JPH0367584A - 細胞培養用担体 - Google Patents
細胞培養用担体Info
- Publication number
- JPH0367584A JPH0367584A JP1201414A JP20141489A JPH0367584A JP H0367584 A JPH0367584 A JP H0367584A JP 1201414 A JP1201414 A JP 1201414A JP 20141489 A JP20141489 A JP 20141489A JP H0367584 A JPH0367584 A JP H0367584A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- carrier
- cells
- culture
- calcium phosphate
- cell culture
- Prior art date
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- Pending
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- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〈産業上の利用分野〉
本発明は、接着増殖性細胞を培養するための細胞培養用
担体及び該担体を充填してなるカラム式連続培養装置に
関する。
担体及び該担体を充填してなるカラム式連続培養装置に
関する。
〈従来の技術〉
従来、細胞培養用担体としては、多孔性ガラス等が使用
されているにすぎず、該多孔性ガラスの気孔率と細胞培
養における増殖等との関連については検討されているも
のの、担体の材質と、細胞付着性との関連については、
全く知られていないのが現状である。
されているにすぎず、該多孔性ガラスの気孔率と細胞培
養における増殖等との関連については検討されているも
のの、担体の材質と、細胞付着性との関連については、
全く知られていないのが現状である。
〈発明が解決しようとする課題〉
本発明の目的は、接着増殖性細胞の付着性が良好で、且
つ付着した細胞の活性が高い細胞培養用担体を提供する
ことにある。
つ付着した細胞の活性が高い細胞培養用担体を提供する
ことにある。
本発明の別の目的は、連続的に細胞を増殖、分化させる
ことができ、且つ細胞が産生ずる有用物質を収集するこ
とができるカラム式連続培養装置を提供することにある
。
ことができ、且つ細胞が産生ずる有用物質を収集するこ
とができるカラム式連続培養装置を提供することにある
。
く課題を解決するための手段〉
本発明によれば、リン酸カルシウム化合物を含む担体材
料からなる接着増殖性細胞を培養するための細胞培養用
担体が提供される。
料からなる接着増殖性細胞を培養するための細胞培養用
担体が提供される。
また本発明によれば培養用の培地を流通させることによ
って、連続的に細胞を増殖、分化させ。
って、連続的に細胞を増殖、分化させ。
且つ得られる溶出液より、前記細胞が産生ずる有用物質
を収集するための培養装置であって、該培養装置が、前
記細胞培養用担体を管内に充填してなることを特徴とす
るカラム式連続培養装置が提供される。
を収集するための培養装置であって、該培養装置が、前
記細胞培養用担体を管内に充填してなることを特徴とす
るカラム式連続培養装置が提供される。
以下本発明を更に詳細に説明する。
本発明の細胞培養用担体は、接着増殖性細胞、具体的に
は例えば株化された前原性細胞ＭＣ３Ｔ３Ｅ１．各種線
維芽細胞、内皮細胞、筋細胞、神経細胞等を培養するた
めの担体であって、リン酸カルシウム化合物を含む担体
材料を成分とすることを特徴とする。
は例えば株化された前原性細胞ＭＣ３Ｔ３Ｅ１．各種線
維芽細胞、内皮細胞、筋細胞、神経細胞等を培養するた
めの担体であって、リン酸カルシウム化合物を含む担体
材料を成分とすることを特徴とする。
本発明に用いるリン酸カルシウム化合物としては、例え
ば水酸アパタイト、リン酸三カルシウム。
ば水酸アパタイト、リン酸三カルシウム。
リン酸四カルシウム、フッ素アパタイト、炭酸アパタイ
ト及びこれらの混合物等から成る群より選択される化合
物又は混合物を好ましく挙げることができ、特に細胞の
付着性が良好であり、且つ接着増殖性細胞の活性を高く
することができろ水酸アパタイトを用いるのが望ましい
、前記リン酸カルシウム化合物の形状は、リアクター容
器の種類により、種々選択することができ１例えば多孔
体、顆粒状等とすることができる。また、リン酸カルシ
ウム化合物の比表面積（ガス吸着法による）は、０．１
〜７０ｒｒｒ／ｇの範囲であるのが好ましく、特にリン
酸カルシウム化合物表面の５０％以上に０．１μｍ以上
の凹凸構造を設けることにより、接着増殖性細胞の付着
性を更に向上させることができる。
ト及びこれらの混合物等から成る群より選択される化合
物又は混合物を好ましく挙げることができ、特に細胞の
付着性が良好であり、且つ接着増殖性細胞の活性を高く
することができろ水酸アパタイトを用いるのが望ましい
、前記リン酸カルシウム化合物の形状は、リアクター容
器の種類により、種々選択することができ１例えば多孔
体、顆粒状等とすることができる。また、リン酸カルシ
ウム化合物の比表面積（ガス吸着法による）は、０．１
〜７０ｒｒｒ／ｇの範囲であるのが好ましく、特にリン
酸カルシウム化合物表面の５０％以上に０．１μｍ以上
の凹凸構造を設けることにより、接着増殖性細胞の付着
性を更に向上させることができる。
本発明の細胞培養用担体に用いる前記リン酸カルシウム
化合物をＩｌ製するには、公知の焼成方法等により得る
ことができ、例えばリン酸カルシウムの焼成温度により
コントロールすることができる。
化合物をＩｌ製するには、公知の焼成方法等により得る
ことができ、例えばリン酸カルシウムの焼成温度により
コントロールすることができる。
本発明では、接着増殖性細胞の付着性及び増殖性を更に
向上させるために、担体材料として、前記リン酸カルシ
ウム化合物に、更に接着増殖性細胞を接着及び伸展させ
る因子を含有させることもできる。前記因子は、接着増
殖性細胞の種類により適宜選択することができる。具体
的には例えば、フィブロネクチン、オステオネクチン、
コンドロネクチン、コラーゲン、フィブリン等を好まし
く挙げることができ、使用に際しては、単独若しくは混
合物として用いることができる。前記因子の使用量は、
特に限定されるものではないが、好ましくはリン酸カル
シウム化合物１００重量部に対して、０．００１〜１０
重量部の範囲で用いることができる。
向上させるために、担体材料として、前記リン酸カルシ
ウム化合物に、更に接着増殖性細胞を接着及び伸展させ
る因子を含有させることもできる。前記因子は、接着増
殖性細胞の種類により適宜選択することができる。具体
的には例えば、フィブロネクチン、オステオネクチン、
コンドロネクチン、コラーゲン、フィブリン等を好まし
く挙げることができ、使用に際しては、単独若しくは混
合物として用いることができる。前記因子の使用量は、
特に限定されるものではないが、好ましくはリン酸カル
シウム化合物１００重量部に対して、０．００１〜１０
重量部の範囲で用いることができる。
また本発明では、前記細胞培養用担体を管内に充填する
ことにより、培養用の培地を流通させることによって、
連続的に細胞を増殖、分化させ。
ことにより、培養用の培地を流通させることによって、
連続的に細胞を増殖、分化させ。
且つ得られる溶出液から、前記細胞が産生ずる有用物質
を収集するためのカラム式連続培養装置を得ることがで
きる。前記細胞培養用担体を管内に充填するには、例え
ばカラム等にリン酸カルシウム化合物を充填し、接着増
殖性細胞の培養液、即ち培養用の培地を添加する方法等
により行うことができる。また前記接着及び伸展させる
因子を用いる場合には、前記因子を培養液等によって希
釈した後、リン酸カルシウム化合物を浸漬させる方法、
カラム中にリン酸カルシウム化合物を充填した後、前記
因子を添加した培養液を通過させる方法又はリン酸カル
シウム化合物と培養液との混合物を撹拌しながら前記因
子を添加する方法等により行なうことができる。前記培
養液、即ち培養用の培地を調製するには、既にイーグル
らによって確立されている動物細胞培養用の培地、即ち
最小必要培地の処方等に従って、塩類、アミノ酸、必須
栄養物等の溶液を調製し、滅菌した後、さらにコウジ血
清等を添加する方法等により得ることができる。
を収集するためのカラム式連続培養装置を得ることがで
きる。前記細胞培養用担体を管内に充填するには、例え
ばカラム等にリン酸カルシウム化合物を充填し、接着増
殖性細胞の培養液、即ち培養用の培地を添加する方法等
により行うことができる。また前記接着及び伸展させる
因子を用いる場合には、前記因子を培養液等によって希
釈した後、リン酸カルシウム化合物を浸漬させる方法、
カラム中にリン酸カルシウム化合物を充填した後、前記
因子を添加した培養液を通過させる方法又はリン酸カル
シウム化合物と培養液との混合物を撹拌しながら前記因
子を添加する方法等により行なうことができる。前記培
養液、即ち培養用の培地を調製するには、既にイーグル
らによって確立されている動物細胞培養用の培地、即ち
最小必要培地の処方等に従って、塩類、アミノ酸、必須
栄養物等の溶液を調製し、滅菌した後、さらにコウジ血
清等を添加する方法等により得ることができる。
〈発明の効果〉
本発明の細胞培養用担体は、リン酸カルシウム化合物を
、必須の構成成分として含有するので、従来の培養用担
体に比して、接着増殖性細胞の付着性が良好であり、且
つ付着した細胞の活性を高くすることができる。また前
記細胞培養用担体を充填したカラム式連続培養装置は、
連続的に細胞を培殖分化させることができ、且つ付着し
た細胞が作り出す有用物質を効率よく製造することがで
きるのでバイオリアクターとして極めて有用である。
、必須の構成成分として含有するので、従来の培養用担
体に比して、接着増殖性細胞の付着性が良好であり、且
つ付着した細胞の活性を高くすることができる。また前
記細胞培養用担体を充填したカラム式連続培養装置は、
連続的に細胞を培殖分化させることができ、且つ付着し
た細胞が作り出す有用物質を効率よく製造することがで
きるのでバイオリアクターとして極めて有用である。
〈実施例〉
以下本発明を実施例及び比較例により詳細に説明するが
、本発明は、これらに限定されるものではない。
、本発明は、これらに限定されるものではない。
失凰量よ
比表面積１０ｎ？／ｇの水酸アパタイト、リン酸三カル
シウム、リン酸四カルシウム又は水酸アパタイトとリン
酸三カルシウムとの混合物（重量比１：１）を１．４３
φＸ３．２ＱＩＬのカラムに夫々充填し１次いで予め骨
芽細胞を約１０＠個分散するようにｒｌＲＷシた培養液
を、前記夫々のカラムに流し込んだ後、骨芽細胞を含ま
ない培養液で１時間洗浄を行って、材料表面に付着して
いない骨芽細胞を流出させた。流出した骨芽細胞の数を
血球計算板により測定し、付着した骨芽細胞の付着率を
測定した。その結果付着率は、水酸アパタイトで８７％
、リン酸三カルシウムで７５％、リン酸カルシウムで７
０％、水酸アパタイトとリン酸三カルシウムとの混合物
で８４％であった。
シウム、リン酸四カルシウム又は水酸アパタイトとリン
酸三カルシウムとの混合物（重量比１：１）を１．４３
φＸ３．２ＱＩＬのカラムに夫々充填し１次いで予め骨
芽細胞を約１０＠個分散するようにｒｌＲＷシた培養液
を、前記夫々のカラムに流し込んだ後、骨芽細胞を含ま
ない培養液で１時間洗浄を行って、材料表面に付着して
いない骨芽細胞を流出させた。流出した骨芽細胞の数を
血球計算板により測定し、付着した骨芽細胞の付着率を
測定した。その結果付着率は、水酸アパタイトで８７％
、リン酸三カルシウムで７５％、リン酸カルシウムで７
０％、水酸アパタイトとリン酸三カルシウムとの混合物
で８４％であった。
生較量よ
りラムに仕込む各材料の代わりに、粒径０．５〜０．３
閣の石英ガラスの顆粒を用いた以外は。
閣の石英ガラスの顆粒を用いた以外は。
実施例１と同様に行って、骨芽細胞の付着率を測定した
。その結果付着率は３６％であった。
。その結果付着率は３６％であった。
失産銖主
実施例１と同様にして、各々のリン酸カルシウム化合物
をカラムに仕込み、骨芽細胞を付着させた後、実施例１
と同じ培養液を用いて、３′日間洗浄を行った６次いで
ＫＩＳＳＡＮＥ−ＲＯＢＩＮＳによる蛍光法により骨芽
細胞中に含まれるデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）の量を測
定したところ、付着率と正の相関関係が認められた。
をカラムに仕込み、骨芽細胞を付着させた後、実施例１
と同じ培養液を用いて、３′日間洗浄を行った６次いで
ＫＩＳＳＡＮＥ−ＲＯＢＩＮＳによる蛍光法により骨芽
細胞中に含まれるデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）の量を測
定したところ、付着率と正の相関関係が認められた。
失凰班１
比表面積１０ボ／ｇ及び粒径０．５〜０．３ｎ。
の水酸アパタイトの顆粒を１．４備φＸ３．２ａａＬの
カラムに詰めた後、フィブロネクチン１０μｇ／−を含
むα−ＭＥＭの培養液１ｍＧを流し込んだ。
カラムに詰めた後、フィブロネクチン１０μｇ／−を含
むα−ＭＥＭの培養液１ｍＧを流し込んだ。
次いで、予め繊維芽細胞的１０６個分散するように！Ｉ
ＩＩＩした培養液を、カラムに流し込んだ後、ＪＩ繊維
芽細胞含まない培養液で１時間洗浄を行って。
ＩＩＩした培養液を、カラムに流し込んだ後、ＪＩ繊維
芽細胞含まない培養液で１時間洗浄を行って。
材料表面に付着していない繊維芽細胞を流出させた。流
出した繊維芽細胞の数を血球計算板により測定し、付着
した繊維芽細胞の付着率を測定した。
出した繊維芽細胞の数を血球計算板により測定し、付着
した繊維芽細胞の付着率を測定した。
その結果、付着率は９８％の高付着率であった。
失胤量土
比表面積がＯ，Ｏｌｄｌｇ、０．１ボ／ｇ、１０ボ／ｇ
、４０ｒｒｒ／ｇ、７０ボ／ｇ及び９０ボ／ｇの粒径０
．５〜０．３−の水酸アパタイト顆粒夫々を用い、実施
例１と同様に骨芽細胞の付着率を測定した。その結果を
表１に示す。
、４０ｒｒｒ／ｇ、７０ボ／ｇ及び９０ボ／ｇの粒径０
．５〜０．３−の水酸アパタイト顆粒夫々を用い、実施
例１と同様に骨芽細胞の付着率を測定した。その結果を
表１に示す。
表 １
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）リン酸カルシウム化合物を含む担体材料からなる接
着増殖性細胞を培養するための細胞培養用担体。 ２）前記担体材料が、更に接着増殖性細胞を接着及び伸
展させる因子を含むことを特徴とする請求項１記載の細
胞培養用担体。 ３）培養用の培地を流通させることによって、連続的に
細胞を増殖、分化させ、且つ得られる溶出液より、前記
細胞が産生する有用物質を収集するための培養装置であ
って、該培養装置が、請求項１又は２記載の細胞培養用
担体を管内に充填してなることを特徴とするカラム式連
続培養装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1201414A JPH0367584A (ja) | 1989-08-04 | 1989-08-04 | 細胞培養用担体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1201414A JPH0367584A (ja) | 1989-08-04 | 1989-08-04 | 細胞培養用担体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0367584A true JPH0367584A (ja) | 1991-03-22 |
Family
ID=16440692
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1201414A Pending JPH0367584A (ja) | 1989-08-04 | 1989-08-04 | 細胞培養用担体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0367584A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4131375A1 (de) * | 1990-10-01 | 1992-04-02 | Mitsubishi Materials Corp | Traeger zum kultivieren von zellen in serumfreiem medium und mit traeger gefuellte saeulenartige vorrichtung |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002155120A (ja) * | 2000-09-07 | 2002-05-28 | Shin Etsu Chem Co Ltd | 高分子化合物、レジスト材料及びパターン形成方法 |
| JP2005150335A (ja) * | 2003-11-14 | 2005-06-09 | Tdk Corp | レジストパターン形成方法並びに磁気記録媒体及び磁気ヘッドの製造方法 |
| JP2007318024A (ja) * | 2006-05-29 | 2007-12-06 | Dainippon Printing Co Ltd | 有機半導体素子、および、有機半導体素子の製造方法 |
| JP2012074616A (ja) * | 2010-09-29 | 2012-04-12 | Kaneka Corp | 有機半導体素子の製造方法および該製造方法によって得られる有機半導体素子 |
| JP2012209290A (ja) * | 2011-03-29 | 2012-10-25 | Fujifilm Corp | レジストパターン形成方法およびそれを用いたパターン化基板の製造方法 |
-
1989
- 1989-08-04 JP JP1201414A patent/JPH0367584A/ja active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002155120A (ja) * | 2000-09-07 | 2002-05-28 | Shin Etsu Chem Co Ltd | 高分子化合物、レジスト材料及びパターン形成方法 |
| JP2005150335A (ja) * | 2003-11-14 | 2005-06-09 | Tdk Corp | レジストパターン形成方法並びに磁気記録媒体及び磁気ヘッドの製造方法 |
| JP2007318024A (ja) * | 2006-05-29 | 2007-12-06 | Dainippon Printing Co Ltd | 有機半導体素子、および、有機半導体素子の製造方法 |
| JP2012074616A (ja) * | 2010-09-29 | 2012-04-12 | Kaneka Corp | 有機半導体素子の製造方法および該製造方法によって得られる有機半導体素子 |
| JP2012209290A (ja) * | 2011-03-29 | 2012-10-25 | Fujifilm Corp | レジストパターン形成方法およびそれを用いたパターン化基板の製造方法 |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4131375A1 (de) * | 1990-10-01 | 1992-04-02 | Mitsubishi Materials Corp | Traeger zum kultivieren von zellen in serumfreiem medium und mit traeger gefuellte saeulenartige vorrichtung |
| GB2248628A (en) * | 1990-10-01 | 1992-04-15 | Mitsubishi Materials Corp | Cell culture in media comprising a calcium phosphate compound as carrier |
| GB2248628B (en) * | 1990-10-01 | 1994-09-07 | Mitsubishi Materials Corp | Cell culturing in serum-free media |
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