JPH0372236B2 - - Google Patents
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- JPH0372236B2 JPH0372236B2 JP1229262A JP22926289A JPH0372236B2 JP H0372236 B2 JPH0372236 B2 JP H0372236B2 JP 1229262 A JP1229262 A JP 1229262A JP 22926289 A JP22926289 A JP 22926289A JP H0372236 B2 JPH0372236 B2 JP H0372236B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は抗生物質に関し、さらに詳しくは、下
記式 式中、Ｒは水素原子、水酸基又はヒドロキシス
ルホニルオキシ基を表わす、 で示される化合物及びそれらの塩、並びに該化合
物の製造方法に関する。 下記式 で示される７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・
２・０〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸骨格
を有する抗生物質は、一般に高い抗菌力とβ−ラ
クタマーゼ阻害活性を有しており、従来から、発
酵法、半合成法、全合成法により各種の７−オキ
シ−１−アザビシクロ〔３・２・０〕ヘプト−２
−エン−２−カルボン酸誘導体が製造されている
〔例えば、チエナマイシン（ジヤーナル・オブ・
アンテイビオテイクス、32巻（1979年）、１〜12
頁）、エピチエナマイシン類（第17回インターサ
イエンス・コンフアランス・オン・アンテイミク
ロビアル・エイゼンツ・アンド・ケモテラピー、
要旨第80号および第81号（1977年））、Ｎ−アセチ
ルエナマイシン（西ドイツ特許第2652681号
（1977））、オリバニン酸類（ジヤーナル・オブ・
アンテイビオテイクス、32巻（1979年）、284〜
304頁）、PS−５（ジヤーナル・オブ・アンテイビ
オテイクス、32巻（1979年）、262〜286頁）、PS
−６（特開昭54−59295号）、PS−７（特開昭54−
92983号）など〕。 さらに、本発明者の一部は、ストレプトミセス
OA−6129菌株（微工研条寄第11号（FERM BP
−11）が下記式 式中、Ｒは水素原子、水酸基又はヒドロキシス
ルホニルオキシ基を表わす、 で示される７−オキソ−１アザビシクロ〔３・
２・０〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸骨格
の３位にパンテテイニル基を有し且つ６位にエチ
ル基、１−ヒドロキシエチル基又は１−ヒドロキ
シスルホニルオキシエチル基を有している点に構
造的特徴を有する従来の文献に未載の新規な抗生
物質を産出することを見い出し、これらを抗生物
質OA−6129A、Ｂ及びＣと命名して先に特許出
願した。（特開昭57−62280号、同昭57−70890号
及び同昭57−95987号参照）。 本発明により提供される前記式（）の化合物
は、上記抗生物質OA−6129A、Ｂ及びＣ（以下、
総称して「抗生物質OA−6129」という）の一級
水酸基がリン酸エステルになつている点に構造的
特徴を有する新規な抗生物質である。以下これら
の抗生物質のうち、６位にエチル基を有する化合
物を「抗生物質OA−6129A−リン酸エステル」、
１−ヒドロキシエチル基を有する化合物を「抗生
物質OA−6129B−リン酸エステル」、並びに１−
ヒドロキシスルホニルオキシエチル基 【式】を有する化合物を「抗生物 質OA−6129C−リン酸エステル」と略称する。 また、これらのリン酸エステルを「抗生物質
OA−6129のリン酸エステル」と総称する。 式（）の新規抗生物質OA−6129のリン酸エ
ステルは、従来提案されている同じ基本骨格をも
つ抗生物質に比較して安定である点でユニークで
あり、しかも上記の公知文献に記載されていると
同様に、強い抗菌力及びβ−ラクタマーゼ阻害活
性を有すると共に、β−ラクタマーゼ生産菌に対
するペニシリン系、セフアロスポリン系等の抗菌
生物質の抗菌力を相乗的に増強する能力をも併せ
有しており、抗菌剤として有用である。 式（〕の化合物は、２−位のカルボキシル基
及び／又はリン酸基の塩の形態をとることもで
き、かかる塩の例としては、例えばナトリウム
塩、カリウム塩、リチウム塩の如きアルカリ金属
塩；カルシウム塩、マグネシウム塩の如きアルカ
リ土類金属塩；アルミニウム塩の如きその他の金
属塩；アンモニウム塩、モノエチルアミン、ジメ
チルアミン、トリメチルアミン、モノエタノール
アミン、ジエタノールアミンの如く第一級、第二
級又は第三級アミンによる塩；ベンザチン塩、プ
ロカイン塩などの有機塩基による塩、等が含ま
れ、中でも製薬学的に許容しうる塩が好ましく、
特に、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ
金属塩が好適である。 本発明に従えば、前記式（）の抗生物質OA
−6129のリン酸エステルは、式（）で示される
抗生物質OA−6129A、ＢまたはＣを基質とした
通常の酵素反応条件下に、ATP（アデノシン−
5′−トリリン酸）の共存下でパントテン酸をリン
酸化し得る微生物の培養菌体又は該菌体の処理物
で反応させることにより製造することができる。 本発明で使用する培養菌体又は該菌体の処理物
は、前述した式（）の化合物の一級水酸基をリ
ン酸化し、６位の置換基が対応する式（）の化
合物を生産する能力を有するものである限り、ど
のような属に属する微生物の菌体又は菌体処理物
でも使用できるが、本発明の目的に適する菌体又
は菌体処理物は、一般にパンテトテン酸をリン酸
化し得るもの（例えば、Agricultual and
Biological Chemistry vol.36、84〜92頁（1972）
に記載の菌株）を挙げることができるが、その中
で、ブレビバクテリウム・アンモニアゲネス
ATCC6871の培養菌体の洗浄したものが有利に用
いられる。 該菌体を用いた酵素反応は、PH６〜8.5の緩衝
液にリン酸供与体としてATPを添加し、上記菌
体を懸濁した溶液を調製した後、式（）で示さ
れる各化合物を添加反応させる方法によつて実施
できる。 緩衝液は、式（）の化合物の安定性等を考慮
してリン酸の含有するもので、PH６〜8.5の範囲、
特に、PH７〜８の範囲に調節するのが有利であ
る。 かかる緩衝液での反応は、一般に20〜45℃、好
ましくは30〜40℃の範囲内の温度が好適であり、
その反応時間は、反応温度や使用菌体又は菌体処
理物によつて異なるが通常30分〜10時間の範囲で
ある。 また、反応を好適に行なうため、必要に応じて
反応液中高級脂肪属硫酸ナトリウム等の界面活性
剤やマグネシウム等の酵素活性の安定化に寄与し
得る金属イオンを共存させることができる。 なお、使用する反応条件は、使用する菌体又は
菌体処理物の特性に応じて、当業者であれば簡単
な実験により、最適条件を容易に決定することが
できる。 かくして生成した式（）の化合物を反応混合
物から単離するには、反応液、過、遠心分離、
抽出などのそれ自体公知の分離法によつて菌体又
は菌体処理物を除去し、その液、上澄液、抽出
液などにより回収される。 回収はそれ自体公知の種々の方法で行なうこと
ができ、特にカルボン酸型抗生物質の回収のため
にしばしば利用される方法が有利に適用される。
例えば、低PHにおける酢酸エチル、ｎ−ブタノー
ル等での溶媒抽出及びその溶媒層から高PH水層へ
の転溶；活性炭、アンバーライトXAD（ローム・
アンド・ハース社製）、ダイヤイオンHP−20（三
菱化成社製）等による吸着と、メタノール水、ア
セトン水等による溶出；ダウエツクス１×２（ダ
ウケミカル社製）、QAE−セフアデツクスＡ−25
（フアルマシア社製）、DEAE−セルローズワツト
マンDE−32（ワツトマン社製）、DEAE−セフア
デツクスＡ−25（フアルマシア社製）等のイオン
交換樹脂による吸着及び溶出；セフアデツクスＧ
−10（フアルマシア社製）、バイオ・ゲルＰ−２
（バイオ・ラツド社製）、等にゲル過；セルロー
ズ、アビセルSF（アメリカン・ビスコース社製）
等のカラムクロマトグラフイー；アセトン等の溶
剤添加による強制沈殿法；凍結乾燥法、等をそれ
ぞれ単独で或いは適宜組合せて、さらに場合によ
つては反復して使用される。 回収精製工程中の式（）の化合物の挙動は後
述するビオアツセイ法およびビオオートグラフイ
ーにより定量測定することができる。 かくして、前記した特性を有する抗生物質OA
−6129A−リン酸エステル、同OA−6129B−リ
ン酸エステル又は同OA−6129C−リン酸エステ
ルが得られる。 本抗生物質OA−6129のリン酸エステルは、一
般に遊離型のものよりも塩の形の方がより安定で
あるから、後述する医薬用途に使用したり、さら
に誘導体に転換する場合の中間体として使用した
り、或いは前記した精製工程に付する場合等にお
いては、塩の形で処理することが好適である。 抗生物質OA−6129のリン酸エステルのその塩
形への転化はそれ自体公知の方法に従い、該抗生
物質OA−6129のリン酸エステルを無機又は有機
の塩基で処理することにより行うことができる。
この造塩反応に使用し得る無機又は有機の塩基と
しては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリ
ウム、水酸化リチウム如きアルカリ金属の水酸化
物；水酸化カルシウム、水酸化マグネシウムの如
きアルカリ土類金属の水酸化物；モノエチルアミ
ン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、モノエ
タノールアミン、ジエタノールアミン、ベンザチ
ン、プロカインの如き第一級、第二級又は第三級
の有機アミン等が挙げられる。 本発明により提供される抗生物質OA−6129の
リン酸エステル又はその塩は、広範囲の抗菌活性
を有し、各種微生物、例えばスタフイロコツカス
属、サルシナ属、バチルス属等に属する陽性菌に
対し非常に強い抗菌力を示し、更に例えばアルカ
リゲネス属、コマモナス属等に属するグラム陰性
菌に対しても非常に強い抗菌力を示す。 また、本発明の抗生物質OA−6129のリン酸エ
ステルは、例えばエシエリヒア属、クレブシエラ
属、プロテウス属等に属するグラム陰性菌に対し
てもかなり強い抗菌力を示す。 特に、本発明の抗生物質OA−6129のリン酸エ
ステルは、β−ラクタム環を有する抗生物質に対
して耐性を有する、例えばシトロバクター属、プ
ロテウス属、エンテロバクター属、クレブシエラ
属、セラチア属等に属するグラム陰性細菌に対し
てかなり強い抗菌力を示す点、及び哺乳動物の腎
臓ホモジネートに対して安定である点で特徴的で
ある。 本発明の抗生物質OA−6129のリン酸エステル
の抗菌スペクトルは以下に述べる各種病原性被験
菌に対する最小発育阻止濃度の測定により立証さ
れる（第１表）。 また、本発明の抗生物質OA−6129のリン酸エ
ステルは、前述したように、従来公知の同種の抗
生物質と比較して安定であり、特に哺乳動物の腎
臓ホモジネートに対する安定性は、以下に述べる
各種の被験腎臓ホモジネート処理に対する残存活
性の測定により明らかである（第２表）。 【表】 【表】 【表】 次に実施例により本発明をさらに説明する。な
お、以下の実施例において用いる抗菌活性物質の
定性及び定量分析は下記の方法で行つた。 (1) ビオアツセイ法 一夜、ニユートリエント・アガー上で培養し
たコマモナス・テリゲナ（Comamonas
terrigena）Ｂ−996の菌体を、ニユートリエン
ト・ブロス中に懸濁させ、その菌体に由来する
610nm吸光度が、0.04を示す種母液をつくる。
極東粉末ブイヨン（極東製薬工業(株)製）0.8％
及びバクト・アガー（デイフコ社製）１％より
なるとけた寒天培地に種母液１％を接種し、こ
れを７mlずつ９cm径のペトリ皿に分注し固化さ
れて、コマモナス検定板とする。 (2) ビオオートグラフイー 上記ビオアツセイ法において、９cm径ペトリ
皿を用いる代りにタテ32cm×ヨコ24cmの皿を用
い、被験菌を接種した寒天培地100mlを分注し
固化させて大型検定板をつくる。 被検液の展開後のペーパークロマト紙を上
記で作つた大型検定板の寒天表面に張り、15分
後取り除き、大型検定板を35℃、20時間培養
し、阻止帯の位置よりペーパークロマトグラム
のRf値を算出し（定性）、且つ阻止帯の大きさ
から半定量することができる。薄層クロマト板
を用いる場合は、薄紙を介して、成分面がむれ
るように寒天表面に張り、15分後取り除き、上
記と同様操作により定性及び半定量分析を行
う。 実施例 １ ブレビバクテリウム・アンモニアゲネス
（ATCC6871）の培養方法 グルコース１％、ペプトン1.5％、K2HPO40.3
％、NaCl0.2％、MgSO4・7H2O0.02％、酵母エ
キス0.1％（殺菌前PH7.0）から成る培地５を
500mlエルレンマイヤーフラスコに100mlずつ分注
し、120℃15分間殺菌した。冷却後ブレビバクテ
リウム・アンモニアゲネス（ATCC6871）を無菌
的に接種し、28℃で２日間振盪培養した。培養
後、遠心分離により菌体を得、0.01Mリン酸緩衝
液（PH7.1）で２回洗浄後、同緩衝液100mlに懸濁
し、凍結保存した。 実施例 ２ 抗生物質OA−6129A−リン酸エステルの調製 ATP（2Na塩）300mg、MgSO4・7H2O148mgを
蒸留水５mlに溶解し、NaHCO3でPH７附近に調
整後1Mリン酸緩衝液（PH7.4）５ml、実施例１で
得られた菌体懸濁液100ml、ラウリル硫酸ナトリ
ウム100mgを加え良く撹拌した。これに抗生物質
OA−6129A（Na塩）40mgを加え35℃で４時間、
ゆるやかに振盪した。反応後遠心分離により菌体
を除去し、上清を高圧紙電気泳動（ワツトマン
No.１紙、1500V／30cm、50分、PH8.6ベロナー
ル緩衝液）で検定すると陽極側４cmの所にわずか
な原料スポツト、11cmの所に新らたな抗生物質
OA−6129A−リン酸エステルのスポツトが認め
られた。 この反応液（遠沈上清）を予め0.01Mリン酸緩
衝液（PH7.4）で平衡化したQAE−セフアデツク
スＡ−25（フアルマシア社製）カラム（3.0×40
cm）に吸着させ同緩衝液で洗浄後、同緩衝液に溶
解したNaClの濃度勾配により溶出した。抗生物
質OA−6129A−リン酸エステルは0.25M附近の
濃度で溶出されるので、その活性区分を集め、予
め0.01Mリン酸緩衝液（PH7.4）で平衡化したダ
イヤイオンHP−20AG（三菱化製社製）カラム
（3.0×40cm）に吸着させた。これを蒸留水で溶出
し、活性区分を凍結乾燥して部分精製標品16mgを
得た。本標品を蒸留水１mlに溶解し、セルロフア
インGC−15−ｍ（チツソ社製）カラム（1.9×65
cm）を用いてゲル過を行い、活性区分を凍結乾
燥してOA−6129A−リン酸エステル12.9mgを得
た。 この抗生物質OA−6129A−リン酸エステルは
次ぎのような諸特性を示した。 (1) 紫外部吸収スペクトラム 0.01Mリン酸緩衝液（PH7.4）中で測定 λnaxnm：302、Ｅ１％ １cm：87.9 (2) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D2O、内部
基準DSS） δ（ppm）： 0.89（3H，ｓ，【式】） 0.97（3H，ｓ，【式】） 0.98（3H，ｔ，Ｊ＝7.0Hz，CH2−ＣＨ 3） 1.50〜2.00（2H，ｍ，ＣＨ 2−CH3） 2.47（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，NH−CH2−ＣＨ 2
−CR） 2.70〜3.83（11H，ｍ，Ｃ−4H2、Ｃ−6H、
Ｓ−ＣＨ 2−ＣＨ 2−NH、NH−ＣＨ 2−CO、 【式】 3.85〜4.20（2H，ｍ，Ｃ−5H、
【式】 (3) 呈色反応 エールリツヒ試薬：陽性 塩化白金酸反応：陽性 モリブデン酸反応：陽性 ニンヒドリン反応：陰性 (4) ペーパークロマトグラフイー 東洋紙No.50 展開溶液 アセトニトリル：0.1M Tris−
HCl緩衝液（PH7.5）：0.1M EDTA＝120：30：
１ 検出方法 Comamonas terrigena B996に
よるバイオオーグラフイー Rf値 0.03（この時抗生物質OA−6129A、及
び抗生物質PS−5Rf値はそれぞれ0.26、0.31で
あつた。） (5) 高圧紙電気泳動 ワツトマンNo.１紙 ベロナール緩衝液（PH8.6） 1500V／30cm、50分通電 検出方法 Comamonas terrigena B996に
よるバイオオーグラフイー 移動度 陽極側に11〜12cm（この時、抗生物
質OA−6129Aは４〜５cm、PS−５は６〜７cm
陽極側に移動した。 (6) フオスフアターゼに対する挙動 アルカリフオスフアターゼ（シグマ社
P3877）処理により分解され、抗生物質OA−
6129Aを生ずる。 実施例 ３ 抗生物質OA−6129B−リン酸エステルの調製
及び単離精製 実施例２と同様にして抗生物質OA−6129B40
mgをリン酸化した。反応液を菌体除去後、予め
0.01Mリン酸緩衝液（PH7.4）で平衡化したQAE
−セフアデツクスＡ−25（フアルマシア社製）カ
ラム（3.0×40cm）に吸着させた。カラムを同緩
衝液で洗浄後、同緩衝液に溶解したNaClの濃度
勾配で溶出した。抗生物質OA−6129B−リン酸
エステルは0.35M附近で溶出されるのでその活性
区分を集め、予め0.01Mリン酸緩衝液で平衡化し
たダイヤイオンHP−20AG（三菱化製社製）カラ
ム（3.0×40cm）に吸着させた。同緩衝液で十分
洗浄後、10％アセトンで溶出した。活性区分を進
めドライアイストラツプを使用して減圧下約１ml
なるまで濃縮し、これをセルロフアインGC−15
−ｍ（チツソ社製）カラム（1.9×65cm）をゲル
過を行つた。活性区分を凍結乾燥して抗生物質
OA−6129B−リン酸エステル11.3mgを得た。 得られた抗生物質OA−6129B−リン酸エステ
ルは以下の諸特性を示した。 (1) 紫外部吸収スペクトラム 0.01Mリン酸緩衝液（PH7.4）中で測定 λnaxnm：302、Ｅ１％ １cm：82.4 (2) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D2O、内部
基準DSS） δ（ppm）： 0.87（3H，ｓ，【式】） 0.95（3H，ｓ，【式】） 1.27（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，【式】） 2.47（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，NH−CH2−ＣＨ 2
−CO） 2.80〜4.50（14H，ｍ，Ｃ−4H2、Ｃ−5H、
Ｃ−6H、【式】 Ｓ−ＣＨ 2−ＣＨ 2 −NH、NH−ＣＨ 2−CH2−CO、 【式】 【式】 (3) 呈色反応 エールリツヒ試薬：陽性 塩化白金酸反応：陽性 モリブデン酸反応：陽性 ニンヒドリン反応：陰性 (4) ペーバークロマトグラフイー 東洋紙No.50 展開溶液 アセトニトリル：0.1M Tris−
HCl緩衝液（PH7.5）：0.1M EDTA＝120：30：
１ 検出方法 Comamonas terrigena B996に
よるバイオオーグラフイー Rf値 0.01（この時抗生物質OA−6129A、及
び抗生物質PS−5Rf値はそれぞれ0.26、0.31で
あつた。） (5) 高圧紙電気泳動 ワツトマンNo.１紙 ベロナール緩衝液（PH8.6） 1500V／30cm、50分通電 検出方法 Comamonas terrigena B996に
よるバイオオーグラフイー 移動度 陽極側に11〜12cm（この時、抗生物
質OA−6129Aは４〜５cm、PS−５は６〜７cm
陽極側に移動した。 (6) フオスフアターゼに対する挙動 アルカリフオスフアターゼ（シグマ社
P3877）処理により分解され、抗生物質OA−
6129Bを生じる。 実施例 ４ 抗生物質OA−6129C−リン酸エステルの調製 抗生物質OA−6129C1mg（力価相当）をＭ／５
リン酸緩衝液（PH7.4）0.2mlに溶解し100mM
ATP溶液（NaHCO3でPH６〜７に調整）0.05ml、
100mM MgSO4溶液0.05ml、実施例１と同様にし
て得られた菌体懸濁液0.2mlを加え、撹拌後ラウ
リル硫酸ナトリウム0.5mgを添加し35℃で４時間
振盪した。反応後、遠心分離により菌体を除去
し、上清について高圧紙電気泳動を下記の条件
で行つたところ、陽極側6.5cmの所にわずかな原
料スポツトと9.4cmの所に新たなOA−6129C−リ
ン酸エステルのスポツトが認められた。 高圧紙電気泳動 ワツトマンNo.１紙 ベロナール緩衝液（PH8.6） 1500V／30cm、50分通電 検出方法 Comamonas terrigena B996によ
るバイオオーグラフイー 移動度（全て陽極側） 抗生物質 OA−6129C ６〜７cm 〃 OA−6129C−リン酸エステル
９〜10cm 〃 OA−6129A ２〜３cm 〃 PS−５ ４〜５cm 又、抗生物質OA−6129C−リン酸エステル区
分を切り出し、0.01Mリン酸緩衝液（PH8.4）で
抽出後、アルカリフオスフアターゼ（シグマ社
P3877）処理したものを再び高圧紙電気泳動で
行つたところ、抗生物質OA−6129Cのスポツト
が認められた。 本発明の原料に用いられる抗生物質OA−6129
物質の調製法を以下の参考例に示す。 参考例 〔A〕 500ml容エルレンマイヤーフラスコに100ml
の下記組成の種母培地（Ｓ−１）を入れ、常法
により、120℃で15分間殺菌した。 一方、ストレピトミセス・エスピーOA−
6129（Streptomyces sp.OA−6129）菌株の胞
子を充分着生させ、この一白金耳を上記種母培
地に接種し、28℃で48時間ロータリーシエーカ
ー（200rpm、振幅７cm）振盪培養した。この
種母培養液200mlを、下記組成の種母培地（SE
−４）15を入れた30容ジヤー・フアーメン
ターに接種し、28℃、400rpmで撹拌及び7.5
／min通気の条件下に90時間通気撹拌培養を
行つた。消泡剤としてシリコンKM−75〔登録
商標・信越化学(株)製〕を0.07％使用した。 〔B〕 上記〔Ａ〕で得られた24時間培養後の種母
培養液２を下記組成の生産培地（GM−１）
100を入れた200容醗酵タンクに接種し、28
℃、200rpmで撹拌及び50／min通気の条件
下に90時間通気撹拌培養を行つた。消泡剤とし
てシリコンKM−75〔前出〕を0.07％使用した。 経時的に培養液をサンプリングし、遠心分離
した上澄液について抗菌力の測定を行つた。 各時間における測定結果は、下表に示す通り
であつた（抗菌力価はPS−５ナトリウム塩相
当力価である）。 培養時間（時間） 抗菌力価（μg／ml） 48 2.6 72 11.5 90 24.0 種母培地（Ｓ−１）の組成： 大豆粉 1.5％（Ｗ／Ｖ） 酵母エキストラクト 0.5 〃 ポテトスターチ 2.0 〃 CaCO3 0.2 〃 PH（殺菌前） 7.0 〃 種母培地（SE−４）の組成： 牛肉エキストラクト 0.3％（Ｗ／Ｖ） トリプトン 0.5 〃 グルコース 0.5 〃 溶性でんぷん 2.4 〃 酵母エキストラクト 0.5 〃 CaCO3 0.4 〃 大豆粉 0.5 〃 PH（殺菌前） 7.5 〃 生産培地（GM−１）の組成： グリセリン 8.0％（Ｗ／Ｖ） 魚粉 1.0 〃 大豆粉 3.0 〃 CaCO3 0.3 〃 K2HPO4 0.2 〃 MgSO4 0.2 〃 殺菌前に、NaOHでPHを7.2に調整。 別にPH5.5の0.01Mリン酸緩衝液中に溶解し、
且つオートクレーブで１Kg／cm2Ｇ、５分間殺菌
したビタミンB12を0.0005％（Ｗ／Ｖ）添加。 〔C〕 上記〔Ｂ〕で得られた90時間培養後の醗酵
液100に５％（Ｗ／Ｖ）量のトプコパーライ
トNo.34〔登録商標・東興パーライト(株)製〕を添
加し、バスケツト型遠心分離器で菌体を分離
し、90の培養液を得た。これをダイヤイオ
ンHP−20〔登録商標・三菱化成(株)製〕充填カ
ラム（15×100cm）に吸着させ、蒸留水５で
洗浄後、30％（Ｖ／Ｖ）アセトン水溶出した。
１画分を1.0とし、その溶出液を分画した。
バイオアツセイ活性画分８から15までの合計
8.0の溶出液を集め、これをダイヤオイン
PA306S〔登録商標・三菱化成(株)製〕充填カラ
ム（８×60cm）に吸着させ、蒸留水1.0で洗
浄後、30％食塩水で溶出した。500mlずつ溶出
液を分画し、バイオアツセイ活性画分７から画
分16までの合計5.0の抗生物質OA−6129A、
Ｂが含まれた溶出液を集めた。 続いて、上記のPA306S充填カラムを30％食
塩水で溶出し、500mlずつ溶出液を分画し、バ
イオアツセイ活性画分３から画分16までの合計
7.0の抗生物質OA−6129Cが含まれた溶出液
を集めた。 抗生物質OA−6129A、Ｂを含む溶出液5.0
に300ｇの食塩を加え、ダイヤイオンHP−20
充填カラム（６×150cm）に吸着させ、蒸留水
500mlで洗浄後、濃度が０％から40％まで直線
的に増加するアセトン水合計4.0で溶出した。 １区分を17mlとして、その溶出液を分画し
た。バイオアツセイ活性画分20から画分130ま
での約1.8の溶出液には、主に抗生物質OA−
6129Bと若干の抗生物質OA−6129Aが含まれ
ていた。バイオアツセイ活性画分131から画分
170までの約700mlの溶出液にはOA−6129Aと
が含まれていた。上記の２区分をそれぞれ凍結
乾燥し、茶褐色の粉末を得た。 抗生物質OA−6129Aの精製 〔D〕 抗生物質OA−6129Aを主に含む溶出液を凍
結乾燥することによつて得られた茶褐色粉末
を、少量の蒸留水に溶解し、バイオゲルＰ−２
（登録商標・バイオラツド社製充填カラム（８
×100cm）に導き、蒸留水で展開し、バイオア
ツセイにより活性画分1.0を集めた。この活
性画分を予め、0.01Mリン酸緩衝液（PH8.4）
で平衡化したQAE−セフアデツクスＡ−25（登
録商標・フアルマシア社製）充填カラム（４×
40cm）に吸着させ、上記緩衝液200mlで洗浄後、
濃度が０％から４％まで直線的に増加する食塩
水（合計3.0）で溶出を行つた。溶出液を15
mlずつ分画し、バイオアツセイを行い、画分51
から画分70まで、合計300mlの活性画分を得た。 この画分を凍結乾燥し、黄褐色の粉末を得
た。 この粉末を少量の蒸留水に溶解し、５ｇの食
塩を加え、ダイヤイオンHP−20AG（登録商
標・三菱化成(株)製〕充填カラム（２×50cm）に
吸着させ、５％食塩水50mlで洗浄後、蒸留水
100mlで洗浄した。濃度が０％から30％まで直
線的に増加するアセトン水（合計1.0）で溶
出し、１画分を10mlとし、その溶出液を分画し
た。バイオアツセイにより、活性画分35から画
分45までの合計110mlを集め、これを凍結乾燥
すると黄褐色の抗生物質OA−6129Aの粗粉末
52mlが得られた。 該粉末を、少量の蒸留水に溶解し、セフアデ
ツクスＧ−10（登録商標・フアルマシア社製）
充填カラム（２×80cm）に導き、蒸留水で展開
し、バイオアツセイにより活性画分30mlを集め
た。この活性画分を予め、0.01Mリン酸緩衝液
（PH8.4）で平衡化したQAE−セフアデツクス
Ａ−25（前出）充填カラム（２×30cm）に吸着
させ、上記緩衝液50mlで洗浄後、濃度が０％か
ら５％まで直線的に増加する食塩水（合計800
ml）で溶出を行い、溶出液を５mlずつ分画し
た。バイオアツセイにより、活性画分36から画
分40までの合計25mlを集めた。 この画分に４ｇの食塩を加え、ダイヤイオン
HP−20AG〔前出〕充填カラム（２×40cm）に
吸着させ、蒸留水50mlで洗浄後、濃度０％から
30％まで直線的に増加するアセトン水（合計
800ml）で溶出し、１画分を５mlとし、その溶
出液を分画した。 バイオアツセイにより、活性画分105から画
分117の合計65mlを集めた。 これを凍結乾燥することにより抗生物質OA
−6129Aの淡黄粉末21ｇを得た。 得られた抗生物質OA−6129Aの凍結乾燥標品
は次の特性を示した。 (1) 形状：淡黄色粉末 (2) 比施光度：〔α〕24 D：11.6゜（ｃ＝1.0、0.01Mリ
ン酸緩衝液、PH8.4） 但し、紫外部吸収においてλnax300nmのεを
5600とした時の値である。 (3) 分子式 理論分子式C20H30N3O7SNa（M.W.＝479） (4) 紫外部吸収スペクトラム 0.01Mリン酸緩衝液（PH8.4） λnaxnm（ε）300（5600） (5) 赤外部吸収スペクトラム（KBr）の主要ピ
ークλnaxcm-1： 1760（β−ラクタム） 1660（アミド） 1600（カルボキシレート） (6) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D2O） （内部基準：DSS） δ（ppm）： 0.89（3H，ｓ，【式】） 0.92（3H，ｓ，【式】） 1.00（3H，ｔ，Ｊ＝7.5Hz，CH2−ＣＨ 3） 1.60〜2.00（2H，ｍ，ＣＨ 2−CH3） 2.48（2H，ｔ，Ｊ＝7.5Hz，Ｎ−CH2−ＣＨ 2
−CO） 2.8〜3.65（11H，ｍ，Ｃ−4H2、Ｃ−6H、Ｓ
−ＣＨ 2−ＣＨ 2−NH、NH−ＣＨ 2−CH2−
CO−Ｃ−ＣＨ 2−OH） 3.95（2H，ｍ，Ｃ−5H、
【式】） 〔E〕 抗生物質OA−6129Bの精製 抗生物質OA−6129Bを主に含む溶出液を、
凍結乾燥することによつて得られた茶褐色の粉
末を、少量の蒸留水に溶解し、バイオゲルＰ−
２（前出）充填カラム（８×100cm）に導き、蒸
留水で展開し、バイオアツセイにより活性画分
1.0を集めた。この活性区分を予め、0.01M
リン酸緩衝液（PH8.4）で平衡化したQAE−セ
フアデツクスＡ−25（前出）充填カラム（４×
40cm）に吸着させ、上記緩衝液200mlで洗浄後、
濃度０％から４％まで直線的に増加する食塩水
（合計3.0）で溶出を行つた。溶出液を15mlず
つ分画し、バイオアツセイを行い、画分51から
画分70まで、合計300mlの活性画分を得た。 この粉末を少量の蒸留水に溶解し、５ｇの食
塩水を加え、ダイヤイオンHP−20AG（前出）
充填カラム（２×50cm）に吸着させ、５％食塩
水50mlで洗浄後、蒸留水100mlで洗浄した。濃
度が０％から30％まで直線的に増加するアセト
ン水（合計1.0）で溶出し、１画分を10mlと
し、その溶出液を分画した。バイオアツセイに
より活性画分15から画分35まで合計210mlの区
分を得た。この区分を凍結乾燥することにより
抗生物質OA−6129Bの黄褐色粉末が得られた。
得られた抗生物質OA−6129Bの凍結乾燥標品
は次の特性を有した。 (1) 形状：淡黄色粉末 (2) 比施光度：〔α〕24 D4.7゜（ｃ＝1.0、0.01Mリ
ン
酸緩衝液、PH8.4） 但し、紫外部吸収においてλnax300nmのε
を5400とした時の値である。 (3) 分子式 理論分子式C20H30N3O8SNa（M.W.＝495） (4) 紫外部吸収スペクトラム 0.01Mリン酸緩衝液（PH8.4） λnaxnm（ε）300（5400） (5) 赤外部吸収スペクトラム（KBr）の主要
ピークνnaxcm-1： 1760（β−ラクタム） 1660（アミド） 1600（カルボキシレート） (6) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D2O）
（内部基準：DSS） δ（ppm）： 0.87（3H，ｓ，【式】） 0.92（3H，ｓ，【式】） 1.28（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，【式】） 2.45（2H，ｔ，Ｊ＝7.0Hz，NH−CH2−ＣＨ 2
−CO） 3.94（1H，ｓ，【式】） 〔F〕 抗生物質OA−6129Cの精製 前期の抗生物質OA−6129Cを含む溶出液7.0
をダイヤイオンHP−20（前出）充填カラム
（５×80cm）に吸着させ、0.01Mリン酸緩衝液
（PH8.4）1.5で洗浄後、濃度が０％から20％
まで直線的に増加するアセトン水（合計6.0）
で溶出液を25mlずつ分画し、画分９から画分13
までの合計1.25の溶出液を得た。 この溶出液を、３％アルキルジメチルベンジ
ルアンモニウムクロライド〔東京化成(株)製〕を
含むメチレンクロライド1.0で抽出を行い、
続いて、抽出後のメチレンクロライド層を８％
ヨウ化ナトリウム水溶液300mlで再抽出を行つ
た。 得られた抽出液300mlを予め0.01Mリン酸緩
衝液（PH8.4）で平衡化したバイオゲルＰ−２
（前出）充填カラム（８×100cm）に導き、上記
緩衝液で展開し、バイオアツセイを行い、活性
画分1.2を集めた。 この溶出液をダイヤイオンHP−20充填カラ
ム（４×60cm）に吸着させ、蒸留水600mlで洗
浄後、濃度が０％から10％まで直接的に変化す
るアセトン水（合計3.0）で溶出した。溶出
液を15mlずつ分画し、バイオアツセイを行い、
画分４から画分115までの合計1.1の活性画分
を得た。この溶出液を予め0.01Mリン酸緩衝液
（PH8.4）平衡化したQAE−セフアデツクスＡ
−25（前出）充填カラム（４×40cm）に吸着さ
せ、上記緩衝液500mlで洗浄後、濃度が０％か
ら５％まで直線的に増加する食塩水（合計3.0
）で溶出を行つた。溶出液を15mlずつ分画
し、バイオアツセイを行い、画分112から画分
139までの合計420mlの活性画分を得た。次に、
この活性画分に最終濃度が５％になるように食
塩を加え、ダイヤイオンHP−20AG〔前出〕充
填カラム（３×60cm）に吸着させ、脱イオンで
溶出をおこなつた。溶出液を15mlずつ分画し、
バイオアツセイを行い画分31から画分48まで、
合計270mlの活性画分を得た。この活性画分を
凍結乾燥し、135mgの黄褐色の粉末を得た。 この粉末135mgを少量の蒸留水に溶解し、セ
フアデツクスＧ−10（前出）充填カラム（２×
70cm）に導き、蒸留水で展開し、バイオアツセ
イを行い、活性画分合計68mlを得た。 これを予め、0.01Mリン酸緩衝液（PH8.4）
で平衡化したQAE−セフアデツクスＡ−25充
填カラム（４×30cm）に吸着させ、上記緩衝液
800mlで洗浄後、濃度が０から５％まで直接的
に増加する食塩水（合計2.4）で溶出した。
溶出液を13mlずつ分画し、バイオアツセイを行
い、画分118から画分139まで合計286mlを得た。 これに、最終濃度が５％になるように食塩を
加え、ダイヤイオンHP−20AG充填カラム
（３×60cm）に吸着させ脱イオン水で溶出を行
つた。溶出液を10mlずつ分画し、300nmに、紫
外部極大吸収を有する画分を合計90ml集めた。 これを、凍結乾燥し、18mgの淡黄色の抗生物
質OA−6129C粉末を得た。 得られた抗生物質OA−6129Cの凍結乾燥標品
は次の特性を示した。 (1) 形状：淡黄色粉末 (2) 比施光度：〔α〕24 D：17.4゜（ｃ＝0.55、0.01M
リ
ン酸緩衝液、PH8.2） (3) 元素分析値（C20H29N3O11S2Na2・2H2Oと
して） 計算値 Ｃ 37.91％、Ｈ 5.25％ Ｎ 6.63％、Ｓ 10.12％ 分析値 Ｃ 37.61％、Ｈ 5.00％ Ｎ 6.38％、Ｓ 9.52％ (4) 分子量597.5731（分子式C20H29N3O11S2Na2） (5) 紫外部吸収スペクトラム 0.01Mリン酸緩衝液（PH8.4） λnax（ε）：300.5（7600） (6) 赤外部吸収スペクトラム（KBr）の主要ピ
ーク λnaxcm-1： 1750（β−ラクタム） 1660〜1595（アミド、カルボキシレート） 1250〜1220（硫酸エステル） (7) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D2O） （内部基準：DSS） δ（ppm）： 0.86（3H，ｓ，【式】） 0.89（3H，ｓ，【式】） 1.49（3H，ｄ，Ｊ＝6.5Hz，ＣＨ 3−CH−） 2.47（2H，ｔ，Ｊ＝7.0Hz，Ｎ−CH2−ＣＨ 2
−CO） 2.70〜3.10（10H，ｍ，Ｃ−４Ｈ 2−ＣＨ 2−
OH、NH−ＣＨ 2−CH2−CO、Ｓ−ＣＨ 2−Ｃ
Ｈ2−NH） 3.83（1H，dd，Ｊ＝5.5Hz，Ｊ＝9.5Hz，Ｃ−
６Ｈ） 3.94（1H，Ｓ，【式】） 4.40〜4.43（1H，ｍ，Ｃ−５Ｈ） 4.78（1H，dd，Ｊ＝6.5HzＪ＝9.5Hz，
【式】）
記式 式中、Ｒは水素原子、水酸基又はヒドロキシス
ルホニルオキシ基を表わす、 で示される化合物及びそれらの塩、並びに該化合
物の製造方法に関する。 下記式 で示される７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・
２・０〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸骨格
を有する抗生物質は、一般に高い抗菌力とβ−ラ
クタマーゼ阻害活性を有しており、従来から、発
酵法、半合成法、全合成法により各種の７−オキ
シ−１−アザビシクロ〔３・２・０〕ヘプト−２
−エン−２−カルボン酸誘導体が製造されている
〔例えば、チエナマイシン（ジヤーナル・オブ・
アンテイビオテイクス、32巻（1979年）、１〜12
頁）、エピチエナマイシン類（第17回インターサ
イエンス・コンフアランス・オン・アンテイミク
ロビアル・エイゼンツ・アンド・ケモテラピー、
要旨第80号および第81号（1977年））、Ｎ−アセチ
ルエナマイシン（西ドイツ特許第2652681号
（1977））、オリバニン酸類（ジヤーナル・オブ・
アンテイビオテイクス、32巻（1979年）、284〜
304頁）、PS−５（ジヤーナル・オブ・アンテイビ
オテイクス、32巻（1979年）、262〜286頁）、PS
−６（特開昭54−59295号）、PS−７（特開昭54−
92983号）など〕。 さらに、本発明者の一部は、ストレプトミセス
OA−6129菌株（微工研条寄第11号（FERM BP
−11）が下記式 式中、Ｒは水素原子、水酸基又はヒドロキシス
ルホニルオキシ基を表わす、 で示される７−オキソ−１アザビシクロ〔３・
２・０〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸骨格
の３位にパンテテイニル基を有し且つ６位にエチ
ル基、１−ヒドロキシエチル基又は１−ヒドロキ
シスルホニルオキシエチル基を有している点に構
造的特徴を有する従来の文献に未載の新規な抗生
物質を産出することを見い出し、これらを抗生物
質OA−6129A、Ｂ及びＣと命名して先に特許出
願した。（特開昭57−62280号、同昭57−70890号
及び同昭57−95987号参照）。 本発明により提供される前記式（）の化合物
は、上記抗生物質OA−6129A、Ｂ及びＣ（以下、
総称して「抗生物質OA−6129」という）の一級
水酸基がリン酸エステルになつている点に構造的
特徴を有する新規な抗生物質である。以下これら
の抗生物質のうち、６位にエチル基を有する化合
物を「抗生物質OA−6129A−リン酸エステル」、
１−ヒドロキシエチル基を有する化合物を「抗生
物質OA−6129B−リン酸エステル」、並びに１−
ヒドロキシスルホニルオキシエチル基 【式】を有する化合物を「抗生物 質OA−6129C−リン酸エステル」と略称する。 また、これらのリン酸エステルを「抗生物質
OA−6129のリン酸エステル」と総称する。 式（）の新規抗生物質OA−6129のリン酸エ
ステルは、従来提案されている同じ基本骨格をも
つ抗生物質に比較して安定である点でユニークで
あり、しかも上記の公知文献に記載されていると
同様に、強い抗菌力及びβ−ラクタマーゼ阻害活
性を有すると共に、β−ラクタマーゼ生産菌に対
するペニシリン系、セフアロスポリン系等の抗菌
生物質の抗菌力を相乗的に増強する能力をも併せ
有しており、抗菌剤として有用である。 式（〕の化合物は、２−位のカルボキシル基
及び／又はリン酸基の塩の形態をとることもで
き、かかる塩の例としては、例えばナトリウム
塩、カリウム塩、リチウム塩の如きアルカリ金属
塩；カルシウム塩、マグネシウム塩の如きアルカ
リ土類金属塩；アルミニウム塩の如きその他の金
属塩；アンモニウム塩、モノエチルアミン、ジメ
チルアミン、トリメチルアミン、モノエタノール
アミン、ジエタノールアミンの如く第一級、第二
級又は第三級アミンによる塩；ベンザチン塩、プ
ロカイン塩などの有機塩基による塩、等が含ま
れ、中でも製薬学的に許容しうる塩が好ましく、
特に、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ
金属塩が好適である。 本発明に従えば、前記式（）の抗生物質OA
−6129のリン酸エステルは、式（）で示される
抗生物質OA−6129A、ＢまたはＣを基質とした
通常の酵素反応条件下に、ATP（アデノシン−
5′−トリリン酸）の共存下でパントテン酸をリン
酸化し得る微生物の培養菌体又は該菌体の処理物
で反応させることにより製造することができる。 本発明で使用する培養菌体又は該菌体の処理物
は、前述した式（）の化合物の一級水酸基をリ
ン酸化し、６位の置換基が対応する式（）の化
合物を生産する能力を有するものである限り、ど
のような属に属する微生物の菌体又は菌体処理物
でも使用できるが、本発明の目的に適する菌体又
は菌体処理物は、一般にパンテトテン酸をリン酸
化し得るもの（例えば、Agricultual and
Biological Chemistry vol.36、84〜92頁（1972）
に記載の菌株）を挙げることができるが、その中
で、ブレビバクテリウム・アンモニアゲネス
ATCC6871の培養菌体の洗浄したものが有利に用
いられる。 該菌体を用いた酵素反応は、PH６〜8.5の緩衝
液にリン酸供与体としてATPを添加し、上記菌
体を懸濁した溶液を調製した後、式（）で示さ
れる各化合物を添加反応させる方法によつて実施
できる。 緩衝液は、式（）の化合物の安定性等を考慮
してリン酸の含有するもので、PH６〜8.5の範囲、
特に、PH７〜８の範囲に調節するのが有利であ
る。 かかる緩衝液での反応は、一般に20〜45℃、好
ましくは30〜40℃の範囲内の温度が好適であり、
その反応時間は、反応温度や使用菌体又は菌体処
理物によつて異なるが通常30分〜10時間の範囲で
ある。 また、反応を好適に行なうため、必要に応じて
反応液中高級脂肪属硫酸ナトリウム等の界面活性
剤やマグネシウム等の酵素活性の安定化に寄与し
得る金属イオンを共存させることができる。 なお、使用する反応条件は、使用する菌体又は
菌体処理物の特性に応じて、当業者であれば簡単
な実験により、最適条件を容易に決定することが
できる。 かくして生成した式（）の化合物を反応混合
物から単離するには、反応液、過、遠心分離、
抽出などのそれ自体公知の分離法によつて菌体又
は菌体処理物を除去し、その液、上澄液、抽出
液などにより回収される。 回収はそれ自体公知の種々の方法で行なうこと
ができ、特にカルボン酸型抗生物質の回収のため
にしばしば利用される方法が有利に適用される。
例えば、低PHにおける酢酸エチル、ｎ−ブタノー
ル等での溶媒抽出及びその溶媒層から高PH水層へ
の転溶；活性炭、アンバーライトXAD（ローム・
アンド・ハース社製）、ダイヤイオンHP−20（三
菱化成社製）等による吸着と、メタノール水、ア
セトン水等による溶出；ダウエツクス１×２（ダ
ウケミカル社製）、QAE−セフアデツクスＡ−25
（フアルマシア社製）、DEAE−セルローズワツト
マンDE−32（ワツトマン社製）、DEAE−セフア
デツクスＡ−25（フアルマシア社製）等のイオン
交換樹脂による吸着及び溶出；セフアデツクスＧ
−10（フアルマシア社製）、バイオ・ゲルＰ−２
（バイオ・ラツド社製）、等にゲル過；セルロー
ズ、アビセルSF（アメリカン・ビスコース社製）
等のカラムクロマトグラフイー；アセトン等の溶
剤添加による強制沈殿法；凍結乾燥法、等をそれ
ぞれ単独で或いは適宜組合せて、さらに場合によ
つては反復して使用される。 回収精製工程中の式（）の化合物の挙動は後
述するビオアツセイ法およびビオオートグラフイ
ーにより定量測定することができる。 かくして、前記した特性を有する抗生物質OA
−6129A−リン酸エステル、同OA−6129B−リ
ン酸エステル又は同OA−6129C−リン酸エステ
ルが得られる。 本抗生物質OA−6129のリン酸エステルは、一
般に遊離型のものよりも塩の形の方がより安定で
あるから、後述する医薬用途に使用したり、さら
に誘導体に転換する場合の中間体として使用した
り、或いは前記した精製工程に付する場合等にお
いては、塩の形で処理することが好適である。 抗生物質OA−6129のリン酸エステルのその塩
形への転化はそれ自体公知の方法に従い、該抗生
物質OA−6129のリン酸エステルを無機又は有機
の塩基で処理することにより行うことができる。
この造塩反応に使用し得る無機又は有機の塩基と
しては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリ
ウム、水酸化リチウム如きアルカリ金属の水酸化
物；水酸化カルシウム、水酸化マグネシウムの如
きアルカリ土類金属の水酸化物；モノエチルアミ
ン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、モノエ
タノールアミン、ジエタノールアミン、ベンザチ
ン、プロカインの如き第一級、第二級又は第三級
の有機アミン等が挙げられる。 本発明により提供される抗生物質OA−6129の
リン酸エステル又はその塩は、広範囲の抗菌活性
を有し、各種微生物、例えばスタフイロコツカス
属、サルシナ属、バチルス属等に属する陽性菌に
対し非常に強い抗菌力を示し、更に例えばアルカ
リゲネス属、コマモナス属等に属するグラム陰性
菌に対しても非常に強い抗菌力を示す。 また、本発明の抗生物質OA−6129のリン酸エ
ステルは、例えばエシエリヒア属、クレブシエラ
属、プロテウス属等に属するグラム陰性菌に対し
てもかなり強い抗菌力を示す。 特に、本発明の抗生物質OA−6129のリン酸エ
ステルは、β−ラクタム環を有する抗生物質に対
して耐性を有する、例えばシトロバクター属、プ
ロテウス属、エンテロバクター属、クレブシエラ
属、セラチア属等に属するグラム陰性細菌に対し
てかなり強い抗菌力を示す点、及び哺乳動物の腎
臓ホモジネートに対して安定である点で特徴的で
ある。 本発明の抗生物質OA−6129のリン酸エステル
の抗菌スペクトルは以下に述べる各種病原性被験
菌に対する最小発育阻止濃度の測定により立証さ
れる（第１表）。 また、本発明の抗生物質OA−6129のリン酸エ
ステルは、前述したように、従来公知の同種の抗
生物質と比較して安定であり、特に哺乳動物の腎
臓ホモジネートに対する安定性は、以下に述べる
各種の被験腎臓ホモジネート処理に対する残存活
性の測定により明らかである（第２表）。 【表】 【表】 【表】 次に実施例により本発明をさらに説明する。な
お、以下の実施例において用いる抗菌活性物質の
定性及び定量分析は下記の方法で行つた。 (1) ビオアツセイ法 一夜、ニユートリエント・アガー上で培養し
たコマモナス・テリゲナ（Comamonas
terrigena）Ｂ−996の菌体を、ニユートリエン
ト・ブロス中に懸濁させ、その菌体に由来する
610nm吸光度が、0.04を示す種母液をつくる。
極東粉末ブイヨン（極東製薬工業(株)製）0.8％
及びバクト・アガー（デイフコ社製）１％より
なるとけた寒天培地に種母液１％を接種し、こ
れを７mlずつ９cm径のペトリ皿に分注し固化さ
れて、コマモナス検定板とする。 (2) ビオオートグラフイー 上記ビオアツセイ法において、９cm径ペトリ
皿を用いる代りにタテ32cm×ヨコ24cmの皿を用
い、被験菌を接種した寒天培地100mlを分注し
固化させて大型検定板をつくる。 被検液の展開後のペーパークロマト紙を上
記で作つた大型検定板の寒天表面に張り、15分
後取り除き、大型検定板を35℃、20時間培養
し、阻止帯の位置よりペーパークロマトグラム
のRf値を算出し（定性）、且つ阻止帯の大きさ
から半定量することができる。薄層クロマト板
を用いる場合は、薄紙を介して、成分面がむれ
るように寒天表面に張り、15分後取り除き、上
記と同様操作により定性及び半定量分析を行
う。 実施例 １ ブレビバクテリウム・アンモニアゲネス
（ATCC6871）の培養方法 グルコース１％、ペプトン1.5％、K2HPO40.3
％、NaCl0.2％、MgSO4・7H2O0.02％、酵母エ
キス0.1％（殺菌前PH7.0）から成る培地５を
500mlエルレンマイヤーフラスコに100mlずつ分注
し、120℃15分間殺菌した。冷却後ブレビバクテ
リウム・アンモニアゲネス（ATCC6871）を無菌
的に接種し、28℃で２日間振盪培養した。培養
後、遠心分離により菌体を得、0.01Mリン酸緩衝
液（PH7.1）で２回洗浄後、同緩衝液100mlに懸濁
し、凍結保存した。 実施例 ２ 抗生物質OA−6129A−リン酸エステルの調製 ATP（2Na塩）300mg、MgSO4・7H2O148mgを
蒸留水５mlに溶解し、NaHCO3でPH７附近に調
整後1Mリン酸緩衝液（PH7.4）５ml、実施例１で
得られた菌体懸濁液100ml、ラウリル硫酸ナトリ
ウム100mgを加え良く撹拌した。これに抗生物質
OA−6129A（Na塩）40mgを加え35℃で４時間、
ゆるやかに振盪した。反応後遠心分離により菌体
を除去し、上清を高圧紙電気泳動（ワツトマン
No.１紙、1500V／30cm、50分、PH8.6ベロナー
ル緩衝液）で検定すると陽極側４cmの所にわずか
な原料スポツト、11cmの所に新らたな抗生物質
OA−6129A−リン酸エステルのスポツトが認め
られた。 この反応液（遠沈上清）を予め0.01Mリン酸緩
衝液（PH7.4）で平衡化したQAE−セフアデツク
スＡ−25（フアルマシア社製）カラム（3.0×40
cm）に吸着させ同緩衝液で洗浄後、同緩衝液に溶
解したNaClの濃度勾配により溶出した。抗生物
質OA−6129A−リン酸エステルは0.25M附近の
濃度で溶出されるので、その活性区分を集め、予
め0.01Mリン酸緩衝液（PH7.4）で平衡化したダ
イヤイオンHP−20AG（三菱化製社製）カラム
（3.0×40cm）に吸着させた。これを蒸留水で溶出
し、活性区分を凍結乾燥して部分精製標品16mgを
得た。本標品を蒸留水１mlに溶解し、セルロフア
インGC−15−ｍ（チツソ社製）カラム（1.9×65
cm）を用いてゲル過を行い、活性区分を凍結乾
燥してOA−6129A−リン酸エステル12.9mgを得
た。 この抗生物質OA−6129A−リン酸エステルは
次ぎのような諸特性を示した。 (1) 紫外部吸収スペクトラム 0.01Mリン酸緩衝液（PH7.4）中で測定 λnaxnm：302、Ｅ１％ １cm：87.9 (2) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D2O、内部
基準DSS） δ（ppm）： 0.89（3H，ｓ，【式】） 0.97（3H，ｓ，【式】） 0.98（3H，ｔ，Ｊ＝7.0Hz，CH2−ＣＨ 3） 1.50〜2.00（2H，ｍ，ＣＨ 2−CH3） 2.47（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，NH−CH2−ＣＨ 2
−CR） 2.70〜3.83（11H，ｍ，Ｃ−4H2、Ｃ−6H、
Ｓ−ＣＨ 2−ＣＨ 2−NH、NH−ＣＨ 2−CO、 【式】 3.85〜4.20（2H，ｍ，Ｃ−5H、
【式】 (3) 呈色反応 エールリツヒ試薬：陽性 塩化白金酸反応：陽性 モリブデン酸反応：陽性 ニンヒドリン反応：陰性 (4) ペーパークロマトグラフイー 東洋紙No.50 展開溶液 アセトニトリル：0.1M Tris−
HCl緩衝液（PH7.5）：0.1M EDTA＝120：30：
１ 検出方法 Comamonas terrigena B996に
よるバイオオーグラフイー Rf値 0.03（この時抗生物質OA−6129A、及
び抗生物質PS−5Rf値はそれぞれ0.26、0.31で
あつた。） (5) 高圧紙電気泳動 ワツトマンNo.１紙 ベロナール緩衝液（PH8.6） 1500V／30cm、50分通電 検出方法 Comamonas terrigena B996に
よるバイオオーグラフイー 移動度 陽極側に11〜12cm（この時、抗生物
質OA−6129Aは４〜５cm、PS−５は６〜７cm
陽極側に移動した。 (6) フオスフアターゼに対する挙動 アルカリフオスフアターゼ（シグマ社
P3877）処理により分解され、抗生物質OA−
6129Aを生ずる。 実施例 ３ 抗生物質OA−6129B−リン酸エステルの調製
及び単離精製 実施例２と同様にして抗生物質OA−6129B40
mgをリン酸化した。反応液を菌体除去後、予め
0.01Mリン酸緩衝液（PH7.4）で平衡化したQAE
−セフアデツクスＡ−25（フアルマシア社製）カ
ラム（3.0×40cm）に吸着させた。カラムを同緩
衝液で洗浄後、同緩衝液に溶解したNaClの濃度
勾配で溶出した。抗生物質OA−6129B−リン酸
エステルは0.35M附近で溶出されるのでその活性
区分を集め、予め0.01Mリン酸緩衝液で平衡化し
たダイヤイオンHP−20AG（三菱化製社製）カラ
ム（3.0×40cm）に吸着させた。同緩衝液で十分
洗浄後、10％アセトンで溶出した。活性区分を進
めドライアイストラツプを使用して減圧下約１ml
なるまで濃縮し、これをセルロフアインGC−15
−ｍ（チツソ社製）カラム（1.9×65cm）をゲル
過を行つた。活性区分を凍結乾燥して抗生物質
OA−6129B−リン酸エステル11.3mgを得た。 得られた抗生物質OA−6129B−リン酸エステ
ルは以下の諸特性を示した。 (1) 紫外部吸収スペクトラム 0.01Mリン酸緩衝液（PH7.4）中で測定 λnaxnm：302、Ｅ１％ １cm：82.4 (2) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D2O、内部
基準DSS） δ（ppm）： 0.87（3H，ｓ，【式】） 0.95（3H，ｓ，【式】） 1.27（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，【式】） 2.47（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，NH−CH2−ＣＨ 2
−CO） 2.80〜4.50（14H，ｍ，Ｃ−4H2、Ｃ−5H、
Ｃ−6H、【式】 Ｓ−ＣＨ 2−ＣＨ 2 −NH、NH−ＣＨ 2−CH2−CO、 【式】 【式】 (3) 呈色反応 エールリツヒ試薬：陽性 塩化白金酸反応：陽性 モリブデン酸反応：陽性 ニンヒドリン反応：陰性 (4) ペーバークロマトグラフイー 東洋紙No.50 展開溶液 アセトニトリル：0.1M Tris−
HCl緩衝液（PH7.5）：0.1M EDTA＝120：30：
１ 検出方法 Comamonas terrigena B996に
よるバイオオーグラフイー Rf値 0.01（この時抗生物質OA−6129A、及
び抗生物質PS−5Rf値はそれぞれ0.26、0.31で
あつた。） (5) 高圧紙電気泳動 ワツトマンNo.１紙 ベロナール緩衝液（PH8.6） 1500V／30cm、50分通電 検出方法 Comamonas terrigena B996に
よるバイオオーグラフイー 移動度 陽極側に11〜12cm（この時、抗生物
質OA−6129Aは４〜５cm、PS−５は６〜７cm
陽極側に移動した。 (6) フオスフアターゼに対する挙動 アルカリフオスフアターゼ（シグマ社
P3877）処理により分解され、抗生物質OA−
6129Bを生じる。 実施例 ４ 抗生物質OA−6129C−リン酸エステルの調製 抗生物質OA−6129C1mg（力価相当）をＭ／５
リン酸緩衝液（PH7.4）0.2mlに溶解し100mM
ATP溶液（NaHCO3でPH６〜７に調整）0.05ml、
100mM MgSO4溶液0.05ml、実施例１と同様にし
て得られた菌体懸濁液0.2mlを加え、撹拌後ラウ
リル硫酸ナトリウム0.5mgを添加し35℃で４時間
振盪した。反応後、遠心分離により菌体を除去
し、上清について高圧紙電気泳動を下記の条件
で行つたところ、陽極側6.5cmの所にわずかな原
料スポツトと9.4cmの所に新たなOA−6129C−リ
ン酸エステルのスポツトが認められた。 高圧紙電気泳動 ワツトマンNo.１紙 ベロナール緩衝液（PH8.6） 1500V／30cm、50分通電 検出方法 Comamonas terrigena B996によ
るバイオオーグラフイー 移動度（全て陽極側） 抗生物質 OA−6129C ６〜７cm 〃 OA−6129C−リン酸エステル
９〜10cm 〃 OA−6129A ２〜３cm 〃 PS−５ ４〜５cm 又、抗生物質OA−6129C−リン酸エステル区
分を切り出し、0.01Mリン酸緩衝液（PH8.4）で
抽出後、アルカリフオスフアターゼ（シグマ社
P3877）処理したものを再び高圧紙電気泳動で
行つたところ、抗生物質OA−6129Cのスポツト
が認められた。 本発明の原料に用いられる抗生物質OA−6129
物質の調製法を以下の参考例に示す。 参考例 〔A〕 500ml容エルレンマイヤーフラスコに100ml
の下記組成の種母培地（Ｓ−１）を入れ、常法
により、120℃で15分間殺菌した。 一方、ストレピトミセス・エスピーOA−
6129（Streptomyces sp.OA−6129）菌株の胞
子を充分着生させ、この一白金耳を上記種母培
地に接種し、28℃で48時間ロータリーシエーカ
ー（200rpm、振幅７cm）振盪培養した。この
種母培養液200mlを、下記組成の種母培地（SE
−４）15を入れた30容ジヤー・フアーメン
ターに接種し、28℃、400rpmで撹拌及び7.5
／min通気の条件下に90時間通気撹拌培養を
行つた。消泡剤としてシリコンKM−75〔登録
商標・信越化学(株)製〕を0.07％使用した。 〔B〕 上記〔Ａ〕で得られた24時間培養後の種母
培養液２を下記組成の生産培地（GM−１）
100を入れた200容醗酵タンクに接種し、28
℃、200rpmで撹拌及び50／min通気の条件
下に90時間通気撹拌培養を行つた。消泡剤とし
てシリコンKM−75〔前出〕を0.07％使用した。 経時的に培養液をサンプリングし、遠心分離
した上澄液について抗菌力の測定を行つた。 各時間における測定結果は、下表に示す通り
であつた（抗菌力価はPS−５ナトリウム塩相
当力価である）。 培養時間（時間） 抗菌力価（μg／ml） 48 2.6 72 11.5 90 24.0 種母培地（Ｓ−１）の組成： 大豆粉 1.5％（Ｗ／Ｖ） 酵母エキストラクト 0.5 〃 ポテトスターチ 2.0 〃 CaCO3 0.2 〃 PH（殺菌前） 7.0 〃 種母培地（SE−４）の組成： 牛肉エキストラクト 0.3％（Ｗ／Ｖ） トリプトン 0.5 〃 グルコース 0.5 〃 溶性でんぷん 2.4 〃 酵母エキストラクト 0.5 〃 CaCO3 0.4 〃 大豆粉 0.5 〃 PH（殺菌前） 7.5 〃 生産培地（GM−１）の組成： グリセリン 8.0％（Ｗ／Ｖ） 魚粉 1.0 〃 大豆粉 3.0 〃 CaCO3 0.3 〃 K2HPO4 0.2 〃 MgSO4 0.2 〃 殺菌前に、NaOHでPHを7.2に調整。 別にPH5.5の0.01Mリン酸緩衝液中に溶解し、
且つオートクレーブで１Kg／cm2Ｇ、５分間殺菌
したビタミンB12を0.0005％（Ｗ／Ｖ）添加。 〔C〕 上記〔Ｂ〕で得られた90時間培養後の醗酵
液100に５％（Ｗ／Ｖ）量のトプコパーライ
トNo.34〔登録商標・東興パーライト(株)製〕を添
加し、バスケツト型遠心分離器で菌体を分離
し、90の培養液を得た。これをダイヤイオ
ンHP−20〔登録商標・三菱化成(株)製〕充填カ
ラム（15×100cm）に吸着させ、蒸留水５で
洗浄後、30％（Ｖ／Ｖ）アセトン水溶出した。
１画分を1.0とし、その溶出液を分画した。
バイオアツセイ活性画分８から15までの合計
8.0の溶出液を集め、これをダイヤオイン
PA306S〔登録商標・三菱化成(株)製〕充填カラ
ム（８×60cm）に吸着させ、蒸留水1.0で洗
浄後、30％食塩水で溶出した。500mlずつ溶出
液を分画し、バイオアツセイ活性画分７から画
分16までの合計5.0の抗生物質OA−6129A、
Ｂが含まれた溶出液を集めた。 続いて、上記のPA306S充填カラムを30％食
塩水で溶出し、500mlずつ溶出液を分画し、バ
イオアツセイ活性画分３から画分16までの合計
7.0の抗生物質OA−6129Cが含まれた溶出液
を集めた。 抗生物質OA−6129A、Ｂを含む溶出液5.0
に300ｇの食塩を加え、ダイヤイオンHP−20
充填カラム（６×150cm）に吸着させ、蒸留水
500mlで洗浄後、濃度が０％から40％まで直線
的に増加するアセトン水合計4.0で溶出した。 １区分を17mlとして、その溶出液を分画し
た。バイオアツセイ活性画分20から画分130ま
での約1.8の溶出液には、主に抗生物質OA−
6129Bと若干の抗生物質OA−6129Aが含まれ
ていた。バイオアツセイ活性画分131から画分
170までの約700mlの溶出液にはOA−6129Aと
が含まれていた。上記の２区分をそれぞれ凍結
乾燥し、茶褐色の粉末を得た。 抗生物質OA−6129Aの精製 〔D〕 抗生物質OA−6129Aを主に含む溶出液を凍
結乾燥することによつて得られた茶褐色粉末
を、少量の蒸留水に溶解し、バイオゲルＰ−２
（登録商標・バイオラツド社製充填カラム（８
×100cm）に導き、蒸留水で展開し、バイオア
ツセイにより活性画分1.0を集めた。この活
性画分を予め、0.01Mリン酸緩衝液（PH8.4）
で平衡化したQAE−セフアデツクスＡ−25（登
録商標・フアルマシア社製）充填カラム（４×
40cm）に吸着させ、上記緩衝液200mlで洗浄後、
濃度が０％から４％まで直線的に増加する食塩
水（合計3.0）で溶出を行つた。溶出液を15
mlずつ分画し、バイオアツセイを行い、画分51
から画分70まで、合計300mlの活性画分を得た。 この画分を凍結乾燥し、黄褐色の粉末を得
た。 この粉末を少量の蒸留水に溶解し、５ｇの食
塩を加え、ダイヤイオンHP−20AG（登録商
標・三菱化成(株)製〕充填カラム（２×50cm）に
吸着させ、５％食塩水50mlで洗浄後、蒸留水
100mlで洗浄した。濃度が０％から30％まで直
線的に増加するアセトン水（合計1.0）で溶
出し、１画分を10mlとし、その溶出液を分画し
た。バイオアツセイにより、活性画分35から画
分45までの合計110mlを集め、これを凍結乾燥
すると黄褐色の抗生物質OA−6129Aの粗粉末
52mlが得られた。 該粉末を、少量の蒸留水に溶解し、セフアデ
ツクスＧ−10（登録商標・フアルマシア社製）
充填カラム（２×80cm）に導き、蒸留水で展開
し、バイオアツセイにより活性画分30mlを集め
た。この活性画分を予め、0.01Mリン酸緩衝液
（PH8.4）で平衡化したQAE−セフアデツクス
Ａ−25（前出）充填カラム（２×30cm）に吸着
させ、上記緩衝液50mlで洗浄後、濃度が０％か
ら５％まで直線的に増加する食塩水（合計800
ml）で溶出を行い、溶出液を５mlずつ分画し
た。バイオアツセイにより、活性画分36から画
分40までの合計25mlを集めた。 この画分に４ｇの食塩を加え、ダイヤイオン
HP−20AG〔前出〕充填カラム（２×40cm）に
吸着させ、蒸留水50mlで洗浄後、濃度０％から
30％まで直線的に増加するアセトン水（合計
800ml）で溶出し、１画分を５mlとし、その溶
出液を分画した。 バイオアツセイにより、活性画分105から画
分117の合計65mlを集めた。 これを凍結乾燥することにより抗生物質OA
−6129Aの淡黄粉末21ｇを得た。 得られた抗生物質OA−6129Aの凍結乾燥標品
は次の特性を示した。 (1) 形状：淡黄色粉末 (2) 比施光度：〔α〕24 D：11.6゜（ｃ＝1.0、0.01Mリ
ン酸緩衝液、PH8.4） 但し、紫外部吸収においてλnax300nmのεを
5600とした時の値である。 (3) 分子式 理論分子式C20H30N3O7SNa（M.W.＝479） (4) 紫外部吸収スペクトラム 0.01Mリン酸緩衝液（PH8.4） λnaxnm（ε）300（5600） (5) 赤外部吸収スペクトラム（KBr）の主要ピ
ークλnaxcm-1： 1760（β−ラクタム） 1660（アミド） 1600（カルボキシレート） (6) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D2O） （内部基準：DSS） δ（ppm）： 0.89（3H，ｓ，【式】） 0.92（3H，ｓ，【式】） 1.00（3H，ｔ，Ｊ＝7.5Hz，CH2−ＣＨ 3） 1.60〜2.00（2H，ｍ，ＣＨ 2−CH3） 2.48（2H，ｔ，Ｊ＝7.5Hz，Ｎ−CH2−ＣＨ 2
−CO） 2.8〜3.65（11H，ｍ，Ｃ−4H2、Ｃ−6H、Ｓ
−ＣＨ 2−ＣＨ 2−NH、NH−ＣＨ 2−CH2−
CO−Ｃ−ＣＨ 2−OH） 3.95（2H，ｍ，Ｃ−5H、
【式】） 〔E〕 抗生物質OA−6129Bの精製 抗生物質OA−6129Bを主に含む溶出液を、
凍結乾燥することによつて得られた茶褐色の粉
末を、少量の蒸留水に溶解し、バイオゲルＰ−
２（前出）充填カラム（８×100cm）に導き、蒸
留水で展開し、バイオアツセイにより活性画分
1.0を集めた。この活性区分を予め、0.01M
リン酸緩衝液（PH8.4）で平衡化したQAE−セ
フアデツクスＡ−25（前出）充填カラム（４×
40cm）に吸着させ、上記緩衝液200mlで洗浄後、
濃度０％から４％まで直線的に増加する食塩水
（合計3.0）で溶出を行つた。溶出液を15mlず
つ分画し、バイオアツセイを行い、画分51から
画分70まで、合計300mlの活性画分を得た。 この粉末を少量の蒸留水に溶解し、５ｇの食
塩水を加え、ダイヤイオンHP−20AG（前出）
充填カラム（２×50cm）に吸着させ、５％食塩
水50mlで洗浄後、蒸留水100mlで洗浄した。濃
度が０％から30％まで直線的に増加するアセト
ン水（合計1.0）で溶出し、１画分を10mlと
し、その溶出液を分画した。バイオアツセイに
より活性画分15から画分35まで合計210mlの区
分を得た。この区分を凍結乾燥することにより
抗生物質OA−6129Bの黄褐色粉末が得られた。
得られた抗生物質OA−6129Bの凍結乾燥標品
は次の特性を有した。 (1) 形状：淡黄色粉末 (2) 比施光度：〔α〕24 D4.7゜（ｃ＝1.0、0.01Mリ
ン
酸緩衝液、PH8.4） 但し、紫外部吸収においてλnax300nmのε
を5400とした時の値である。 (3) 分子式 理論分子式C20H30N3O8SNa（M.W.＝495） (4) 紫外部吸収スペクトラム 0.01Mリン酸緩衝液（PH8.4） λnaxnm（ε）300（5400） (5) 赤外部吸収スペクトラム（KBr）の主要
ピークνnaxcm-1： 1760（β−ラクタム） 1660（アミド） 1600（カルボキシレート） (6) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D2O）
（内部基準：DSS） δ（ppm）： 0.87（3H，ｓ，【式】） 0.92（3H，ｓ，【式】） 1.28（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，【式】） 2.45（2H，ｔ，Ｊ＝7.0Hz，NH−CH2−ＣＨ 2
−CO） 3.94（1H，ｓ，【式】） 〔F〕 抗生物質OA−6129Cの精製 前期の抗生物質OA−6129Cを含む溶出液7.0
をダイヤイオンHP−20（前出）充填カラム
（５×80cm）に吸着させ、0.01Mリン酸緩衝液
（PH8.4）1.5で洗浄後、濃度が０％から20％
まで直線的に増加するアセトン水（合計6.0）
で溶出液を25mlずつ分画し、画分９から画分13
までの合計1.25の溶出液を得た。 この溶出液を、３％アルキルジメチルベンジ
ルアンモニウムクロライド〔東京化成(株)製〕を
含むメチレンクロライド1.0で抽出を行い、
続いて、抽出後のメチレンクロライド層を８％
ヨウ化ナトリウム水溶液300mlで再抽出を行つ
た。 得られた抽出液300mlを予め0.01Mリン酸緩
衝液（PH8.4）で平衡化したバイオゲルＰ−２
（前出）充填カラム（８×100cm）に導き、上記
緩衝液で展開し、バイオアツセイを行い、活性
画分1.2を集めた。 この溶出液をダイヤイオンHP−20充填カラ
ム（４×60cm）に吸着させ、蒸留水600mlで洗
浄後、濃度が０％から10％まで直接的に変化す
るアセトン水（合計3.0）で溶出した。溶出
液を15mlずつ分画し、バイオアツセイを行い、
画分４から画分115までの合計1.1の活性画分
を得た。この溶出液を予め0.01Mリン酸緩衝液
（PH8.4）平衡化したQAE−セフアデツクスＡ
−25（前出）充填カラム（４×40cm）に吸着さ
せ、上記緩衝液500mlで洗浄後、濃度が０％か
ら５％まで直線的に増加する食塩水（合計3.0
）で溶出を行つた。溶出液を15mlずつ分画
し、バイオアツセイを行い、画分112から画分
139までの合計420mlの活性画分を得た。次に、
この活性画分に最終濃度が５％になるように食
塩を加え、ダイヤイオンHP−20AG〔前出〕充
填カラム（３×60cm）に吸着させ、脱イオンで
溶出をおこなつた。溶出液を15mlずつ分画し、
バイオアツセイを行い画分31から画分48まで、
合計270mlの活性画分を得た。この活性画分を
凍結乾燥し、135mgの黄褐色の粉末を得た。 この粉末135mgを少量の蒸留水に溶解し、セ
フアデツクスＧ−10（前出）充填カラム（２×
70cm）に導き、蒸留水で展開し、バイオアツセ
イを行い、活性画分合計68mlを得た。 これを予め、0.01Mリン酸緩衝液（PH8.4）
で平衡化したQAE−セフアデツクスＡ−25充
填カラム（４×30cm）に吸着させ、上記緩衝液
800mlで洗浄後、濃度が０から５％まで直接的
に増加する食塩水（合計2.4）で溶出した。
溶出液を13mlずつ分画し、バイオアツセイを行
い、画分118から画分139まで合計286mlを得た。 これに、最終濃度が５％になるように食塩を
加え、ダイヤイオンHP−20AG充填カラム
（３×60cm）に吸着させ脱イオン水で溶出を行
つた。溶出液を10mlずつ分画し、300nmに、紫
外部極大吸収を有する画分を合計90ml集めた。 これを、凍結乾燥し、18mgの淡黄色の抗生物
質OA−6129C粉末を得た。 得られた抗生物質OA−6129Cの凍結乾燥標品
は次の特性を示した。 (1) 形状：淡黄色粉末 (2) 比施光度：〔α〕24 D：17.4゜（ｃ＝0.55、0.01M
リ
ン酸緩衝液、PH8.2） (3) 元素分析値（C20H29N3O11S2Na2・2H2Oと
して） 計算値 Ｃ 37.91％、Ｈ 5.25％ Ｎ 6.63％、Ｓ 10.12％ 分析値 Ｃ 37.61％、Ｈ 5.00％ Ｎ 6.38％、Ｓ 9.52％ (4) 分子量597.5731（分子式C20H29N3O11S2Na2） (5) 紫外部吸収スペクトラム 0.01Mリン酸緩衝液（PH8.4） λnax（ε）：300.5（7600） (6) 赤外部吸収スペクトラム（KBr）の主要ピ
ーク λnaxcm-1： 1750（β−ラクタム） 1660〜1595（アミド、カルボキシレート） 1250〜1220（硫酸エステル） (7) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D2O） （内部基準：DSS） δ（ppm）： 0.86（3H，ｓ，【式】） 0.89（3H，ｓ，【式】） 1.49（3H，ｄ，Ｊ＝6.5Hz，ＣＨ 3−CH−） 2.47（2H，ｔ，Ｊ＝7.0Hz，Ｎ−CH2−ＣＨ 2
−CO） 2.70〜3.10（10H，ｍ，Ｃ−４Ｈ 2−ＣＨ 2−
OH、NH−ＣＨ 2−CH2−CO、Ｓ−ＣＨ 2−Ｃ
Ｈ2−NH） 3.83（1H，dd，Ｊ＝5.5Hz，Ｊ＝9.5Hz，Ｃ−
６Ｈ） 3.94（1H，Ｓ，【式】） 4.40〜4.43（1H，ｍ，Ｃ−５Ｈ） 4.78（1H，dd，Ｊ＝6.5HzＪ＝9.5Hz，
【式】）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 構造式 式中、Ｒは水素原子、水酸基又はヒドロキシス
ルホニルオキシ基を表す、 で示される化合物及びそれらの塩。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1229262A JPH02138287A (ja) | 1989-09-06 | 1989-09-06 | 新規な抗生物質ｏａ‐６１２９のリン酸エステル |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1229262A JPH02138287A (ja) | 1989-09-06 | 1989-09-06 | 新規な抗生物質ｏａ‐６１２９のリン酸エステル |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56156133A Division JPS5857392A (ja) | 1981-10-02 | 1981-10-02 | 新規な抗生物質ｏａ−６１２９のリン酸エステル |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02138287A JPH02138287A (ja) | 1990-05-28 |
| JPH0372236B2 true JPH0372236B2 (ja) | 1991-11-18 |
Family
ID=16889358
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1229262A Granted JPH02138287A (ja) | 1989-09-06 | 1989-09-06 | 新規な抗生物質ｏａ‐６１２９のリン酸エステル |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH02138287A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7654283B2 (en) * | 2003-10-21 | 2010-02-02 | Seiko Epson Corporation | Check valve and pump including check valve |
-
1989
- 1989-09-06 JP JP1229262A patent/JPH02138287A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH02138287A (ja) | 1990-05-28 |
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