JPH0361675B2 - - Google Patents

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JPH0361675B2
JPH0361675B2 JP58026032A JP2603283A JPH0361675B2 JP H0361675 B2 JPH0361675 B2 JP H0361675B2 JP 58026032 A JP58026032 A JP 58026032A JP 2603283 A JP2603283 A JP 2603283A JP H0361675 B2 JPH0361675 B2 JP H0361675B2
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JP
Japan
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ss9816c
antibiotic
culture
water
properties
Prior art date
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JP58026032A
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English (en)
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JPS59151892A (ja
Inventor
Masa Narita
Kenichi Yano
Takemitsu Asaoka
Kenichi Kukita
Koichi Yokoi
Toshiaki Nakajima
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SSP Co Ltd
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SSP Co Ltd
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Publication date
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  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】
本発明は新規な抗生物質SS9816Cに関する。 本発明者らは天然の土壌より数多くの微生物を
単離し、その生産物について種々研究を行なつた
結果、千葉県鹿野山の土壌から分離した菌株がグ
ラム陽性菌に対し優れた抗菌力を有し、かつ抗腫
瘍作用を有する新規な抗生物質SS9816Cを生産す
ることを見出し本発明を完成した。 すなわち本発明は新規な抗生物質SS9816Cを提
供するものである。 本発明の抗生物質SS9816Cを産生するS9816株
は次のような菌学的性質を有する。 (1) 形態 気菌糸の分枝は単純分枝で車軸分枝は認められ
ない。気菌糸の先端部はらせん状である。基生菌
糸は通常分断しない。胞子のう及び鞭毛胞子は認
められない。電子顕微鏡観察によると、胞子の表
面は平滑であり、形は円筒形である。胞子の大き
さは0.7〜0.9×0.8〜1.5μmであり、通常10個以上
が連鎖している。 (2) 各種培地における生育状態 S9816株の各種培地上での生育状態は次表のと
おりである。観察は27℃、14日培養後に行つた。 色の記載には、日本色研事業(株)発行の「色名小
辞典」を用いその系統色名で表示した。
【表】 (3) 生理的物質 生育温度範囲(イースト・スターチ寒天培地、
14日培養) 生育可能温度 8〜33℃ 生育至適温度 24〜30℃ ゼラチンの液化 陽性 スターチの加水分解 陽性 脱脂乳の凝固 陽性 脱脂乳のペプトン化 陽性 メラニン様色素の生成 陰性 硝酸塩の還元 陰性 セルロースの分解 陰性 耐塩性:7%NaCl添加培地で生育するが10
%では生育しない。 (4) 炭素源の利用性(プリドハム・ゴドリーブ寒
天培地、27℃、14日培養) L−アラビノース + D−キシロース + D−グルコース + D−フラクトース + シユクロース + イノシトール − L−ラムノース + ラフイノース + D−マンニツト − ガラクトース + サリシン + ラクトース + D−マンノース + (注)+は利用する、−は利用しない。 (5) 細胞壁組成 細胞壁組成成分中のジアミノピメリン酸を分析
した結果LL型であつた。 以上の菌学的性状から、本S9816株はストレプ
トミセス属に属すると判断される。更に該株は気
菌糸の先端はらせん形で10個以上の胞子が連鎖
し、胞子表面は平滑である;気菌糸の色はグレイ
カラーシリーズないしはグリーンカラーシリーズ
で裏面の色は無色〜うすい黄〜黄みのブラウン〜
灰みのオリーブである;可溶性色素はうすい黄〜
ブラウンみのオリーブ〜あさい赤みのブラウム〜
にぶい赤である;裏面の色及び可溶性色素はPH指
示色でない及びメラニン様色素を生成しない等の
特徴を有する。 本発明者らは、以上の菌学的性状を有する
S9816株をストレプトミセス・エスピーS9816
(Streptomyces sp.S9816)と命名して、工業技
術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第6886号
(FERM P−6886)として寄託した。 本発明の抗生物質SS9816Cは上記菌株を栄養源
含有培地に接種し、好気的に培養することにより
製造される。抗生物質SS9816C生産株としては上
記S9816株はもとより、その人工変異株あるいは
自然変異株であつても抗生物質SS9816Cを生産す
る能力を有するものであれば、すべて使用するこ
とができる。上記S9816株の人工変異株は、他の
放線菌の場合同様、例えば紫外線、コバルト60照
射、化学変異誘起剤等により容易に得ることがで
きる。 つぎに、抗生物質SS9816Cの製造における菌株
の培養について説明する。すなわち、ストレプト
ミセス属に属する抗生物質 SS9816C生産菌株の培養には通常の放線菌の培
養法が用いられる。 栄養培地としては、資化しうる炭素源、窒素
源、無機物などを適当に含有する限り、合成培
地、半合成培地あるいは天然培地のいずれでも使
用可能である。 炭素源としては、例えば、グルコース、フラク
トース、シユクロース、アラビノース、澱粉、グ
リセリン、デキストリン、糖蜜等が単独または組
合せて用いられる。さらに菌の資化性によつて炭
化水素、アルコール類、有機酸等も用い得る。窒
素源としては、無機もしくは有機窒素化合物、例
えば塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸
アンモニウム、尿素、硝酸ソーダ、グルタミン酸
ソーダなど、または天然物、例えば大豆抽出物、
大豆粉、酵母エキス、乾燥酵母、綿実粕、ベジタ
ブル・プロテイン、ソイトン等が単独または組合
せて用いられる。無機物としては例えば炭酸カル
シウム、塩化ナトリウム、硫酸銅、塩化マンガ
ン、硫酸亜鉛等が単独または組合せて用いられ
る。その他S9816株の発育を助けSS9816Cの生産
を促進する物質あるいはシリコン油又はアデカノ
ール(商品名)等の一般的消泡剤を適宜培地に添
加することもできる。 培養法としては一般の抗生物質の生産に用いら
れる方法が採用されるが、液体培養法、特に振盪
培養法が最も適している。培養は好気的条件下で
行われ、培養に適当な温度は24〜30℃であるが、
一般に27℃付近で培養するのが好ましい。抗生物
質SS9816Cは振盪培養、深部撹拌培養の何れの場
合もその生産量は5〜8日間の培養で最高に達す
る。培養物中の抗生物質SS9816Cの蓄積量が最高
になつた時に培養を停止し、培養液中から目的物
質を単離・精製する。培養液中からの抗生物質
SS9816Cの単離は、後記実施例に示す如く、本抗
生物質の理化学的性状を考慮して種々の方法を単
独で、あるいは適宜組合せることによつて行なわ
れる。 すなわち、抗生物質SS9816Cは通常菌体及び培
養液中に存在するので、培養物を遠心分離、又は
過等によつて菌体を分離し、その菌体及び培養
液から通常の分離手段、例えば沈澱法、溶媒抽
出法、イオン交換樹脂法、ゲル過法、吸着又は
分配カラムクロマト法、透析法などを単独で、あ
るいは適宜組合せて抗生物質SS9816Cを分離精製
する。 好ましい分離精製法の例としては、次の方法が
挙げられる。醗酵を終了した培養物に希塩酸を加
え、PH2.0とし、遠心分離により菌体を含めた沈
澱物を得る。この沈澱物に適当な溶媒例えばアセ
トンを加えよく混合して抽出過する。次いで
過残渣をクロロホルムで抽出し、液を合わせ、
この抽出液に適当量の水を加え分配し下層をと
る。この下層を減圧留去し、残渣をn−ヘキサン
で洗滌したのちシリカゲルカラムクロマトグラフ
イーに付す。活性画分を集め、減圧濃縮後、残渣
を適当な溶媒例えばエタノールで再結晶すると
SS9816Cの暗紫色の微細結晶が得られる。 以上の如くして得られたSS9816Cは次のような
理化学的性質及び生物学的性質を有する。 (1) 理化学的性質 元素分析 C H N 実験値(%) 67.29 4.13 2.38 理論値(%) 67.27 4.19 2.53 分子量 553.52 融点 270℃(分解) 紫外線吸収スペクトル 第1図 λEtOH nax(E1% 1cm)257nm(265),280nm (285),503nm(94),539nm(178),568nm
(180),580nm(209), 赤外線吸収スペクトル(KBr法) 第2図 1H−NMRスペクトル(90MHz) 重クロロホルム/重トリフルオロ酢酸(10:1)
混合溶液中TMSを基準物質として測定した 第3図 マススペクトル(EI70eV) M+m/z553 溶剤に対する溶解性 クロロホルム、アセトン、エタノール、メタノ
ール、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ピリジ
ン、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン
−水混液に可溶。n−ヘキサン、水に難溶。 塩基性、酸性、中性の区別 酸性 物質の色及び性状 暗紫色の微細結晶 アルカリ水中で青色 酸性水中で赤色を呈する 薄層クロマトグラフイー 担体:シリカゲルプレートF254(メルク社製)
【表】 分子式 C31H23NO9 (2) 生物学的性質 抗菌作用 抗生物質SS9816Cの各種微生物に対する最小発
育阻止濃度(MIC)を第1表に示す。
【表】
【表】 試験菌培養条件:イノキユラムサイズ
106cells/mlバクテリアの場合はミユーラー・ヒ
ントン・アガー(Difco)で37℃にて18〜20時間
培養。 酵母・カビの場合はグルコース・ペプトン培地
で28℃にて120時間培養。 抗腫瘍作用 抗生物質SS9816Cのマウス白血病P−388、ザ
ルコーマ180(S−180)およびエールリツヒ カ
ルシノーマ(Ehrlich)に対する治療効果を下記
方法により試験した。結果を第2表に示す。なお
表中の延命効果は無処理群の生存日数(C)に対する
治療群の生存日数(T)の比を百分率を以つて表
わした。 実験方法 P−388:106個のP−388細胞をCDF(〓,日
本チヤールズリバー)の腹腔内に移植し、
24時間後より抗生物質SS9816Cを1日回計
10回腹腔内に投与した。 S−180及びEhrlich: 5×106個の腫瘍細胞をICRマウス(♀,日本
クレア)の腹腔内に移植し、24時間後より抗生物
質SS9816Cを1日1回計10回腹腔内に投与した。
【表】 以上述べた諸性質を本発明化合物に類似する既
知抗生物質のそれと比較したが該当する物質はな
くSS9816Cは新規な抗生物質と判断された。 これらの結果から明らかな様に抗生物質
SS9816Cはグラム陽性細菌に強い抗菌力を有して
いる。またマウス白血病P−388,ザルコーマ180
およびエールリツヒ カルシノーマ 腹水癌に対
しても顕著な治療効果を示している。これらの抗
菌活性および抗腫瘍活性からみて抗生物質
SS9816Cは医療用の抗生物質として有用な物質で
ある。 次に実施例を挙げて本発明を説明する。 実施例 SS9816Cの生産菌ストレプトミセス・エスピー
S9816(微工研菌寄第6886号)を可溶性澱粉4.0%、
グルコース4.0%、ソイトン1.0%、酵母エキス1.0
%、塩化ナトリウム0.25%、炭酸カルシウム0.32
%、硫酸銅0.0005%、塩化マンガン0.0005%、硫
酸亜鉛0.005%(PH7.0)の液体培地に接種し、27
℃2日間振盪培養して種培養液を作成する。同じ
培地組成からなる液体培地120mlを500ml容坂ロフ
ラスコに仕込み、これに前記の種培養液0.6mlを
接種し、往復式振盪培養機にて振巾9cm、廻転数
110r.p.m、培養温度27℃の条件下で7日間培養す
る。培養終了後、培養液10に希釈塩酸を加え、
PH2.0とし、遠心分離により、菌体を含めた沈澱
物を得た。この沈澱物にアセトン1を加えてよ
く撹拌して抽出し過し、液と過残渣とに分
けた。過残渣にクロロホルム1を加え、よく
撹拌して抽出し、過し、液を得る。この操作
を数回繰返し液を合わせた。この抽出液に水2
を加えて分配し、下層を分取した。この下層を
減圧下濃縮乾固し、少量のn−ヘキサンで洗浄し
乾燥すると赤色粉末800mgが得られた。上記赤色
粉末を1%酢酸含有クロロホルムに溶解し、あら
かじめ1%酢酸含有クロロホルムで充填したキー
ゼルゲル60(メルク社製)100gのカラムに通導
し、同溶媒で溶出し、溶出される画分を除去した
後、酢酸−クロロホルム−メタノール(1:
100:2)混液で溶出する。溶出画分のうち抗生
物質SS9816Cの含まれる画分を集め減圧濃縮し
た。濃縮物を冷所に放置し、析出した結晶を取
した(35mg)。これをエタノールにより再結晶し、
SS9816Cの暗紫色微細結晶20mgを得た。
【図面の簡単な説明】
第1図は抗生物質SS9816Cの紫外線吸収スペク
トル(エタノール溶液中)を示す。第2図は抗生
物質SS9816Cの赤外線吸収スペクトル(KBr錠
剤)を示す。第3図は抗生物質SS9816Cの1H−
NMRスペクトル〔重クロロホルム/重トリフル
オロ酢酸(10:1)混合溶液中〕を示す。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1 下記の理化学的性質を有する新規抗生物質
    SS9816C。 元素分析 C H N 実験値(%) 67.29 4.13 2.38 理論値(%) 67.27 4.19 2.53 分子量 553.52 融点 270℃(分解) 紫外線吸収スペクトル 第1図 λEtoH nax(E1% 1cm)257nm(265), 280nm(285),503nm(94), 539nm(178),568nm(180),580nm(209) 赤外線吸収スペクトル(KBr法) 第2図 1H−NMRスペクトル(90MHz) 重クロロホルム/重フルオロ酢酸(10:1)混
    合溶液中TMSを基準物質として測定した。 第3図 マススペクトル(EI70eV) M+m/z553 溶剤に対する溶解性 クロロホルム、アセトン、エタノール、メタノ
    ール、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ピリジ
    ン、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン
    −水混液に可溶。n−ヘキサン、水に難溶。 塩基性、酸性、中性の区別 酸性 物質の色及び性状 暗紫色の微細結晶 アルカリ性水中で青色 酸性水中で赤色を呈する 薄層クロマトグラフイー 担体:シリカゲルプレートF254(メルク社製) 【表】 分子式 C31H23NO9
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