩＶ−７は、若干数の制限酵素で切断したヒト胎盤ＤＮＡにおけるｐＡ Ｔ　　４６４とｐＡＴ　　７４４のサザーンプロット分析を示している。 Ｆｉｇ、１Ｖ−８は、前骨髄（ＨＬ６０）細胞およびヒト扁桃腺Ｂ細胞における ｐＡＴ　　４６４とｐＡＴ　　７４４のｍＲＮＡの発現を説明している（ノーサ ンプロット法による。）。 Ｆｆｇ、ＪＶ−９は、いろいろな発現ベクターにおけるｐＡＴ　　４６４および ｐＡＴ　　７４４のＤＮＡで形質転換した哺乳動物（ＣＯ３）細胞における適当 な分泌タンパク質の発現を示している（タンパク質の５ｉＳ−システィン標識に よる）。 Ｆｉｇ、［Ｖ−１０は、いろいろな発現ベクターにおけるｐＡＴ　　４６４のＤ ＮＡで形質転換した哺乳動物（ＣＯ８）細胞における適当な分泌タンパク質の発 現を示している（タンパク質の１６３−システィン標識による）。 Ｆｉｇ、ＩＶ−１１は、ｐＡＴ　　７４４（７）ＤＮＡ７−形質転換したＣＯ８ 細胞培養物の上澄液中の分泌タンパク質を検出するために、ｐＡＴ　　７４４の ペプチドのＣ−末端１２のアミノ酸に対して生じたウサギの抗体（Ｎ。 、？２１）の使用を示している（ウェスターンプロット法）。 Ｆｉｇ、１Ｖ−１２は、ｐＡＴ　　７４４のＤＮＡで形質転換したＣＯ８細胞培 養物の上澄液中の分泌タンパク質を検出するために、ｐＡ’ｒ　　７４４のペプ チドのＣ〜末端の１２のアミノ酸に対して生じたウサギの抗体（Ｎ。 、７２２）の活性を示している（ウェスターンプロット法）。 Ｆｉｇ、ＩＶ−１３は、ｐＡＴ　　４６４（７）ＤＮＡで形質転換したＣＯ８細 胞培養物の上澄液中の分泌タンパク質を検出するために、ｐＡＴ　　４６４ペプ チドのＣ−末端の１２のアミノ酸に対して起こしたウサギの抗体（Ｎ。 、７２０）の使用を示している。 Ｆ　ｉ　ｇ、　ＩＶ　−１４ｆｔ、ｐＡＴ　　４６４（７）ＤＮＡで形質転換し たＣＯ３細胞培養物の上澄液中の分泌タンパク質との反応におけるｐＡＴ　　４ ６４ペプチドのＣ−末端の１２のアミノ酸に対して起こした２番目のウサギの抗 体（Ｎｏ、７１９）の結果を示している。 Ｆｉｇ、ＩＶ−１５は、マイトジェンで活性化したヒト末梢血Ｔ細胞がｐＡＴ　 　４６４タンパク質を分泌することを示している（抗−ペプチド抗体によるウニ スターンプロット法による。）。 好ましい実施態様の詳細な説明 本発明のＤＮＡは、ここで引用するＤＮＡにより例示される：完全な長さのＡｃ ｔ−２［即ち、−０，７ｋｂの活性化した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のｃＤＮ Ａ、Ｎｏ、　　２のクローン］：ｐＡＴ　　７４４またはｐＡＴ　　４６４のＤ ＮＡのクローン；およびこれらのＤＮＡ断片へのハイブリッド形成により検出で きる関連ＤＮＡ断片。 本発明の他のＤＮＡ群は下記のｃＤＮＡクローンを包含する： ｐＡＴ　　１２０；ｐＡＴ　　１２５；ｐＡＴ　　１２７；ｐＡＴ　　１２９； ｐＡＴ　　１３３；ｐＡＴ　　１３９；ｐＡＴ　　１４０Ｓ；ｐＡＴ　　１４０ Ｌ；ｐＡＴ　　１５４゜ｐＡＴ　　１５８：ｐＡＴ　　１８９；ｐＡＴ　　２θ １；ｐＡＴ　　２０４；ｐＡＴ　　２２５；ｐＡＴ　　２２９゜ｐＡＴ　　２３ ２Ｓ、ｐＡＴ　　２３２Ｌ；ｐＡＴ　　２３７゜ｐＡＴ　　２３９；ｐＡＴ　　 ２４３；１）ＡＴ　　２７０゜ｐＡＴ　　２７６；ｐＡＴ　　２８１；ｐＡＴ　 　３８３；ｐＡＴ　　４０２；ｐＡＴ　　４θ７；ｐＡＴ　　４１６：ｐＡＴ　 　４２８；ｐＡＴ　　４６６；１）ＡＴ　　４７８；ｐＡＴ　　４８３：ｐＡＴ 　　４８５；ｐＡＴ　　４９６；ｐＡＴ　　５１６；ｐＡＴ　　５４２；ｐＡＴ 　　５６３；ｐＡＴ　　５９１：ｐＡＴ　　５９４；ｐＡＴ　　６０３；ｐＡＴ 　　６０７；ｐＡＴ　　６２０．およびｐＡＴ　　７３０゜ この発明のＤＮＡ類は、下記のものを包含する組換え分子も含む：完全な長さの Ａｃｔ−２ＤＮＡおよびバキュロウィルス−ベクターＤＮＡ　（プラスミドｐＡ ｃ−Ａｃｔ２、および組換えバキュロウィルス、ｖＡｃ−ＡＣｔ２により例示さ れる。）；完全な長さのＡｃｔ−２のＤＮＡまたはｐＡＴ　　７４４またはｐＡ Ｔ　　４６４のＤＮＡおよびバクテリオファ−９ス 完全な長さのＡｃｔ−２のＤＮＡまたはｐＡＴ　　７４４またはｐＡＴ　　４６ ４のＤＮＡおよびＭ１３バクテリオファージ（Ｍｌ　３ｍｐ　１　９により例示 される）；完全な長さのＡＣｔ−２のＤＮＡおよびＲＮＡ転写ベクターｐＧＥＭ −１； およびｐＡＴ　　７４４またはｐＡＴ　　４６４のＤＮＡおよび ＣＯ８細胞中で挿入したＤＮＡ類を発現できる哺乳動物発現ベクター（ＣＤＭ− ８またはＰＭＴ２−２により例示される）。 センス鎖ＤＮＡヌクレオチド配列、およびコードされている予想した最初の（ｐ ｒｉｍａｒｙ）タンパク質配列は、完全な長さのＡ　Ｃ　’ｔ　−　２のＤＮＡ のためにＦｉｇ．Ｉ−３に示しである。実験の部Ｉに示しであるように、約−０ 、７ｋｂの同じ大きさの挿入部を持つ４個のクローンを確認した。それらの全て は同じ０，９ｋｂｍＲＮＡにハイブリッド形成する。 使用した配列決定の戦略、得られたヌクレオチドの配列およびコードしたタンパ ク質のための予想アミノ酸配列を、ｐＡＴ　　７４４のためにＦｉｇ．ＩＶ−４ にモしてｐＡＴ　　４３４（７）ためニＦ　ｉ　ｇ．　ＩＶ　−　８　ニ示シテ ある。 これらのＤＮＡ類、完全な長さのＡｃｔ−２（　　０。 ７ｋｂ）、およびｐＡＴ　　７４４およびｐＡＴ　　４６４クローンはこの発明 の最も好ましいＤＮＡである。 完全な長さのＡｃｔ−２のｃＤＮＡおよびｐＡＴ　　７４４のｃＤＮＡは根本的 に同じ遺伝子から誘導されているように見える。もっと特定していうと、２個の ｃＤＮ八配列配列覚的に検討すると、タンパク質をコードしている領域内ではた った２個の塩基配列のみが異なっているのみであって、換言すれば：完全な長さ のＡｃｔ−２（Ｆｉｇ．Ｉ−３を参照）では塩基Ｎｏ．１６７はＣであり、そし て１７１はＧである。一方、該当するｐＡＴ７４４配列（Ｆｉｇ．ｌＶ〜４）で は塩基１８１はＴでありそして１３５は八である。これらの違いは、予想される アミノ酸番号２０は完全な長さのＡｃｔ−２とｐＡＴ７４４、各々、においてＰ ｒｏとＬｅｕであるようにし、一方他の塩基の変化はアミノ酸配列を変更させな い。このような相違がクローンが取られた２種の異なる個体の遺伝子における遺 伝性変異（換言すれば、多型性）に由来するということはあり得る。 ビオネット（Ｂｉｏｎｅｔ）（最近発売された）を使用するコンピュータ検索は 、Ｉ）ＡＴ　　４６４に非常に似ているクローンは、刺戟したヒト扁桃腺リンパ 球から以前に単離されており（ＩＶ−４１）　、ｐＬＤ７８と呼ばれている。 クローンｐＬＤ７８は、クローンｐＡＴ　　４６４より更に５′から７ヌクレオ チド伸長しておりそして配列の比較は両方のクローンの間の５ヌクレオチドの相 違を示しているが、そのどれもがアミノ酸の予測配列に影響していない。ヌクレ オチド配列におけるこれらの違いは異なるドナーの遺伝子間の多型性を反映させ るだろう。 ｐＡＴ　　７４４とｐＡＴ　　４６４のための配列の比較は、ヌクレオチドレベ ルで驚（べき類似性（４５％）およびアミノ酸レベルでのより高い相同性（５６ ％、Ｆｉｇ、　ＩＶ−６Ａ）をすら示している。共通の調節特異性に加えて、こ れらの一つの遺伝子は共通の祖先遺伝子から誘導されたのであろう；そしてそれ らがコードしているタンパク質は機能的に同し役目をするのであろう。 完全な長さのＡｃｔ−２、ｐＡＴ　　７４４またはｐＡＴ　４６４クローンから 誘導された試料を使用するゲノムのヒトＤＮＡ類のサザーンプロット分析は（各 々、Ｆｉｇ、ｌ−１６、ＩＶ−７およびＩＶ６）は、Ａｃｔ−２／ｐＡＴ　　７ ４４およびｐＡＴ　　４６４と非常に合致している、比較簡単な切断パターンは 単独コピー数または低コピー数の遺伝子を示している。 明らかに、ｐＡＴ　　４６４と７４４は、それらの顕著な類似性に係わらず、互 いにクロス−ハイブリッド形成をしない。 か（して、ハイブリッド形成法に本発明のＤＮＡ類またはＲＮＡ類、特にここで 掲げた最も好ましいＤＮＡ類を使用することにより、この技術の熟練者は、不当 な実験をすることなしに、本発明の範囲内に・入る他のリンホカイン／サイト力 イン様タンパク質を探すためにゲノムのまたはｃＤＮＡライブラリーをスクリー ンできる。 ベクターと本発明の他のＤＮＡ類を包含する組換えＤＮＡ分子も、本発明の範囲 内に入る。 好ましい組換え分子は、完全な長さのＡｃｔ−２のＤＮＡおよびと下記のＤＮＡ 類のいずれかを含む分子を包含する：バクテリオファージスベクター（ｇｔｌＯ ）；Ｍ１３バクテリオファージのベクター：またはＲＮＡ転写ベクターｐＯＥＭ −１゜ この発明の好ましい組換えＤＮＡ類は、クローンｐＡＴ　７４４またはｐＡＴ　 　４６４のＤＮＡおよび下記のいずれかのベクターＤＮＡ類を含む組換え分子も 包含する：λベクター（例えば、ｇｔｌＯ）；Ｍ１３ベクター。 この発明の最も好ましい組換え分子は：完全な長さのＡｃｔ−２のＤＮＡと下記 のベクターＤＮＡのいずれかを含む分子：バキュロウィルスベクター（ｐＡｃ− Ａｃｔ２、多角プラスミドｐＡｃ　３７３から誘導されたプラスミド；ｐＡｃ− Ａｃｔ２から誘導された組換えバキュロウィルス、ｖＡｃ−Ａｃｔ２および野性 型ＡｃＮＰＶ株Ｅ２　ＤＮＡを含む）：を包含する。 他の最も好ましい組換え分子は、ｐＡＴ　　７４４またはｐＡＴ　　４６４のＤ ＮＡおよび哺乳動物細胞（例えば、Ｃ０５）中に挿入したＤＮＡ類を発現できる 哺乳動物発現ベクター（ＣＤＭ−８またはＰＭＴ２−２）を包含するそれらであ る。 完全な長さのＡｃｔ−２ヒトｃＤＮＡは、実験の部Ｉに記述したように、合成さ れ、クローンされそして単離される。完全な長さのＤＮＡを確認するために、λ ｇｔ１０（１−１４）中に組み立てたＨＵＴ−１０２Ｂ２ｃＤＮＡライブラリー からの１０＠個のファージプラークを、ランダムブライミング法（ｒａｎｄｏｍ 　ｐｒｉｍｉｎｇ　ｒｎｅｔｈｏｄ’）（１−１５）を使用して、標識した部分 長（−０，４ｋｂ）のＡｃｔ−２のｃＤＮＡ挿入でスクリーンした。 完全な長さく−０，７ｋｂ）のＤＮＡ配列は、９２個のアミノ酸に該当する２７ ６個の塩基対の読み取り枠を含有する。 この読み取り枠は、５’ＡＵＧをもっとも利用しており、これは真核生物の翻訳 の開始に概して利用されるものである。更に、第１のＡＵＧの領域は、真核生物 の開始部位のために決められる共通配列と高い相同性を持つ（Ｉ−１７）、この ｃＤＮＡはｍＲＮＡの３′末端へ伸長しているように見える。というのは、これ は古典的なＡＡＵＡＡＡポリアデニル化シグナル（１−１８）とポリＡ末端の開 始を持つからである。 本発明のヒトＤＮＡ類は、合成され、クローンされそして実験の部ＩＩに記載し であるように、活性化したＴ細胞からのｍＲＮＡを使用する「引抜き」（ｓｕｂ ｔｒａｃｔｉｏｎ）クローニングとハイブリッド形成の工程により単離した。こ の戦略はＦｉｇ、ｌｌ−１に纏めて記載しである。 ヒト末梢血Ｔｍ胞を、マイトジェンである植物凝集素（ＰＨＡ）およびホルボー ル　１２−ミリステート　１３−アセテ−）　（ＰＭＡ）並びにタンパク質合成 阻害剤であるシクロへキシミドの存在下、４．５時間にわたりポリクローナルに 活性化する。この方法は、タンパク質新規合成に依存しないで誘導されるそれら の遺伝子によって限定される初期応答の分析に焦点を当てるものである。現在ま で、引き抜かれたλｇｔｌＯのｃＤＮＡライブラリーの約４０％が、引き抜かれ た試料でスクリーニングされた。引き抜かれた試料にハイブリッド形成した精製 ファージは、活性化したおよび休止期のＴ細胞ｍＲＮＡから合成したｃＤＮＡ試 料がファージの二重のフィルターに使用される確認スクリーンにかけられる。 最後に、引抜きと確認スクリーニングの両方法により誘導ｃＤＮＡを持っている と判断された５２８フアージが選別された。 実験の部ＩＩに記載したように、更に分析して６６個の特異的ｃＤＮＡクローン を確認した。それらの大多数が別個の遺伝子を表しているように見える（表１１ −１の脚注を参照）。新規の誘導遺伝子クローンの４４個を更に検討した（実験 の部１１）。この発明のＤＮＡ類を例示するこれらのクローンは： ｐＡＴ　　１２０；ｐＡＴ　　１２５；ｐＡＴ　　１２７：ｐＡＴ　　１２９； ｐＡＴ　　１３３．ｐＡＴ　　１４０３；ｐＡＴ　　１４０Ｌ：ｐＡＴ　　１５ ４：　　ｐＡＴ　　１５８゜ｐＡＴ　　１８９；ｐＡＴ　　２０１；　　ｐＡＴ 　　２０４；ｐＡＴ　　２２５：ｐＡＴ　　２２９；１）ＡＴ　　２３２Ｓ；ｐ ＡＴ　　２３２Ｌ；ｐＡＴ　　２３７．ｐＡＴ　　２１９゜ｐＡＴ　　２４３； ｐＡＴ　　２７０：ｐＡＴ　　２７６；ｐＡＴ　　２８１．ｐＡＴ　　３８３； ｐＡＴ　　４０２；ｐＡＴ　　４０７．ｐＡＴ　　４１６；ｐＡＴ　　４２８： ｐＡＴ　　４６４；ｐＡＴ　　４６６；ｐＡＴ　　４７８；ｐＡＴ　　４８３； ｐＡＴ　　４８５．ｐＡＴ　　４９６゜ｐＡＴ　　５１６；ｐＡＴ　　５４２： ｐＡＴ　　５６３；ｐＡＴ　　５９１；ｐＡＴ　　５９４；ｐＡＴ　　６０３； ｐＡＴ　　６０７；ｐＡＴ　　６２０；ｐＡＴ　　７３０およびｐＡＴ　　７４ ４を包含する。 いろいろのＴ細胞活性化剤に応答して誘導される９個の新規のマイトジェン誘導 遺伝子を、そのような遺伝子を調節する経路の多様性を評価するために、検討し た（実験の部ＩＩＩ　）。これらの９個の遺伝子は、ｐＡＴ２３７；ｐＡＴ　　 ５６３；ｐＡＴ　　２２９；ｐＡＴ　　１２０；ｐＡＴ　　１５４：ｐＡＴ　　 ２２５；ｐＡＴ　　４１６であり、それらはこの発明の好ましいＤＮＡであり、 そしてｐＡＴ　　７４４とｐＡＴ　　４６４であり、これらは本発明の最も好ま しいＤＮＡである。 引き抜いたｃＤＮＡライブラリーを起源にして誘導したクローンｐＡＴ　　４６ ４とｐＡＴ　　７４４を、更に詳しく特徴付けた（実験の部ＩＩを参照）。 はぼ完全な長さのｃＤＮＡクローンをｃＤＮＡライブラリーから単離した。そし てこのライブラリーは、シクロへキシミドの存在下、ＰＨＡ−ＰとＰＭＡで４． ５時間にわたり刺戟したヒト末梢血子細胞から抽出したＲＮＡから誘導したもの である。このｃＤＮＡライブラリーは、記述したように（ＩＶ−２９）オリゴｄ Ｔブライミング（ｐｒｉｍｉｎｇ）で構成し、続いてλｇｔｌＯにクローンした （ＩＶ−３０）。 クローンｐＡＴ　　４６４は、７９３ヌクレオチド長であり、そしてクローンｐ ＡＴ　　７４４は６５９ヌクレオチド長である（５′末端におけるＥｃｏ　　Ｒ １リンカ−を含む。）。ｐＡＴ　　７４４のためブライマー伸長分析は、単離し たクローンは殆ど完全な長さのｃＤＮＡを表していることを確証した（Ｆ　ｉ　 ｇ、　１ｖ−５）。 真実のｍＲＮＡ配列の５′末端の約１０のヌクレオチドがこのｃＤＮＡクローン に欠けていることを確定できる。最初のＡＴＧは、ｐＡＴ　　４６４およびｐＡ Ｔ　　７４４では各々８４と７４の位置にある。各々の場合について、９２個の アミノ酸の読み取り枠が続く。 １）ＯＥＭ−１ベクターにおける完全な長さのＡＣｔ−２ＲＮＡの転写のための ＤＮＡ鋳型を、下記のようにして製造した（実験の部工を参照）ニー０．７ｋｂ の完全な長さのＡｃｔ−２のｃＤＮＡをＡｖａＩで切断し、クレノーウとｄＮＴ Ｐｓで充填し、次いでＥｃｏ　　Ｒ１で切断して、はぼ完全な長さの断片を生成 せしめ、それから人工の５’　Ｇ−Ｃ末端を取り除いた。この断片を、Ｓｍａ　 　ＩとＥｃｏ　　Ｒ１で切断しておいたＰＧＥＭ−１〔プロメガ　バイオチック （Ｐｒｏｍｅｇａ　Ｂｉｏｔｅｃ））中にサブクローンした。 完全な長さのＡｃｔ−２のｃＤＮＡを含むバキュロウィルスベクターの構成物は 、ｐＡｃ−Ａｃｔ２を生成するためにバキュロウィルス多角プラスミドｐＡｃ　 ３７３（１−１６ａ）のＢａｍＨ１部位中に一〇、７ｋｂのＡｃｔ−２のｃＤＮ Ａをクローニングすることにより、この０．７ｋｂのｃＤＮＡから製造した。そ れによって、完全な長さのＡｃｔ−２のｃＤＮＡを多角プロモーターの支配下に 置いた（実験の部工も参照）。 ＳＦ９細胞を、ｐＡｃ−Ａｃｔ２および野性型ＡｃＮＰＶ株ＥＩ　ＤＮＡで共ト ランスフェクションした。組換えしたバキュロウィルスのｖＡｃ−Ａｃ　ｔ　２ を単離し、プラークハイブリッド形成の連続的な繰り返しの手順により精製した （Ｉ−１６ａ）。 ｐＡＴ　　４６４またはｐＡＴ　　７４４のＤＮＡと哺乳動物の発現ベクター（ ＣＤＭ−８またはＰＭＴ　２−２により例示される）を含み、挿入したＤＮＡを ＣＯ８細胞中で発現できる組換えＤＮＡの構成は、実験の部ｔＶに記載されてい る。組換え体は、下記のいずれかのベクターＤＮＡを含んでいた：ＣＤＭ−８［ マサチューセッツ州、ポストン市、マサチューセラツ一般病院におけるブライア ン種から得られた、モしてビー、シード。 Ｎａｔｕｒｅ　　３２９，８４０−８４２（１９８７）に記載されているコ　； またはＰＭＴ２−Ｔ［マサチューセッツ州、ケムブリッジ、遺伝研究所から取得 ；このベクターの関連するそれ以前の変換は、ニーチャン　ヤング本発明のＤＮ Ａとセンス鎖（ｓｅｎｓｅ　５ｔｒａｎｄ）ＲＮ　Ａは、本発明のタンパク質生 産法と組み合わせて、実質的に純粋なリンホカイン／サイト力イン様タンパク質 の大量を生産するために、使用できる。更に、かくして生産した実質的に前駆体 のリンホカイン／サイト力イン様タンパク質は、よく知られている技術を使用し て、いろいろな体液と組織試料中のこれらのタンパク質のための受容体の存在を 確認するために診断的検定で使用できる。 か（して、本発明は細胞、好ましくは哺乳動物または虫の細胞であって、本発明 のＤＮＡにより形質転換されており、かつその細胞中でその形質転換するＤＮＡ が発現できる細胞も包含する。 本発明のこの観点の最も好ましい実施態様では、本発明のＤＮＡにより形質転換 された細胞は、そのＤＮＡによりコードされているタンパク質を、活性化したＴ 細胞により分泌される（不完全な）型で分泌する。 本発明は、本発明のＤＮＡの発現により、または本発明のＲＮＡの翻訳により生 成する新規のリンホカイン／サイト力イン様タンパク質も包含する。好ましくは 、これらのタンパク質は分泌型（換言すれば、明らかなシグナル配列を欠如して いる。）であるだろう。これらのタンパク質因子は機能の研究に使用でき、定性 的および定量的受容体結合検定のような別の生化学的および機能的分析のために 精製することもできる。 完全な長さのＡ、　Ｃｔ　−２のＤＮＡを含む組換え分子で形質転換した虫の細 胞は実験の部Ｉに記載したようにして製造した。簡単に述べると、精製した、組 換えバキュロウィルス、ｖＡｃ−Ａｃ　ｔ　２のプラークは、標準法に従ってＳ Ｆ９の細胞を感染するのに使用される。組換えした完全な長さのＡｃｔ−２／バ キユロウイルスベクターを、ＳＦ９細胞内に発現させて、上澄液中に豊富なＡＣ ｔ−２タンパク質を生産する。更に、放射線標識したタンパク質のＮ−末端配列 は、予想とおりにシグナルペプチドが切断したことを示している。 ｐＡＴ　　７４４またはｐＡＴ　　４６４のＤＮＡで形質転換し、且つｐＡＴ　 　７４４またはｐＡＴ　　４６４のタンパク質を分泌する哺乳動物細胞は、実験 の部ＩＶに記載されている。 簡単に述べると：　ＣＯＳ細胞を、ＣＤＭ−８またはＰＭＴ２−Ｔのいずれかの 発現部位に挿入したｃＤＮＡクローンで、標準ＤＥＡＥ−デキストラン法を使用 してトランスフェクションした。新規のタンパク質は、標準の、よく知られた方 法を使用してＤＮＡ構成をトランスフェクションした後の細胞のＢｓ５−システ °イン標識化により視覚化した。タンパク質生産物の大きさは、リーダーペプチ ドが切断した後はｃＤＮ人配列配列予測されるように適当である。 この発明は、本発明のＤＮＡ断片によりコードされているペプチドに対して作ら れた新規の抗体も包含する。 本発明のこの実施態様は、ｃＤＮＡ配列により予想されるようなペプチドの配列 を含有するｐＡＴ　　７４４またはｐＡＴ　　４６４−リンホカイン／サイトカ イン様タンパク質に特異的に結合する抗体を含むウサギの抗血清により例示され 、この抗体はｐＡＴ　　７４４およびｐＡＴ４６４タンパク質の両者の末端の１ ２個のアミノ酸を表す合成ペプチドに対して起こった。これは、ペプチド免疫学 の標準法に従い、化学的にペプチドを合成し、それらを担体（ＫＬＨ）に結合し 、そしてこの　担体＋ペプチド　をウサギに注射することにより行われた。 これらの抗体は、タンパク質因子の検出または精製に使用できる。Ｆｉｇ、ＩＶ −１１とＩＶ−１２は、ｐＡＴ７４４ペプチドに対して発生した２種の異なるウ サギの抗体（７２１と７２２）のウェスタンプロットにおける使用を示している 。ｐＡＴ　　４６４に対する抗体を使用する類似の研究を、Ｆｉｇ、ＩＶ−１３ とＩＶ−１４に示した。これらの図（Ｆｉｇ、）から明らかなように、適当な分 泌因子は、合成ペプチドにより免疫化したウサギからの抗血清により検出される 。 更に、この発明は、本発明のＤＮＡに関する遺伝子の発現を検出するための新規 のバイオアッセイ法を包含する。ある模範的実施態様では、本発明のＤＮＡは、 関連するｍＲＮＡの、定常状態レベルもしくは誘導の速度を定量するための試料 として使用された。 完全な長さのＡｃｔ−２を使用するか、またはｐＡＴ７４４もしくはｐＡＴ　　 ４６４のＤＮＡを使用する本発明のこれらのバイオアッセイのための方法、およ び標準ノーザンプロット技術は、各々、実験の部■、または１１−　ＩＶに詳細 に記述されている。 この技術における熟練者は、このような方法が、不当な実験なしに、単離した細 胞中のまたはいろいろの組織中のいずれかにおける、リンホカイン／サイト力イ ン様タンパク質のための遺伝子発現の分析に容易に適用できることを理解するで あろう。このようなバイオアッセイは、例えば、腫瘍細胞のいろいろな種類の同 定のためにまたは炎症応答での遺伝子的欠損の確認のために役立つだろう。 更に詳細を追加することなしに、前出の記述、そして下記の実験の部の方法を使 用すれば、本発明をその一杯の範囲迄利用できる。実験の部に開示した材料は、 特に断りのない限り説明の目的のために開示されたちであり、従って添付した請 求の範囲を如何なる方法でも限定するように構成されてはいない。 実験の部Ｉ 新規の免疫活性化遺伝子の確認、クローニング、および特徴付け Ａｃｔ−２と表示した新規の免疫活性化遺伝子を、活性化Ｔ細胞ライブラリーの 分別（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ）　ハイブリッド形成スクリーニングにより確 認した。遺伝子は、植物凝集素によるＴ細胞の活性化、ブドウ状球菌（Ｓｔａｐ ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）　Ｃｏ　ｗ　ａ　ｎ　　ＩによるＢ細胞 の活性化、およびリボ多糖による半球の活性化に続いて急速に含まれる。完全な 長さをコードしている領域を含むｃＤＮＡを単離した。推論されたアミノ酸配列 は、重量マトリックス評点法（ｗｅｉｇｈｔ　ｍａｔｒｉｘ　５ｃｏｒｅ）　　 によりシグナルペプチドと予測される非常に嫌水性のＮ−末端を含む、９２個の アミノ酸の読み取り枠を予測する。 バキュロウィルスの発現系を使用して、この遺伝子は分泌タンパク質をコードし ていることが証明された。従って、Ａｃｔ−２は新規のサイト力インを表現して いることは可能である。 Ａｃｔ−２と実質的に同等の遺伝子から誘導された他のｃＤＮＡクローンも単離 され、特徴付けされた（参照：下記の実験の部１１　ＩＩＩおよび１ｖ）。この クローンはｐＡＴ　　７４４と呼ばれる。 序論 Ｔ細胞は、免疫応答の調節とエフェクター機能において重要な役目をする。抗原 またはマイトジェンレクチンによる刺戟の結果、細胞内のカルシウムの増加、タ ンパク質のリン酸化、そしてホスホイノシトールのターンオーバーの増加を含む 一連の生化学的事象が起こる（参照；Ｉ−１、ｌ−２）。 これら事象は、細胞遺伝子の活性化および休止期の細胞により発現されないかま たは非常に弱くしか発現されない細胞タンパク質の生産に至るシグナルを発生す る。 これらの誘導タンパク質は、ヘルパー、サプレッサー、または細胞毒のＴ細胞機 能をメジニーとするエフェクターＴ細胞の増殖と分化のために重要である。 マイトジェン刺戟に応答して誘導されるＴリンパ球中の新規の遺伝子を特徴付け する需要があり、この需要は、その特徴付けの結果として、それらの機能的遺伝 子の生産物を確認し、Ｔ細胞機能と免疫応答のメジエートにおけるそれらの役目 を特徴付けすることを目標としている。 マイトジェン刺戟により活性化された遺伝子を確認するために成功できる手法は 、分別（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ）ハイブリッド形成の技術を使用することで ある（１−３−１−８）。 この方法の成功は、休止期のおよび活性化された細胞中で発現される遺伝子の間 には広範囲の重複があるというものの；各々の状態は、個々の活性化状態の特徴 あるタンパク質をコードしているかなり豊富にあるｍＲＮＡの少数により特徴付 けられることに依存している。 この部は、ｃＤＮへのクローニング、配列決定（ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）、およ び活性化した正常Ｔ細胞ｃＤＮＡライブラリーの分別スクリーニングにより確認 された、そしてＡＣｔ−２と表示した新規の遺伝子の特徴付けを記ＢＭＣ）を健 康な志願者から採取し、ファイコル−ハイパキュ（Ｐｉｃｏｌ　１（ｙｐａｑｕ ｅ）　　Ｃｘルエスエム、リットン　バイオネチックス（ＬＳＭ、Ｌｉｔｔｏｎ 　Ｂｉｏｎｅｔｉｃｓ）の勾配遠心分離により単離した。細胞は、概して、１０ ％の胎児ウシの血清（ＦＢＳ）　、Ｌ−グルタミン、および抗生物質を含有する ＲＰＭ１１６４０培地中、１−２Ｘ１０＠細胞／ｍ１で培養した。特に指示のな い限り、植物凝集素〔Ｅ−ＰＨＡ、ブーロー−ウェルカム（Ｂｕｒｒｏｕｇｈｓ −１ｉ１ｅｌ　ｌｃｏｍｅ）〕およびホルボールミリステートアセテート（ＰＭ Ａ。 シグマ社）を各々、５μｇ／ｍｌおよび５０ｎｇ／ｍｌで使用した。８９２８球 は、臭化２−アミノエチルイソ−チウロニウムで処理したヒツジの赤血球と共に ＰＢＭＣ（４％の非特異的エステラーゼ陽性細胞）を培養し、ロゼツトが集中し た細胞を除くことにより精製した。ある実験では、半球類をプラスチックの粘着 により消尽した。このような細胞は、８０％表面１ｇ陽性、ラテックス非摂取性 であり、それらをフドウ状球菌（Ｓｔａ　ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　　ａｕｒｅｕ ｓ）　Ｃｏｗａｎ　　Ｉ　　（ＳＡＣ。 カルビオケミーベーリング社（Ｃａｒｂｉｏｃｈｅｍ−ＢｅｈｒｉｎｇＣａｒｐ 、　））の１：１０，０００の希釈液の存在下、３０分ないし７２時間培養した 。 半球類は、ＰＢＭＣのエルトリエージタン（ｅｌｕｔｒｊａｔｉｏｎ）により製 造し、ギムザ染色法とフローサイトメトリーにより９５％の純度であった。細胞 を、１０ｕｇ／ｍｇのリボ多糖（Ｌ　Ｐ　Ｓ　、　　シグマ社）の存在下培養し た。 細胞系、Ｔ細胞系（ジャーカット、ＨＵＴ−１０２Ｂ２、Ｍｏ　１　ｔ−４，Ｃ ＥＭ、およびＨＵＴ−７８）　、Ｂ細胞系（Ｒａｊｉ、Ｓ３．Ｎａ１ｌ−１，８ ３９２，０Ｍ４６７２．Ｕ２６６、および５ＵＤＨＬ−６）　、および骨髄細胞 系（Ｋ５６２およびＵ９３７）を、１０％のＦＢＳを含有するＲＰＭＩ　　１６ ４０中に保持した。繊維芽細胞系４３１２および４４２９　（１−９）、および 骨肉腫細胞系５８８７（１−９）は１５％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ中１こ保持 した。ヒト胎児の繊維芽細胞ＨＦＬ−１細胞を、１０％ＦＢＳを含有するＤＨＥ Ｍの２５ｍ１中で、１７’５ａｎ”の細胞培養フラスコ当り、約ｌＸｌ０’の密 度になるように通過せしめ、３７℃で７日の期間にわたり合流（ｃｏｎｆ　１ｕ ｅｎｃｅ）するようにして生育した。消尽した培地を除くことにより細胞を刺戟 し、それを２０％のＦＢＳを含有する新鮮なりＥＭで置換した。初期通過（ｅａ ｒｌｙ　ｐａｓｓａｇｅ）のＨＦＬ−１細胞を全ての試験に使用した。 活性化したＰＢＭＣからのｃＤＮＡライブラリーの作製、　前に記述したように （１−１０）　、ＰＨＡとＰＭＡでＰＭＢＳを活性化し、全ての細胞ＲＮＡを抽 出しく１−１１）、そしてｍＲＮＡをオリゴ（ｄＴ）セルロースクロマトグラフ ィーにより単離した。二重鎖のｃＤＮＡをオカヤマおよびバーブ（１−１０，ｌ −１２）の手順に準じて作製した。 ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング、　誘導のまたは非誘導のＰＢＭＣのい ずれもから誘導した、′２Ｐ−標識しである初めのｃＤＮＡを使用して、グルン スタインとホグネス（１−１３）の方法で、ライブラリーを２回スクリーニング した。ニトロセルロースの繊維を、０．１ＭのＮａＨｔ　ＰＯ４ｐＨ６，８，０ ，８５ＭのＮａＣ１，１ｍＭのＥＤＴＡ、１０Ｘ　（デンハルト（Ｄｅｎｈａｒ ｄｔ’　ｓ）溶液）、０．１％のＳＤ３．１００μｇ／ｍｌの鮭精子ＤＮＡおよ び１０ｕ　ｇ／ｍ　１のポリ（ｒＡ）（ハイブリッド形成の前の溶液）中で６５ ℃で３時間保持した。次いで、ろ液を、１０％のデキストランスルヘートと放射 活性の試料を含有する新鮮なハイブリッド形成前の溶液を使用して、ハイブリッ ド形成した。濾紙を、２ＸＳＳＣ，０，５％ＳＤＳ中６５℃で２０分間にわたり ４回洗浄しそして０．１ＸＳＳＣ，０，１％ＳＤＳを使用して６５℃で３０分間 にわたり２回洗浄しそしてオートラジオグラフィーした。 ＨＵＴ−１０２Ｂ２のｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング、　完全な長さの ｃＤＮＡを確認するために、λｇｔ　１０　（Ｉ−１４）に組み込んだＨＵＴ− １０２Ｂ２からのｃＤＮＡライブラリーからの１０’個のファージ・プラークを 、ランダムブライミング法（ｒａｎｄｏｍ　ｐｒｉｍｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ）　 　（１−１５）を使用して標識した部分長のＡｃｔ−２のｃＤＮＡ挿入部でスク リーンした（１−１５）。 ファージのＤＮＡをニトロセルロースに結合せしめ、５０％のホルムアミド、５ ×〔ボンハルト（Ｄｅｎｈａｒｄｔ’　ｓ）溶液）、５ｘＳＳＰＥ、Ｏ１１％Ｓ ＤＳおよび１００μｇ／ｍｌ鮭精子ＤＮＡ中、４２℃に一夜保ってハイブリッド 形成した。濾紙を、２ＸＳＳＣ，０，１％ＳＤＳ中２０分間にわたるので３回そ して０．ｌＸ５ＳＣ，０゜１％ＳＤＳを使用して５６℃で３０分間にわたるので ２回洗浄しそしてオートラジオグラフィーした。 ＤＮＡの配列決定（ｓｅｑｕｅｎｃｉｇ）　、配列決定は、Ｍ１３ファージＤＮ Ａとシークエナーゼ（Ｓｅｑｕｅｎａｓｅ＞　　Ｃ米国、バイオケミカル・コー ポレーション〕を使用し、製造者の推薦に従って、ジチオキンチェーンターミネ ータ−法（ｄｉｄｅｏｘｙ　ｃｈａｉｎ　ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏ ｄ）により行った〇ノーザンプロット分析、　　ホルムアルデヒドゲル上、全細 胞のＲＮＡ（１０ａｇ）またはポリΔ＋ＲＮＡ　（４−５μｇ）を電気泳動し、 ニトロセルロースの濾紙〔シュライヒエル　アンド　シュエル（Ｓｃｈｌｅｉｃ ｈｅｒ　ａｎｄ　５ｃｈｕｅｌｌ）に移動し、そしてｔｆｆｉｐ−標識したＡｃ ｔ−２のｃＤＮＡにハイブリッド形成した。 ゲノムのサザーンプロット、　　Ｕ９３７または４２８細胞からの１０ａｇのＤ ＮＡを、示した酵素で切断し、１％アガロースゲル上で分析し、そして下記の製 造者のプロトコールに従って、「遺伝子スクリーン・プラス・ナイロンＭ（Ｇｅ ｎｅ　５ｃｒｅｅｎ　Ｐｌｕｓ　ｎｙｌｏｎ　ｍｅｍｂｒａｎｅｓ）　（シュボ ン社製）」に移してからハイブリッド形成した。 ｉｎ　　ｖｉｔｒｏ転写と無細胞翻訳、　　−０，７ｋｂのＡｃｔ−２のｃＤＮ Ａを、Ａｖａ　　Ｉで切断し、クレノーとｄＮＴＰｓで充填し、そしてＥｃｏ　 　ＲＩで消化して、人工の５’　Ｇ−Ｃ末端を除いであるほぼ完全な長さの断片 （挿入部の３′末端を通して２７塩基）を得た。この断片を、Ｓｍａ　　ＩとＥ ｃｏ　　Ｒ１で切断ししであるｐＧＥＭ−１（プロメガ・バイオチック（Ｐｒｏ ｍｅｇａＢｉｏｔｅｃ））にサブクローンした。ＲＮＡを、プロメガ・バイオチ ック（Ｐｒｏｍｅｇａ　Ｂｉｏｔｅｃ）からの指示に従って、ＳＦ３またはＴ７ プロモーターを使用して両方の鎖から転写した。この転写反応は、ＤＮＡ鋳型を ＲＮＡ　ａ　ｓ　ｅのないＤＮＡａ　ｓ　ｅで分解することにより終わりとした 。 そして、ＲＮＡをフェノール／クロロホルムで抽出し、エタノールで沈積した。 ＲＮＡは、ｍ５３−システィン（＞６００　　Ｃｉ／ｍｍｏ１．　アメ−ジャム （Ａｍｅｒｓｈａｍ））を使用する、ウサギの網状赤血球とコムギ胚芽の溶解物 〔プロメガ・バイオチック（Ｐｒ’ｏｍｅｇａ　Ｂｉｏｔｅｃ）かアメ−ジャム （Ａｍｅｒｓｈａｍ）のいずれかから購入〕を使用して翻訳した。 ある種の翻訳は、イヌの膵臓のミクロゾーム膜の存在下行った。翻訳生成物を１ ５％ポリアクリルアミドゲル上分析した。 Ａｃｔ−２のｃＤＮＡの発現、　　　ｐＡｃ−Ａｃｔ２を生成するために、−０ ，７ｋｂのＡｃｔ−２のｃ　ＤＮＡを、バキュロウィルス多角プラスミドｐＡｃ ３７３　（１−１６ａ）のＢａｍＨ１部位中にクローニングした。それによって 、Ａｃｔ−２のｃＤＮＡを多角プロモーターの支配下に置いた。ＳＦ９細胞を、 ｐＡｃ−Ａｃｔ２および野性型ＡｃＮＰＶ株Ｅ、ＤＮＡで共トランスフェクショ ンした。組換えしたバキュロウィルスのｖＡｃ　−ＡＣｔ２を単離し、プラーク ハイブリッド形成の連続的な繰り返しの手順により精製した（Ｉ−１６ａ）。 プラーク精製した組換えウィルスを得たら、ＳＦ９細胞を感染し、１Ｓ−標識し たシスティンとメチオニンで生化学的に標識した。細胞の上澄液中に分泌された 放射線標識したタンパク質は、ＳＤＳゲル上で単離し、抽出型４７７を使用した 。）上で製造者により供給されたＡＴＺプログラムに従って、連続的エドマン分 解に処した。フラクションを液体シンチレーションにより計数した。 結果 Ａｃｔ−２のｃＤＮＡの確認、　活性化したＰ　ＢＭＣのｃＤＮＡライブラリー からの１０，０００の細菌のクローンを、特別に誘導したｃＤＮＡ配列があるか どうかのためにスクリーニングにかけた。活性化したまたは休止期のＰＢＭＣか らのＲＮＡから誘導した最初の鎖のＣＤＮＡ試料を使用して、ニトロセルロース 濾紙上２回スクリーニングした。コロニーの約１％だけが、誘導した鎖にハイブ リッド形成した。ＡＣｔ−２は、誘導試料だけに選択的かつ強固にハイブリッド 形成する約０．４ｋｂのｃＤＮＡクローンであった。この発見を、未刺戟のＰＢ ＭＣ，ＰＭＡまたはＰＨＡのいずれかで１６時間にわたり活性化したＰＢＭＣｌ およびＨＵＴ−１０２Ｂ２細胞、ＨＴＬＶ−１で形質転換したＴ細胞系からのＲ ＮＡのノーザンプロットにより確定した（Ｆ　ｉ　ｇ、　　Ｉ　−ＩＡ）。休止 期ＰＢＭＣには検出できるシグナルはなく、ＰＭＡまたはＰＨＡのいずれかで活 性化したＰＢＭＣには約０．９ｋｂのバンドが検出された。より弱いシグナルは ＨＵＴ−１０２Ｂ２のｍＲＮＡを表す列（ｌａｎｅ）には検出された。 細胞特異性、Ａｃｔ−２遺伝子を発現する細胞の型を決めるために、Ｔ細胞、Ｂ 細胞、そして非リンパ球系を、ノーザンプロット分析を使用して検討した（Ｆｉ ｇ、１−ＩＢ）、既に述べたように、Ａｃｔ−２はＨＵＴ−１０２Ｂ２細胞（列 （ｌａｎｅ）１）では発現したが、ＭＯＬＴ−４またはＣＥＭＴ細胞では発現し なかった（提示せず）。Ａｃｔ−２に特異的なｍＲＮＡは、同様にＨｅＬａまた はに５６２細胞（列２，３）に検出されず、Ｓ■で形質転換した繊維芽細胞系４ ３１２および４４２９のいずれにも、骨細胞系５８８７　（データを提示しなか った）のいずれにも検出されなかった。 Ａｃｔ−２のｍ　ＲＮ　Ａは、Ｒａｊｉ（列４）、０Ｍ５４６７２　（列５）、 ＳＢ　（列８）、およびＥＰＶで感染したＢ細胞系８３９２　（列９）で僅かに 検出される（これは、オートラジオグラムの原板でよ（理解される。）が、その 検出はＮａ１ｌ−１（前Ｂ細胞、列７）　、５ＵＤＨＬ−６（列１０）中に、ま たは多発性骨髄腫細胞系Ｕ２６６（列１１）または８６６２　（列６）中に見出 せなかった。面白いことに、ＰＭＡ−刺戟したＵ９３７細胞（ヒトの組織球リン パ腫から誘導したが、単球様の特性を維持している。Ｆｉｇ、Ｉ−Ｃ）がするよ うに、ジャーカットＴ細胞は、ＰＨＡとＰＭＡとで一緒に誘導するとＡｃｔ−２ を発現するが、いずれかの薬剤で別々に誘導すると発現しない。 正常のリンパ球の活性化におけるＡｃｔ−２のｍＲＮへの時制の発現を更に特徴 付けるために、ＰＨＡで活性化した新規に単離した、ＰＢＭＣ中でＡｃｔ−２の ｍＲＮＡの発現の時間経過を検討した（Ｆｉｇ、ｌ−２Ａ）。 八ｃｔ−２のｍＲＮＡは、休止期のＰＢＭＣでは低いまたは検出できないレベル で発現するが、マイトジェン刺戟に応答すると急速かつ劇的に増加する。最高の レベルは、約４時間で発生し、そしてその後、刺戟後２４時間までに無視できる レベルに迄急速に減少した。かくして、Ａｃｔ−２の発現は、ＰＨＡに応答して 速やかに誘導されそして終了するの両方をすることを説明している。 ブドウ状球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）　Ｃｏ　ｗ　ａ 　ｎｌ　（ＳＡＣ，Ｆｉｇ、ｌ−２Ｂ）により活性化されたＢ細胞の類似の検討 も、Ａｃｔ−２のｍＲＮＡの急速な誘導と消失を示した。同様に検査したのは、 休止期の単球類とＡｃｔ−２の発現のためにリボ多糖（ＬＰＳ）で８時間にわた り刺戟した単球類であった（Ｆｉｇ、ｌ−２）。八ｃｔ−２のｍＲＮＡは、未刺 戟の細胞には無いが、ＬＰＳで誘導した半球では容易に検出された。 マイトジェンの刺戟に曝された若干数の異なる正常の細胞の型においてＡｃｔ− ２が発現されるということを観察すると、活性化に続く全ての正常細胞において Ａｃｔ−２が発現されて細胞周期を妨害する可能性を提起した。マイトジェンに 対する休止期のリンパ球の、モしてｃ−ｍｙ　ｃ発現に係わる成長因子に対する 休止期の繊維芽細胞の繁殖応答の間にある平行関係を観察するに、正常のヒト胎 児の肺（ＨＦＬ−１）の繊維芽細胞の休止期のそして血漿で刺戟した初期の培地 におけるＡｃｔ−２発現を検討した。しかしながら、ｃ−ｍｙｃとは対照的に、 血漿はＡＣｔ−２のｍＲＮＡの発現を誘導できなかった（データを提示しなかっ た。） 完全な長さの八Ｃｔ−２のｃＤＮＡの確認と配列決定。 ｃＤＮＡの長さとノーサンプロット上に検出されたバンドの間の大きさに違いが あるので、次に進めることはもっと長いｃＤＮＡを単離することである。試料と して、０．４ｋｂのＡｃｔ−２のｃＤＮＡを使用して、増幅したＨＵＴ−１０２ Ｂ２のｃＤＮＡライブラリーからの１０６個のλｇｔｌＯプラークをスクリーニ ングした（１−１４）。約−０，７ｋｂの同様の大きさの４個のクローンを確認 し、それらの全てを、０．４ｋｂのｃＤＮＡにより確認した同じ０．９ｋｂのｍ ＲＮＡにハイブリッド形成した。配列決定の戦略、ＤＮＡ配列、および推定した アミノ酸配列をＦｉｇ、Ｉ−３に示した。 配列の顕著な特徴を下記のように纏めることができる（１）Ａｃｔ−２は新規な 遺伝子を表す。ＤＮＡとタンパク質相同検索プログラムを使用することによる、 ＤＮＡ配列と予想されるアミノ酸配列の比較は、最近の遺伝子パンク（ＧｅｎＢ ａｎｋ）　（５５版、１９８８年３月３１日版）とＮＢＲＦ　（１６版と３４版 、１９８８年３月３１日版）のデータベースにある公開の配列と同一のものを見 出せなかった。゛ （２）このＤＮＡ配列は、９２個のアミノ酸に該当する２７６個の塩基対の読み 取り枠を含む。この読み取り枠は、５’ＡＵＧを最も利用しており、これは真核 生物の翻訳の開始に概して利用されるものである。更に、第１のＡＵＧの領域は 、真核生物の開始部位のために決められた共通配列と高い相同性を持つ　（１− １７）。 （３）このｃＤＮＡはｍＲＮＡの３′末端へ伸長しているように見える。という のは、これは古典的なＡＡＵＡＡＡポリアデニル化シグナル（１−１８）とポリ Ａ末端の開始を持つからである。３′の非翻訳領域もＡ−Ｔが豊富なドメインを 含む（枠内、議論を参照）。 （４）強力なＮ−結合したグリコジル化部位（Ａｓｎ−に−３ｅｒ／Ｔｈｒ）が ない。 （５）６個のシスティン基がある：かくして、分子内または分子間のジスルフィ ド結合が形成される可能性がある。 （６）推定するアミノ酸配列から発生するカイトーヅーリトル（Ｋｙｔｅ−Ｄｏ ｏｌｉｔｔｌｅ）の嫌水性プロット（Ｆｉｇ。 ■−４）を検討すると、極端に嫌水性のＮ−末端基が明瞭になってくる。ヘイイ ン（Ｈｅｉ　ｊｎｅ）の重量マトリックス分析法（ｗｅｉｇｈｔ　ｍａｔｒｉｘ 　ａｎａｌｙｓｉｓ）を使用すると、これはシグナルペプチドであるように見ら れ（１１，３の計算評点から）、その切断点は５ｅｒ２３とＡ１ａ２４の間であ ると予測される（１−１９）。切断部位はサイトカイン類のＩＬ−２（１−２０ ）、ＩＬ−３（１−２１）、ＧＭ−ＣＳＦ　（１−２２）でも利用されている。 Ａｃｔ−２が機能的ｍＲＮＡをコードしていることを証明するために、次に、ｃ ＤＮＡをｐＧＢＭ−１中にサブクローンし、センス鎖とアンチ−センス鎖の両方 をＳＦ３およびＴ７プロモーターを利用して転写した。得られたＲＮＡ種をコム ギの胚芽と網状赤血球の溶解物中翻訳した（Ｆｉｇ、ｌ−５）。 センス鎖〔列（ｌａｎｅ）Ｂ）は検出され得る生産物中に出たが、アンチ−セン ス鎖〔列（ｌａｎｅ）Ａ）は出なかった。この検出できる生産物は、１０，１９ ９ダルトンの計算分子量に類似した約１１，０００ダルトンの見かけのＭｗで移 行した。運悪く、網状赤血球の溶解物中の翻訳では、グロビンに伴った人工物が Ａｃｔ−２の初期の翻訳生産物と共に移行した（提示しなかった）が、コムギの 胚芽の溶解物は明瞭な結果を与えた。 推定上のシグナルペプチドの切断と小胞体のルーメン（］、ｕｍｅｎ）中への移 行を評価するために、イヌのミクロゾーム膜を使用して、次の実験を行った。ミ クロゾーム膜は、網状赤血球の溶解物の系中よりは、往々にしてより効果的であ る。 かくして、このような翻訳を伴う移動／切断実験は、網状赤血球溶解物の系を使 用し、次いで膜類を３１，０００×ｇでベレットにし、そしてそれを１０ｍＭｔ ｒｉｓ、０．１５ＮａＣ１，０，２Ｍ砂糖、ｐＨ７，５で洗浄することにより行 われた。次いで、膜を検体の緩衝液中で煮沸し、ＳＤＳゲル上分析した。この方 法では、汚染するグロビンは膜フラクションから除くことができた。 初期の翻訳生産物は膜のフラクションと連合しておりＣ列（ｌａｎｅ）Ｃ）、こ れはＮ〜末端がシグナルペプチドのように機能していることを暗示している。 配列に基づ（と、もしも推定上のシグナルペプチドか切断しているとするならば 、２３９１ダルトンの変化が期待された；しかじ、顕著な変化が認め゛られなか ったことは、推定上のシグナルペプチドが切断していないだろうことを暗示して いた。 トリトンＸＸ１００の不在下または存在下でのプロテナーゼＫによる、列Ｃに見 られる膜と連合するバンドの処理は、界面活性剤の存在下非常により多くの完全 な分解を起こした。これらのデータは、タンパク質は膜類に結合するがシグナル ペプチドの切断は証明出来なかったことを示している。 完全な長さのＡｃｔ−２のｃＤＮＡが分泌型の生産物をコードしているかどうか そしてシグナルペプチドは切断したかどうかの重要な問題を解決するために、Ａ ｃｔ−２の−０，７ｋｂのクローンを、ＳＦ９細胞中胸中換えバキュロウィルス として発現させた（準備中の原稿）。 細胞を５ｓ３−メチオニンとシスティンで生化学的に標識化し、上澄液を回収し 、ＳＤＳゲル上で電気泳動に処し、そして各々の標識物について、特徴付けのＡ Ｃｔ−２のタンパク質のバンドを切り取った。物質を水中に抽出してそして配列 を決定して、推定上のシグナルペプチドが切断したことを証明した（表ｉ−１を 参照）。 サイクル３におけるメチオニンそしてサイクル１１と１２におけるシスティンの 検出は、初期の翻訳生産物の５ｅｒ−２３とａｌａ−２４の間で切断が起こるこ とを確証した（Ｆ　ｉ　ｇ、　　Ｉ　−３を参照）。 次に、ゲノムのサザーンプロット法を行うのにｃＤＮＡを利用した（Ｆｉｇ、ｌ −６）。切断の比較的簡単なパターンが得られた。同じプロットをインターロイ キン−２（ＩＬ−２）受容体ｃＤＮＡ　（ＩＬ−２受容体はシングルコピー遺伝 子によりコードされている）と７１イブリツド形成した。そして類似した強さの バンドを確認した（提示しなかった。）。これらのデータは、シングルコピーま たは低コピー数遺伝子を表すＡｃｔ−２と殆ど一致している。 最後に、ＰＨＡまたはＰＨＡ＋ＰＭＡで刺激したＰＢＭＣにおけるＡｃｔ−２、 ｃ−ｆｏｓ、およびＣ−ｍ）’Ｓの発現の時間経過を直接に比較した。そして、 Ａｃｔ＝２のｍ　ＲＮ　Ａはｃ−ｆｏｓと協同して誘導されることそしてその最 高の発現はｃ−ｍｙｃのそれと一致することを見出した（Ｆｉｇ、ｌ−７）。 Ｎ　ｏ　、　　　　　　　　ｃｐｍ　　　　　　　　　　　　　　ｃｐｍ〔サイ クル３におけるメチオニンのためのサイクル４における、そして位置１１と１２ におけるシスティンからのサイクル１３と１４における（実験２を参照）〕高い キャリオーバーは、連続的エドマン分解で非能率的に切断する成熟タンパク質（ Ｆ　ｉ　ｇ、　　Ｉ−４を参照）の位置２，７．および８におけるプロリンの存 在に因ると期待された。 議論 この研究は、正常の活性化したＰＢＭＣからのｍＲＮＡから作成したｃＤＮパラ イブラリ−中の、Ａ、　ｃ　ｔ−２と表示した（活性化ＰＢＭＣのｃＤＮＡ、Ｎ ｏ、２）新規の活性化遺伝子を確認し、特徴付けした。 Ａｃｔ−２は、９２アミノ酸の読み取り枠をコードしている。ヘイイン（Ｈｅｉ ｊｎｅ）の重量マトリックス分析法（ｗｅｉｇｈｔ　ｍａｔｒｉｘ　ａｎａｌｙ ｓｉｓ）により、シグナルペプチドであると強く予測される非常に嫌水性のＮ− 末端基を含有する。ｉｎ　　ｖｉｔｒｏの翻訳分析はシグナルペプチドの切断を 証明できなかったが、組換えＡｃｔ−２／バキュロウィルス−ベクターは虫網胸 中では発現され、上澄液にＡｃｔ−２タンパク質が豊富にあることが見出された 。更に、放射線標識したタンパク質のＮ−末端配列決定は、シグナルペプチドが 予測されたように切断することを示している。Ａｃｔ−２が膜に連合した形でも 存在する興味ある可能性が残っている。最近、正常の活性化したヒトリンパ球中 で生産されたＡｃｔ−２タンパク質の分布を直接に確認することが可能になるよ うに抗体が生産されている。 ３′非翻訳領域も、それがＡ−Ｔ豊富であり、共通配列ＡＴＴＴ八（１−２３） とＴＴＡＴＴＴＡＴ　（１−２４）を含有し、この共通配列は原ガン遺伝子、お よび腫瘍壊死因子、リンホトキシン、ＩＬ−１（αとβの両方）、多数のインタ ーフェロン、そしてＧＭ−ＣＳＦを包含する分泌因子の多数において共通配列と して確認されているということで顕著な興味がある。 共通のＴＴＡＴＴＴＡＴは、概して、哺乳動物のｍＲＮＡには共通して見出され ないが、炎症応答に関連するタンパク質をコードしているｍＲＮＡ　（１−２４ ）には特に広く見出される：かくしてＡｃｔ−２中にこの配列があるということ は、この遺伝子が新規のサイトカインを表現しているかも知れないという考えを 支持している。 これらの配列はｍＲＮＡの比較的な不安定性と相関しく１−２３）、誘導された ｍＲＮＡの最高レベルから速やかに減退することと一致している。 この遺伝子は、活性化の速やかな時間経過の観点で特に興味がある。休止期のヒ トのＰＢＭＣは、生理的に静止の状態の正常の細胞を表している（Ｇ、）（１− ２５、ｌ−２６）。抗原またはマイトジェンによる活性化の結果；細胞の増大、 およびＲＮＡの含有量、新規遺伝子の転写および新規タンパク質の合成の増加が ある。それにより細胞には、細胞増殖を促進するＩＬ−２（Ｉ−２７）のような 別のシグナルに対する感受性が付与される。 マイトジェン刺激に対する応答におけるＡｃｔ−２発現の早い誘導とｃ−ｆｏｓ およびｃ−ｍｙｓとのその協調的発現は、Ａｃｔ−２が細胞成長と繁殖において 初期の強力な重要な役目をしているかも知れない可能性と一致する。 Ａｃｔ−２は、休止期のＰＢＭＣ中では、極小に発現されるか発現されない。し かしこれは、ＰＨＡまたはＰＭＡによるＴ細胞の、ＳＡＣによるＢ細胞の、また はＰＰＳによる単球類の活性化の俊速やかに誘導された。 しかし、ＨｅＬａのに５２細胞における非発現、そして静止しているヒト繊維芽 細胞の血漿刺激に対する応答においてのそれの不成功により明白であるように、 Ａｃｔ−２は全ての活発に成長している細胞中では発現されない。　この部で記 述した実験は、本発明の最も重要な実施態様の若干数を説明したものであり、完 全な長さのＡｃｔ−２のｃＤＮＡはこのＤＮＡで形質転換した虫の細胞中で発現 でき、そして適当にプロセス（ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ）した生産物がこれらの形質 転換した細胞から分泌されることを示している。 刊行物 ■−１，ヴアイス、ニー９．インボデン、ジエー。 バーディ、ケイ０．マンガー、ビー、およびストール。 ジｘ　−、＋　　（１９８６）＋　Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　４ ．５９３−６１９゜ ｌ−２，アシュマン、アール、ニス、（１９８４）「　基礎免疫学（Ｆｕｎｄａ ｍｅｎｔａｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）　Ｊ　＋　ラヴアン　プレス、ニューヨ ーク　ｐｌｌ、２６７−３００゜■−３，グレイ、ビー、ダブリユウ、、ラング 、ディー、ダブリュー９．ナシヤリアン、アール０．シモンセンシー、シー０． プリンク、アール９．シェルウッド、ビー。 ジェー、、ワラツク、ディ、エム０．ベルガー、ニス、エルレビンソン、ニー、 ディ、及びゲデル、ディ、ブイ。 （１９８２）、ｒネイチ−？　−（Ｎａｔｕｒｅ）ロンドン２９５゜５０３−５ ０８゜ Ｉ−４，コクラン、ビー、エイチ、、リフエル、ニーシー８．およびスチレス、 シー、デー（１９８３）ｒ細胞（Ｃｅｌｌ）　Ｊ　３３．９３９−９４７゜■− ５，ヒルスコホルン、アール、アール、ｌアルラー、ビー１．ユアン１．ゼット 、ニー１．ギプソン、シー。 ダブリユウ、及びバゼルガ、アール、（１９８４）、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａ ｃａｄ、Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８１，６００４−６００８゜■−６，ヤナギ、ワイ 、、ヨシカイ、ワイ、、レゲット。 ケー、、クラーク、ニス、ビー１．アレキサングー、アイ。 及びマック、ティー、ダブリュー、　　（１９８４）　、Ｎａｔｕｒｅ　　ロン ドン３０８．１４５−１４９■−７，ロー、エル、エフ０．及びナサンズ、ディ ー（１９８５）　、　ＢＭＢＯＪ、　４．３１４５−３１５１■−８，ロベ、シ ー、ジー９．ハベル、シー、及びブリックリー、７−ル、シー、　Ｐｒｏｃ、Ｎ ａｔｌ、　Ａｃａｄ、Ｓｏｃ、［ＪＳＡ８３、１４４８−１４５２ １−９．　　　　）ネレ、シー６．デマルス、アール、及びロング、イー、オー 、　　（１９８５）　１１！ＭＢＯＪ、　４．２８３９−２８４７゜ １−１０．　　　チャング、エヌ、ティー１．タム、ニス、エイチ、、クング、 ビー、シー、及びチャング、ティー、ダブリュー、　　（１９８４）　、　Ｍａ ｌ、Ｂｉｏｌ、Ｍｅｄ、　２，１６１−１６５、■〜１１．　　チルギン、ジュ ー。エム１．ブリッピラ。 ニー、イー１．マクドナルド、アール、リュー、及びクツター。ダブリュー、リ ュー、（１９７９）、ｒ生化学１１８、５２９４−５２９９． １−１２．　　オクヤマ、エイチ、及びベルグ、ビー３（１９８２）　、　Ｍｏ １．　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、２．１６１−１７０１−１３．　　　グランステ ィン、エム、及びホグネス、ディー、ニス、　　（１９７５）　、　Ｐｒａｃ、 Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、５ｏｃ５．ＵＳＡ７２、　３９６１−３９６５゜ １−１４．　　　レオナルト、ダブり二一、ジェー、、デッパー、ジエイ、エム ３．クラブツリー、ジー、アール０．ルデイコフ、ニス１．パンプレイ、ジエイ 、、ロブ、アール、ジェイ１．クロンケ、エム１．スベトリック、ビー、ビー１ ．ペファー、エヌ、ジェイ、、ワルドマン、ティー、ニー、及びグリーン、ダブ リュー９　シー、　　（１９８４）　Ｎａｔｕｒｅ３１１．６２６−６１０゜ ｌ−１５，フェインベルり、ニー、ビー、及びフ才ゲルステイン、ビー、　　（ １９８３）　Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　１３２゜スチレス、シー、ディー、 及びレーダー、ビー、（１９８３）　、　Ｃｅ１ｌ　３５，６０３−６１０　。 ｌ−１ｅａ、エム、ディー、サマー及びジー、イー、スミス「バクロビールス　 ベクターおよび昆虫細胞培養操作の手引（Ａ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｍｅｔｈｏ ｄｓ　ｆｏｒ　Ｂａｃｕｌｏｖｊｒｕｓ　Ｖｅｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　Ｉｎ５ｅｃ ｔ　Ｃｅ１ｌ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ　）　Ｊテキサス　アグ リカルテャル　エックスベリメント　ステーション　ブレチンｎｏｉ５５５．　 ｔ９８７．１−１７．　　　コザク、エム、　　（１９８７）　Ｎｕｃ、Ａｃ１ ｄｓ　ｒｅｓ、　１５．８１２５−８１４８゜ １−１８．　　　ブロードフット、エヌ、ジエー及びブラウンリー、ジー、ジー 、　　（ｆ　９７６　）　Ｎａｔｕｒｅ　２６３，２１１−２１４゜ ｌ−１９，フォノ　ヘイシネ、ジー、（１９８６）Ｎｕｃ、　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ ｓ、　１４．４６８３−４６９０１−２０．　　　タニグチ、ティー０．マツイ 、エイチ、、フジタウティー１．タカ才力、シー、ｌカシ７．エフ。ヨシモトア ール、及びハム口、ジェ−（１９８３）　Ｎａｔｕｒｅ　３０２゜３０５　−３ １０゜ ］−２１，ヤング、ソイ。シー９．カレッタ、ニー、ビー０．テンプル、ビー、 ニー０．チュング、エム、ビー０．コバシク、ニス、゛、ウイテックーギアノチ 、ジエー、ニス。 、リャリー、ニー、シー０．クリツ、アール８．ドナウ、アール、イー９．ロン グ、ジー、ジー、及びクラーク、ニス。 シー、　　（１９８６）　Ｃｅ１ｌ　４７．３−１０゜ｌ−２２，ウヲング、ワ イ、シー９．　カレッタ、ニー。 ビー、テンプル、ビー、ニー、ｌウィルケンス、チー。エム０．リャリー、ニー 、シー２．ルクセンベルグ、ディー。 ビー０．ジョンズ、ニス、ニス０．ブラウン、イー、エル。 、カイ、アール、エム、ｌオル、イー、−シー９．シヨマーカー、シー１．ゴル デ、ディー、ダブリュー９．カウフマン。 アール、リュー２．ヒユイツク、アール、エム０．ロング。 イー、ニー、及びクラーク、ニス、シー、（１９８５）　５ｃｉｅｎｃｅ　２２ ８．８１０−８１５１−２３．　　　シャウ、ジー、及びカメン、アール、（１ ９８６）　　Ｃｅ１ｌ　４７，３−１０゜１−２４．　　　キャブト、ディー６ ．ボイトラー、ビー０．ハルトング、ケー、、サーヤー、アール１．ブラウン− シマー。 ニス、及びセラミ、ニー、　　（１９８６）　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ。 ＳＯＣ，ＵＳＡ　　８３．１６７０　−１６７４゜１−２５．　　　カクザマレ ク、エル８．カラベレッタ、ビー、及びバセルガ、アール、　　（１９８５）　 Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。 Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ　８２．５３７５−５３７９゜１−２８．　　 　リード、ジュー。シー０．アルバー、シェープイー、ノウエル、ビー、シー、 及びフーバー、アール。 ジー、　　（１９８６）　　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ｓｏｃ、　［ＪＳＡ　８ ３，３９８２−３９８６゜ １−２７．　　ステルン、ジエー、ビー、及びスミス、チー。ニー、５ｃｉｅｎ ｃｅ　２３３．２０３−２０６゜丈］ＬＱ」Ｌ巳 ヒトＴ細胞のマイトジェン活性に 対する初期の転写反応の複雑さ この章は６０（ｉｌより多い新規なｃＤＮＡクローンの分離および特徴付けを記 載する。これらはマイトジェン活性に続いてヒト末梢血Ｔ細胞のままにあるとい う即時転写反応の部分より成る。この初期の反応は誘導遺伝子の絶対数において 並びにその規則の多様性においても大変複雑である。活性化Ｔ細胞と発現される 大部分の遺伝子は正常なヒト繊維芽細胞の活性化反応を分担するけれども、相当 数のものかそれらの組織特異性においてより制限されかつ従って活性化Ｔ細胞の 分化された機能をエンコードするかまたは影響を与える。さらに活性化遺伝子は その誘導の速度論、シクロヘキシミドに対するその反応並びに免疫阻害薬シクロ スポリンＡに対する感受性に基いて分化することかできる。この後者の医薬は１ ０個より多い誘導遺伝子の発現を阻害することに留意すべきてあり、このことは この作用物質の作用について広範な遺伝子機構を示唆する。 １紅又ｌ」１ 糺庭亙１　　ヒト末梢血Ｔ細胞は健康な志願者から得そしてＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙ ｐａｑｕｅ勾配のナイロンウールカラムに通して分離した。生成した細胞製剤は 、ａｎｔｉ　−ＣＤ　３染色により判断すると、−貫して９０％以上Ｔ細胞てあ った。ＰＢＴ細胞はｌＯ％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含有するＲＰＭＩ　　１６ ４０中において２ｘ１０６細胞／　ｍ　１の濃度にて培養した。ＰＢＴ細胞は種 々の期間の時間の間Ｐ　ＨＡ　Ｐ　（１ｇ　ｇ　／　ｍ　１　；　Ｂｕｒｒｏｕ ｇｈｓ−Ｗｅｌｃｏｍｅ　Ｃｏ、）およびＰＭＡ　（２ｏｎｇ／ｍｌ）で、シク ロヘキシミド（１０μｇ　７ｍ　１　）を用いてまたは用いずに刺激した。 ジャーカット細胞系はに、　Ｈａｒｄｙより提供を受けた。ジャーカット細胞は １０％ＦＣＳおよび２５＃Ｌｇ／ｍｌゲンタマイシンで補充したＲＰＭＩ　　１ ６４０中に生存させた。 シャーカット細胞は種々の期間の時間の間ＰＨＡ−Ｐ（Ｉｇｇ／ｍｌ）およびＰ ＭＡ　（２０ｎ　ｇ／ｍ　１　）で、シクロスポリン、６．　（１４ｇ　７ｍ　 １　；　５ａｎｄｏｚ）を用いてまたは用いずに刺激した。ヒト繊維芽細胞系、 ＣＣＤ　−１１ＬＵおよびＷ　Ｉ　３Ｂはアメリカンタイプカルチャーコレクシ ョンより得た。繊維芽細胞は１０％ＦＣＳを含むＭＥＭ中に集めて成長させそし てその後０．２５％ＦＣ３を含むＭＥＭ中におい−て３ないし５日の間生存させ た。ｍ長を再開始するために、使い尽くした培地を、２０％ＦＣ８を補充しシク ロヘキシミド（１０ｐ−ｇ　／　ｍ　１　）て含みまたは含まないＭＥＭに置き 換えた。 クローニン　およ　ハ　　１・・　　　　ＰＢＴ細胞を上記したように分離しか つ培養した。ＲＮＡを（Ｔｌ−８）て記載したように未刺激細胞からまたはＰＨ Ａ−ＰおよびＰＭＡで、シクロヘキシミドの存在下４．５時間の間細胞を刺激し た後に分離した。　ｐｏｌｙ＾＋　ＲＮＡをｏｌｉｇｏ−ｄＴカラム（ＩＩ−３ ）を通る一回の通過により精製した。ｏｌｉｇｏ−ｄＴ　ｐｒｉｚｉｎｇ　（１ ８）を利用して活性化Ｔ細胞からの２０４　ｇ　ｐｏｌｙ　Ａ＋　　ＲＮＡより ｃＤＮＡを合成した。該ＲＮＡの加水分解後に、このｃＤＮＡを未刺激細胞から ハイブリッド形成して１０倍過剰のｐｏｌｙ　Ａ＋　　ＲＮＡを持つ２０００モ ルｘ　ｓ／１のｃｏｔ値とした。その後−末鎖分子を二本鎖ｃＤＮＡ　：　ｍＲ ＮＡハイブリッドからヒドロキシアパタイトカラム（ＩＩ−１４、ＩＩ−２０＞ を使用したクロマトグラフィーにより分離した。最初のラウンドの引き抜きの後 、カウントの分布より判断するに、１５％の分子が一本鎖フラクションに３いて みられた。このフラクションを再び未刺激細胞からハイブリッド形成して１０倍 過剰のｍＲＮＡとし、そしてこの二回目ラウンドの引き抜きにより約９０％の一 本鎖材料を得た。　５ｅｐｈａｒｏｓｅ　ＣＬ−６８カラム上でのサイズフラク ション化に続いて、サイズにおいて４００個のヌクレオチドより大きいｃＤＮＡ 分子は、第二の鎖合成のためにＤ　Ｎ　Ａ　　Ｐｏ１ｙ■ｅｒａｓｅ　Ｉにより 鋳型とされて使用した。続いて二本鎖ＤＮＡは標準手順（ＩＩ−１２）に従って ｌａｍｂｄａ　ｇｔ　１０の中にクローン化した。　４５，０００個の個々のク ローンのベースを持つライブラリーを得た。約４０％の引き抜きｃＤＮＡライブ ラリーを上記の通り合成された引き抜きｃＤＮＡプローブで、例外として高い特 異活性（５ｘ　　１０８ｃｐｓ／ｕｇ）に標識化しそしてたった一回　ＩＩ−引 き抜きされたプローブで、スクリーニングした。引き抜きプローブを用いた三回 目のスクリーニングおよびプラーク精製に続いて、異なるスクリーニングを行な った。二重濾過物を、活性化細胞ｍＲＮＡから調整したｃＤＮＡプローブおよび 未刺激細胞ｍＲＮＡから誘導したｃＤＮＡプローブにハイブリッドした。５２３ 通りに分化したハイブリッド化クローンを得た。 ４乙ユ、ヅ≦乙ｊＬ折　　全細胞のＲＮＡをグアニジンイソチオシアナートて抽 出しそして　５．７　　Ｍ　ＣｓＣ］　（ＩＴ−８）に通して遠心分離により精 製し、ホルムアルデヒド−アガロース　ゲル中で電気泳動して、遺伝子スクリー ン膜フィルター（ＮＥＮ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）上に斑点を付 け、モして３２ｐ−標識ｃＤＮＡ挿入物にハイブリッドした。 ＲＮＡの定量負荷をβ−２ミクログロブリンプローブへのハイブリッド形成によ り測定した（データは図示せず、）。 Ｌ三二ｊ　プローブは以下の個人および団体より供給を受けた。　　：　ＧＭ　 −ＣＳ　Ｆ　　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ；　Ｔ　−インターフェ ロン　Ｍｅｌｏｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；　ｃ　−ｆ　ｏ　ｓＤｒ、Ｔ、 Ｃｕｒｒａｎ；　Ｉ　Ｌ　−２レセプター　Ｄｒｌ、Ｇｒｅｅｎｅ　；　Ｉ　Ｌ −３Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ’；　Ｍｅｔ−及びＬｅｕ−プレプ ロエンケファリン（ｐｒｅｐｒｏｅｎｋｅｐｈａｌｉｎ）　Ｄｒ、Ｓ、５ａｂｏ ｌ　；ヒトＩＬ−４ＡＴＣＣ：ｐ５３　　Ｄｒ、Ｄ、Ｇｉｖｏｌ；リンフォトキ シン　Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ　；　Ｉ　Ｌ　−５Ｄｒ、に、Ａｒ１ａ（ＤＮＡＸ） 　；オルニチン−デカルボキシラーゼ　Ｄｒ、Ｄ、Ｎａｔｈａｎｓ　；　ｂ　ｃ 　１−２Ｄｒ、Ａ、Ｂａｋｈｓｈｉ　；　Ｉ　Ｌ　−６Ｄｒ、Ｈ，Ｇｏ、Ｉｄｓ ｔｅｉｎ　；　ｃ　−ｍ　ｙ　ｂＤｒ、Ｆ、Ｍｕｓｈｉｎｓｋｉ　；　ＨＳ　Ｐ 　７０及び非巻きＡＴＰａｓｅＤｒ、Ｒ，Ｍｏｒｉｍｏｔｏ　ＩＩＤｒ、Ｍ、５ ｐｏｒｎはニックトランスレーション化ＴＧＦ−ベータプローブを提供した。 ■ ；　゛　　　の　　　　クローニン　　　マイトジェン活性化Ｔ細胸中のクロー ン即時誘導遺伝子に、この仕事には引き抜きｃＤＮＡクローニングの方法を用い て、引き抜きプローブハイブリッド形成に続いて、これら技術通りにその成熟ｍ ＲＮＡか低いレベルて活性化か現われるところの遺伝子（ＩＩ−１４、１１−２ ０）でさえ検出するのに最も大きい感度を与えた。この手順は図Ｉｌｌに要約し て示す、ヒト末梢血Ｔ細胞はマイトジェン植ｅｆｆ凝集素（ＰＨＡ）およびホル ボール１２−ミリステート　１３−アセテート（ＰＭＡ）並びにタンパク質合威 阻害剤シクロヘキシミドの存在下て４．５時間の間多クローン的に活性化した。 後者の作用物質は多くの成長関連遺伝子（ＩＩ−１，ＩＩ−２７、ＩＩ−３０、 １１−３４）を超誘導（５ｕｐｅｒｉｎｄｕｃｅ）することか知られている。加 えて、シクロヘキシミドはＩＬ−２およびＩＬ−２レセプタ一合成および相互作 用の後に起きるｍＲＮＡｕ導を防止する。このことは、活性化細胞の初期反応に ついての分析を焦点にして、新しいタンパク質合成に独立して誘導されるそれら 遺伝子により定まる。これまで、およそ４０％の引き抜きｌａｍｂｄａｇｔｌＯ ｃＤＮＡライフラリ−を引き抜きプローブてスクリーニングした。引き抜きプロ ーブにハイブリ・ントした精製フｑ−ジを、さらに、活性化されそして生存して いるＴ細胞ｍＲＮＡから合成されたｃＤＮＡプローブかファージの二重フィルタ ー上て使用されるところの異なるスクリーンにかけた。最後に、引き抜き方法論 および異種スクリーニング方法論の双方により判断した通りに、誘導ｃＤＮＡを しみ付けしたところの５２８個のファージクローンを選択した。 これら　５２８個のファージクローンの中からはつきりした遺伝子の数を決定す るために、次の段階はサックローン化ｃＤＮＡ挿入物を　５２８個のファージて 交差ハイブリッドすることとした。この方法において、６６個の特有ＣＤＮＡク ローンを同定し、その大部分ははっきりした遺伝子を表現すると思われる。限ら れた数の群は同じｍＲＮＡのおこなるセグメントから誘導することかでき、よっ て個々の遺伝子の過大な評価に導く。しかしながら、５２８個のファージのうち の　１２０個はこれまてに試験された選択されたｃＤＮＡ挿入物にハイブリッド されなかったのて、特有の誘導遺伝子の数は６６個を越えないであろう、交差ハ イブリッドを経て与えられた群に属する分離されたファージクローンの数は相畠 に変動しそして工ないし８６個程度のファージクローンの範囲にある（参照表１ １−２　　説明文）、４４個の新規な誘導遺伝子クローンはさらに研究した（下 記参照）、ノーザンブロツ１−分析により全てを誘導可能にそして、二重の例外 を除き、一本サイズのメツセージにハイフリットした（表１ｌ−１）。さらに、 ｃＤＮＡ挿入物のうち反復性配列を含むものは無かったか、サザンプロット分析 により測定したところ、二重のものは小さいマルチ−遺伝予科のメンバーである ことが明らかとなった（表１ｌ−１）。 引き抜きライブラリーおよび５２８個の選択されたファージクローンか既に記載 した誘導遺伝子を表わすところの程度を評価するために、双方を、■細胞中て誘 導しうると知られた多くの遺伝子を用いた交差ハイブリット分析に受けさせた。 引き抜きライブラリーの組成はＩＬ−２、ＧＭ−Ｃ３Ｆ、ｇａｇ＋ｍａ−Ｉ　Ｆ Ｎ、ｃ−ｍｙｃおよびＣ−ｆｏｓをエンコードするクローンについて豐富化によ り測定したところ、典型的な活性化Ｔ細胞表現型を表わすことを示し、その後者 はＴ細胞中でシクロヘキシミドの存在下４．５時間舗道したが、Ｃ−ｍ　ｙ　ｃ 　（ｌｌ−３６）よりもずっと小さい程度にまで誘導された。５２８個の選択フ ァージの中でいくつかのｃ−ｍｙｃの分離物か検出された。加えて、　５２８個 のファージはＩＬ−２レセプター、ＩＬ３およびＩＬ−４成長因子そしてＭｅｔ −及びＬｅｕ−プレプロエンケファリン（ＴＩ−４６、１１−４７、ｌｌ−４９ ）に類似したｃＤＮＡを含む（表１ｌ−１）　、分離された５２８個のファージ の中で、分析は、ＩＬ−２、ＧＭ−Ｃ３Ｆ。 −ＩＦＮ、ｃ−ｆｏｓ、ｐ５３、オルニチン−デカルボキシラーゼ、ｂｃｌ−２ ，リンフォトキシン、ＴＧＦ−ベータ、ｃ−ｍｙｂ、インターロイキン５及び６ 、熱衝撃遺伝子７０、及び非巻きＡＴＰａｇｅ（１１−６，１１−９゜１１−１ ３　、１１−２１　、　ｌｌ−２５、ｌｌ−３５、１１−３６、ｌｌ−３８、１ １−４８）の存在を除外し、多くの新規遺伝子か分離されたことを確認する。公 知の遺伝子の検出は分離した。引き抜きｃＤＮＡプローブて選択された５２８個 のファージにおいて存在しないというライブラリー中の公知遺伝子（例えばＩＬ −２）の検出はニックトランスレーション対不均質ｃＤＮＡプローブにより生し るずっと強い信号からかけ離れているという結果になった。加えて、誘導期間の 長さく４．５時間）は大多数の遺伝子にとって最適であるけれども、相対的に遅 れた速度論を発現するところの遺伝子にとっては最適でなかった。にもかかわら ず、ハイツリット形成データは、　５２８個の選択ファージは予測された遺伝子 を多くだが全てでなく包含し、そして引き抜きライブラリーは分析された公知の 誘導遺伝子を含むことを示す。 ツ　゛　　の　　　およ　シクロスギ１ンＡに　　る５ＬＩｆ　　　分離された 誘導遺伝子についての発現の不均質性を評価するために、多くの遺伝子について ｍＲＮＡレベルの速度論分析を行なった１図ｒ＋−ｚは４個の新規な誘導遺伝子 についての典型的なノーザン分析を示す０発現の一つのパターンはｐＡＴ２４９ により例示してなるが、ＰＨＡおよびＰＭＳによるＴ細胞の活性化の後に大変速 く、即ち３０分またはそれより速く、現われることを示している。ｐＡＴ４６４ について示される他の普通のパターンはわずか２ないし４時間後のｍＲＮＡ発現 を特徴とする。別のｍＲＮＡ種（例えば　ｐＡＴ１２９及びｐＡＴ１３９、図１ ｌ−２）は中間の時間て誘導した。発現の開始と期間の双方に関してＨ察された 速度論の差は、表１１−１に要約して示すか、初期の反応の高い逆規則性を示唆 するものである。およそ７０％の遺伝子（参照表１ｌ−１）はシクロヘキシミド により超誘導されそして残りのものは影響を及ばさないかまたは最小にしか及ぼ さない、シクロヘキシミドの使用は速く誘導された遺伝子の分離にとって、その 多くか遷移的に発現しそしてタンパク質合成阻害剤（例えばＰＡＴ１２９および ｐ　Ａ　Ｔ　２４９）の存在下てのみ４．５時間で検出可能となるので、批判的 なものてあった。シクロヘキシミド単独ではこれら遺伝子の発現を引き起こさな かったが（図１ｌ−２）　、その多くは転写的に規則化されていることを示して いる。９個の新しく分離された遺伝子の発現にとって詳細な必要条件は添付の用 紙（実験の部　１■１．下記）においてアドレスされている。 ヒトＣＤ４◆ヘルパー細胞系ジヤーカツトはリンフ才力インＩＬ−２およびガン マ−インターフェロン並びに■Ｌ−２レセプター（１１−１１９、ｌｌ−３７、 １１−４５）を含め、いくつかの遺伝子の誘導可能性を保つことか知られている ０本発明者は　多くの分離された遺伝子をこの腫瘍線におけるその発現および規 則性について、並びに免疫阻害剤シクロスポリンＡ　（ＣｓＡ）に対するその感 度について試験した。活性化Ｔ細胞から苦心して作られた多くのリンフ才力イン は転写的誘導（Ｉ＋−１６、ｌｌ−３７、ｌｌ−３９）すると思われるところの この作用物質により抑圧されることか知られている。図１１−３に示しかつ表１ １２に要約したように、４つの異なるパターンの発現は識別された。 試験した３５個の新しいクローン化遺伝子のうちで、２２種の発現はシャーカッ ト細胞においてＰＨＡおよびＰＭＡを用いた処理の後に誘導した。これらのうち の１１種において、誘導はＣｓＡにより本質的に影響されなかった（例えばｐＡ Ｔ６０２、図１ｌ−３）　、　Ｌ、かじながら、驚くべきことに大多数の遺伝子 の誘導は、２２のうちの１１．ＣｓＡにより抑圧された（例えばｐＡ７４６４、 図１ｌ−３）　、これは、ＣｓＡは全く大きい群の遺伝子（多分多くのリンフ才 力インおよびサイトカインを含む、）に対して普通であるところの活性化の間の 段階に影響を及ぼすことを意味し、またこれは、はっきりした活性化バスがこの 遺伝子の座のために必要とされることをさらに示唆するものである。試験した残 りの１３個の遺伝子はジャーカット細胞において誘導しなかった。誘導に続く時 間点の数で測定したところ（データ図示せず、）、これらのうち１０個（例えば ｐ　Ａ　Ｔ　　１３３．図１ｌ−３）はジャーカット細胞においていかなるメツ セージへのハイブリッド形成にも失敗している。たぶん、これらメツセージはジ ャーカットと区別される細胞型、例えばＣＤ８◆Ｔ細胞に存在する。 あるいは、ジャーカット細胞は形質転換しそして喪失もしくは変質したこれら遺 伝子またはそれらのｍＲＮＡを誘導するのに必要なシグナル機械類を有する。最 後の群の遺伝子のメンバー（３５個のうちの３（１１）はジャーカット細胞にお いて本質的に発現した（例えばｐＡＴ１２９、図１１３）、これら遺伝子はこの 腫瘍線の未制御成長に寄与しつる（ディスカッジョン参照）。 表ユ上」 速度論 挿入　＠ＲＮＡ　　５ＲＮＡ クローン　　　　頻度群１　　　サイズ　　　号イス　　　の　誘導　　　ＣＨ Ｘ　　　　　遺伝組織’　　　　　　　　［ｂｐｌ　　［核］　【分】６　効果 ０　子型ｐＡＴ１２０　　５　　１６００２０００　　６０／６０　　　Ｓ　　 　ＦｐＡＴ１２５　　４　　４００　３５００　　６０／６０　　　Ｓ　　　５ ｐＡＴ１２７　　５　　９００　２０００　　３０／６０　　　Ｓ　　　ＭｐＡ Ｔ１２９　　２　　６００　２０００　　６０／６０　　　Ｓ　　　ＭｐＡＴ１ ３３　　　　　２　　　　　６００　　　２０口０　　　１２０／２４０　　　 　Ｓ　　　　　　５ｐＡＴ１３９　　３　　８００　２５００　　６０／１２０ 　　Ｓ　　　−ｐＡＴ１４０Ｓ　　　Ｉ　　　ＺＯＯ２６００２７０／２７０　 　Ｓ　　　５ｐＡＴ１４０Ｌ　　　２　　３００　２６００　２４０／２７０　 　Ｓ　　　５ｐＡＴ１５４　　５　　８００　３４００　　３０／１２０　　Ｓ 　　　５ｐＡＴ１５８　　３　　１０００３４００　　　＋　　　　−５ｐＡＴ １８９　　１　　１１００３０００　　　＋　　　　Ｓ　　　ＭｐＡＴ２０１　 　３　　３５０　３５００　　　＋　　　　−−ｐＡＴ２０４　　３　　３６０ 　２７００　　　＋　　　　−５ｐＡＴ２２５　　　Ｓ　　　６００　３９００ 　　３０／６０　　　Ｓ　　　５ｐＡＴ２２９　　３　　６００　６７００　２ ４０／２４０”　　Ｓ　　　５ｐＡＴ２３２ｓ　　　１　　４００　２６００　 １２Ｇ／１２０　　Ｓ　　　ＭｐＡＴ２３２Ｌ　　　４　　９００　１９００　 　６０／２７０”　　Ｓ　　　ＭｐＡ７２３７　　５　　１８００　２０００　 　３Ｇ／１２０　　Ｓ　　　５ｐＡＴ２コ９　　　　　１　　　　　４００　　 　８１００　　　　　　＋　　　　　　　　−ＳｐＡＴ２４３　　　　４　　　 　１３００４５００　　　６０／４２０　　　　Ｓ　　　　　５ｐＡＴ２７０　 　　　３　　　　１２００　　２１００　　　　　＋　　　　　　　−−ｐＡＴ ２７ｆｉ　　　　　３　　　　８００　　　３３００　　　　　＋　　　　　　 　−−ｐＡＴ２８］　　　　　１　　　　９００　　９００　　　　３０／４２ ０　　　ＮＥ　　　　５ｐＡＴ３８３　　　　４　　　　３００　　２０００” 　　　１２０／２７０’　　　Ｓ　　　　　ＭｐＡＴ４０２　　　　２　　　　 ５００　　２７００　　　　　＋　　　　　　Ｓ　　　　　ＦｐＡＴ４０７　　 　　１　　　　８００　　２３００　　　６（１／６０（ｌ　　　ＮＥ　　　　 ５ｐＡＴ４１６　　　　３　　　　６００　　２４００　　　６０／１２０　　 　Ｓ　　　　　５ｐＡＴ４２８　　　　３　　　　５００　　５８００　　　　 　＋　　　　　　−５ｐＡＴ４６４　　　　　３　　　　　９００　　　９００ 　　　　１２０／４２０　　　ＮＥ　　　　　ＦｐＡ丁４６６　　　　　１　　 　　　９００　　　１４５０　　　　　　＋　　　　　　　　−５ｐＡＴ４７８ 　　　　２　　　　４００　　２２００　　　　　＋　　　　　　ＮＥ　　　　 ５ｐＡＴ４８３　　　　１　　　　３００　　１８００　　　　　＋　　　　　 　−５ｐＡＴ４８５　　　　２　　　　７００　　６８００　　２４０／２４０ 　　　Ｓ　　　　　５ｐＡＴ４９６　　　　１　　　　４００　　２０００　　 　　　＋　　　　　　−５ｐＡＴ５１６　　　　　　２　　　　　　４５０　　 　　１３００’　　　　　　十　　　　　　　　　−−ｐＡＴ５４２　　　　３ 　　　　５００　　６８００’　　　　＋　　　　　　Ｓ　　　　　−ｐＡＴ５ ６３　　　　３　　　　１８００　２４００ｈ　２７０／４２０　　　Ｓ　　　 　　ＦｐＡ丁５９］　　　　　　２　　　　　５００　　　３５００　　　　６ ０／４２０　　　　Ｓ　　　　　　−ｐＡＴ５９４　　　　２　　　　５００　 　２０００　　１２０／２７０　　　ＮＥ　　　　５ｐＡＴ６０３　　　　　］ 　　　　　：Ｉ００　　４８００　　　　　＋　　　　　　ＮＥ　　　　５ｐＡ Ｔ６０７　　　　　］　　　　　１１００　　　：ｌ］００　　　　　＋　　　 　　　−−ｐＡＴ６２０　　　　３　　　　３００　　１２５０　　２４０／４ ２０　　　ＨＥ　　　　−ρＡＴ７３０　　　　　２　　　　　５５０　　　］ ９００　　　　　　＋　　　　　　　ＮＥ　　　　　−ｐＡＴ７４４　　　　４ 　　　　８００　　８００　　　１２０／４２０　　　ＮＥ　　　　Ｓｃ−ｍｙ ｃ　　　　　　　２　　　　　　　　　　２４００　　　　５０／１２０　　　 　Ｓ　　　　　５ＩＬ−３１−８００＋　　　　　　　　　　　　５ＩＬ−４２ −７００＋　　　　　　　　　　　　５ＩＬ−２Ｒ］、　　　　　　　　　　　 ３５００　　　　　　＋　　　　　　　　　　　　５ＰＰＥ　　　　　　　　　 　　　　　２　　　　　−１３００　　　　　＋　　　　　　　　　　　　　３ 表−口二」　　マイトジェン−誘導遺伝子特性１頻度群は分離された　５２８個 のクローンの中で、ファージクローンを交差パイプリットした数を示し、これは 掲げたサブクローン化挿入物により検出される。：１＝１個の交差ハイブリット ファージクローン：２＝２ないし５ｇＭの交差ハイブリットファージクローン； ３＝６ないし１０個の交差ハイブリッドファージクローン；　　４＝＋１ないし ２５個の交差ハイブリッドファージクローン、これまでに分離された全ての６６ 個の異なるクローンのうちで、頻度分布は　１＝２２クローン；　　２＝１７ク ローン、　　３＝１６クローン；４＝６クローンであった。ｍＲＮＡサイズ（ヌ クレオチド中）はホルムアルデヒド−アガロースゲル上ての２８　Ｓおよび１８ Ｓ　　ｒＲＮＡの移行に関して測定した。 ５時間（分）は誘導ｍＲＮＡ種か末梢血（ＰＢ）Ｔ細胞のＰＨＡ　（ｉ　ｐ−ｇ ／ｍ　１　）およびＰＭＡ　（２０ｎ　ｇ／ｍ１）刺激に続いて最初に検出した 詩を表わす、二番目の数は最大の定常状態ｍＲＮＡレベルが認められた時間（分 ）を示す、この欄における＊はｍＲＮＡかシクロヘキシミド（１０ｕ−ｇ　／　 ｍ　１　）かＰＨＡ／ＰＭＡ刺激中に含まれたときにのみ検出てきることを示す 。、＋は、ざらに進んだ研究は行なわれていないけれども、ＰＨＡ、ＰＭＡおよ びシクロヘキシミドの組合せに対する反応における遺伝子誘導を示す。 ０はＰＢ　　Ｔ細胞中のＰＨＡ／ＰＭＡ誘導された定常状態ｍ　ＲＮ　Ａレベル についての、ＰＨＡ／ＰＭＡ単独て得たレベルに対する。シクロヘキシミドの効 果を表わす。 ：Ｓ　＃５誘導、　ＮＥ　　シクロヘキシミドの効果無しまたは最低の効果；− 効果測定せず。 ’　Ｂａｍ　　Ｈｌ、Ｅｃｏ　　Ｒ１またはＳｓｔ　　Ｉのうち何れかで消化し たヒト胸１１１ＤＮＡのサザンプロットで検出されたバンドの数：Ｓ　全て三つ の消化において４個より少ないバンド；Ｆ　少なくとも二つの消化において４個 またはそれ以上のハンド：Ｍ　全て三つの消化において５個またはそれ以上のハ ンド；−ゲノム組織測定せず。 ｅｐＡ７３８３はまたシクロヘキシミドにより影響されない　９００個のヌクレ オチドの本質的に発現するｍ　ＲＮ　Ａ種を検出した。 ’ｐＡＴ５１６はまた１７００個のヌクレオチドの木質的に発現するｍＲＮＡを 検出した。 ’ｐＡＴ５４２はまた６８００個のヌクレオチドの優勢種と対等に発現する４６ ００個のヌクレオチドのｍ　ＲＮ　Ａ種を検出した。 ’ＰＡＴ５６３はまた優勢な２４００側のヌクレオチド種と対等に発現する３６ ００個、４１００個および８５００個のヌクレオチドのｍＲＮＡ種を検出した。 １　　　ヘルパー■細胞系ジャーカットおよびヒト繊維芽細胞におけるＴ細胞誘 導遺伝子の発現分析、実験の詳細は図１１−３および図１１−４に記載した通っ である。 Ｙ−血清を用いた休止期ヒト繊維芽細胞（ＨＦ）の刺激の際の誘導。 Ｎ−休止期または血清刺激のヒト繊維芽細胞において発現無し。 ＮＤ−測定せず。 ａ−９００個のヌクレオチドの木質的に発現するｍＲＮＡ種（参照表１ｌ−１） についての発現データを示す。 ｂ−２０００個のヌクレオチドの誘導ｍＲＮＡ種（参照表１ｌ−１）についての 発現データを示す。 Ｔ　　　で宝゛された゛　　の　　　　　　　マイトジェン誘導遺伝子の反応性 の初期特性における重大な疑問は転写活性化プロセスの組織特異性である。異な る組織に由来する細胞は大きい分担の活性化反応を示すのかあるいはそれらはマ イトジェン作用物質のためのレセプターが一般に組織特異性であるということを 与えないのか？正常なヒト肺繊維芽細胞ＷＩ３８およびＣＣＤ　−１１ＬＵ　（ ＴＩ−２）の活性化は研究された。これらの細胞は成長に続いて休止期に肺って 集りそしてその後０．２５％血清中での培養となり、またそれらは多数の成長促 進活性を含む高濃度のウシ胎児血清の存在下細胞周期を再開するように刺激され つる。三つの代表的な誘導遺伝子の分析は図４に示し、その中では休止期の繊維 芽細胞を２０％血清で様々な時間の間、シクロヘキシミドを用いてまたは用いず に、刺激した０個々のマイトジェン誘導遺伝子について発現の速度論はＴ細胞お よび繊維芽細胞におけるのと相対的に似ている（図１１４および表１１−１と比 較）、興味のあることに、シクロヘキシミドだけを用いたｍＲＮＡの誘導は多様 な遺伝子について繊維芽細胞中においてしばしば起きるが、■細胞中においては 起きない（図ｌｌ−２および図１１−４を比較）、かかる結果は、ヒト肺繊維芽 細胞、例えばここで利用されたものが活性化細胞の背景を含むか、あるいは休止 期の間遺伝子発現を抑圧する機構が二つの細胞型において異なるかもしれないこ とを示唆する６表１１−２に要約して示すように、ここで分析されたおよそ８０ ％の新規なＴ細胞誘導遺伝子はノーザン分析により繊維芽細胞において検出でき たてあろう。従って、初期反応は完全に区別される細胞型において大変類似して いるとみえるけれども、遺伝子のうちのいくつかはその組織特異性においてより 制限されそして従ってリンパ球またはＴ細胞の分化した機能をエンコードまたは 発揮するらしい。これまでに、組織特異性において制限を示す四つの全ての遺伝 子はその誘導においてＣｓＡにより阻害されている。興味のあることに、両方の 組織により発現したいくつかの誘導遺伝子はＴ細胞においてＣｓＡにより抑圧さ れる（参照表１ｌ−２）　、但し、ＣｓＡの作用の組織特異性をアドレスする原 糸を除く。 −スカ・・ジョン この章で示したように、Ｔ細胞の活性化に対する初期の転写反応は大変複雑てあ り、非常にはっきりしたパターンの規則性と発現をもった大多数の新規遺伝子を 包含する。細胞周期を通しての進行と増殖に対する拘留に関係する機能に加えて 、これら遺伝子は他の機能例えば免疫系の調節をエンコードすることができる。 とりわけ、発現の限られた組織分布を示す遺伝子は、活性化Ｔ細胞の分化した機 能においてかかる役割を演じると予測される。確かに、これら遺伝子のうちの二 つ、　ＰＡＴ　４６４とＰＡＴ７４４は連続しておりそして予想された親木性リ ーダーペプチドと公知のシークレット化タンパク質との構造類似性を示し、これ は潜在的リンフ才力インとしての同定を示唆する（実験の部ＩＶ　）　。 種々のＴ細胞製剤、細胞系またはクローン（＋１２、ｌｌ−４、ｌｌ−ｌ５　、 　ｌｌ−２３、１１−２８、ｌｌ−３２、１＋−４１）において誘導されたこと を基に既に分離された一定数の遺伝子を越えて、より進んだ研究をマウス３Ｔ３ 繊維芽細胞における崩清誘導活性化プロセスについて行なってきた。即時活性可 能な遺伝子をクローン化した以前の研究によりここて発見した数よりもずっと少 ない数のものを得ている（　１１−１０　、１＋−３０）　、　Ｌ、かじ、マウ ス３Ｔ３繊維芽細胞系を利用する最近の研究は、７０個より多い遺伝子が誘導さ れるとの結論を下しており、ヒト末梢血Ｔ細胞（ＩＩ−１）についての本発明者 の研究と一致している。ここて示すように、大部分の誘導遺伝子はヒト繊維芽細 胞およびリンパ球の双方において同様に発現される。かかる観察は、マイトジェ ンに対する早期即時反応の複雑さか主に分化した機能の誘導の結果として生ずる ものでないことを示唆する。むしろ、至る所で発現する活性化遺伝子がおそらく は細胞代謝の維持面における役割例えばＤＮＡ合成のための細胞に呼び水を与え ることを演じる。これまで繊維芽細胞から分離した誘導遺伝子の中で特に興味を そそるものは、ＤＮＡ結合タンパク質なエンコードてきるいくつかのものであり （Ｔｌ−７、ｌｌ−３３、ｌｌ−４０、１＋−４３”）　、これはいくつかの早 期誘導遺伝子が多形質発現性調節の役割に仕えるという仮定を支持する。 繊維芽細胞およびリンパ球において発現するところの二つの遺伝子、いわゆるＥ ｇｒ−１（またはＮＧＦ　Ｉ　−ＡＡ）およびＫｒｏｘ２０は結合ＤＮＡ（＋１ ７、Ｉ＋−３：ｌ　。 Ｉ＋−４２、１１−４３）に包含するところの三つの亜鉛フィンガー結合領域を 含む一級アミノ酸構造を予測する。 誘導された多数の遺伝子に加えて、ＰＢ　　Ｔ細胞のマイトジェン刺激に続いて 誘導遺伝子の中て観察された速度論パターンの多様性はその規則性における相当 な相違を示唆する０発現の一つの普通のパターン（表１ｌ−１）は、　ｃ　−ｆ 　ｏ　ｓ　（ｌｌ−３４）および繊維芽細胞において誘導された多くの遺伝子（ Ｉｌｌ、１ｌ−３１）と同様に急速かつ遷移的現われを示す、一つの可能性とし て、かかる遺伝子が細胞周期の中でＧＯからＧｌへの遷移を創始するのに重要な 役割を演しるのかもしれず、またその連続した存在が必ずしもＧを経る別の進行 のために必要としないかもしれない、より遅いオンセットおよび／または持続発 現を示す別の速度論パターンは他の遺伝子についてＨ察された（図７１−２およ び表ｌ１ｌ）。 ここての遺伝子研究の中で調節群を多様に仕向けることの別の証拠は遺伝子誘導 の際のＣＳＡの様々な効果である。ＣＳＡは転写の開始の前にまたはその際誘導 遺伝子発現を妨げると思われる（１１−１６　）　、従って、本発明者は、Ｃ３ Ａ阻害可能な遺伝子はこれら遺伝子のために分担する調節モチーフに反映しうる ところの誘導に必要な普通の活性化成分を分担すると予想する。加えて、予測し ない大部分の遺伝子についてこの作用物質の広範な特表千３−５０４３３１　（ ２２） 効果はその免疫抑圧作用かごく少数の遺伝子、例えばＩＬ−２の抑圧以上のもの によるてあろうと信じさせるものである。 研究された誘導遺伝子のうちの７０％の中で観察された普通の特徴はシクロヘキ シミドによるメツセージレベルの超誘導てあった。加えて、シクロヘキシミドの 存在下で多くの遷移的発現した遺伝子はますます持続する発現速度論を示した。 従って、多くの誘導遺伝子は動揺性タンパク質により媒介される調節機構に、細 胞内のメツセージレベルの調整のために最大の適応性を備える系に受けやすいと 思われる。ｍａｔｒ芽細胞においてシクロヘキシミドが転写の遮断とｍＲＮＡ安 定性の増加との双方を阻害するという証拠が示され、それは動揺性転写レセプタ ーの連累と誘導遺伝子発現の調節において酵素を退化させること（１１−１，１ ｌ−３１）を示唆する。 ここで記載した遺伝子のサブユニ・ントはプログラムされた細胞成長において役 割を演じるであろう。マイトジェン活性化の後だけ正常に発現するという三個の 遺伝子のシャーカット腫瘍細胞における木質的発現に注目せよ（［］　ｌｌ−３ および表１ｌ−２）。かかる遺伝子の発現は、この腫瘍由来の細胞系の未制御成 長に寄与することかできる。 したかって、この章は、いくつかの公知のリンフオカイン／サイトカインタンパ ク質遺伝子の特性と同様に、■細胞活性化において早期に誘導されたｍ　ＲＮ　 Ａの機部的かつ構造的特徴を有するところの本発明のｃＤＮＡクローンの分離を 説明する。 刊行物 １１−１．　　　　アルメンドユラル、ジェー、エム。 （Ａｌｍｅｎｄｒａｌ、　Ｊ、Ｍ、　）、ディー、ツマ−（Ｄ、Ｓｏｍｍｅｒ） 、　ｘイチ。 マドナルドーブラヴｔ　（Ｈ，Ｍａｃｄｏｎａｌｄ−Ｂｒａｖｏ）　、　　ジェ ー。 プルツクハルト（Ｊ、　Ｂｕｒｃｋｈａｒｄｔ）、　ジエー、ペレラ（Ｊ、　Ｐ ｅｒｒｅｒａ）およびアール、ブラヴｔ　（Ｒ，Ｂｒａｖｏ）　、　　（１９８ ８）ｒマウス繊維芽細胞中の成長因子への早期遺伝反応の複雑さくＣｏｍｐｌｅ ｘｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅａｒｌｙ　ｇｅｎｅ目Ｃｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　 ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｉｎ　ｍｏｕｓｅ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ） Ｊ　。 Ｍｏ１．　Ｃｅ１１．　Ｂｆｏｌ、　８：２１４０−２１４８ＩＩ　−２，アロ ンソ、エム、エイ、　（Ａｌｏｎｓａ、Ｍ、Ａ、）およびニス、エム、ワイスマ ン（Ｓ、Ｍ、Ｗｅｉｓｓｍａｎ）、　　（１９８７）、ｒヒトＴ細胞の分化に関 連するＭＡＬ、疎水性タンパク質のｃＤＮＡクローニング及びシーフェンス（Ｃ ＤＮＡ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ＭＡＬ、　ａ　ｈ ｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｐｒｏｔｅｉｎ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｈｕ ｍａｎ　Ｔ−ｃｅｌｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ−ｉａｔｉｏｎ）　Ｊ　、　Ｐｒｏ ｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８４：１９９７−２００１１ １−３．　　　　アヴイヴ、エイチ（Ａｖｆｖ、　Ｈ，）およびビー。 レダー（Ｐ、Ｌｅｄｅｒ）　、　　（１９７２）　、　　ｒオリゴチミジル酸− セルロースにおけるクロマトグラフィによる生物学的活性グロブリンメツセンジ ャーＲＮＡの精製（Ｐｕｒｆ−ｆｊｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｌｙ　ａｃｔｉｖｅ　ｇｌｏｂｉｎ　ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ　ＲＮＡ　ｂｙ　ｃｈ ｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｏｎ　ｏｌｉｇｏｔｈｙｍｉｄｙｆｉｃ　ａｃｉｄ −ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ 、ＵＳＡ　６９：１４０８−１４１１−４．　　　バード、ビー、アール、　（ Ｂｕｒｄ、　Ｐ、　Ｒ，）　＋ジー、ジュー。フリーマン（Ｇ、Ｊ、Ｆｒｅｅｍ ａｎ）　、ニス、ディー、ウィルソン（Ｓ、Ｄ、Ｗｉｌｓｏｎ）、　ｘム、ベル マン（Ｍ、　Ｂｅｒｍａｎ）、　７−ル、デクリュフ（Ｒ９ＤｅＫｒｕｙｆｆ） 、　　ビー、アール。 ビリンゲス（Ｐ、　Ｒ，ＢｉｌＢｌｌｌｉｎおよびエム、イー、ドルフ（Ｍ。 Ｂ、Ｄｏｒｆ）、　　（１９８７）　、　　ｒ新規なＴ細胞活性化遺伝子のクロ ーニング及び特徴付け（Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒ−ｉｚａ ｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｇｅ ｎｅ）Ｊ　ｒＪ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　１３９：３１２６−３１３１１１−５． 　　　　カントレル、ディー、エイ、　　（Ｃａｎｔｒｅｌｌ。 Ｄ、　Ａ、　）およびケイ、エイ、スミス（Ｋ、Ａ、Ｓｍ１ｔｈ）　、（１９８ ４）「インターロイキン−２Ｔ細胞系：新規な細胞成長モデル（Ｔｈｅ　１ｎｔ ｅｒｌｅｕｋｉｎ−２Ｔ　ｃｅｌｌ　ｓｙｓｔｅｍ：　ａ　ｎｅｗｃｅｌｌ　ｇ ｒｏｗｔｈ　ｍｏｄｅｌ）　Ｊ　、　５ｃｉｅｎｃｅ　２２４：１３１２−１３ １６１１−６．　　　　チャン、ジエー、ワイ−（Ｃｈａｎ、　Ｊ、Ｙ−）　。 ディー、ジェー、スラモン（Ｄ、　Ｊ、　Ｓｌａｍｏｎ）、ニス、ディー。 二ｖ　−（Ｓ、　Ｄ、　Ｎｉｍｅｒ）　＋　ディー、ダブリュー、ゴールデ（Ｄ 。 Ｗ、　Ｇｏｌｄｅ）およびジュー。シー、ガツソン（Ｊ、Ｃ，Ｇａ５５ｏｎ）。 （１９８６）、ｒヒト顆粒球／マクロファージ　コロニー刺激因子の発現調節（ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｇｒ ａｎｕｌｏｃｙｔｅ／ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔ ｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ）Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ 、ＵＳＡ　８３：８６６９−８６７３１１−７．　　　　チャブリアー、ビー、 　（Ｃｈａｖｒｉｅｒ、Ｐ、）　ｒエム、ゼリアル（Ｍ、　Ｚｅｒｉａｌ）、　 　ビー、レマイレ（Ｐ、Ｌｅｍａｉｒｅ）　＋　　ジェー、アルメンドユラル（ Ｊ、Ａｌｍｅｎｄｒａｌ）　ｌ　アール、ブラヴオ（Ｒ，Ｂｒａｖｏ）およびビ ー、チャルネイ（Ｐ、Ｃｈａｒｎａｙ）　、　　（１９８８）　、　　ｒ亜鉛フ ィンガーを持つタンパク質を暗号化する遺伝子は培養された細胞中、ＧＯ／Ｇｌ ）ランジションの間、活性化される（Ａ　ｇｅｎｅ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ａ　ｐ ｒｏｔｅｆｎ　ｗｉｔｈ　ｚｉｎｃ　Ｌｉｎｇｅｒｓ　ｉｓ　ａｃｔｉｖａｔｅ ｄ　ｄｕｒｉｎｇ　ＧＯ／Ｇｌ　ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ　ｆｎ　ｃｕｌｔｕｒｅ ｄ　ｃｅｌｌｓ）」、　Ｅ！ＭＢＯＪ。 ７：２９−３５ １１−８．　　　　チルグウィン、ジェー、エム、　（Ｃｈｉｒｇｗｆｎ、Ｊ、 Ｍ、）　、エイ、イー、ブリジビラ（Ａ、　Ｂ、　Ｐｒｚｙｂｙｌａ）、アール 、エフ、マクドナルド（Ｒ９Ｆ、　ＭｃＤｏｎａｌｄ）およびダブリュー、ジェ ー、ルター（Ｗ、Ｊ、Ｒｕｔｔｅｒ）、　　（１９７９）　。 「リボヌクレアーゼ中の豊富な源からの生物的活性リボ核酸の単離（Ｉｓｏｌａ ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ　ａｃｔｉｖｅ　ｒｉｂｏ−ｎｕｃ ｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄ　ｆｒｏｍ　５ｏｕｒｃｅｓ　ｅｎｒｉｃｈｅｄ　ｉｎ　ｒ ｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ）　Ｊ　、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　１８：５２９４−５２ ９９１１−９．　　　　クリスマス、ニス、イー、　（Ｃｈｒｉｓｔｍａｓ、Ｓ 。 Ｅ、）、エイ、メガ−（Ａ、　Ｍｅａｇｅｒ）およびエム、モアー（Ｍ、　Ｍｏ ｏｒｅ）、（１９８７）、ｒクローン化されたヒト天然細胞毒性リンパ球および Ｔ細胞によるインターフェロンおよび腫瘍壊死因子の製造（Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏ ｎ　ｏｆ　１ｎｔｅｒｆｅｒｏｎａｎｄ　ｔｕｍ＋ｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆ ａｃｔｏｒ　ｂｙ　ｃｌｏｎｅｄ　ｈｕｍａｎ　ｎａｔｕｒａｌｃｙｔｏｔｏｘ ｉｃ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　Ｔ　ｃｅｌｌｓ）　Ｊ　、　Ｃｌ１ｎ 、　ＢＩＰ。 Ｉｍｍｕｎｏｌ、　６９：４４１−４５０ＩＩ−１０，：ｆｆチャラン、ビー、 エイチ、　（Ｃｏｃｈｒａｎ、　Ｂ。 Ｈｏ）、　エイ、シー、レフエル（Ａ、Ｃ１Ｒｅｆｆｅｌ）およびシー。 エイチ、スチレス（Ｃ，Ｈ，５ｔｉｌｅｓ）、　　（１９８３）　、　　ｒ血小 板誘導性成長因子により調節された遺伝子シーフェンスの分子クローニング（Ｍ ｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ｇｅｎｅ　５ｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｒ ｅｇｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗｔｈ　 ｆａｃｔｏｒ）Ｊ　、　Ｃｅ１ｌ　３３：９３９−９４７ＩＩ−１１，コール、 エム、ディー、　（Ｃｏｌｅ、Ｍ、Ｄ、）　。 （１９８６）、ｒｍｙｃオンコジーン：形質転換および分化におけるその役割（ Ｔｈｅ　ｍｙｃ　ｏｎｃｏｇｅｎｅ：　ｉｔｓ　ｒｏｌｅ　ｉｎｔｒａｎｓｆｏ ｒｍａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆａｔｉｏｎ）Ｊ　ｒ　Ａｎｎ、 　Ｒｅｖ＋Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　２０：３６１−３８４ＩＩ−１２，クリストファ ロ、ヴイー、ジエー。 （Ｃｒｉｓｔｏｆａｌｏ、　Ｖ、　Ｊ、　）およびビー、ビー、シャレフ（Ｂ、 　Ｂ、　５ｈａｒｆ）　、　　（１９７３）　、　　ｒ細胞質の老化およびＤＮ Ａ合成（Ｃｅｌｌｕｌａｒ　５ｅｎｅｓｃｅｎｃｅ　ａｎｄ　ＤＮＡ　５ｙｎｔ ｈｅｓｆｓ）　Ｊ　＋　Ｂｘｐ。 Ｃｅ１ｌ　Ｒｅｓ、　６：４１９−４２７１１−１３．　　　ダブリ　エム、シ ー、　（Ｃｕｔｕｒｉ　Ｍ、Ｃ，）　＊エム、ムルフィ−（Ｍ、　Ｍｕｒｌｌｈ Ｙ）、エム、ビー、コスタージオミ（Ｍ、Ｐ、Ｃｏｓｔａ−Ｇｉｏｍｉ）　＋　 アール、ワインマン（Ｒ，Ｗｅｉｎｍａｎｎ）、　　ビー、ベルッシア（Ｂ、　 Ｐｅｒｕｓｓｆａ）およびジー、トリンチェリ（Ｇ、Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉ）、 　　（１９８７）　ｒ　　ｒヒト末梢血リンパ球による腫瘍壊死因子およびリン フォトキシンの製造の個々の調整（Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｒｅｇｕｌａｔｉ ｏｎ　ｏｆｔｕｍｏｒ　　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　　ｆａｃｔｏｒ　　ａｎｄ　　ｌ ｙｍｐｈｏｔｏｘｆｎ　　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙ　ｈｕｍａｎ　ｐｅｒｉｐ ｈｅｒａｊ　ｂｌｏｏｄ　Ｉｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）Ｊ　＋　Ｊ、Ｂｘｐ、Ｍｅ ｄ、１６５：１５８１−１５９４ Ｉｔ−１４，デビス、エム、エム、　（Ｄａｖｉｓ、　Ｍ、　Ｍ、　）＋（１９ ８６）、ｒ負のｃＤＮＡハイブリッド形成およびＴ細胞レセプター遺伝子（Ｓｕ ｂｔｒａｃｔｉｖｅ　ｃＤＮＡ　ｈｙｂｒｉｄ−ｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈ ｅ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｇｅｎｅｓ）Ｊ　＋　Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ　ａｘｐｅｒｔｍｅｒ＋ｔａｔ　１ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、　Ｂｌａｃｋｗｅ ｌｌ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、　０ｘｆｏｒｄ、　Ｕ ｎｉｔｅｄ　Ｋｉｎｇｄｏｍ、　７６：１−１３ＩＩ−１５，ゲルジエンフェル ト、エイチ、ケイ。 （Ｇｅｒｓｈｅｎｆｅｌｄ、　Ｈ，Ｋ、　）およびアイ、エル、エアイスマン（ ［、Ｌ、Ｗｅｆｓｓｍａｎ）、　　（１９８６）　、　　ｒ細胞毒性Ｔリンパ球 からのＴ細胞に特異的なセリンプロテアーゼのためのＣＤＮＡクローニング（Ｃ ｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ａ　ｃＤＮＡ　ｆｏｒ　ａ　Ｔ　ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆ ｉｃ　５ｅｒｉｎｅ　ｐｒｏｔｅａｓｅ　ｆｒｏｍ　ａ　ｃｙｔｏｔｏｘｆｃ　 Ｔｌｙｍｐｂｏｃｙｔｅ）　Ｊ　、　５ｃｉｅｎｃｅ　２３２：８５４−８５８ Ｉ！−１６，グラネリービペルノ、エイ、　（Ｇｒａｎｅｌｌｉ−Ｐｉｐｅｒｎ ｏ、Ａ、）　ｒ　エル、アンドルス（Ｌ、　Ａｎｄｒｕｓ）およびアール、エム 、スティンマン（Ｒ，Ｍ、Ｓｔｅｉｎｍａｎｎ）　ｌ　　（１９８６）、「刺激 されたヒトＴ細胞におけるリンホカイン及びノンリンホカイン　ｍＲＮＡ濃度（ Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ　ａｎｄｎｏｎｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ　ｍＲＮＡ　１ｅｖ ｅｌｓ　ｉｎ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｈｕｍａｎ　Ｔｃｅｌｌｓ）　Ｊ　、　 Ｊ、Ｂｘｐ、Ｍｅｄ、　１６８：９２２−９３７１１−１７．　　　グリーン、 ダブり二一、シー、（Ｇｒｅｅｎｅ。 Ｗ、　Ｃ，＞およびダブり二一、ジュー。レオナルト（Ｗ、Ｊ。 しｅｏｎａｒｄ）、　　（１９８６）　ｌ　　ｒヒト　インターロイキン−２レ セプター（Ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２ｒｅｃｅｐｔｏｒ ）　Ｊ　。 Ａｎｎ、　　Ｒｅｖ、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　４：６９−９５ＩＬ　−１８， グブラー、　、：Ｌ−、（Ｇｕｂｌｅｒ、　Ｕ、　）およびビー、ジェー、ロフ マンＣＢ、Ｊ、Ｈｏｆｆｍａｎ）、　　（１９８３）　。 ｒｃＤＮＡライブラリーを生ずるための単純およびかなり有効な方法（Ａ　ｓｉ ｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｖｅｒｙ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄｆｏｒ　ｇｅ ｎｅｒａｔｉｎｇ　ｃＤＮＡ　１ｉｂｒａｒｉｅｓ）　Ｊ　、　Ｇｅｎｅ　２５ ：２６３−２６ｌｌ−１９，バーディ、ケイ、ジ：ｒ−−、（Ｈａｒｄｙ、　Ｋ 、　Ｊ、　）。 ビー、マンゴ−（Ｂ、Ｍａｎｇｅｒ）、　エム、ニュートン（Ｍ、　Ｎｅｗｔ。 ｎ）およびジュー。ディー、ストボ（Ｊ、Ｄ、５ｔｏｂｏ）　、　　（１９８７ ）、ｒＴ細胞の活性化の間、分子発生は調整ヒトインターフェロン　ガンマ遺伝 子発現を含む（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｅｖｅｎｔｓ　１ｎｖｏｌｖｅｄ　ｔｎ　ｒ ｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ｈｕｍａｎ　１ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ｇａｍｍａ　　ｇｅ ｎｅ　　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　　ｄｕｒｉｎｇ　　Ｔ　　ｃｅｌｌ　　ａｃｔ ｆｖａｔｉｏｎ）　　Ｊ　　ｒＪ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３８：２３５３−２３ ５８ＩＩ−２０，ヘトリック、ニス、エム、　（Ｈｅｄｒｆｃｋ、Ｓ、Ｍ。 ）、ディー、アイ、コヘン（Ｄ、１．Ｃｏｈｅｎ）　、イー、エイ。 ニールマン（Ｂ、Ａ、　Ｎ１ｅｌｓｏｎ）およびエム、エム、ディビス（Ｍ、Ｍ 、ＤａｖｔＳ）　、　　（１９８４）　、　　ｒＴ細胞−特異的播く結合タンパ ク質を暗号化するｃＤＮＡクローンの単離（ＩｓｏｌａＨｏｎ　ｏｆ　ｃＤＮＡ 　ｃｌｏｎｅｓ　ｅｎｃｏｄｉＢ　Ｔ　ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃｍｅｍｂｒ ａｎｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ）Ｊ　、　Ｎａｔｕｒｅ　３ ０８：１４９−１１１−２１．　　　ヒラノ、ティー、（旧ｒａｎｏ、　Ｔ）　 、　ケイ。 ヤスカワ（Ｋ、　Ｙａｓｕｋａｗａ）、エイチ、ハラダ（Ｈ，Ｈａｒａｄａ）、 ティー、タガ（Ｔ、　Ｔａｇａ）、　　クイ。ワタナベ（Ｙ、　Ｗａｔａｎａｂ ｅ）、ティー、マツダ（Ｔ、Ｍａｔｓｕｄａ）　ｒ　ニス、カシワムラ（Ｓ、Ｋ ａｓｈｉｗａｍｕｒａ）　、ケイ、ナカジマ（Ｋ、Ｎａｋａｊｉｍａ）、ケイ、 コヤマ（Ｋ、Ｋｏｙａｍａ）、　：ｘ、イ、イワマツ（Ａ、　ＩＷａｍａｔ＆＋ 、）、　ｘ　ス、ツナサワ（Ｓ、Ｔｓｕｎａｓａｗａ）　、　ｘフ、サキャマ（ Ｐ、Ｓａ＋、＋ｙａｍａ）、　＋Ｔ−イチ、マツイ（Ｈ，Ｍａｔｓｕｆ）、　　 ライ。タカハラ（Ｙ、’Ｉ　・ｋａｈａｒａ）。 ティー、タニグチ（Ｔ、　Ｔａｎｉｇｕｃ旧）およびティー、キシモ）（Ｔ、Ｋ ｉｓｈｉｍｏｔｏ）　＋　　（１９８６）　、　　ｒ免疫グロブリンヲ作るため の８９２８球を誘発する新規なヒト　インターロイキン（ＢＳＦ−２）のための 相補ＤＮＡ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ　ＤＮＡ　ｆｏｒ　ａ　ｎｏｖｅｌ　 ｈｕｍａｎ　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ（ＢＳＰ−２）　　ｔｈａｔ　１ｎｄｕｃ ｅｓ　Ｂ　Ｉｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｔｏ　ｐｒｏｄｕｃｅｉｍｍｕｎｏｇｌｏ ｂｕｌｉｎ　）　Ｊ　、　Ｎａｔｕｒｅ　３２４ニア３−７６１１−２２．　　 　ヒュイン、ティー、ケイ＋、　（Ｈｕｙｎｈ、Ｔ、Ｖ。 ）、アール、エイ、ヤング（Ｒ，Ａ、　Ｙｏｕｎｇ）およびアール。 ダブリュー、ディビス（Ｒ，Ｗ、Ｄａｖｉｓ）　、　　（１９８５）　。 「ラムダｇｔｌＯ及びラムダｇｔｌｌ中のｃＤＮＡライブラリーの建設およびス クリーニング（Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇ　ａｎｄ　　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｃ ＤＮＡ　１ｉｂｒａｒｉｅｓ　ｉｎ　ｌａｍｂｄａ　ｇｔｌＯａｎｄｌａｍｂｄ ａ　ｇｔｌｌ）Ｊ　、　ＤＮＡ　ｃｌｏｎｉｎｇ：　Ａ　ｐｒａｃＮｃａｌ　ａ ｐｐｒｏａｃｈ。 Ｄ、Ｇｌｏｖｅｒ、（ｅｄ、）　ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ、０ｘｆｏｒｄ、Ｌｌｎｉ ｔｅｄ　ＫｊｎｇｄｏｍＩＩ−２３，ジョンストラ、ジｘ−，（Ｊｏｎｇｓｔｒ ａ、Ｊ、）、ティー、ジェー、シャル（Ｔ、　Ｊ、　５ｃｈａｌｌ）、　　ビー 、リュー。 ダイア−（Ｂ、　Ｊ、　Ｄｙｅｒ）、　　シー、クレイベルガ−（Ｃ，Ｃｌａｙ ｂｅｒｇｅｒ）、　ジェー、ジョルゲンセン（Ｊ、Ｊｏ「ｇｅｎｓｅｎ）　、エ ム。 エム、ディビス（Ｍ、　Ｍ、　Ｄａｖｉｓ）およびエイ、エム、クレンスキイ（ Ａ、Ｍ、Ｋｒｅｎｓｋｙ）　、　　ｒヒト機能性Ｔ細胞列の新規な遺伝子の単離 およびシーフェンス（Ｔｈｅ　ｊｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　５ｅｑｕｅｎｃｅ 　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｇｅｎｅ　ｆｒｏｍ　ａ　ｈｕｍａｎ　ｆｕｎｃｔｉ ｏｎａｌ　Ｔｃｅｌｌ　１ｉｎｅ）Ｊ　；　Ｊ、　Ｅ！ｘ１１．　Ｍｅｄ、　１ ６５：６０１−６１４ＩＩ−２４，シュン、シー、ダイア、　（Ｊｕｎｅ、　Ｃ ，Ｈ，）　ｒリュー、エイ、レッドペター（Ｊ、Ａ、Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ）　、 　エム。 エム、ギレスビエ（Ｍ、　Ｍ、　Ｇ目１ｅｓｐｉｅ）　、ティー、リントスチン （Ｔ、　Ｌｉｎｄｓｔｅｎ）およびシー、ビー、トンプソン（Ｃ，Ｂ。 Ｔｈｏｍｐｓｏｎ）　、　　（１９８７）　、　　ｒＣＤ　２　Ｂ経路を含むＴ 細胞増殖は、シクロスポリン耐性　インターロイキン−２遺伝子発現と関連する （Ｔ　ｃｅｌｌ　ｐｒｏＨｆｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ　ａ　ＣＤ２ ８　ｐａｔｈｗａｙ　ｉｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｙｃｌｏｓｐ ｏｒｉｎ−ｒｅｓｊｓｔａｎｔ　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｆｎ−２ｇｅｎｅ　ｅｘｐ ｒｅｓｓｉｏｎ）Ｊ　、　Ｍｏ１．　Ｃｅ１１、　Ｒｉｏｌ、　７：４４７２− ４４８１１Ｉ−２５，ケール、ジェー、エイチ、　（Ｋｅｈｒｌ、Ｊ、Ｈ，）。 エル、エム、ワケフィールド（Ｌ、Ｍ、Ｗａｋｅｆｉｅｌｄ）　＊　エイ。 アール、ロバーツ（Ａ、ＲｌＲｏｂｅｒｔｓ）　、ニス、ジャコリュー（Ｓ、Ｊ ａｋｏｗｌｅｗ）、　＋Ｉ＋ム、アルヴアレッツーモン（Ｍ、　Ａｌｖａｒｅｚ −Ｍａｎ）　、アール、プリンク（Ｒ，Ｄｅｒｙｎｃｋ）　、　ｘム、ビー。 スボルン（Ｍ、　Ｂ、　５ｐｏｒｎ）およびエイ、ニス、ファウシ（Ａ、　Ｓ。 Ｆａｕｃｆ）　、　　（１９８６）　、　　ｒヒトＴリンパ球による形質転換成 長因子ベータの製造およびＴ細胞成長の調節におけるその潜在的な役割（Ｐｒｏ ｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏ ｒ　ｂｅｔａ　ｂｙ　ｈｕｍａｎ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　ｉｔ ｓ　ｐ。 ｔｅｎｔｉａｌ　ｒｏｌｅ　ｆｎ　ｔｈｅ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔ　 ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ）Ｊ　ｒＪ、　　ＩＥｘｐ、Ｍｅｄ、　　１６３：１０ ３７−１０５０ＩＩ−２６，ケリー、ケイ、　（Ｋｅｌｌｙ、　Ｋ、　）および ニー。 シーベンリスト（Ｕ、５ｉｅｂｅｎｌｉｓｔ）、　　（１９８６）　、　　ｒ標 準および悪性の細胞でのｃ−ｍｙｃの調節及び発現（Ｔｈｅ　「ｅｇｕｌａｔｆ ｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉａｎ　ｏｆ　ｃ−ｍｙｃ　ｆｎ　ｎｏｒｍａｌ 　ａｎｄ　ｒｎａｌｉｇｎａｎｔ　ｃｅｌｌｓ）Ｊ　ｒ　Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　 Ｉｍｍｕｎｏｌ、　４：３１７−４３８ＩＩ−２７，ケリー、ケイ、　（Ｋｅｌ ｌｙ、に、）、　　　ビー、エイチ、コツチャラン（Ｂ、Ｈ，Ｃｏｃｈｒａｎ） 　＋　　シー、ディー、スタイルス（Ｃ，Ｄ、５ｔｉｌｅＳ）およびビー、レダ ー（Ｐ、Ｌｅｄｅｒ）　＋（１９８３）、ｒリンパ球マイトゲンおよび血小板誘 導性成長因子によるｃ−ｍｙｃ遺伝子の細胞特異性調節（Ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉ ｆｉｃ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃ−ｍｙｃ　ｇｅｎｅ　ｂｙＩ ｙｔｎｐｈｏｃｙｔｅ　ｔｎｉｔａｇｅｎｓ　ａｎｄ　ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅ ｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ）Ｊ　、　Ｃｅ１ｌ　３５：６０３−６ １０ＩＩ−２８，クウオン、ビー、ニス、　（Ｋｗｏｎ、Ｂ、Ｓ、）　ｒジー、 ニス、キム（Ｇ、Ｓ、Ｋｉｍ）　ｌ　エム、ビー、ブリストウスキー（Ｍ、　Ｂ 、　Ｐｒｙｓｔｏｗｓｋｙ）、ディー、ダブリュー、ランキ（Ｄ、　Ｗ、　Ｌａ ｎｃｋｉ）、ディー、イー、サバス（Ｄ、　Ｂ、　５ａｂａｔｈ）、ジュー。パ ン（Ｊ、　Ｐａｎ）およびニス、エム、ワイスマン（Ｓ、Ｍ。 Ｗｅｔｓｓｍａｎ）、　　（１９８７）　＋　　ｒ多種のＴリンパ球サブセすト ｃＤＮＡクローンの単離および第一の特徴付け（Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　 １ｎｉｔｉａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｕｌｔｉ−ｐｌ ｅ　５ｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　Ｔ−１ｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　５ｕｂｓｅｔ　ｃＤＮ Ａ　ｃｌｏｎｅｓ）　Ｊ　。 Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８４：２８９６−２９ ００ＩＩ−２９，ラルッソン、イー、エル、　（Ｌａｒｓｓｏｎ、Ｂ、Ｌ。 ）、（１９８０）、ｒシクロスギ９２人およびデキサメタシンは、引金となる方 法の異なる部位で選択的に作用することによりＴ細胞反応を抑制する（Ｃｙｃｌ ｏｓｐｏｒｉｎ　Ａ　ａｎｄ　ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ　５ｕｐｐｒｅｓｓ 　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｂｙ　５ｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ　ａｃｔ ｉｎｇ　ａｔ　ｄｉｓｔｉｎｃｔ　５ｉｔｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｒｉｇｇｅｒ ｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓ）　Ｊ　、　Ｊ、ｒｍｍｕｎｏｌ、　１２４：２８２８− ２８３３ＩＩ−３０，ラウ、エル、エフ、　ＣＬａｕ；　Ｌ、　Ｐ、　）および ディー、ナタンス（Ｄ、Ｎａｔｈａｎｓ）　、　　（１９８５）　、　　ｒ培養 されたマウス細胞のＧＯ／Ｇｌ）ランジションの間、発現された一群の遺伝子の 同定（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　５ｅｔｏｆ　ｇｅｎｅｓ　ｅ ｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　Ｇｏ／Ｇｌ　ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ 　ｏｆｃｕｌｔｕｒｅｄ　　ｍｏｕｓｅ　　ｃｅｌｌｓ）Ｊ　　、　　　ＢＭＢ ＯＪ、　　４　二３１４５−３１５１１Ｉ−３１，ラウ、エル、エフ、　（Ｌａ ｕ、Ｌ、Ｐ、）およびディー、ナタンス（Ｄ、Ｎａｔｈａｎｓ）　、　　（１９ ８７）　、　　ｒＢＡＬＢ／ｃ　　３Ｔ３細胞中での成長に関連する中間の初期 遺伝子の一群の発現：ｃ−ｆｏｓ及びｃ−ｍｙｃでの同等の調節（Ｂｘｐｒｅｓ ｓｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｓｅｔ　ｏｆ　ｇｒｏｗｔｈ−ｒｅｌａｔｅｄ　ｉｍｍｅ ｄｉａｔｅ　　ｅａｒｌｙ　　ｇｅｎｅｓ　　ｉｎ　　ＢＡＬＢ／ｃ　　３Ｔ３ 　　ｃｅｌｌｓ：　　Ｃｏｏｒｄｔｎａｔｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　 ｃ−ｆｏｓ　ａｎｄ　ｃ−ｍｙｃ）　Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ＋Ａｃａｄ 、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８４：１１８２−１１８６ＩＩ−３２，ロベ、ディー、 ジー、（Ｌｏｂｅ、　Ｄ、　Ｇ、　）　ｒ　　シー、ハヴエレ（Ｃ，Ｈａｖｅｌ ｅ）およびアール、シー、プレツクレイ（Ｒ，Ｃ，Ｂｌｅａｃｋｌｅｙ）　、　 　（１９８８）　、　　ｒ活性化された細胞毒性Ｔリンパ球で特異的に発現され た２個の遺伝子のクローニング（Ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｇｅｎｅｓ　 ｔｈａｔ　ａｒｅ　５ｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ　　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　　ｉｎ 　　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　　Ｔ　　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔ ｅｓ）　　Ｊ　　、　　Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、 　　ＵＳＡ　８３：１４４８−１４５２ＩＩ−３３，ミルプラント、ジー、　（ Ｍｉｌｂｒａｎｄｔ、　Ｇ、　ＩＬ（１９８７）、ｒ神経成長因子を誘発する遺 伝子は、可能な転写調節因子を暗号化する（Ａ　ｎｅｒｖｅ−ｇｒｏｗｔｈ　ｆ ａｃｔｏｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ　ｇｅｎｅ　ｅｎｃｏｄｅｓ　ａ　ｐｏｓｓｉｂｌ ｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ）　 Ｊ　、　５ｃｉｅｎｃｅ　２３８ニア９７−７９９ＩＩ−３４，ミュラー、アー ル、　（Ｍｕｌｌｅｒ、　Ｒ，）＋　アール、ブラダｔ　（Ｒ，Ｂｒａｖｏ）　 、　　ジュー。プルツクハルト（Ｊ、　Ｂｕｒｃｋｌ＋ａｒｄｔ）およびティー 、クラン（Ｔ、Ｃｕｒｒａｎ）、　　（１９８４）、ｒｅ−ｍｙｃの活性化より 先に起きる成長因子によるｃ−ｆｏｓ及びタンパク質の誘発（Ｉｎｄｕｃｔｉｏ ｎ　ｏｆ　ｃ−ｆｏｓ　ｇｅｎｅ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｂｙ　ｇｒｏｗｔ ｈ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｐｒｅｃｅｄｅｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃ−ｍｙ ｃ）　Ｊ　、　Ｎａｔｕｒｅ　３１２ニア１６−７２０ＩＩ−３５，ムステリン 、ティー、　（Ｍｕｓｔｅｌｉｎ、Ｔ、）　。 エイチ、ボッ（Ｈ，Ｐｏ５ｏ）、ニス、ビー、ラビンジョキ（Ｓ、　Ｐ。 Ｌａｐｉｎｊｏｋｉ）　＋　ジエー、ギンサー（Ｊ、Ｇｙｎｔｈｅｒ）およびエ ル、シー、アンダーソン（Ｌ、Ｃ，Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ）　、　　（１９８７） 、「成長暗号の形質導入ニホスファチジルイノシトールの分解の間の共有結合オ ルニチンデカルボキシラーゼの迅速な活性（Ｇｒｏｗｔｈ　ｓｉｇｎａｌ　ｔｒ ａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ：　Ｒａｐｉｄａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｖａｌ ｅｎｔｌｙ　ｂｏｕｎｄ　ｏｒｎｉｔｈｉｎｅ　ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ　 ｄｕｒｉｎｇ　ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙＨｎｏｓｉｔｏｌ　ｂｒｅａｋｄｏｗｎ ）Ｊ　、　Ｃｅ１１４９：１７１−１７６ ＩＩ−３６，リード、ジュー。シー、　　（Ｒｅｅｄ、　Ｊ、　Ｃ，）。 ジュー。ディー、アルバース（Ｊ、　Ｄ、　Ａｌｐｅｒｓ）　Ｔ　　ビー、シー 、ノウエル（Ｐ、　Ｃ８Ｎｏｗｅｌｌ）およびアール、ジー、ホープｙ　−（Ｒ ，Ｇ、Ｈｏｏｖｅｒ）　、　　（１９８６）　、　　ｒ標準のヒトリンパ球のレ クチン刺激性細胞分裂の促一時の原潰瘍遺伝子の連続発現（Ｓｅｑｕｅｎｔｉａ ｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ　ｄｕｒｉ ｎｇ　ｌｅｃｔｉｎ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｍｉｔｏｇｅｎｅｓｆｓ　ｏｆｎ ｏｒｍａｌ　ｈｕｍａｎ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）　Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、Ｎａ ｔｌ、　Ａｃａｄ。 Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ　　８３：３９８２−３９８６ＩＩ−３７，リード、ジュー 。シー、（Ｒｅｅｄ、　Ｊ、　Ｃ，）　ｒエイ、エイチ、アビディ（Ａ、Ｈ，Ａ ｂｉｄｉ）　、　　ジュー。ディー。 アルバース（Ｊ、　Ｄ、　Ａｌｐｅｒｓ）、アール、ジー、ホープ７−（Ｒ。 Ｇ、　Ｈｏｏｖｅｒ）、アール、ジー、ロブ（Ｒ，Ｊ、　Ｒｏｂｂ）およびビー 。 シー、ノウエル（Ｐ、Ｃ，Ｎｏｗｅｌｌ）、　　（１９８６）　　ｒインタロイ キン　２　レセプター遺伝子の発現におけるシロスポリン人及びデキサメタシン の効果（Ｂｆｆｅｃｔ　ｏｆｃｙｌｏｓｐｏｒｉｎ　Ａ　ａｎｄ　ｄｅｘａｍｅ ｔｈａｓｏｎｅ　ｏｎ　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　２ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｇｅｎ ｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）Ｊ　＋　Ｊ、Ｉｍ＋ｎｕｎｏ１．１９７：１５０− １ＴＩ−３８，リード、ジュー。シー、　　（Ｒｅｅｄ、Ｊ、Ｃ，）　。 ワイ、ツジモト（Ｙ、Ｔｓｕｊｉｍｏｔｏ）　、ジュー。ディー、アルバース（ Ｊ、　Ｄ、　Ａｌｐｅｒｓ）、　　シー、エム、クロス（Ｃ，Ｍ、　Ｃｒｏｓｅ ）およびビー、シー、ノウエル（Ｐ、Ｃ，Ｎｏｗｅｌｌ）、　　（１９８７）［ 標準のヒトリンパ球増殖の間のｂｃｌ−２プロト−オンコジーン発現の調節（Ｒ ｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｃｌ−２ｐｒｏｔｏ−ｏｎｎｃｏｇｅｎｅ　　ｅ ｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　　ｄｕｒｉｎｇ　　ｎｏｒ＋ｎａｌ　　ｈｕｍａｎｌｙｍ ｐｈｏｃｙｔｅ　　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）Ｊ　　、　　５ｃｉｅｎｃｅ 　２３６：１２９５−１２９ｌｌ−３９，リーム、ジー、エイチ（Ｒｅｅｍ、　 Ｇ、　Ｈ，）　ｒ　エル、エイ、タック（Ｌ、　Ａ、　Ｃｏｏｋ）およびジエー 、ヴイルセク（Ｊ、Ｖｆｌｃｅｋ）、　　（１９８３）　、　　ｒシクロスギ９ ２人によって阻害されたヒト胸腺細胞及びＴリンパ球のガンマインターフェロン の合成（Ｇａｍｍａ　１ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｂｙｈｕｍ ａｎ　ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｆｎｈｉ ｂｉｔｅｄ　ｂｙｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ　Ａ）　Ｊ　、５ｃｉｅｎｃｅ　２２ １：６３−６５ＩＩ−４０，リーダー、ケイ、　（Ｒｙｄｅｒ、　Ｋ、　）、− １−ル６エフ、ラウ（Ｌ、　Ｆ、　Ｌａｕ）およびディー、ナサンス（Ｄ、Ｎａ ｔｈａｎＳ）、「成長因子により活性化された遺伝子はオンコジーンｖ−Ｊｕｎ に関連する（Ａ　ｇｅｎｅ　ａｃ目ｖａｔｅｄ　ｂｙ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔ ｏｒｓ　ｉｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｏｎｃｏｇｅｎｅ　ｖ−ｊｕｎ ）　Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｅｉ、　ＵＳＡ　８５： １４８７−１４９１１Ｉ−４１，シュミット、ジェ−、（Ｓｃｈｍｉｄ、　Ｊ、 　）およびシー５　ワイスマン（Ｃ，Ｗｅｉｓｓｍａｎ）、　　（１９８７）　 ＊　　ｒマイトゲン刺激性ヒト白血球におけるセリンプロテアーゼ及びベーター スロンボグロプリン様タンパク質のためのｍＲＮＡの誘導（Ｉｎｄｕｅｔｉｏｎ 　ｏｆ　ｍＲＮＡ　ｆｏｒ　ａ　５ｅｒｉｎｅｐｒｏｔｅａｓｅ　ａｎｄ　ａ　 ｂｅｔａ−ｔｈｒｏｍｂｏｇｌｏｂｕｌｉｎ−１ｉｋｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｉｎ　 ｍｉｔｏｇｅｎ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｈｕｍａｎ　１ｅｕｋｏｃｙｔｅｓ） 　Ｊ　。 Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３９：２５０−２５６ＩＩ−４２，スハトメ、ヴイー 、ビー、　（Ｓｕｋｈａｔｍｅ、Ｖ。 ｐ、）、ｚス、カルサ（Ｓ、　Ｋａｒｔｈａ）、エフ、ジー、ドパツク（Ｐ、　 Ｇ、　Ｔｏｂａｃｋ）、アール、シー、タウブ（ＲｏＣ，Ｔａｕｂ）、アール、 ジー、ホープ−ｒ　（Ｒ，Ｇ、　Ｈｏｏｖｅｒ）およびシー、サイーモリス（Ｃ ，Ｔｓａｆ−Ｍｏｒｒｊｓ）　、　　（１９８７）　、　　ｒ繊維芽、上皮細胞 およびリンパ球マイトジェンにより素早く誘発された新規な式成長反応遺伝子（ Ａ　ｎｏｖｅｌ　ｅａｒｌｙ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　　ｇｅｎｅ　 　ｒａｐｉｄｌｙ　　１ｎｄｕｃｅｄ　　ｂｙ　　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ、　　 ｅｐｉｔｈｅｌｆａｌ　ｃｅｌｌ　ａｎｄ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｍｉｔｏｇ ｅｎｓ）　Ｊ　ｒ　Ｏｎｃｏｇｅｎｅ　Ｒｅｓ。 １：３４３−３５５ ＩＩ−４３，スハトメ、ニス、ビー、　（Ｓｕｋｈａｔｍｅ、　Ｓ、　Ｐ。 ）、エックス、カオ（Ｘ、Ｃａｏ）　、　ｘル、シー、チヤツク（Ｌ。 Ｃ，Ｃｈａｎｇ）　、　　シー、エイチ、サイーモリス（Ｃ，Ｈ，Ｔｓａｉ−Ｍ 。 ｒｒｉｓ）　、ディー、スタメンコヴイック（Ｄ、　Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃｈ ）。 ビー、シー、ビー、フエレイラ（Ｐ、　Ｃ，Ｐ、　Ｐｅｒｒｅｉｒａ）、　ディ ー、アール、コヘン（Ｄ、Ｒ，Ｃｏｈｅ、ｎ）　、　ｘス、エイ、ニドワード（ Ｓ、Ａ、Ｂｄｗａｒｄｓ）　、　　ティー、ビー、ショウ（Ｔ、　Ｂ、　Ｓｈｏ ｗＳ）、ティー、クラン（Ｔ、Ｃｕｒｒａｎ）、、　エム、エム、し　ヒユ（Ｍ 、Ｍ、Ｌｅ　Ｂｅａｕ）およびイー、ディー、アダムソン（Ｂ。 Ｄ、Ａｄａｍｓｏｎ）　、　　（１９８８）　、　　ｒ成長および分化の間、及 び細胞の脱分極の後、ｃ−ｆｏｓで相互にｉ１１節された亜鉛フィンガー暗号遺 伝子（Ａ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ−ｅｎｃｏｄｉｎｇｇｅｎｅ　ｃｏｒｅｇｕ ｌａｔｅｄ　＊ｉｔｈ　ｃ−ｆｏｓ　ｄｕｒｊｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄｄｊ ｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ、　ａｎｄ　ａｆｔｅｒ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｄｅ ｐｏｌａｒｉｚａｔｉ。 ｎ）Ｊ　、　Ｃｅ１１．５３：３７−４３ＩＩ−４４，ワイス、エイ、　（Ｗｅ ｉｓｓ、Ａ、）、アール、シールド（Ｒ，５ｈｉｅｌｄｓ）　、　エム、＝、− １ン（Ｍ、　Ｎｅｗｔｏｎ）、　　ビー、マンゴ−（ＢｌＭａｎｇｅｒ）および ジェー、インボデン（Ｊ、　Ｉｍｂｏｄｅｎ）　＋　　（１９８７）　、　　ｒ インターロイキン　２　遺伝子の活性を拘束するのに要するリガンド−レセプタ ー相互作用（Ｌｉｇａｎｄ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ　１ｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ　ｒ ｅｑｕｉｒｅｄ　ｆｏｒｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔ　　ｔｏ　　ｔｈｅ　　ａｃｔｉ ｖａｔｉｏｎ　　ｏ、ｆ　　ｔｈｅ　　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　　２ｇｅｎｅ ）Ｊ　、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３８：２１６９−２１７６ＩＩ−４５，ワ イス、エイ、　（Ｗｅｉｓｓ、Ａ、）およびリュー。 ビー、インボデン（Ｊ、Ｂ、Ｉｍｂｏｄｅｎ）　、　　（１９８７）　、　　ｒ 細胞表面分子および初期の発生はヒトＴリンパ球活性中に含まれる（Ｃｅｌｌ　 ５ｕｒｆａｃｅ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　ａｎｄ　ｅａｒｌｙ　ｅｖｅｎｔｓ　１ ｎｖａｌｖｅｄ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ａｃｔｊｖａ ｔｊｏｎ）　Ｊ　ｒ　Ａｄｖ。 Ｉｍｍｕｎｏｌ、　４１：１−３８ ＩＶ−４６、ヤング、ライ。シー、　　（Ｙａｎｇ、　Ｙ、　Ｃ，）　＊エイ、 ビー、レアシッタ（Ａ、　Ｂ、　Ｃ１ａｒｌｅｔｔａ）、　　ビー、エイ。 テンプル（Ｐ、Ａ、Ｔｅｍｐｌｅ）　、　エム、ビー、チヤツク（Ｍ、　Ｐ。 Ｃｈｕｎｇ　）　、　ｘス、コヴアシック（Ｓ、　Ｋｏｖａｃｉｃ）、　リュー 。 ニス、ウィテクージアノッチ（Ｊ、　Ｓ、　Ｗｉ　ｔｅｋ−Ｇｉａｎｎｏｔｔｉ ）。 エイ、シー、レアシー（Ａ、　Ｃ，Ｌｅａｒｙ）、　　アーＪｋ、りｒ）’）（ Ｒ，Ｋｒ１ｚ）　、アール、イー、ドナヒユー　（Ｒ，ｆ！、Ｄｏｎａｈｕｅ） 。 ジー、ジー、ウォング（Ｇ、　Ｇ、　ＩＩｌｏｎｇ）およびニス、シー。 クラーク（Ｓ、Ｃ，Ｃ１ａｒｋ）、　　（１９８６）　、　　ｒヒト　ＩＬ−３ ＝ネズミのＩＬ−３に関連した新規な血液成長因子の発現クローニングによる同 定（Ｈｕｍａｎ　ＩＬ−３（Ｍｕｌｔｉ−ＣＳＦ）：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉ ｏｎ　ｂｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　 ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｊｃ　　ｇｒｏｗｔｈ　　ｆａｃｔｏｒ　　ｒｅｌａｔ ｅｄ　　ｔｏ　　ｍｕｒｉｎｅ　　ＩＬ−３）Ｊ　　、　　Ｃｅ１ｌ　　４７： ３−１０ＩＶ−４７，ヨコタ、ティ、　　（Ｙｏｋｏｔａ、Ｔ）　、ティー。 オツ力（Ｔ、　０ｔｓｕｋａ）　、ティー、モスマン（Ｔ、　Ｍｏｓｍａｎｎ） 。 ジュー。パンチェリュー　（Ｊ、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ）　、ティー、デフラン ス（Ｔ、　ＤｅＰｒａｎｃｅ）　、ディー、ブランチヤード（Ｄ。 Ｂｌａｎｃｈａｒｄ）、ジュー。イー、デ　ブリ：ｆ−ス（Ｊ、　Ｂ、　ＤｅＶ ｒｉｅｓ）　、エフ、シー（Ｆ、　Ｌｅｅ）およびケイ、アイ、アライ（Ｋ、１ ．Ａｒａｉ）　＋　　（１９８６）　＋　　’Ｂ細胞及びＴｉ胞刺激活性を発現 するマウスＢ細胞刺激因子１と同族のヒトインターロイキンｃＤＮＡクローンの 単離および特徴付け（ｌ５ｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ 目ｏｎ　ｏｆ　ａ　ｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　　ｃＤＮＡ　　ｃｌｏ ｎｅ、　　ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ　　ｔｏ　　ｍｏｕｓｅ　　Ｂ−ｃｅｌｌｓｔ ｉｍｕｌａｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ　１．　ｔｈａｔ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｓ　Ｂ −ｃｅｌｌ　ａｎｄＴ−ｃｅｌｌ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　ａｃ口ｖｉｔｉｅ ｓ）Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。 Ｓｅｔ、　ＵＳＡ　８３：５８９４−５８９８ＩＩ−４８，ヨコタ、ティー　、 　　（Ｙｏｋｏｔａ、　Ｔ）　ｒ　アール。 エル、コッフマン（Ｒ，Ｌ、　Ｃｏｆｆｍａｎ）、　ｘイチ、ハギヮラ（Ｈ０Ｈ ａｇｉ＊ａｒａ）　ｒ　ディー、エム、シーック（Ｄ、Ｍ。 Ｒｅｎｎ１ｃｋ）、　ワイ、タケベ（Ｙ、　Ｔａｋｅｂｅ）　、ケイ、ヨコタ（ に、Ｙｏｋｏｔａ）　、　ｘル、テンプル（Ｌ、　Ｇｅｍｍｅｌｌ）、　　ビー 、シュレイダ−（Ｂ、５ｈｒａｄｅｒ）　、　　ジー、ヤング（Ｇ、　Ｙａｎｇ ）、　　ビー。 メイヤーソン（Ｐ、　Ｍｅｙｅｒｓｏｎ）、ジュー。ルー（Ｊ、Ｌｕｈ）　、　 ビー、ホイ（Ｐ、）ｔｏｙ）　、　　ジュー。ペン（Ｊ、Ｐｅｎｅ）、エフ、ブ リニレ（Ｐ、Ｂｒ１ｅｒｅ）、　ｘイチ、スピッツ（Ｈ，５ｐｉｔｓ）　、　リ ュー。 パンチェリュー　ティー　−（Ｊ、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ　Ｔ、　）　＋　　ジ ュー。イー、デ　ヴリエス（Ｊ、Ｅ、　Ｄｅ　Ｖｒｉｅｓ　）　、　エフ、ディ ー、シー（Ｐ、　Ｄ、　Ｌｅｅ）、エヌ、アライ（Ｎ、　Ａｒａｆ）およびケイ 、アイ、アライ（Ｋ、［、Ａｒａｉ）　、　　（Ｌ　９８７）　、　　ｒマウス 及びヒト　ＩｇＡ増強因子及び好酸球コロニー刺激因子活性を暗号化するリンフ ォカインｃＤＮＡクローンノ単離および特徴付け：インターロイキン５との関係 Ｃ１ｓ。 １ａｔｊｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａ− ｃｔｅｒｊｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｙｍｐｈｋｆｎｅ　ｃＤＮＡ　ｃｌｏｎｅｓ 　ｅｎｃｏｄｉｎｇｍｏｕｓｅ　ａｎｄ　ｈｕｍａｎ　ＩｇＡ−ｅｎｈａｎｃｆ ｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ａｎｄｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ　ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕ ｌａｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ：Ｒｅ１ａｔｉｏｎｓｈｉ ｐ　ｔｏ　１ｎｔｅｌｅｕｋｉｎ　５）　Ｊ　＋　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃ ａｄ。 Ｓｃｊ、ｔｌＳＡ　８４ニア３８８−７３９２ＩＩ−４９，ズラスキ、ジー、　 （Ｚｕｒａｗｓｋｆ、Ｇ、）　、　エム。 ベネディク（Ｍ、Ｂｅｎｅｄｆｋ）　＋　　ビー、ジェー、カンブ（１３，Ｊ、 　Ｋａｍｂ）、　ジュー。ニス、アブラム（Ｊ、　Ｓ、　Ａｂｒａｍｓ）、　ｘ 　ｘ　、　エム、ズラスキ（Ｓ、　Ｍ、　ＺｕｒａｗｓｋＤおよびフランク　デ ィー。 シー（Ｐｒａｎｋ　Ｄ、　Ｌｅｅ）、　　（１９８６）　、　　ｒｖウスＴヘル パー細胞の活性は、豊富なプレプロエンケファリン　ｍＲＮＡ合成を誘発する（ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｏｕｓｅ　Ｔ　ｈｅｌｐｅｒ　ｃｅＩＩｓ　（ ｎｄｕｃｅｓ　ａｂｕｎｄａｎｔ　ｐｒｅｐｒｏｅｎｋｅｐｈａｌｉｎ　ｍＲＮ Ａ５ｙｎｔｈｅｓｉｓ）　Ｊ　Ｉ　５ｃｉｅｎｃｅ　２３２ニア７２−７７５実 験の部ＩＩＩ マイトジェン誘導遺伝子はＴ細胞活性化の初期段階において複数の調節経路に従 う。 幾つかの細胞表面分子のどれかを経由するＴ細胞へのマイトジェンシグナルの伝 送は、多様な細胞内応答を引き出し、その幾つかまたは全部はその後の遺伝子発 現出来事を調節する。そのような遺伝子を調節する経路の多様性を評価するため に、９種の新規なマイトジェン誘導遺伝子の発現が、種々のＴ細胞活性化剤に応 じて試験された。別個の第２シグナルの、個々のまたは共同してのマイトジェン 刺激遺伝子誘導に対する相対的な貢献、および、異なる細胞表面構造から発生す る時々異なるシグナルに対する個々の遺伝子の応答能力は、ここに説明されてい る。マイトジェンモノクローナル抗体でのＴ細胞の活性化は、ＣＤ２またはＣＤ ３細胞表面分子に、またはＰＨＡと共に誘導された全９種の遺伝子に対して向け られている。かくして、細胞表面結合特性とは無関係に充分に有糸分裂させる薬 剤（ｆｕｌｌｙ　ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ　ａｇｅｎｔ）による刺激は、ここで研究 する全ての遺伝子の発現に関連している。しかしながら、５種の調節種類（ｒｅ ｇｕｌａｔｏｒｙｃ］ａｓｓｅｓ）を包含する不均等な遺伝子発現パターンは、 ＰＭＡ、カルシウム　イオノフォレ（ｃａｌｃｉｕｍ　１ｏｎｏｐｈｏｒｅ）お よび抗−ＣＤ２８モノクロ一ナル抗体、細胞内出来事のサブセット（ｓｕｂｓｅ ｔ）のみを仲介する薬剤の使用、およびこうした不完全マイトジェンシグナルに よって解明された。ＩＬ−２および２種の新規リンホキン（ｌｕｍｐｈｏｋｉｎ ｅ）は、他のマイトジェン誘導遺伝子に係るユニークな転写活性化シグナルを必 要とすると見られる一つの調節種類を表している。前記の実験の部で示したよう に、マイトジェン刺激に対するＴ細胞の迅速な転写応答は全く複雑であり、既述 したものを越えた多（の遺伝子を含んでいる。さらに、これら９種の遺伝子のう ちの幾つかの調節表現型の区別は、シグナル経路の複雑さが細胞表面から転写レ ベルに広がっていることを示唆している。 イントロダクション 前記の実験の部には、後にＰＨＡおよびＰＭＡによる静止ヒト末梢血（ＰＢ）Ｔ 細胞のマイトジェン活性化へと誘導される迅速早期ｍＲＮＡ種に由来した６０を 越える異なる新規ｃＤＮＡクローンの単離が記載されている。 それらのデータは、Ｔ細胞に伝送された刺激への初期生化学的応答が非常に複雑 で、数多くの直接に誘導された遺伝子を含んでいることを示唆している。独特の 第２シグナルにより仲介される（ｍｅｄｉａｔｅａ）異なる経路は、この大−族 （ｌａｒｇｅ　ｆａｍｉｌｙ）の遺伝子群を誘導することを予期させる。実際に 、ここに提示されている重要な疑問は、増殖を導くそれらの刺激により引き出さ れる誘導遺伝子応答の均等性または不均等性に関する。細胞周期進行（ｃｅｌｌ 　ｃｙｃｌｅ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）において本質的な役割を担う遺伝子は 、どのようなマイトジェン応答中にも開始剤とは無関係に不均等に発現されると 予期される。さらに、誘導遺伝子の潜在的な調節種類を定義することは、与えら れた種類についての調節基調特性を最終的に明瞭にする上で重要である。 本研究は、異なる第２シグナルに影響を与えると知られている様々なマイトジェ ンおよびコミトジエン薬剤の使用による、９種の新規マイトジェン誘導遺伝子の 活性化要求の詳細な特性付けに関する。これら９種の遺伝子は、さらに研究のた めに、前記の部（セクション）に記載の大きい方の群から選択されるが、その理 由は、それらの発現がリンパ球細胞に限定されているか、または一方で、それら が免疫抑制薬シクロスポリンＡによる誘導阻害のような興味深い調節特性を示す からである。ここで研究された作用薬剤（ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　ａｇｅｎｔ） には、異なる理学的にＴ細胞表面分子に関連の無いＣＤ２．ＣＤ３またはＣＤ２ ８に向うモノクローナル抗体（ｍＡｂ）、レクチン　フィトへマグルチコン（ｌ ｅｃｔｉｎ　ｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ：　ＰＨＡ）　、カルシウ ム　イオノフオレ（ｃａｌｃｉｕｍｉｏｎｏｐｈｏｒｅ）、フォルボール　１２ −ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）　、およびジオクタノイルグリセロ ール（Ｉ）ｔｃ’りが含まれる。 抗原またはｍＡｂの、Ｔ細胞受容体またはＴ細胞の関連ＣＤ３錯体への結合は、 Ｔ細胞（１１■−２、ｌｌｌ−１８、ｌｌｌ−２３）の活性化を開始させる。Ｐ ＨＡ仲介刺激（ＰＨＡ−ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ）は、選択 された表面損失突然変異体（ｓｕｒｆａｃｅ　１ｏｓｓ　ｍｕｔａｎｔｓ）　（ ｌｌｌ−２０）での研究により断定されたように、抗体受容体コンプレックスま たは対等発現分子（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｌｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｍｏｌｅ ｃｕｌｅ）を必要とするとみられる。ＣＤ２錯体（Ｅロゼツト受容体）を含めＴ 細胞活性化の抗原独立経路（ａｎＬｔｇｅｎ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｐａｔ ｈｗａｙ）もまた記載されている（ｉｌｉｌ　９）、Ｔ細胞上の細胞表面受容体 への上記マイトジェンの結合は、イノシトール　１．４．５−　トリホスフェー トの生産、増加した細胞内カルシニウム濃度（（Ｃａ”ｉ））　、プロティン　 キナー七Ｃ（ＰＫＣ）の膜トランスローケーション（ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｔｒａ ｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）およびその後の増殖を生じさせる（Ｉ［１６、ｌｌｌ− ９、ｌ１ｌ−１３、ｌｌｌ−１５、Ｉｌｌ−２２、ｌｌｌ−２５）。対照的に、 抗−ＣＤ２８による刺激がサイクリックＧＭＰ濃度の上昇を導き、（Ｃａ”）を 増加させたり、ＰＫＣ（１１１１２、ｌｌｌ−１４、ｌｌｌ−２２、目１−２６ ）を活性化したりしないので、ＣＤ２８により伝送されたシグナルは、ＣＤ２ま たはＣＤ３のそれとは基本的に異なると思われる。さらに、ＣＤ２８により開始 されたＩＬ−２生産は、ＣＤ３またはカルシウム　イオノ７ｔしおよびＰＭＡ　 （ＩＩＩ−８）により誘導されるそれに比べ、シクロスポリンへの効果に抵抗性 である。さらに抗−ＣＤ２８単独は、Ｔ細胞の増殖を刺激しないが、コミトジェ ン、例えばＰＭＡ　（Ｉｌｌ−７，ｌｌｌ−８）の同時存在を必要とする。Ｔ細 胞はまた、細胞表面相互反応をバイパスし、ＰＭＡまたはＤｉＣ８に加えての続 くカルシウム　イオノフォレでの処理によっても活性化され得る；後者の二つの 薬剤は、プロティンキナーゼＣ（［Ｉ［−１６，１１１２１）を刺激することに より、少な（とも一部で作用する。 イオノフォレで仲介された（Ｃａ”）の増加は、ＤｉＣ３またはＰＭＡと相乗的 に作用して増殖を、また精製ＰＢ　　Ｔ細胞における誘導遺伝子発現とＴ細胞系 ジャーカット（Ｉｌｌ−１６）におけるリンホカインを含めた幾つかの誘導遺伝 子発現を刺激する。 細胞は白血球永動法（Ｉｅｕｋｏｐｈｏｒｅｓｆｓ）により通常の健康な提供者 から得られ、そしてＰＢリンパ球は、リンパ球分離媒体を通しての密度勾配遠心 分離、続いてのナイロンウールカラム通過による接着細胞（単球およびＢ細胞） の除去により単離された。得られた細胞は、ＦＡＣ３による測定では、１％のＢ 細胞と１％以下の半球を有していた。Ｔ細胞は、１０％加熱−不活性化ウシ胎子 血清を含むＲＰＭＩ−１６４０培地中、２Ｘ１０’／ｍｌで培養され、以下の薬 剤：１０ｎｇ／ｍｌで使用される抗−ＣＤ３　（ｍＡｂ　　０ＫＴ３．０ｒｔｈ ｏ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ　）　　；３　ｕ　ｇ／ｍ　１で使用されるＰ　Ｈ Ａ　−Ｐ　（Ｂｕｒｒｏｕｇｈ、ｓ−Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）　；抗−ＣＤ２　（参 照ｌｌｌ−１９：抗−Ｔ１１２および抗−Ｔ１１３腹水、Ｂ、　Ｒｅ１ｎｈｅｒ ｚより入手）の一つで刺激された；各腹水は１　：　２００の希釈比で使用され た。ＰＢＴ細胞のピーク増殖の刺激能またはジャーカット細胞によるＩＬ−２産 生により評価される最適濃度を決定するために全試薬が滴定された。培養時、シ クロヘキシイミド（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）がｌｏμｇ／ｍｌ で使用された。各薬剤の増殖刺激能は、４日後に分析される！Ｈ−チミジン組み 込み（”Ｈ−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ　１ｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）にり測定され た。代表的な実験では培地単独で１．００３ｃｐｍ、ＰＨＡで１８４，５６７　 ｃｐｍ　、抗−ＣＤ２で１０７，９０８　ｃｐｍそして抗−ＣＤ３で１，２４８ 　ｃｐｍを示した。ＰＢ　　Ｔ細胞内の抗−ＣＤ３への応答の欠如は、同一提供 者からの未分画ＰＢＬが１２７，７６０　ｃｌ）ｍを与えるので半球喪失による と見られる。 ＣＤ２８＋ＰＢ　　Ｔ細胞の培養および活性化ＰＢ　　Ｔ細胞の約８０％はＣＤ ２８＋を表わし、従って応答するＣＤ２８＋細胞による最大応答を確実にし、Ｃ Ｄ２８＋およびＣＤ２８＋集団（ｐｏｐｕ］ａｔｆｏｎｓ）の潜在的な相互作用 （ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）を除くために、ＣＤ２８＋細胞は前述のように精製 された（ＩＩＩ−８）。細胞は概して上記のごと（培養され、１１００ｎ／ｍｌ での抗−ＣＤ　２８　ｍ　Ａ　ｂ　９　、　３　（Ｊ、Ａ、Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ より入手）、１３３ｎＭｍでのイオノマイシン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ　；　Ｄ 　Ｍ　Ｓ　Ｏ中に溶解）および０．３ｎｇ／ｍｌでのＰＨＡ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈ ｅｍｊｃａｌ　Ｃｏ、　；　ＤＭ　Ｓ　Ｏ中に溶解）で４時間刺激された。 予備実験は、全遺伝子が４時間で最大に誘導されることを示していた。ＰＭＡ濃 度は、抗−Ｃ０２Ｂまたはそれ自身まだ分裂誘起性でないイオノマイシンのいず れかとで最大に相乗作用させるべ（、ｓＨ−チミジン組み込み（ｉｎｃｏｒｐｏ ｒａｔｉｏｎ）により測定された。各々の薬剤のマイトジェン活性は、刺激３日 後のｓＨ−チミジン組み込みで分析された。代表的な実験では、培地単独で１２ １ｃｐｍ、ＰＭＡで４８８ｃｐｍ　ＳｍＡｂ　９．８単独で２３６ｃｐｍ　、　 ｍＡｂ　９．　３とＰＭＡで５８，５９０ＣＩ）ＩＩＩ、イオノマイシン単独で １８６ｃｐｍ、イオノマイシンとＰＭＡで４４．７６０ｃｐｍそして固定化抗− ＣＤ３で６９，３９０ｃｐｍを示した。　　ジャーカット細胞（Ｊｕｒｋａｔ　 ｃｅｌｌｓ）の培養および活性化：ジャーカット細胞は、ウシ胎子血清を２Ｘ１ ０’／ｍｌないし８×１ｏ値／ｍｌの密度で含むＲＰＭＩ−１６４０培地中に保 持した。細胞の新鮮な部分試料を約６週間緩解した。細胞を４Ｘ１０’／ｍ】で 、１種またはそれ以上の次の薬剤で刺激した：１゜０８ＭでのＤ　ｉ　Ｃ３（Ｍ ｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｐｒｏｂｅｓ、　Ｉｎｃ、、Ｂｕｇｅｎ、ＯＲ；無水エタノ ール中に溶解）、５００ｎＭでのイオノマイシン、１０μ／ｍｌでのシクロヘキ シイミド。ＤｉＣ３およびイオノマイシン濃度は、単独で使用されるとどちらも 全＜ＩＬ−２を産生じないけれども、相互で最大限に相乗作用させるため、Ｔ細 胞系ＧＴＬＬに依存するＩＬ−２に基づいて評価されるＩＬ−２産生により測定 した。 ノーザン（ＲＮＡプロット）分析：指示された時点間の培養に続いて、全細胞の ＲＮＡをキニジンチオシアネートで抽出し、５．７Ｍ−ＣｓＣ］　　（夏１ｌ− ３）のクッションを通す遠心分離により精製した。ＲＮＡ（ＸＯμｇ／レーン） をホルムアルデヒド−アガロースゲル中の電気泳動により分離し、遺伝子スクリ ーン膜フィルタ（ＮＢＮ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｐｒｏｄｕｃｔ）上にプロットし 、ニック翻訳（ｎｉｃｋ−ｔｒａｎｓｌａｔｊｏｎ＞によりＷＲ製される１ｍｐ −ラベル化精製ｃＤＮＡインサートにハイブリット化した。 結果 初期実験において、９種の新規マイトジェン誘導遺伝子の発現は、ＰＢナイロン ウール非接着Ｔ細胞で試験された。細胞は、様々に変えられた時間、（ｉ）ＯＫ Ｔ３゜ＣＤ３錯体（１）の非多型性鎖に結合するモノクローナル抗体：　（ｉｉ ）ＣＤ　２分子（ＩＩＩ−１９）に向う２種のｍＡｂマイトジェン組合せ；およ び（ｆｉｔ）　ＰＨＡ　；で刺激され、９種の遺伝子の堅固状態（ｓｔｅａｄｙ 　ｓｔａｔｅ）ｍ　ＲＮ　Ａレベルが測定された。 図１１１−１は各遺伝子にとって、ＰＨＡ、抗−ＣＤ２および抗−ＣＤ３刺激が 同様な応答結果に終ったことを示している。ｍＲＮＡ発現の相対的なレベルが低 レベルの誘導性（ｐＡＴ　　２２９）から強誘導性（ｐＡＴ　　４６４）まで等 板付けされ得るヒエラルキー（ｂｉｅｒａｒｃｈｙ）は３種のマイトジェンのい ずれにも応答すると見ることができる。ＰＨＡ、　　または抗−ＣＤ２または抗 −ＣＤ３ｍＡｂのどれによっても、試験された９種の遺伝子のうち２つは強（誘 導され（ｐＡＴ　　４６４．図１１１−１　：　ｐＡＴ　　７４４．データは図 示せず）、２つは適度なレベルに誘導され（ｐＡＴ　　５６３．図１１１−１　 ：　ｐＡＴ　　１２０．データは図示せず）、２つは低いレベルに誘導され（ｐ ＡＴ　　４１６．図１１ｉ１　：　ｐＡＴ　　２３７．データは図示せず）、そ して３つは弱く誘導された（ｐ　ＡＴ２２９、図１１１−１　：　ｐＡＴ　　１ ５４およびｐＡＴ　　２２５、データは図示せず）。ＰＭＡの存在下における上 記マイトジェンのいずれかでの刺激は、ＰＨＡ、抗−ＣＤ２または抗−ＣＤ３ｍ Ａｂ単独と比較して、全遺伝子にとってそ高められた応答を導（（データは図示 せず）。 さらに、ｍＲＮＡ蓄積の動力学（ｋｉｎｅｔｉｃｓ）は各遺伝子にとってユニー クであるけれども、これらの動力学は使用される刺激に係りなく、各遺伝子にと って相対的に同質である。 タンパク質合成の中断が遺伝子の発現に影響するかどうかを決定するために、細 胞はシクロヘキシイミドの不在下または存在下で刺激された；以前の研究は、多 くの誘導遺伝子のｍＲＮＡレベルがこれらの条件（１１１４，１１１−１０、ｌ ｌｌ−１１）で高められることを示している。 マイトジェン薬剤へのシクロヘキシイミド添加の相対的な効果は、ｍＲＮＡレベ ルの変調に係るシクロヘキシイミドのマグネチュードが遺伝子間で実質的に検知 できないほどから１０倍以上まで異なるけれども、試験された各遺伝子にとって 種々の刺激の間で一定であった。 上記結果（表１１１−１にまとめた）は、これらの新規遺伝子が、研究用のＲＮ への製造（実験の部ＩＩ）に使用されるものよりもマイトジェン薬剤によって誘 導されることを示している。重要なことに、抗原結合受容体（ＣＤ３）内の一つ の鎖に結合しているｍＡｂを経由する刺激は、ここで研究された新規遺伝子の発 現を誘導する。このように、Ｔ細胞がＣＤ２またはＣＤ３細胞表面受容体を通じ て或はＰＨＡで活性化される時、この誘導遺伝子のパネルにおける各遺伝子は、 一定の動力学パターンと、これらシグナルを発生させるのに使用された薬剤に係 りの無い発現レベルを示す。 表１１１−１　：　　図１１１−１−３に使用されている薬剤に応答してマイト ジェン誘導された遺伝子についてのノーザンプロットデータの概要、記号：＋、 ラベル化プローブへのｍＲＮＡハイブリッド化；−１非ハイブリッド化；十／− １弱いハイブリッド化；Ａｂ、ＤｉＣ８−およびイノマイシン仲介発現の廃棄（ ａｂｒｏｇａｔｉｏｎ）　；　Ｉ　ｎ　ｃ　ｒ　ｒＤｉＣ８−およびイノマイシ ン仲介発現の増加レベル；ＮＤ、実験を行なわず。　異なる細胞表面受容体への 結合にも拘らず、上記マイトジェンの各々は同様で迅速な細胞内応答を発生させ ることを示し、その一部または全部は回目ｒ−１中の試験された９種の遺伝子の 活性化を必要とするかもしれない。しかしながら、この実験で用いられた条件は 、用いられた３種の刺激の一つについては結果として増殖を生じさせないので、 これらの９種の遺伝子の発現は、ＤＮＡ合成を開始させるのには不十分である。 　さらに、９種の遺伝子の誘導要求が一族に（ｆａｍｉｌｉｅｓ）にグループさ れ得るかを問うために、高精製Ｔ細胞が、異なる生化学的シグナルを発生するコ ミトジェン薬剤で刺激された。これらの薬剤には、カルシウム　イオノフォレ、 ＰＫＣ活性活性末剤は抗−ＣＤ２８ｍＡｂが含まれており、そのどれもが精製Ｔ 細胞内のＤＮＡ合成を刺激しない（ＩＩＩ−８、ｌｌｌ−１６、［１１２４およ びｌｌ１−２６に再掲）。それに対し、精製Ｔ細胞は、カルシウム　イオノフォ レまたは抗−ＣＤ２８ｍＡｂとＰＭＡ　（材料および方法参照）とを組み合わせ て処理した後、増殖した。 ＰＭＡ、抗−ＣＤ２８ｍＡｂ９．３．イオノマイシン、ＰＭＡ＋抗−ＣＤ２８＋ ＰＢおよびＰＭＡ＋イオノマイシンでＣＤ２８＋Ｔ細胞を刺激して得られた堅固 状態ｍＲＮＡレベルはＩｇｒｌｌ−２中に示されている。ＣＤ２またはＣＤ３経 由の刺激とは異なるように、それらは全９種のマイトジェン誘導遺伝子からグレ ード化された応答を導き、ＣＤ２８を通じた活性化は明らかに９種の新規遺伝子 を異なるグループに区別した（図１１１−２および表１１１−１）。ｐＡＴ　　 ４１６（図１１１−２）によって例示される、ｐＡＴ　　１２０、ｐＡＴ　　１ ５４、ｐＡＴ　　２２５およびｐＡＴ　　２２９（データは示さず）を含む一つ グループは、抗−ＣＤ２８に応答を示さなかった。この遺伝子群はＰＭＡ単独に 可変の応答性を示すが、抗−ＣＤ２８によるＰＭＡシグナルの増強作用（ｐｏｔ ｅｎｔｉａＨｏｎ）は如何なる場合も観察されなかった。ＣＤ４．ＣＤ８または ＣＤ４５に結合しているコントロールｍＡｂでの刺激は、堅固状態ｍＲＮＡレベ ルに影響しなかった。しかしながら、ＰＭＡ単独で観察された堅固状態ｍＲＮＡ レベルは、ＰＨＡとＰＭＡの共同刺激により高められた（データは示さず）。第 ２の遺伝子群において、抗−ＣＤ２８応答性は、４種の遺伝子（ｐＡＴ　　２３ ７およびｐＡＴ　　４６４．図１１１−２　＋　ｐＡＴ　　５６３およびｐＡＴ ７４４、データは示さず）についておよびＩＬ−２（Ｉ［ｉ８、データは示さず ）について、ｍＡｂ９．３とＰＭＡの間で相乗作用として観察された。ＰＭＡ単 独では可変の発現レベルを誘導できないけれども、水溶性または架橋化ｍＡｂ９ ．３での遺伝子誘導は、この群には見られなかった。それに対し、ＩＬ−２ｍＲ ＮＡはＰＭＡ単独で誘導されなかったが、ＰＭＡとｍＡｂ９．３の相乗的組合せ に応答して誘導された。全９種のマイトジェン誘導遺伝子は、固定化された抗− ＣＤ３ｍＡｂに応答しくデータは示さず）、ＣＤ２８＋ＰＢ　　Ｔ細胞における 遺伝子発現パターンが図ｆｌｉｔ中に掲げられたより少量の厳格精製ＰＢ　　Ｔ 細胞に匹敵することを示した。 これらの結果は、図１１１−１に示されているデータを広げ、また、代わりのＰ Ｂ　　Ｔ細胞活性化手段を用いることによってＰＨＡ、抗−ＣＤ２または抗−Ｃ Ｄ３仲介シグナルに全て応答する９種のマイトジェン誘導遺伝子が明らかにＣＤ ２８誘導シグナルに応答するグループ（ＰＭＡの存在下）と、そのようなシグナ ルに応答しないグループとに区別できることを示している（表１１１−８参照） 。ｍＡｂ９．８処理に応答する遺伝子のため、ＣＤ２８、ＣＤ３およびＣＤ２− 仲介活性化に共通するシグナルのどれもが、これら遺伝子の幾つかを調節できる か、またはｍＡｂ９．８が、代わりのメカニズムで幾つかの遺伝子の発現を誘導 できる新規シグナルを伝送する。 コミトジェンＰＭＡおよびｍＡｂ９．３の効果を他のコミトジェンＣａ　ｆｉ４ イオノフｔしと比較するために、ＰＭＡの不在下または存在下で細胞ｔ・イオマ イシンで処理した。興味深いことに、ｍＡｂ９．３とＰＭＡ間に相乗作用を観察 させるための遺伝子の４種のうちの３種は、イオノマイシンとＰＭＡ間に強い相 乗作用を発揮させ（ｐＡＴ　　２３７．ｐＡＴ　　４６４．図１１！−２；　ｐ 　ＡＴ７４４、データ示さず）、そしてｍＡｂ９．３非応答性遺伝子は同様にイ オノマイシンにより影響されない。ｍＡｂ９．３が（Ｃａ　”）　　ｉ　（ＩＩ Ｉ−２４）に影響を与えるかは不明である。このことは、ｐＡＴ　　５６３がＰ ＭＡ（表１１１−３）の存在下で抗−ＣＤ２８とイオマイシンにより異なって調 節されることの観察と合わせて、これら２種の部分的マイトジェン薬剤がＰＭＡ と相乗作用するメカニズムが同様に異なることを示唆している。 マイトジェン誘導遺伝子の調節−族をさらに定義するために、Ｔ細胞系ジャーカ ット中の遺伝子誘導におけるイオノマイシンおよびＤｉＣ８−仲介ＰＫＣ活性化 の分離および併合効果を試験した。ＤｉＣ８は、ＰＫＣ（ＩＩｒ−５、＋１１１ ６、ｌｌｌ−１７）を逆転可能に活性化することにより内因性ＤＣの効果をまね る細胞透過性合成ジアシルグリセロール（ＤＧ）である。以前の研究は、上記の ように分析された休止Ｔ細胞中の９種のマイトジェン誘導遺伝子のうちの８種が 、ＰＨＡとＰＭＡの併合添加でジャーカット中で誘導性であることを示している ；ｐＡＴ　　５６８は構造的に低レベルで発現される（データは示さず）。シク ロヘキシイミドの存在下または不在下におけるイオノマイシンおよび／またはＤ ｉＣ８でのジャーカット細胞の処理は、３種の遺伝子調節種類が定義できること を示している。発見された第１の種類は、図［１１３中のｐＡＴ　　２３７によ り代表され、ＰＫＣ誘導性であるが、（Ｃａ”）ｉシグナルで可変的な僅かの相 乗作用を示すかまたは相乗作用を全（示さない遺伝子を含む（ｐＡＴ　　２３７ ．図１１１−８　：　ｐＡＴ　　１２０．　ｐＡＴ　　１５４．ｐＡＴ　　２２ ５およびｐＡＴ　　４１６゜データは示さず）。この種類の遺伝子について、イ ノマイシン単独への応答は発見されなかった。これら遺伝子の全てはＰＢ　　Ｔ 細胞中で、ＰＭＡ仲介ＫＰＣ活性化により同様に誘導され、ジャーカット中のＰ ＭＡ応答における遺伝子発現パターンは、ここでＤｉＣ８として表されているそ れと同一であった（データは示さず）。ｐＡＴ　２２９を含む第２の種類はＫＢ Ｃ誘導性であり、〔Ｃａ”）ｉシグナルにより増強され得る。この点に関しｐＡ Ｔ　　２２９はＩＬ−２Ｒに似ている（データは示さず）が、ｐＡＴ　　２２９ が増加した（Ｃａ’◆〕　ｉレベル単独で誘導されることにおいてＩＬ−２Ｒと は異なっている（図１１１−３）。 これらの細胞で観察された最後の種類には、ｐＡＴ４６４（データは示さず）お よびｐＡＴ　　７４４並びにＩＬ−２（図１１１−３）が含まれ、その誘導は、 この実験で評価された両シグナルの必要性を示した。加えて、ジャーカット細胞 中の種々の遺伝子の、シクロヘキシイミドの存在下での誘導剤に対する応答は、 ＩＬ−２，ｐＡＴ　４６４およびｐＡＴ　　７４４を他の遺伝子から区別する付 加的な相互関係を示した。特に活性化剤と同時に加えられたシクロヘキシイミド は完全にＩＬ−２，ｐＡＴ７４４（図１１１−３）およびｐＡＴ　　４６４ｍＲ ＮＡの蓄積を防止し、新しく合成されたタンパク質を必要とする遺伝子誘導メカ ニズムを意味している。対照的にシクロヘキシイミド処理は他の二つのグループ においてｍＲＮＡレベルを高めた（図１［１−３，データは示さず）。 ディスカッジョン ９種の新規マイトジェン誘導遺伝子のパネルを誘導する能力に関して異なるシグ ナル経路の効果は表１１１−１にまとめられている。ここで研究された遺伝子の 大部分はＰＫＧ単独活性化にある程度の応答性を示す。しかしながら、このシグ ナルは、ＰＨＡおよび抗−ＣＤ３または抗−ＣＤ２ｍＡｂがＰＢ　　Ｔ細胞中の 全ての遺伝子についてＰＭＡの効果を高める（データは示さず）ので、評価した どの遺伝子についても最大応答性が不十分であり、一方、抗−ＣＤ２８およびイ オマイシン（図１１１２、データは示さず）は、ＰＭＡと一緒になってＰＢＴ細 胞中胸中れら遺伝子のサブセットのために相乗作用を示す。 ＰＨＡ、抗−ＣＤ３または抗−ＣＤ２ｍＡｂに応答する各遺伝子のための明らか な発現パターンの均等性は、質的に類似する一連の細胞内生化学的出来事が、こ れら薬剤でＴ細胞を活性化したことに由来することを反映するのかも知れない。 様々な誘導剤に応じた遺伝子発現の共通パターンは、シグナル経路の数多（のレ ベルで潜在的に仲介され得る。シグナル発生のレベルで、細胞内メツセンジャー の類似する一群が発生するか、または代わりにこれら遺伝子の転写または後転写 の調節におけるそれらの効果に近い点で様々なシグナルを伝達する分子の集合が 起こる。これら遺伝子をコントロールする異なる調節基調（ｄｉｓｔｉｎｃｔ　 ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｍｏｔｉｆｓ）は、転写に正の効果（ｐｏｓｉｔｉｖｅ 　ｅｆｆｅｃｔ）を発生するにもかかわらず異なるシグナルに応答性であろう。 ＰＨＡまたは抗−ＣＤ３および抗−ＣＤ２ｍＡｂでの刺激に対するＰＢ　　Ｔ細 胞応答の明瞭な均等性にも拘らず、誘導遺伝子のための調節差異は、そのシステ ムを、上記のもの（ＩＩＩ−２４）および抗−ＣＤ２８ｍＡｂに関連するシグナ ルのサブセットを発生させると見られるイオノマイシンで探査することによって 暴かれ、それが異なる第２のシグナルを発生することは明らかである（Ｉｆ■− ８，！ｆｉｌ　２．　ｌｌｌ−１４，ｌｌｌ−２２，ｌｌｌ−２６）　、イオノ マイシンおよび抗−ＣＤ２８に非応答性である種類■遺伝子（表１１１−１）は 、Ｔ細胞中の前記マイトジェン誘導遺伝子の大分部に比較して新規である。さら に、ジャーカット細胞系における膜−バイパス刺激の効果を分析することにより 不均等性が観察された。５種の調節種類が９種のマイトジェン−誘導遺伝子のこ の相対的に小さな群を職別できるという事実は、このＴ細胞マイトジェン刺激の 段階で作用する調節メカニズムの複雑さを示している。 遺伝子誘導の要求は一般的に休止Ｔ細胞およびジャーカット細胞においてパラレ ルであるが、成る遺伝子の調節において差異が見られた。特に刺激性のシクロヘ キシイミドの添加は、ジャーカットにおいてはｐＡＴ　　４６４、ｐＡＴ　　７ ４４およびＩＬ−２のマイトジェン誘導を廃止させる（図１１１−３、データは 示さず）がＰＢ　　Ｔ細胞においてはこれら遺伝子のためのｍＲＮＡレベルを僅 かに高めた（図１０−１、データは示さず）。第二にイオノマイシンは、ＰＢ　 　Ｔ細胞中のｐＡＴ　　２３７ｍＲＮＡレベルを高めることにＰＭＡで相乗作用 を示すが、ジャーカット細胞では示さず、一方、ｐＡＴ　　２２９はＰＢ　　Ｔ 細胞中でイオノマイシンに応答しないが、ジャーカット中ではそうする。これら の不均衡は、ＰＢＴ細胞が集団サブタイプに関して不均等であるという事実に、 または静止した非形質転換細胞と環化癌細胞との間の基本的な活性化状態におけ る差異に由来しているかもしれない。それとは別に、ジャーカット細胞は、成る 遺伝子誘導出来事に必要な特異調節成分を異常に高発生または低発生するかもし れない。 本研究は、ｐＡＴ　　４６４およびｐＡＴ　　７４４の調節における目立つ相互 関係をＩＬ−２のそれと共に示した。事実、ｐＡＴ　　４６４およびｐＡＴ　　 ７４４のＤＮＡ配列は、リーダーペプチドを示している誘導アミノ酸配列と、１ 種のリンホキナーゼの特性を示す特異位置でのアミノ酸の保存を生じさせる。こ の遺伝子の調節種類は、ＰＢ　　Ｔ細胞中のＣＤ２およびＣＤ３に加えて、ＣＤ ２８を通して仲介されたシグナルに応答し、ジャーカット細胞における二つのシ グナルの必要を示し、そしてそれらの誘導はジャーカット細胞におけるシクロヘ キシイミド処理により完全に廃止させられる。ジャーカット細胞におけるｍＲＮ Ａ誘導を進行するタンパク質合成の必要は、ここで研究された多くの他のマイト ジェン誘導遺伝子にくらべ、この種類の遺伝子にはユニークであると見られ、そ して一方では、これらのための新規な保存された調節メカニズムと最もありそう な他の他のリンホキナーゼを示唆している。 この章は、Ｔ細胞のマイトジェン刺激に横たわっている遺伝子の活性化メカニズ ムを解明するための本発明のＤＮＡ５の用途を示しており、従って炎症および／ または成長および修復における早期出来事に係る遺伝子誘導のための生化学分析 を含む本発明の具体例を示している。 刊行物 １１１−１．　　　ポルスト、ジェー、　（Ｂｏｒｓｔ、　Ｊ、　）、ニス。 アレキサンダー（Ｓ、ＡＩｅｘａｎｄｅｒ）　、ジュー。エルダー（Ｊ。 Ｂｌｄｅｒ）およびジー、テルホルスト（Ｇ、Ｔｅｒｈｏｒｓｔ）＋　　（１９ ８３）、ｒヒトＴリンパ球上のＴ８コンプレックスは４個の構造の異なる糖蛋白 （Ｔｈｅ　Ｔ３　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｏｎ　ｈｕｍａｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　 １ｎｂｏｌｖｅｓ　ｆｏｕｒ　５ｔｒｕｃｔｕｒａｌｌｙ　ｄｉｓＮｎｃｔｇｌ ｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ）Ｊ　、　Ｊ、　Ｂｉｏ、　Ｃｈｅｍ、　２５８：５１ ３５，５１４１１１１−２．　　チャング、ティー、ダブリ−Ｌ−、（Ｃｈａｎ ｇ。 Ｔ、　Ｗ、　）、　　ビー、シー、クング（Ｐ、Ｃ，Ｋｕｎｇ）、　ｘス、ビー 。 ギングラス（Ｓ、　Ｐ、　Ｇｊｎｇｒａｓ）およびジー、ボルドスタイン（Ｇ、 Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ）　、　　（１９８１）　、　　ｒＯＫＴ　３モノクロナル 抗体は、ヒトＴ細胞上で抗原認識構造体と反応するか？　（Ｄｏｓｅ　０ＫＴ３ 　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｒｅａｃｔ　ｗＨｈ　ａｎａｎｔ ｉｇｅｎ　ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　 Ｔ　ｃｅｌｌｓ？）Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｆ、Ｕ ＳＡ　７８：１８０５．１８０８１１Ｔ−３，チルグウィン、ジエー、エム、　 （Ｃｈｉｒｇｗｉｎ、　Ｊ、　Ｍ、　）　、エイ、イー、ブリジビラ（Ａ、　Ｂ 、　Ｐｒｚｙｂｙｌａ）。 アール、エフ、マクドナルド（Ｒ，Ｆ、　ＭｃＤｏｎａｌｄ）およびダブリュー 、ジエー、ルター（Ｗ、Ｊ、Ｒｕｔｔｅｒ）、　　（１９７９）　。 「リボヌクレアーゼ中の豊富な源からの生物的活性リボ核酸の単離（Ｉｓｏｌａ ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｊｏｌｏｇｆｃａｌｌｙ　ａｃｔｉｖｅ　ｒｉｂｏ−ｎｕｃ ｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄ　ｆｒｏｍ　５ｏｕｒｃｅｓ　ｅｎｒｉｃｈｅｄ　ｉｎ　ｒ ｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ）　Ｊ　、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　１８：５２９４−５２ ９９ＩＩＩ−４，コチャラン、ビー、エイチ、　（Ｃｏｃｈｒａｎ、　Ｂ。 Ｈｏ）、エイ、シー、レフエル（Ａ、Ｃ，Ｒｅｆｆｅｌ）およびシー。 エイチ、スチレス（Ｃ，Ｈ，５ｔｉｌｅｓ）、　　（１９８３）　、　　ｒ血小 板誘導性成長因子により調節された遺伝子シーフェンスの分子クローニング（Ｍ ｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ｇｅｎｅ　５ｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｒ Ｂｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆ ａｃｔ。 ｒ）　Ｊ　、　Ｃｅ１ｌ　３３：９３９−９４７１１１−５．　ディビス、アー ル、ジｚ　−、（Ｄａｖｆｓ、　Ｒ，Ｊ。 ）、ビー、アール、ガノン（Ｂ、　Ｒ，Ｇａｎｏｎｇ）、アール、エム。 ベル（Ｒ，Ｍ、　Ｂｅ１ｌ）およびエム、ビー、ゼク（Ｍ、　Ｐ　−Ｃｚｅｃｈ ）　＋（１９８５）、ｒｓｎ−１，２−ジオクタノニルグリセロール。表皮細胞 成長因子レセプターおよび細胞分裂促進に於いてホルボールジエステル作用の挙 動をする細胞−透過性ジアシルグリセロール（ｓｎ−１，２−Ｄｉｏｃｔａｎｏ ｎｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ、　Ａ　ｃｅｌｌ−ｐｅｒｍｅａｂｌｅ　ｄｉａｃｙｌ ｇｌｙｃｅｒｏｌ　ｔｈａｔ　ｍ１ｍ１ｃｓ　ｐｈｏｒｂｏｌ　ｄｉｅｓｔｅｒ 　ａｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔ ｏｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｎｄ　ｍｉｔｏｇｅｎＢｉｓ）Ｊ　＋　Ｊ、　Ｂｉ ｏｌ。 Ｃｈｅｒａ、　２６０：１５６２．１５６６１１１−６．　　　ファラー、ダブ リュー、エル、　（Ｆａｒｒａｒ、Ｗ、Ｌ、）およびエフ、ダブリュー、ルスチ ェツチ（Ｆ、　Ｗ。 Ｒｕ５ｃｅｔｔｉ）、　　（１９８６）　、　　ｒ　Ｉ　Ｌ　２レセプターの発 現とプロティンキナーゼＧ活性の関係（Ａｓｓｏｃ］ｔａｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏ ｔｅｉｎ　　ｋｉｎａｓｅ　　Ｇ　　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　　ｗｉｔｈ　　Ｉ Ｌ　　２　　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）」ｌ　Ｊ、［ｍｍｕ ｎｏｌ、　１３６：１２６６−１２７３１１１−７．　　ハラ、ティー、　（Ｈ ａｒａ、Ｔ、）　、ニス、エム。 フ（Ｓ、　Ｍ、　Ｐｕ）およびジュー。エイ、ハナエン（Ｊ、　Ａ、　Ｈａｎａ ｅｎ）＋（１９８５）、ｒヒトＴ細胞活性１１．４４キロダルトンのポリペプチ ド（９，３抗原）のダイマーに結合したヂスルフィドを介して、主なＴ細胞集団 により使用された新規活性経路（Ｈｕｍａｎ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ａｃｔｉｖａ目ｏ ｎ　Ｉｌ、　Ａ　ｎｅｗａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｐａｔｈｗａｙ　ｕｓｅｄ　ｂ ｙ　ａ　ｍａｊｏｒ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｖｉａ　ａ　ｄｉ ｓｕｌｆｉｄｅ　ｂｏｎｄｅｄ　ｊｉｍｅｒ　ｏｆ　ａ　４４　ｋｉｌｏｄａＩ ｔｏｎ　１）ＯＩＹｐｅｐｔｉｄｅ　（９，３ａｎｔｉｇｅｎ））Ｊ　、　Ｊ、 　Ｂｘｏ８Ｍｅｄ。 １６１：１５１３−１５２４ １１１−８．　　　シュン、ジー、エイチ、　（Ｊｕｎｅ、Ｇ、Ｈ，）　＋シｘ −，：Ｌイ、　　Ｌ／フッドター（Ｊ、Ａ、Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ）　、エム。 エム、ギレスビ−ｒ−（Ｍ、Ｍ、Ｇ１１ｌｅｓｐｉｅ）　、ティー、リントスチ ン（Ｔ、　Ｌｉｎｄｓｔｅｎ）およびシー、ビー、トンプソン（Ｃ，Ｂ。 Ｔｈｏｍｐｓｏｎ）　、　　（１９８７）　、　　ｒＣＤ　２８経路を含むＴ細 胞増殖は、シクロスポリン耐性　インターロイキン−２遺伝子発現と関連する（ Ｔ　ｃｅｌｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎｖｏｌｖｆｎｇ　ａ　ＣＤ２ ８　ｐａｔｈｗａｙ　ｉｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｙｃｌｏｓｐ ｏｒｉｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２ｇｅｎｅ　ｅｘｐ ｒｅｓｓｉｏｎ）Ｊ　＊　Ｍｏ１、　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、　７：４４７２− ４４８１１１１−９．　　　シュン、ジー、エイチ、　（Ｊｕｎｅ、Ｇ、Ｈ，） 　１ジェー、エイ、レッドペター（Ｊ、Ａ、Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ）　ｒ　　ビー 。 ニス、ラビノヴイッチ（Ｐ、Ｓ、　Ｒａｂｉｎｏｖｔｔｃｈ）　ｌ　　ビー、ジ エー、マルチン（Ｐ、Ｊ、Ｍａｒｔｆｎ）、　　ビー、ジー、ベテイ−（Ｐ、Ｇ 。 Ｂｅａｔｔｙ）およびジュー。エイ、ハンセン（Ｊ、Ａ、　Ｈａｎｓｅｎ）。 （１９８６）、ｒ分化抗原クラスター２　（Ｅロゼツトレセプター）またはヒト リンパ球の３（Ｔ！３）刺激の後の、カルシウム誘拐および細胞内カルシウム起 動の異なるパターン（Ｄｉｓｔｉｎｃｔ　ｐａｔｔｅｒｎｓ　ｏｆ　ｃａｌｃｉ ｕｍｕ　ｆｌｕｘ　ａｎｄｆｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｅａｌｃｉｕｍｕ　ｍ ｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ａｆｔｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｆｏｎ　ａｎ ｔｉｇｅｎ　ｃｌｕｓｔｅｒ　２　（Ｂ　ｒｏｓｅｔｔｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ） ｏｒ　３（Ｔ３）　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　１ｙａ＋ｐｈ ｏｃｙｔｅｓ）　Ｊ　＊　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　７７：１２２４ ．１２３２ＩＩＩ−１０，ケリー、ケイ、　（Ｋｅｌｌｙ、　Ｋ、　）、　　　 ビー。 エイチ、コツチャラン（Ｂ、Ｈ，Ｃｏｃｈｒａｎ）　、　　シー、ディー。 スタイルス（Ｃ，Ｄ、　５ｔｉｌｅｓ）およびビー、レダー（Ｐ、　Ｌｅｄｅｒ ）、（１９８３）、ｒリンパ球マイトゲンおよび血小板誘導性成長因子によるｃ 　−ｍ　ｙ　ｃ遺伝子の細胞特異性調節（Ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｒｅｇ ｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃ−ｍｙｃ　ｇｅｎｅ　ｂｙｌｙｍｐｈｏｃｙ ｔｅ　ｍｉｔｏｇｅｎｓ　ａｎｄ　ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｇｒｏ ｗｔｈｆａｃｔｏｒ）Ｊ　、　Ｃｅ１ｌ　３５：６０３−６１０ＩＩＩ−１１， ラウ、エル、エフ、　（Ｌａｕ、Ｌ、Ｆ、）およびディー、ナタンス（Ｄ、Ｎａ ｔｈａｎｓ）　、　　（，１９８５）　、　　ｒ培養されたマウス細胞のＧｏ／ Ｇｌ）ランジションの間、発現された一群の遺伝子の同定（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃ ａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｓｅｔ　ｏｆ　ｇｅｎｅｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｄｕ ｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ＧＯ／Ｇｌ　ｔｒａｎｓｉ目０ｎｏｆ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　 ｍｏｕｓｅ　ｃｅｌｌｓ）Ｊ　＋　ＢＭＢＯＪ、　４：３１４５−３１５１１Ｉ Ｉ−１２，レッドペター、ジュー。エイ、　（Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ、　Ｊ、Ａ、 　）＋　　シー、エイチ、シュン（Ｃ，Ｈ，Ｊｕｎｅ）、　エル。 ニス、グロスマイアー（Ｌ、　Ｓ、　Ｇｒｏｓｍａｉｒｅ）およびビー、ニス、 ラビノビッチ（Ｐ、Ｓ、Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ）　＋　　（１９８７）　＋「 表面抗原のクロスリンクはＴリンパ球中で細胞内イオン化カルシウムの起動を生 じる（Ｃｒｏｓｓ−１ｉｎｋｉｎｇ　ｏｆ　５ｕｒｆａｃｅ　ａｎｔｉｇｅｎｓ 　ｃａｕｓｅｓ　ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　１ｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａ ｒ　ｆｏｎｉｚｅｄ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｉｎ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｃｔｅｓ）　Ｊ　 ＊　Ｐｒａｃ、　Ｎａｔｌ。 Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８４：１３８４．１３８８ＩＩＩ−１３，レッド ペター、ジュー。エイ、　（Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ、　Ｊ、　Ａ、　）＋　　ジー 、エイチ、シュン（Ｃ，Ｈ，Ｊｕｎｅ）、　　ビー。 ジェー、マルチン（Ｐ、Ｊ、Ｍａｒｔｉｎ）＋　ジー、イー、スブーナ−（Ｇ、 Ｂ、５ｐｏｏｎｅｒ）　、　　ジュー。エイ、ハンセン（Ｊ、　Ａ、　Ｈａｎｓ ｅｎ）およびケイ、イー、メイアー（Ｋ、Ｂ、Ｍｅｉｅｒ）　、　　（１９８６ ）、ｒＣＤ３結合の価数およびＣＤ３細胞表面錯体の内面化は、第二の暗号に対 するＴ細胞反応を′Ｉ４節するニブロチインキナーゼＣ１細胞質フリーカルシウ ムでの硬化の違い、及び増殖（Ｖａｌｅｎｃｙ　ｏｆ　ＣＤ３　ｂｉｎｄｉｎｇ 　ａｎｄｊｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｆｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＣＤ３　ｃｅｌｌ　 ５ｕｒｆａｃｅ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｃｏｎｔｒｏｌ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｒｅｓｐｏ ｎｓｅｓ　ｔｏ　５ｅｃｏｎｄ　ｓｊｇｎａｌｓ：　＋Ｎ５ｔｉｎｃＮｏｎ　ｂ ｅｔｗｅｅｎ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　Ｃ，ｃ ｙｔ。 ｐｌａｓｍｉｃ　ｆｒｅｅ　ｃａｌｃｆｕｍ、　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔ ｉｏｎ）　Ｊ　、　Ｊ。 Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３６：３９４５−３９５２ＩＩＩ−１４，レッドペター、 ジュー。エイ、　（Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ＋Ｊ−Ａ−）＋　エム、バーソンズ、　 （Ｍ、Ｐａｒｓｏｎｓ）　ｒ　　ビー。 ジュー９マルチン（Ｐ、　Ｊ、　Ｍａｒｔｉｎ）、　ジュー。エイ、ハンセン（ Ｊ、　Ａ、　Ｈａｎｓｅｎ）およびビー、ニス、ラビノヴイッチ（Ｐ、　Ｓ。 Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ、　）及びシー、エイチ、シュン（Ｃ，Ｈ，Ｊｕｎｅ） 　（１９８６）　、　　ｒＣＤ５　（Ｔｐ６７）及びＴｐ４４細胞表面分子に対 する抗体接着：環状ニウクレチドについての効果、細胞質フリーカルシウム及び ｃＡＭＰ、仲介抑制Ｊ　、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３７：３２９９．３９ ５２２１１−１５．　　　マイノ、ブイ、シー８．エム、ジェーハイマンおよび エム、ジュー。クリンプトン（１９７５）、［ホスファチジルイノシトールの増 強された代謝回転とマイトジェンによるリンパ球活性との間の関係」。 Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、　１４６：２４７−２５２ＩＩＩ−１６，マンガー、ビ ー９．ニー、ワイス、ジェー、インボデン、ティー、レイングおよびジュー。デ ィー、ストボ（１９８７）、ｒＴ細胞抗原レセプターコンブレタスにより標識化 されたトランスメンブランにおけるプロティンキナーゼＣの役割Ｊ　、　Ｊ、　 ｒｍｍｕｎｏｌ、　　１３９：２７５５−２７６０ ＩＩＩ−１７，メイ５　ダブリユウ、ニス２．イー、ジーラベチナ及びビー、ガ トレカサス（１９８６）、ｒプロティンキナーゼＣの細胞内活性化及びジアシル グリセロールによる表面トランスフェリン　レセプターの調節はホスハチジル酸 の急速な形成と関連する自発的な可逆プロセスである。Ｊ　＊　Ｐｒｏｃ、Ｎａ ｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｉｃ、　ＵＳＡ　８３：１２８１−１２８４゜ ｌｌｌ−１８，ミューアー、ニス、ジー１．ジエイ、ジー、ホジドン、アール、 イー、フッセイ、ジエイ、ビーブロテンチス、ニス、エフ、シュロスマン及びい −、エル、ラインヘルツ（１９８ｔ）、ｒヒトＴｍ胞りローン上のレセプターを 指揮するモノクロナル抗体の抗原様効果Ｊ　、　Ｊ、　Ｂｘｐ、Ｍｅｄ、　１５ ８：９８８−９９３゜ＩＩＩ−１９，ミュウアー、ニス、ジー、アール、イー、 フッセイ、エム、ファビー、ディー、フｔクス、オー、アキュート、ケー、ニー 、フィッガラルド、ジェーシー、ホジドン、ジュー。ビー、プロテンチス、ニス 。 エフ、シュロスマン及びイー、エル、ラインハルト（１９８４）、ｒＴ細胞活性 化の代替経路：５０ｋｄＴ１１羊赤血球レセプタープロティンに対する機能的な 役割」。 Ｃｅ１ｌ　３６：８９７−９０６ ＩＩＩ−２０，モレツタ、ニー１．ニー、ボギー、ディー、オリーブ、ジー、ボ ッチーノ、ジー、フォルチスジー、パンタレオ及びエル、モレツタ（１９８７） 。 「Ｔ細胞活性化を含む分子を欠くＴ細胞変種（ＴＩ　　Ｔ。 細胞レセプター、Ｔ４４およびＴｌ　１）の選択と特徴付：異なる活性化経路中 の機能的な関係の分析Ｊ　、　ｐｒｏｃ。 Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、ｓｏｃ、　ＵＳＡ　８４：１６５４−１６５８ＩＩＩ−２ １，ニシザ牛、ワイ、（１９８４）、ｒ細胞表面シグナル形質導入と腫瘍促進に 於けるプロティンキナーゼの役割Ｊ　、　Ｎａｔｕｒｅ、３０８：６９３−６９ ７ＩＩＩ−２２，バンタレオ、ジー５．ディー、オリーブ、ニー、ボギー、ダブ リウ、ジェー、クズンボ、エル。 モレツタ及びニー、モレツタ（１９８７）、ｒヒトＴ細胞活性化のＴｌ１−依存 経路を介して標識化されるトランスメンブラン。　　１．２−ジアシルグリセロ ール及びイノシトールホスフェートの包含にたいする事実Ｊ、Ｂｕｒ、　Ｊ、　 Ｉｍ＋ｎｏｎｏ１．１７：５５−６０ＩＩＩ−２３，サイト−、ティー及びアー ル、エフ。 ゲルメイン（１９８６）、ｒＴ細胞レパートリ−の発生と選択。　Ｔ細胞認識の 分子ベースの研究からの洞察」。 ［ｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ＲｅｖｉｅｗｓＩＩＩ−２４，トルネー、ニー１ ．エフ、アルバート。 ビー、ジルステイン及びニーエム、シュミット　Ｖ　ｅｒｈｕｌｓｔ、　（１９ ８５）　、　　ｒカルシウム　イオノホレス及びホルボールエステル間の相乗作 用により迂回するリンパ球活性化の初期段階Ｊ　、　Ｎａｔｕｒｅ　３１３：３ １８．３２０ＩＩＩ−２５，ヴアイス、ニー１．ジェー、インボデン、ディー、 ショバック及びジエー、ストボ　（１９８４）、「ヒトＴ細胞活性化に於ける１ ３表面分子の役割：細胞質フリーカルシウムの増加でもたらされるＴ−３依存活 性化Ｊ　＋　Ｐｒｏｃｅ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８１： ４１６９−４１７３゜ １１１−２８．　　　ヴアイス、ニー、及びジュー。ビー。 インボデン、（１９８７）、ｒ細胞表面粒子及びヒトＴリンパ球活性を含む初期 事実Ｊ　ｒ　Ａｄｖ、　ＩＩＩｌｍｕｎｏｌ、　４１：１゜３８゜ 実験の部■ ヒトＴ細胞のマイトジェン活性化は構造的類似性と分泌因子の新規ファミリーと をあわせもつ２種の密接に関連した遺伝子を誘導する 相当するｍＲＮＡがヒト末梢血子細胞中のマイトジェン活性化により誘導される 約６０種の新規ｃＤＮＡクローンが予め単離された（実験の部■参照）。ここに は、新規リンホカイン／サイトカインをコード化する２種のクローンｐＡＴ４６ ４およびｐＡＴ７４４の一次構造および調節が記載されている。ＩＬ−２と同様 に、両方の遺伝子は薬剤の相乗作用、例えば最適発現のためにＰＨＡおよびＰＭ Ａを必要とし、そしてさらに、両方の誘導は免疫抑制剤シクロスポリンＡに感受 性である。２種の遺伝子はＴ細胞、Ｂ細胞および前骨髄球細胞系ＨＬ６０中で発 現され得るが、しかしヒト繊維芽細胞中で発現されない。このことはそれらの発 現が造血系統に限定されていることを示菅する。これらの２種のクローンにより コード化される予測ペプチドは、分泌タンパク質に特存の疎水性Ｎ末端リーダー の特徴を示す。両方のタンパク質の予測された大きさは推定上のリーダーペプチ ドの切断に基づいて約８ｋＤである。ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４ＤＮＡで 形質転換された哺乳類（ＣＯＳ）Ｊｌ胞は、リーダーペプチドが切除された後に 、ｃＤＮＡ配列から期待される大きさの新規タンパク質を分泌した。ｐＡＴ４６ ４およびｐＡＴ７４４の両方の予測Ｃ末端アミノ酸に対して生起させたウサギ抗 血清は形質転換されたＣＯ３細胞から分泌された生成物およびマイトジェン活性 化されたヒト末梢血子細胞により分泌された同じ大きさの生成物と反応した。 ｐへＴ４６４およびｐＡＴ７４４は互いに類似しており、そしていくつかの重要 なアミノ酸配列類似性と分泌因子の新たに出現するファミリーとをあわせもつ。 該因子は結合組織活性化因子ＩＩＩ　（ＣＴＡＰＩ［［）　、血小板因子４（Ｐ Ｆ４）、インターフェロン−ガンマ誘導化因子（ＩＰ−１０）、マクロファージ 炎症性タンパク質（ＭＩＰ）および好中球への走化性因子（３−１０Ｃ，ＭＤＮ ＣＦ、ＮＡＦ）を包含する。これらの因子のいくつかは炎症性応答と関連した機 能を示し、および／またはマイトジェン活性を有する。まとめると、ここに提示 されたデータは、ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４は新規なリンホカイン／サイ ト力インをコード化し、該リンホカイン／サイト力インはこれと構造的に関連し た因子によるものと同様の免疫応答の間に役割を果たす。 ｐＡＴ７４４と実質的に同一の遺伝子から誘導されたｃＤＮＡクローンは上記実 験の部工で特徴づけられた。 そのクローンはＡｃｔ−２と呼ばれる。 導入 休止Ｔ細胞の活性化で開始される遺伝プログラムを分析する必要がある。この目 的のために、マイトジェンによりヒト末梢血子細胞細胞中に誘導される６０以上 の遺伝子が単離された（実験の部■参照）。新規リンホカインをコード化し得る このコレクションの中からそれらの遺伝子を選択するために、単離された遺伝子 は因子をコード化する公知遺伝子により示される調節特性が試験された。ここに は、その遺伝子が多くの調節特性とシクロスポリン八に対する全体の感受性を包 含するＩＬ−２遺伝子とをあわせもつ２種のｃＤＮＡクローンｐＡＴ４６４およ びＩ）ＡＴ７４４の一次構造が記載されている。それらのヌクレオチド配列は分 泌タンパク質の疎水性リーダーペプチド特性を予測する。アミノ酸配列類似性は 、両方の遺伝子がある種の炎症性応答を仲介し、および／またはマイトジェン活 性を示すようにみえる小さい分泌タンパク質の新たに出現するファミリーの構成 員であるヒト末梢血子細胞は健康なヒト供血者からフェンウを一ル（Ｐｅｎｗａ ｌｌ）　ＣＳ　３０００またはＩＢＭコープ（Ｃｏｂｅ）２９９７装置でのリン ホホレシスにより得られた。リンパ球が富化された血液を引続きフィコール・ハ イバーク・グラジェントおよびナイロン・ウール・カラム上で精製した。抗ＣＤ ８染色により判断されるように、これらの細胞調製物は９０％より高いＴ細胞か ら常に構成されヒト末梢血子細胞、ジャーカット細胞およびＨＬ６０細胞は、１ ０％熱不活性化ウシつ児血清、ペニシリン、ストレプトマイシンおよびゲンタマ イシンを補足したＲＰＭ１１６４０中に、ヒトＴ細胞に対して２Ｘ１０＠細胞／ −１またはジャーカット細胞に対して５×１０６細胞／−の細胞密度でそれぞれ 維持された。細胞は以下の薬剤：植物性血球凝集素ＣＰＨＡ−Ｐニブローズ・ウ ェルカム）最終濃度１μｇ／ｄ、ホルボル１２−ミリステート１３−アセテート （ＰＭＡ）　２０　ｎ　ｇ／ｍｌ、シクロヘキシミド１０μｇ／ｄ、およびシク ロスポリンＡ１μｇ／−の１種または組合せのいずれかで処理された。一部を異 なる時間に採取し、細胞をＲＰＭ１１６４０中で洗浄し、そして全体の細胞のＲ ＮＡを単離した。 ＲＮＡ単離およびノーザン分析 全体の細胞のＲＮＡを■−２７に記載のようにグアニジウムイソチオシアネート 法により単離し、そして８μｇ（ヒト末梢血子細胞）または１０μｇ（ジャーカ ット細胞）の全体の細胞のＲＮ　Ａをホルムアルデヒドアガロースゲル上で分離 し、そして続いて１ｏｘｓｓｃを有するニトロセルロース（シュライヒャー・ア ンド・シューエル）に移した。 ニックトランスレーションおよびハイブリダイゼーショｃＤＮＡ挿入物をニック トランスレーションしく１’Ｖ−２８）、そして４０％ホルムアルデヒド、４Ｘ ＳＳＣ。 １０％デキストラン硫酸およびＩＸＸシンルト溶液中４２℃でのハイブリダイゼ ーションのためのプローブとして使用した。１０−１８時間のハイブリダイゼー ションの後、フィルターをＯ，ｌＸ５ＳＣの最終強度、６０”Ｃで洗浄した。 全長ｃＤＮＡクローンの単離 クローンｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４がサブストラクト化ｃＤＮＡライブラ リィ（上記実験の部■）から誘導された。はぼ全長のｃＤＮＡクローンがシクロ へキシミドの存在下でＰＨＡ−ＰおよびＰＭＡで４，５時間刺激したヒト末梢血 子細胞から抽出されたＲＮＡから誘導された。このｃＤＮＡライブラリィは■− ２９に記載されたようにオリゴｄＴブライミングを用いて構築され、そして次に ラムダｇｔｌＯ（ＩＶ−３０）内にクローン化ヒト胎盤ＤＮへ（１０μｇ）をＥ ｃａＲＩ　、Ｒａｍ）＋７　またはＳＳｔ［で消化し、０．８％アガロースゲル 中で電気泳動し、そしてニトロセルロースフィルターに移した。ニックトランス レーションしたｃＤＮＤＮＡ挿入物ハイブリダイゼーシヨンの後、フィルターを ｏ、１ｘｓｓｃの最終強度、５５℃で洗浄した。 ｃＤＮＡクローンの配列分析 最長のｃＤＮＡ挿入物がＭ２Ｓ　　ＲＦ１９内にクローン化され、そしてシーケ ナーゼ（ＵＢＳ）　、ｄＡＴＰ（α−５ｓＳ）および種々のオリゴヌクレオチド ブライマーを用いるジデオキシ鎖停止法（ＩＶ−３１）により配列決定された。 配列決定反応のためのブライマーは１７ｍｅｒｓとしてオリゴヌクレオチドシン セサイザーモデル３８０Ａ（アプライド・バイオシステムズ）で供給者のプロト コルに従って合成された。全てのオリゴヌクレオチドが２０％アクリルアミドゲ ル上で使用前に精製された。ｃＤＮＡ配列および予測タンパク質配列の両方がコ ンピュータデータバンク（バイオネット、カレントリリース）と比較された。 ブライマー伸長 ｐＡＴ７４４配列のヌクレオチド１３５−１５２に相補的なオリゴヌクレオチド （図ＩＶ−４Ｂ）がシクロへキシミドの存在下ＰＨＡおよびＰＭＡで４，５時間 刺激されたヒト末梢血子細胞からのＲＮＡ２０μｇにアニーリングされた。アニ ーリングは１００ｍＭ　　ＫＣｌ中で行われ、そして逆転写反応はアニーリング されたブライマー（１００μｇ　／　ｄ　）を伸長するために逆転写酵素（セイ カゲイク）を用いて■−２９に記載されたように行われた。パイグリッドを等量 のフェノール／クロロホルムで抽出し、次にエタノールに沈殿させた。最終反応 生成物は８％変性ポリアクリルアミドゲル上で分析された。 ＤＮＡ配列ラダーはサイズマーカーとして作用した。 哺乳類（ＣＯ３）細胞中のｃＤＮＡクローンの発現ＣＯ８細胞は標準ＤＥＡＥテ キストラン方法論を用いて、以下のベクターＤＮＡ　：　ＣＤＭ−８（マサチュ ーセブッ、ボストン、マサチューセッツ・ゼネラル・ホスとタルのブライアン・ シードから得られ；そしてＢ、　５ｅｅｄ。 Ｎａｔｕｒｅ　３２９　、８４０−８４２　（１９８７）に記載〕　；またはＰ ＭＴ２−Ｔ〔マサチューセッツ、ケンブリッジにあるジェネティックス・インス ティチュートから得られ；　Ｙｕ−ＣｈｕｎｇＹａｎｇ等、　Ｃｅ１ｌ　４７　 、３−１０　（１９８６）　ニ記載されタヘクターの関連初期バージョン〕のい ずれかの発現部位内に挿入されたｃＤＮ八クワクローンってトランスフェクショ Ｔリンパ球中の２種のｃＤＮＡクローンの単離および調節 アプローチはヒト末梢血子細胞のマイトジェン刺激と同時に誘導される遺伝子を 単離するために前もって（実験の部■参照）記載された。６０を越える遺伝子が 誘導化配列で高度に富化されたサブストラクト化ｃＤＮＡライブラリィから単離 された。Ｔ細胞の刺激に続いて、これらの遺伝子の多くではあるが、全てでない ものが急速に、そして３０分ないし１時間以内の一時的に誘導され、そしてそれ らの誘導レベルはタンパク質合成阻害剤シクロヘキシミドの存在下で高められた （本明細書の上記実験の部■参照）。９種の新規マイトジェン誘導化遺伝子の発 現および調節はより詳細に研究され、そしてこれらの遺伝子が種々のＴ細胞特異 的活性化剤に異なる応答を示したので、異なる調節クラスであることが明確にさ れた。（上記実験の部■参照）。 ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４と命名されたｃＤＮ人のこのコレクシジンから の２種の遺伝子は、調節特性とＩＬ−２リンホカイン遺伝子（実験の部■）とを あわせもつことが見出された。ＩＬ−２と同様に、これらの遺伝子は高度に精製 されたＴ細胞中での最適発現のためのイノマイシンおよびＰＭＡにより開始され るシグナルの結合された作用を絶対的に必要とした。さらにｐＡＴ４６４および ｐＡＴ７４４のためのｍＲＮＡは２時間以内に誘導され、そして少なくとも２４ 時間高レベルに、単離された遺伝子の大部分に見られたものとは異なる力学を維 持した（実験の部■）。 これらの調節特徴が与えられ、２種の遺伝子はさらに特徴づけられた。ヒト末梢 血子細胞調製物のＰＨＡおよびＰＭＡ両方との処理により、ｐＡＴ４６４および ｐＡＴ７４４の両方のための高レベルのメツセージが得られた（図ＩＶ−１）。 ＰＨＡは単独でこれらの遺伝子を誘導したが、より低い程度であり、そしてＰＭ Ａ単独ではほとんど効果がないか、または全く効果がなかった（図■−１）。従 って、不完全精製Ｔ細胞調製物との場合も、２種のシグナルが最適発現に要求さ れた。免疫抑制剤シクロスポリン人は血液Ｔ細胞においてＰＨＡおよびＰＭＡに よるｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４の誘導を完全に阻害した（図ＩＶ−１）。 この薬剤の同様に劇的な作用はＩＬ−２遺伝子とで生じることが知られている（ ＩＶ−３２）。図ＩＶ−１に示されるように、タンパク質合成阻害剤シクロへキ シミドの存在は活性化の間に誘導化レベルを明瞭には変化させなかった。 ２種のｃＤＮＡクローンとＩＬ−２遺伝子の間の発現の類似性をさらに調べるた めに、それらの調節はＣＤｄ＋ヘルパー細胞系ジャーカットにおいて分析された 。ＩＬ−２の誘導の必要条件はこの腫瘍系において十分に特徴づけられている（ ＩＶ−３２，ＩＶ−３３）。図■に示されように、ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７ ４４に必要とされる誘導の力学と活性化シグナルは、末梢血Ｔ細胞において見ら れるものに匹敵した。最初に、両方の遺伝子のためのメツセージはＰＨＡおよび ＰＭＡでの刺激に続いて約２時間で現れ、そしてそれらのレベルは少なくとも２ ４時間維持された。第２に、ＰＭＡ単独ではこれらの遺伝子を誘導せず、モして ＰＨＡ単独では低い程度にしか誘導しないので、両方のＰＨＡおよびＰＭＡが２ 種のｃＤＮＡの最適刺激に要求された。第３に、シクロスポリン人はここで分析 された２４時間の刺激期間の間、ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４の発現を停止 させた。 末梢血Ｔ細胞において観察されたこととは異なり、ＰＨＡおよびＰＭＡでの活性 化の間のシクロヘキシミド内包は発現の顕著な阻害を引き起こした。これは、シ クロヘキシミドが２つの異なる活性化剤、イオノマイシンおよび合成ジアシルグ リセロールＤｉＣ３（実験の部■）と−緒に添加されたときの場合だった。ＩＬ −２遺伝子がジャーカット細胞中でのシクロヘキシミドによる同様の阻害に正確 に曝されるので（ＩＶ−３２）、これらのデータはＩＬ−２、ｐＡＴ４６４およ びｐＡＴ７４４の調節における類似性を示す。シクロへキシミドがジャーカット 細胞中ではこれらの遺伝子のメツセージ誘導を阻害するが、末梢血Ｔ細胞中では 阻害しない理由は知られていない。ジャーカット細胞活性化の直後に誘導された タンパク質はＩＬ−２ｉ１１節領域への根因子の結合に必要とされるように考え られる（ＩＶ−３４，ＩＶ−３５）。 ＡＴ４６４および　ＡＴ７４４のヌクレオチド配列ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７ ４４のためのほぼ全長のｃＤＮＡクローンのヌクレオチド配列は決定された（材 料および方法の項参照）。使用された配列決定ストラテジー、生成するヌクレオ チド配列およびコード化されるタンパク質の予測アミノ酸がｐＡＴ４６４および ｐＡＴ７４４に対してそれぞれ図ＩＶ−３およびＩＶ−４に示されている。クロ ーンｐＡＴ４６４は７９３のヌクレオチド長であり、そしてクローンｐＡＴ７４ ４は６５９ヌクレオチド長である（５′末端にあるＥｃｏＲＩ　リンカ−を含め て）。ｍＲＮＡがより長いポリ八尾部を含むであろうから、両方のｃＤＮＡサイ ズは８５０ヌクレオチド（ｐＡＴ４６４）および７５０ヌクレオチド（ｐＡＴ７ ４４）の見積もられたｍＲＮＡと良好な一致を示す。 ｐＡＴ７４４のブライマー伸長分析は、単離されたクローンがほぼ全長のｃＤＮ Ａを表すことを裏づけた（図■−５）。ｐＡＴ７４４配列のヌクレオチド１３５ −１５２（図■−４）に相補的なオリゴヌクレオチドを逆転写酵素のブライマー （材料および方法の項参照）として用いて、約１５５ヌクレオチドの大きさの断 片を生じた（合成されたｃＤＮＡ１３８ヌクレオチドおよびブライマー１７ヌク レオチド）。ｐＡＴ７４４のための配列決定されたクローンの５′末端にある最 初の７個のヌクレオチドはｆ！ｃｏＲＩ　リンカ−から誘導されるので、実際の ｍＲＮＡ配列の５′末端の約１０ヌクレオチドがこのｃＤＮＡクローンにおいて 失われていることが結論づけられ得る。 ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４の最初のＡＴＧはそれぞれ８４位および７４位 である。各々の場合において、９２個のアミノ酸の読み枠が続く。これらの読み 枠は２つのクローンに見出される最長のものである。ｐＡＴ７４４に対して種々 の読み停止コドンが第１のＡＴＧの前に位置する。両方のクローンのための翻訳 の予測された開始部位の周囲のヌクレオチド配列は公知の翻訳開始部位から誘導 されたコンセンサス配列と良好な一致を示す（ＩＶ−３６）。これらのデータは 、両方のｃＤＮＡが９２個のアミノ酸のペプチドをコード化することを強く示唆 する。 １）ＡＴ４６４および７４４両方に予測されたペプチドの親水性分析は、分泌タ ンパク質のシグナルペプチドには典型的な疎水性Ｎ末端領域を明らかにした。シ グナルペプチド切断の基準によれば（ＩＶ−３７，ＩＶ−３８）、リーダー配列 の最初の２３個のアミノ酸は両方のタンノ（り質において切除され、その結果大 きさが６９個のアミノ酸の成熟分泌タンパク質を生じるであろう。潜在的なＭ連 結グリコジル化部位はいずれのペプチド中に現れない。 ２つのクローン化遺伝子の８′非翻訳領域は、調節機能を表し得る種々の要素を 含む。リンホカインメツセージ（ＩＶ−３９）の不安定さに関連したＡＴＴＴＡ モチーフ（図■−３およびＩＶ−４において下線を付した）はクローンｐＡ７４ ６４では４回、そしてクローンｐＡＴ７４４では２回現れる。さらに、ｐＡＴ７ ４４および４６４は、炎症応答（ＩＶ−４０）の間に誘導される多（の異なるｍ ＲＮＡの３′非翻訳領域に存在するオクタマーモチーフＴＴＡＴＴＴＡＴ　（Ａ ＴＴＴＡモチーフのサブセット）を含む。この要素はｐＡＴ４６４の５２７位お よびｐＡＴ７４４の５２６位に位置している。両方のｃＤＮＡクローンはポリＡ ストレッチに先行するポリＡ付加シグナル（図ＩＶ−３．ＩＶ−４中で四角で囲 まれている）を有する。 ｐＡＴ７４４および４６４に対する配列の比較は、ヌクレオチドレベルで顕著な 類似性（４５％）およびアミノ酸レベルでのより高い相同性（５６％１図ＩＶ− ６Ａ）を示した。共通の調節特徴の他に、これらの２つの遺伝子は共通の先祖の 遺伝子から誘導されてもよく、そしてそれらのコード化されたタンパク質は機能 的に関連した役割を演じ得る。より高いアミノ酸の類似性は、機能の保存を示唆 し、モしてｃＤＮＡクローン中の読み枠から予測されたコード化タンパク質構造 をさらに強化させる（下のその他のタンパク質との比較も参照せよ）。特に、２ つのタンパク質の推定される分泌部分は高度の類似性を示し、一方、それらのＮ 末端リーダーペプチドは疎水性の他は共通性をもたない。２つのタンパク質の親 水性プロットはほとんど重ね合わせることができ、その他のそれらの構造の関連 性を裏づける（データは示されていない）。 ｐＡＴ４６４および７４４によりコード化されるタンパク質の一次構造は、その 中のいくつかが分泌タンパク質として検出されていた多くのその他のタンパク質 との顕著な類似性を示す。タンパク質のこのファミリーのいくつかの構成員は炎 症応答およびマイトジェン性との関連を示すことがわかっていた（考察の項参照 ）。特に、この類似性は、このファミリーの全てのタンパク質に存在する、４個 のほとんど同一の配置のシスティン残基と１個のプロリン残基に基づいている（ 図■〜６Ｂ）。これらの高度に保存されたアミノ酸はタンパク質の構造において 重要な役割を演じると考えられる（考察の項参照）。 この保存に加えて、多くのその他のアミノ酸はこのファミリニの種々の構成員間 に共有されている。 ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４自体がより高度に関連する遺伝子のファミリー の構成員であるか否かを決定するために、ゲノムＤＮＡがこれら２つの遺伝子と 共に調べられた。ヒト胎盤ＤＮＡは種々の制限酵素で消化され、そして２つの遺 伝子に対するｃＤＮＡ挿入物から誘導された放射性プローブとのサザン分析に供 された。図ＩＶ、−７におけるデータは２つのプローブに対して異なるパターン で断片をハイブリッド形成する限定された構成員であることを証明した。明らか に、ｐＡＴ４６４および７４４は、それらの顕著な類似性にもかかわらず、容易 には互いに交差ハイブリッド形成しない。このことは、ｐＡＴ４６４および７４ ４に対して作成されたプラスミド誘導化ｃＤＮＡプローブでサブトラクティブラ イブラリィから単離されたｃＤＮＡファージをスクリーニングして以前に示され ていた。２つのクローンが繰り返し要素を含まず、そして密接に関連した配列の 大きなファミリーに属さないことも結論づけられる。遺伝子が単一のコピー遺伝 子であるか、または高度に類似する配列の小さいファミリーに属するかを決定す ることは今回能ではない。 発現の組織および細胞型特異性 予め決定されたように、ｐＡＴ４６４および７４４は休止または血清刺激された 通常のヒト繊維芽細胞中に発現されない。ここではＴ細胞以外の造血細胞が発現 のために分析された。前骨髄球ＨＬ６０細胞はマクロファージまたは顆粒球に最 終的に分化され得る。ｐＡＴ４６４もｐＡＴ７４４も未分化６０４ｉＩ＋胞中に 発現されないが、両者はＰＭＡを存するマクロファージへの分化の誘導により誘 導された（図ＩＶ−８Ａ）。対照的に、ＨＬ６０細胞を顆粒球に分化させるため にＤＭＳＯを用いると、それらのｍＲＮＡの誘導は何ら生じなかった。おもしろ いことに、ＰＭＡはｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４に対するＲＮＡを末梢血Ｔ 細胞またはジャーカット細胞中に誘導しなかった。それ故に、ＨＬ６０細胞中の これらの遺伝子の誘導はこれらの細胞の特定の分化状態により説明されなければ ならない。ｐＡＴ４６４および７４４はヒトＢ細胞中にも誘導された。刺激され ていないヒト扁桃腺の小さいＢ細胞において、メツセージはいずれの遺伝子に対 しても検出し得なかったが、ｐＡＴ７４４に対するｍＲＮＡはＳＡＣでの刺激４ 時間で誘導され（図■−８Ｂ）、ｐＡＴ４６４に対するｍＲＮＡはＳＡＣおよび シクロへキシミドだけので明らかに検出できた（データは示されていない）。さ らに、種々のＥＢＶ形質転換Ｂ細胞系は、ＨＴＬＶＩが抗原特異的Ｔ細胞細胞ク ローンを形質転換したように、これら遺伝子のｍＲＮＡを構造的に合成した。そ れ故に、ｐＡＴｊ６４およびｐＡＴ７４４は、ウィルス形質転換を包含するいく つかの方法で活性化されて、多（の異なる造血細胞により発現され得る。 ＣＯ３細胞における分泌タンパク　の発現ＤＮＡ配列から予測されたように（図 ＩＶ−９および■−１０参照）、ｐＡＴＪ８４またはｐＡＴ７４４ｃＤＮ人をコ ード化する種々の発現ベクターで形質転換したＣｏＳ細胞がタンパク質生成物を 分泌することが見出された。これらのタンパク質は製造され、そして陰性の対照 構築物が使用されるときでなく、適当な発現ベクター構築物がトランスフェクシ ョンしたときのみｃｏｓｍ胞から分泌される。新規タンパク質は、よく知られた 標準法を用いてＤＮＡ構築物のトランスフェクションの後、細胞のＩＩＳシステ ィン標識により可視化された。タンパク質生成物の大きさは、リーダーペプチド が切除された後に、ｃＤＮＡ配列から予測されるものにあてはまる。 予測アミノ酸配列に対する抗体 ｃＤＮＡ配列により予測されるように、ｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４の両方 のＣ末端の１２個のアミノ酸を表す合成ペプチドに対してウサギ抗血清を生起さ せた。 これはペプチドを化学的に合成し、それらをキャリヤー（ＫＬＨ）に連結し、そ してキャリーおよびペプチドをウサギに注射することにより、ペプチド免疫学の 標準法に従って行われた。図ＩＶ−１１ＡおよびＢはｐＡＴ７４４ペプチドに対 して生起させた２つの異なるウサギ抗体（７２１および７２２）のウェスタンプ ロット試験における使用を示し、図ＩＶ−１２ＡおよびＩＶ−Ｂは同様にｐＡＴ ４６４ペプチドに対する２つの抗体（７１９および７２０）を説明する。すべて の場合において、種々の発現ベクター構築物でトランスフェクションさせたＣｏ Ｓ細胞の上澄みが抗血清で分析された。図から明らかなように、適当な分泌され た因子は合成ペプチドで免疫感作されたウサギからの抗血清により検出され、ペ プチドでの免疫感作の前に同一ウサギから採取した血清試料により検出されなか った。それ故に、これらの結果は、ｐ人Ｔ４６４およびｐＡＴ７４４の両方の予 測されたタンパク質の配列から誘導された合成ペプチドが適当なｃＤＮＡクロー ンで形質転換させたＣＯ８細胞により分泌された因子に対する抗体を生起させる ことを示す。 図ｍＶ−１３は抗−ｐＡＴ４６４抗体を用いるＰＨＡ／ＰＭＡで培養液において 活性化させたヒトＴ細胞細胞からの上澄みのウェスタンプロットを示す。抗体は 適当な大きさの分泌物を検出する。同様の結果が抗−ｐＡＴ７４４抗体で得られ た（データは示されていない）。それ故に、ヒトＴ細胞はマイトジェン刺激で大 量のｐＡＴ４６４およびｐ人Ｔ７４４ｍＲＮＡだけでなく（上記参照）、これら のクローンのｃＤＮＡ配列から予測される分泌形態のタンパク質因子をも産生ず る。 考察 マイトジェン活性化でＴ細胞中に誘導可能な大多数の遺伝子が前もって単離され た（上記実験の部■参照）。 この項は２つの誘導性遺伝子、クローンｐＡＴ４８４（またはｐＬＤ７８、結果 の項参照）およびｐＡＴ７４４の調節およびヌクレオチド配列を記載する。これ らの２つの遺伝子は新規なリンホカイン／サイト力インをコード化すると考えら れる。各々のｃＤＮＡクローンに対するヌクレオチド配列は、分泌タンパク質に は共通のＮ末端疎水性リーダーペプチドを存する９２個のコード化されたタンパ ク質を予測する。ｐＡＴ４６４および７４４は、特にその予想された分泌された 部分において互いに非常に相同である。このことは機能の保存を示唆する。 両方の遺伝子産物はまた、重要なアミノ酸残基とタンパク質のファミリーとを共 存し、その機能は理解されていないか、または部分的にしか理解されていない： これらのタンパク質のいくつかは分泌因子として検出されていた（以下参照）。 ｐＡＴ４８４およびｐＡＴ７４４は、ＩＬ−２またはガンマ−ＩＦＮのようない くつかの十分に規定された免疫調節性因子を有する重要なアミノ酸相同性をもた ないけれども、それらは調節要素とこれらの遺伝子とをあわせもつ。これらのリ ンホカインのように、ｐＡＴ４６４およびｐ人Ｔ７４４は最適発現のために２つ の誘導性シグナル（例えばＰＨＡおよびＰＭＡ）を必要とし、それらはＴ細胞細 胞の刺激の２時間後出現し、それらは免疫抑制剤シクロスポリンＡの阻害作用に 対して非常に感受性であり、そしてそれらの活性化はシクロへキシミドの存在下 でジャーットＴ細胞細胞中で完全に抑制される。 ｐＡＴ４６４および７４４によりコード化されるタンパク質の一次アミノ酸構造 は分泌因子の新たに出現するファミリーと重要な相同性を示す。相同性は４個の システィン残基（ＩＶ−２３，ＩＶ−４２，ＩＶ−４３参照）および１個のプロ リン残基（図ＩＶ−６Ｂ中で四角で囲まれている）に主に基づいている。これら のアミノ酸はここで示されているタンパク質全てに見出されており、そしてペプ チドは図ＩＶ−６Ｂに並べられている。システィンは共通の構造を付与するよう に考えられる。このファミリーの構成員の１つであるβ−トロンボグロブリン（ ＰＢＰのプロセシングされた形態、以下参照）に対して、これらのシスティンは ジスルフィド結合を形成することが示された（ＩＶ−４４）。アミノ末端から出 発して、システィン】および３ならびにシスティン２および４はそのような結合 を形成する。 完全に保存されたアミノ酸の他に、多くのその他の残基が種々の残基間に共有さ れている。例えば、アミノ酸Ｔｒｐ　　Ｖａ　Ｉ　　Ｇｉｎ　（ＷＶＱ）（また はＷＶ）（図ＩＶ−６Ｂ中で四角で囲まれている）は、４個の保存されたシステ ィンの最後から６残基下流で、８個の因子に見出される。図■−６Ｂに挙げた遺 伝子は２つの基本的グループにさらに分割され得る：最初の２個のシスティンが 、Ｃｙｓ　（Ｃ）のように互いに隣接するか、またはＣＸＣのように１個のアミ ノ酸により分断されているか、２通りのうちの１つで位置している。この変化と 一致して、種々の位置は、一方の群または他方の群とは異なる明らかなアミノ酸 優位を示す。さらに’　ｃｃ’群について挙げると、保存されたプロリン（図Ｉ Ｖ−８Ｂ中で四角で囲まれているプロリン）に続く７番目の残基は常にＴｙｒ（ Ｙ）であり、第４のシスティンに先行する９番目の残基はＰｈｅ　（Ｆ）であり 、そしてこの最後の保存されたシスティンに直接続く残基はＡｌａ（Ａ）である 。 ’　ｃｘｃ’群において、保存されたプロリンに続く第３および第６番目の残基 はそれぞれ１ｉｅ（１）またはＬｅｕ（Ｌ）およびＬまたはＶａｌ（Ｖ）であり 、そして第４のシスティンに直接続（残基は常にＬである。しかしながら、多く のその他の部位において、異なる種類が可能であり、これらの２つの遺伝子間の 区別をあいまいにする。 図ＩＶ−６Ｂに挙げたｐＡＴ４６４、ｐＡＴ７４４および全ての付加的なタンパ ク質の間の相同性は機能のいくつかの保存を示し得る。種々のこれらの因子は炎 症応答の間発現されるか、もしくは該応答を引起し、および／または炎症の間の 役割と一致した機能を示すことが見出された。タンパク質のいくつかはまた、傷 治療および組織修復、炎症と一緒に、または引き続いて起こり得るプロセスにに 寄与可能に、マイトジェン的に作用する。３−ｔｏｃ（Ｎ−２３）または単球誘 導化好中球走化性因子（ＭＤＮＣＦ）（ＩＶ−４３）または好中球活性化因子（ ＮＡＦ）（ＩＶ−２５）は、試験管内で顆粒球に対して走化性を有するヒト因子 であり（ＩＶ−２４，］Ｖ−４５゜ＩＶ−４６）、試験管内でまたは生体内での 全身注射で急速に顆粒球を誘導し、そして局部注射で皮膚反応を引き起こす（Ｉ ＩＶ−４６，ＩＶ−４７）。誘導性発現は薬剤、例えばＬＰＳＳ　ＩＬ−１また はＴＮＦ　（ＩＶ−２４，ＩＶ〜４６）またはＣｏｎＡ（ＩＶ−４６）により単 球／マクロファージに、およびスタフィロコッカスエントロトキシンによりＴ細 胞（ＩＶ−２３）に示された。マクロファージ炎症タンパク質（ＭＩＰ）はマウ スマクロファージによりＬＰＳ刺激で合成される因子である（ＩＶ−２２，ＩＶ −４８）。それは好中球走化性を存し、いくつかの過酸化水素産生を引起し、そ して皮下投与された場合に局部炎症を導＜　（ＩＶ−２２，ＩＶ−４８）。 Ｉｐ−１ｏ　（ＩＶ−２１）はツベルクリンの形態またはγ−Ｉ　ＦＮ　（ＩＶ −４９）により刺激された遅延型過敏反応の間に発現されるインターフェロン誘 導化タンパク質問子である。それは、内皮細胞、半球、繊維芽細胞および角質細 胞を包含する種々の細胞型で発現され得る（■−４９．ＩＶ−５０）。 血小板因子４　（ＰＦ−４）は傷害の間に血小板中にα−顆粒から放出され、そ して単球、中性域および繊維芽細胞に対して走化性を存する（ＩＶ−５１，ＩＶ −５２）。 付加的な活性はコラゲナーゼの阻害（ＩＶ−５３）および免疫調節作用（ＩＶ− ５４）である。 血小板はまた、血小板塩基性タンパク質（Ｐ　Ｂ　Ｐ）、β−トロンボグロブリ ン（β−ＴＧ）および結合組織活性化ペプチドＩ［（ＣＴＡＰＩ［Ｉ）（低親和 性因子−４としても知られている）を放出する。後者の２つ、ＣＴＡＰ■および β−ＴＧは、図ＩＶ−６Ｂに示されるように、ＰＢＢの連続的にＮ末端がプロセ シングされた形態を表す。 ＣＴＡＰＩ［［はヒト真皮繊維芽細胞（ＩＶ−５５）およびヒト結合組繊細胞に 対してマイトジェン的に作用し、モして解糖、グリコサミノグリカン合成、ｃＡ ＭＰレベルおよびブラスミノーゲンアクチベーターの放出を刺激する（ＩＶ−２ ０，ＩＶ−５６）。β−ＴＧは繊維芽細胞に対して走化性であると考えられる（ ＩＶ−５１）。 上記のうち残りの因子は全て誘導性または分化発現に基づいてクローン化された 。ＲＡＮＴＥＳ　（ＩＶ−４２）およびＴＣ人−３（ＩＶ−５７）はその機能が まだ解明されていないＴ細胞誘導化遺伝子である。両者の発現は、活性化１時間 以内に出現するマウスＴＣＡ−３ｍＲＮＡ（Ｎ−５７）および１日以内にヒトＲ ＡＮＴＥＳｍＲＮＡ（■−４２）とともに、抗原およびマイトジェンにより誘導 される。ヒトＨ−Ｇｒｏ遺伝子、マウスＪＥ遺伝子およびニワトリ９Ｅ３遺伝子 は全て繊維芽細胞により発現される。ＪＥ遺伝子は、血清およびＩＬ−１を含む ３Ｔ３細胞中の種々の薬剤により誘導される（ＩＶ−５８）。 ９Ｅ３遺伝子はロウス・ザルコーマ・ウィルスとの形質転換により活性化され、 そして成長抑制細胞中で抑制される（ＩＶ−５９）。Ｈ−Ｇｒｏ遺伝子はハムス ターＨ−Ｇｒｏ遺伝子のヒト相当物であり、その構造性発現は非腫瘍形成性チャ イニーズ・ハムスター繊維芽細胞（ＣＨＥＦ）の腫瘍形成性変種と相互に関連す る（ＩＶ−２６）。 Ｇｒｏは非腫瘍形成性ＣＨＥＦ細胞中の血清により一時的に誘導される。この遺 伝子の発現は腫瘍形成状懇と関連した表現型の誘導のためには明らかに十分では ない。 上で考察された遺伝子のための発現データは、炎症および／または組織修復と関 連したマイトジェン性の同の役割と一致している。このことは、示された種々の 機能から、これらの遺伝子を誘導する薬剤から、そして包含される細胞型から推 論される。それ故にｐＡＴ４６４およびｐＡＴ７４４は、特にｐＡＴ４６４遺伝 子がマウスＭＩＰ遺伝子のヒト相同物を示すように考えられるので、同様の機能 を発揮することが期待される。炎症および傷害治療／組繊修復は、多くの異なる 細胞を包含する非常に複雑なプロセスである。種々の細胞の機能の調和した組合 せは、細胞間を連絡するのに必要な多数の分泌因子に反映されるように思われる 。１つの共通の先祖遺伝子から誘導されてもよい遺伝子のこのファミリーはその ようなネットワークを確立するのに十分に作用し得る。炎症および修復を仲介す るために、このファミリーの構成員のいくつかに対して示されるように（上記参 照）、個々の因子は多数の機能を有し得る。これらのタンパク質問の保存された 類似性は保存されたレセプター要素との相互作用を示し得る。上に説明されたよ うに、タンパク質のこのファミリーの構成員は組織特異性の顕著な変化を示す。 ｐＡ７４８４およびｐＡＴ７４４はＴ細胞およびその他の造血細胞に発現される が、しかし繊維芽細胞では発現されない。因子間でのこの区別は活性化された細 胞型による免疫反応の間に要求されるユニークな機能を決定し得る。 この項では本発明の最も好ましい組換え分子のい（つか、すなわちｐＡＴ７４４ またはｐＡＴ４６４ＤＮＡおよび哺乳類（例えばＣ０３）細胞中に挿入されたＤ ＮＡを発現し得る哺乳類発現ベクター（ＣＤＭ−８またはＰＭＴ２−２）を含む ものを記載してきた。それは、これらのＤＮＡにより形質転換された好ましい細 胞を立証し、そしてリーダーペプチドが切除された後のｃＤＮＡ配列から予測さ れるように適当な大きさのタンパク質の上記細胞による分泌を立証する。さらに 、この項では本発明のＤＮＡ断片によりコード化されたペプチドに対して製造さ れ、そして該ペプチドの配列を含むｐＡＴ７４４またはｐＡＴ４６４リンホカイ ン／サイトカイン様タンパク質に特異的に結合し得る本発明の新規抗体について 説明した。 刊行物 Ｔ　Ｖ　−１，リード、ジュー。シー、　　（Ｒｅｅｄ、　Ｊ、　Ｃ，）＋ジュ ー。ディー、アルパース（Ｊ、Ｄ、ＡＩｐｅｒｓ）　、　　ビー、シー、ノウエ ル（Ｐ、Ｃ，Ｎｏｗｅｌｌ）およびアール、ジー、ホープｙ　−（Ｒ，Ｇ、Ｈｏ ｏｖｅｒ）　、　　（１９８６）　、　　ｒ標準のヒトリンパ球のレクチン刺激 性細胞分裂の促進時の原潰瘍遺伝子の連続発現（Ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ　ｅｘｐ ｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｔ。 ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ　ｄｕｒｉｎｇ　１ｅｃｔｉｎ−８口ｍｕｌａｔｅｄ　ｍｉ ｔｏｇｅｎｅｓｊｓ　ｏｆｎｏｒｍａｌ　ｈｕｍａｎ　］ｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ）　Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。 Ｓ＋ｊ、　ＵＳＡ　８３：３９８２ ＴＶ−２，グリーン、ダブり二一、シー、　　（Ｇｒｅｅｎｅ。 Ｗ、　Ｃ，）およびダブりニー９　ジュー。レオナルト（Ｗ、　Ｊ。 Ｌｅｏｎａｒｄ）、　　（１９８６）　、　　ｒヒト　インターロイキン−２レ セプター（Ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ　ｊｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２ｒｅｃｅｐｔｏｒ ）　Ｊ　。 Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　４：６９ＩＶ−３，ヤング、ソイ。シ ー、　　（Ｙａｎｇ、　Ｙ、Ｃ，）　＋エイ、ビー、レアシッタ（Ａ、　Ｂ、　 Ｃ１ａｒｌｅｔｔａ）、　　ビー、エイ。 テンプル（Ｐ、　Ａ、　Ｔｅｍｐｌｅ）　、エム、ビー、チャンク（Ｍ、　Ｐ。 Ｃｈｕｎｇ　）　＋　ニス、コヴアシック（Ｓ、　Ｋｏｖａｃｉｃ）、　　リュ ー。 ニス、ウィテクージアノッチ（Ｊ、　Ｓ、　Ｗｉ　ｔｅｋ−Ｇｉａｎｎｏｔｔｉ ）。 エイ、シー、レアシー（Ａ、　Ｃ，Ｌｅａｒｙ）、　　アール、クリツ（Ｒ，Ｋ ｒ１ｚ）　、アール、イー、ドナヒ、：Ｌ　−（Ｒ，Ｅ、　Ｄｏｎａｈｕｅ）。 ジー、ジー、ウォング（Ｇ、　Ｇ、　Ｗｏｎｇ）およびニス、シー。 クラーク（Ｓ、Ｃ，Ｃ］ａｒｋ）、　　（１９８６）　、　　ｒヒト　ＩＬ−３ ：ネズミのＩＬ−３に関連した新規な血液成長因子の発現クローニングによる同 定（Ｈｕｍａｎ　ＩＬ−３（Ｍｕ］ｔｉ−ＣＳＰ）：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉ ｏｎ　ｂｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　 ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅＮｃ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔ ｏ　ｍｕｒｉｎｅ　ＩＬ−３）Ｊ　、　Ｃｅ１ｌ　４７：３ ＩＶ−４，ヨコタ、ティー　、　　（Ｙｏｋｏｔａ、　Ｔ）　、ティー。 オツ力（Ｔ、　０ｔｓｕｋａ）　、ティー、モスマン（Ｔ、　Ｍｏｓｍａｎｎ） 。 ジュー。パンチェリュー　（Ｊ、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ）　、ティー、デフラン ス（Ｔ、　ＤｅＰｒａｎｃｅ）　、ディー、ブランチヤード（Ｄ。 Ｂｌａｎｃｈａｒｄ）、ジュー。イー、デ　ヴリエス（Ｊ、　Ｅ、口ｅＶｒｉｅ ｓ）　＋　エフ、シー（Ｐ、　Ｌｅｅ）およびケイ、アイ、アライ（Ｋ、１．Ａ ｒａｉ）　、　　（１９８６）　、　　ｒＢ細胞及びＴ細胞刺激活性を発現する マウスＢ細胞刺激因子１と同族のヒトインターロイキンｃＤＮＡクローンの単離 および特徴付け（ｌ５ｏｌａＮｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏ ｎ　ｏｆ　ａ　ｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　ｃＤＮＡ　ａｌｏｎｅ、　 ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ　ｔｏ　ｍｏｕｓｅ　Ｂ−ｃｅｌｌｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ ｙ　ｆａｃｔｏｒ　１．　　ｔｈａｔ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｓ　Ｂ−ｃｅｌｌ−ａ ｎｄＴ−ｃｅｌｌ−ｓｔｉｍｕｌａｔｊｎｇ　ａｃｔｆｖｉｔｉｅｓ）Ｊ　、　 Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。 ＳｃＬ　ＵＳＡ　８３：５８９４ ＩＶ−５，ヨコタ、ティー、　　（Ｙｏｋｏｔａ、Ｔ）　、アール。 エル、コッフマン（Ｒ，Ｌ、　Ｃｏｆｆｍａｎ）、　ｘイチ、ハギワラ（Ｈ，Ｈ ａｇｊｗａｒａ）　、ディー、エム、レニック（Ｄ、　Ｍ。 Ｒｅｎｎ１ｃｋ）、ワイ、タケベ（Ｙ、　Ｔａｋｅｂｅ）　！　ケイ、ヨコタ（ Ｋ、Ｙｏｋｏｔａ）　、エル、テンプル（Ｌ、　Ｇｅｍｍｅｌｌ）、　　ビー、 シュレイシー（Ｂ、５ｈｒａｄｅｒ）　、　　ジー、ヤング（Ｇ、　Ｙａｎｇ） 、　　ビー。 メイヤーソン（Ｐ、Ｍｅｙｅｒｓｏｎ）＋　ジュー。ルー（Ｊ、Ｌｕｈ）　、　 　ビー、ホイ（Ｐ、Ｈｏｙ）　、　　ジュー。ペン（Ｊ、　Ｐｅｎｅ）＋　エフ 、ブリニレ（Ｐ、　Ｂｒ１ｅｒｅ）、エイチ、スピッツ（Ｈ，５ｐｉｔｓ）　、 　リュー。 パンチェリュー　（Ｊ、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ）　、　ジェー、デ　ヴリエス（ Ｊ、　Ｄｅ　Ｖｒｉｅｓ　）　、−ｒ−フ、ディー、リ−（Ｐ、　Ｄ、　Ｌｅｅ ）。 エフ、アライ（Ｎ、Ａｒａｉ）およびケイ、アイ、アライ（Ｋ、［。 Ａｒａｊ）、（１９８７）、ｒｖウス及びヒト　ＩｇＡ増強因子及び好酸球コロ ニー刺激因子活性を暗号化するリンフォカインｃＤＮＡクローンの単離および特 徴付け：インターロイキン５との関係（Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒ ａ−ｃｔｅｒｊｚａＨｏｎ　ｏｆ　Ｉｙｍｐｈｋｊｎｅ　ｃＤＮＡ　ｃｌｏｎｅ ｓ　ｅｎｃｏｄｉｎｇｍｏｕｓｅ　ａｎｄ　ｈｕｍａｎ　ＩｇＡ−ｅｎｈａｎｃ ｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ａｎｄｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ　ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍ ｕｌａｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ：Ｒｅ１ａｔｉｏｎｓｈ ｉｐ　ｔｏ　１ｎｔｅｌｅｕｋｊｎ　５）　Ｊ　＋　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　 Ａｃａｄ。 Ｓｃｊ、ＵＳＡ　８４ニア３８８ ＩＶ−６，ヒラノ、ティー、（旧ｒａｎｏ、Ｔ）　、ケイ。 ヤスカワ（Ｋ、Ｙａｓｕｋａｗａ）、　ｘイチ、ハラダ（Ｈ，Ｈａｒａｄａ）、 ティー、タガ（Ｔ、　Ｔａｇａ）、　ソイ。ワタナベ（Ｙ、　Ｗａｔａｎａｂｅ ）、ティー、マツダ（Ｔ、Ｍａｔｓｕｄａ）　、　ｘス、カシワムラ（Ｓ、　Ｋ ａｓｈｉｗａｍｕｒａ）　、ケイ、ナカジマ（Ｋ、　Ｎａｋａ　ｊｊｍａ）、ケ イ、コヤマ（Ｋ、　Ｋｏｙａｍａ）、エイ、イワマツ（Ａ、　Ｉｗａｍａｔｓｕ ）、ニス、ツナサワ（Ｓ、Ｔｓｕｎａｓａｗａ）　、　ｘフ、サキャマ（Ｆ、　 Ｓａｋｉｙａｍａ）、　ｘイチ、マツイ（Ｈ，Ｍａｔｓｕｊ）、　クイ。タカハ ラ（Ｙ、　Ｔａｋａｈａｒａ）。 ティー、タニグチ（Ｔ、　Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ）およびティー、キシモ）　（Ｔ 、Ｋｊｓｈｉｍｏｔｏ）　＋　　（１９８６）　、　　ｒ免疫グロブリンを作る ためのＢリンパ球を誘発する新規なヒト　インターロイキン（ＢＳＦ−２）のた めの相補Ｄ　Ｎ　Ａ　（Ｃｏｍｐｌｅ−ｍｅｎｔａｒｙ　ＤＮＡ　　ｆｏｒ　ａ 　ｎｏｖｅｌ　　ｈｕｍａｎ　　ｊｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　　（ＢＳＰ−２）　 　ｔｈａｔ　　１ｎｄｕｃｅｓ　　Ｂ　　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　　ｔｏ　　 ｐｒｏｄｕｃｅ　　ｉｍｍｕｎｏ−ｇｌｏｂｕｌｉｎ）Ｊ　　、Ｎａｔｕｒｅ　 　３２４ニア３ＩＶ−７，ウォング、ジー、ジー、　（Ｗｏｎｇ、Ｇ、Ｇ、）　 ＊ジ、　＋、　ニス、ライチク（Ｊ、Ｓ、Ｗｉｔｅｋ）　、　　ビー、エイ、テ ンプル（Ｐ、Ａ、Ｔｅｍｐｌｅ）、ケイ、エム、ウィルケンス（Ｋ、　Ｍ、　Ｗ ｉｌｋｅｎｓ）　＊−１−イ、シー、レアシー（Ａ、Ｃ，Ｌｅａｒｙ）　、ディ ー。 ビー、ル’）セ’、ｔブルク（Ｄ、Ｐ、Ｌｕｘｅｎｂｅｒｇ）　、ニス、ニス。 ジジーンズ（Ｓ、Ｓ、Ｊｏｎｅｓ）　、イー、エル、ブラウン（Ｂ、　Ｌ、　Ｂ ｒｏｗｎ）　、アール、エム、カイ（Ｒ，Ｍ、Ｋａｙ）　、イー、シー。 オール（Ｂ、Ｃ，０ｒｒ）　、シー、シューメイカ−（Ｃ，Ｓｈｏｅｍａｋｅ「 ）、ディー、ダブリュー、ゴールデ（Ｄ、Ｗ、Ｇｏｌｄｅ）　、アール、ジュー 。カウフマン（Ｒ，Ｊ、Ｋａｕｆｍａｎ）　、アール、エム、ヘライック（Ｒ， Ｍ、　Ｈｅｗｉｃｋ）、イー、エイ、ウアング（Ｂ。 Ａ、　Ｗａｎｇ）およびニス、シー、クラーク（Ｓ、Ｃ，Ｃ１ａｒｋ）　。 （１９８５）、ｒヒト　ＧＭ−Ｃ３Ｆ：相補ＤＮＡの分子クローニング、及び天 然および組み換えタンパク質の精１（Ｈｕｍａｎ　ＧＭ−ＣＳＦ：　Ｍｏ１ｅｃ ｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｍ−ｐｌｅａ＋ｅｎｔａｒｙ　 ＤＮＡ　ａｎｄ　ｐｕｒＨｉｃａＮｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｎａｔｕｒａｌ　ａｎ ｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　）　Ｊ　、　５ｃｉｅｎｃｅ　 ２２８：８１０ＩＶ−８，ダブリ　エム、シー、　（Ｃｕｔｕｒｉ　Ｍ、Ｃ，） 　ｒエム、ムルフィ−（Ｍ、　Ｍｕｒｐｈｙ）、エム、ビー０コスタージオミ（ Ｍ、Ｐ、Ｃｏｓｔａ−Ｇｉｏｍｊ）　、アール、ワインマン（Ｒ，Ｗｅｉｎｍａ ｎｎ）、　　ビー、ベルッシア（Ｂ、　Ｐｅｒｕｓｓｉａ）およびジ−、トリン チェリ（Ｇ、Ｔｒｊｎｃｈｉｅｒ＋）、　　（＋　９８７　）　、　　ｒヒト末 梢血リンパ球による腫瘍壊死因子およびリンフォトキシンの製造の個々の調整（ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｒｅｇｕｌａ口ｏｎ　ｏｆｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓ ｉｓ　ｆａｃｔｏｒ　ａｎｄ　Ｉｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ　　ｈｕｍａｎ　　ｐｅＢｐｈｅｒｓｌ　　ｂｌｏｏｄ　　Ｉｙｍｐｈａｃ ｙｔｅｓ）Ｊ　　、　　Ｊ、Ｂｘｐ、Ｍｅｄ、　１６５：１５８］ ＩＶ−９，グルニー、エム、イー、　（Ｇｕｒｎｅｙ、　Ｍ、　Ｂ、　）、ビー 、アール、アバトフ（Ｂ、Ｒ，ＡＩ）ａｔｏｆｆ）　、　　ジー、ティー、スペ ア（Ｇ、Ｔ、５ｐｅａｒ）　、　エム、ジェー、バウメル（Ｍ、　Ｊ。 Ｂａｕｍｅｌ）、　　ジュー。ビー、アンタル（Ｊ、Ｐ、Ａｎｔａｌ）　、　− ７−ム。 ブラウン　バニア（ｌＪ、Ｂｒｏｗｎ　Ｂａｎ１ａ）およびエイ、ティー。 レダー（＾。Ｔ、Ｒｅｄｅｒ）　＋　　（１，９８６）　、　　ｒ＝ユ−ロロイ キン：レクチン刺激性Ｔ細胞のリンフｔカイン生成物（Ｎｅｕｒｏｌｅｕｋｉｎ ：Ａ　Ｉｙｍｐｈｏｋｉｎｅ　ｐｒｏｄｕｃｔ　ｏｆ　ｌｅｃｔｉｎ−ｓｔｉｍ ｕｌａｔｅｄ　Ｔ　ｃｅｌｌｓ）　Ｊ　、　５ｃｉｅｎｃｅ　２３４：５７４Ｔ Ｖ−１０，アロンソ、エム、エイ、　（Ａｌｏｎｓａ、Ｍ、Ａ、）およびニス、 エム。ワイスマン（Ｓ、ｌＪ、Ｗｅｊｓｓｍａｎ）、　　（１９８７）、ｒヒト Ｔ細胞の分化に関連するＭＡＬ、疎水性タンパク質のＣＤＮＡクローニング及び シーフェンス（ＣＤＮＡ　　ｃｌｏｎｉｎｇ　　ａｎｄ　　５ｅｑｕｅｎｃｅ　 　ｏｆ　　ＭＡＬ、　　ａ　　ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ　　ｐｒ。 ｔｅｔｎ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｈｕｍａｎ　Ｔ−ｃｅｌｌ　ｄｉ ｆｆｅｒｅｎ口ａｔｉｏｎ’）Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　 Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８４：１９９７ＩＶ−１１，クウォン、ビー、ニス、　（Ｋｗ ａｎ、　Ｂ、　Ｓ、　）　＋ジー、ニス、キム（Ｇ、Ｓ、Ｋｉｍ）　、エム、ビ ー、ブリストウスキー（Ｍ、　Ｂ、　Ｐｒｙｓｔｏｗｓｋｙ）、ディー、ダブリ ュー、ランキ（Ｄ、　Ｗ、　Ｌａｎｃｋ　ｉ　）＋ディー、イー、サバス（Ｄ、 　Ｂ、　５ａｂａｔｈ）、ジュー。パン（Ｊ、　Ｐａｎ）およびニス、エム６　 ワイスマン（Ｓ、Ｍ。 Ｗｅｉｓｓｍａｎ）＋　　（１９８７）　、　　ｒ多種のＴリンパ球すブセット ｃＤＮＡクローンの単離および第一の特徴付け（ｌｓｏｌａｔｆｏｎ　ａｎｄ　 １ｎｉｔｉａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｕｌｔｆ−ｐｌ ｅ　５ｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　Ｔ−１ｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　５ｕｂｓｅｔ　ｃＤＮ Ａ　ｃｌｏｎｅｓ）　Ｊ　。 Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８４：２８９６ＴＶ− １２，ゲルジエンフェルト、エイチ、ケイ。 （Ｇｅｒｓｈｅｎｆｅｌｄ、　Ｈ，Ｋ、　）およびアイ、エル、エアイスマン（ ［、Ｌ、Ｗｅｉｓｓｍａｎ）、　　（１９８６）　、　　ｒ細胞毒性Ｔリンパ球 からのＴ細胞に特異的なセリンプロテアーゼのためのＣＤＮＡクローニング（Ｃ ｌｏｎｔｎｇ　ｏｆ　ａ　ｃＤＮＡ　ｆｏｒ　ａ　Ｔ　ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｊｆ ｉｃ　５ｅｒｉｎｅ　ｐｒｏｔｅａｓｅ　ｆｒｏｍ　ａ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　 Ｔｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）　Ｊ　、　５ｃｉｅｎｃｅ　２３２：８５４ＩＶ−１ ３，ｔｆｆべ、シー、ジー、　（Ｌｏｂｅ、　Ｃ，Ｇ、　）　ｒ　　シー。 ハヴエレ（Ｃ，Ｈａｖｅｌｅ）およびアール、シー、プレツクレイ（［？、Ｃ， Ｂ１ｅａｃｋｌｅｙ）　、　　（１９８６）　、　　ｒ活性化された細胞毒性１ ９２８球において特異的に発現される２個の遺伝子のクローニング（ＣＩｏｎｊ Ｂ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｇｅｎｅｎｓ　ｔｂａｔ　ａｒｅ　５ｐｅｃｊｆｉｃａｌｌ ｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　ａｃｔｉＶａｔｅｄ　ｃｙｔｏｔｏｘｔｃ　Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃ ｉ、ＵＳＡ　８３：１４４８ＩＶ−１４，リード、ジュー。シー、（Ｒｅｅｄ、 　Ｊ−Ｃ１）　。 エイ、エイチ、アビディ（Ａ、Ｈ，Ａｂｉｄｉ）　、　　ジュー。ディー。 アルバース（Ｊ、　Ｄ、　Ａｌｐｅｒｓ）、アール、ジー、ホープｙ　　（Ｒ。 Ｇ、　Ｈｏｏｖｅｒ）、アール、ジー、ロブ（Ｒ，Ｊ、　Ｒｏｂｂ）およびビー 。 シー、ノウエル（Ｐ、Ｃ，Ｎｏｗｅｌｌ）、　　（１９８６）　　ｒインタロイ キン　２　レセプター遺伝子の発現におけるシクロスポリンＡ及びデキサメタシ ンの効果（ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ　Ａ　ａｎｄ　ｃｌｅｘ ａｍｅｔｈａｓｏｎｅ　ｏｎ　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　２ｒｅｃｅｐｔｏｒ　 ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）　Ｊ　、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３７： １５０ＩＶ−１５，グラネリービペルノ、エイ、　（Ｇｒａｎｅｌｌｉ−Ｐｊｐ ｅｒｎｏ、Ａ、）　ｌ　エル、アンドルス（Ｌ、　Ａｎｄｒｕｓ）およびアール 、エム、スティンマン（Ｒ，Ｍ、Ｓｔｅｉｎｍａｎｎ）　、　　（１９８６）、 ［刺激されたヒトＴ細胞におけるリンホカイン及びノンリンホカイン　ｍＲＮＡ 濃度（Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ　ａｎｄｎｏｎｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ　ｍＲＮＡ　 １ｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｓｉｍｕｌａｔｅｄ　ｈｕｍａｎ　Ｔｃｅｌｌｓ）　Ｊ　 、　Ｊ、Ｂｘｐ、Ｍｅｄ、　１９６３：９２２ＩＶ−１６，リーム、ジー、アー ル（Ｒｅｅｍ、Ｇ、Ｒ，）　、　ｚル、エイ、タック（Ｌ、＾、　Ｃｏｏｋ）お よびジェー、ヴイルセク（Ｊ、Ｖｉｌｃｅｋ）、　　（１９８ｇ　）　、　　ｒ シクロスポリンＡによって阻害されたヒト胸腺細胞及びＴリンパ球のガンマイン ターフェロンの合成（Ｇａｍｍａ　１ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ 　ｂｙｈｕｍａｎ　ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓ　１ｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｂｙｃｙｃｌｏｓｐｏｒｊｎ　Ａ）　Ｊ　、　５ｃｉ ｅｎｃｅ　２２１：６３ＩＶ−１７，レロルド、ケイ、シー、　（Ｒｅｒｏｌｄ 、に、Ｃ，）、ディー、ダブリュー、ランキ（Ｄ、Ｗ、Ｌａｎｋｉ）　、アール 。 エル、モルトイン（Ｒ，Ｌ、　Ｍｏｌｄｗｉｎ）およびエフ、ダブリュー、ツイ ツチ（Ｐ、Ｗ、Ｐｉｔｃｈ）　、　　（１９８８）　、　　ｒクローン化された Ｔ細胞上のシクロスポリンの免疫抑制効果（［ｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖ ｅ　　ｅｆｆｅｃｔｓ　　ｏｆ　　ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ　　Ａ　　ｏｎｃｌ ｏｎｅｄ　　Ｔ　　ｃｅｌｌｓ）Ｊ　　、　　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　１３６ ：１３１５ＩＶ−１８，デュエル、ティー、エフ、　（Ｄｅｕｅｌ、　Ｔ、Ｆ。 ）、ビー、ニス、ケイム（Ｐ、　Ｓ、　Ｋｅｉｍ）、エム、ファーマー（Ｍ、　 Ｆａｒｍｅｒ）およびアール、エル、ハインリクソン（Ｒ，Ｌ。 ）１ｅｉｎｒｉｋｓｏｎ）　＋　　（Ｌ　９７７）　＋　　ｒヒト血小板因子４ のアミノ酸シークエンス（Ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｈ ｕｍａｎ　ｐｉａｔｅｌｅｔ　ｆａｃｔｏｒ　４）Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ ｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　７４：２ＩＶ−１９，ロルト、ジ！−，シ ー、　（Ｒｏｌｔ、Ｊ、Ｃ０）　。 エム、イー、ハリス（Ｍ、Ｅ、Ｈａｒｒ４ｓ）、　エイ、エム、ボルト（Ａ、Ｍ 、Ｈｏ１ｔ）、イー、ランノ（Ｅ、Ｌａｎｇｅ）　、　エイ、レンジエン（Ａ、 　Ｒｅｎ５ｃｈｅｎ）およびニス、ニスイアロスキー（Ｓ、　Ｎｉｅｗｉａｒｏ ｗｓｋｉ）、　　（１９８６）　、　　ｒヒト血小板基本タンパク質、低親和性 血小板因子４の前駆体形態、及びベータースロンボグロプリンの特徴付け（Ｃｈ ａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎｐｌａｔｅｌｅｔ　ｂａｓｉ ｃ　ｐｒｏｔｅｉｎ、　ａ　ｐｒｅｅＵｒ８０ｒ　ｆｏｒｌｌ　ｏｆ　ｌｏｗ− ａｆＨｎｉｔｙ　ｐｌａｔｅｌｅｔ　ｆａｃｔｏｒ　４　ａｎｄ　ｂｅｔａ−ｔ ｈｒｏｍｂｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）　Ｊ　、　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　２５： １９８８ＩＶ−２０，カスター、シー、ダブり二一、　（Ｃａｓｔｏｒ、　ｃ。 Ｗ、）、ジュー。ダブリュー、ミラー（Ｊ、Ｗ、旧１１ｅｒ）およびディー、エ イ、ワルツ（Ｄ、Ａｉａｌｚ）、　　（１９８８）　、　　ｒ結合組織活性化ペ プチド（ＣＴＡＰ−１１１）、主にヒト血小板から誘導された成長因子の構造的 および生物的特徴付け（Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ 　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆ　ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ　１ｓｓｕｅ　 ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　ｐｅｐ口ｄｅ（ＣＴＡＰ−ＩＩ＋）。 ａ　　ｍａｊｏｒ　　ｈｖｒｎａｎ　　ｐｌａｔｅｌｅｔ　　ｄｅｒｉｖｅｄ　 　ｇｒｏｙｔｔｈ　　ｆａｃｔｏｒ）　　Ｊ　　ｒＰｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ、　 　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　　８０ニア６５ＩＶ−２１，ルスター、エイ 、ディー、　（Ｌｕｓｔｅｒ、Ａ、Ｄ。 ）、ジュー。シー、ウンケレス（Ｊ、　Ｃ，Ｕｎｋｅｌｅｓｓ）およびジェー、 ヴイー、ラヴ工”）チ（Ｊ、Ｖ、Ｒａｖｅｔｃｈ）　、　　（１９８５）、「ガ ンマ−インターフェロンは同族の血小板タンパク質を含む早期反応性遺伝子を転 写しながら調整する（Ｇａｍｍａ−ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ｔｒａｎｓｃｒｊｐ ｔｉｏｎａｌｌｙ　ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　ａｎｅａｒｌｙ−ｒｅｓｐｏｎｓｅ　 ｇｅｎｅ　ｅｏｎｔａｊｎｉｇ　ｈｏｍｏｌｏｇｙ　ｔｏ　ｐｌａｔｅｌｅｔｐ ｒｏｔｅｉｎｓ　）　Ｊ　、　Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）　３１５：６７２ ＴＶ−２２，ダヴアテリス、ジー、　（Ｄａｖａｔｅｌｊｓ、Ｇ、）。 ビー、テカンブーオルソン（Ｐ、　Ｔｅｋａｍｐ−０１ｓｏｎ）、ニス、ディー 、ウォルペ（Ｓ、Ｄｌｏｌｐｅ）　、ケイ、ヘルムセン（Ｋ、　Ｈｅｒｍｓｅｎ ）　、シー、ロイケ（Ｃ，Ｌｕｅｄｋｅ）、　　シー、ガレゴス（Ｃ，Ｇａｌｌ ｅｇｏｓ）、ディー、コイト（Ｄ、　Ｃｏ１ｔ）、　　ジュー。メリーウェザ− （Ｊ、Ｍｅｒｒｙｗｅａｔｈｅｒ）およびエイ、セラミ（Ａ、　Ｃｅｒａｍｉ） 、　　（１９８８）　、　　ｒネズミのマクロファージ炎症性タンパク質、炎症 性および化学挙動特性を持つ新規なモノカインのためのｃＤＮＡのクローニング および特徴付け（ＣＩｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ 　ｏｆ　ａ　ｃＤＮＡ　ｆｏｒｍｕｒｆｎｅ　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｊｎｆｌ ａｍｍａｔｏｒｙ　ｐｒｏｔｅｌｎ（ＶＩＰ）、　ａｎｏｖｅｌ　ｍｏｎｏｋｉ ｎｅ　ｗｉｔｈ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ａｎｄ　ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｔｉ ｃｐｒｏｐｅｒｔｊｅｓ）Ｊ　、　Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、１６７：１９３９ＩＶ −２３，シュミット、ジエ−，（Ｓｃｈｍｉｄ、Ｊ、）およびシー、ワイスマン （Ｃ，Ｗｅｉｓｓｍａｎ）、　　（１９８７）　ｒ　　ｒマイトゲン刺激性ヒト 白血球におけるセリンプロテアーゼ及びベータースロンボグロプリン様タンパク 質のためのｍＲＮＡの誘導（Ｉｎｄｕｃ目ｏｎ　ｏｆ　ｍＲＮＡ　ｆｏｒ　ａ　 ５ｅｒｉｎｅｐｒｏｔｅａｓｅ　ａｎｄ　ａ　ｂｅｔａ−ｔｈｒｏｍｂｏｇｌｏ ｂｕｌｊｎ−１ｉｋｅ　ｐｒｏｔｅｊｎｉｎ　ｍｉｔｏｇｅｎ−ｓｔｉｍｕｌａ ｔｅｄ　ｈｕｍａｎ　Ｉｅｕｋｏｃｙｔｅｓ）　Ｊ　ｒＪ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　 １３９：２５０４ＩＶ−２４，３シムラ、ティ、　（Ｙｏｓｈｉｔｎｕｒａ、　 Ｔ、　）、ケイ、マツシフ　（Ｋ、　Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ）、ニス、タナ力（ Ｓ、　Ｔａｎａｋａ）。 イー、エイ、ロビンソン（Ｂ、　Ａ、　Ｒｏｂｉｎｓｏｎ）、イー、アベラ（Ｂ 、Ａｐｐｅｌｌａ）　、ジエー、ジエー、オッペンハイム（Ｊ、　Ｊ、　Ｏｐｐ ｅｎｈｅｉｍ）およびイー、ジュー。レオナルト（Ｅｌ、　Ｊ。 しｅｏｎａｒｄ）、　　（１９８７）　、　　ｒ他の宿主の防御細胞分裂に類似 したベプチドシークエンスを持つヒト単球から誘導された好中球化学定性因子の 精製（Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｈｕｍａｎ　ｍｏｎｏｃｙｔｅ−ｄ ｅｒｉｖｅｄ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃｆａｃｔｏｒ　 ｔｈａｔ　ｈａｓ　ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　５１ｍ１ｌａｒｉｔｙ 　ｔ。 ｏｔｈｅｒ　ｈｏｓｔ　ｄｅｆｅｎｓｅ　ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ　）　Ｊ　＋　Ｐ ｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。 Ａｃａｄ、　Ｓｃｊ、ＵＳＡ　８４：９２３３ＩＶ−２５，ワルツ、　　エイ、 　（Ｗａｉｚ、Ａ、）　、　　ビー、ベヴエリ（Ｐ、　Ｐｅｖｅｒｉ）、エイチ 、アシャウアー（Ｈ，Ａｓｃｈａｕｅｒ）およびエム、バギオリニ（Ｍ、Ｂａｇ ｇｊｏｌｉｎｉ）、　　（１９８７）　。 ｒＮＡＦ、単球から製造された新規な好中球活性化因子の精製およびアミノ酸シ ークエンス（Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄａｍｆｎｏ　ａｃｉｄ　ｓｅｑ ｕｅｎｃｉｎｇ　ｏｆ　ＮＡＰ、　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ−ａ ｃｔｉｖａＨｎｇ　　ｆａｃｔｏｒ　　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　　ｂｙ　　ｍｏｎｏ ｃｙｔｅｓ）Ｊ　　＋Ｂｉｏｅｈｅｍ、　　Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍ 、　　１４９ニア５５Ｉ　Ｖ−２６，アニソウィック、エイ、　（Ａｎｉｓｏｗ ｉｃｚ、　Ａ、　）。 エル、パルドウエル（Ｌ、　Ｂａｒｄｗｅｌｌ）およびアール、サガー（Ｒ，Ｓ ａｇｅｒ）　、　　（１９８７）　、　　ｒ形質転換されたチャイニーズハムス ターおよびヒト細胞における成長調整された遺伝子の本質的な過剰発現（Ｃｏｎ ｓｔｉｔｕｔｉｖｅ　ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｆｏｎ　ｏｆ　ａ　ｇｒｏｗｔｈ −ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｃｈｉｎｅｓ ｅ　ｔｅａｍｓｔｅｒ　ａｎｄ　ｈｕｍａｎ　ｃｅｌｌｓ）　Ｊ　、　Ｐｒｏｃ 、　Ｎａｔｌ。 Ａｅａｄ、　Ｓｃｊ、ＵＳＡ　８４ニア１８ＢＩＶ−２７，チルグウィン、ジエ ー、エム、　（Ｃｈｉｒｇｗｉｎ、Ｊ、Ｍ、）　、　ｘイ、イー、ブリジビラ（ Ａ、　Ｂ、　Ｐｒｚｙｂｙｌａ）、アール、エフ、マクドナルド（Ｒ，Ｆ、　Ｍ ａｃＤｏｎａｌｄ）およびダブリュー、ジェー、ルター（Ｗ、Ｊ、Ｒｕｔｔｅｒ ）、　　（１９７９）　。 「リボヌクレアーゼ中の豊富な源からの生物的活性リボ核酸の単離（Ｉｓｏｌａ Ｎｏｎ　ｏｆ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ　ａｃ目ｗｅ　ｒｉｂｏ−ｎｕｃｌｅ ｉｃ　Ａｃ１ｄ　ｆｒｏｍ　５ｏｕｒｃｅｓ　ｅｎｒｉｃｈｅｄ　ｉｎ　ｒｉｂ ｏｎｕｃｌｅａｓｅ）　Ｊ　、　Ｂｉｏｃｈｅ＋ｎｊｓｔｒｙ　１８：５２９４ ＩＶ−２８，マ：アチス、ティー、　（Ｍａｎｉａｔｉｓ、Ｔ、）　＋イー、エ フ、フリッチ（Ｅ、Ｐ、Ｐｒ１ｔｓｃｈ）　、ジュー。サンブロック（Ｊ、Ｓａ ｍｂｒｏｏｋ）、　　（１９８２）　、　　ｒ分子クローニング（Ｍｏｌｅｃｕ ｌａｒ　Ｃ２ｏｎｆｎｇ）　Ｊ　、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　 Ｌａｂｏｒｔｏｒｙ Ｉ　Ｖ−２９，ダブ、　−、ニー、　（Ｇｕｂｌｅｒ、Ｕ、）およびビー、ジェ ー、ロフマン（Ｂ、Ｊ、Ｒｏｆｆｍａｎ）　、　　（１９８８）　。 ｒｃＤＮＡライブラリーを生ずるための単純およびかなり有効な方法（＾ｓｉｍ ｐｌｅ　ａｎｄ　ｖｅｒｙ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆ。 ｒ　ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ　ｃＤＮＡ　１ｉｂｒａｒｉｅｓ）Ｊ　、　Ｇｅｎｅ 　２５：２６２ＩＶ−３０，ルイン、ティー、ヴ４−、　（Ｒｕｙｎｈ、Ｔ、Ｖ 、）。 アール、エイ、ヤング（Ｒ，Ａ、　Ｙｏｕｎｇ）およびアール、ダブリュー、デ ィビス（Ｒ，Ｗ、Ｄａｖｉｓ）　、　　（１９８５）　、　　ｒラムダｇｔｌｏ 及びラムダｇｔｌｌ中のｃＤＮＡライブラリーの建設およびスクリーニング（Ｃ ｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ｃＤＮＡ　１ｉｂ ｒａｒｉｅｓ　ｉｎ　ｌａｍｂｄａ　ｇｔｌＯａｎｄｌａｍｂｄａ　ｇｔｌｌ、 　［ｎ：ＤＮＡ　ｃｌｏｎｉｎｇ：　Ａ　ｐｒａｅｔｉｃａｌ　ａｐｐｒｏａｃ ｈ。 Ｄ、Ｇｌｏｖｅｒ、Ｅｌｄ、　（！ＲＬ　Ｐｒｅｓｓ、０ｘｆｏｒｄ、Ｕｎｉｔ ｅｄ　Ｋｆｎｇｄｏｍ）　９゜ＩＶ−３１，サンガー、エフ、　（Ｓａｎｇｅｒ 、Ｐ、）　、　ｘス。 ニックレン（Ｓ、Ｎ１ｃｋｌｅｎ）　ｒ　エイ、アール、コウルソン（Ａ。 Ｒ，Ｃｏｕｌｓｏｎ）　、　　（１９７７）　、　　ｒ鎖末端阻害剤を持ツＤＮ Ａシークエンス（ＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｃｈａｉｎ−ｔｅ ｒｍｉｎａｔｉｏｎ　１ｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）Ｊ　＋　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、 　Ａｃａｄ、　Ｓｃｊ、ＵＳＡ　７４：５ＩＶ−１２，ワイス、エイ、　（Ｗｅ ｉｓｓ、　Ａ、　）、アール、シールド（Ｒ，５ｈｊｅｌｄｓ）　、エム、ニュ ートン（Ｍ、　Ｎｅｗｔｏｎ）、　　ビー、マンゴ−（１３，Ｍａｎｇｅｒ）お よびジエー、インボデン（Ｊ、　１ｍｂｏｄｅｎ）　、　　（１９８７）　、　 　ｒインターロイキン　２　遺伝子の活性を拘束するのに要するリガンド−レセ プター相互作用（Ｌｉｇａｎｄ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｊｎｔｅｒａｃｔｆｏｎｓ 　ｒｅｑｕｉｒｅｄ　ｆｏｒｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔ　ｔｏ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖ ａＨｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　１ｎｔｅｒ１ｅｕｋ４ｎ　２ｇｅｎｅ）Ｊ　　、　　 Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３８：２１６９ＩＶ−８８，バーディ、ケイ、ジエ＋、 　（Ｈａｒｆｙ、に、　Ｊ、　）。 ビー、マンゴ−（Ｂ、Ｍａｎｇｅｒ）、　ｘム、−１−ニー）ン（Ｍ、　Ｎｅｗ ｔ。 ｎ）およびジュー。ディー、ストロボ（Ｊ、口、５ｔｒｏｂｏ）＋　　（１９８ ７）、ｒＴ細胞の活性化の間、分子発生は調整ヒトインターフェロン　ガンマ遺 伝子発現を含む（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｅｖｅｎｔｓ　１ｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ 　ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ｈｕｍａｎ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｇａｍｍａ　ｇｅ ｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｄｕｒｉｎｇＴ　ｃｅｌｌ　ａｃｔｉｖａｔｉｏ ｎ）　Ｊ　。 Ｊ、［ｍｍｕｎｏｌ、　１３８：２３５３ＩＶ−３４，シャウ、ジェー、ビー、 　　（Ｓｈａｗ、Ｊ、Ｐ、）　ｒビー、ジェー、ウツ（Ｐ、Ｊ、Ｕｔｚ）　、デ ィー、ビー、デュランド（Ｄ、　Ｂ、　Ｄｕｒａｎｄ）、　ジェー、ジェー、ト ール（Ｊ、　Ｊ、　Ｔｏｏｌｅ）　ｒ　イー、エイ、エメルＣＥ、　Ａ、　Ｂｍ ｍｅｌ）およびジー、アール、クラブツリー（Ｇ、Ｒ，Ｃｒａｂｔｒｅｅ）、　 　（１９８８）　。 「早期Ｔ細胞活性化遺伝子の推定される調整剤の同定（■ｄｅｎｔｆＮｃａｔｉ ｏｎ　ｏｆ　ａ　ｐｕｔａｔｉｖｅ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒ　ｏｆ　ｅａｒｌｙ　 Ｔ　ｃｅｌｌ　　ａｃｔｊｖａ　口ｏｎ　　ｇｅｎｅｓ）　　Ｊ　　、　　　５ ｃｉｅｎｃｅ　　２４１　二２０２ＩＶ−３５，ブルンワンド、エム−ダブリュ ー、　（Ｂｒｕｎｗａｎｄ、ＩＪ−Ｗ、）　、　　エイ、ジー、シュミット（Ａ 、　Ｇ、　Ｓｅｔ＋ｍ１ｄｔ）およびニー、シベンリスト（Ｕ、５ｉｅｂｅｎｌ ｉｓｔ）、　　（１９８８）、「インターロイキン−２遺伝子のマイトジェン反 応性調整部位と相互に作用する根因子（Ｎｕｃｌｅａｒ　ｆａｃｔ。 ｒｓ　１ｎｔｅｒａｃ口ｎｇ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｍＨｏｇｅｎ　ｒｅｓｐｏｎ ｓｉｖｅ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　１ｎｔｅｒｌ ｅｕｋｊｎ−２ｇｅｎｅ）　Ｊ　＋　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　、印刷中 ＩＶ−１６，：ｌザック、エム、（Ｋｏｚａｋ、Ｍ、）＋　　（１９８７）　、 　　ｒ６９　’ａ　　を推動物のメツセンジャーＲＮＡの５′　−コードされな いシーフェンスの分析（Ａｎ　ａｎａｌｙｓｉｓｏｆ　５’−ｎｏｎｃｏｃｆｆ ｎｇ　５ｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｆｒｏｍ　６９９　ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ　ｔｏｅ ｓｓｅｎｇｅｒ　ＲＮＡ５）Ｊ　、　Ｎｕｃｌ、Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、　１５： ８１２５ＩＶ−３７，７ｒン　ヘイジン、ジー、　（Ｖａｎ　Ｈｅ１ｊｎｅ。 Ｇ、）、（１９８５）、、ｒ暗号シーフェンス、変異の制限（Ｓｉｇｎａｌ　５ ｅｑｕｅｎｃｅｓ、　Ｔｈｅ　１１ｍ１ｔｓ　ｏｆ　ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ）Ｊ 　、　Ｊ。 Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、１８４：９９ ＩＶ−３８，フォノ　ヘイジン、ジー、　（Ｙｏｎ　Ｈｅｆｊｎｅ。 Ｇ、）、（１９８６）、ｒ暗号シーフェンスの分裂−を良くするための新しい方 法（Ａ　ｎｅｗ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇｓｉｇｎａｌ　 ５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｃｌｅａｖａｇｅ　５ｉｔｅｓ）Ｊ　＋　Ｎｕｃｌ、Ａｃ１ ｄｓ　Ｒｅｓ。 １４：４６８３ ＩＶ−３９，シャウ、ジー、　（Ｓｈａｗ、　Ｇ、）およびアール。 カメン（Ｒ，Ｋａｍｅｎ）　、　　（１９８６）　、　　ｒ選択的ｍＲＮＡ分解 を媒介する０ＭＣ３Ｆ　　ｍＲＮＡの３′−翻訳されない部位からの保存された へＵシークエンス（Ａ　ｃｏｎｓｅｒｖｅｄＡＵ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｆｒｏｍ 　ｔｈｅ　３’−ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄ　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　ＧＭＣＳＦ 　ｍＲＮＡ　ｍｅ＋Ｈａｔｅｓ　５ｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｍＲＮＡ　ｄｅｇｒａｄ ａｔｉｏｎ）　Ｊ　。 Ｃｅ１ｌ　　４６：６５９ ＩＶ−４０，カプト、ディー、　（Ｃａｐｕｔ、Ｄ、）およびビー。 ビュッラ−（Ｂ、Ｂｅｕｔｌｅｒ）　、ケイ、バードグ（Ｋ、　Ｈａｒｔｏｇ） 。 アール、ティア−（Ｒ，Ｔｈａｙｅｒ）、ニス、ブラウンシマー（Ｓ。 ＢｒｏｗｎＳｈｉｍｅｒ）およびエイ、セラミ（Ａ、Ｃｅｒａｍｉ）、　　（１ ９８６）、ｒ炎症性のメディエータ−を明記するｍＲＡＮ分子の３′　−翻訳さ れていない部分での共通のヌクレオチドシーフェンスの同定（Ｉｄｅｎｔｊｆｉ ｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｃｏ＋Ｉｍｏｎｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　５ｅｑｕｅｎ ｃｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　３’−ｕｎｔｒａｓｌａｔｅｄ　ｒｅｇｉｏｎ　。 ｆ　ｍＲＮＡ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　ｓｐｅｃｉｆｙｉｎｇ　ｉｎｆｌａｍｍａ ｔｏｒｙ　ｍｅｄｉａｔｏｒｓ）　Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ 、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８３：１６７０ＩＶ−４１，オバル、ケイ、　（Ｏｂａｒ ｕ、に、）、−ｒ−ム、フクダ（Ｍ、Ｐｕｋｕｄａ）、　ｘス、マエダ（Ｓ、　 Ｍａｅｄａ）およびケイ、シマダ（Ｋ、Ｓｈｉｍａｄａ）　、　　（１９８６） 　　ｒ腫瘍ブＣｌモータによってヒト扁桃腺リンパ球中で誘発されうるｍＲＮＡ を研究するのに使用されるｃＤＮＡクローン（Ａ　ｃＤＮＡ　Ｃ１ｏｎｅｕｓｅ ｄ　ｔｏ　５ｔｕｄｙ　ｍＲＮＡ　ｊｎｄｕｃｉｂｌｅ　ｉｎ　ｈｕａ＋ａｎ　 ｔｏｎｓＨｌａｒ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｂｙ　ａ　ｔｕｍｏｒ　ｐｒｏｍ ｏｔｅｒ）　　Ｊ　、　Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　９９：ＩＶ−４２，シャルウテ ィー、ジｘ−，（Ｓｃｈａｌｌ、Ｔ、Ｊ。 ）、ジエー、ジョンストラ（Ｊ、　Ｊｏｎｇｓｔｒａ）、　　ビー、リュー。 ダイシー（Ｂ、　Ｊ、　Ｄｙｅｒ）、　ジエー、ジョルゲンセン（Ｊ、　Ｊｏｒ ｇｅｎｓｅｎ）　、　　シー、クライベルガー（Ｃ，ＣＩａｙｂｅｒｇｅｒ）、 　ｘム。 エム、デビット（Ｍ、　Ｍ、　Ｄａνｊｓ）およびエイ、エム、クレンスキイ（ Ａ、Ｍ、Ｋｒｅｎｓｋｙ）　、　　（１９８Ｂ　）　、　　ｒヒトＴｍ胞−特異 分子は新遺伝子ファミリーの一員（Ａ　ｈｕｍａｎ　Ｔ　ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉ ｆｉｃ　ｍｏｌｅｃｕｌｅ　ｉＢ　ａ　ｍｅｔｎｂｅｒ　ｏｆ　ａ　ｎｅｗ　ｇ ｅｎｅ　ｆａｔｎｉＩＹ）　Ｊ　、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１４１＋１０１８ ＩＶ−４３，？ツシマ、ケイ、　（Ｍａｔｓｕｓｈｊｍａ、　Ｋ）、ケイ。 モリシタ（Ｋ、Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ）　、ティー、ヨシムラ（Ｔ、　Ｙｏｓｈｆ ｍｕｒａ）　、　ｘス、　ラヴ（Ｓ、　Ｌａｖｕ）、　ソイ。コバヤシ（Ｙ、　 ＫｏｂａｙａｓｈＤ　、ダブリュー、リュウ（Ｗ、Ｌｅｗ）　、イー、アペラ（ Ｂ、Ａｐｐｅｌｌａ）　、エイチ、エフ、クング（Ｈ，Ｆ、　Ｋｕｎｇ）、イー 、ジュー。レオナルト（Ｂ、　Ｊ、　Ｌｅｏｎａｒｄ）およびジェー、ジェー。 オペンヘイム（Ｊ、Ｊ、Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ）　、　　（１９８８）　、　　ｒ ヒト単球誘導性好中球の化学定性因子（ＭＤＮＣＦ）の分子クローニング、およ びインターロイキン１及び腫瘍壊死因子によるＭＤＮＣＦｍＲＮＡの誘発（ＩＪ ｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ａ　ｈｕｍａｎ　ｍｏｎｏｃｙｔｅ −ｄｅｒｉｖｅｄ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｅ　ｆａｃｔ ｏｒ（ＭＤＮＣＰ）　ａｎｄ　ｔｈｅ　１ｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＭＤＮＣＦ 　ｍＲＮＡｂｙ　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　１　ａｎｄ　ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒ ｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ）　Ｊ　、　Ｊ。 Ｅｌｘｐ、Ｍｅｄ、　１６７：１８８３ＴＶ−４４，ベグ、ジー、ニス、　（Ｂ ｅｇｇ、Ｇ、Ｓ、）　、ディー、ニス、ベラバー（口、　Ｓ、　Ｐｅｐｐｅｒ） 、　シー、エア。チェスターマン（Ｃ，Ｎ、　Ｃｈｅｓｔｅｒｍａｎ）およびエ フ、リュー０モルガン（Ｆ、、１Ｍｏｒｇａｎ）、　　（１９７８）　、　　ｒ ヒト　ベータースロンボグロプリンの完全な共有結合構造（Ｃｏａ＋ｐｌｅｔｅ 　ｃｏｖａｌｅｎｔ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｂｅｔａ−ｔｈ ｒｏｍｂｏｇｌｏｂｕｌｊｎ）　Ｊ　ｒ旧ｏｃｈｅｍｊｓｔｒｙ　１７：１７３ ９ＩＶ−４５，ヨシムラ、ティ、　（Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ、Ｔ、）、ケイ、マツ シマ（に、Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ）、ジェー、ジエー、オッペンハイム（Ｊ、　 Ｊ、　０ｐｐｅｎｈｅｉａ＋）およびイー、ジエ、レオナルト（Ｂ、Ｊ、Ｌｅｏ ｎａｒｄ）　＋　　（１９８８）　、　　ｒリボ多糖類に刺激されるヒト血液単 球白血球により作られる好中球の化学定性因子：インターロイキン１からの部分 的な特徴付けおよび単離（Ｎｅｕｔｒｏｐｈｊｌ　ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ　ｆ ａｃｔｏｒ　ｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙ　　１ｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒａｉｄ ｅ　　（ＬＰＳ）−ｓｔｊｍｕｌａｔｅｄ　　ｈｕｍａｎｂｌｏｏｄ　　ｍｏｎ ｏｎｕｃｌｅａｒ　　Ｉｅｕｋｏｃｙｔｅｓ：Ｐａｒｔｉａｌｃｈａｒａｃｔｅ ｒｆｚａｔｉｏｎ　　ａｎｄ　　５ｅｐａｒａＮｏｎ　　ｆｒｏｍ　　１ｎｔｅ ｒｌｅｕｋｉｎ１　　（ＩＬ−１））Ｊ　　、　　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　１ ３９ニア８８ＩＶ−４６，ヴアン　ジーメ、ジェー、　（ｖａｎ　Ｄａｍｍｅ、 Ｊ。 ）、ジエー、ヴアン　ビラメン（Ｊ、ｖａｎ　Ｂｅｅｕｍｅｎ）　、　　ジー。 オープナツカ−（Ｇ、０ｐｄｅｎａｋｋｅｒ）およびエイ、ビリアラ（Ａ。 Ｂ１１１ｉａｕ）　、　　（１９８８）　、　　ｒ好中球の化学定性、皮膚反応 性および顆粒球促進活性を持つ、新規なＮＨ”−末端シーフェンスで特徴付けら れたヒト　モノカイン（Ａ　ｎｏｖｅｌ、ＮＯｘ−ｔｅｒｍｉｎａｌ　５ｅｑｕ ｅｎｃｅ−ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ　ｈｕｍａｎ　ｍｏｎｏｋｌｎｅ　ｐｏ ｓｓｅｓｓｉｎｇ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　ｃｈｅｍｏｔａｃ口ｃ、　５ｋｊｎ −ｒｅａｃｔｉｖｅ、　ａｎｄ　ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｏｓｉｓ−ｐｒｏｍｏｔ ｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ）　　Ｊ　＋Ｊ、Ｂｘｐ、Ｍｅｄ、　１６７：１３６ ４ＩＶ−４７，ベヴエリ、ビー、　（Ｐｅｖｅｒｉ、Ｐ、）　、　−７−イ。 ワルツ（Ａ、Ｗａｌｚ）、　　ビー、デワルド（Ｂ、　Ｄｅｗａｌｄ）およびエ ム。 バギオリニ（Ｍ、Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ）、　　（１９８８）　、　　ｒヒト　 単核性食細胞によって作られた新規な好中球活性因子（Ａ　ｎｏｖｅｌ　ｎｅｕ ｔｒｏｐｈｉｌ−ａｃｔｊｖａｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂ ｙ　ｈｕｍａｎ　ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ　ｐｈａｇｏｃｙｔｅｓ）　Ｊ　、　 Ｊ、Ｂｘｐ、Ｍｅｄ、　１６７：１５４７ＩＶ−４８，ウォルペ、ニス、ディー 、　（Ｗｏｌｐｅ、　Ｓ、　Ｄ、　）。 ジー、ダヴアテリス（Ｇ、Ｄａｖａｔｅｌｉｓ）　、　　ビー、シェリー（Ｂ。 ５ｈｅｒｒｙ）、　　ビー、ビュツラ−（Ｂ、Ｂｅｕｔｌｅｒ）　ｒ　ディー、 ジー、レッセ（Ｄ、Ｇ、Ｒｅ５ｓｅ）　、　ｘイチ、ティー、シュエン（Ｈ。 Ｔ、Ｎｇｕｙｅｎ）、　ｘル、アイ、モルダワ−（Ｌ、　１Ｍｏｌｄａｗｅｒ） ＋シー、エフ、ラタン（Ｃ，Ｆ、　Ｒａｔｈａｎ）、　ｘ　ス、　ｘフ、ローリ −（Ｓ、　Ｐ、　Ｌｏｗｒｙ）およびエイ、セラミ（Ａ、Ｃｅｒａｍｉ）、　　 （１９８８）、ｒマクロファージは、炎症性および好中球化学走性特性をもつ新 規なヘパリン結合タンパク質を分泌する（Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ　５ｅｃｒｅ ｔｅ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｈｅｐａｒｉｎ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒ。 ｔｅｉｎ　ｗｉｔｈ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ａｎｄ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉ ｌ　ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｔｉｃｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）Ｊ　、　Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍ ｅｄ、　１６７：５７０ＩＶ−４９，カブラン、ジー、　　（Ｋａｐｌａｎ、Ｇ 、）　、　ｘイ。 ディー、ルスター（Ａ、　Ｄ、　Ｌｕ５ｔｅｒ）＋　　ジー、ハンコック（Ｇ、 　Ｈａｎｃｏｃｋ）およびゼット、エイ、コーン（Ｚ、Ａ、Ｃｏ１ｎ）、　　（ １９８７）、ｒヒトの皮膚の遅延免疫反応におけるガンマ−インターフェロンに 誘発されるタンパク質の発現（Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｇａｍ ｍａ　１ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ（ＩＰＩＯ）　 ｉｎ　ｄｅｌａｙｅｄ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ 　５ｋｉｎ）Ｊ　、　Ｊ、Ｂｘｐ、Ｍｅｄ、　１６６：１０９ＢＩＶ−５０，ル スター、エイ、ディ、　（Ｌｕｓｔｅｒ、＾、Ｄ。 ）およびジェー、ヴイー・ラヴエッチ（Ｊ、Ｖ、Ｒａｖｅｔｃｈ）　。 （１９８７）、ｒガンマ−インターフェロンに誘発されるサイトカインの生化学 的特徴付け（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｊｚａｔｉｏｎ　ｏ ｆ　ａ　ｇａｍｍａ　］ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　５ｙｔｏｋ ｉｎｅ（ＩＰ−１０））Ｊ　、　Ｊ、８ｘｐ、Ｍｅｄ、　１６６：１０８４ＩＶ −５１，シニア、アール、エム、　（Ｓｅｎｉｏｒ、Ｒ，Ｍ、）、ジー、エル、 グリフイン（Ｇ、Ｌ、Ｇｒｉｆｆｉｎ）　ｒ　ジュー。ニス、ヒュアング（Ｊ、 Ｓ、Ｈｕａｎｇ）　、ディー、エイ、ワルツ（Ｄ。 Ａ、Ｗａｌｚ）およびティー、エフ、デュエル（Ｔ、Ｐ、Ｄｅｕｅｌ）　＋（１ ９８３）、ｒ繊維芽細胞のための血小板アルファ顆粒タンパク質の化学走性（Ｃ ｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｐｌａｔｅｌｅｔ　ａｌｐｈ ａ　ｇｒａｎｕｌｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｆｏｒ　Ｎｂｒｏｂｌａｓｔｓ）　Ｊ 　。 Ｊ、Ｃｅ１１．Ｂｊｏｌ、　９６：３８２ＩＶ−５２，オスターマン、ディー、 ジー、　（Ｏｓｔｅｒｍａｎｎ、　Ｄ、　Ｇ、　）＋　　ジー、エル、グリフイ ン（Ｇ、Ｌ、Ｇｒｉｆｆｉｎ）　、　アール、エム、シニア−（Ｒ，Ｍ、　５ｅ ｎｉｏｒ）、イー、ティー、カイザー（Ｂ、Ｔ、Ｋａｉｓｅｒ）およびティー、 エフ、デュエル（Ｔ、　Ｆ。 Ｄｅｕｅｌ）　、　　（１９８２）　、　　ｒ血小板因子４のカルボキシル末端 トリデカペプチドは単球に対する強力な化学走性剤（Ｔｈｅ　ｃａｒｂｏｘｙｌ −ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｔｒｉｄｅｃａｐｅｐｔｉｄａ　ｏｆ　ｐｌａｔｅｌｅｔ 　ｆａｃｔｏｒ　４　ｉｓ　ａ　ｐｏｔｅｎｔ　ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ　ａｇ ｅｎｔ　ｆｏｒ　ｌｌ１ｏｎｏｃｙｔｅｓ）　Ｊ　、　Ｂｊｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏ ｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｌ１１．１０７：１８０ＩＶ−５８，ヒットーラルパ ー、ジ、−，（ｌｉｔ−Ｒａｒｐｅｒ、Ｊ、）＋　エイチ５ウオール（Ｈ，Ｗｏ ｈｌ）およびイー、ハルバー（８，Ｈａｒｐｅｒ）、　　（１９７８）　、　　 ｒ血小板因子４：コラゲナーゼの阻害剤（Ｐｌａｔｅｌｅｔ　Ｐａｃｔｏｒｅ　 ４：Ａｎ　ｒｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｆＣｏｌｌａｎｇｅｎａｓｅ）　Ｊ　、　５ ｃｉｅｎｃｅ　１９９：９９１１Ｖ−５４，カッツ、アイ、アール、　（Ｋａｔ ｚ、　１．Ｒ３）　ｒジー、ジュー。ツルベック（Ｇ、Ｊ、Ｔｈｏｒｂｅｃｋｅ ）　ｒ　エム、ケイ、ベル（Ｍ、　Ｋ、　Ｂｅ１ｌ）、　ジュー。ゼット、イン （Ｊ、　Ｚ、　Ｙｆｎ）、ディー、クラーク（Ｄ、　Ｃ１ａｒｋｅ）およびエム 、ビー、ズチャ−（Ｍ、Ｂ、Ｚｕｃｈｅｒ）、　　（１９８６）　、　　ｒ血小 板因子４のプロテアーゼで誘発される免疫調整活性（Ｐｒｏｔｅａｓｅ−ｆｎｄ ｕｃｅｄ　　ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　　 ｐｌａｔｅｌｅｔ　　ｆａｃｔｏｒ　　４）Ｊ　　、　　Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔ ｌ、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　　８３：３４９１１Ｖ−５５，ムレン バッハ、ジー、ティ、　（Ｍｕｌｌｅｎｂａｃｈ、Ｇ、Ｔ、）　、　ｘイ、タブ リジ（Ａ、Ｔａｂｒｉｚｉ）　ｒ　アール、ダブリュー、ブラチャ−（Ｒ，Ｗ、 　Ｂｌａｃｈｅｒ）およびケイ、ニス。 スタイマー（Ｋ、Ｓ、Ｓｔｅｉｍｅｒ）　＋　　（１９８６）　、　　ｒ結合組 織を活性化するペプチドを暗号化する遺伝子の酵母における化学合成および発現 １１１　（Ｃｈｅｍｉｃａｌ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏ ｎ　ｉｎ　ｙｅａｓｔ　ｏｆ　ａ　ｇｅｎｅ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ｃｏｎｎｅｃ ｔｉｖｅＬｉｓｓｕｅ　ａｃｔｉｖａｔｆｎｇ　ｐｅｐｔｉｄｅ、ＩＩＩ）Ｊ　 、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　２６１ニア１９ ＩＶ−５６，ラグスジール、シー、ジー、（Ｒａｇｓｄａｌｅ。 Ｃ，Ｇ、）、　　シー、ダブり二一、カスター（Ｃ，Ｗ、Ｃａ５ｔｏｒ）＋　デ ィー、ジェー、ロバーツ（Ｄ、　Ｊ、　Ｒｏｂｅｒｔｓ）およびケイ、アール、 スワルタ（Ｋ、Ｒ，Ｓｗａｒｔａ）、　　（１９８４）　、　　ｒ滑液の繊維芽 細胞によるプラスミノーゲン活性の合成および分泌を誘発する結合組織活性化ペ プチドＩ　Ｉ　Ｉ　（Ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ口５ｓｕｅ　ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ 　ｐｅｐｔｉｄｅ　ＩＩＩ　１ｎｄｕｃ目ｏｎ　ｏｆ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａ ｎｄ　５ｅｃｒｅｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ　ａｃｔｉｖａｔｏ ｒ　ｂｙ　５ｙｎｏｖｉａｌ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ）Ｊ　、　Ａｒｔｈｒｉ 目ｓ　Ｒｈｅｕｍ　２７：６６３ＩＶ−５７，バード、ビー、アール、　（Ｂｕ ｒｄ＋Ｐ、Ｒ，）　ｒジー、ジュー。フリーマン（Ｇ、、１．Ｐｒｅｅｍａｎ） 　、　ｘス、ディー、ウィルソン（Ｓ、　Ｄ、　Ｗｉ　ｌ５ｏｎ）＋　エム、ベ ルマン（Ｍ、　Ｂｅｒｍａｎ）＋　アール、デクリュフ（Ｒ，ＤｅＫｒｕｙｆｆ ）、　　ビー、アール。 ビリンゲス（Ｐ、　Ｒ，Ｂ目１ｉｎｇｓ）およびエム、イー、ドルフ（Ｍ。 Ｂ、Ｄｏｒｆ）、　　（１９８７）　、　　ｒ新規なＴ細胞活性化遺伝子のクロ ーニング及び特徴付け（Ｃｌｏｇｎｊｎｇ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｊｚａ ｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ａｃ目ｖａｔｉｏｎ　ｇｅｎ ｅ）　Ｊ　、　Ｊ、Ｉｍｔｎｕｎａｌａｇｙ　１３９：３１２６ＩＶ−５８，ｌ ：ｌリンス、ビー、ジｘ−，（Ｒｏｌｌｊｎｓ、Ｂｌ。 ）、イー、ディー、モリソン（Ｂ、　Ｄ、　Ｍｏｒｒｉｓｏｎ）およびシー。 ディー、スタイルス（Ｃ，Ｄ、５ｔｉｌｅｓ）、　　（１９８８）　、　　ｒＪ Ｅ１血小板誘導性成長因子により誘発され、その生成物がサイト力イン様の特性 を持つ遺伝子のクローニング及び発現（ＣＩｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓ ｓｉｏｎ　ｏｆ　ＪＢ、　ａ　ｇｅｎｅ　１ｎｄｕｃｉｂｌｅ　ｂｙ　ｐｌａｔ ｅｌｅｔ−ｄ８ｒｉＶｅｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒａｃｔｏｒ　ａｎｄ　ｗｈｏｓｅ 　ｐｒｏｄｕｃｔ　ｈａｓ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ−１ｊｋｅ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅ ｓ）　Ｊ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。 Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８５：３７３８ＴＶ−５９，スガノ、ニス、（Ｓ ｕｇａｎｏ、Ｓ、＞　ｒ　：ｒ−ム、ワイ、ストックル（ＩＪ、　Ｙ、　５ｔｏ ｅｃｋｌｅ）およびアール、ハナフサ（Ｒ，ｔ（ａｎａｆｕｓａ）、　　（１９ ８７）　、　　ｒｏウス　サルコマ　　ウィルスによる形質転換は細胞分裂促進 性血小板タンパク質と同族の新規な遺伝子を誘発する（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔ ｊｏｎ　ｂｙＲａｕｓ　ｓａｒｃｏｍａ　ｖｉｒｕｓ　４ｎｄｕｃｅｓ　ａ　ｎ ｏｖｅｌ　ｇｅｎｅ　ｗｉｔｔ＋　ｈｏｍ。 １ｏｇｙ　ｔｏ　ａ　ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ　ｐｌａｔｅｌｅｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ ）　Ｊ　、　Ｃｅ１ｌ　４９：背景の記載および本発明の明細書を終える目的の ために、この明細書で同一と認められた発行論文、特許およびこれまでの特許１ １）願のそれぞれが、明細書中で参照されてものがここに導入される。 前記の発明は、明白に理解することを目的として詳細に記載される。種々の組み 合わせの形態および詳細は本発明の範囲からはずれることがないことも明らかで ある。 ２、べ ｃ）Ｓｃ ４１■■−ヒ１−■■冒　１ｈ　ＰＨＡ＋ＰＭＡＰＢＭＣ−〇 ＦＩＧ、ｌ−３ ＴＴＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣｅＣＣ（ｉｃｃｌ：ＧＡＧＣＡＣ ＡＧＧＡ（：ＡＣＡＯＣＴＯＧＧＴＴＣＴＣＡＡＧＣＴＴＣU０ ｃｃａｒｆｉ工区乎ｅＴＴＴＡ々Ｘ戸！少ＴＧＣ＾ＧＡＣ＾ＧＴＴ＾＾＾＾＾＾ ＾＾ム＾＾＾＾＾＾＾　　　　　　７１１ＦｆＧ、Ｉ−５ ＦＩＧ、Ｉ−６ ｌ−６Ｂａ　　ＥｃｏＲＩ　　　Ｈｉｎｄｌｌｌ　　ＸｂａｌＦＩＧ、Ｉ−７ 大きさの分取 ２木目の鎖の合成（ＤＮＡポリメラーゼ　Ｉ）λｇｔｌＯ中へのクローニング ｐＡＴ　１２９　　　　ｐＡＴ１３３　　　　ρＡＴ６０２　　　　ｐＡＴ４６ ４ＦＩＧ、Ｉｎ−３ ・−＠　　ｐＡＴ　１５４ ｅ　　＠ＩＩ　　＠１ＩｌｐＡＴ２２５ＩＮＩ＠Ｉ　　＠　　ＰＡ”４１６ ＦＩＧ、ｎ−４ ＦｆＧ、Ｉ［ｌ−１ ｐＡ７４１６　　ｍ　　儀　− ２・ｐＡＴ４６４ラ　−　― ＩＬ−２−− β２ＭＧＩｉ−− ＦｉＧ、ＩＩＩ−２ 刺戟物　　　　　　　　夕％、、に　　　　　　　Ｄｉｃｅ　　　　　　　　イ オノでイシン　　　　　　　イオノマイシン　十〇ｉＣ８時間（ｈｒ）　　　０ ４　　１４　　４　　１４　　４　　１４　　４ｐＡＴ７４４　　　　　　　　 　　　　　　　＠　。 ＦｆＧ、ニー３ ＝４．５ｈ−−１−４．５トーコ ［−１龜・−ｐＡＴ４６４ 、■閣−、、、ｐＡＴ７４４ 、′、“””ＭＡ−■駆Ｅ　　１）ＡＴ樹ＦＩＧ、バト２ ５°ＵＲＯＲＦ　　　　　　　　　　　　　　　３°０ＲＦＩＧ、　ｆｆ　’５ 　（Ａ） ＦＩＧ、　ＥＩ３（Ｂ） １００　ｂｐ ＦＩＧ、　ＴＸ４　（Ａ） ＯＡＡＴＴｅｅＣＣＴｌａＴＴ（ＴＣ入Ａ　　ＣｅｆｒｅＴ’Ｃ＾Ｇ丁　丁ｃｔ ａｅ＾ＧＣＣＴ−Ｃ＾ｆｆ丁Ｃ＾Ｃ入入＾＾Ｃｅ丁ＣＴ丁　sテｅｃ＾ＣＣ入Ａ 丁　＾Ｃｅ ＦＩＧ、工４　（Ｂ） ＦＩＧ、ＴｓＬ−５ ＦＩＧ、　ｆｆ　６（Ｂ） ｐａＴｔ４４　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋＋＋　試 　ｔｃｖｔｖｔｔｔｔ＊ｔｖ　＾　＾　ｒｅｇｔ＊ｔ　官ｌO　− ｐａＴ　ａ＠Ｉ　　　　　　　　　　　　　　　Ｎ　Ｑ　Ｖ　Ｓ丁＾＾Ｌ＾ＶＬ ＬｅＴＮ＾ｔｃｗ６ｒｔ＾ＩＳ−−、、ｉ−、’　　　　；　　　＝ 国際調査報告 １ｎ＋１トｒ響〜＋＋ｍ＋ｍ＾・−−−１【＃Ｉ＃＋−−禰し■コ（’Ｔ）−＋ ！！；ｌｌＱ１０％０１

Claims (28)

【特許請求の範囲】
1. １．ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質をコードしているＤＮＡ断 片であって；該タンパク質がＡｃｔ−２のｃＤＮＡの完全な長さのクローンおよ びｐＡＴ　７４４のｃＤＮＡのクローンの翻訳生産物から成る群から選択されて いるＤＮＡ断片。
2. ２．請求項１記載のＤＮＡ断片とベクターを包含する組換えＤＮＡ分子。
3. ３．請求項２記載の該組換えＤＮＡ分子で形質転換された細胞の培養。
4. ４．ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質の生産法であって、該タン パク質が生産されるような条件下で請求項３記載の該細胞を培養しそして該タン パク質を単離することを包含する生産法。
5. ５．請求項４に記載の該細胞を培養することを包含するヒトのリンホカイン／サ イトカイン様タンパク質の生産法であって； 該タンパク質が該細胞から分泌される生産法。
6. ６．請求項４に記載の生産法により製造できるヒトのリンホカイン／サイトカイ ン様タンパク質。
7. ７．請求項５に記載の生産法により製造できるヒトのリンホカイン／サイトカイ ン様タンパク質。
8. ８．ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質のアミノ酸配列を包含する ペプチドにより誘導される抗体であって； 該タンパク質がＡｃｔ−２のｃＤＮＡのほぼ完全な長さのクローンおよびｐＡＴ 　７４４のｃＤＮＡのクローンからの翻訳生産物から成る群から選択されている 抗体。
9. ９．ｉ）マイトジェン活性化を生起する条件下にＴ細胞を置き； ｉｉ）該Ｔ細胞からｍＲＮＡを単離し；そしてｉｉｉ）ＤＮＡ試料へのハイブリ ッド形成によりリンホカイン／サイトカイン様タンパク質のための遺伝子のマイ トジェン活性化のレベルを定量する段階を包含するバイオアッセイであって； 該試料が請求項１記載のＤＮＡ断片に含有されるＤＮＡ断片を包含するバイオア ッセイ。
10. １０．ｉ）その中でＴ細胞を培養した液体を取得し；そしてｉｉ）請求項８に記 載の抗体との反応によりヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質のレベ ルを定量する段階を包含するバイオアッセイ。
11. １１．ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質をコードしているＤＮＡ 断片であって；該タンパク質がｐＡＴ　７４４のｃＤＮＡのクローンの翻訳生産 物であるＤＮＡ断片。
12. １２．請求項１１記載のＤＮＡ断片とベクターを包含する組換えＤＮＡ分子。
13. １３．請求項１２記載の該組換えＤＮＡ分子で形質転換された細胞の培養。
14. １４．ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質の生産法であって、該タ ンパク質が生産されるような条件下で請求項１３記載の該細胞を培養しそして該 タンパク質を単離することを包含する生産法。
15. １５．請求項１４に記載の該細胞を培養することを包含するヒトのリンホカイン ／サイトカイン様タンパク質の生産法であって； 該タンパク質が該細胞から分泌される生産法。
16. １６．請求項１４に記載の生産法により製造できるヒトのリンホカイン／サイト カイン様タンパク質。
17. １７．請求項１５に記載の生産法により製造できるヒトのリンホカイン／サイト カイン様タンパク質。
18. １８．ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質のアミノ酸配列を包含す るペプチドにより誘導される抗体であって； 該タンパク質がｐＡＴ　７４４のｃＤＮＡのクローンからの翻訳生産物から選択 されている抗体。
19. １９．ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質をコードしているＤＮＡ 断片であって；該タンパク質が下記のｃＤＮＡクローンのいずれかの翻訳生産物 から成る群から選択されているＤＮＡ断片：【配列があります】；およびｐＡＴ 　７３０。
20. ２０．請求項１９記載のＤＮＡ断片とベクターを包含する組換えＤＮＡ分子。
21. ２１．請求項２０記載の該組換えＤＮＡ分子で形質転換された細胞の培養。
22. ２２．ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質の生産法であって、該タ ンパク質が生産されるような条件下で請求項２１記載の該細胞を培養しそして該 タンパク質を単離することを包含する生産法。
23. ２３．請求項２２に記載の該細胞を培養することを包含するヒトのリンホカイン ／サイトカイン様タンパク質の生産法であって； 該タンパク質が該細胞から分泌される生産法。
24. ２４．請求項２２に記載の生産法により製造できるヒトのリンホカイン／サイト カイン様タンパク質。
25. ２５．請求項２３に記載の生産法により製造できるヒトのリンホカイン／サイト カイン様タンパク質。
26. ２６．ヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質のアミノ酸配列を包含す るペプチドにより誘導される抗体であって； 該タンパク質が下記のｃＤＮＡクローンのいずれかの翻訳生産物から成る群から 選択されている抗体：【配列があります】およびｐＡＴ　７ ３０。
27. ２７．ｉ）マイトジェン活性化を生起する条件下にＴ細胞を置き； ｉｉ）該Ｔ細胞からｍＲＮＡを単離し；そしてｉｉｉ）ＤＮＡ試料へのハイブリ ッド形成によりリンホカイン／サイトカイン様タンパク質のための遺伝子のマイ トジェン活性化のレベルを定量する段階を包含するバイオアッセイであって； 該試料が請求項１９記載のＤＮＡ断片に含有されるＤＮＡ断片を包含するバイオ アッセイ。
28. ２８．ｉ）その中でＴ細胞を培養した液体を取得し；そしてｉｉ）請求項２６に 記載の抗体を使用してヒトのリンホカイン／サイトカイン様タンパク質のレベル を定量する段階を包含するバイオアッセイ。