JPH0377882A - ブタラクチンおよびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ブタラクチンど命名された化合物、＠＊貧号
が旧Ｌ　Ｙ−８ｆｉ、３６９２３　（Ｓｔｒ。ｓｐ、　
　Ｙ−８６、３６９２３）である微生４１！！ｉ種また
はその突然変異体または変異体を培養することによるそ
の製造法ならびに医薬および生合成のＩ［整剤としての
ブタラクチンの使用に関する。

ストレプトミセス種Ｙ−８６，３６９２３（Ｓｔ、ｒ、
ｓｐ。

ｙ−８６，３６９２３）はインド国、マハラシュトう州
、グーネにおいて採取された土壌から単離され、そして
ブタベスト条約の規定によって１９８９年５月２５日に
西ドイツ微生物収集機間ＤＳＭに寄託番号５３７２でを
託された。

Ｓｉｒ、　　Ｓｐ、　　Ｙ−８６，３６９２３の変異体
および突然変異体は、突然変異源例えばＮ−メチル−Ｎ
−ニトロ−Ｎ′−二トロングアニジンまたは紫外線のよ
うな変異源を使用するこの技術分野で知られた方法で得
ることができる。、微生物Ｓｔｒ、　　ｓｐ。

Ｙ−８６、３６９２３は放線菌目、ストレグトミセタセ
ア科そしてストレプトミセス属に属する。

Ｓｔ、ｒ、　　ｓｐ、　　Ｙ−８６，３６９２３は後記
の記述から明らかのようにその形態学、培養および生理
学的特性のいくつかにおいて知られた菌株とは相異なる
ために新規な菌株であると考えられる。それはまた後記
の記述から明らかであるように特にブタラクチンと呼ば
れる新しい抗生物質を生産するので新しい菌株であると
考えられる。

本発明の詳細な説明から明らかであるように、本発明の
ブタラクチンは２．３−二置換ブタノリド抗生物質であ
るが、Ａ−ファクター（Ｂｉｏｏｒｇ、　Ｋｈｉｍ、　
２．　１１４２−１１４７．　１９７６）、アントラザ
イクリンー誘導７アクター（Ｊ、　Ａｎｔｉｂｉｏ−ｒ
、ｉｅｓ、　３５．１７２２−１７２３．１９８２　；
　ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＬｅｔｔ、５゜５９１”
５９Ｌ　１９８３）、パージニアエブタノリド（Ｊ、　
Ａｎｉｉｂｉｏｔｉｃｓ、　４０．　４９Ｓ〜５０４．
　１９８７）および種々のラセミ体の［縁体（Ｊ、　　
Ａｎｔ、１ｂｉｏ−ｔ、ｉＣ８，４１，１８２８〜１８
３７，１９８８）　＋７）ようなあらゆる既知の二置換
ブタノリド代謝産物とは異なるものである。

ブタラクチンは次の式Ｉ の化合物である。

本発明の化合物の化学名はＩＵＰＡＣ命名法によれば、
２−　（４，５’−エポキシ−１′−オキソ−２’（Ｅ
）−ヘキセン）−イル−２−ヒドロキシ−３−ヒドロキ
シメチル−２，３−（Ｚ）−ブタノリドまたは、別途に
２−　（４’、５’−エポキシ−ヘキサ−，２’（Ｅ）
−エン）オイル−２−ヒドロキシ−４−ヒドロキシメチ
ル−２，３−（Ｚ）−ブタノリドと呼称されるものであ
る。

分子量および分子式を検索、の鍵として行な９たケミカ
ルアブストラクトザービス（ＣＡＳ）−オンライン−文
献ザーグーでブタラクチンが新規化合物であることを確
認している。

本発明の新規な抗生物質は数多くのダラム陽性菌および
ダラム陰性薄に対してイン・ビトロで活性である。また
嬉二次代謝産物の生合成の調整剤として活性である。従
って治療薬としておよび抗生物質の生合成の調節におけ
る生化学的調整劫として使用しうる。

また本発明によれば、知られたやり方で６−５〜８．５
のｐｉ（において栄養培地を用いて土壌からＳｔｒ、　
　ｓｐ、　Ｙ−８６，３６９２３を単離する方法が提供
される。

土壌から微生物を単離するのに使用された栄養培地は炭
素源および窒素源および無機栄養塩ならびに凝固剤から
構成されている。炭素源は、例えばグルコース、殿粉、
デギストリン、グリセロール、スクロースまたはモラセ
スでありうる、窒素源は、例えばペプトン、酵母エキス
、ビーフエキス、麦芽エキス、カゼインまたはアルギニ
ンまたはアスパラギンのようなアミノ酸でありうる。凝
固剤は例えば寒天でありうる。

無機栄養塩は、例えばナトリウム、カリウム、マグネシ
ウム、カルシウム、リンまた硫黄の塩類でありうる。

本発明の微生物は、分枝した基質菌糸体からの無色の気
中菌糸体が伸長したものである。胞子鎖は、気中菌糸体
の先端でスパイラルを形成している。スパイラルは開い
ている。節ＲＡを代表する短胞子鎖はまた普通のもので
ある。渦巻きまたは胞子嚢は観察されていない。成熟し
た胞子鋼は１つの鎖当り１０〜２０個の胞子を含んでい
る。種々の寒天培地上におけるこの微生物の培養特性は
下記のとおりである。

■、酵母エキス：麦芽エキス寒天 生　　長：　　良好、しわ、乾燥 気中菌糸：　　不良、粉末状、明るい灰色裏　　面：　
　黄色がかった白色 可溶性色素：　な　し ２、オートミール寒天 生　　長：　　良好、平滑、乾燥 気中薗糸二　　適度、粉末状、白色 裏　　面：　　黄色がかった黄色 可溶性色素：　な　し ３、無機塩：殿粉寒天 生　　長：　　良好、上昇、乾燥 気中菌糸：　　良好、粉末状、灰色 裏　　面：　　灰色−オリーブ色 可溶性色素：　な　し ４、グリセロール：アスパラギン寒天 生　　長：　　良好、しわ、乾燥 気中菌糸：　　弱い、粉末状、白色 裏　　面：　　黄色がかった黄色 可溶性色素：　な　し ５、ペプトン：酵母エキス−鉄寒天 生　　長二　　適度、平滑、砂状 気中菌糸：　　な　し 裏　　面：　　うすい褐色 可溶性色素：　な　し ６、チロシン寒天 生　　長：　　良好、しわ、乾燥 気中菌糸；　　な　し 裏　　面：　　明るい黄色 可溶性色素：　な　し ７、スクロース：硝酸塩寒天 生　　長：　　良好、しわ、砂状 気中菌糸：　　不良、粉末状、白っぽい裏　　面：　　
うすい黄色 可溶性色素：　な　し ８、グルコース：アスパラギン寒天 生　　長：　　良好、しわ、乾燥 気中菌糸二　　弱い、粉末状、明るい灰色裏　　面：　
　うすい黄色 可溶性色素：　な　し 本発明の微生物のための最適生長温度範囲は２５〜３７
℃である。この微生物はグルコース−ペグトン−ゼラチ
ン培地中でゼラチンを液化し、殿粉−無機塩寒天中では
殿粉を加水分解し、脱脂ミルクを凝固させ硫化水素を発
生せず硝酸塩を還元しない。Ｓｔｒ、　　ｓｐ、　　Ｙ
−８６，３６９２３はツアペック溶液寒天上では良好に
生長する。

メラノイド色素の生成は、チロシン寒天、ペプトン−酵
母エキス−鉄寒天またはトリプトン−酵母エキスブロス
中では観察されなかった。

この微生物の炭素源同化パターンは次のようである（　
Ｐｒｉｄｈａｍ−にｏｔｔｌｉｅｂ’ｓ培地中）。

陽性：Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロ
ース、ｍ−イノシトール、Ｄ−マンニトール、Ｄ−フル
クトース、ガラクトース、マルトース、セロビオーズ、
グルタミン酸ナトリウム、マンノース、ラクトース、ス
クロース。

弱い：ラムノース、ラフィノース。

陰性：セルロース０ ５ｔｒ、ｓｐ、Ｙ−８６，３６９２３は６．２５μｇ７
’ｓＱより大きい濃度テはストレプトマイシンによって
阻害され、ＮａＣＱに７％以下６％以上の濃度で耐容性
であり、そしてｐＨ許容範囲ｐＨ６，０〜９．０を有す
るつＳｔｒ、　　ｓｐ、　　Ｙ−８６，３６９２３は、
実質的にはシネロマイシンＢおよび関連化合物であるア
ルポザイクリンを産生ずるこの技術分野で知られた微生
物とは異なる。これらの微生物はスト１／ブトマイシス
シネロクロモジス、スト１７ゾトマイシスビリユンネオ
グリセオス、ストレブトマイシスロゼオシネリウスおよ
びストレプトマイシスロゼオクロモジエンズバーアルポ
サイクリンである。

他の知られた微生物の培養および生理学的特性に関する
開示された情報と本発明の微生物とを比較する時、明ら
かな差異が示される。

さらにＳｔｒ、　ｓｐ、　Ｙ−８６，３６９２３を醗酵
させる時、既知の抗生物質シネロマイシンＢに加えて新
規な抗生物質ブタラクチンを生産するのである。

本発明の微生物）え、上記の観察からストレプトマイシ
スの新しい菌株であることは明らかである。

本発明が、上に明示した特殊な生物に限定されるのでは
なくて新規な抗生物質ブタラクチンを生産しうる上述の
微生物から誘導された自然発生的および人工的な突然変
異体および変異体のすべてを含有するものであることは
この技術分野で熟達した人々には良く理解されるところ
である。

本発明のもう一つの主題は、ブタラクチンの製造方法に
ある。該製造方法は、ＳＬｒ、　　５ｐ。

Ｙ−８６、３６９２３を炭素源、および窒素源、栄養無
機塩、および微量の元素を含む栄養培地中で好気的条件
下で６゜θ〜９゜ＯのｐＨｓ好ましくは６〜７のｐｏお
よび１８〜４０℃の温度、好Ｊ己しくは２０〜３７℃で
醗酵させて培養し前記のようなこの技術分時で知られた
常法で培養ブロスから該化合物を単離することからなる
。

この新規の抗生物質生産のために栄養培地に用いられる
炭素源は、例えばグルコース、殿粉、デキストリン、グ
リセロール、スクロース、モラセスまたは油であること
ができる。この新規の抗生物質生産のために栄１１！培
地に用いられる窒素源は、例えば大豆ミール、酵母エキ
ス、牛゛肉エキス、麦芽エキス、玉蜀黍浸出液、ベグト
ン、ゼラチンまたはカゼインであることができる。新規
の抗生物質生産のために栄養培地に用いられる栄養無機
塩／ミネラル塩は、例えば塩化ナトリウム、ｆＥ酸マグ
ネシウム、硫酸アンモニウムまたは炭酸カルシウムであ
ることができる。微量元素として、例えば鉄、マンガン
、銅、亜鉛またはコバルトが使用されうる。

好ましくは、Ｓｔｒ、　　ｓｐ、　　Ｙ−８６，３６９
２３は約２７°Ｃ（±１　”　）　、ｐＨ約７．０で培
養される。醗酵は好ましくは、化合物の最高収率が得ら
れる２３〜４８時間後停止される。醗酵は、好ましくは
、液内培養でありうる。ブタラクチンの醗酵の進展およ
びブタラクチンの形成は寒天培地中の黄色葡萄球菌２０
９Ｐおよび大蔚菌９６３２に対する培養液および菌糸体
の抗菌活性および酢酸エチルを展開溶媒どして用いるシ
リカゲルプレート上の薄層クロマトグラフィーによって
モニターすることができる。若し望まれるならば、該培
養菌の醗酵中に栄養培地中に抗発泡剤例えばデスモアエ
ンＤｅｓｍｏｐｈｅｎ”’　（ＰｏＸｙｏｌｓ、　　西
ドイツ２Ｌｅｖｅｒｋｕｓａｎ、　Ｂａｙｅｒ社＆１）
を使用することができる。

ブタラクチンはｐＨを６．５”　７．５にｌｌｌ整した
後、好ましくは水と混和しない溶媒による抽出によって
培養ブロスから得ることができる。溶媒としては酢酸エ
チルまたはクロロホルムが用いられ１酢酸エチルが好ま
しく、好ましいｐＨは約７．０である。溶媒抽出液を濃
縮して溶媒を除去し、そしてさらにクロマトグラフィー
にかける。

ブタラクチンは、また適当な吸着剤、例えばア７　、＜
　−ライト”’　ＸＡＤ−４または７（ポリスチレンま
たアクリル酸エステルをベースとする多孔吸着性樹脂、
米国、ロームアンドハス社製）、またはダイヤイオン”
’ＨＰ−２０（ポリスチレン−ジビニルベンゼンコポリ
マーをベースとスル高多孔吸着性樹脂、三菱化成工業社
製）上に直接吸着させることによって培養ブロスから得
られる。

好ましい吸着剤はダイヤイオン（ｍｌ　Ｈｐ−２０であ
る。

本発明による化合物は、適当な移動相例えばクロロホル
ム、メタノールまたはアセトンを単一または互いに組合
せまたは水との組合せを用いてその吸着剤から溶離され
、モして溶離物は乾固するまで蒸発される。好ましい溶
離剤はメタノールである。かくして得られた活性溶離物
はプールされそして濃縮される。

ブタラクチンを含有する前記の濃縮された溶離物または
抽出物はさらに数多くの方法で精製されうる。例えば、
活性炭、アンバーライ）　”’ＸＡＤ−４および７、ダ
イヤイオ７　（”　ＨＰ−２０による再吸着および溶離
法、セファデックス（寵）ＬＨ−２０ゲル（ゲルが過密
天上一定の多孔性を有するゲル、ファルマシアファイン
ケミカルＡＢ社製（スエーデン））およびその同等物に
よるゲルが過、アルミナおよびシリカゲル上の吸着クロ
マトグラフィーをそれ以上の精製のために都合よく組み
合わせることができる。加えて適当な吸着剤例えばシリ
カゲルおよび変性シリカゲルＣ−１８を適当な溶媒系と
ともに用いる薄層クロマトグラフィー、中圧および高圧
液体クロマトグラフィーを使用することができる。さら
に特別の溶媒系を用いる向流クロマトグラフィーは該目
的に十分役立つことができる。好ましくは、溶離溶媒と
して酢酸エチルおよび石油エーテル（４０〜６０℃）を
用いる反覆シリカゲルクロマトグラフィーが使用される
。またこのクロマトグラフィーの間に知られた化合物シ
ネロマイシンＢが単離される。

ブタラクチンは室１１（２５℃）ではうすい黄色のの濃
いシロップ状である。それは、水、メタノール、エタノ
ール、フロピレンゲリコール、ジメチルスルフォキサイ
ド、メチレンクロリド、酢酸エチルおよびクロロホルム
に可溶である。

それはヘキサン、石油エーテル（４０〜６０℃）に不溶
である。

下記の薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）系においてブ
タラクチンは次の数値を有している。

ＴＬＣ板二予備被覆したシリカゲルプレート：ダームス
タットのＥ、　　Ｍｅｒｃｋ社製Ａｒｔｉｃｌｅ　Ｎｏ
。

５５４４゜ Ｒｆ値　　　１玉ム ブタラクチン　　　　　　　　０．４４シネロマイシン
Ｂ　　　　　　　Ｏ，５１高速液体クロマトグラフィー
分析（ＨＰＬＣ）結果は、第１図に示した。ＨＰＬＣは
次の条件を用いて実施された。

カラム充填：　０ＤＳ−Ｈｙｐｅｒｓｉ　ｌ　”’−１
０μ、４ｘ（３０＋１１００）ａ　（オクタデシルシラ
ンを基本とするカラム充填材料、 ５ｈａｎｄｏｎ　Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ社製、フラ
ンクフルト（マイン）、西ドイツ） 流　　速：　　０．５ｓＩＲ／分 検　　　出　＝　　　２４Ｏｎ＋ｍ 溶　　媒：　メタノール二本（１：３）ブタラクチンの
分光学的データーを以下に示す。

１、　メタノールおよび０．１Ｎ　塩酸−メタノール中
における紫外線最大吸収ｕｖ□８は２４２ｎａ＋に２゜ ３゜ ４． ５゜ あつて、０．１Ｎ　水酸化すトリウム−メタノール中で
はＩＪＶａ＋、ｘ２０６ｎｍにシフトする。この吸収ス
ペクトルは１ｌｖｉｋｏｎ社８１０分光光度計を用いて
２００〜８００．ｎｍの波長範囲で測定された。

＋Ｒスペクトル（ｎｅａｔ）はパーキンエルマー社Ｐ、
Ｅ、　　５２１　１Ｈ分光光度計を用いて測定されたー
ｔｓ２図参照。

’Ｈ−ＮＭＲスペクトルはＣＤＣα、を溶媒として用イ
テＪＥＯＬ（８本電子）社９０ＭＨ２ｊＥＯｌ、　ＦＸ
−９００で測定された一茶３図参照。

ｌ　ＳＣ−ＮＭＲスペクトルはＣＤＣらを溶媒として用
いてＪＥＯＬ（日本電子）社９０ＭＨｚ　ＪＥＯＬ　Ｆ
Ｘ−９００で測定された７第４図参照。

質量分析ＭＳは、電子衝撃（Ｅ１）、化学的イオン化（
Ｃ１）　、おｊ：びイオン化のＦａｓｔ　Ａｔ、ｏｍＢ
ｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ（ＦＡＢ）型式音用いるＶＧ社Ｚ
Ａ８３Ｆ機器で行なわれた−　Ｃ＋＋Ｈｔ４０ｓの分子
式に相当する分子量は、２４２゜０８５７であることが
見出された。

化学分析値と共に上記のデーターはブタラクチンが式Ｉ
に示１−た構造を有することを表わしている。

ブタラクチンはダラム陽性菌およびダラム陰性菌に対し
て活性である。抗生物質効力検定培地における寒天ウェ
ル法（６ｍ＊Ｔｅｉ、径）で試験した時、第１表に示し
たような活性を有していた。

第　　　１　　　表 本　　　　　　　　　　本 エシェリヒアコリ　９６３２ エンテロバクテリウムクロアカニ シトロバクタ−フロインディー シトロバクタ−２０４６Ｅ プロテウスバルガリス グロテウスミラビリス プソイドモナスエルギノザ カンデダアルビカンス アスペルギルスニガー 本　關で示した阻止帯直径。

ブタラクチンはまた抗菌活性に加えて産生ずる微生物の
生長を阻止しない濃度で抗生物質の様に第二次代謝産物
の生合成を閣害することが見出された。

以下に本発明をざらに好適した実施例により説明するが
これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない
。

実施例　Ｉ 土壊からのストレプトミセスｓｐ、　Ｙ−８６，３６９
２３の単離 （ａ）重重栄養培地の！Ｉｌｌ製 培地ｌ：　グル３−ス　　　　　　１６０９グリ七ロー
ル　　　　　１．ｈ Ｌ−アルギニン　　　　０，３９ に、ＨＰＯ３０８３９ Ｍｇ５Ｏ，ｘ　７Ｈ，ＯＯ，２ｇ 塩化ナトリウム　　　　０．３ｇ 酵母エキス　　　　　　２．０ｇ Ｆｅ５Ｏａ　Ｘ　７ＨｐＯｌＯ，０ｍｇＣｕ５Ｏａ　Ｘ
　５ＨｓＯｌ−０ｍｇ Ｚｎ５Ｏ４Ｘ　７Ｈ＊Ｏｌ−０ｍ９ ＭｎＳＯ４Ｘ　７Ｈ＊ｏ　　　　　　ｌｌ−０ｒａ寒　
　　　天　　　　　　　　　　　１５．０ｇ蒸留水　　
　　　１ａ ｐＨ６，５ 培地２：　グルコース し−アスパラギン に、ＨＰＯ。

Ｍｇ５Ｏ４Ｘ　７Ｈ，０ 土壌抽出物 寒　　　天 蒸留水 Ｈ 培地３二　殿　　粉 カゼイン ＫＮＯ。

塩化ナトリウム に、）ＩＰＯ。

Ｍｇ５（ｈ　Ｘ　７Ｈ２０ ＣａＣＯ。

Ｆｅ５Ｏａ　ｘ　７ｕｌ。

寒　　　天 蒸留水 Ｈ ２，０ｇ １．０９ ０．５９ ０．５ｇ ２００　　肩α １５．０９ ８００　　ｙａＱ ８．０ １０．０９ ０．３ｇ ２．０ｇ ２．０ｇ ２．０ｇ ０．０５ｇ ０．０２９ ０．０１９ １５．０９ Ｑ ７．２〜７．５ 培地は１２１”ｏで３０分間滅菌された。すべての場合
、滅菌培地は４５℃に冷却しペトリ皿に注ぎ入れ固化さ
せる。

（ｂ）土壌懸濁液の調製 土壌１９を１１０℃で熱い空気浴中で１時間加熱する。

冷却後、それを蒸留水に懸濁しよく振盪する。土を沈降
させそして上澄液体を上記培地のそれぞれに一度に接種
するのに使用する。

（ｃ）単離用培地の接種 土壌懸濁液１ｍ１２を、上記栄養単離培地それぞれ５０
ｍ１２を含有するペトリ皿上に接種する。

（ｄ）ストレプトミセスｓｐ、　Ｙ−８６，３６９２３
の単離接種したベトリ皿を３７℃でｌＯ日間培養しそし
てストレプトミセスｓｐ、　Ｙ−８６，３６９２３を生
長した微生物から単離する。

実施例　■ ブタラクチン醗酵生産のためのストレプトミセスｓｐ、
　Ｙ−８６，３６９２３の培養ストレプトミセスｓｐ、
　Ｙ−８６，３６９２３を次の組成を有する酵母エキス
−麦芽エキスに加えた。

麦芽エキス　　　　　　　ｌｏ、０ｇ 酵母エキス　　　　　　　４．０ｇ グルコース　　　　　　　　４．０ｇ 寒　　　　　天　　　　　　　　　　　１５．０９蒸　
　留　　水　　　　　　　　　　　　１ＱｐＨ７，０ この培地を試験管に入れモしてｌ　２１　’Ｏで３０分
滅菌した。試験管を傾斜して冷却して斜面寒天培養基を
製造した。その斜面管に培養菌を接種しそして２８℃で
良好な生長および胞子形成が観察されるｌＯ〜１５日間
培養した。

斜面管からの蒸留水中の胞子の懸濁液は、種子培養培地
の１００ｍαを含有するそれぞれ５個の５００ｍ１２円
錐フラスコに接種するのに使用されＩこ　。

種子培養培地の組成 グルコース　　　　　　　１５．０９ 大豆ミール　　　　　　　１５．０ｇ 玉蜀黍浸出液　　　　　　５．０ｇ ＣａＣ０，２，０９ ＮａＣＱ　　　　　　　　　　　５．０９蒸　　留　　
水　　　　　　　　　　　１１２ｐＨ６，５ 上記培地１００ｍ（２を５００１の円錐フラスコのそれ
ぞれに入れ１２１”Ｏで３０分滅菌した。フラスコを冷
却し、胞子の懸濁液または菌糸体の塊で接種し１．５イ
ンチの手振幅で操作される回転振盪機中で２４０ｒ、ｐ
、ｍの回転数で２７℃（±ｌ”ｏ）で７２時間振盪され
た。生長培養物は２〜４容量（ｖ／ｖ）％生産用培養培
地の１００１Ｉａをそれぞれ含有する２００ｍの５００
ａｌｌフラスコに接種するのに使用された。

生Ｉｌ培地の組成 グルコース　　　　　　　１０・Ｏｇ 可淳性鮫粉　　　　　　　１０．０ｇ 麦芽エキス　　　　　　　７．５２ ベグトン　　　　　７．５ｇ Ｍル５ｏ４Ｘ　７Ｈ！０　　　　１．０１１１１ＮａＣ
Ｉ２　　　　　　　３．０ｍ Ｃｕ５Ｏ４Ｘ　５Ｈ２０７，０ｔａ９ ＦｅＳＯ，Ｘ　７ＨｚＯｌ　−０１１９ＭｎＣ（２，ｘ
　４Ｈ，０８−０ｍ９ ＺｎＳＯ＊　Ｘ　７ＨｉＯ２−０ｍ９ 蒸留水　　　　　１Ｑ ｐＨ６，５ 醗酵は、１．５インチ手振幅を有し２４Ｏｒ、ｐ、ｌ１
１で回転する回転振盪機上において２７℃（±１℃）で
実施された。ａ！酵を４５〜４８時間の終了時に停止し
た時、培！ｌＩ枦液を寒天ウェル（６ｍｍ直径）法で検
定するとスタフィロコッカスアウレウス２０９Ｐに対す
る阻止帯の直径は１６Ｉであり、エシェリヒアコリに対
する阻止帯の直径は１３ｍｍであり、そして培養液体の
ｐＨは６．８〜７．０の範囲であった。充填細胞容積は
２０％容量（ｖ／ｖ）％であった。収集Ｉまた抗生物質
を含有する培養ブロスを遠心分離にかけ菌糸体および培
養液体を分離しそしてさらに実施例■に記述したように
処理した。

実施例　度 ブタラクチンの醗酵生産のｌ；めのスト１７ズトミセス
ｓｐ、　Ｙ−８６，３６９２３の培養実施例■の操作を
次の相違なのぞき繰り返した。ストレプトミセスｓｐ、
　Ｙ−８６，３６９２３は次の組成を有する寒天培地で
生長させた。

可溶性殿粉　　　　　　　１０．Ｏｇ ＫＪＰＯ−１−０ｇ Ｍｇ５Ｏ６Ｘ　７Ｈ，Ｏ１，０ｇ 塩化すｌ・リウム　　　　　１．Ｏｇ （ＮＨａ）ｓｓＯａ　　　　　　　　　　　　　２．０
ρＣａＣ０，２−０９ ＦｅＳＯ，Ｘ　７Ｈ，００，１ｍｇ ＭｎＣらｘ　４Ｈ２００，１ｍｇ Ｚｎ５Ｏ，Ｘ　７Ｈ３００，ｂｔ９ 寒　　　天　　　　　　　　　　　　１５．０９蒸留水
　　　　　目 ｐｌ（７，２ 種子培養培地の組成は実施例■のそれと同様である。

生産培地の組成 グルコース　　　　　　　２０．０９ ペプトン　　　　　　　　５・０９ ビーフエキス　　　　　　５．０ｇ ＣａＣＯ３３，０９ 蒸留水　　　　　１１２ ｐＨ７，０ デスモアエン＋ＩＩ）　２１１Ｑを消泡剤として加えた
。

」−記培地１０１２を１５１２の醗＃器に入れる。培地
を１２１”Ｏで２０分間蒸気によって直接的および間接
的に滅菌する。、醗酵器を冷却して種子培養培地（９％
ｖ／ｖ）により接種する。醗酵は毎分６０〜７０ｇの通
気速度で通気しつつ１２０ｒ、ｐ、ｍの撹拌条件下に２
７℃で実施した。醗酵を２３〜２７時間の終了時に停止
１．た時培養ブロスのｐＨはｐＨ７、４であり、そして
培養炉液を寒天ウェル法（６ｍ＋ｍ直径）によって検定
した時スタフィロコッカスアウレウス２０９Ｐに対する
阻止帯のＴｆｔ、径は２２ｍｍであり、エシェリヒアコ
リに対する阻止帯の直径は１４肩跪であった。充填細胞
容積は１５％（ｖ／ｖ）であった。

培養ブロスは実施例Ｖに従って処理された。

実施例　■ ブタラクチンの単離と精製 実施例■から得られた培Ｉ！枦液のおおよそ１６Ｑをｐ
　Ｈ７、０に調整した後それぞれ酢酸エチルｉｏ！２で
２回抽出した。水ｍｔ捨て合体した酢酸エチル抽出物を
真空蒸発させて乾個した。はぼ６．４ｇの粗抽出物が得
られｌ；。この粗抽出物を５×２００Ｉｍ（〆ＸＬ）シ
リカゲル（２３０−４００メツシユサイズ）カラムにド
ライチャージして石油エーテル（４０〜６０℃）酢酸エ
チル混合物（１：　１）での溶離を始めてから引続き段
階的に酢酸エチル濃度を増やし１００％まで増加して溶
離した。この操作で石油エーテル−酢酸エチルの勾配が
ｌ二１であった時溶離してフラクションＡの１７ｇを得
、そして石油エーテル−酢酸エチルの°勾配が３＝７で
あった時溶離してフラクションＢの３．２ｇを得た。フ
ラクションＡはさらに５×２５ｃｍシリカゲル（２３０
〜４００メツシユサイズ）カラムに仕込みクロロホルム
−酢酸エチル（ｌ：１）から（３：　７）への勾配で溶
離することによって精製した。クロロホルム−酢酸エチ
ル（８：　２）濃度で得られた活性７ラクシヨンを濃縮
し２−２−４Ｘ９０セフアデツクス（ＩＩゝＬＨ２０カ
ラム上でメタノールでクロマトグラフィーを行ない抗生
物質化合物４００１１９を得た。これはさらに３Ｘ　３
５ｃｔｘ　ＭＰＬＣシリカゲル（３０μ）カラムでクロ
マトグラフィー処理を実施しクロロホルムからクロロホ
ルム中２％メタノールまで０．５％ずつメタノールをふ
やす段階的な勾配において流速１（ｍ２／分で溶離した
。メタノール濃度が１−１．５％間であった時活性化合
物が溶離され濃縮して既知の抗生物質シネロマイシンＢ
と同定された純化合物１５０す１得た。

フラクションＢは３等分ロットとして４．５×４５ｃｍ
　ＭＰＬＣシリカゲル（３０μ）カラムにチャージし、
石油エーテル−酢酸エチル（５：５）から（３ニア）の
勾配で溶離した。流速を毎分１５ｍｇに＃ｌ持し溶離物
はＫｎａｎｅｒ社■Ｖ検出器により２４０ｎｍで監視さ
れた。ブタラクチンは石油エーテル−酢酸エチル（４：
　６）混合物で溶離した。活性７ラクシヨンは真空上濃
縮され６５０＋＊ｇの純粋な化合物を得た。

実施例　Ｖ ブタラクチンの単離と精製 実施例■で略述したように二つの醗酵バッチからの培養
が液はプールされ１７Ｑの容積となった。これをダイヤ
イオン（１１１ｐ−２ＱのＮ２を含有するカラムに通し
た。このカラムは１０ａの脱ミネラル化した水で洗浄し
、そして５ａのメタノールで溶離した。活性メタノール
溶離物を真空下乾個するまで濃縮し粗製生成物８．８ｇ
を得た。

これは二つの５　Ｘ　２５Ｃ１１シリカゲル（２３０〜
４００メツシユ）カラムにチャージされクロロホルム−
酢酸エチル（９：　１）から（３：　７）までの勾配で
溶離し二つの活性７ラクシヨンを得た。これはクロロホ
ルム−酢酸エチル（８：　２）で溶離したシネロマイシ
ンＢを含有する７ラクシヨンＡ　（２，３９）およびク
ロロホルム−酢酸エチルの比が５：５であった時溶離し
たブタラクチンを含有するフラクションＢ　（４，３９
）である。フラクシヨンＢは二つのロフトで５　Ｘ　６
０ｃｍシリカゲル（３０μ）　ＭＰＬＣカラム上の石油
エーテル−酢酸エチル（５：　５）から（３：　７）の
勾配を用いる反覆クロマトグラフィーで精製した。流速
は２゜ｒａＱ／分に維持し溶離のモニタリングはＫｎａ
ｎｅｒ社ＵＶ検出器により２４０ｎ−で実施した。石油
エーテル−酢酸エチルの比が４二６であった時溶離した
活性溶離物を濃縮し５５０ｍｇの純粋の化合物５５０１
Ｉｇを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図はブタラクチンの高速液体クロマトグラフィー分
析で得られたクロマトグラムを示し、 第２図はブタラクチンのＩＲスペクトル（ｎｅａｔ）を
示し、 第３図はブタラクチンの’　Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示
し、 基４図はブタラクチンの目Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す
。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）次の式 I ▲数式、化学式、表等があります▼ の化合物であるブタラクチン。 ２）ストレプトミセス種のＹ−８６，３６９２３（ＤＳ
   Ｍ５３７２）、その突然変異体および（または）変異体
   を炭素源および窒素源、無機栄養塩ならびに微量元素を
   含有する栄養培地中において好気性条件下で培養し、そ
   して慣用の方法で培養ブロスから化合物を単離および精
   製することからなる請求項１に記載された式 I の化合
   物の製造方法。 ３）培養を約１８〜４０℃の温度および約６〜９のｐＨ
   で実施する請求項２に記載された方法。 ４）培養を２７℃（±１℃）の温度および約７．０のｐ
   Ｈで実施する請求項２または３に記載された方法。 ５）醗酵を２３〜４８時間実施する請求項２〜４の１つ
   またはそれ以上の項に記載された方法。 ６）醗酵を液内培養で実施する請求項２〜５の１つまた
   はそれ以上の項に記載された方法。 ７）必要によって、医薬の製造のために慣習的な補助剤
   および（または）賦形剤を追加してなる請求項１に記載
   された化合物を含有する医薬。 ８）抗生物質様作用を有する医薬を製造するための請求
   項１に記載された化合物の使用。９）抗生物質の生合成
   の調節における生化学的調整剤としての請求項１に記載
   された化合物の使用。 １０）ストレプトミセス種のＹ−８６，３６９２３（Ｄ
   ＳＭ５３７２）。