JPH0372085B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は米糠を熱水抽出し、抽出物をさらに除
蛋白操作することにより得られ、下記の性質を有
する新規多糖体RDP物質、その製造法およびそ
れを有効成分とする抗腫瘍剤、免疫調節剤および
感染症予防治療剤に関し、詳しくは優れた抗腫瘍
活性、免疫調節活性および感染防御活性を有する
新規多糖体RDP物質と、米糠を原料として当該
物質を抽出、精製する当該物質の製造法に関す
る。なお、RDPとはRice bran De Proteinの頭
文字をとつた略語であり、米糠から脱蛋白したも
のという意味である。 (1) 分子量：透析膜を通過せず、分子量１万以上
と推定される。 (2) 溶解性：アルコール、アセトン、ヘキサン、
ベンゼン、酢酸エチル、ジメチルスルホキ
シド、リグロイン、四塩化炭素、クロロホ
ルムおよびエーテルに不溶であり、水には
可溶である。 (3) 水溶液のPH：１％水溶液は中性を示す。 (4) 蛋白質、無機質：蛋白質を含有せず、５％以
下の無機質を含有する。 (5) 呈色反応：モーリツシユ反応、アンスロン硫
酸反応、トリプトフアン硫酸反応、システ
イン硫酸反応、クロモトロープ硫酸反応、
フエノール硫酸反応、カルバゾール硫酸反
応が陽性であり、ビユーレツト反応、ニン
ヒドリン反応、ローリーフオーリン反応、
エルソンモルガン反応、ヨード反応が陰性
である。 (6) 紫外部吸収スペクトル：第１図に示す紫外部
吸収スペクトルを示す。 (7) 赤外部吸収スペクトル：第２図に示す赤外部
吸収スペクトルを示す。 (8) ¹³C−NMRスペクトル：第３図に示す¹³C−
NMRスペクトルを示す。 (9) 構成糖：グルコースのみで構成される。 (10) 構造：α−１，６グルコシド結合を主骨格と
し、約10個のα−１，６結合で結ばれたグ
ルコース残基に１個の割合でα−１，４結
合を有する。 (11) 融点：一定の融点を示さず、220℃で褐変し、
280℃で黒変して炭化が起こる。 かつて、殻粒、豆粒等あるいはこれらの表層部
を原料として生理活性を有する物質を製造する方
法が提案されているが、これらの方法は収得量が
非常に少ない、毒性がみられる等の問題点があ
る。 本発明はこれらの問題点を解消すべく鋭意研究
を続けた結果なされたものである。 本発明の多糖体RDP物質は米糠を熱水処理し
て得られる抽出液に極性有機溶媒を加えるか、あ
るいは塩析剤を加え、生じた沈でんを分取したの
ち水に溶解し、除蛋白操作、必要に応じて精製処
理、粉末処理を行なうことによつて製造すること
ができる。 本発明に用いられる原料米糠は通常の精米にお
いて発生する米糠であり、当該米糠の発生源であ
る玄米の品種、産地および精白歩留等を問わない
が、この原料米糠からの多糖体RDP物質の抽出、
精製に先立つて当該原料中に混在する砕米等は可
及的に除去し、洗浄することが望ましい。また、
米糠油を抽出した後の残渣である脱脂糠等のよう
に、他の目的に使用された後の米糠であつても本
発明に使用することができる。 米糠の抽出液は、米糠を熱水処理することによ
り得られる。熱水処理は細かく粉砕した米糠に対
し約５〜10倍量（重量）の蒸留水または精製水を
加え、ステンレスタンク、ホーロー引きタンク、
ガラス製タンク、流通式の管状抽出装置等の容器
あるいはこれらの耐圧性容器を用いて撹拌し、ま
たは撹拌しないで０〜15Kg／cm²、好ましくは０〜
5.0Kg／cm²の圧力、70〜200℃、好ましくは100〜
150℃の温度で10分乃至24時間、好ましくは0.5〜
５時間撹拌しながら抽出を行なう。実用上は０〜
3.0Kg／cm²の圧力、100〜140℃の温度で１〜５時
間の熱水処理が適当である。 なお、該処理に先立つて、米糠は水洗後、酢酸
エチル、四塩化炭酸、クロロホルム、エーテル、
ｎ−ヘキサン、ベンゼン、石油エーテル、アセト
ン等の有機溶媒によつて脂溶性区分の除去を行な
うことが望ましい。 前記熱水処理により得られた抽出液は濾過ある
いは遠心分離等の操作によつて固形分と分離し、
必要に応じて適当な手段、たとえば減圧濃縮、限
外濾過等の手段を単独もしくは組合せて行ない適
当量まで濃縮する。 この抽出液に対して水に可溶な極性有機溶媒も
しくは塩析剤を加え、生じた沈でんを分取するこ
とによつて多糖体RDP物質を含む画分を得るこ
とができる。ここで用いる極性有機溶媒として
は、たとえばメタノール、エタノール、プロパノ
ール、アセトン等がある。極性有機溶媒の使用量
は抽出液中における目的物質の含有量等を考慮し
て決定するが、エタノールを用いる場合を例にす
ると、エタノール濃度が30〜50％（Ｖ／Ｖ）にな
るように添加すればよい。なお、生じた沈でんは
前記エタノール等の有機溶媒で洗浄することが好
ましい。一方、塩析剤としては塩化ナトリウム、
硫酸アンモニウム、塩化カリウム等があり、通常
は熱水抽出液に対し塩析剤が飽和度0.5〜１にな
るまで加えて沈でんを生成せしめる。 本発明では、極性有機溶媒もしくは塩析剤を熱
水抽出液に加える前あるいは上記の如くこれら物
質を添加して沈でんを生成せしめ、次いで水に溶
解した後に、除蛋白処理、必要に応じて精製処理
および粉末化処理を単独であるいは適宜組合せて
行なうことができる。除蛋白処理や精製処理とし
ては種々の操作を適用することができる。たとえ
ば多糖体RDP物質を含有する溶液に澱粉分解酵
素および／または蛋白分解酵素を作用させて混在
している澱粉、蛋白質などの不純物を低分子化す
る。低分子化されたものは後の精製工程で除去さ
れる。酵素は任意のものを使用することができ、
たとえばα−アミラーゼ、イソアミラーゼ、プル
ラナーゼなどの種々のアミラーゼ、パパイン、ペ
プシン、トリプシン、プロナーゼなどの種々のプ
ロテアーゼや必要ならば他の酵素も任意に使用で
きる。酵素処理は、好ましくは酵素を基質の1/10
００〜1/5000の割合で添加し、0.5〜24時間、好ま
しくは１〜15時間行なう。 他の除蛋白処理および精製処理として、前記多
糖体RDP物質含有水溶液に氷酢酸、硫酸、塩酸、
タンニン酸、トリクロル酢酸などの無機酸あるい
は有機酸を0.1〜10％、好ましくは３〜５％程度
加え、沈でんが生成したならば濾過、遠心分離等
の操作により除き、続いて残存する酸、無機イオ
ンおよび低分子区分を流水または蒸留水中でセロ
フアン膜、コロジオン膜等の透析膜にて１〜３日
透析する方法、ダウエツクス、アンバーライト、
デユオライト、ダイヤイオン等のカチオン、アニ
オン交換樹脂を用いるイオン交換処理方法、分画
分子量10000〜100000の膜を使用する限外濾過方
法、ゲル濾過、遠心分離、活性炭処理、濃縮等を
単独であるいは組み合わせて適用して分画除去す
る。さらに、酸や酵素等による低分子化処理を適
用することもできる。 上記したプロテアーゼまたは酸処理により多糖
体RDP物質に夾雑した蛋白質の大部分は除去さ
れるが、一部多糖体RDP物質に化学的に結合し
た蛋白質は完全には除去されない場合がある。そ
の場合はさらにセバーグ法等の除蛋白法を使用す
ることにより完全除蛋白を行なうことができる。 上記した有機溶媒による洗浄、酵素処理、除蛋
白、イオン交換処理、限外濾過、ゲル濾過、遠心
分離、活性炭処理および濃縮等の精製処理は、そ
の操作順序、組み合わせ方などに制限はなく必要
に応じて単独もしくは２種以上を組み合わせて適
用すればよい。 前記の操作により精製された高分子の多糖体
RDP物質を含む水溶液を凍結乾燥、噴霧乾燥、
極性有機溶媒による沈でんなどを行なつて白色の
粉末状とすることができる。 このようにして得られた多糖体RDP物質は次
のような理化学的性質を有している。透析膜を通
過せず、有機酸または有機溶媒、たとえばアルコ
ール（メタノール、エタノール、プロパノール、
ブタノール等）、アセトン、ヘキサン、ベンゼン、
酢酸エチル、ジメチルスルホキシド、リグロイ
ン、四塩化炭素、クロロホルム、エーテル等に不
溶であるが、水には可溶である。また、本物質の
１％水溶液のPHは中性である。本物質は一定の融
点を示さず、220℃で褐変し、280℃で黒変して炭
化が起る。後記製造例１で代表される本物質の元
素分析の結果は、炭素38.10％、水素6.27％、酸
素50.73％、無機質4.90％であつた。また、本発
明の方法により得た物質の１％水溶液の呈色反応
はモーリツシユ反応、アンスロン硫酸反応、トリ
プトフアン硫酸反応、システイン硫酸反応、クロ
モトロープ硫酸反応、フエノール硫酸反応、カル
バゾール硫酸反応がいずれも陽性であり、ビユー
レツト反応、ニンヒドリン反応、ローリーフオー
リン反応、エルソンモルガン反応、ヨード反応は
陰性である。 また、後記製造例１で代表される本物質の比旋
光度は〔α〕²⁰ _D＝＋142゜〜＋145゜（H₂O）であつた。
次に、無機質については主としてSi，Ｐ，Ｋ，
Na，Ca，Mgなどが含まれていることを確認し
た。これら元素はRDP物質をセフアローズCL−
6B（フアルマシア製）にてゲル濾過したとき、糖
成分と挙動を共にし、ボイドボリユームに現われ
ることから考えて、無機質として単独でRDP物
質に夾雑しているのではなく、RDP物質の骨格
成分に化学的に結合して存在しているものと推定
される。 さらに、本物質の１％水溶液に1N硫酸になる
ように硫酸を加え、100℃で３時間加水分解を行
ない、次いで炭酸バリウムを加えて中和した後の
上清液はモーリツシユ反応、アンスロン硫酸反
応、トリプトフアン硫酸反応、システイン硫酸反
応、クロモトロープ硫酸反応等はいずれも陽性で
あつた。ビユーレツト反応、ニンヒドリン反応、
ローリーフオーリン反応等は陰性であつた。一
方、当該分解液の薄層クロマトグラフイーを行な
うと、必ずグルコースのみを検出した。 また、RDP物質の硫酸およびギ酸による完全
加水分解物の薄層クロマトグラフイーを下記の４
種類の展開溶媒で展開したところ、いずれもグル
コース以外の糖スポツトを検出しないので、本物
質はグルコースのみを構成糖とする多糖であるこ
とが判明した。 (1)酢酸エチル：メタノール：酢酸：水 65：15：10：10 (2)酢酸エチル：イソプロパノール：水 65：23：12 (3)イソプロパノール：ピリジン：水：酢酸 ８：８：４：１ (4)ｎ−ブタノール：ピリジン：水 ６：４：３ さらに、本物質は第１図に示す紫外部吸収スペ
クトル、第２図に示す赤外部吸収スペクトルおよ
び第３図に示す¹³C−NMRスペクトルを示す。
これらのスペクトルの解析と比旋光度の結果か
ら、α結合の存在が推定される。また、本物質が
透析膜を通過せず、セフアローズCL−6B（フア
ルマシア製）のゲル濾過でボイドボリユームに現
われる点から、本物質はグルコースを唯一の糖構
成成分とする多糖体であると認められる。 また、RDP物質は過ヨウ素酸酸化実験により
グルコース残基１個当り約1.7モルの過ヨウ素酸
を消費し、約0.85モルのギ酸を生ずること、スミ
ス分解を行なつた溶液をペーパークロマトグラフ
イーで分析すると多量のグリセリンを検出するこ
と、メチル化糖のペーパークロマトグラムから少
量のテトラメチルグルコース、ジメチルグルコー
スの他に多量の２，３，４−トリメチルグルコー
スを検出すること等の実験結果から考えてα−
１，６グルコシド結合を主体とする多糖であるこ
とが推定される。さらに、RDP物質を¹³C−
NMRで解析したスペクトルから本物質はα−
１，６グルコシド結合が主体であるが、少量のα
−１，４結合をも含有し、その存在比は約10対１
であることが判明した。 本発明により得られる多糖体RDP物質は、抗
腫瘍活性、免疫調節活性、感染防御活性等の種々
の生理活性を有していることが判明した。以下に
それぞれの生理活性についてその検定法および後
述する製造例１で得られた多糖体RDP物質を投
与した実験での検定結果について詳述する。 (1) 抗腫瘍活性について (イ) 同系腫瘍メス−Ａに対するRDP物質の腹腔
投与の効果 ６週令メス、平均体重20ｇのBALB／Ｃ−CRJ
マウスに１週間、同系のマウスの腹腔内で継代し
た癌細胞メス−Ａをマウス１匹当り１×10⁵個を
腹腔内に移植し、対照群20匹（１群）、試験群各
10匹（３群）の計４群に分けた。癌細胞を移植し
た翌日から連続５日間、試験群には生理食塩水に
溶解したRDP物質をマウス１匹の体重１Kg当り
各10，30，100mgを0.1mlずつ腹腔内に投与し、対
照群には同様にして生理食塩水のみを投与した。
以後、生存日数を観察し、延命効果を次式により
算出した。 延命率（％）＝試験群の平均生存日数／対照群の平均
生存日数×100 (ロ) 同系腫瘍メス−Ａに対するRDP物質の経口
投与の効果 ６週令メス、平均体重20ｇのBALB／Ｃ−CRJ
マウスに１週間、同系のマウスの腹腔内で継代し
た癌細胞メス−Ａをマウス１匹当り１×10⁴個を
右腋下皮下に移植し、対照群20匹（１群）、試験
群各10匹（３群）の計４群に分けた。癌細胞を移
植した翌日から連続10日間、試験群には生理食塩
水に溶解したRDP物質をマウス１匹の体重１Kg
当り各10，30，100mgを0.2mlずつ経口ゾンデを用
いて胃に投与し、対照群には同様にして生理食塩
水のみを投与した。癌細胞を移植してから35日後
に各マウスを屠殺し、増殖した腫瘍を切り出し重
量を測定した。なお、阻止率は次式により算出し
た。 阻止率（％）＝（１−試験群の平均腫瘍重量／対照群
の平均腫瘍重量） ×100 上記(イ)，(ロ)の方法により検定したRDP物質の
抗腫瘍効果は下表の通りであつた。

【表】 上表より明らかなように、腹腔投与、経口投与
ともにマウス体重１Kg当り30mg付近を至適投与量
としてRDP物質は強い抗腫瘍活性を有している
ことが判明した。 その他にRDP物質は同系腫瘍ルイス肺癌、メ
ラノーマＢ−16、同種腫瘍ザルコーマ180、エー
ルリツヒ腫瘍等に対し、投与量10〜100mg／Kgの
範囲で腹腔投与または経口投与により腫瘍阻止率
30〜70％の効果が確認されており後述するように
毒性が全く見られない点とも合わせて極めて有効
な抗腫瘍剤となりうると考えられる。 (2) 免疫調節活性について (イ) カーボンクアランステスト（CCT） 本法は免疫調節作用のうちマクロフアージの食
細胞活性の増強効果について調べるものである。 ４週令メス、平均体重20ｇのICR−CRJマウス
１群６匹に、生理食塩水に溶解したRDP物質を
２日間腹腔投与し（対照群は生理食塩水のみを投
与）、３日目にカーボン液（ペリカン製黒インク
（商品名：フアウント インデイア）を生理食塩
水で５倍に希釈した液）をマウス尾静脈より0.25
ml注入し、注入直後および10分後に眼窩静脈叢よ
り0.025ml採血し、3.5mlの0.01モル炭酸ナトリウ
ム溶液に懸濁溶解させ、650nmの吸光度
（OD₆₅₀）を測定し、血中カーボン濃度の減少率
を調べた。効果は次式に示す貧食係数で表わし
た。 貧食係数（Ｋ）＝logC₁−logC₂／T₂−T₁ ＊T₁時におけるOD₆₅₀をC₁，T₂時における
OD₆₅₀をC₂とする。 なお、担癌マウスについてはRDP物質の投与
開始より７日前にザルコーマ180細胞を１×10⁷個
大腿部筋肉に移植し、以下同様に試験した。結果
は下表の通りであり、正常マウス、担癌マウスと
もにRDP物質の10〜30mg／Kg、特に30mg／Kgの
投与によりマウスの細網内皮系の機能が亢進し、
マクロフアージの貧食能が大幅に増強されている
ことが判明した。

【表】 (ロ) プラークフオーミングセル法（PFC） 本法は免疫調節作用のうち、宿主のＢ細胞の賦
活による抗体産生能の増強効果を調べるものであ
る。 ４週令メス、平均体重20ｇのICR−CRJマウス
１群６匹に、生理食塩水に溶解したRDP物質を
３日間連続して腹腔内に投与し（対照群は生理食
塩水のみを投与）、４日目と11日目にそれぞれ羊
赤血球４×10⁸個を尾静脈より注入感作せしめ、
その４日後にカニンガムの方法でマウス脾細胞の
プラーク形成能を測定した。 結果は下表の通りであり、RDP物質は10〜100
mg／Kgの投与により抗体産生能を著しく増強して
いることが示された。

【表】 (ハ) 遅延型皮膚反応性（DHR） 本法は免疫調節作用のうち宿主のＴ細胞の賦活
による細胞性免疫の作用の増強効果を調べるもの
である。 ８週令メス、平均体重27ｇのICR−CRJマウス
１群６匹に、生理食塩水に溶解したRDP物質を
８日間連続して経口投与し（対照群は生理食塩水
のみを投与）、投薬開始後４日目にマウスの剃毛
腹部に５％塩化ビクリルエタノール溶液を塗布し
て一次感作し、11日目に１％ビクリルオリーブ油
溶液をマウス両耳の表裏に塗布して二次感作し、
その24時間後に耳厚の増加をゲージで測定し、塗
布前の耳厚との差から耳厚の増加量をみた。一
方、担癌マウスについてはザルコーマ180腹水型
腫瘍細胞を１×10⁵個を投薬開始前日にマウス腹
腔内に移植し、以下同様に試験した。 結果は下表の通りであり、RDP物質は試験し
た30〜500mg／Kgの経口投与により、正常マウス、
担癌マウスともに細胞性免疫能を著しく増強して
いることが示された。

【表】 以上、(イ)，(ロ)，(ハ)の各免疫実験によりRDP物
質はメカニズムの異なる免疫作用をそれぞれ顕著
に亢進させていることがわかつた。免疫調節剤は
一般には生体の免疫機能が低下したり、異種抗原
認識機能が弱い場合などに使用され得ることか
ら、特に微生物感染症や悪性腫瘍の治療剤、治療
補強剤または併用剤、予防剤あるいは術後回復促
進剤としての薬剤用途が期待される。以上の免疫
賦活回復機能の他にも、免疫調節剤は異常に亢進
した生体免疫反応を正常化し、たとえばリウマ
チ、膠原病、アレルギー等の自己免疫疾患にも適
用できる場合が考えられる。 (3) 感染防御活性について 生体の細菌による感染症に対する防御作用とし
ては、侵入細菌に対する抗体産生による、いわゆ
る体液性免疫作用によるものと、マクロフアージ
やＴ細胞が侵入細菌と斗う、いわゆる細胞性免疫
によるものがあることが知られている。一般には
生体はこれら異種細菌の侵入に対しては充分な防
御作用を持つているが、担癌状態、特に癌の末期
には著しく防御作用が低下することが知られてお
り、通常宿主と共生している非病源菌によつてさ
え重篤な結果を招来することが知られている。 そこでRDP物質がこれらの細菌の感染症に対
して宿主の防御活性を増強するかどうか、体液性
免疫が関与するといわれる代表的感染菌であるエ
シエリヒア・コリ（Escherichia coli）および細
胞性免疫が関与するといわれるリステリア・モノ
サイトゲネス（Listeria monocytogenes）感染
に対するRDP物質の効果を調べた。 ７週令メス、平均体重26ｇのICR−CRJマウス
を１群20匹ずつ用い、生理食塩水に溶解した
RDP物質を10〜100mg／Kg（対照群は生理食塩水
のみ）マウスの背中皮下に細菌感染３日前、１日
前に各１回投与した後、エシエリヒア・コリの場
合は２×10⁷個を背中皮下に、リステリア・モノ
サイトゲネスの場合は２×10⁷個を腹腔内に感染
させ、それぞれ１週間観察して、生残マウス数を
比較した。防御効果は次式により算出した。 防御効果（％） ＝試験群の生残匹数−対照群の生残匹数／１群のマウ
ス数×100 結果は下表に示す通りであり、RDP物質の10
〜100mg／Kgの事前投与により、エシエリヒア・
コリ感染に対しては非常に強い防御作用が生じ、
リステリア・モノサイトゲネス感染に対しても有
意な防御作用の増強効果がみられた。 後述するように、RDP物質は毒性が全く見ら
れない点とも合わせて、極めて有効な感染症予防
治療剤となりうると考えられる。

【表】 次に、RDP物質の急性毒性について言及する。
５週令オスのSD−CRJラツト、体重120〜150ｇ、
１群10匹を用いてRDP物質の物理的投与限界で
ある15ｇ／Kgを投与し観察を続けたところ、全例
死亡例がなく体重増加も対照と変わらず、しかも
外観上や剖検上も全く異常が認められなかつた。
したがつて、LD₅₀＞15ｇ／Kgと考えられ、急性
毒性はないものと判断される。 このように優れた抗腫瘍活性、免疫調節活性、
感染防御活性を示す多糖体RDP物質が比較的容
易な操作の組み合わせにより下記製造例に示され
るように大量に得られるので、米糠から生理活性
多糖を工業的に製造する技術上に与える効果は非
常に大なるものである。 さらにインターフエロン誘起能がみられること
からヘルペス、インフルエンザ等のウイルス性疾
患に対する予防治療効果が期待できる。 RDP物質は経口的または非経口的に投与でき
るので、極めて有用な抗腫瘍剤、免疫調節剤ある
いは感染症予防治療剤として期待される。 なお、実際の製剤化については、本物質を単独
で、あるいは賦形剤（水、生理食塩水、ポリエチ
レングリコール、グリセロゼラチン、澱粉、デキ
ストリン、乳糖など）と組み合わせて水剤、丸
剤、錠剤、散剤、坐剤などの剤型にて製造するこ
とができる。 次に、本物質の製造を以下の製造例によつて説
明する。 製造例 １ 市販の米糠を用い篩で砕米等を除いたもの25Kg
に水道水125を加え、120℃で１時間、その後さ
らに100℃で５時間加熱し撹拌しながら抽出を行
なつた。 抽出液を濾過後、40に減圧濃縮し、水酸化ナ
トリウムでPHを6.7とした後、500mgのα−アミラ
ーゼ（長瀬産業製）を加え、70℃で１時間酵素処
理を行なつた。反応後、100℃まで加熱し酵素を
失活させ、遠心分離により不溶物を除去し、最終
濃度が30％（Ｖ／Ｖ）となるようにエタノールを
加えて、生じた沈でんを分離した。分離後、水に
溶解せしめて不溶物を除き、凍結乾燥を行なつた
ところ、508ｇの淡黄色粉末を得た。この淡黄色
粉末４ｇを再度イオン交換水に溶かし、不溶物を
遠心分離で除去した後、セフアローズCL−6B
（フアルマシア製）によりゲル濾過し、そのボイ
ドボリユームに溶出された画分を集めて凍結乾燥
を行ない、１ｇの白色粉末を得た。これをさらに
100mlのイオン交換水に溶解させ、クロロホルム
20ml、ｎ−ブタノール４mlとともに分液濾斗を用
いて60分間振とうし、低速で遠心すると水層とク
ロロホルム層との間に変性蛋白質の白い層ができ
た。水層部分を取り出し、再び同比率のクロロホ
ルムおよびｎ−ブタノールを加えて振とうした。
この操作を変性蛋白質の白い層が出なくなるまで
約30回繰り返した後、水層部分を凍結乾燥させて
800mgの白色の除蛋白された粉末を得た。 製造例 ２ 市販の米糠25Kgをヘキサン100で還流脱脂し
たのち乾燥した米糠を製造例１と同様の方法で抽
出回収処理をして淡黄色粉末450ｇを得た。この
粉末４ｇを用いて製造例１と同様の方法で処理し
て750mgの白色粉末を得た。 製造例 ３ 市販の脱脂糠３Kgに水20を加え撹拌しながら
120℃で２時間加圧加熱下で抽出した。抽出液を
減圧濃縮して得た５の濃縮液に結晶α−アミラ
ーゼ（長瀬産業製）0.3ｇを加えて60℃で５時間
保持した。しかる後、100℃に加温した後、遠心
分離して上清4.9を得た。この上清にエタノー
ルを加えてエタノール濃度40％とし、生じた沈で
んを分取した。次いでこれを凍結乾燥して淡黄褐
色粉末88ｇを得た。 この粉末４ｇを用いて製造例１と同様に処理し
て720mgの白色粉末を得た。 製造例 ４ 市販の米糠20Kgを30メツシユの篩でふるつて砕
米等の夾雑物を除去した後、イオン交換樹脂で処
理した水道水100で洗浄した。次いで、洗浄し
た米糠に蒸留水50を加え撹拌しながら110℃で
３時間加圧加熱下で抽出した後、濾過した。得ら
れた濾液を減圧濃縮し、さらに遠心分離して上清
10を得た。この上清に結晶α−アミラーゼ250
mgを添加し、65℃で24時間作用せしめた後、100
℃に加温した。次いでエタノール濃度30％になる
ようにエタノールを加え生じた沈でんを遠心分離
によつて採取した。この沈でんに水３を加えて
溶解した後、遠心分離を行なつて上清を得た。こ
の上清を１となるまで減圧濃縮し、さらに遠心
分離して上清を得、これを流水に対して２日間透
析し、遠心分離を行なつて上清１を得た。この
上清１にクロロホルム200ml、ｎ−ブタノール
40mlを加え、以下製造例１と同様の方法で除蛋白
処理および凍結乾燥処理を行なつて白色粉末402
ｇを得た。 製造例 ５ 製造例４で透析後遠心分離して得られた上清１
を陽イオン交換ゲルであるCMセフアローズ
（フアルマシア製）および陰イオン交換ゲルであ
るDEAEセフアローズ（フアルマシア製）で順次
イオン交換処理し、非吸着部を集め１に濃縮し
た後、製造例４と同様の方法で除蛋白処理および
凍結乾燥処理を行なつて白色粉末358ｇを得た。 製造例 ６ 製造例４で透析後遠心分離して得られた上清１
に活性炭10ｇを加え、30分後に遠心分離を行な
い上清を得た。この上清を製造例４と同様の方法
で除蛋白処理および凍結乾燥処理を行なつて白色
粉末365ｇを得た。 製造例 ７ 製造例４で透析後遠心分離して得られた上清１
のうち20mlをセフアローズCL−6B（フアルマ
シア製）でゲル濾過し、そのボイドボリユーム画
分を集めて100mlとした。この液を製造例１と同
様に除蛋白処理および凍結乾燥処理を行なつて白
色粉末70ｇを得た。 製造例 ８ 製造例１でα−アミラーゼ処理物をエタノール
沈でんさせて得られた沈でん物を再び10の水に
溶解し、分画分子量８万のウルトラフイルター膜
を用いて低分子画分を除去すると同時に３にな
るまで濃縮し、生じた沈でんを遠心分離して除去
し2.8の上清を得た。この上清を製造例１と同
様に除蛋白処理および凍結乾燥処理を行なつて
400ｇの白色粉末を得た。 製造例 ９ 製造例１でα−アミラーゼ処理し100℃で１時
間加熱して酵素を失活させた液に、最終濃度40％
（Ｖ／Ｖ）となるようにアセトンを加え、生じた
沈でんを10の水に溶解した。以後、製造例８に
おけるウルトラフイルター膜を用いた処理以後の
工程を行ない412ｇの白色粉末を得た。 製造例 10 製造例１でα−アミラーゼ処理し100℃で１時
間加熱して酵素を失活させた液に、飽和度70％に
なるように硫酸アンモニウムを加えて塩析を行な
い、生じた沈でんを遠心分離で集め３の水に溶
解し、流水に対して２日間透析を行なつた。この
透析内液にトリクロル酢酸を濃度７％になるよう
に添加して沈でんを生ぜしめ、生じた沈でんを遠
心分離で除去し、上清を再び流水に対して２日間
透析し、透析内液を凍結乾燥して淡黄色粉末503
ｇを得た。この粉末４ｇをイオン交換水に溶解
し、セフアローズCL−6B（フアルマシア製）の
カラムでゲル濾過を行ない、そのボイドボリユー
ム画分を集めて凍結乾燥し白色粉末1.5ｇを得た。 製造例 11 製造例１でα−アミラーゼ処理を行なつた液を
そのまま40℃まで下げ、蛋白分解酵素（ブロナー
ゼＥ、科研化学製）600mgを加えて24時間反応さ
せた。反応液を100℃で１時間加熱して酵素を失
活させた後、遠心分離して不溶物を除去した上清
に、最終濃度30％（Ｖ／Ｖ）となるようにエタノ
ールを加え、生じた沈でんを遠心分離で集め、10
の水に溶解した。以後、製造例８におけるウル
トラフイルター膜を用いた処理以後の工程を行な
い白色粉末413ｇを得た。 製造例 12 製造例８と同様の工程を経て得られたウルトラ
フイルター膜処理上清３に製造例１と同様の比
率でクロロホルム、ｎ−ブタノールを加えて除蛋
白操作を行ない、水溶部を噴霧乾燥して420ｇの
白色粉末を得た。 製造例 13 製造例12で除蛋白操作を行なつて得られた水溶
部に最終濃度40％（Ｖ／Ｖ）となるようにエタノ
ールを加え、生じた沈でんを遠心分離で集め、さ
らに３回エタノールで洗浄脱水した後、真空乾燥
して白色粉末405ｇを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は生理活性多糖体RDP物質の紫外部吸
収スペクトルの特性吸収図であり、第２図は同じ
く赤外部吸収スペクトルの特性吸収図であり、第
３図は同じく¹³C−NMRスペクトルの特性吸収
図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 米糠を熱水抽出し、抽出物をさらに除蛋白操
   作することにより得られ、以下の性質を有する新
   規多糖体RDP物質。 (1) 分子量：透析膜を通過せず、分子量１万以上
   と推定される。 (2) 溶解性：アルコール、アセトン、ヘキサン、
   ベンゼン、酢酸エチル、ジメチルスルホキ
   シド、リグロイン、四塩化炭素、クロロホ
   ルムおよびエーテルに不溶であり、水には
   可溶である。 (3) 水溶液のPH：１％水溶液は中性を示す。 (4) 蛋白質、無機質：蛋白質を含有せず、５％以
   下の無機質を含有する。 (5) 呈色反応：モーリツシユ反応、アンスロン硫
   酸反応、トリプトフアン硫酸反応、システ
   イン硫酸反応、クロモトロープ硫酸反応、
   フエノール硫酸反応、カルバゾール硫酸反
   応が陽性であり、ビユーレツト反応、ニン
   ヒドリン反応、ローリーフオーリン反応、
   エルソルモルガン反応、ヨード反応が陰性
   である。 (6) 紫外部吸収スペクトル：第１図に示す紫外部
   吸収スペクトルを示す。 (7) 赤外部吸収スペクトル：第２図に示す赤外部
   吸収スペクトルを示す。 (8) ¹³C−NMRスペクトル：第３図に示す¹³C−
   NMRスペクトルを示す。 (9) 構成糖：グルコースのみで構成される。 (10) 構造：α−１，６グルコシド結合を主骨格と
   し、約10個のα−１，６結合で結ばれたグ
   ルコース残基に１個の割合でα−１，４結
   合を有する。 (11) 融点：一定の融点を示さず、220℃で褐変し、
   280℃で黒変して炭化が起こる。 ２ 米糠を熱水処理して得られる抽出液に極性有
   機溶媒または塩析剤を加え、生じた沈でんを分取
   し、除蛋白操作を行なうことを特徴とする以下の
   性質を有する新規多糖体RDP物質の製造法。 (1) 分子量：透析膜を通過せず、分子量１万以上
   と推定される。 (2) 溶解性：アルコール、アセトン、ヘキサン、
   ベンゼン、酢酸エチル、ジメチルスルホキ
   シド、リグロイン、四塩化炭素、クロロホ
   ルムおよびエーテルに不溶であり、水には
   可溶である。 (3) 水溶液のPH：１％水溶液は中性を示す。 (4) 蛋白質、無機質：蛋白質を含有せず、５％以
   下の無機質を含有する。 (5) 呈色反応：モーリツシユ反応、アンスロン硫
   酸反応、トリプトフアン硫酸反応、システ
   イン硫酸反応、クロモトロープ硫酸反応、
   フエノール硫酸反応、カルバゾール硫酸反
   応が陽性であり、ビユーレツト反応、ニン
   ヒドリン反応、ローリーフオーリン反応、
   エルソンモルガン反応、ヨード反応が陰性
   である。 (6) 紫外部吸収スペクトル：第１図に示す紫外部
   吸収スペクトルを示す。 (7) 赤外部吸収スペクトル：第２図に示す赤外部
   吸収スペクトルを示す。 (8) ¹³C−NMRスペクトル：第３図に示す¹³C−
   NMRスペクトルを示す。 (9) 構成糖：グルコースのみで構成される。 (10) 構造：α−１，６グルコシド結合を主骨格と
   し、約10個のα−１，６結合で結ばれたグ
   ルコース残基に１個の割合でα−１，４結
   合を有する。 (11) 融点：一定の融点を示さず、220℃で褐変し、
   280℃で黒変して炭化が起こる。 ３ 極性有機溶媒がメタノール、エタノール、プ
   ロパノールおよびアセトンのいずれかである特許
   請求の範囲第２項記載の新規多糖体RDP物質の
   製造法。 ４ 塩析剤が塩化ナトリウム、硫酸アンモニウム
   および塩化カリウムのいずれかである特許請求の
   範囲第２項記載の新規多糖体RDP物質の製造法。 ５ 除蛋白操作が酵素処理法、酸処理法およびセ
   バーグ法のいずれかである特許請求の範囲第２項
   記載の新規多糖体RDP物質の製造法。 ６ 米糠を熱水抽出し、抽出物をさらに除蛋白操
   作することにより得られ、以下の性質を有する新
   規多糖体RDP物質または該物質と製剤上許容さ
   れる賦形剤より実質的になるものを有効成分とす
   る抗腫瘍剤。 (1) 分子量：透析膜を通過せず、分子量１万以上
   と推定される。 (2) 溶解性：アルコール、アセトン、ヘキサン、
   ベンゼン、酢酸エチル、ジメチルスルホキ
   シド、リグロイン、四塩化炭素、クロロホ
   ルムおよびエーテルに不溶であり、水には
   可溶である。 (3) 水溶液のPH：１％水溶液は中性を示す。 (4) 蛋白質、無機質：蛋白質を含有せず、５％以
   下の無機質を含有する。 (5) 呈色反応：モーリツシユ反応、アンスロン硫
   酸反応、トリプトフアン硫酸反応、システ
   イン硫酸反応、クロモトロープ硫酸反応、
   フエノール硫酸反応、カルバゾール硫酸反
   応が陽性であり、ビユーレツト反応、ニン
   ヒドリン反応、ローリーフオーリン反応、
   エルソンモルガン反応、ヨード反応が陰性
   である。 (6) 紫外部吸収スペクトル：第１図に示す紫外部
   吸収スペクトルを示す。 (7) 赤外部吸収スペクトル：第２図に示す赤外部
   吸収スペクトルを示す。 (8) ¹³C−NMRスペクトル：第３図に示す¹³C−
   NMRスペクトルを示す。 (9) 構成糖：グルコースのみで構成される。 (10) 構造：α−１，６グルコシド結合を主骨格と
   し、約10個のα−１，６結合で結ばれたグ
   ルコース残基に１個の割合でα−１，４結
   合を有する。 (11) 融点：一定の融点を示さず、220℃で褐変し、
   280℃で黒変して炭化が起こる。 ７ 米糠を熱水抽出し、抽出物をさらに除蛋白操
   作することにより得られ、以下の性質を有する新
   規多糖体RDP物質または該物質と製剤上許容さ
   れる賦形剤より実質的になるものを有効成分とす
   る免疫調節剤。 (1) 分子量：透析膜を通過せず、分子量１万以上
   と推定される。 (2) 溶解性：アルコール、アセトン、ヘキサン、
   ベンゼン、酢酸エチル、ジメチルスルホキ
   シド、リグロイン、四塩化炭素、クロロホ
   ルムおよびエーテルに不溶であり、水には
   可溶である。 (3) 水溶液のPH：１％水溶液は中性を示す。 (4) 蛋白質、無機質：蛋白質を含有せず、５％以
   下の無機質を含有する。 (5) 呈色反応：モーリツシユ反応、アンスロン硫
   酸反応、トリプトフアン硫酸反応、システ
   イン硫酸反応、クロモトロープ硫酸反応、
   フエノール硫酸反応、カルバゾール硫酸反
   応が陽性であり、ビユーレツト反応、ニン
   ヒドリン反応、ローリーフオーリン反応、
   エルソンモルガン反応、ヨード反応が陰性
   である。 (6) 紫外部吸収スペクトル：第１図に示す紫外部
   吸収スペクトルを示す。 (7) 赤外部吸収スペクトル：第２図に示す赤外部
   吸収スペクトルを示す。 (8) ¹³C−NMRスペクトル：第３図に示す¹³C−
   NMRスペクトルを示す。 (9) 構成糖：グルコースのみで構成される。 (10) 構造：α−１，６グルコシド結合を主骨格と
   し、約10個のα−１，６結合で結ばれたグ
   ルコース残基に１個の割合でα−１，４結
   合を有する。 (11) 融点：一定の融点を示さず、220℃で褐変し、
   280℃で黒変して炭化が起こる。 ８ 米糠を熱水抽出し、抽出物をさらに除蛋白操
   作することにより得られ、以下の性質を有する新
   規多糖体RDP物質または該物質と製剤上許容さ
   れる賦形剤より実質的になるものを有効成分とす
   る感染症予防治療剤。 (1) 分子量：透析膜を通過せず、分子量１万以上
   と推定される。 (2) 溶解性：アルコール、アセトン、ヘキサン、
   ベンゼン、酢酸エチル、ジメチルスルホキ
   シド、リグロイン、四塩化炭素、クロロホ
   ルムおよびエーテルに不溶であり、水には
   可溶である。 (3) 水溶液のPH：１％水溶液は中性を示す。 (4) 蛋白質、無機質：蛋白質を含有せず、５％以
   下の無機質を含有する。 (5) 呈色反応：モーリツシユ反応、アンスロン硫
   酸反応、トリプトフアン硫酸反応、システ
   イン硫酸反応、クロモトロープ硫酸反応、
   フエノール硫酸反応、カルバゾール硫酸反
   応が陽性であり、ビユーレツト反応、ニン
   ヒドリン反応、ローリーフオーリン反応、
   エルソンモルガン反応、ヨード反応が陰性
   である。 (6) 紫外部吸収スペクトル：第１図に示す紫外部
   吸収スペクトルを示す。 (7) 赤外部吸収スペクトル：第２図に示す赤外部
   吸収スペクトルを示す。 (8) ¹³C−NMRスペクトル：第３図に示す¹³C−
   NMRスペクトルを示す。 (9) 構成糖：グルコースのみで構成される。 (10) 構造：α−１，６グルコシド結合を主骨格と
   し、約10個のα−１，６結合で結ばれたグ
   ルコース残基に１個の割合でα−１，４結
   合を有する。 (11) 融点：一定の融点を示さず、220℃で褐変し、
   280℃で黒変して炭化が起こる。