JPH0353320B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、下記一般式： ［式中、R¹はＨまたはOHを表わす。そして、R¹
がＨであるときは、R²はＨであり、R³およびR⁴
は共にＨであるか、共にOHである。また、R¹が
OHであるときは、R²はＨであり、R³はOHもし
くはC₁〜C₆アルコキシであり、R⁴はOHである
か、あるいはR²はCONH₂であり、R³およびR⁴は
共にOHである。R⁵はドデシル、Ｎ−（ｎ−ドデ
カノイル）−ｐ−アミノフエニルもしくはｐ−（ｎ
−オクチルオキシ）フエニルを表わす。］ で示される環状ペプチド核誘導体に関する。 式の化合物は、下記一般式： ［式中、R¹、R²、R³およびR⁴は前記定義に同
じ］ で示される環状ペプチド核のオルニチン上のαア
ミノ基をアシル化することによつて製造すること
ができる。 式の核化合物は、下記一般式： ［式中、Ｒは飽和または不飽和脂肪酸側鎖であ
り、R¹、R²、R³およびR⁴は前記定義に同じ］ で示される環状ペプチド抗生物質を脱アシル化す
ることによつて製造することができる。 本明細書においては、便宜上、上記式で示さ
れる脱アシル化された環状ペプチド化合物を「環
状ペプチド核」または単に「核」と呼ぶ。また、
上記式または式で示されるアシル化された環
状ペプチドのアシル基ＲまたはCOR⁵を除く環状
ペプチド骨格を「環状ペプチド核」または単に
「核」と呼ぶこともある。 我々は、脂肪酸側鎖のＲを酵素的に脱離して環
状ペプチド核とする製造方法を見出した。この製
造方法は、水性溶媒中、抗生物質を、
Actinoplanaceae科の微生物から産生される酵素
と、脱アシル化反応が実質的に完了するまで接触
させることよりなる。本発明の好ましい製造方法
は、微生物、Actinoplanes utahensis
NRRL12052から産生される酵素を用いて、脂肪
酸側鎖を開裂することよりなる。脱アシル化は、
通常、適当な抗生物質をA.utahensisの培地に加
え、脱アシル化が実質的に完了するまでその培地
を培養することよりなる。それによつて得られた
核は、当業者には周知の方法により、発酵ブロス
から分離される。これらの核は、再びアシル化し
て新しい抗生物質とすることができるという点に
おいて有用である。 本発明において式で示される環状ペプチド核
の各定義は次のとおりである。 R¹はＨまたはOHを表わす。そして、R¹がＨで
あるとき、R²はＨであり、R³およびR⁴は共にＨ
であるか、共にOHである。また、R¹がOHであ
るとき、R²はＨであり、R³はOHもしくはC₁〜
C₆アルコキシであり、R⁴はOHであるか、あるい
はR²はCONH₂であり、R³およびR⁴は共にOHで
ある。 本発明に係る核の実施態様の１つとして、R¹、
R³およびR⁴がOHであり、R²がＨであるものが
挙げられ、この核はＡ−30912A核として公知で
ある。Ａ−30912A核は、式において、Ｒがリ
ノレオイル、ステアロイル、またはパルミトイル
であり、R¹、R²、R³およびR⁴がＡ−30912A核と
同意義を有する環状ペプチド抗生物質を脱アシル
化することによつて製造することができる。 式において、R¹、R²、R³およびR⁴がＡ−
30912A核と同意義であり、Ｒがリノレオイルで
ある環状ペプチド抗生物質は、Ａ−30912因子Ａ
として公知であり、Ｒがステアロイルである抗生
物質は、テトラヒドロ−Ａ−30912因子Ａとして
公知であり、また、Ｒがパルミトイルである抗生
物質は、アクレアシンＡとして公知である。 Ａ−30912因子Ａ Ａ−30912因子Ａは、因子Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ
およびＧも同時に含有しているＡ−30912複合体
のうちの１つの因子である。Ａ−30912複合体お
よび個々の因子ＡないしＧについては、Marvin
M.HoehnとKarl H.Michelとが米国特許第
4024245号に記載している。Ａ−30912因子Ａは、
Calvin.E.HiggensとKarl H.Michelとによつて米
国特許第4024246号に記載されている抗生物質Ａ
−22082と同一である。Ａ−30912因子Ａはまた、
抗生物質エキノカンジンＢ（echinocandin Ｂ）
［F.Benz et al.，Helv.Chim.Acta 57，2459〜
2477（1974）およびスイス特許第568386号参照］
ならびに抗生物質SL7810／Ｆ［C.Keller−Juslen
et al.，Tetrahedron Letters（46），4147〜4150
（1976）ならびにベルギー特許第834289号参照］
と同一であることもわかつている。 Keller−Juslenらは、式においてＲがリノレ
オイルであり、R¹、R³およびR⁴がOHであり、
R²がＨである構造をＡ−30912因子Ａとすること
を提案した。 テトラヒドロ−Ａ−30912因子Ａ テトラヒドロ−Ａ−30912因子Ａ（テトラヒドロ
−SL7810／Ｆ；テトラヒドロエキノカンジンＢ）
は、式においてＲがステアロイルであり、R¹、
R³およびR⁴がOHであり、R²がＨである構造を
有し、ベルギー特許第834289号およびF.Benz et
al.によりHelv.Chim.Acta.57，2459〜2477（1974）
に記載されてる。便宜上、この物質を以下テトラ
ヒドロ−Ａ−30912Aと記載する。 アクレアシンＡ アクレアシンＡはアクレアシン複合体の１つの
成分である。アクレアシン複合体は１つの主な成
分（アクレアシンＡ）と６つの小量の成分（アク
レアシンＢ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ）からなり、こ
れらアクレアシンの構成成分はK.Mizunoらによ
り、米国特許第3978210号に記載されている。ベ
ルギー特許第859067号に論じられているように、
アクレアシンＡは、ステアロイル側鎖がパルミト
イルに置きかわる以外は、テトラヒドロ−Ａ−
30912Aと同じ構造の環状ペプチドである。 Ａ−30912A核 本発明に係る新規環状ペプチド核、すなわちＡ
−30912因子Ａ（エキノカンジンＢ、SL7810／
Ｆ）、テトラヒドロ−Ａ−30912因子Ａ、ならびに
アクレアシンＡの核は、式において、R¹、R³
およびR⁴がOHであり、R²がＨである構造を有す
る。 Ａ−30912A核は白色無定形の物質であり、水、
ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、
およびメタノールなどの溶媒には可溶であり、ク
ロロホルム、トルエン、ジエチルエーテルなどの
溶媒には不溶である。 AM30912A核の実験式はC₃₄H₅₁N₇O₁₅であり、
分子量は797.83である。 図１にＡ−30912A核をKBrデイスクで測定し
た赤外吸収スペクトルを示す。次のような吸収極
大が観察される。3340（巾広、OH、水素結合）、
2970、2930および2890（CH伸縮、脂肪族CH₃、
CH₂、CH）、1660および1625（複数のカルボニル
Ｃ＝０）、1510〜1550、1430〜1450（CH変角）、
1310〜1340、1230〜1260、1080、835、650（巾
広）、および550（巾広）cm^-1。 66％水性ジメチルホルムアミド中でのＡ−
30912A核の電気滴定は、pka値 約7.35（初期PH
7.32）の滴定可能な基１個の存在を示す。 Ａ−30912A核は高速液体クロマトグラフイー
（HPLC）で分離することができ、下記のような
条件を用いて分離した時のおよその保持時間
（K′）は、11.52分である。 カラム：４×300mm 充填剤：シリカゲル／C₁₈ 溶媒：酢酸アンモニウム−アセトニトリル−水
（１：２：97） 流速：３ml／分 圧力：2500psi 検出器：波長可変UV（230nｍ） 感度：０〜0.4A.U.F.S. Ａ−30912A核の製造 基質の製造 本発明におけるＡ−30912A核はＡ−30912因子
Ａ、テトラヒドロ−Ａ−30912因子Ａ、またはア
クレアシンＡから製造しうる。これらの基質は、
精製された物質として用いてもよいが、必ずしも
精製する必要はない。従つて、例えば、Ａ−
30912因子Ａが主成分であるＡ−30912複合体をＡ
−30912A核を製造する基質として用いてもよい。 Ａ−30912因子Ａ Ａ−30912因子Ａは、下記の微生物のいずれか
を用いて深部通気発酵を行うことによつて製造さ
れる。(1)Aspergillus rugulosus NRRL8113：(2)
Aspergillus nidulans NRRL8112；(3)
Aspergillus nidulans var.echinulatus Ａ−
32204、NRRL3860；(4)Aspergillus rugulosus
NRRL8039；または(5)Aspergillus nidulans
var.rose us，NRRL11440。 A.nidulans var.roseus NRRL11440株をＡ−
30912因子Ａの産生に用いる時、因子の複合体が
得られ、これを便宜上、Ａ−42355抗生物質複合
体と称す。Ａ−30912因子Ａは、Ａ−42355抗生物
質複合体に含まれる主な因子であり、その他に、
因子Ｂ、ＤおよびＨが少量含まれる。 テトラヒドロ−Ａ−30912A テトラヒドロ−Ａ−30912Aは、Ａ−30912因子
Ａを、標準の水素化操作により、リノレオイル側
鎖の２つの二重結合が還元されてしまうまで還元
することにより製造される。 アクレアシンＡ アクレアシンＡは、Aspergillus aculeatus
NRRL8075の発酵により製造され、このことは、
米国特許第3978210号に記載されているので、そ
の記載をここに引用する。 本発明に係る核のまた別の実施態様は、R¹お
よびR²が共にＨであり、R³およびR⁴が共にOH
であり、これはＡ−30912B核として公知である。
Ａ−30912B核は、式において、Ｒがリノレオ
イルまたはステアロイルであり、R¹、R²、R³お
よびR⁴がＡ−30912B核と同意義である環状ペプ
チド抗生物質を脱アシル化することにより製造さ
れる。式において、R¹、R²、R³およびR⁴がＡ
−30912B核と同意義であり、Ｒがリノレオイル
である環状ペプチド抗生物質は、Ａ−30912因子
Ｂとして公知であり、Ｒがステアロイルである抗
生物質は、テトラヒドロ−Ａ−30912因子Ｂとし
て公知である。 Ａ−30912因子Ｂ Ａ−30912因子Ｂは、因子Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ
およびＧも同時に含有しているＡ−30912複合体
のうちの１つの因子である。Ａ−30912複合体に
ついては、Marvin M.HoehnおよびKarl H.
Michelとによつて米国特許第4024245号に記載さ
れている。 Ａ−30912因子Ｂは、抗生物質エキノカンジン
Ｃ（echinocandin Ｃ）［R.Traber et al.，Helv.
Chim.Acta.62，1252〜1267（1979）参照］および
抗生物質SL7810／Ｆ−（ベルギー特許第
834289号参照）と同一であることがわかつてい
る。 Traberらは、式においてR¹およびR²が共に
Ｈであり、R³およびR⁴が共にOHであり、Ｒがリ
ノレオイルである構造をエキノカンジンＣとする
ことを提案した。また、Traberらは、式にお
いて、R¹およびR²が共にＨであり、R³およびR⁴
が共にOHであり、Ｒがステアロイルである構造
を、テトラヒドロ−エキノカンジンＣとすること
を提案した。 テトラヒドロ−Ａ−30912因子Ｂ テトラヒドロ−Ａ−30912因子Ｂ（テトラヒドロ
−SL7810／Ｆ−：テトラヒドロエキノカンジ
ンＣ）は、式において、R¹およびR²が共にＨ
であり、R³およびR₄が共にOHであり、Ｒがステ
アロイルである構造を有し、ベルギー特許第
834289号およびR.TraberらによつてHelv.Chim.
Acta 62，1252〜1267（1979）に記載されてい
る。便宜上、この物質を以下テトラヒドロ−Ａ−
30912Bと記載する。 Ａ−30912B核 本発明に係る新規環状ペプチド核、すなわちＡ
−30912因子Ｂ（エキノカンジンＣ、SL7810／Ｆ
−）の核およびテトラヒドロ−Ａ−30912Bの
核は、式において、R¹およびR²が共にＨであ
り、R³およびR⁴が共にOHである構造を有する。 Ａ−30912B核の実験式はC₃₄H₅₁N₇O₁₄であり、
分子量は781.83である。 Ａ−30912B核の製造 基質の製造 Ａ−30912B核は、Ａ−30912因子Ｂまたはテト
ラヒドロ−Ａ−30912Bから製造される。Ａ−
30912因子Ｂは、これを産生する抗生物質複合体
の主成分ではないので、基質として用いる前に、
一緒に産生される他の因子を除く程度まで精製し
ておかねばならない。 Ａ−30912因子Ｂ Ａ−30912因子Ｂは、下記の微生物のいずれか
を用いて深部通気発酵を行うことによつて製造さ
れる。(1)Aspergillus rugulosus NRRL8113；(2)
Aspergillus nidulans var.echinulatus Ａ−
32204、NRRL3860；(3)Aspergillus rugulosus
NRRL8039；または４）Aspergillus nidulans
var.roseus NRRL11440。 A.nidulans var.roseus NRRL11440株をＡ−
30912因子Ｂの産生に用いる時、因子の複合体が
得られ、これを便宜上、Ａ−42355抗生物質複合
体と称す。Ａ−30912因子Ａは、Ａ−42355抗生物
質複合体に含まれる主な因子であり、その他に、
Ａ−30912因子Ｂ、ＤおよびＨが少量含まれる。 テトラヒドロ−Ａ−30912B テトラヒドロ−Ａ−30912Bは、Ａ−30912因子
Ｂを、標準の水素化操作により、リノレオイル側
鎖の２つの二重結合が還元されてしまうまで還元
することにより製造される。 本発明に係る核のまた別の実施態様は、R¹、
R²、R³およびR⁴がいずれもＨであり、これはＡ
−30912D核として知られている。Ａ−30912D核
は、式において、Ｒがリノレオイルまたはステ
アロイルであり、R¹、R²、R³およびR⁴がＡ−
30912D核と同意義である環状ペプチド抗生物質
を脱アシル化することにより製造される。 式において、R¹、R²、R³およびR⁴がＡ−
30912D核と同意義であり、Ｒがリノレオイルで
ある環状ペプチド抗生物質は、Ａ−30912因子Ｄ
として公知であり、Ｒがステアロイルである抗生
物質は、テトラヒドロ−Ａ−30912因子Ｄとして
公知である。 Ａ−30912因子Ｄ Ａ−30912因子Ｄは、因子Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ
およびＧも同時に含有しているＡ−30912複合体
のうちの１つの因子である。Ａ−30912複合体に
ついては、Marvin M.HoehnおよびKarl.H.
Michelとによつて米国特許第4024245号に記載さ
れている。 Ａ−30912因子Ｄは、抗生物質エキノカンジン
Ｄ（echinocandin Ｄ）［R.Traber et al.，Helv.
Chim.Acta.62，1252〜1267（1979）参照］および
抗生物質SL7810／Ｆ−（ベルギー特許第
834289号参照）と同一であることがわかつてい
る。 Traberらは、式においてR¹、R²、R³および
R⁴がいずれもＨであり、Ｒがリノレオイルであ
る構造をエキノカンジンＤとすることを提案し
た。また、Traberらは、式において、R¹、
R²、R³およびR⁴がいずれもＨであり、Ｒがステ
アロイルである構造を、抗生物質テトラヒドロエ
キノカンジンＤとすることを提案した。 テトラヒドロ−Ａ−30912因子Ｄ（テトラヒドロ
−SL7810／Ｆ−；テトラヒドロエキノカンジ
ンＤ）は、以下便宜上、テトラヒドロ−Ａ−
30912Dと称す。 Ａ−30912D核 本発明に係る新規環状ペプチド核、すなわちＡ
−30912因子Ｄ（エキノカンジンＤ、SL7810／Ｆ
−）ならびにテトラヒドロ−Ａ−30912Dの核
は、式において、R¹、R²、R³およびR⁴がいず
れもＨである構造を有する。 Ａ−30912D核の実験式はC₃₄H₅₁N₇O₁₂であり、
分子量は749.83である。 Ａ−30912D核の製造 基質の製造 Ａ−30912D核はＡ−30912因子Ｄまたはテトラ
ヒドロ−Ａ−30912Dから製造しうる。Ａ−30912
因子Ｄは、これを産生する抗生物質複合体の主成
分ではないので、基質として用いる前に、一緒に
産生される他の因子を除く程度まで精製しておか
ねばならない。 Ａ−30912因子Ｄ Ａ−30912因子Ｄは、下記の微生物のいずれか
を用いて深部通気発酵を行うことによつて製造さ
れる。(1)Aspergillus rugulosus NRRL8113；(2)
Aspergillus nidulans var.echinulatusA−
32204、NRRL3860；(3)Aspergillus rugulosus
NRRL8039；または(4)Aspergillus nidulans
var.roseus NRRL11440。 A.nidulans var.roseus NRRL11440株をＡ−
30912因子Ｄの産生に用いる時、因子の複合体が
得られ、これを便宜上、Ａ−42355抗生物質複合
体と称す。Ａ−30912因子Ａは、Ａ−42355抗生物
質複合体に含まれる主な因子であり、その他に、
Ａ−30912因子Ｂ、ＤおよびＨが少量含まれる。 テトラヒドロ−Ａ−30912D テトラヒドロ−Ａ−30912Dは、Ａ−30912因子
Ｄを、標準の水素化操作により、リノレオイル側
鎖の２つの二重結合が還元されてしまうまで還元
することにより製造される。 本発明のまた別の実施態様は、R¹およびR⁴が
共にOHであり、R²がＨであり、R³がC₁〜C₆ア
ルコキシであり、これはＡ−30912H型核として
知られている。Ａ−30912H型核は、式におい
て、Ｒがリノレオイルまたはステアロイルであ
り、R¹、R²、R³およびR⁴がＡ−30912H型核と同
意義である環状ペプチド抗生物質を脱アシル化す
ることによつて製造される。 式において、Ｒがリノレオイルであり、R¹
およびR⁴がOH、R²がＨ、R³がメトキシである
環状ペプチド抗生物質は、Ａ−30912因子Ｈとし
て知られており、Ｒがステアロイルであり、R¹
およびR⁴がOH、R²がＨ、R³がメトキシである
抗生物質は、テトラヒドロ−Ａ−30912因子Ｈと
して知られている。 式において、Ｒがリノレオイルであり、R¹
およびR⁴がOH、R²がＨ、R³がC₂〜C₆アルコキ
シである環状ペプチド抗生物質はＡ−30912因子
Ｈの低級アルコキシ同族体として知られており、
Ｒがステアロイルであり、R¹およびR⁴がOH、
R²がＨ、R³がC₂〜C₆アルコキシである抗生物質
は、テトラヒドロ−Ａ−30912因子Ｈの低級アル
コキシ同族体として知られている。 Ａ−30912因子Ｈ Ａ−30912因子Ｈは、因子Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ
およびＧも同時に含有しているＡ−30912複合体
のうちの１つの因子である。Ａ−30912複合体に
ついては、Marvin M.HoehnおよびKarl H.
Michelとによつて米国特許第4024245号に記載さ
れている。Ａ−30912因子Ｈは、あとから発見さ
れたＡ−30912因子であり、Karl H.Michelの米
国特許出願第117739号（1980年２月１日出願）
に、抗生物質Ａ−30912因子Ｈと称されて記載さ
れている。この米国出願は、現在は却下された米
国特許出願第46875号（1979年６月８日出願）の
部分継続出願である。 Ａ−30912因子Ｈの同族体 Ａ−30912因子Ｈの構造の発見にひき続き、Ａ
−30912因子Ｈの低級アルコキシ同族体が有用な
生成物であるということが評価されるようになつ
てきた。これまでは、アルコキシ誘導体は有用な
効果を有することが認識されていなかつたので、
単に構造決定の道具として用いるために製造され
ていただけであつた。Ａ−30912因子Ｈの低級C₂
〜C₆アルコキシ同族体は、Ａ−30912因子Ａから
製造される。 Ａ−30912因子Ａは、下記の微生物のいずれか
を用いて深部通気発酵を行うことによつて製造さ
れる。(1)Aspergillus rugulosus NRRL8113；(2)
Aspergillus nidulans NRRL8112；(3)
Aspergillus nidulans var.echinulatus Ａ−
32204、NRRL3860；(4)Aspergillus rugulosus
NRRL8039（ベルギー特許第834289号に記載）；
または(5)Aspergillus nidulans var.roseus
NRRL11440。 Ａ−30912H核はアミノ部分を含有しているの
で、塩の形で存在してもよい。このような塩は、
中間体として有用であり、精製の目的で用いられ
る。Ａ−30912H核の製薬上許容される塩は、最
終生成物の精製工程が短縮されるため、特に有用
である。製薬上許容しうる塩とは、全体として、
温血動物に対する生成物の毒性が増加しない塩を
意味している。 Ａ−30912H核の酸付加塩は、無機酸または有
機酸と、通常の反応操作により反応させると形成
する。代表的な無機酸または有機酸としては、塩
酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸、
酢酸、安息香酸、スルフアミン酸、酒石酸、クエ
ン酸、マレイン酸、コハク酸、アスコルビン酸、
グリコール酸、乳酸、フマル酸、パルミチン酸、
コール酸、パモ酸、ムチン酸、Ｄ−グルタミン
酸、ｄ−カンフル酸、グルタール酸、フタル酸、
ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル酸、メタン
スルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸、
ピクリン酸、ケイ皮酸、および他の適当な酸を例
示しうる。 Ａ−30912H核の製造 基質の製造 Ａ−30912H核、すなわち式において、R¹お
よびR⁴が共にOHであり、R²がＨであり、R³が
メトキシである化合物は、Ａ−30912因子Ｈまた
はテトラヒドロ−Ａ−30912Hから製造しうる。
Ａ−30912因子Ｈは、これを産生する抗生物質複
合体の主成分ではないので、基質として用いる前
に、一緒に産生される他の因子を除く程度まで精
製しておかねばならない。 式において、R¹およびR⁴が共にOHであり、
R²がＨであり、R³がC₂〜C₆アルコキシであるＡ
−30912H核（Ａ−30912H同族体）を製造するた
めの基質は、Ａ−30912因子Ａまたはテトラヒド
ロ−Ａ−30912Aを適当なアルコールと反応させ
て、対応するC₂〜C₆アルコキシ誘導体とするこ
とにより得られる。Ａ−30912因子Ａは、それを
産生する抗生物質複合体の主成分であるので、こ
の製法は、Ａ−30912因子Ｈおよびテトラヒドロ
−Ａ−30912Hを製造する好ましい方法である。 Ａ−30912因子Ｈ Ａ−30912因子Ｈは、下記の微生物のいずれか
を用いて深部通気発酵を行うことによつて製造さ
れる。(1)Aspergillus rugulosus NRRL8113また
は(2)Aspergillus nidulans var.roseus
NRRL11440。 A.nidulans var.roseus NRRL11440をＡ−
30912因子Ｈの産生に用いる時、因子の複合体が
得られ、これを便宜上、Ａ−42355抗生物質複合
体と称す。Ａ−30912因子Ａは、Ａ−42355抗生物
質複合体に含まれる主な因子であり、その他に、
Ａ−30912因子Ｂ、ＤおよびＨが少量含まれる。 Ａ−30912H同族体 Ａ−30912H同族体は、Ａ−30912因子Ａまたは
テトラヒドロ−Ａ−30912Aを適当な対応するア
ルコールと反応させて、式において、R¹およ
びR⁴が共にOHであり、R²がＨであり、R³がC₂
〜C₆アルコキシである目的とするアルコキシ誘
導体とすることにより製造される。これはＡ−
30912因子Ｈおよびテトラヒドロ−Ａ−30912Hを
製造する好ましい方法である。式において、Ｒ
がステアロイルであり、R³がC₂〜C₆アルコキシ
であるＡ−30912H同族体は、(a)テテトラヒドロ
−Ａ−30912Aを製造し、これを適当なアルコー
ルと反応させてアルコキシ誘導体とするか、(b)Ａ
−30912因子Ａを適当なアルコールと反応させて
アルコキシ誘導体とし、これのリノレオイル側鎖
の二重結合を還元することにより得られる。 テトラヒドロ誘導体 テトラヒドロ−Ａ−30912A、テトラヒドロ−
Ａ−30912H、および式において、R³がC₂〜C₆
アルコキシであり、Ｒがステアロイルである化合
物は、Ａ−30912因子ＡおよびＨ、ならびに式
において、R³がC₂〜C₆アルコキシであり、Ｒが
リノレオイルである化合物を、リノレオイル側鎖
の二重結合が還元されてしまうまで通常の水素化
操作により還元することにより製造される。 本発明に係る核のまた別の態様は、R¹、R³お
よびR⁴がOHであり、R²がカルボキサミドであ
り、これはＳ−31794／Ｆ−１核として知られて
いる。Ｓ−31794／Ｆ−１核は、式においてＲ
がミリストイルであり、R¹、R²、R³およびR⁴が
Ｓ−31794／Ｆ−１核と同意義である環状ペプチ
ド抗生物質を脱アシル化することにより得られ
る。 S31794／Ｆ−１ 本発明のS31794／Ｆ−１核は、環状ペプチド
抗生物質Ｓ−31794／Ｆ−１を脱アシル化するこ
とにより得られる。 抗生物質S31794／Ｆ−１は、西独公開特許第
2628965号および米国特許第4173629号に開示され
ており、Acrophialophora limonisporanov.
spec.Dreyfuss et Mull er NRRL8075により産
生される抗かび作用を有する抗生物質であり、次
のような性質を有する。 融点178−180℃（dec.）（無晶形）または181−
183℃（dec.）（結晶）； ［α］²⁰ _D−24゜（ｃ＝0.5、CH₃OH）または＋37゜
（ｃ＝0.5、メタノール）（結晶）； UV極大吸収（メタノール中）194nｍ（Ｅ１％ １cm
＝807）、225nｍ（肩）（Ｅ１％ １cm＝132）276nｍ
（Ｅ１％ １cm＝12.8）、284nｍ（肩）（Ｅ１％ １cm＝10.5）； ¹³C−NMR（重メタノール、190mg／1.5ml、内
部標準テトラメチルシラン）176.2、175.0、
173.7、172.6、172.0、171.8、171.7、168.6、
157.7、132.5、129.0、115.9、76.6、75.5、74.0、
71.0、70.5、69.7、68.0、62.2、58.3、57.0、56.2、
55.4、52.9、51.2、39.7、38.8、36.6、34.8、32.8、
30.6、26.7、23.5、19.7、14.3、11.1（PPM）； 元素分析値（高度真空下100℃で２時間乾燥）
炭素55.5−56.5％、水素7.5−7.7％、窒素10.5−
10.8％、酸素25.5−26.0％；溶解性 メタノール、
エタノール、ピリジン、ジメチルスルホキシドに
可溶、水、クロロホルム、酢酸エチル、ジエチル
エーテル、ベンゼン、ヘキサンに僅溶。 抗かび作用（特にCandida albicansに対して）
を有する。 抗生物質S31794／Ｆ−１は、式において、
Ｒがミリストイルであり、R¹、R³およびR⁴が
OHであり、R²がカルボキサミドである構造を有
するとされている。 S31794／Ｆ−１核 本発明の新規環状ペプチド核、すなわち抗生物
質S31794／Ｆ−１核は、式においてR¹、R³お
よびR⁴がOHであり、R²がカルボキサミドである
構造を有している。 S31794／Ｆ−１核の実験式はC₃₅H₅₂N₈O₁₆であ
り、分子量は840.87である。 S31794／Ｆ−１核の製造 基質の製造 S31794／Ｆ−１核は抗生物質S31794／Ｆ−１
から製造される。 抗生物質S31794／Ｆ−１はAcrophialophora
limonispora NRRL8095の深部通気培養により
製造される。この微生物はNRRL（Northern
Regional Research Laboratory、U.S.
Department of Agriculture、Agricultural
Research Culture Collection，North Central
Region、Peoria、Illinois 61604）の永久保存菌
株となつており、つけられたNRRL番号で一般
に入手可能である。 これらの核はアミノ部分を各々有しているの
で、塩の形で存在してもよく、塩は中間体として
有用であり、また精製の目的で用いられる。核の
製薬上許容される塩は、最終生成物の精製工程が
短縮されるので特に有用である。製薬上許容され
る塩とは、全体として、温血動物に対する生成物
の毒性が増加しない塩を意味している。 核の酸付加塩は、無機酸または有機酸と、通常
の反応操作により反応させると形成する。代表的
な無機酸または有機酸としては、塩酸、臭化水素
酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、安息香
酸、スルフアミン酸、酒石酸、クエン酸、マレイ
ン酸、コハク酸、アスコルビン酸、グリコール
酸、乳酸、フマル酸、パルミチン酸、コール酸、
パモ酸、ムチン酸、Ｄ−グルタミン酸、ｄ−カン
フル酸、グルタール酸、フタル酸、ラウリン酸、
ステアリン酸、サルチル酸、メタンスルホン酸、
ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸、ピクリン酸、
ケイ皮酸、およびその他の適当な酸を例示しう
る。 シリカゲル／C₁₈を吸着剤として用いた逆相高
速低圧液体クロマトグラフイー（HPLPLC）を
用いて個々の抗生物質の最終的な精製を行うのが
好ましい。この際には、粗製な抗生物質複合体は
溶媒に溶かし、同一溶媒で平衡にしたカラムに吸
着させる。カラムは溶媒で溶出し、集めた分画
は、Candida albicansを用いるバイオオートグ
ラフイーまたはUV（相対的な保持時間に基く）
によつてモニターされる。同一の抗生物質因子を
含む分画同志を合わせる。各因子を純粋な形でと
り出すためには、更にクロマトグラフ操作により
分離する必要があることもある。 Ａ−30912またはＡ−42355の粗抗生物質複合体
は、たとえば全ブロスまたは菌糸をメタノール−
クロロホルムで抽出することにより得られる。こ
れらの抗生物質をクロマトグラフ処理する際に
は、メタノール−水−アセトニトリル（７：２：
１）を溶媒系として用いるのが好ましい。 粗S31794／Ｆ−１抗生物質は、全ブロスを酢
酸エチル−イソプロパノール（４：１）で抽出
し、抽出液をクロマトグラフ処理して得られる。 各因子は薄層クロマトグラフイー（TLC）に
よつて同定される。吸着剤としてはシリカゲルを
用いるのが好ましい。 高炭素含量シリカゲルTLC、ベンゼン−メタ
ノール（７：３）溶媒系、およびCandida
albicansバイオオートグラフイーを用いたＡ−
30912因子Ａ乃至ＧのRf値を表に示す。

【表】 高炭素含量シリカゲルTLCおよびCandida
albicansバイオオートグラフイーを用い、異なる
溶媒系を用いたＡ−30912因子Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄお
よびＨのおよそのRf値を表に示す。

【表】 Ａ−30912因子Ａ、Ｂ、ＤおよびＨは下記条件
を用いたHPLPLCにより同定される。 カラム；ガラス（0.8×15.0cm） 充填剤：ヌクレオシル^R10−C₁₈（Machery Nagel
and Company）、実施例７のスラリー充填法
を用いて充填。 溶媒：メタノール−水−アセトニトリル（７：
２：１） サンプル量：8mc サンプルサイズ：8mcｇ カラム温度：常温 流速：1.8ml／分 圧力：約200psi 検出器：222nｍにおけるUV（ISCO
Model1800Variable Wavelength UV−
Visible Absorbance Monitor） ポンプ：LDC Duplex Minipump 注入：ループ注入 これらの条件下でのＡ−30912因子Ａ、Ｂ、Ｄ、
およびＨのおよその保持時間は、表に要約す
る。

【表】 酵素の製造 １ 産生微生物 本発明における抗生物質の脱アシル化に有用
な酵素は、Actinoplanaceae科のある微生物、
好ましくはActinoplanes utahensis
NRRL12052から産生される。 酵素はペニシリン類の脱アシル化に用いられ
た酵素（Walter J.Kleinschmidt、Walter E.
Wright、Frederick W.Kavanaghおよび
William M.Starkによつて米国特許第3150059
号に記載）と同一であつてもよい。A.
utahensis NRRL12052を培養させてこの酵素
を産生させる好ましい方法は、製造例１に記載
してあるが、他の方法を用いてもよいことは当
業者のよく知るところである。 ActinoplanaceaeはActinomycetales目の比
較的最近の科であり、まず初めにDr.John N.
Couchによつて記載され、1955年にこの科が確
立された［J.Elisha Mitchell Sci.Soc.71，148
〜155（1955）］。この科および多くの個々の属の
性質がBergey′s Manual of Determinative
Bacteriology、8th ed.，R.E.Buchanan and
N.E.Gibbons，Eds.，The Williams＆Wilkins
Co.，Baltimore，Md.，1974，706〜723頁に
記載されており、これまでに以下の10属が区別
されている。 ．Actinoplanes（標準的属であり、最も普
遍的な属）； ．Spirillospora；．
Streptosporangium； ．Amorphosporangium；．
Ampullariella； ．Pilimelia；．Planomonospora；．
Planobispora；．Dactylosporangius；およ
び．Kitasatoa。 これまでに単離され、その性質が示されてい
る種は次のとおりである。Actinoplanes
phillippinensis，Actinoplanes armeniacus，
Actinoplanes utahensis，およびActinoplanes
missouriensis；Spirillospora albida；
Streptosporangium roseum，
Streptosporangium vulgare，
Streptosporangium roseum var.
hollandensis，Streptosporangium album，
Streptosporangium villdialbum，
Amorphosporangium auranticolor，
Ampullariella regularis，Ampullariella
cam panulata，Ampullariella lobata，
Ampullariella digitata，Pilimelia terevasa，
Pilimelia anulata，Planomonospora
parontospora，Planospora venezuelensis，
Planobispora longispora，Planobispora
rosea，Dactylosporangium aurantiacum，お
よびDactylosporangium theilandense。 Actinoplanes属は、本発明に有用な酵素の
好ましい提供源である。Actinoplanes属のな
かでもActinoplanes utahensis種は酵素の特に
好ましい提供源である。 代表的菌株は、下記の番号によつてNRRL
（住所は上述）から入手可能である。 Actinoplanes utahensis NRRL12052 Actinoplanes missouriensis NRRL12053 Actinoplanes sp. NRRL8122 Actinoplanes sp. NRRL12065 Streptosporangium roseum var.hollandensis
NRRL12064 A.utahensis NRRL12052は、ATCC
（American Type Culture Collection；12301
Parklawn Drive，Rockville，Md.20852）に
A.utahensis ATCC14539として寄託されてい
る親菌株から誘導された。A.utahensis
ATCC14539株を酵素源として用いてもよい。 A.missouriensis NRRL12053はATCCにA.
missouriensis ATCC14538として寄託されて
おり、別の酵素源となる菌株から誘導される。 Actinoplanaceae科の任意に選んだ菌株につ
いて、本発明の脱アセチル化を実施する際の活
性を検定しようとするときは、次のようにして
行うことができる。適当な生育培地に微生物を
接種し、約28℃で２−３日間ロータリー式振盪
機を用いて培養する。これに抗生物質基質を加
える。発酵培地のPHを約6.5に保ち、Candida
albicansを用いてモニターする。このことは操
作Ｅに記載されており、その微生物が必要な脱
アシル化活性を有していることは、抗生物質活
性が消失することによつて示される。しかしな
がら、これは、(1)核そのものの存在をHPLC分
析によつて検出するか、(2)適当な側鎖で再アシ
ル化することにより活性の復活を確認するかの
いずれかの方法により証明されなければならな
い。 ２ 酵素製造の条件 酵素の製造は、Actinoplanaceaeの生育に適
した条件下、すなわち25〜30℃、PH5.0〜8.0で
通気撹拌下に行う。培養培地は次のようなもの
を含んでおく必要がある。(a)シヨ糖、グルコー
ス、グリセロールなどの同化できる炭素源；(b)
ペプトン、尿素、硫酸アンモニウムなどの窒素
源；(c)可溶性リン酸塩などのリン酸塩源；およ
び(d)微生物の生長を促進させるのに一般に有効
とされている無機塩。発育環形成後、約40〜60
時間に酵素の有効量が一般に得られるが、その
後もしばらくの間培養を続ける。産生される酵
素の量は、微生物の種によつて、また増殖条件
によつて変化する。 この分野では明らかなように、
Actinoplanesutahensis NRRL 12052のよう
な、酵素を産生する菌は変異させることができ
る。たとえば、これらの菌株の人為変異および
突然変異は、公知の各種の変異誘発要因、たと
えば紫外線、Ｘ線、高頻度波、放射線、および
化学物質と処理することにより得られる。
Actinoplanaceaeから得られ、酵素を産生する
自然変異株、人為変異株、および突然変異株は
すべて本発明において用いられる。 Ｃ 脱アシル化条件 Actinoplanaceaeの培地を少なくとも48時間
培養した後に基質を加えるのが好ましい。培地
変換における基質の濃度は広く変えることがで
きる。しかし、酵素を最大限に使用し、24時間
以内に脱アシル化を実質的に完了するために
は、基質の濃度は一般に約0.5〜1.0mg／mlとす
る。低濃度とすることもできるが、酵素は最大
限に使用されない。また、高濃度にすることも
できるが、発酵時間をのばさなければ、基質は
完全に脱アシル化されない。 基質である抗生物質を、対応する本発明に係
る核に変換するには、発酵培地はPH約6.0〜7.0
に保つのが最もよい。PH６以下では、脱アシル
化がゆつくり進行し、PHが６をこえると、基質
も、形成される核も、だんだん安定性を失なつ
てくる。安定性を最大にするためには、PH6.0
が好ましいが、PH6.0では脱アシル化がそれほ
ど速く進行しない（約30〜36時間）。大きな損
失なしに、もつと速く脱アシル化を行なうため
には（約24時間）、PH約6.5が好ましい。撹拌機
を付した発酵槽においては、PH値は、自動PH感
知型PH制御器によつて制御されうる。フラスコ
内での発酵のような時には、基質の添加前に、
0.1モルリン酸緩衝液を添加することによつて
PH値は制御される。 基質を添加した後、約24時間、培地の培養を
続ける。基質の精製は、脱アシル化の速度に影
響を及ぼす。たとえば、50％以上の純度を有す
る基質は、約0.8〜1.2mgの速度で24時間で脱ア
シル化が進行するが、それより低い純度の基質
を用いると、脱アシル化はもつとゆつくり進行
する。 基質を複数回加えて行なつてもよい。たとえ
ば小さなタンク中、抗生物質0.3〜0.5mg／mlを
12時間ごとに少なくとも５回加えたり、大きな
タンク中、0.7mg／mlを２回加えたりしてもよ
い。 脱アシル化反応は、広範な温度範囲で、たと
えば約20〜45℃で達成することができるが、好
ましくは約25〜30℃で、特に好ましくは約26℃
で行なう。これは、脱アシル化および基質なら
びに核の安定性に最適な条件である。 Ｄ 基質 基質としては、精製された抗生物質を用いる
のが好ましい。基質となる抗生物質は抗かび作
用を有するが、抗細菌作用は示さない。従つ
て、基質となる物質は、脱アシル化発酵培地中
で生育しうる細菌細胞またはその胞子を含んで
いることがあり得る。このような汚染菌は、脱
アシル化反応あるいは原料の抗生物質または生
成物の核の安定性に影響を及ぼしうる。従つ
て、基質は減菌しておくことが重要である。オ
ートクレーブにより、基質となる抗生物質のほ
とんどが破壊するので、気圧を一定に保つた中
でエチレン・オキシド処理して減菌するのが好
ましい。 Ｅ 脱アシル化のモニター 原料物質は、抗かび作用を有する抗生物質で
あり、特にCandida albicansに対して活性で
ある。このため、C.albicansを用いて、存在す
る基質の量を決定するのが好ましい。生成する
核は水に可溶であるが、生物学的に不活性であ
る。従つて、生物学的活性の減少は、迅速な、
脱アシル化の推定試験となる。基質がわずかに
ブロスにとけるので、ブロスのサンプルおよび
発酵固型物のアルコール性抽出液を共に検定す
る。 Ｆ 休止細胞の使用 脱アシル化の別法は、Actinoplanaceae細胞
を培養培地から取り出し、これを緩衝液に再度
懸濁し、操作Ｃに記載の脱アシル化を行なうこ
とにより達成させる。この操作を用いる時は、
酵素的に活性な菌糸を再び用いることができ
る。たとえば、A.utahensis NRRL12052菌糸
は、冷蔵庫中（４〜８℃）または凍つた状態
（−20℃）で１ケ月もしくはそれ以上貯蔵した
後でも脱アシル化活性を保持している。好まし
い緩衝液は0.1モルリン酸緩衝液である。 Ｇ 運動抑制酵素 脱アシル化法の別法は、当業者には公知の操
作により、酵素を運動抑制することである
（Biomedical Applications of Ｉ
mmobilized Enzymes and Proteins，
Thomas Ming Swi Chang，Ed.，Plenum
Press，New York，1977；１巻参照）。運動
抑制酵素はカラム内（他の適当な形の反応物）
内で用いて脱アシル化を行なう。 更に、微生物自体を運動抑制し、脱アシル化
反応の触媒に用いることができる。 核の有用性 核およびその酸付加塩は、合成抗かび剤の製
造における有用な中間体である。これらの核か
ら製造された有用な抗かび剤は、現在出願中の
Bernard J.AbbottおよびDavid S.Fukudaに
よる出願ならびに現在出願中のManuel
Debonoによる２件の出願に記載されており、
これらはいずれも“環状ペプチド核の誘導体”
と称されており、同一の日に出願されている。 前述の定義において“アルキル”なる用語は
一価飽和の直鎖もしくは分岐の炭化水素基を意
味する。“アルケニル”なる用語は一価不飽和
の直鎖もしくは分岐の炭化水素基を意味し、こ
れに含まれる二重結合の数は３個までとする。
この不飽和炭化水素鎖は、cisまたはtransいず
れの配置をとつていてもよい。“C₆−C₂₄”なる
表示は、直鎖もしくは分岐の炭化水素が６乃至
24個の炭素原子を有することを意味する。 式の化合物は、適当な核のオルニチン上の
αアミノ基を、アミド結合を形成するための常
法によつて、適当なアシル側鎖でアシル化する
ことにより製造される。一般には、このアシル
化は、核を所望のアシル側鎖に対応する酸の活
性化誘導体と反応させることによつて行なわれ
る。 ここでいう“活性化誘導体”とは、アシル化
剤のアシル基を、第一級アミノ基とカツプリン
グさせてアシル側鎖と核とを結びつけるアミド
結合を形成し得るように活性化した誘導体をい
う。適当な活性化誘導体、その製造法およびそ
れを第一級アミンに対してアシル化剤として使
用する方法は当業者が知つている。好ましい活
性誘導体としては、(a)酸ハライド（例えば酸ク
ロリド）、(b)酸無水物（例えばアルコキシギ酸
無水物、アリールオキシギ酸無水物）、(c)活性
化エステル（例えば２，４，５−トリクロロフ
エニルエステル）がある。カルボキシ官能基を
活性化する他の方法には、カルボン酸をカルボ
ジイミド（例えば、Ｎ，N′−ジシクロヘキシ
ルカルボジイミド、Ｎ，N′M−ジイソプロピ
ルカルボジイミド）と反応させる方法がある。
この場合、生成する反応性中間体は、不安定で
あるため単離せず、そのまま第一級アミンと反
応させる。 アミノ酸が、そのアミノ基以外に、アシル化
されうる官能基を含んでいるなら、Ｎ−アルカ
ノイル基またはＮ−アルケノイル基を導入する
ために用いる試薬をアミノ酸と反応させる前
に、あらかじめ保護しておくことは当業者には
周知のことである。保護基としては、ペプチド
合成においては当業者には周知の、側鎖の官能
基の保護基を用いるのが適当である。このよう
な基は公知であり、保護基の選択およびその使
用方法は、当業者にはよく知られている（たと
えば、“Protective Groups In Organic
Chemistry”，M.McOmie，Editor，Plenum
Press，N.Y.，1973参照）。 式の化合物は病原性のかび類（fungi）の
生育を抑制し、従つて、環境表面上のかび類の
生育を制御する（防腐剤として）のに有用であ
り、またかび類によつて起る感染症の治療に有
用である。化合物は、Candida albicansに
対して特に活性であり、従つて、カンジダ症
（candidosis）の治療に特に有用である。化合
物の活性は、in vitroの寒天平板デイスク拡散
法または寒天希釈法のような標準の微生物試験
法、あるいはC.albicansを感染させたマウスを
用いたin vivoの試験によつて証明される。化
合物は、Trichophyton mentagrophytes（皮膚
糸状菌）、Saccharomyces pastorianusおよび
Neurospora crassaに対しても活性を示す。 ある種の化合物（たとえば実施例19、表に
示されているもの）は、マウスに経口投与した
場合に、有意な血中濃度を示す。 R⁵がｐ−（ｎ−オクチルオキシ）ベンゾイル
である式の化合物を、１日当り100mg／Kgで
５日間、犬に静脈内投与しても、外見上毒性の
徴候は認められなかつたが、SGPTレベルの上
昇が観察された。 全身的に使用するとき、式の化合物の用量
は、使用する特定の化合物、感染症の種類と程
度および被治療者の身体状況によつて異る。治
療は低用量で開始し、所望の抗かび効果が得ら
れるまで用量を増していくのが望ましい。本化
合物は、滅菌水溶液または懸濁液の剤型で静脈
内もしくは筋肉内に注射投与し得る。この製剤
には、必要あれば既知の制約上許容される保存
剤、緩衝剤、可溶化剤もしくは懸濁剤などを加
えてもよい。また、この他の添加物、例えば食
塩やグルコースを加えて、溶液を等張化しても
よい。このような添加物の比率および種類は当
業者のよく知るところである。 式のある種の化合物は、経口投与により有
意な血中濃度を与えるので（実施例19、表参
照）、経口的に全身投与することができる。経
口的に使用するには、これらの化合物は、製薬
上許容される担体もしくは賦形剤と共にカプセ
ル剤、錠剤あるいは粉剤に製剤して投与され
る。この担体や賦形剤の種類および比率は当業
者が容易に定め得る。 膣カンジダ症の治療には、式の化合物を、
膣内使用に適した製薬上許容される賦形剤と組
合せて投与することができる。膣投与用の製剤
化については当業者のよく知るところである。 本発明の操作を更に詳細に示すために、以下に
実施例を示す。 製造例 １ Actinoplanes utahensisの発酵 Actinoplanes utahensis NRRL12052の保存菌
は、寒天斜面上で調製し、保存する。この斜面用
培地は、下記のものから選択する。 培 地 Ａ 成 分 使用量 プレクツク・オートミル 60.0ｇ イースト 2.5ｇ K₂HPO₄ 1.0ｇ ツアペツク・ミネラル・ストツク＊ 5.0ml 寒 天 25.0ｇ 脱イオン水 適量（全量１） 滅菌前のPH約5.9；水酸化ナトリウム添加によ
る調整後のPH7.2；滅菌後のPH約6.7。 ＊ツアペツク・ミネラル・ストツクの組成：成 分 使用量 FeSO₄・7H₂O（濃塩酸２mlに溶解したもの） ２ｇ KCl 100ｇ MgSO₄・7H₂O 100ｇ 脱イオン水 適量（全量１） 培 地 Ｂ 成 分 使用量 ポテト・デキストリン 5.0ｇ イースト・エキス 0.5ｇ カゼイン酵素水解物＊ 3.0ｇ ビーフ・エキス 0.5ｇ グルコース 12.5ｇ コーン・スターチ 5.0ｇ ミート・ペプトン 5.0ｇ 糖密（blackstrap） 2.5ｇ MgSO₄・7H₂O 0.25ｇ CaCO₃ 1.0ｇ ツアペツク・ミネラル・ストツク 2.0ml 寒 天 20.0ｇ 脱イオン水 適量（全量１） ＊Ｎ−Ｚ−アミンＡ、Humko Sheffield
Chemical，Lyndhurst，N.J. アクチノプラネス・ユタエンシスNRRL12052
を斜面に接種し、30℃で約８〜10日間培養する。
この斜面培養菌の凡そ半分を用いて下記組成の増
殖培地50mlに接種する。成 分 使用量 プレクツク・オートミル 20.0ｇ シユクロース 20.0ｇ イースト 2.5ｇ デイステイラーズ・ドライド・グレイン＊ 5.0ｇ K₂HPO₄ 1.0ｇ ツアペツク・ミネラル・ストツク 5.0ml 脱イオン水 適量（全量１） 水酸化ナトリウムによるPHの調整、7.4；滅菌後
のPH、約6.8。 ＊National Disfillers Products Co.，99Park
Ave.，New York，N.Y. 接種後の培地を250mlの広口エルレンマイヤー
フラスコ中30℃において約72時間振盪する（直径
２インチの弧状、250rpm）。 この培養済培地は、第２次増殖培地への接種に
直接用いてもよい。また、好ましくは、後の使用
のために、これを窒素気流中に保存して貯蔵する
こともできる。この培養菌を貯蔵するためには、
下記のようにして小型バイアル中に分封してお
く。培養培地２mlをグリセリン−ラクトース溶液
［W.A.Dailey and C.E.Higgens，“Preservation
and Storage of Microorganisms in the Gas
Phase of Liquid Nitrogen，Cryobiol10，364〜
367（1973）for detailsを参照］２mlと共に各バイ
アルに入れる。得られた懸濁液は窒素雰囲気中に
保存する。 こうして保存した菌体懸濁液１mlを用いて第１
次増殖培地（組成は前記のとおり）50mlに接種す
る。培養は前記と同様に行う。 大量の接種用培養菌を得るためには、第１次培
養菌10mlを、同一の組成を有する第２次増殖培地
400mlに接種する。第２次培養は、２の広口エ
ルレンマイヤーフラスコ中30℃で約48時間振盪
（直径２インチの弧上、250rpm）して行う。 こうして得た第２次培養物（800ml）を用いて、
下記のいずれかの滅菌製造用培地100に接種す
る。 培 地 成 分 使用量（ｇ／） 落花生物 10.0 可溶性ミート・ペプトン 5.0 シユクロース 20.0 KH₂PO₄ 0.5 K₂HPO₄ 1.2 MgSO₄・7H₂O 0.25 水道水 適量（全量１） 121℃、16〜18psiで45分間滅菌した後のPHは約
6.9。 培 地 成 分 使用量（ｇ／） シユクロース 30.0 ペプトン 5.0 K₂HPO₄ 1.0 KCl 0.5 MgSO₄・7H₂O 0.5 FeSO₄・7H₂O 0.002 脱イオン水 適量（全量１） 塩酸でPH7.0に調整；滅菌後のPH約7.0。 培 地 成 分 使用量（ｇ／） グルコース 20.0 NH₄SO₄ 3.0 Na₂SO₄ 2.0 ZnCl₂ 0.019 MgCl₂・6H₂O 0.304 FeCl₃・6H₂O 0.062 MnCl₂・4H₂O 0.035 CuCl₂・2H₂O 0.005 CaCO₃ 6.0 KH₂PO₄＊ 0.67 水道水 適量（全量１） ＊別途に滅菌し、無菌的に添加。最終PH約6.6。 接種後の培地は、165の発酵タンクを用いて
約30℃で42時間発酵させる。培地は、通常の撹拌
機により約200rpmで撹拌し、常圧で溶解酸素量
が空気飽和の30％を超えるように滅菌空気で通気
する。 製造例 ２ Ａ−42355抗生物質複合体の製造 Ａ 振盪フラスコ発酵 Aspergillus nidulans var.roseus
NRRL11440は下記組成の寒天斜面上で培養
し、保存する。成 分 使用量 グルコース ５ｇ イースト・エキス ２ｇ CaCO₃ ３ｇ 野菜ジユース＊ 200ml 寒天＊＊ 20ｇ 脱イオン水 適量（全量１） （初期PH6.1） ＊Ｖ−8Juice，Campbell Soup Co.，Camden，
N.J. ＊＊Meer Corp. Aspergillus nidulans var.roseus
NRRL11440を上記斜面培地に接種し、25℃で
約７日間培養する。成熟した斜面を水で覆い、
滅菌ループで胞子をこすりとる。得られた懸濁
液をさらに滅菌脱イオン水10mlに懸濁し、その
１mlを用いて250mlフラスコ中の増殖用培地55
mlに接種する。この増殖用培地の組成は次のと
おりである。成 分 使用量 シユクロース 25ｇ 糖密（blackstrap） 36ｇ コーン・ステイープ・リカー ６ｇ 麦芽エキス 10ｇ K₂HPO₄ ２ｇ カゼイン酵素水解物＊ 10ｇ 水道水 1100ml （初期PH6.5〜6.7） ＊Ｎ−Ｚ−Case，Humko Sheffield Chemical，
Lyndhurst，N.J. 接種後、250rpmで振盪しながら（ロータリ
ー型振盪機、25℃で48時間培養する。途中、24
時間経過時に培地をブレンダー（Waring
type）により低速で１分間ホモゲナイズし、次
いで残りの24時間培養を続ける。あるいは、上
記培地を48時間培養した後に低速で15秒間ホモ
ゲナイズしてもよい。 この培養物は、振盪培養用培地への接種に用
いてもよいし、第２次増殖培養用培地への接種
用としてもよい。あるいは、後で使用するため
に窒素雰囲気中に保存してもよい。このために
は、次のようにして培養物を多数の小型バイア
ル中に保存する。培養物を下記組成を有する等
容積の懸濁溶液と混合する。成 分 使用量 グリセロール 20ml ラクトース 10ｇ 脱イオ水 適量（全量100ml） この懸濁物をねじ蓋付きの小型滅菌バイアル
に４mlずつ入れ、窒素雰囲気中で保存する。 こうして得た保存懸濁液は、寒天斜面あるい
は液体培地への接種に用いられる。斜面の場合
には、明るい場所において、25℃で７日間培養
する。 Ｂ タンク培養 大量の接種用培養物を得るために、第１次培
養物10mlを用いて、同一組成の第２次増殖用培
地400mlに接種し、２の広口エルレンマイヤ
ーフラスコ中25℃で24時間振盪培養する（直径
２インチの弧上を250rpmで振盪）。 こうして得た第２次培養物（800ml）を用い
て、下記のいずれかの滅菌製造用培地100に
接種する。 培 地 成 分 使用量 ZnSO₄・7H₂O 0.00455ｇ／ 可溶性肉ペプトン＊ 30.5ｇ／ 大豆粉 15.5ｇ／ タピオカ・デキストリン＊＊ 2.0ｇ／ 糖密（blackstrap） 10.5ｇ／ カゼイン酵素水解物＊＊＊ 8.5ｇ／ Na₂HPO₄ 4.5ｇ／ MgSO₄・7H₂O 5.5ｇ／ FeSO₄・7H₂O 0.1ｇ／ 綿実油 40.0ml （消泡剤）＊＊＊＊ 1.0ml 水道水 1000.0ml （初期PH6.8〜7.0） ＊O.M.Peptone，Amber Laboratories，
Juneaw，Wisc. ＊＊Stadex11，A.E.Staley Co.，Decatur，I11. ＊＊＊Ｎ−Ｚ−Amine A. Humko Sheffield
Chemcal，Lyndhurst，N.J. ＊＊＊＊P2000，Dow Corning，Midland，
Michigan 培 地 成 分 使用量 グルコース 2.5％ 澱 粉 1.0％ 可溶性肉ペプトン＊ 1.0％ 糖密（blackstrap） 1.0％ CaCO₃ 0.2％ MgSO₄・7H₂O 0.05％ カゼイン酵素水解物＊＊ 0.4％ （消泡剤）＊＊＊ 0.02％ 水道水 所要量 ＊O.M.ペプトン ＊＊Ｎ−Ｚ−アミンＡ ＊＊＊消泡剤“Ａ”、Dow Corning 接種済培地は、165の発酵タンク中、25℃
で約７日間発酵させる。培地には、溶解酸素量
が空気飽和の30％を越えるように滅菌空気で通
気する。 Ｃ 第３次増殖培地 100を超える大規模発酵を行う時は、常に
第３次培養物を用いて大型タンクへ接種するの
が望ましい。第３次増殖用培地の好ましい組成
は次のとおりである。成 分 使用量 シユクロース 25ｇ 糖密（blackstrap） 25ｇ コーン・ステイーブ・リカー ６ｇ カゼイン酵素水解物＊ 10ｇ 麦芽エキス 10ｇ K₂HPO₄ ２ｇ 水道水 1000ml （初期PH6.1） ＊Ｎ−Ｚ−Case 製造例 ３ Ａ−42355抗生物質複合体の分離 製造用培地を用いて製造例２に記載の方法
により発酵を行い、得られた全培養物（4127
）にメタノール（4280）を加えて１時間よ
く撹拌し、濾過助剤（Hyflo Super−cel，ケ
イソウ土、Johns−Manville Products Corp.）
で濾過する。瀘液に5N塩酸を加えてPH4.0と
し、等容積のクロロホルムで２回抽出する。ク
ロロホルム抽出液を合併し、減圧化に約20ま
で濃縮する。この濃縮液を約200のジエチル
エーテルに加えてＡ−42355複合体を沈澱させ
る。これを濾取し、灰白色粉末としてＡ−
42355複合体2775ｇを得る。 製造例 ４ Ａ−30912因子Ａの単離 製造例３の記載によつて製造したＡ−42355抗
生物質複合体１ｇをメタノール−水−アセトニト
リル（７：２：１）７mlに溶かす。この溶液を濾
過した後、バルブ操作によりループを通じてガラ
スカラム（3.7cm内径×35cm、Michel−Miller高
速低圧液体クロマトグラフイー（HPLPLC）カ
ラム、Ace Glass Incorporated，Vineland，
NJ08360）に導入する。カラムにはLP−１／C₁₈
シリカゲル逆相樹脂（10〜20ミクロン）（製造例
10による）を、メタノール−水−アセトニトリル
（７：２：１）を用いて製造例26に記載のスラリ
ー充填法に従つて充填する。バルブレス・ピスト
ン型F.M.I.ポンプ（最大流速19.5ml／分）を用
い、約100psiの圧力下、流速９ml／分で溶媒を移
動させ、毎分毎に分画を集める。抗生物質の単離
は、光学ユニツト（ISCO Type ６）を付した
UVモニター（ISCO Model UA−５，
Instrument Specialist Co.，4700 Superior
Ave.，Lincoln，Nebraska 68504）を用い、
280nｍでモニターする。 画分（およそ112〜140）を合わせ、水20mlを加
え、ついで1N塩酸でPH4.0に調整した後、等量の
クロロホルムで２回抽出する。クロロホルム層を
合併し、減圧濃縮すると、油状物を得る。これを
ｔ−ブタノールに溶かし、凍結乾燥するとＡ−
42355因子Ａ（Ａ−30912因子Ａ；Ａ−22082）524
mgを得る。 製造例 ５ Ａ−30912因子Ｂの単離 AM−42355複合体は製造例３に記載のとおり
分離される。ただし、濃縮したクロロホルム抽出
液（285）は、シリカゲルのカラム（Grace
silicagel 150、grade 62）上に２／分の流速
でクロマトグラフする。カラムをクロロホルム
（200）で洗い、アセトニトリル（500）、つい
でアセトニトリル−水（98：２）で１／分の流
速で溶出する。画分約200を集め生物活性を
個々に分析する。生物検定はCandida albicans
を接種した寒天平板上ペーパー・デイスク検定法
を用いる。画分77から103（1365）を合わせ、減
圧濃縮する。濃縮された溶液（4.5）を濾過す
ると、因子Ｂを多く含むＡ−42355複合体（119
ｇ）を得る。瀘液を蒸発乾固し、得られた残渣を
適量のメタノールに再び溶解する。このメタノー
ル溶液を10倍容のジエチルエーテルに加えると因
子Ｂを含む抗生物質複合体が沈澱する。これを濾
取し、乾燥すると因子Ｂを多く含むＡ−42355複
合体24ｇを灰白色粉末として得る。 このようにして得た因子Ｂを多く含むＡ−
42355複合体をメタノール−水−アセトニトリル
（７：２：１）８mlに溶かす。この溶液を濾過し
た後、バルブ操作によりループを通じてガラスカ
ラム（3.7cm内径×35cm、Michel−Millerカラム）
に導入する。カラムにはLP−１／C₁₈シリカゲル
逆相樹脂（10〜20ミクロン）（製造例10による）
をメタノール−水−アセトニトリル（７：２：
１）を用いて、バルブ操作によるループを通じて
充填する。製造例11に記載のスラリー充填法を用
いる。バルブレス・ピストン型のF.M.I.ポンプを
用い、約100psiの圧力下、流速10ml／分で溶媒を
移動させ、毎分毎に分画を集める。抗生物質の溶
離は製造例16と同様に、UVモニターを用い、
280nｍでモニターする。画分102〜110合わせ、
減圧濃縮すると、油状物を得る。これを小量のｔ
−ブタノールに溶かし、凍結乾燥するとＡ−
30912因子Ｂ 22mgを得る。 製造例 ６ Ａ−30912因子Ｄの単離 製造例３に記載の方法により得られた２回の発
酵からの濃縮クロロホルム抽出液（3800および
4007）を合わせ、シリカゲルのカラム（Grace
grade62）上にクロマトグラフする。カラムをク
ロロホルムで洗い、アセトニトリルおよびアセト
ニトリル−水（98：２）で溶出する。約200の
留分を集め、Candida albicansを接種した寒天
上でのペーパー・デイスク法により生物活性を試
験する。活性を有する留分（850）を合わせ、
減圧濃縮する。濃縮した溶液（0.7）を10容量
倍のジエチルエーテルに加えると、因子Ｄを多く
含むＡ−42355複合体が沈澱する。これを濾取し、
乾燥すると因子Ｄを多く含むＡ−42355複合体を
灰色粉末として得る。 こうして得た因子Ｄを多く含むＡ−42355複合
体（1.0ｇ）をメタノール−水−アセトニトリル
（７：２：１）５mlに溶かす。この溶液を濾過し
た後、バルブ操作によりループを通じてシリカゲ
ルカラム（3.7cm内径×30cm、Michel−Millerカ
ラム）に導入する。カラムにはLP−１／C₁₈シリ
カゲル逆相樹脂（10〜20ミクロン）（製造例10に
よる）を充填する。充填は製造例11に記載のスラ
リー充填法によりメタノール−水−アセトニトリ
ル（７：２：１）を用いて行う。バルブレス・ピ
ストン型F.M.I.ポンプを用い、約45psiの圧力下、
流速８ml／分で溶媒を移動させる。２分毎に画分
を集める。抗生物質の溶離は、光学ユニツト
（ISCO Type6）を備えたUVモニター（ISCO
Model UA−５）を用い、280nｍでモニターす
る。画分96〜108を合わせ、減圧濃縮すると、油
状物を得る。これを小量のｔ−ブタノールに溶か
し、凍結乾燥するとＡ−30912因子Ｄ 89mgを得
る。 製造例 ７ Ａ−30912因子Ｈの単離 製造例３に記載の方法で得られたＡ−42355抗
生物質複合体（5.0ｇ）をメタノール−水−アセ
トニトリル（７：２：１）35mlに溶かし、得られ
る溶液を濾過した後、バルブ操作によりループを
通じてガラスカラム（3.7cm内径×42cm、Michel
−Miller カラム）に導入する。カラムにはLP
−１／C₁₈シリカゲル逆相樹脂（10〜20ミクロン）
を、メタノール−水−アセトニトリル（７：２：
１）を用いて製造例11の記載に従つて充填する。
バルブレス・ピストン型F.M.I.ポンプを用い、約
120psiの圧力下、流速13ml／分で溶媒を移動さ
せ、２分毎に画分を集める。抗生物質の溶離は、
280nｍのUVでモニターする。画分112〜132を、
別途に行つた精製の画分106〜117と合わせ、減圧
濃縮すると油状物を得る。これを小量のｔ−ブタ
ノールに溶かし、凍結乾燥すると粗製Ａ−30912
因子Ｈ 173mgを得る。 粗製Ａ−30912因子Ｈ（150mg）をメタノール−
水−アセトニトリル（７：２：１）８mlに溶か
し、得られた溶液を濾過した後、上述と同様にし
てガラスカラム（2.0cm内径×32cm）に導入する。
約80psiの圧力下、８ml／分の流速で溶媒を移動
させ、３分毎に画分を集める。抗生物質の溶離は
280nｍでモニターする。画分17と18を合わせ、
減圧濃縮すると油状物を得る。これを小量のｔ−
ブタノールに溶かし、凍結乾燥するとＡ−30912
因子H29mgを得る。 製造例 ８ 抗生物質S31794／Ｆ−１の製法 Acrophialosphore Limonispora NRRL8095
を振盪撹拌下および／または通気下に深部培養す
ると抗生物質S31794／Ｆ−１が得られる。培養
は振盪撹拌下および／または通気下に、PH３〜８
で、好ましくはPH５〜７で、15〜30℃で、好まし
くは18〜27℃で48〜360時間、好ましくは120〜
288時間行なう。 培養ブロス（90）を酢酸エチル−イソプロパ
ノール（４：１、90）で処理し、室温で30分間
ホモゲナイズする。有機層を分離し、約40℃で減
圧濃縮する。得られた残渣を、10倍量のシリカゲ
ル上、クロロホルム−メタノール（95：５から
60：40）を用いてクロマトグラフする。抗かび活
性を有する画分を合わせ、100倍量のセフアデツ
クスLH−20上、メタノールを用いてクロマトグ
ラフする。セフアデツクスカラムから溶出する画
分のうち、抗かび活性を有する画分を合わせ100
倍量のシリカゲル（0.05〜0.2mm）上、クロロホ
ルム−メタノール−水（71：25：４）の溶媒系を
用いてクロマトグラフする。抗かび活性を有する
溶出画分を合わせ、減圧濃縮すると、粗製な抗生
物質S31794／Ｆ−１を得る。これを小量のメタ
ノールに溶かし、ジエチルエーテルを加えて沈澱
させ、沈澱を高度真空下、25〜30℃で乾燥する
と、融点178〜180℃のS31794／Ｆ−１を白色無
晶粉末として得る。これを10倍量の酢酸エチル−
メタノール−水（80：12：８）から結晶化し、高
度真空下、20℃で乾燥すると、融点181〜183℃
（分解）のS31794／Ｆ−１の結晶を得る。 製造例 ９ 抗生物質S31794／Ｆ−１の単離 製造例８の記載によつて製造した粗製な抗生物
質S31794／Ｆ−１をセフアデツクスのカラム上
にクロマトグラフした後、バルブ操作によりルー
プを通じてシリカゲルカラム（Michel−Miller
Colum）に導入する。カラムには、製造例10に記
載の方法で得られたLP−１／C₁₈シリカゲル逆相
樹脂（10〜20ミクロン）を、バルブ操作によるル
ープを通じて、クロロホルム−メタノール−水
（71：25：４）を用いて充填する。充填には、製
造例11に記載のスラリー充填法を用いる。バルブ
レス・ピストン型F.M.I.ポンプを用いて溶媒を移
動させる。抗生物質の溶離は280nｍにおけるUV
モニターを用いてモニターする。抗かび活性を有
する画分を集め、減圧濃縮すると、抗生物質
S31794／Ｆ−１を得る。 製造例 10 シリカゲル／C₁₈逆相樹脂の製法 工程１：加水分解 LP−１シリカゲル（1000ｇ、Quantum
Corp.，now Whatman）を５の丸底フラスコ
中で濃硫酸（1650ml）と濃硝酸（1650ml）の混液
に加え、充分懸濁するように振盪する。ウオータ
ー・ジヤケツト冷却器をフラスコに付けて蒸気浴
上でこの混液を一夜（16時間）加熱する。 この混液を氷浴中で冷却し、熔融ガラス濾過器
を用いて注意して濾過する。このシリカゲルを脱
イオン水でPHが中性になるまで洗浄後、減圧下に
100℃で２日間乾燥する。 工程２：第１次シリル化 工程１で得た乾燥シリカゲルを丸底フラスコに
移し、トルエン（3.5）に懸濁する。これを蒸
気浴上で２時間加熱して共沸により若干の残留水
を除く。オクタデシルトリクロロシラン（321ml、
Aldrich Chemical Company）を加え、反応混
液を約60℃でゆつくり撹拌しながら一夜（16時
間）還流する。この間、撹拌器がフラスコの底付
近に届かないように注意する。これはシリカゲル
粒子が破砕されるのを防ぐためである。 この混液を冷却し、シラン化シリカゲルを濾取
し、トルエン（３）とアセトン（３）で洗浄
し、一夜（16〜20時間）風乾する。これを５の
フラスコ中アセトニトリル−水（１：１）3.5
に懸濁し、室温で２時間注意しながら撹拌し、濾
過し、アセトン（３）で洗浄した後、一夜風乾
する。 工程３：第２次シリル化 オクタデシルトリクロロシラン（200ml）を用
いて第１次シリル化の操作を繰り返す。注意深く
撹拌しながら、懸濁液を60℃で２時間還流する。
最終製品を濾取し、トルエン（３）およびメタ
ノール（６）で洗い、減圧下50℃で一夜（16〜
20時間）撹拌する。 製造例 11 マイケル−ミラー・カラム（Michel−Miller
Colum）のスラリー充填法 一般事項 Ａ カラムはこの操作により充填されうる。 Ｂ シリカゲルおよびシリカゲル逆相樹脂の充填
にはたとえばQuantum LP−１、粒子サイズ
10〜20ミクロンおよびLiChroprep RP−８な
らびにRP−18、粒子サイズ25〜40ミクロンが
好ましい。しかし、他のシリカゲル、たとえば
Shandons ODS Hypersil、粒子サイズ５ミク
ロンも他の型の樹脂同様、この操作によりうま
く充填された。 Ｃ このスラリー充填には、一般に200psiより低
い圧力と５〜40ml／分の流速が必要であるが、
これはカラムの容積とサイズに依存する。充填
の圧力は、実際の分離に用いる圧より30〜
50psi高いのが望ましい。そうすることにより
分離時に吸着剤がさらに圧縮されることを防ぐ
ことができる。この操作により逆相シリカゲル
が充填されたカラムは、数年間、効率の損失な
く用いることができる。 Ｄ 急激な圧力低下は、充填剤中にひび割れや流
路（Channel）を生じさせ、カラムの効率を著
しく低下させる。従つて、ポンプを切る時は常
に圧力を徐々に０にで低下させることが重要で
ある。 Ｅ カラムのおよその容積（Ace Glass Cat，
No.，unpacked）：5795−04、12ml；5795−10、
110ml；5795−16、300ml；5795−24、635ml；
および5796−34、34ml。 Ｆ ガラスカラムの充填に要する時間は、カラム
サイズと実施者の熟練度に応じて、数分〜数時
間程度である。 詳細な事項 １ ガラスカラムと貯蔵カラムとをカツプリング
によつて結合する（貯蔵カラムの容積は主カラ
ム容積の２倍とする）。両カラムを垂直に（貯
蔵カラムを上にして）立てる。 ２ 充填剤を秤量する（カラム200mlに対して約
100ｇ）。 ３ 充填剤に対して約５倍容積の溶媒を加える。
溶媒としては、70〜80％のメタノールと20〜30
％の水の混合物を用いる。 ４ 全粒子が湿潤するまでよく振盪し、溶媒が粒
子へ完全に浸透することを確実にするために一
夜以上放置する。上澄を傾斜して除く。 ５ 樹脂を貯蔵カラムへ充填するのに充分な溶媒
でスラリー化し、速かに貯蔵カラムに注ぎこ
む。カラムは予め同一の溶媒で充たしておき、
貯蔵カラムはスラリーを注入する前に溶媒で充
たしておく。スラリー容積が大きいほど良好な
結果を与えるが、そのためには(a)大容積の貯蔵
カラムが必要になるか、または(b)充填操作中に
何度も貯蔵カラムへの補充が必要となる。 ６ カラム下部へテフロン・プラグを用いて貯蔵
カラムを閉鎖する（米国特許4131547の第１図、
プラグNo.３を参照）。ポンプへ連結し、直ちに
溶媒のポンプ搬送を開始する。Ace Cat No.
13265−25ポンプまたは同類の溶媒搬送系を使
用する時は、最大流速（約20ml／分）とする。 ７ カラムが吸着剤で完全に満たされるまで続け
る。この間、圧力はカラムの最大耐容値（大型
カラムで約200psi、分析用カラムで300psi）を
超えてはならない。多くの場合、圧力は200psi
未満で充分である。 ８ 圧力が最大値を超える時は、流速を低減させ
る。それにより圧力は低下する。 ９ カラムが吸着剤で充填されたらポンプを切
り、圧力を０にまで低下させる。貯蔵カラムを
取除いて、代りにプレカラムを取付ける。プレ
カラムに溶媒と少量の吸着剤を入れ、カラムが
完全に充填されるまで最大圧力でポンプ搬送を
行う。その他の点については一般事項を参照の
こと。ポンプを停止する時は、常に圧力を徐々
に低下させ、充填剤中にひび割れや流路
（channel）が形成されることを防ぐ。 10 圧力を緩解、注意してプレカラムを取除く。
小型スパーテルでカラムの上部から少量（２〜
４mm）の吸着剤を取除き、カラムの上部に１枚
または２枚のフイルターを乗せる。吸着剤の上
部をおだやかに押し下げ、充分密着するように
テフロンプラグを押しこむ。ポンプに連結し、
加圧（通常200psi未満）し、樹脂が更に圧縮さ
れるかどうかをガラス壁を通して観察する。も
し吸着剤が動くようであれば（大カラムで起り
易い）、死空間もしくは流路を生じるので、前
記の操作９を反覆する。 製造例 12 テトラヒドロ−Ａ−30912Aの製法 Ａ−30912因子Ａをエタノールに溶かす。一方、
酸化白金を無水エタノール中で還元して白金に導
き、次いでこれを用いてＡ−30912因子Ａを接触
還元する。還元は陽圧の水素を用いて反応が完了
するまで（約２〜３時間）行う。反応混合物を濾
過し、減圧濃縮する。残渣を少量のｔ−ブタノー
ルに溶かし、凍結乾燥してテトラヒドロ−Ａ−
30912Aを得る。 製造例 13 テトラヒドロ−Ａ−30912Bの製法 Ａ−30912因子Ｂをエタノールに溶かす。一方、
酸化白金を無水エタノール中で還元して白金に導
き、次いでこれを用いてＡ−30912因子Ｂを接触
還元する。還元は陽圧の水素を用いて反応が完了
するまで（約２〜３時間）行う。反応混合物を濾
過し、減圧濃縮する。残渣を少量のｔ−ブタノー
ルに溶かし、凍結乾燥すると、テトラヒドロ−Ａ
−30912Bを得る。 製造例 14 テトラヒドロ−Ａ−30912Dの製法 Ａ−30912因子Ｄをエタノールに溶かす。一方、
酸化白金を無水エタノール中で還元して白金に導
き、次いでこれを用いてＡ−30912因子Ｄを接触
還元する。還元は陽圧の水素を用いて反応が完了
するまで（約２〜３時間）行う。反応混合物を濾
過し、減圧濃縮する。残渣を少量のｔ−ブタノー
ルに溶かし、凍結乾燥してテトラヒドロ−Ａ−
30912Dを得る。 製造例 15 テトラヒドロ−Ａ−30912Hの製法 Ａ−30912因子Ｈをエタノールに溶かす。一方、
酸化白金を無水エタノール中で還元して白金に導
き、次いでこれを用いてＡ−30912因子Ｈを接触
還元する。還元は陽圧の水素を用いて反応が完了
するまで（約２〜３時間）行う。反応混液を濾過
し、減圧濃縮する。残渣を少量のｔ−ブタノール
に溶かし、凍結乾燥してテトラヒドロ−Ａ−
30912Hを得る。 製造例 16 Ａ Ａ−30912因子Ａの脱アシル化 スラント用培地Ａおよび製造用培地Ｉを用
い、製造例１の記載に従つて、A.utahensisの
発酵を行う。製造用培地での培養は約42時間と
する。粗製のＡ−30912因子Ａ（340ｇ、本品は
Ａ−30912因子Ａを約19.7ｇ含む）をエタノー
ル1.5に溶かして発酵培地に加える。 Ａ−30912因子Ａの脱アシル化は、Candida
albicansを用いる検定でモニターする。発酵
は、C.albicansに対する活性の消失によつて脱
アシル化の完成が示されるまで継続する。 Ｂ Ａ−30912A核の単離 Ａ−30912因子Ａ約20ｇから生ずる核を含み、
工程Ａの記載に従つて得られた発酵ブロス
（100）を濾過し、菌体ケーキは廃棄する。得
られた透明な瀘液（約93）を、HP−20樹脂
（ダイヤイオン、高度多孔質ポリマー、HP−
シリーズ、三菱化成工業（株）製品）4.5を
含むカラムに流速200ml／分で通過させ、通過
液を棄てる。次いで、カラムをカラム容積の８
倍量の脱イオン水（PH6.5〜7.5）で洗浄して残
留するブロス瀘液を除く。この洗液は廃棄す
る。カラムの溶離は、水−メタノール（７：
３）混液（85）を用いて流速200〜300ml／分
で行う。 溶離は次のような操作によりモニターされ
る。各溶出分画からサンプリングした試料を二
分し、その一方を少量になるまで濃縮し、酸ク
ロリド（たとえばミリストイル・クロリド）で
処理する。この操作は実施例１に記載の方法を
用いる。この生成物および他方の未処理サンプ
ルについて、Candida albicansに対する活性
を検討する。未処理試料が活性を示さず、アシ
ル化済試料が活性を示せば、その画分はＡ−
30912A核を含有している。Ａ−30912A核を含
む画分を少量になるまで減圧濃縮し、凍結乾燥
すると粗製の核約97ｇを得る。 Ｃ 逆相液体クロマトグラフイーによるＡ−
30912A核の精製 工程Ｂの記載に従つて得られた粗Ａ−
30912A核（25ｇ）を水：アセトニトリル：酢
酸：ピリジン（96：２：１：１）（300ml）に溶
かし、Lichroprep RP−18（粒子径25〜40ミク
ロン）（MC／Ｂ Manufacturing Chemists，
Inc.E／Ｍ，Cincinnati，OH）を充填した４
のステンレス・スチール・カラムでクロマトグ
ラフする。このカラムは、高速液体クロマトグ
ラフイー機器（Chromatospac prep
100unit；Jobin Yvon，16〜18 Rue du Canal
191160 Longjumeau，France）に組み込まれ
ている。カラムは、上記と同じ溶媒を用い、90
〜100psiの圧力で、流速約60ml／分で操作す
る。分離状態は、光学ユニツト（ISCO
Type6）を備えたUVモニター（ISCO
Absorption Monitor Model VA−５，
Instrumentation Specialties Co.，4700
Superior Ave.，Lincoln，Nebraska 68504）
を用いて280nｍでモニターする。毎分500mlの
画分を集める。 280nｍにおける吸収に基いて、Ａ−30912A
核を含む画分を合わせて減圧濃縮し、凍結乾燥
すると核2.6ｇを得る。このクロマトグラフイ
ー操作実施に要する溶媒量は７〜８である。 Ｄ Ａ−30912A核の特性 (a) 実験式：C₃₄H₅₁N₇O₁₅ (b) 分子量：797.83 (c) 白色無定型固体。水、ジメチルホルムアミ
ド、ジメチルスルホキシドおよびメタノール
に可溶、クロロホルム、トルエンおよびジエ
チルエーテルに不溶。 (d) 赤外線吸収スペクトル（臭化カリウム
錠）：3340（巾広、OH、水素結合）、2970、
2930および2890（CH伸縮、脂肪族CH₃、
CH₂、CH）；1660および1625（複数のカルボ
ニルＣ＝０）；1510〜1550；1430〜1450（CH
変角）；1310〜1340；1230〜1260；1080；
835、650（巾広）および550（巾広）cm^-1。 (e) 66％水性ジメチルホルムアミド中での電気
滴定は、pka値約7.35（初期PH7.32）の滴定可
能な基１個の存在を示す。 (f) HPLC保持時間（K′）：11.52分。 条件： カラム：４×300mm 充填剤：シリカゲル／C₁₈ 溶媒系：酢酸アンモニウム：アセトニトリル：
水（１：２：97） 流速：３ml／分 圧力：2500psi 検出器：波長可変UV（230nｍ） 感度：０〜0.4A.U.F.S. 製造例 17 テトラヒドロ−Ａ−30912Aを基質として用い
て製造例16の方法によりＡ−30912A核を製し、
かつ精製する。 製造例 18 アクレアシンＡを基質として用いて製造例16の
方法によりＡ−30912A核を製し、かつ精製する。 製造例 19 Ａ Ａ−30912因子Ｂの脱アシル化 製造用培地Ｉを用い、製造例１の記載に従つ
て、A.Utahensisの発酵を行う。約48時間培養
した後、Ａ−30912因子Ｂを少量のメタノール
に溶かし、発酵培地に加える。 Ａ−30912因子Ｂの脱アシル化は、Candida
albicansまたはNeurospora crassaに対するペ
ーパー・デイスク法によつてモニターする。生
物活性の消失によつて脱アシル化の完了を確認
するまで発酵を続ける。 Ｂ Ａ−30912B核の単離 工程Ａの記載に従つて得られた発酵ブロスを
濾過し、菌体ケーキは廃棄する。得られた透明
な溶液（ダイヤイオン、高度多孔質ポリマー、
HP−シリーズ、三菱化成工業（株）製品）を
充填したカラムに通し、通過液は棄てる。この
カラムをPH6.5〜7.5の脱イオン水８カラム容で
洗つて残存する発酵瀘液を除き、洗液は棄て
る。このカラムを水−メタノール（７：３）で
溶離させ、溶離液を下記のようにしてモニター
する。各溶離画分ごとにサンプルをとり、これ
を２分し、その一方を少量になるまで濃縮した
後、製造例11に記載の方法を用いて酸クロリド
（たとえばミリストイル・クロリド）で処理す
る。この生成物と他方の未処理サンプルとにつ
いて、Candida albicansに対する活性を検定
する。未処理サンプルが活性を示さず、アシル
化サンプルが活性を示せば、この画分はＡ−
30912B核を含有していることになる。Ａ−
30912B核を含有する画分を少量になるまで減
圧濃縮し、凍結乾燥して粗製の核を得る。 Ｃ Ａ−30912B核の逆相液体クロマトグラフイ
ーによる精製 上記工程Ｂで得た粗製Ａ−30912B核を水−
アセトニトリル−酢酸−ピリジン（96：２：
１：１）に溶かし、この溶液をLichroprep
RP−18、粒子サイズ25〜40ミクロン（MC／
Ｂ Manufacturing Chemists，Inc.E／Ｍ，
Cincinnati，OH）を充填したカラム上でクロ
マトグラフする。このカラムはChromatospac
Prep 100unit（Jobin Yvon，16〜18Ruedu
Canal91160 Longjumeau，France）に組み込
む。カラムは同じ溶媒を用い、90〜100psiの圧
力下、流速約60ml／分で操作する。分離状況は
光学ユニツト（ISCO Type6）を備えたUVモ
ニター（ISCO Absorption Montior Model
UA−５，Instrumentation Specialites Co.，
4700 Superior Ave.，Lincoln，Nebraska
68504）を用いて280nｍでモニターする。 280nｍにおける吸収に基いて、Ａ−30912B
核を含有する画分を合わせ、減圧濃縮し、凍結
乾燥すると、精製されたＡ−30912B核を得る。 製造例 20 テトラヒドロ−Ａ−30912Bを基質として用い
て製造例19の方法によりＡ−30912B核を製し、
かつ精製する。 製造例 21 Ａ Ａ−30912因子Ｄの脱アシル化 製造用培地を用い、製造例１の記載に従つ
て、A.utahensisの発酵を行う。約48時間培養
した後、Ａ−30912因子Ｄを少量のメタノール
に溶かし、発酵培地に加える。 Ａ−30912因子Ｄの脱アシル化は、Candida
albicansまたはNeurospora crassaに対するペ
ーパー・デイスク法でモニターする。生物活性
の消失によつて脱アシル化の完了を確認するま
で発酵を続ける。 Ｂ Ａ−30912D核の単離 工程Ａの記載に従つて得られた発酵ブロスを
濾過し、菌体ケーキは棄てる。得られた透明瀘
液をHP−20樹脂（ダイヤイオン、高度多孔質
ポリマー、HP−Series、三菱化成工業（株）
製品）を充填したカラムに通し、通過液は棄て
る。次いで、このカラムをPH6.5〜7.5の脱イオ
ン水８カラム容で洗つて残存する発酵瀘液を除
き、洗液は棄てる。このカラムを水−メタノー
ル（７：３）で溶離させ、溶離液を下記のよう
にしてモニターする。核溶離画分ごとにサンプ
ルをとり、これを２分し、その一方を少量にな
るまで濃縮した後、実施例１に記載の方法を用
いて酸クロリド（たとえばミリストイル・クロ
リド）で処理する。この生成物と他方の未処理
サンプルとについて、Candida albicansに対
する活性を検定する。未処理サンプルが活性を
示さず、アシル化サンプルが活性を示せば、こ
の画分はＡ−30912D核を含有していることに
なる。Ａ−30912D核を含有する画分を少量に
なるまで減圧濃縮し、凍結乾燥して粗製の核を
得る。 Ｃ Ａ−30912D核の逆相液体クロマトグラフイ
ーによる精製 工程Ｂで得られた粗製Ａ−30912D核を製造
例19の工程Ｃに従つて精製する。 280nｍにおける吸収に基いて、Ａ−30912D核
を含有する分画を合わせ、減圧濃縮し、凍結乾燥
すると、精製されたＡ−30912D核を得る。 製造例 22 テトラヒドロ−Ａ−30912Dを基質として用い
て製造例21の方法によりＡ−30912D核を製し、
かつ精製する。 製造例 23 Ａ Ａ−30912因子Ｈの脱アシル化 製造用培地Ｉを用い、製造例１の記載に従つ
て、A.utahensisの発酵を行う。約48時間培養
した後、Ａ−30912因子Ｈを少量のメタノール
に溶かし、発酵培地に加える。 Ａ−30912因子Ｈの脱アシル化は、Candida
albicansまたはNeurospora crassaに対するペ
ーパー・デイスク法によつてモニターする。生
物活性の消失によつて脱アシル化の完了を確認
するまで発酵を続ける。 Ｂ Ａ−30912H核の単離 工程Ａの記載に従つて得られた発酵ブロスを
濾過し、菌体ケーキは棄てる。得られた透明瀘
液をHP−20樹脂（ダイヤイオン、高度多孔質
ポリマー、HP−Series、三菱化成工業（株）
製品）を充填したカラムに通し、通過液は棄て
る。次いで、このカラムをPH6.5〜7.5の脱イオ
ン水、８カラム容で洗つて残存する発酵瀘液を
除き、洗液は棄てる。このカラムを水−メタノ
ール（７：３）で溶離させ、溶離液を下記のよ
うにしてモニターする。各溶離画分ごとにサン
プルをとり、これを２分し、その一方を少量に
なるまで濃縮した後、実施例１に記載の方法を
用いて酸クロリド（たとえばミリストイル・ク
ロリド）で処理する。この生成物と他の未処理
サンプルとについて、Candida albicansに対
する活性を検定する。未処理サンプルが活性を
示さず、アシル化サンプルが活性を示せば、こ
の画分はＡ−30912H核を含有していることに
なる。Ａ−30912H核を含有する画分を少量に
なるまで減圧濃縮し、凍結乾燥して粗製の核を
得る。 Ｃ Ａ−30912H核の逆相液体クロマトグラフイ
ーによる精製 工程Ｂの記載に従つて得られた精製Ａ−
30912H核を製造例19の工程Ｃの操作に従つて
精製する。 280nｍにおける吸収に基いて、Ａ−30912H
核を含有する画分を合わせ、減圧濃縮し、凍結
乾燥すると精製されたＡ−30912H核を得る。 製造例 24 テトラヒドロ−Ａ−30912Hを基質として用い
て、製造例23の方法に従つてＡ−30912H核を製
し、かつ精製する。 製造例 25 製造例23の方法に従いＡ−30912H核を製し、
精製する。ただし基質となるＡ−30912因子Ｈは
次のような操作によりＡ−30912因子Ａから得ら
れる。 抗生物質Ａ−30912因子Ａ（19.6mg）をジメチル
ホルムアミド（１ml）に溶かし、これに酸性メタ
ノール（３％HCl、0.06ml）を加え、室温で一夜
撹拌した後、減圧濃縮する。得られた残渣を逆相
シリカゲル（LP−１／C₁₈、製造例10に記載の方
法により製造）および溶出溶媒としてメタノール
−水−アセトニトリル（７：２：１）を用いて、
製造例７に記載したHPLPLC処理するとＡ−
30912因子Ｈ（式において、R¹およびR⁴が共に
ヒドロキシ、R²が水素、R³がメトキシ、Ｒがリ
ノレオイルである化合物）1.4mgを得る。 製造例 26 一般式においてR¹およびR⁴がOH、R²がＨ、
R³がエトキシでＲがリノレオイルである化合物
を基質として用いて、製造例23の方法により、一
般式においてR¹およびR⁴がOH、R²がＨ、R³
がエトキシであるＡ−30912H型の核を製し、精
製する。基質は製造例25記載の方法と同様にして
製造される。 製造例 27 一般式においてR¹およびR⁴がOH、R²がＨ、
R³がｎ−プロポキシでＲがリノレオイルである
化合物を基質として用いて、製造例23の方法によ
り、一般式においてR¹およびR⁴がOH、R²が
Ｈ、R³がｎ−プロポキシであるＡ−30912H型の
核を得る。基質は製造例25に記載の方法と同様に
して製造される。 製造例 28 一般式においてR¹およびR⁴がOH、R²がＨ、
R³がイソブトキシでＲがリノレオイルである化
合物を基質として用いて、製造例23の方法によ
り、一般式においてR¹およびR⁴がOH、R²が
Ｈ、R³がイソブトキシであるＡ−30912H型の核
を製し、かつ精製する。 製造例 29 一般式においてR¹およびR⁴がOH、R²がＨ、
R³がｎ−ペンチルオキシでＲがリノレオイルで
ある化合物を基質として用いて、製造例23の方法
により、一般式においてR¹およびR⁴がOH、
R²がＨ、R³がｎ−ペンチルオキシであるＡ−
30912H型の核を製し、かつ精製する。 製造例 30 一般式においてR¹およびR⁴がOH、R²がＨ、
R³がｎ−ヘキシルオキシでＲがリノレオイルで
ある化合物を基質として用い、製造例23の方法に
より、一般式においてR¹およびR⁴がOH、R²
がＨ、R³がｎ−ヘキシルオキシであるＡ−
30912H型の核を製し、精製する。 製造例 31 一般式においてR¹およびR⁴がOH、R²がＨ、
R³がエトキシでＲがステアロイルである化合物
を基質として用い、製造例23の方法により、一般
式においてR¹およびR⁴がOH、R²がＨ、R³が
エトキシであるＡ−30912H型の核を製し、精製
する。 製造例 32 一般式においてR¹およびR⁴がOH、R²がＨ、
R³が２−エチル−１−ブトキシでＲがリノレオ
イルである化合物を基質として用い、製造例23の
方法により、一般式においてR¹およびR⁴が
OH、R²がＨ、R³が２−エチル−１−ブトキシで
あるＡ−30912H型の核を製し、精製する。 製造例 33 一般式においてR¹およびR⁴がOH、R²がＨ、
R³が３−メチル−１−ブトキシでＲがリノレオ
イルである化合物を基質として用い、製造例23の
方法により、一般式においてR¹およびR⁴が
OH、R²がＨ、R³が３−メチル−１−ブトキシで
あるＡ−30912H型の核を製し、精製する。 製造例 34 Ａ 抗生物質S31794／Ｆ−１の脱アシル化 製造用培地を用い、製造例１の記載に従つ
て、A.utahensisの発酵を行う。約48時間培養し
た後、抗生物質S31794／Ｆ−１を少量のメタノ
ールに溶かし、発酵培地に加える。 S31794／Ｆ−１の脱アシル化は、Candida
albicansに対するペーパー・デイスク法でモニタ
ーする。生物活性の消失によつて脱アシル化の完
了を確認するまで発酵を続ける。 Ｂ S31794／Ｆ−１核の単離 工程Ａの記載に従つて得られた発酵ブロスを
濾過し、菌体ケーキは棄てる。得られた透明瀘
液をHP−20樹脂（ダイヤイオン、高度多孔質
ポリマー、HP−シリーズ、三菱化成工業(株)製
品）を含むカラムに通し、通過液は棄てる。次
いで、このカラムをPH6.5〜7.5の脱イオン水８
カラム容で洗つて残存する発酵瀘液を除き、洗
液は棄てる。このカラムを水−メタノール
（７：３）で溶離させ、容離液を下記のように
してモニターする。各液離画分ごとにサンプル
をとり、これを２分し、その一方を少量になる
まで濃縮した後、実施例１に記載の方法を用い
て酸クロリド（たとえばミリストイル・クロリ
ド）で処理する。この生成物と他処理サンプル
について、Cadida albicansに対する活性を検
定する。未処理サンプルが活性を示さず、アシ
ル化サンプルが活性を示せば、この画分はＳ−
31794／Ｆ−１核を含有していることになる。
Ｓ−31794／Ｆ−１核を含有する画分を少量に
なるまで減圧濃縮し、凍結乾燥して粗製の核を
得る。 Ｃ S31794／Ｆ−１核の逆相液体クロマトグラ
フイーによる精製 工程Ｂの記載に従つて得られた粗製
S31794／Ｆ−１核を製造例19の工程Ｃの操作
に従つて精製する。 280nｍにおける吸収に基いて、S31794／Ｆ
−１核を含有する画分を合わせ、減圧濃縮し、
凍結乾燥すると精製されたS31794／Ｆ−１核
を得る。 AbbcttおよびFukuta誘導体の製造 下記の操作は、活性エステル法による一般式
の化合物の製造法を示している。この方法に
よつて得られる特別な化合物は、一般式にお
いてR⁵がCH₃（CH₂）₁₁−でR¹、R²、R³、およ
びR⁴が個々の核と同意義である化合物である。 参考製造例 １ ２，４，５−トリクロロフエニル・トリデカノ
エート ｎ−トリデカン酸（Sigma Chemical Co.）
12.5ｇ、２，４，５−トリクロロフエノール11.5
ｇ、およびＮ，N′−ジシクロヘキシルカルボジ
イミド12.0ｇを塩化メチレン650mlに溶かし、室
温で16時間撹拌する。反応混液を濾過し、減圧で
乾燥して２，４，５−トリクロロフエニル・トリ
デカノエート22ｇを得る。これをシリカゲル
（Woelm）上、溶離剤としてトルエンを用いてカ
ラムクロマトグラフイーにより精製する。画分
は、短波長のUV光線で検出しながらTLCにより
モニターする。精製された製品を含む画分を合わ
せ、減圧下で蒸発乾固する。 実施例 １ Ａ−30912A核の２，４，５−トリクロロフエ
ニル・ｎ−トリデカノエートによるアシル化 ２，４，５−トリクロロフエニル・トリデカノ
エート6.0ｇおよびＡ−30912A核4.5ｇをジメチル
ホルムアミド600mlに溶かし、室温で16時間撹拌
する。減圧下で溶媒を留去し、得られた残渣12ｇ
を塩化メチレン500mlで45分間スラリー化し、濾
過する。濾液を棄て、残つた固型物をメタノール
500mlで抽出する。メタノール抽出液を濾過し、
減圧濃縮するとR¹、R³およびR⁴がOH、R²がＨ、
そしてR⁵がドデシルである式の化合物の粗生
成物5.0ｇを得る。 この粗生成物を次のとおりにして逆相HPLCに
より精製する。 粗生成物１ｇのサンプルをメタノール５mlに溶
かし、LP−１／C₁₈樹脂（製造例10および11参
照）を充填したステンレス・スチール・カラム
（１×32インチ）を注入し、水−メタノール−ア
セトニトリル（３：３：４）よりなる溶媒系で溶
離する。溶離は、LDC duplex pump（Milton−
Roy）を用い、1000〜1500psiの圧力下、11〜12
ml／分の流速で行う。流出液は紫外線検出器
（ISCO−UA−５）を用いて280nｍでモニターす
る。２分毎に画分（21〜24ml）を集める。目的物
を含有する画分を集め、減圧乾燥する。生成物の
収量は550mgである。上記クロマトグラフイーを
４回繰り返すと、更に精製された生成物のサンプ
ル620mg、520mg、670mgおよび490mgを得る。総収
量は2.8ｇである。 上記操作に従つて、Ａ−30912A核40ｇを２，
４，５−トリクロロフエニル・ｎ−トリデカノエ
ートと反応させると精製されたR¹、R³およびR⁴
がOH、R²がＨ、そしてえR⁵がドデシルである式
の化合物2.6ｇを得る。これを先に得られた生
成物と合わせる（5.4ｇ）。FDMSによるマスイオ
ン（M⁺＋Na⁺）：1016（理論値：M⁺＋Na⁺＝
1016）。水−メタノール−アセトニトリル（２：
１：２）を溶媒系とするHPLC（C₁₈Micro
Bondapak，Wasters Co.）は１つのピークのみ
を示す。 実施例 ２ Ａ−30912B核の２，４，５−トリクロロフエ
ニル・ｎ−トリデカノエートによるアシル化 ２，４，５−トリクロロフエニル・ｎ−トリデ
カノエート（3.3ミリモル）およびＡ−30912B核
（１ミリモル）をジメチルホルムアミド（DMF）
（200ml）に溶かし、室温で16時間撹拌し、減圧下
で溶媒を留去する。残渣を塩化メチレン（300ml）
で45分間スラリー化し、得られた混液を濾過す
る。濾液は棄て、固体をメタノール（300ml）で
抽出する。メタノール抽出液を濾過し、減圧濃縮
すると、R¹およびR²がＨ、R³およびR⁴がOH、
そしてR⁵がドデシルである式の化合物の粗生
成物が得られる。 これを次のようにして逆相PHLCにより精製す
る。 粗生成物のサンプル（１ｇ）をメタノール（５
ml）に溶かし、LP−１／C₁₈樹脂（製造例10およ
び11参照）を充填したステンレス・スチール・カ
ラム（１×32インチ）を注入し、水−メタノール
−アセトニトリル（３：３：４）を溶媒系として
溶離する。溶離はLDC duplex pump（Milton−
Roy）を用い、1000〜1500psiの圧力下、11〜12
ml／分の流速で行う。溶離液はUV検出器
（ISCO−UA−５）を用いて280nｍでモニターす
る。２分毎に画分（21〜24ml）を集める。目的物
を含有する画分を合わせ、減圧下で乾燥すると最
終生成物を与える。精製された生成物を、逆相
C₁₈プレート（Whatman KC₁₈）上、水−メタノ
ール−アセトニトリル（１：２：2v／ｖ）を溶
媒とした薄層クロマトグラフイーにより分析す
る。展開後、紫外線下でプレートを観察し、生成
物を検出する。 実施例 ３ Ａ−30912D核の２，４，５−トリクロロフエ
ニル・ｎ−トリデカノエートによるアシル化 ２，４，５−トリクロロフエニル・ｎ−トリデ
カノエート（3.3ミリモル）およびＡ−30912D核
（１ミリモル）をジメチルホルムアミド（200ml）
に溶かし、室温で16時間撹拌する。溶媒を減圧下
で留去し、得られた残渣を塩化メチレン（300ml）
で45分間スラリー化し、濾過する。濾過を棄て、
固型物をメタノール（300ml）で抽出する。メタ
ノール抽出液を濾過し、減圧濃縮すると、R¹、
R²、R³およびR⁴がすべてＨであり、R⁵がドデシ
ルである式の化合物の粗生成物が得られる。 粗生成物を実施例２と同様にして逆層HPLCで
精製する。 実施例 ４ Ａ−30912H核の２，４，５−トリクロロフエ
ニル・ｎ−トリデカノエートによるアシル化 ２，４，５−トリクロロフエニル・ｎ−トリデ
カノエート（3.3ミリモル）およびＡ−30912H核
（１ミリモル）をジメチルホルムアミド（200ml）
に溶かし、室温で16時間撹拌した後、溶媒を減圧
留去する。残渣を塩化メチレン（300ml）で45分
間スラリー化し、混液を濾過する。濾液は棄て、
濾過物をメタノール（300ml）で抽出する。メタ
ノール抽出液を濾過し、減圧濃縮してR¹および
R⁴がOH、R²がＨ、R³がメトキシ、そしてR⁵が
ドデシルである式の化合物の粗生成物を得る。 粗生成物を実施例２と同様にして逆相HPLC処
理して精製する。 実施例 ５ 一般式においてR¹およびR⁴がOH、R²がＨ、
R³がｎ−プロポキシである化合物（製造例27の
方法により製造）を出発原料として用い、実施例
４の操作に従うと、一般式においてR¹および
R⁴がOH、R²がＨ、R³がｎ−プロポキシR⁵が
CH₃−（CH₂）₁₁−である化合物を得る。 実施例 ６ S31794／Ｆ−１核の２，４，５−トリクロロ
フエニル・ｎ−トリデカノエートによるアシル
化 ２，４，５−トリクロロフエニル・ｎ−トリデ
カノエート（3.3ミリモル）およびS31794／Ｆ−
１核（１ミリモル）をジメチルホルムアミド
（200ml）に溶かし、室温で16時間撹拌した後、溶
媒を減圧下で留去する。残渣を塩化メチレン
（300ml）で45分間スラリー化し、瀘液は棄て、濾
過物をメタノール（300ml）で抽出する。メタノ
ール抽出液を濾過し、減圧濃縮すると、R¹、R³
およびR⁴がOH、R²がOCNH₂、そしてR⁵がドデ
シルである式の化合物の粗生成物が得られる。 粗生成物を実施例２と同様にして逆相HPLCで
精製する。 デボノ基誘導体の製造 下記のようにして、一般式においてR⁵が

【式】である化合 物、すなわち一般式のデボノ化合物を製造し
うる。 参考製造例 ２ Ｎ−（ｎ−ドデカノイル）−ｐ−アミノ安息香酸
の製造 ｐ−アミノ安息香酸（5.5ｇ；40ミリモル）を
ピリジン（100ml）に溶かし、これにｎ−ドデカ
ノイル・クロリド（8.74ｇ；40ミリモル）を滴下
する。混液を３時間撹拌し、水（３）に注ぐ。 生成した沈澱を濾取し、減圧下で乾燥してＮ−
（ｎ−ドデカノイル）−ｐ−アミノ安息香酸
（11.01ｇ）を得る。 参考製造例 ３ Ｎ−（ｎ−ドデカノイル）−ｐ−アミノ安息香
酸・２，４，５−トリクロロフエニルエステル
の製造 Ｎ−（ｎ−ドデカノイル）−ｐ−アミノ安息香酸
（11.01ｇ：34.5ミリモル）、２，４，５−トリク
ロロフエニル（7.5ｇ；38ミリモル）およびＮ，
N′−ジシクロヘキシルカルボジイミド（6.94ｇ；
34.5ミリモル）を塩化メチレン（250ml）に溶か
し、室温で3.5時間撹拌し、濾過する。濾液を減
圧濃縮し、残渣をアセトニトリル−水から結晶化
して、Ｎ−（ｎ−ドデカノイル）−ｐ−アミノ安息
香酸・トリクロロフエニルエステル（12.84ｇ）
を得る。 実施例 ７ Ａ−30912A核のアシル化 Ａ−30912A核（8.16ｇ；10.2ミリモル）および
Ｎ−（ｎ−ドデカノイル）−ｐ−アミノ安息香酸・
２，４，５−トリクロロフエニルエステルをジメ
チルホルムアミド（100ml）に溶かし、室温で15
時間撹拌する。溶媒を減圧下で留去し、残渣をジ
エチル・エーテルで２回洗う。洗液は棄て、洗浄
した残渣をメタノール（50ml）に溶かし、固定相
としてPrep Pak−500／C₁₈カラム（Waters
Associates、Ｉ nc.、）を用いたPrep LC／
System 500 unitにより逆相HPLC処理して精製
する。カラムは500psiの圧力で水−メタノール−
アセトニトリル（25：65：10v／ｖ）により定常
的に溶離する。画分をシリカゲル板上、水−メタ
ノール−アセトニトリル（25：65：10容量比）を
溶媒系として薄相クロマトグラフイーにより分析
する。目的物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥
してＡ−30912A核のＮ−（ｎ−ドデカノイル）−
ｐ−アミノベンゾイル誘導体［R¹、R³およびR⁴
がOH、R²がＨ、そしてR⁵がＮ−（ｎ−ドデカノ
イル）−ｐ−アミノフエニルである式の化合物
3.5ｇを得る。 実施例 ８ Ａ−30912B核のアシル化 Ａ−30912B核（10.2ミリモル）およびＮ−（ｎ
−ドデカノイル）−ｐ−アミノ安息香酸・２，４，
５−トリクロロフエニルエステル（10.2ミリモ
ル）をジメチルホルムアミド（100ml）に溶かし、
室温で15時間撹拌する。溶媒を減圧留去し、得ら
れた残渣をジエチルエーテルで２回洗う。洗液は
棄て、洗浄した残渣をメタノール（50ml）に溶か
し、固定相としてPrep Pak−500／C₁₈カラムを
用いたPrep LC／System500unitにより逆相
HPLCにより精製する。カラムは、500psiの圧力
で、水−メタノール−アセトニトリル（25：65：
10v／ｖ）により定常的に溶離する。画分を、シ
リカゲル板上、水−メタノール−アセトニトリル
（25：65：10v／ｖ）を溶媒系とした薄層クロマ
トグラフイーで分析する。目的生成物を含む画分
を合わせ、凍結乾燥してＡ−30912B核のＮ−（ｎ
−ドデカノイル）−ｐ−アミノベンゾイル誘導体
を得る。 実施例 ９ Ａ−30912D核のアシル化 Ａ−30912D核（10.2ミリモル）およびＮ−（ｎ
−ドデカノイル）−ｐ−アミノ安息香酸・２，４，
５−トリクロロフエニルエステル（10.2ミリモ
ル）をジメチルホルムアミド（100ml）に溶かし、
室温で15時間撹拌する。溶媒を減圧留去し、得ら
れた残渣をジエチルエーテルで２回洗う。洗液は
棄て、洗浄した残渣をメタノール（50ml）に溶か
し、固定相としてPrep Pak−500／C₁₈カラムを
用いたPrep LC／System500unit（Waters
Associates、Inc.、Milford、Massachusetts）に
よる逆層HPLCにより精製する。カラムは、
500psiの圧力で、水−メタノール−アセトニトリ
ル（25：65：10v／ｖ）で定常的に溶離する。画
分を、シリカゲル板上、水メタノール−アセトニ
トリル（25：65：10v／ｖ）を溶媒系とした薄層
クロマトグラフイーで分析する。目的生成物を含
有する画分を合わせ、凍結乾燥してＡ−30912D
核のＮ−（ｎ−ドデカノイル）−ｐ−アミノベンゾ
イル誘導体を得る。 実施例 10 Ａ−30912H核のアシル化 Ａ−30912H核（10.2ミリモル）およびＮ−（ｎ
−ドデカノイル）−ｐ−アミノ安息香酸・２，４，
５−トリクロロフエニルエステル（10.2ミリモ
ル）をジメチルホルムアミド（100ml）に溶かし、
室温で15時間撹拌する。溶媒を減圧留去し、得ら
れた残渣をジエチル・エーテルで２回洗う。洗液
は棄て、洗浄した残渣をメタノール（50ml）に溶
かし、固定相としてPrep Pak−500／C₁₈カラム
（Water Associates、Inc.）を用いたPrep LC／
System500unit（Water Associates、Inc.、
Milford、Massachusetts）による逆相HPLCに
より精製する。カラムは、500psiの圧力で、水−
メタノール−アセトニトリル（25：65：10v／
ｖ）で定常的に溶離する。画分を、シリカゲル板
上、水−メタノール−アセトニトリル（25：65：
10v／ｖ）を溶媒系とした薄層クロマトグラフイ
ーで分析する。目的生成物を含有する画分を合わ
せ、凍結乾燥してＡ−30912H核のＮ−（ｎ−ドデ
カノイル）−ｐ−アミノベンゾイル誘導体を得る。 実施例 11 一般式においてR¹およびR⁴がOH、R²がＨ、
R³がイソブトキシである化合物（製造例28の方
法により製造）を出発原料として用い、実施例９
の操作に従うと、一般式においてR¹およびR⁴
がOH、R²がＨ、R³がイソブトキシR⁵が

【式】である化合 物を得る。 実施例 12 S31794／Ｆ−１核のアシル化 S31794／Ｆ−１核（10.2ミリモル）およびＮ−
（ｎ−ドデカノイル）−ｐ−アミノ安息香酸・２，
４，５−トリクロロフエニルエステル（10.2ミリ
モル）をジメチルホルムアミド（100ml）に溶か
し、室温で15時間撹拌する。溶媒を減圧留去し、
得られた残渣をジエチルエーテルで２回洗う。洗
液は棄て、洗浄した残渣をメタノール（50ml）に
溶かし、固定相としてPrep Pak−500／C₁₈カラ
ム（（Water Associates、Inc.）を用いたPrep
LC／System500unit−（Water Associates、
Inc.）による逆相HPLCにより精製する。カラム
は、500psiの圧力で、水−メタノール−アセトニ
トリル（25：65：10v／ｖ）で定常的に溶離す
る。画分を、シリカゲル板上、水メタノール−ア
セトニトリル（25：65：10v／ｖ）を溶媒系とし
た薄層クロマトグラフイーで分析する。目的生成
物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して
S31794／Ｆ−１核のＮ−（ｎ−ドデカノイル）−
ｐ−アミノベンゾイル誘導体を得る。 デボノ基誘導体の製造 下記のようにして、一般式においてR⁵が

【式】である化合物と、 すなわち一般式のデボノ化合物を製造しう
る。 参考製造例 ４ ｐ−（ｎ−オクチルオキシ）安息香酸の製造 ｐ−ヒドロキシ安息香酸（19.2ｇ；150ミリモ
ル）を10％水性水酸化ナトリウム（120ml）に溶
かし、これを、あらかじめ80℃に加熱したジメチ
ルスルホキシド（DMSO）（480ml）に加える。
これに更にｎ−オクチル・ブロミド（28.95ｇ、
150ミリモル）を滴加し、混液を室温で４時間撹
拌した後、氷水1200ml中に注ぐ。濃塩酸（30ml）
を加え、沈澱が完結するまで放置する。沈澱を集
め、乾燥後、アセトニトリル−水から結晶化す
る。 融点97〜99℃ 元素分析（C₁₅H₂₂O₃として） 計算値：Ｃ、71.97；Ｈ、8.86 実測値：Ｃ、71.72；Ｈ、9.10 参考製造例 ５ ｐ−（ｎ−オクチルオキシ）安息香酸・２，４，
５−トリクロロフエニルエステルの製造 ｐ−（ｎ−オクチルオキシ）安息香酸（6.18ｇ、
24.7ミリモル）、２，４，５−トリクロロフエノ
ール（5.39ｇ、27.2ミリモル）、およびＮ，N′−
ジシクロヘキシルカルボジイミド（4.94ｇ、24.7
ミリモル）を塩化メチレン（200ml）に溶かし、
この溶液を室温で18時間撹拌し、濾過する。濾液
を濃縮し、得られた油状物をアセニトリル−水か
ら結晶化してｐ−（ｎ−オクチルオキシ）安息香
酸・２，４，５−トリクロロフエニルエステルを
得る。NMR：δ4.02（2H、ｔ、Ｊ＝３Hz）、7.0
（1H、ｄ、Ｊ＝４Hz）、7.23（ｓ、1H）、7.3（ｓ、
1H）、8.08（ｄ、1H、Ｊ＝４Hz）。 実施例 13 Ａ−30912A核のアシル化 Ａ−30912A核（14.2ｇ、17.8ミリモル）および
ｐ−（ｎ−オクチルオキシ）安息香酸・２，４，
５−トリクロロフエニルエステル（15.32ｇ、
35.7ミリモル）をジメチルホルムアミド（150ml）
に溶かし、この溶液を室温で16〜20時間撹拌す
る。溶媒を減圧留去し、残渣をジエチルエーテル
で２回、塩化メチレンで２回洗う。洗液は棄て、
洗浄した残渣を酢酸エチル：メタノール（１：
３）（80ml）に溶かし、固定相としてシリカゲル
を用い、Prep LC／System500unitにより高速
HPLC処理して精製する。カラムをメタノール−
酢酸エチル（１：４〜２：３）で段階的に溶出す
る。画分をシリカゲル（Merck）上、酢酸エチ
ル−メタノール（３：2v／ｖ）を溶媒系として
薄層クロマトグラフイーにより分析する。Ａ−
30912A核を含まない画分を合わせ、凍結乾燥し
てＡ−30912A核のｐ−（ｎ−オクチルオキシ）ベ
ンゾイル誘導体［R¹、R³およびR⁴がOH、R²が
Ｈ、そしてR⁵がｐ−（ｎ−オクチルオキシ）フエ
ニルである式の化合物を得る。収量7.13ｇ。 M⁺23：1052（FDMSによる） 実施例 14 Ａ−30912B核のアシル化 Ａ−30912B核（17.8ミリモル）およびｐ−（ｎ
−オクチルオキシ）安息香酸（35.7ミリモル）を
ジメチルホルムアミド（150ml）に溶かし、室温
で16〜20時間撹拌する。溶媒を減圧下で留去し、
得られた残渣をジエチルエーテルで２回、塩化メ
チレンで２回洗う。洗液は棄て、洗浄した残渣を
酢酸エチル：メタノール（１：３）（80ml）に溶
かし、固定相としてシリカゲルを用い、Prep
LC／System500＝unitによるHPLCによつて精製
する。カラムは、メタノール−酢酸エチル（１：
４〜２：３）溶媒系を用いて段階的に溶離する。
画分をシリカゲル（Merck）上、酢酸エチル−
メタノール（３：2v／ｖ）を溶媒系として薄層
クロマトグラフイーにより分析する。Ａ−
30912B核を含まない画分を集め、凍結乾燥して
Ａ−30912B核のｐ−（ｎ−オクチルオキシ）ベン
ゾイル誘導体を得る。 実施例 15 Ａ−30912D核のアシル化 Ａ−30912D核（17.8ミリモル）およびｐ−（ｎ
−オクチルオキシ）安息香酸・２，４，５−トリ
クロロフエニルエステル（35.7ミリモル）をジメ
チルホルムアミド（150ml）に溶かし、室温で16
〜20時間撹拌する。溶媒を減圧留去し、残渣をジ
エチルエーテルで２回、ついで塩化メチレンで２
回洗う。洗液は棄て、洗浄された残渣を酢酸エチ
ル−メタノール（１：３）（80ml）に溶かし、固
定相としてシリカゲルを用いたPrep LC／
System500unitを用いるHPLCにより精製する。
カラムは、メタノール−酢酸エチル（１：４〜
２：３）で段階的に溶出する。画分はシリカゲル
上、酢酸エチル−メタノール（３：2v／ｖ）を
溶媒系とする薄層クロマトグラフイーで分析す
る。Ａ−30912D核を含まない画分を集め、凍結
乾燥してＡ−30912D核のｐ−（ｎ−オクチルオキ
シ）ベンゾイル誘導体を与える。 実施例 16 Ａ−30912H核のアシル化 Ａ−30912H核（17.8ミリモル）およびｐ−（ｎ
−オクチルオキシ）安息香酸・２，４，５−トリ
クロロフエニルエステル（35.7ミリモル）をジメ
チルホルムアミド（150ml）に溶かし、溶液を室
温で16〜20時間撹拌する。溶媒を減圧下で留去
し、残渣をジエチルエーテルで２回、ついで塩化
メチレンで２回洗う。洗液は棄て、洗浄した残渣
を酢酸エチル−メタノール（１：３）（80ml）に
溶かし、固定相としてシリカゲルを用いたPrep
LC／System500unitによるHPLCによつて精製す
る。カラムは、メタノール−酢酸エチル（１：４
〜２：３）溶媒系を用いて段階的に溶離する。画
分は、シリカゲル（Merck）上、酢酸エチル−
メタノール（３：2v／ｖ）を溶媒系とする薄層
クロマトグラフイーにより分析する。Ａ−
30912H核を含まない画分を集め、凍結乾燥して
Ａ−30912H核のｐ−（ｎ−オクチルオキシ）ベン
ゾイル誘導体を得る。 実施例 17 一般式においてR¹およびR⁴がOH、R²がＨ、
R³がｎ−ヘキシルオキシである化合物（製造例
30の方法により製造）を出発原料として用い、製
造例31の操作に従うと、一般式においてR¹お
よびR⁴がOH、R²がＨ、R³がｎ−ヘキシルオキ
シR⁵が

【式】である化合 物を得る。 実施例 18 S31794／Ｆ−１核のアシル化 S31794／Ｆ−１核（17.8ミリモル）およびｐ−
（ｎ−オクチルオキシ）安息香酸・２，４，５−
トリクロロフエニルエステル（35.7ミリモル）を
ジメチルホルムアミド（150ml）に溶かし、これ
を室温で16〜20時間撹拌する。溶媒を減圧留去
し、残渣をジエチルエーテルで２回、ついで塩化
メチレンで２回洗う。洗液は棄て、洗浄した残渣
を酢酸エチル−メタノール（１：３）（80ml）に
溶かし、固定相としてシリカゲルを用いたPrep
LC／System500unitによるHPLCによつて精製す
る。カラムは、メタノール−酢酸エチル（１：４
〜２：３）溶媒系で段階的に溶出する。画分は、
シリカゲル（Merck）上、酢酸エチル−メタノ
ール（３：2v／ｖ）を溶媒系とした薄層クロマ
トグラフイーて分析する。S30794／Ｆ−１核を
含まない画分を集め、凍結乾燥してS31794／Ｆ
−１核のｐ−（ｎ−オクチルオキシ）ベンゾイル
誘導体を得る。 実施例 19 式の化合物の抗かび作用は、標準的なデイス
ク拡散法および寒天希釈法によつて生体外活性
を、またかび類による全身感染に対する効力をマ
ウスを用いる標準的方法で生体内活性を、それぞ
れ検定することによつて証明される。式の代表
的な化合物について抗かび試験の結果を評から
に示す。 表およびは、実施例１、７および13の化合
物の、寒天平板デイスク拡散法による生体外試験
結果を示している。表は、被験化合物により産
生された微生物の阻止域の大きさ（直径をmmで測
定）により活性を示している。表は、検定菌の
成育を阻止するのに要する被検物質（μｇ／デイ
スク）の最少阻止濃度（MIC）により活性を示
している。表は、Candida albicans5株に対す
るＡ−30912A核のｐ−（ｎ−オクチルオキシ）ベ
ンゾイル誘導体の寒天希釈法による生体外試験結
果を示している。表は、検定菌を阻止するのに
要する被検物質の最少阻止濃度（MIC、mg／ml）
の値で示している。 マウスでのCandida albicansA−26感染症に対
する誘導体の効果を評価した生体内試験結果を表
に示す。同表において、活性はED₅₀値（検定
マウスの50％を治癒させるのに要した投与量を
mg／Kgで表わした数値）で表わされている。
ED₅₀値が得られなかつたものについては、有意
な抗かび効果が得られる最低用量で活性を示す。
この試験では、体重18−20ｇの雄マウス（albino
mice、specific pathogen free）の群を用い、
Candida albicans Ａ−26を静脈内感染させる。
動物は、感染微生物に対する免疫反応を制御する
ために、感染処理の24時間前に毎分約50レントゲ
ンのＸ線照射を８分間行う（合計線量400レント
ゲン）。感染処理後０、４および24時間経過時に、
各群のマウスに被験化合物を33％ポリエチレング
リコール（PEG）−水に懸濁していくつかの用量
で皮下投与し、各動物の死亡日を記録する。各用
量で、感染−処置群と10匹の感染−未処置群との
間で平均死亡日を統計的（Student′st test）に比
較し、処理により存在期間が有意に延長されたか
どうかを決定する。 表は、経口投与後の吸収を、実施列１、７お
よび13の化合物について試験した結果である。こ
の試験では、416mg／Kgの被験化合物を33％
PEG400−水に懸濁し、マウスに強制接種させ
る。一定時間において眼窩洞（orbital sinus）よ
り採血し、次のようにして抗菌活性を検定する。
全血20μを含浸させた７mmのデイスクを、
Aspergillus montevidensis A35137を接種した
寒天上に置き、30℃で40時間培養して得られる阻
止域を、被験化合物で得られる標準値と比較して
血液試料中の量を計算する。

【表】

【表】

【表】

【表】

【表】 に対する活性によつて検定。

【図面の簡単な説明】

図１は、Ａ−30912A核をKBrデイスクで測定
した赤外吸収スペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 下記一般式： ［式中、R¹はOHであり、R²はＨであり、R³は
   OHであり、R⁴はOHであり、R⁵はドデシル、Ｎ
   −（ｎ−ドデカノイル）−ｐ−アミノフエニルもし
   くはｐ−（ｎ−オクチルオキシ）フエニルを表わ
   す。］ で示される環状ペプチド核誘導体。 ２ R⁵がｐ−（ｎ−オクチルオキシ）フエニルで
   ある特許請求の範囲第１項記載の化合物。