JPH04141084A - 無血清細胞培養担体 - Google Patents
無血清細胞培養担体Info
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- JPH04141084A JPH04141084A JP2260522A JP26052290A JPH04141084A JP H04141084 A JPH04141084 A JP H04141084A JP 2260522 A JP2260522 A JP 2260522A JP 26052290 A JP26052290 A JP 26052290A JP H04141084 A JPH04141084 A JP H04141084A
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- JP
- Japan
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- serum
- cells
- carrier
- cell culture
- medium
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- Pending
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0068—General culture methods using substrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/10—Mineral substrates
- C12N2533/18—Calcium salts, e.g. apatite, Mineral components from bones, teeth, shells
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〈産業上の利用分野〉
本発明は、接着増殖性細胞を無血清培地で培養するため
の無血清細胞培養担体及び該担体を充填してなるカラム
式連続培養装置に関する。
の無血清細胞培養担体及び該担体を充填してなるカラム
式連続培養装置に関する。
〈従来の技術〉
従来、細胞培養方法においては、アミノ酸、ビタミン、
必須栄養物、無機塩類等を加えた合成培地に動物血清を
１０％程度加えた培地を使用すること（組織培養の技術
、朝食書店、１９８８）が知られている。しかしながら
、前記動物血清は製造ロフトによる品質の差が大きく、
細胞を培養する際に最適なロフトを選択する必要がある
。また前記動物血清の供給は必ずしも安定しておらず、
工業的規模に適さないという問題がある。更に前記動物
血清を添加した培地においては、血清タンパク質が高濃
度に存在するため、細胞の産生ずる有用物質の分離が困
難であるという問題もある。
必須栄養物、無機塩類等を加えた合成培地に動物血清を
１０％程度加えた培地を使用すること（組織培養の技術
、朝食書店、１９８８）が知られている。しかしながら
、前記動物血清は製造ロフトによる品質の差が大きく、
細胞を培養する際に最適なロフトを選択する必要がある
。また前記動物血清の供給は必ずしも安定しておらず、
工業的規模に適さないという問題がある。更に前記動物
血清を添加した培地においては、血清タンパク質が高濃
度に存在するため、細胞の産生ずる有用物質の分離が困
難であるという問題もある。
〈発明が解決しようとする課題〉
本発明の目的は、無血清培地で接着増殖性細胞を培養す
るための無血清細胞培養担体を提供することにある。
るための無血清細胞培養担体を提供することにある。
本発明の別の目的は、無血清培地を通過させることによ
って、連続的に細胞を増殖、分化させることができ、且
つ細胞が産生ずる有用物質を効率よく収集することがで
きるカラム式連続培養装置を提供することにある。
って、連続的に細胞を増殖、分化させることができ、且
つ細胞が産生ずる有用物質を効率よく収集することがで
きるカラム式連続培養装置を提供することにある。
〈課題を解決するための手段〉
本発明によれば、リン酸カルシウム化合物を含む担体材
料からなる接着増殖性細胞を無血清培地で培養するため
の無血清細胞培養担体が提供される。
料からなる接着増殖性細胞を無血清培地で培養するため
の無血清細胞培養担体が提供される。
また本発明によれば無血清培地を通過させることによっ
て、連続的に細胞を増殖、分化させ、且つ得られる溶出
液により、前記細胞が産生ずる有用物質を効率よく収集
するための培養装置であって、該培養装置が、前記無血
清細胞培養担体を管内に充填してなることを特徴とする
カラム式連続培養装置が提供される。
て、連続的に細胞を増殖、分化させ、且つ得られる溶出
液により、前記細胞が産生ずる有用物質を効率よく収集
するための培養装置であって、該培養装置が、前記無血
清細胞培養担体を管内に充填してなることを特徴とする
カラム式連続培養装置が提供される。
以下本発明を更に詳細に説明する。
本発明の無血清細胞培養担体は、接着増殖性細胞、具体
的には例えば株化された前原性細胞ＭＣ３Ｔ３−Ｅｌ、
各種線維非細胞、内皮細胞、筋細胞、神経細胞またはこ
れらの腫瘍細胞、更にこれらに外来性の遺伝子を導入し
た細胞等を無血清培地で培養するための担体であって、
リン酸カルシウム化合物を含む担体材料を成分とするこ
とを特徴とする。
的には例えば株化された前原性細胞ＭＣ３Ｔ３−Ｅｌ、
各種線維非細胞、内皮細胞、筋細胞、神経細胞またはこ
れらの腫瘍細胞、更にこれらに外来性の遺伝子を導入し
た細胞等を無血清培地で培養するための担体であって、
リン酸カルシウム化合物を含む担体材料を成分とするこ
とを特徴とする。
本発明に用いるリン酸カルシウム化合物としては、例え
ば水酸アパタイト、リン酸三カルシウム、リン酸西カル
シウム、フッ素アパタイト、炭酸アパタイト及びこれら
の混合物等から成る群より選択される化合物又は混合物
を好ましく挙げることができ、特に細胞の付着性が良好
であり、且つ接着増殖性細胞の活性を高くすることがで
きろ水酸アパタイトを用いるのが望ましい。前記リン酸
カルシウム化合物の形状は、リアクター容器の種類によ
り５種々選択することができ、例えば多孔体。
ば水酸アパタイト、リン酸三カルシウム、リン酸西カル
シウム、フッ素アパタイト、炭酸アパタイト及びこれら
の混合物等から成る群より選択される化合物又は混合物
を好ましく挙げることができ、特に細胞の付着性が良好
であり、且つ接着増殖性細胞の活性を高くすることがで
きろ水酸アパタイトを用いるのが望ましい。前記リン酸
カルシウム化合物の形状は、リアクター容器の種類によ
り５種々選択することができ、例えば多孔体。
顆粒状等とすることができる。また、リン酸カルシウム
化合物の比表面積（ガス吸着法による）は。
化合物の比表面積（ガス吸着法による）は。
０．１〜７０ｍ′／ｇの範囲であるのが好ましい。
本発明の無血清細胞培養担体に用いる前記リン酸カルシ
ウム化合物を調製するには、公知の焼成方法等により得
ることができ、例えばリン酸カルシウムの焼成温度によ
りコントロールすることができる。
ウム化合物を調製するには、公知の焼成方法等により得
ることができ、例えばリン酸カルシウムの焼成温度によ
りコントロールすることができる。
また本発明では、前記無血清細胞培養担体を管内に充填
することにより、無血清の培地を通過させることによっ
て、連続的に細胞を増殖、分化させ、且つ得られる溶出
液から、前記細胞が産生ずる有用物質を収集するための
カラム式連続培養装置を得ることができる。前記無血清
細胞培養担体を管内に充填するには、例えばカラム等に
リン酸カルシウム化合物を充填し、接着増殖性細胞の培
地、即ち無血清の培地を添加する方法等により行うこと
ができる。前記無血清の培地を調製するには、既にイー
グルらによって確立されている動物細胞培養用の培地、
即ち最小必要培地の処方等に従って、無機塩類、アミノ
酸、ビタミン、必須栄養物等の溶液を調製し、滅菌した
後、必要に応じて細胞成長因子、ホルモン、細胞接着因
子等を添加する方法等により得ることができる。
することにより、無血清の培地を通過させることによっ
て、連続的に細胞を増殖、分化させ、且つ得られる溶出
液から、前記細胞が産生ずる有用物質を収集するための
カラム式連続培養装置を得ることができる。前記無血清
細胞培養担体を管内に充填するには、例えばカラム等に
リン酸カルシウム化合物を充填し、接着増殖性細胞の培
地、即ち無血清の培地を添加する方法等により行うこと
ができる。前記無血清の培地を調製するには、既にイー
グルらによって確立されている動物細胞培養用の培地、
即ち最小必要培地の処方等に従って、無機塩類、アミノ
酸、ビタミン、必須栄養物等の溶液を調製し、滅菌した
後、必要に応じて細胞成長因子、ホルモン、細胞接着因
子等を添加する方法等により得ることができる。
〈発明の効果〉
本発明の無血清細胞培養担体は、使用する培地中に血清
を含まないので、組成の一定な培地を安定して供給する
ことができ、また細胞に適したロットを選択する必要が
なく培養操作が簡便である。
を含まないので、組成の一定な培地を安定して供給する
ことができ、また細胞に適したロットを選択する必要が
なく培養操作が簡便である。
また前記無血清細胞培養担体を充填したカラム式連続培
養装置は、連続的に細胞を培地、分化させることができ
、且つ付着した細胞が作り出す有用物質を、余分なタン
パク質が存在しないので効率よく分離・精製することが
できるのでバイオリアクターとして極めて有用である。
養装置は、連続的に細胞を培地、分化させることができ
、且つ付着した細胞が作り出す有用物質を、余分なタン
パク質が存在しないので効率よく分離・精製することが
できるのでバイオリアクターとして極めて有用である。
〈実施例〉
以下本発明を実施例及び比較例により詳細に説明するが
、本発明は、これらに限定されるものではない。
、本発明は、これらに限定されるものではない。
ヌ」１」１
比表面積１０ボ／ｇ、粒径０．３〜０．５ｍｍの水酸ア
パタイト顆粒を体積１０ｍＱ、カラムサイズ２、Ｏａｎ
φＸ３．２ａｎＬのカラムに充填し、次いで予め骨原住
細胞株ＭＣ３Ｔ３−Ｅｌ細胞をＩ Ｘ １０’個カラム
に播種した。播種後３日間は１０％牛脂児血清を添加し
たα−ＭＥＭ培地で培養し、以降は無血清α−ＭＥＭ培
地で培養した９培地は２日おきに交換し、その際交換し
た培養後の培地中の乳酸濃度を、乳酸脱水素酵素による
ＮＡＤの還元により測定した。結果を第１図に示す。
パタイト顆粒を体積１０ｍＱ、カラムサイズ２、Ｏａｎ
φＸ３．２ａｎＬのカラムに充填し、次いで予め骨原住
細胞株ＭＣ３Ｔ３−Ｅｌ細胞をＩ Ｘ １０’個カラム
に播種した。播種後３日間は１０％牛脂児血清を添加し
たα−ＭＥＭ培地で培養し、以降は無血清α−ＭＥＭ培
地で培養した９培地は２日おきに交換し、その際交換し
た培養後の培地中の乳酸濃度を、乳酸脱水素酵素による
ＮＡＤの還元により測定した。結果を第１図に示す。
比較例１〜３
カラムの充填材を１粒径０．３〜０．５ｍｍのアルミナ
顆粒（比較例１）、ジルコニア顆粒（比較例２）及び酸
化チタン顆粒（比較例３）にした以外は、実施例１と同
様にして、培地中の乳酸濃度を測定した。比較例１の結
果を第２図に、比較例２の結果を第３図に、また比較例
３の結果を第４図にそれぞれ示す。
顆粒（比較例１）、ジルコニア顆粒（比較例２）及び酸
化チタン顆粒（比較例３）にした以外は、実施例１と同
様にして、培地中の乳酸濃度を測定した。比較例１の結
果を第２図に、比較例２の結果を第３図に、また比較例
３の結果を第４図にそれぞれ示す。
笑凰何ス
粒径０．３〜０．５ｆ１１１の水酸アパタイト顆粒をカ
ラム体積５０ｍＱ、カラムサイズ３．０（！Ｉｔφ×７
．５ａＩＩＬのカラムに充填し、カラム式連続培養装置
を作製した。前記カラムにＭＣ３Ｔ３−Ｅｌ細胞を８．
２Ｘ１０Ｇ個播種し、連続的に無血清培地を、７０ｍＱ
／日の溶比速度で流し、２．４Ｑの培養培地を得た。次
いで得られた培養培地を５０ｍＱまで濃縮し、得られた
濃縮液を５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動にか
けたところ、細胞の産生じたタンパク質が検出された。
ラム体積５０ｍＱ、カラムサイズ３．０（！Ｉｔφ×７
．５ａＩＩＬのカラムに充填し、カラム式連続培養装置
を作製した。前記カラムにＭＣ３Ｔ３−Ｅｌ細胞を８．
２Ｘ１０Ｇ個播種し、連続的に無血清培地を、７０ｍＱ
／日の溶比速度で流し、２．４Ｑの培養培地を得た。次
いで得られた培養培地を５０ｍＱまで濃縮し、得られた
濃縮液を５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動にか
けたところ、細胞の産生じたタンパク質が検出された。
電気泳動の結果を第５図に示す。
第１図は実施例１で培養した培地中の乳酸濃度と培養日
数との関係を示すグラフ、第２図は比較例１で培養した
培地中の乳酸濃度と培養日数との関係を示すグラフ、第
３図は比較例２で培養した培地中の乳酸濃度と培養日数
との関係を示すグラフ、第４図は比較例３で培養した培
地中の乳酸濃度と培養日数との関係を示すグラフ、第５
図は実施例２で得られた濃縮液を電気泳動にかけた際の
結果を示すチャートである。 ａ・・分子量マーカー、ｂ・・細胞生産タンパク質。
数との関係を示すグラフ、第２図は比較例１で培養した
培地中の乳酸濃度と培養日数との関係を示すグラフ、第
３図は比較例２で培養した培地中の乳酸濃度と培養日数
との関係を示すグラフ、第４図は比較例３で培養した培
地中の乳酸濃度と培養日数との関係を示すグラフ、第５
図は実施例２で得られた濃縮液を電気泳動にかけた際の
結果を示すチャートである。 ａ・・分子量マーカー、ｂ・・細胞生産タンパク質。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）リン酸カルシウム化合物を含む担体材料からなる接
着増殖性細胞を無血清培地で培養するための無血清細胞
培養担体。 ２）無血清培地を通過させることによって、連続的に細
胞を増殖、分化させ、且つ得られる溶出液により、前記
細胞が産生する有用物質を効率よく収集するための培養
装置であって、該培養装置が、請求項１記載の無血清細
胞培養担体を管内に充填してなることを特徴とするカラ
ム式連続培養装置。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2260522A JPH04141084A (ja) | 1990-10-01 | 1990-10-01 | 無血清細胞培養担体 |
| GB9119709A GB2248628B (en) | 1990-10-01 | 1991-09-16 | Cell culturing in serum-free media |
| DE19914131375 DE4131375C2 (de) | 1990-10-01 | 1991-09-20 | Verwendung einer Calciumphosphatverbindung als Träger zum Kultivieren von Zellen in serumfreiem Medium |
| FR9112069A FR2667324B1 (fr) | 1990-10-01 | 1991-10-01 | Support pour culture des cellules dans un milieu exempt de serum et dispositif du type colonne garni dudit support. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2260522A JPH04141084A (ja) | 1990-10-01 | 1990-10-01 | 無血清細胞培養担体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04141084A true JPH04141084A (ja) | 1992-05-14 |
Family
ID=17349140
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2260522A Pending JPH04141084A (ja) | 1990-10-01 | 1990-10-01 | 無血清細胞培養担体 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04141084A (ja) |
| DE (1) | DE4131375C2 (ja) |
| FR (1) | FR2667324B1 (ja) |
| GB (1) | GB2248628B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015211665A (ja) * | 2014-01-29 | 2015-11-26 | ダイキン工業株式会社 | 温度応答性基材、その製造方法及びその評価方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04278082A (ja) * | 1991-03-02 | 1992-10-02 | Mitsubishi Materials Corp | 無血清細胞培養担体 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4757017A (en) * | 1984-09-14 | 1988-07-12 | Mcw Research Foundation, Inc. | In vitro cell culture system |
| JPS61282072A (ja) * | 1985-06-07 | 1986-12-12 | Asahi Optical Co Ltd | 細胞培養基支持体、細胞培養装置および細胞培養方法 |
| JP2520681B2 (ja) * | 1986-08-04 | 1996-07-31 | ザ ユニバーシティ オブ ニュー サウス ウェールズ | 生合成のヒトの成長ホルモン製品 |
| JPS63198970A (ja) * | 1987-02-16 | 1988-08-17 | Kirin Brewery Co Ltd | リン酸カルシウム中空球 |
| JPH02180707A (ja) * | 1988-12-31 | 1990-07-13 | Tonen Corp | リン酸化合物粒子集合体の製造方法 |
| JPH0367584A (ja) * | 1989-08-04 | 1991-03-22 | Mitsubishi Materials Corp | 細胞培養用担体 |
| JPH1042311A (ja) * | 1996-07-23 | 1998-02-13 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 映像信号処理装置 |
-
1990
- 1990-10-01 JP JP2260522A patent/JPH04141084A/ja active Pending
-
1991
- 1991-09-16 GB GB9119709A patent/GB2248628B/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-09-20 DE DE19914131375 patent/DE4131375C2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-10-01 FR FR9112069A patent/FR2667324B1/fr not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015211665A (ja) * | 2014-01-29 | 2015-11-26 | ダイキン工業株式会社 | 温度応答性基材、その製造方法及びその評価方法 |
| US10689615B2 (en) | 2014-01-29 | 2020-06-23 | Daikin Industries, Ltd. | Temperature-responsive base material, method for producing same, and method for evaluating same |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2667324B1 (fr) | 1995-06-16 |
| GB9119709D0 (en) | 1991-10-30 |
| DE4131375C2 (de) | 1994-01-20 |
| GB2248628B (en) | 1994-09-07 |
| DE4131375A1 (de) | 1992-04-02 |
| GB2248628A (en) | 1992-04-15 |
| FR2667324A1 (fr) | 1992-04-03 |
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