JPS6334157B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規な抗生物質に関し、さらに詳しく
は、下記式 で示される化合物並びにその塩及びエステル並び
に該化合物の製造方法に関する。 下記式 で示される７−オキソ−１−アザビシクロ
〔3.2.0〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸骨格
を有する抗生物質（以下カルバペネム系抗生物質
という）は、一般に高い抗菌力とβ−ラクタマー
ゼ阻害活性を有しており、従来から発酵法、半合
成法、全合成法により各種の７−オキソ−１−ア
ザビシクロ〔3.2.0〕ヘプト−２−エン−２−カ
ルボン酸誘導体が製造されている〔例えば、チエ
ナマイシン（ジヤーナル・オブ・アンテイビオテ
イクス、32巻（1979年）、１〜12頁）、エピチエナ
マイシン類（第17回インターサイエンス・コンフ
アランス・オン・アンテイミクロビアル・エイゼ
ンツ・アンド・ケモテラビー、要旨第80および第
81号（1977年））、Ｎ−アセチルチエナマイシン
（西ドイツ特許2652681号（1977年））、オリバニン
酸類（ジヤーナル・オブ・アンテイビオテイク
ス、32巻（1979年）、287〜304頁）、PS−５（ジヤ
ーナル・オブ・アンテイビオテイクス、32巻
（1979年）、262〜286頁）、PS−６及びPS−７（ジ
ヤーナル・オブ・アンテイビオテイクス、33巻
（1980年）、1128〜1137頁）、No.17927A、物質及び
No.17927A₂物質（特開昭53−103401号公報及び特
開昭53−109997号公報）など〕。 上記最後に記載したNo.17927A₁物質及びNo.
17927A₂物質はそれぞれ下記式 で示される抗生物質であるが、最近、これら物質
の生産菌の培養条件の検討により、該物質に構造
的に類似する物質として下記式 で示されるNo.17927D物質（２，３−ジヒドロ体）
が生産されることが発見され提案された（特開昭
55−24129号公報）。 他方、本発明者らは先に下記式 で示される抗生物質OA−6129Bを新規に見い出
し提案した（特願昭55−144507号）。 本発明者らは、前記No.17927A、物質に対する
No.17927D物質の関係と同様に、上記抗生物質OA
−6129Bに対しても２，３−ジヒドロ体が存在す
る可能性があると考え、該抗生物質OA−6129B
の生産菌の培養条件等を検討した結果、前記式
で示される物質が見い出され、本発明を完成する
に至つた。 前記式で示される化合物は、抗生物質OA−
6129Bよりも抗菌活性は弱いが、β−ラクタム高
感受性ビオアツセイ菌、例えばコマモナス・テリ
ゲナＢ−996（Comamonas terrigena Ｂ−996）
に対して馬血清含有のアツセイ板上で抗菌活性を
示すので、本発明者らは該化合物を「抗生物質
OA−6129D」と命名することとした。 この抗生物質OA−6129Dは、３−位のパンテ
テイニル基を離脱させることなく、適当な条件下
に脱水素することにより、抗菌力価の高い抗生物
質OA−6129Bに変換することができる。例えば、
抗生物質OA−6129B生産菌或いはその処理物、
細胞破砕液又はその部分もしくは完全精製酵素溶
液を、抗生物質OA−6129Dに作用させることに
より、抗生物質OA−6129Bに変換することがで
き、また抗生物質OA−6129Dの側鎖中の水酸基
を必要により保護した後、それ自体既知の方法、
例えば特開昭54−76593号公報に記載の如くして
脱水素して抗生物質OA−6129Dの３−位の側鎖
中のパントテイニル基を予め化学的又は生物学的
方法で離脱せしめて下記式 で示される化合物を生成せしめ、３−位の側鎖中
のアミノ基を所望に応じて保護又は修飾した後、
上記と同様にして脱水素し、カルバペネム系抗生
物質に誘導することも可能である。 本発明により提供される上記式で示される化
合物は２−位にカルボキシル基を有しているの
で、塩又はエステルの形態をとることもできる。
かかる塩の例には、ナトリウム塩、カリウム塩、
リチウム塩の如きアルカリ金属塩；カルシウム
塩、マグネシウム塩の如きアルカリ土類金属塩；
アルミニウム塩の如きその他の金属塩；アンモニ
ウム塩；モノエチルアミン、ジメチルアミン、ト
リメチルアミン、モノエタノールアミン、ジエタ
ノールアミンの如き第一級、第二級又は第三級ア
ミンによる塩；ベンザチン塩、プロカイン塩など
の有機塩基による塩等が含まれ、中でも製薬学的
に許容しうる塩が好ましく、特に、ナトリウム
塩、カルウム塩などのアルカリ金属塩が好適であ
る。 また、式の化合物のエステルとしては、例え
ば、ベンジルエステル、ｐ−ニトロベンジルエス
テル、ｐ−メトキシベンジル、ｐ−プロモベンジ
ルエステル、ベンズヒドリルエステル、トリチル
エステル、フエナシルエステル、フタリジルエス
テル、フタルイミドメチルエステル、ピバロイル
オキシメチルエステル、メトキシメチルエステ
ル、メチルチオメチルエステル、２，２，２−ト
リクロロエチルエステル等が挙げられる。 本発明に従えば、前記式の抗生物質OA−
6129Dは、該抗生物質OA−6129D生産性微生物
を栄養培地中で培養し、その培養物から抗生物質
OA−6129Dを採取することからなる方法により
製造することができる。 本発明で使用する抗生物質OA−6129D生産菌
は、前述した化学構造をもつ抗生物質OA−
6129Dを生産する能力を有するものである限り、
どのような属に属する菌でも使用でき、広範囲の
微生物から選ぶことができる。本発明の目的に適
する菌株の検索はそれ自体公知の方法で行なうこ
とができ、これにより当業者であれば、本発明で
用いる抗生物質OA−6129D生産菌を容易に取得
することができる。 抗生物質OA−6129D生産菌の代表的なものに
は、ストレプトミセス属に属する抗生物質OA−
6129D生産菌が包含され、その好適な一例として
は、福岡県福岡市の住吉神社の近くで採取した土
壌から分離した放線菌で、本発明者らがOA−
6129菌株の番号を付した菌株が挙げられる。 このOA−6129菌株の菌学的性質は次の通りで
ある。 １ 形態 顕微鏡下でよく分枝した基中菌糸より、直状〜
曲状（Straight〜flexuous）の気菌糸を伸長し、
輪生枝はみとめられない。成熟した胞子鎖は10個
以上の楕円〜円筒形をした胞子から成り、胞子の
うは認められない。胞子の大きさは0.6〜1.0×0.7
〜2.5ミクロン位で、胞子の表面は平滑である。
鞭毛胞子はみとめられない。 ２ 各種培地における生育状態 培養は特記しないかぎり28゜〜30℃で行つた。
また色調の記載は主としてエツチ・デイ・トレス
ナーとイー・ジエー・バカス（H.D.Tresner
and E.J.Backus）著、ジヤーナル・オブ・アブ
ライド・ミクロビオロジイー（Journal of
Applied Microbiology）11巻、４号、（1963年）
335〜338頁の方法に従い、〔 〕内に示す符号
〔CHMコード（code）〕はコンテイナー・コーポ
レーシヨン・オブ・アメリカのカラー・ハーモニ
ー・マニユアル（Container Corporation of
AmericaのColor Harmony Manual）を用い
た。 (1) シユークロース・硝酸塩寒天培地： 黄灰〔2dc〕〜明るい灰黄茶〔3ge〕の中等度
生育上に、黄灰〔2dc〕〜灰黄ピンク〔5dc〕の
気菌糸を着生し、溶解性色素はみとめられない。 (2) グルコース・アスパラギン寒天培地： うす黄〔2db〕〜明るいオリーブ茶〔2ge〕の
良好な生育上に、明るい灰〔ｄ〕の気菌糸を着生
する。尚この気菌糸はおくれて灰黄ピンク
〔5dc〕となる。溶解性色素はみとめられない。 (3) グリセリン・アスパラギン寒天培地（ISP培
地−５）： 穏やかな黄ピンク〔4gc〕〜明るい茶〔4ie〕の
良好な生育上に、明るい灰〔ｄ〕〜明るい灰赤茶
〔5fe〕の気菌糸を着生する。溶解性色素はみとめ
られない。 (4) スターチ無機塩寒天培地（ISP培地−４）： うす黄〔2db〕〜灰色〔2fe〕の良好な生育上に
明るい灰〔ｄ〕の気菌糸を着生する。溶解性色素
は生成しない。 (5) チロシン寒天培地（ISP培地−７）： 灰黄〔3ec〕〜明るい茶〔4ie〕の生育上に、明
るい灰〔ｄ〕〜明るい茶灰〔3fe〕の気菌糸を着
生する。培地は極く僅かに茶色を帯びる。 (6) 栄養寒天培地： うす黄〔2db〕または明るい黄〔2fb〕〜明る
いオリーブ茶〔2ge〕の良好な生育上に、明るい
灰赤茶〔5fe〕の気菌糸を着生する。溶解性色素
はみとめられない。 (7) イーストエキス・麦芽エキス寒天培地（ISP
培地−２）： 穏やかな黄ピンク〔4gc〕〜明るい茶〔4ie〕の
良好な生育上に、灰黄ピンク〔5dc〕或いはやや
おくれて明るい灰〔ｄ〕の気菌糸を着生する。溶
解性色素はみとめられない。 (8) オートミール寒天培地（ISP培地−３）： 灰黄〔3ec〕〜明るいオレンジ黄〔3ea〕、或る
いは明るい灰黄茶〔3ge〕の良好な生育上に、明
るい茶灰〔3fe〕〜明るい灰赤茶〔5fe〕の気菌糸
を着生し、菌集落の周辺の培地は僅かに褐色を呈
す。 (9) リンゴ酸石灰寒天培地： 暗色〜黄灰〔2dc〕の中等度の生育上に、明る
い灰〔ｄ〕〜明るい灰赤茶〔5fe〕の気菌糸を着
生し、溶解性色素はみとめられない。生育菌集落
の周辺にカルシウム塩の溶解帯が見られる。 (10) グルコース・ペプトン・ゲラチン培地（20℃
培養） うす黄〔2db〕〜茶色の良好な生育上に白色
〔ｂ〕〜灰黄ピンク〔5cb〕の気菌糸を着生する。
培養長期（約３週間以上）にわたると褐色の溶解
性色素を生成した。 ３ 生理的性質 (1) 生育温度範囲 イーストエキス・麦芽エキス寒天培地（ISP培
地−２）を用いて10゜，20゜，25゜，30゜，34゜，37゜
，
40゜，45゜，50℃の各温度で実験の結果、37℃では
殆んど発育出来ない。40℃以上では全く発育しな
い。その他の各温度では生育がみとめられた。最
適生育温度範囲は20〜30℃と思われる。 (2) ゲラチンの液化：液化する。 (3) スターチの加水分解：分解する。 (4) 脱脂牛乳の凝固、ペプトン化：凝固はしない
が、ペプトン化する。 (5) メラニン様色素の生成： ペプトン・イースト・鉄寒天培地（ISP培地−
５）及びトリプトン・イーストエキス・プロス培
地（ISP培地−11）ではメラニン様色素の生成は
認められなかつた。チロシン寒天培地で極く僅か
に茶色を呈するも、メラニンの生成は痕跡程度で
ある。 ４ 各種炭素源の同化性（プリドハム・ゴトリー
ブ寒天培地使用） (1) Ｌ−アラビノース ＋ (2) Ｄ−キシロース ＋ (3) Ｄ−グルコース ＋ (4) Ｄ−フラクトース ＋ (5) シユークロース 疑わしい (6) イノシトール − (7) Ｌ−ラムノース ＋ (8) ラフイノース − (9) Ｌ−マンニツト ＋ ＋は同化する、−は同化しない。 以上の菌学的性質よりOA−6129菌株は
Streptomyces属に属する菌株であつて、気菌糸
の形状はセクシヨンRF（Section
Rectiflexibiles）と考えられ、胞子表面平滑であ
つた。気菌糸の色調は大多数の培地、即ちオート
ミール寒天、グリセリン・アスパラギン寒天、ス
ターチ・無機塩寒天等の培地では明るい灰色
〔ｄ〕で、灰色系（Gray series）の菌株である。
しかしシユークロース・硝酸塩寒天、イーストエ
キス・麦芽エキス寒天、及びグルコース・アスパ
ラギン寒天培地では培養時期に依つては灰黄ピン
ク〔5dc〕の赤色系（Red series）を呈する事が
ある。また、基中菌糸の色は培養初期はいずれの
培地でもうす黄〜灰黄で、培養を続けると黄茶〜
灰黄茶或いは茶色の色調を示す様になる。メラニ
ン色素はペプトン・イーストエキス・鉄寒天培地
中及びトリプトン・イーストエキス・プロス中に
みとめられず、またその他の水溶性色素も多くの
培地で生成しなかつた。しかしチロシン寒天培
地、グルコース・ペプトン・ゲラチン培地及びオ
ートミール寒天培地中に僅かに茶色の色素をみと
めた。 本発明者等は本菌をストレプトミセス・エスビ
−OA−6129（Streptomyces sp.OA−6129）とし
て、工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌
寄第5714号として寄託されており、そして本菌は
昭和56年５月１日に微工研条寄第11号として特許
手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダ
ペスト条約に基づく国際寄託に移管された。 本発明の抗生物質OA−6129Dは、抗生物質OA
−6129D生産菌、例えば、上記ストレプトミセス
sp.OA−6129の胞子または菌糸を栄養源含有培
地に接種して、好気的に増殖させることによつて
生産される。 その栄養源としては、放線菌の栄養源として通
常使用されるもの、例えば炭水化物、窒素源、無
機塩などの同化できる栄養源を使用できる。例え
ば、ぶどう糖、グリセリン、麦芽糖、蔗糖、糖
蜜、デキストリン、デンプンなどの炭水化物や、
大豆油、落花生油、ラードなどの油脂、脂肪類の
如き炭素源；ペプトン、肉エキス、大豆粉、綿実
粉、乾燥酵母、コーンスチープリカー、酵母エキ
ス、脱脂乳、カゼイン、硝酸ナトリウム、硝酸ア
ンモニウム、硫酸アンモニウムなどの窒素源；燐
酸二カリウム、食塩、炭酸カルシウム、硫酸マグ
ネシウムなどの無機塩が使用でき、必要により微
量金属例えばコバルト、マンガンなどを添加する
ことができる。栄養源としては、その他、抗生物
質OA−6129D生産菌を利用して抗生物質OA−
6129Dを生産するものであれば、いずれの栄養源
でも使用でき、公知の放線菌の培養材料はいずれ
も使用できる。また、加熱殺菌時及び培養中にお
ける発泡を抑えるため、シリコン、植物油などの
消泡剤を添加することもできる。 上記の如き栄養源の配合割合は特に制約される
ものではなく、広範囲に亘つて変えることがで
き、使用する抗生物質OA−6129D生産菌にとつ
て最適の栄養源の組成及び配合割合は、当業者で
あれば簡単な小規模実験により容易に決定するこ
とができる。 また栄養培地は培養に先立ち殺菌することがで
き、この殺菌の前又は後で、培地のPHを４〜９の
範囲、特にPH６〜８の範囲に調節するのが有利で
ある。 かかる栄養培地での抗生物質OA−6129D生産
菌の培養は原則的には、一般の放線菌による抗生
物質の製造において通常使用されている方法に準
じて行なうことができる。通常好気的条件下に培
養するのが好適であり、通常撹拌しながら及び／
又は通気しながら行なうことができる。また、培
養方法としては静置培養、振盪培養、通気撹拌を
ともなう液内培養のいずれも使用可能であるが、
液内培養が有利である。 使用しうる培養温度は抗生物質OA−6129D生
産菌の発育が実質的に阻害されず抗生物質OA−
6129Dを生産し得る範囲であれば特に制限される
ものではなく、使用する生産菌株に応じて変える
ことができるが、一般に20〜40℃、好ましくは25
〜35℃の範囲内の温度が好適である。 また、培養を好適に行なうため、必要に応じ
て、培養中に培養物のPHを４〜９、特に６〜８の
範囲に調節することができる。 大規模な大量培養の場合、適宜種母培養を行な
い、これを栄養培地に接種し、液体培養するのが
有利である。 培養は通常抗生物質OA−6129Dが充分に蓄積
するまで継続することができる。その培養時間
は、培地の組成や培養温度、使用生産株等により
異なるが、通常30〜90時間の範囲である。 なお、使用する培養条件は、使用する生産菌株
の特性に応じて、当業者であれば簡単な実験によ
り、最適条件を容易に決定することができる。 培養物中の抗生物質OA−6129Dの蓄積量はβ
−ラクタム高感受性ビオアツセイ菌、例えばコマ
モナス・テリゲナＢ−996を用いたビオアツセイ
法及びビオオートグラフイーにより定量すること
ができ、それにより最適蓄積量を容易に知ること
ができる。 かくして、培養物中に蓄積された抗生物質OA
−6129Dは水溶性であり、主として菌体外に存在
するので、有利には、培養後、過、遠心分離、
抽出などのそれ自体公知の分離法によつて菌体を
除去し、その液、上澄液、抽出液などより回収
される。 回収はそれ自体公知の種々の方法で行なうこと
ができ、特にカルボン酸型抗生物質の回収のため
に屡々利用される方法が有利に適用される。例え
ば、低PHにおける酢酸エチル等での溶媒抽出及び
その溶媒層から高PH水層への転溶；活性炭、アン
バーライトXAD（ローム・アンド・ハース社製）、
ダイヤイオンHP−20（三菱化成社製）等による
吸着と、メタノール水、アセトン水等による溶
出；ダウエツクス１×２（ダウ・ケミカル社製）、
QAE−セフアデツクスＡ−25（フアルマシア社
製）、DEAL−セルローズ・ワツトマンDE−32
（ワツトマン社製）、DEAL−セフアデツクスＡ−
25（フアルマシア社製）等のイオン交換樹脂によ
る吸着及び溶出；セフアデツクスＧ−10（フアル
マシア社製）、バイオ・ゲルＰ−２（バイオ・ラツ
ド社製）、等によるゲル過；セルローズ、アビ
セルSF（アメリカン・ビスコース社製）等のカラ
ムクロマトグラフイー；アセトン等の溶剤添加に
よる強制沈殿法；凍結乾燥法、等をそれぞれ単独
で或いは適宜組合せて、さらに場合によつては反
復して使用される。 かくして、前記した特性を有する抗生物質OA
−6129Dが得られる。 上記発酵法により製造される抗生物質OA−
6129D、すなわち前記式の化合物は、一般に５
−及び６−位の炭素原子に結合する水素原子が互
にトランス又はシス−立体配置を有しており、前
記式には５，６−トランス体、５，６−シス体
又はこれらの混合物のいずれもが包含される。ま
た、２−位及び３−位の炭素原子、３−位の側鎖
中のバンドイル基の第二級水酸基の付け根の炭素
原子及び６−位の１−ヒドロキシエチル側鎖中の
水酸基が結合している炭素原子はそれぞれ不斉炭
素原子であるので、該抗生物質OA−6129DはＳ
−型及びＲ−型のいずれか、又はラセミ型で存在
し得る。 本抗生物質OA−6129Dは、一般に遊離形のも
のよりも塩又はエステルの形の方がより安定であ
るから、誘導体に転換する場合の中間体として使
用したり、或いは前記した精製工程に付する場合
等においては、塩又はエステルの形で処理するこ
とが好適である。 抗生物質OA−6129Dのその塩又はエステル形
への転化はそれ自体公知の方法に従つて行なうこ
とができる。例えば、該抗生物質OA−6129Dの
塩は遊離の抗生物質OA−6129Dを無機又は有機
の塩基で処理することにより製造することができ
る。この造塩反応に使用し得る無機又は有機の塩
基としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化
カリウム、水酸化リチウムの如きアルカリ金属の
水酸化物；水酸化カルシウム、水酸化マグネシウ
ムの如きアルカリ土類金属の水酸化物；モノエチ
ルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、
モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、ベ
ンザチン、ブロカインの如き第一級、第二級又は
第三級の有機アミン等が挙げられる。 また、抗生物質OA−6129Dのエステル化は抗
生物質PS−５等のエステル化と同様の方法、例
えば特開昭54−84589号公報に記載の方法で行な
うことができる。具体的には、抗生物質OA−
6129Dの有機塩基との塩又はアルカリ金属もしく
はアルカリ金属塩を、ジメチルホルムアミド、テ
トラヒドロフラン、ジオキサン、ヘキサメチルホ
スホトリアミド、アセトニトリル、アセトン等の
不活性溶媒中で約−50℃乃至50℃、好ましくは約
−10℃乃至30℃の温度にて、1.0乃至10当量のRX
（式中、Ｘはハロゲン原子を表わし、Ｒはエステ
ル残基を表わす）と数分乃至数時間撹拌反応させ
ることにより容易に製造することができる。 本発明により提供される抗生物質OA−6129D
又はその塩もしくはエステルは、各種のカルバペ
ネム系抗生物質の合成中間体として有用であり
（後記参考例１〜５参照）、また、該抗生物質はデ
ヒドロジペプチターゼの阻害剤として或いはカル
バペネム系抗生物質のブロドラツクとしての有用
性が考えられる。 次に実施例を挙げて本発明をさらに説明する。 実施例 １： ６−（１−ヒドロキシエチル）−３−パンテテイ
ニル−７−オキソ−１−アザビシクロ〔3.2.0〕
ヘプタン−２−カルボン酸ナトリウム（抗生物
質OA−6129D）の発酵法による製造 (A) 500ml容エルレンマイヤーフラスコに100mlの
下記組成の種母培地（Ｓ−１）を入れ、常法に
より、120℃で15分間殺菌した。一方、ストレ
プトミセス・エスピーOA−6129（Streptmyces
sp.OA−6129）菌株（微工研菌寄第5714号）の
胞子を充分着生させ、この一白金耳を上記種母
培地に接種し、28℃で48時間ロータリーシエー
カー（200rpm、振輻７cm）で振とう培養した。
この種母培養液１を、下記組成の生産培地
（GM−１）1000を入れた2000容醗酵槽に
接種し、28℃、150rpmで撹拌及び500／min
通気の条件下に90時間通気撹拌培養を行つた。
消泡剤としてシリコンKM−75〔信越化学(株)製〕
を0.07％使用した。経時的に培養液をサンプリ
ングし、遠心分離した上澄液について抗菌力の
測定をおこなつた。各時間における測定結果は
下表に示す通りであつた。 培養時間（時間） 抗菌力価（μｇ／ml） 48 0.5 72 4.2 90 12.5 種母培地（Ｓ−１）の組成： ミート 1.5％（Ｗ／Ｖ） 酵母エキストラクト 0.5 〃 ポテトスターチ 2.0 〃 CaCO₃ 0.2 〃 PH（殺菌前） 7.0 生産培地（GM−１）の組成： グリセリン 8.0％（Ｗ／Ｖ） 魚粉 1.0 〃 ミート 3.0 〃 CaCO₃ 0.3 〃 K₂HPO₄ 0.2 〃 MgSO₄ 0.2 〃 NaOHでPHを7.2に調整 別にPH5.5の0.01Mリン酸緩衝液中に溶解し、
且つオートクレーブで１Kg／cm²Ｇ、５分間殺菌
したビタミンB₁₂を0.0005％（Ｗ／Ｖ）添加。 (B) 上記(A)で得られた90時間培養後の醗酵液950
に５％（Ｗ／Ｖ）量のトプコパーライトNo.34
〔東興パーライト(株)製〕を添加し、バスケツト
型遠心分離機で菌体を分離し、900の培養
液を得た。 これをダイヤイオンHP−20〔三菱化成(株)製〕
充填カラム（30×300cm）に吸着させ、蒸留水
10で洗浄後、30％（Ｖ／Ｖ）アセトン水で溶
出した。 １区分を１とし、その溶出液を分画した。
画分６から画分18まで合計13の溶出液を集
め、これをダイヤイオンPA306S〔三菱化成(株)
製〕充填カラム（10×100cm）に吸着させ、蒸
留水10で洗浄後、3.0％食塩を含む0.01Mリ
ン酸緩衝液（PH8.4）で溶出した。１ずつ溶
出液を分画し、画分７から画分21までの合計15
の溶出液を集めた。 この溶出液をダイヤイオンHP−20充填カラ
ム（10×100cm）に吸着させ、これを濃度が０
から30％まで直線的に増加するアセトン水合計
40で溶出した。１区分を200mlとし、その溶
出液を分画した。各区分をビオアツセイするこ
とにより、画分52から画分59までの活性区分
1600mlを得た。この活性区分のうち400mlずつ
４回予め0.01Mリン酸緩衝液（PH8.4）で平衡
化したバイオゲルＰ−２（バイオラツド社製）
充填カラム（８×100cm）に導き、上記緩衝液
で展開し、ビオアツセイにより活性区分7.4
を集めた。この活性区分を予め上記緩衝液で平
衡化したQAEセフアデツクスＡ−25（フアルマ
シア社製）充填カラム（８×100cm）に吸着さ
せ、この溶出液を10％NaOHで注意深くPHを
8.4に調整したのち、0.01Mリン酸緩衝液（PH
8.4）で予め平衡化したダイヤイオンHP−20充
填カラム（４×100cm）に吸着させ、濃度が０
から30％まで直線的に増加するアセトン水（合
計6.0）で溶出した。１区分を15mlとし、そ
の溶出液を分画し、区分45から区分64までの抗
生物質OA−6129B及びＤ区分を集め300mlを得
た。これを凍結乾燥し、2.2ｇの淡黄色粉末を
得た。 得られた2.2ｇのOA−6129B及びＤ区分の粉
末を少量の水に溶解し、予め0.01Mリン酸緩衝
液（PH8.4）で平衡化したセフアデツクスＧ−
10（フアルマシア社製）充填カラム（1.5×80
cm）に導き、上記緩衝液で展開し、ビオアツセ
イにより活性区分30mlを集めた。この活性区分
を予め上記緩衝液で平衡化しれQAEセフアデ
ツクスＡ−25（フアルマシア社製）充填カラム
（2.5×40cm）に吸着させる。180mlの上記緩衝
液で洗浄後、０％から2.0％まで直線的に増加
する食塩を含む上記緩衝液で溶出した。15mlず
つ溶出液を分画し、ビオアツセイにより活性区
分として画分20から画分36まで合計約250mlを
集めた。 この溶出液を、凍結乾燥後、少量の水に溶解
し、ダイヤイオンHP−20AG（三菱化成(株)製）
充填カラム（1.5×110cm）に吸着させ、約200
mlの蒸留水で洗浄後、０％から６％まで直線的
に増加するアセトン水（合計1.2）で溶出し
た。溶出液を10mlずつ分画し、ビオアツセイに
より活性区分を得た。該活性区分のうち、画分
25から画分69の合計450mlは抗生物質OA−
6129B及びＤ区分であり、画分70から画分79の
合計100mlは抗生物質OA−6129A区分であつ
た。 各区分を凍結乾燥することにより、OA−
6129B及びＤのナトリウム塩（混合物）が410
mg、OA−6129Aのナトリウム塩が54mg得られ
た。 実施例 ２： ６−（１−ヒドロキシエチル）−３−パンテテイ
ニル−７−オキソ−１−アザビシクロ〔3.2.0〕
ヘプタン−２−カルボン酸（抗生物質OA−
6129D）のｐ−ニトロベンジルエステルの製造 実施例１で得られた抗生物質OA−6129B及び
OA−6129Dのナトリウム塩からなる淡黄色粉末
600mgをジメチルホルムアミド30mlに溶解し、氷
冷下、トリエチルアミン2.0mlを加え、撹拌しな
がら、少量のジメチルホルムアミドに溶解したｐ
−ニトロベンジルブロマイド2.7ｇを加えた。同
じ温度で５分間反応させた後、室温で３時間反応
させた。反応液を100mlのメチレンクロライドに
注ぎ、食塩飽和の0.1Mリン酸緩衝液（PH6.8）30
mlで２回洗浄した。更に、水層60mlをメチレンク
ロライド100mlで２回再抽出を行つた。抽出液を
合わせ、硫酸ナトリウム（無水）で脱水後、減圧
留去した。残渣を少量のメチレンクロライドに溶
解し、ベンゼン／アセトン（１／１）で充填した
60ｇのシリカゲルに吸着させ、ベンゼン／アセト
ン混合溶媒（１／１）、ベンゼン／アセトン混合
溶媒（１／３）及びアセトンで順次展開した。ベ
ンゼン／アセトン混合溶媒（１／３）及びアセト
ンで溶出した区分を集め濃縮すると、ベンゼン／
アセトン混合溶媒（１：４）で展開したシリカゲ
ルTLCにて、Rf値0.52にUV吸収を呈し、さらに
馬血清入りアツセイ板で抗菌活性を示す抗生物質
OA−6129Dのｐ−ニトロベンジルエステルが240
mg得られた。なお、アセトンで溶出した区分を集
めて濃縮すると、ベンゼン／アセトン混合溶媒
（１：４）で展開したシリカゲルTLCにて、Rf値
0.23を示す抗生物質OA−6129Bのｐ−ニトロベ
ンジルエステルが250mg得られた。 上記の如くして得られた抗生物質OA−6129D
のｐ−ニトロベンジルエステルの物性は次のとお
りであつた。 旋光度 〔α〕²⁴ _D 11.7゜（Ｃ＝1.0，CH₂Cl₂） IRスペクトル ν^CHCl3 _naxcm^-1：1750（β−ラクタム、エステル、
1660（アミド） UVスペクトル λ^CH2Cl2 _nax nm（ε）：268（5500） NMRスペクトル（CDCl₃） δ：0.90（3H，ｓ，

【式】） 0.98（3H，ｓ，

【式】） 1.34（2H，ｄ，Ｊ＝6.5Hz，CH₃−CH） 1.75〜2.20（3H，ｍ，Ｃ−4H₂，OH） 2.30〜2.80（5H，ｍ，Ｓ−CH₂−CH₂−NH，
NH−CH₂−CH₂−CO，OH） 3.15〜4.50（12H，ｍ，Ｃ−3H，Ｃ−5H，Ｃ
−6H，Ｃ−8H，NH−CH₂−CH₂−CO，Ｓ
−CH₂−CH₂−NH，

【式】，Ｏ −CH₂−Ｃ，OH） 4.77（1H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，Ｃ−2H） 5.23（2H，ｓ，CH₂−Ar） 6.70（1H，br，NH） 7.30〜7.60（3H，ｍ，Ar・Ｈ，NH） 8.17（2H，ｄ，Ｊ＝8.0Hz，Ar・Ｈ） Massスペクトル（FD） ｍ／ｚ 611（Ｍ＋１） 参考例 １： ６−（１−ヒドロキシエチル）−３−イソプロピ
リデンパンテテイニル−７−オキソ−１−アザ
ビシクロ〔3.2.0〕ヘプタン−２−カルボン酸
ｐ−ニトロベンジルエステルの製造 抗生物質OA−6129Dのｐ−ニトロベンジルエ
ステル52mgをアセトン4.0ml、２，２−ジメトキ
シプロパン0.5ml、硫酸ナトリウム（無水）200mg
の混合溶媒に溶解させ、室温で撹拌しながら、ｐ
−トルエンスルホン酸1.5mgを加える。30分間反
応させた後、反応液にトリエチルアミン20ulを加
え、５分間撹拌した。反応液を減圧留去し、残渣
に30mlのメチレンクロライドを加え、0.1Mリン
酸緩衝液（PH8.4）20ml、0.1Mリン酸緩衝液（PH
6.8）20mlで順次洗浄した。抽出層を硫酸ナトリ
ウム（無水）で脱水後、減圧留去した。残渣を少
量のメチレンクロライドに溶解し、ベンゼン／ア
セトン混合溶媒（10／１）で充填したシリカゲル
５ｇのカラムに吸着させた。ベンゼン／アセトン
混合溶媒（10／１），（５／１），（３／１），（１／
１）及び（１／３）で順次展開し、ベンゼン／ア
セトン混合溶媒（１／１）から（１／３）までで
溶出する区分を集めて濃縮すると、ベンゼン／ア
セトン混合溶媒（１：１）で展開したシリカゲル
TLCにて、Rf値0.35を示す表題物質が31mg得ら
れた。 この物質の物性値は次のとおりであつた。 旋光度 〔α〕²⁴ _D20.3゜（ｃ＝1.0，CH₂Cl₂） IRスペクトル υ^CHCl3 _naxcm^-1：1750（β−ラクタム、エステル）
1660（アミド） UVスペクトル λ^CH2Cl2 _naxnm（ε）：268（7500） NMRスペクトル（CDCl₃） δ：0.96（3H，ｓ，

【式】） 1.02（3H，ｓ，

【式】） 1.36（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，CH₃−CH） 1.42（3H，ｓ，

【式】） 1.46（3H，ｓ，

【式】） 1.60〜2.20（2H，ｍ，Ｃ−4H₂） 2.42（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，NH−CH₂−CH₂
−CO） 2.50〜2.70（2H，ｍ，Ｓ−CH₂−CH₂−NH） 2.85（1H，ｄ，Ｊ＝5.0Hz，OH） 3.15〜3.85（8H，ｍ，Ｓ−CH₂−CH₂−NH，
NH−CH₂−CH₂−CO，Ｃ−3H，Ｃ−6H，
Ｏ−CH₂−Ｃ） 4.04（1H，ｓ，

【式】） 3.90〜4.20（2H，ｍ，Ｃ−5H，Ｃ−8H） 4.77（1H，ｄ，Ｊ＝7.5Hz，Ｃ−2H） 5.27（2H，ｓ，CH₂−Ar） 6.42（1H，br，NH） 6.97（1H，br，NH） 7.50（2H，ｄ，Ｊ＝8.5Hz，Ar・Ｈ） 8.18（2H，ｄ，Ｊ＝8.5Hz，Ar・Ｈ） Nassスペクトル（FD） ｍ／ｚ：651（Ｍ＋１） 参考例 ２ ６−（１−アセトキシエチル）−３−イソプロピ
リデンパンテテイニル−７−オキソ−１−アザ
ビシクロ〔3.2.0〕ヘプタン−２−カルボン酸
ｐ−ニトロベンジルエステルの製造 参考例１で製造した化合物25mgを1.0mlのピリ
ジンに溶解し、氷冷下、撹拌しながら無水酢酸
0.32mlを加えた。同じ温度で５分間反応させた
後、室温で３時間反応させた。反応液に氷水を加
え、10分間撹拌した後、メチレンクロライド50ml
に注ぎ、0.1Mリン酸緩衝液（PH6.8）20ml、0.1M
リン酸緩衝液（PH8.4）40ml、更に0.1Mリン酸緩
衝液（PH6.8）20mlで順次洗浄した。抽出液を硫
酸ナトリウム（無水）で脱水後、減圧留去した。
残渣を少量のメチレンクロライドに溶解し、ベン
ゼンにて充填したシリカゲル５ｇのカラムに吸着
させ、ベンゼン及びベンゼン／アセトン混合溶媒
（10／１），（５／１），（３／１），（２／１），
（１／１）及び（１／５）で順次展開した。ベン
ゼン／アセトン混合溶媒（１／１）で溶出する区
分を集めて濃縮すると、ベンゼン／アセトン混合
溶媒（１／１）で展開したシリカゲルTLCにて、
Rf値0.61にUV吸収を示す表題物質を18mg得た。
この物質の物性値は次のとおりであつた。 旋光度 〔α〕²⁴ _D12.5゜（ｃ＝1.0，CH₂Cl₂） IRスペクトル ν^CHCl3 _naxcm^-1：1768（β−ラクタム） 1740（エステル） 1665（アミド） UVスペクトル λ^CH2Cl2 _naxnm（ε）：268（10100） NMRスペクトル（CDCl₃） δ：0.97（3H，ｓ，

【式】） 1.02（3H，ｓ，

【式】） 1.30（3H，ｄ，Ｊ＝6.5Hz，CH₃−CH） 1.40（3H，ｓ，

【式】） 1.44（3H，ｓ，

【式】） 2.05（3H，ｓ，CH₃CO） 1.80〜2.28（2H，ｍ，Ｃ−4H₂） 2.40（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，NH−CH₂−CH₂
−CO） 2.55〜2.90（2H，ｍ，Ｓ−CH₂−CH₂−NH） 3.10〜3.80（8H，ｍ，Ｓ−CH₂−CH₂−NH，
NH−CH₂−CH₂−CO，Ｃ−3H，Ｃ−6H，
Ｏ−CH₂−Ｃ） 4.01（1H，３，

【式】） 4.00〜4.20（1H，ｍ，Ｃ−5H） 4.72（1H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，Ｃ−2H） 4.98〜5.30（1H，ｍ，Ｃ−8H） 5.23（2H，ｓ，CH₂−Ar） 6.34（1H，br，NH） 6.93（1H，br，NH） 7.48（2H，ｄ，Ｊ＝9.0Hz，Ar・Ｈ） 8.17（2H，ｄ，Ｊ＝9.0Hz，Ar・Ｈ） Massスペクトル FDm／ｚ：693（Ｍ＋１），IBm／ｚ：692（Ｍ） 参考例 ３： ６−（１−アセトキシエチル）−３−クロロ−３
−イソプロピリデンパンテテイニル−７−オキ
ソ−１−アザビシクロ〔3.2.0〕ヘプタン−２
−カルボン酸ｐ−ニトロベンジルエステルＳ−
オキシドの製造 ６−（１−アセトキシエチル）−３−イソプロピ
リデンパンテテイニル−７−オキソ−１−アザビ
シクロ〔3.2.0〕ヘプタン−２−カルボン酸ｐ−
ニトロベンジルエステル31mgをベンゼン１ml、塩
化メチレン１mlに溶解後０℃に冷却し、ピリジン
16μおよびヨードベンゼンジクロリド24mgを加
えて２時間同温度で反応させた。反応液をシリカ
ゲル10mlのカラムに付し、ベンゼン：アセトン混
合溶媒（１：１）にて溶出し、同溶媒展開のシリ
カゲルTLCにてRf値0.44にUV吸収を有する区分
を減圧乾固すると表題化合物が15mg得られた。こ
の物質の物性値は次のとおりであつた。 IRスペクトル υ^CHCl3 _naxcm^-1：1782（β−ラクタム） 1740（エステル） 1665（アミド） UVスペクトル λ^CH2Cl2 _naxnm（ε）：267（10700） NMRスペクトル（CDCl₃） δ：0.94（3H，ｓ，

【式】） 1.01（3H，ｓ，

【式】） 1.24（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，CH₃−CH） 1.38（3H，ｓ，

【式】） 1.41（3H，ｓ，

【式】） 2.04（3H，ｓ，CH₃CO） 2.10〜2.50（3H，ｍ，Ｃ−4H，NH−CH₂−
CH₂−CO） 2.70〜3.90（10H，ｍ，Ｃ−4H，Ｃ−6H，
NH−CH₂−CH₂−CO，Ｓ−CH₂−CH₂−
NH，Ｏ−CH₂−Ｃ） 4.00（1H，ｓ，

【式】） 4.08〜4.45（1H，ｍ，Ｃ−5H） 4.97（1H，ｓ，Ｃ−2H） 5.18（2H，ｓ，CH₂−Ar） 5.28〜5.60（1H，ｍ，Ｃ−8H） 6.48（1H，br，NH） 6.90（1H，br，NH） 7.49（2H，ｄ，Ｊ＝9.0Hz，Ar・Ｈ） 8.15（2H，ｄ，Ｊ＝9.0Hz，Ar・Ｈ） Massスペクトル（FD） ｍ／ｚ：743（Ｍ＋１），707（Ｍ−Cl） 参考例 ４： ６−（１−アセトキシエチル）−３−イソプロピ
リデンパンテテイニル−７−オキソ−１−アザ
ビシクロ〔3.2.0〕ヘプト−２−エン−２−カ
ルボン酸ｐ−ニトロベンジルエステルＳ−オキ
シドの製造 ６−（１−アセトキシエチル）−３−クロロ−３
−イソプロピリデンパンテテイニル−７−オキソ
−１−アザビシクロ〔3.2.0〕ヘプタン−２−カ
ルボン酸ｐ−ニトロベンジルエステルＳ−オキシ
ド7.9mgをベンゼン1.5mlに溶解後、トリエチルア
ミン4μを加え室温で30分反応後シリカゲル５
mlのカラムに付しベンゼン：アセトン混合溶媒
（１：３）にて溶出し、ベンゼン：アセトン混合
溶媒（１：１）展開のシリカゲルTLCにてRf値
0.11にUV吸収を有する区分を減圧乾固し、表題
化合物を5.7mg得た。この物質の物性値は次のと
おりであつた。 IRスペクトル υ^CHCl3 _naxcm^-1：1785（β−ラクタム） 1735，1710（エステル） 1660（アミド） UVスペクトル λ^CH2Cl2 _naxnm（ε）：310（7200） 269（12600） NMRスペクトル（CDCl₃） δ：0.93（3H，ｓ，

【式】） 1.00（3H，ｓ，

【式】） 1.37（3H，ｓ，

【式】） 1.37（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，CH₃−CH） 1.42（3H，ｓ，

【式】） 2.02（3H，ｓ，CH₃CO） 2.41（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，NH−CH₂−CH₂
−CO） 2.80〜3.90（11H，ｍ，Ｃ−4H₂，Ｃ−6H，
NH−CH₂−CH₂−CO，Ｓ−CH₂−CH₂−
NH，Ｏ−CH₂−Ｃ） 4.02（1H，ｓ，

【式】） 4.20〜4.55（1H，ｍ，Ｃ−5H） 5.10〜5.40（3H，ｍ，Ｃ−8H，CH₂−Ar） 6.54（1H，br，NH） 6.93（1H，br，NH） 7.58（2H，ｄ，Ｊ＝8.5Hz，Ar・Ｈ） 8.17（2H，ｄ，Ｊ＝8.5Hz，Ar・Ｈ） 参考例 ５： ６−（１−アセトキシエチル）−３−イソプロピ
リデンパンテテイニル−７−オキソ−１−アザ
ビシクロ〔3.2.0〕ヘプト−２−エン−２−カ
ルボン酸ｐ−ニトロベンジルエステルの製造 ６−（１−アセトキシエチル）−３−イソプロピ
リデンパンテテイニル−７−オキソ−１−アザビ
シクロ〔3.2.0〕ヘプト−２−エン−２−カルボ
ン酸ｐ−ニトロベンジルエステルＳ−オキシド10
mgをベンゼン２mlの溶解しトリブチルホスフイン
4μを加え室温で30分間反応させた後溶媒を減
圧濃縮後シリカゲルカラム６mlに付し、ベンゼ
ン：アセトン混合溶媒（２：１）にて溶出し、ベ
ンゼン：アセトン混合溶媒（１：１）のシリカゲ
ルTLCにてRf値0.46にUV吸収を有する区分を減
圧乾固すると表題化合物が5.0mg得られた。この
物質の物性値は次のとおりである。 旋光度 〔α〕²⁴ _D35.4゜〔ｃ＝0.35，CH₂Cl₂） IRスペクトル υ^CHCl3 _naxcm^-1：1780（β−ラクタム） 1735，1700（エステル） 1660（アミド） UVスペクトル λ^CH2Cl2 _naxnm（ε）：317.5（14600） 270.5（12700） NMR（CDCl₃） δ：0.95（3H，ｓ，

【式】） 1.02（3H，ｓ，

【式】） 1.37（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，CH₃−CH） 1.39（3H，ｓ，

【式】） 1.44（3H，ｓ，

【式】） 2.03（3H，ｓ，CH₃CO） 2.42（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，NH−CH₂−CH₂
−CO） 2.70〜3.80（11H，ｍ，Ｃ−4H₂，Ｃ−6H，
Ｓ−CH₂−CH₂−NH，NH−CH₂−CH₂−
CO，Ｏ−CH₂−Ｃ） 4.00（1H，ｓ，

【式】） 4.10〜4.45（1H，ｍ，Ｃ−5E） 5.00〜5.40（2H，ｍ，Ｃ−8H，CHH−Ar） 5.41（1H，ｄ，Ｊ＝14.0Hz，CHH−Ar） 6.50（1H，br，NH） 6.90（1H，br，NH） 7.57（2H，ｄ，Ｊ＝8.0Hz，Ar・Ｈ） 8.13（2H，ｄ，Ｊ＝8.0Hz，Ar・Ｈ）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 で示される化合物並びにその塩及びエステル。 ２ 該塩がナトリウム塩である特許請求の範囲第
   １項記載の化合物。