JPH0379995B2 - - Google Patents
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- JPH0379995B2 JPH0379995B2 JP62056050A JP5605087A JPH0379995B2 JP H0379995 B2 JPH0379995 B2 JP H0379995B2 JP 62056050 A JP62056050 A JP 62056050A JP 5605087 A JP5605087 A JP 5605087A JP H0379995 B2 JPH0379995 B2 JP H0379995B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- monoclonal antibody
- antibody
- pseudourisin
- culture supernatant
- elisa
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
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- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は単クローン性抗体に関し、更に詳細に
は進行癌のマーカーであるシユードウリジンψ
（psedouridine ψ）に対する単クローン性抗体に
関する。 〔従来の技術及びその問題点〕 近年癌関連抗原に対する単クローン性抗体を用
いた臨床検査診断が盛んに実施されてきている。
また、癌になると増加することが知られている物
質である癌胎児性抗原（CEA）、α−フエトプロ
テンなどに対する抗体を用いて同様なことが行わ
れている。 ところで、癌になると増加する物質、すなわち
腫瘍マーカーと呼ばれる物質の中で、進行癌患者
尿中に増加するものとしてシユードウリジンψが
知られている。この物質はトランスフアー・リボ
ヌクレイツクアシド（ｔ‐RNA）の構成成分の
１つであり、その増加の原因は、癌組織における
ｔ−RNAのブレークダウン（breakdown）が正
常組織に比較し、亢進しているためであるといわ
れているが、その増加のメカニズムの詳細につい
ては未解明である。 現在、このシユードウリジンψ（以下「ψ」の
略称することがある）の量を測定し、これから進
行癌の存在を判定する試みがなされているが、ψ
の定量は高速液体クロマトグラフイー（HPLC）
でおこなわれるため、サンプルの前処理等が煩雑
であり、多検体を測定するには非常に長時間を要
するという欠点があつた。 本発明者らは先に、簡敏なψの測定法を開発す
べく、種々検討をおこなつた結果、ψに対する単
クローン性抗体を新たに作成し、これを用いるこ
とにより、尿サンプルの前処理操作を行うことな
くELISA法を応用した多検体同時測定方法を実
施することができ、測定の迅速化、簡素化がはか
れることを見出し特許出願した〔特願昭61−
143484号（特開昭62−299765号）〕。 しかしながら、特願昭61−143484号に記載され
たψに対する単クローン性抗体は、ウリジンと95
〜99％、ウラシルと30〜40％の交叉反応性を有し
ているため、この単クローン性抗体を用いた
ELISAによるψの定量においては、ψのほかに
ウリジンやウラシルも含めて、測定していた可能
性があつた。そのため、進行癌患者においてさえ
もψの高値例が少ないという、これまでのHPLC
による定量のデータと矛盾する結果が得られると
いう欠点があつた。 そこで、本発明者らは更に、ψに対する反応特
異性の高い単クローン性抗体を得べく研究をおこ
なつた結果、遊離のψに対する阻害が強く、ウリ
ジン及びウラシルに対する阻害がないかあるいは
阻害の極めて弱い単クローン性抗体はψに対する
反応特異性が高く、しかもこれをψの測定法に用
いた場合、HPLC等による定量のデータとよく一
致することを見出し、本発明を完成した。 すなわち、本発明は、次の性質 (1) 抗体のクラス：IgG1 (2) 抗体価（培養上清を２段階希釈し、それぞれ
とψ−BSAを反応させるELISAを行なつたと
き、最も高い吸光度を持続する希釈倍率）：64
倍 (3) 交叉反応性：シユードウリジン 100％ ウリジン ０％ ウラシル ７％ ５−フルオロウラシル 2.8％ を有するψに対する単クローン性抗体及びこれを
用いるψの測定法を提供するものである。 本発明のψに対する単クローン性抗体は、例え
ば次の如くして調製される。 すなわち、まず、ψを用いて動物を免疫し、そ
の動物の脾細胞を採取する。この工程において、
ψはそれ単独では免疫原となり得ないので、適当
なキヤリア・プロテイン（Carrier Protein）と
結合させたのち、免疫原として用いる。ψとして
は、例えば進行癌患者の尿中から公知の方法、例
えばシグマ（Sigma）社から販売されている標品
を用いることができ、キヤリア・プロテインとし
ては、ハプテン部分を免疫担当細胞が認識するこ
とを可能にする目的で用いられるプロテイン、例
えばキーホール・リンペツト・ヘモシアニン、牛
血清アルブミン等を用いることができる。また、
このψとキヤリア・プロテインを結合する方法と
しては、例えば、核酸塩基の糖部分を過ヨウ素酸
で酸化したのちにキヤリア・プロテインと結合さ
せる等の方法が挙げられる。更に、免疫動物とし
ては、マウス、ラツト等が挙げられる。 次に得られた免疫動物の脾細胞を骨髄腫細胞と
融合し、ハイブリドーマを得る。細胞融合におい
ては、公知のポリエチレングリコールを用いる方
法及びウイルスを用いる方法のいずれを用いても
良いが、ハイブリドーマのスクリーニングに当つ
ては、キヤリア・プロテインに対する抗体産生ハ
イブリドーマを除去するための留意が必要であ
る。このためには、免疫に用いたキヤリア・プロ
テインと異なつた種由来のプロテインとψを結合
させたものを抗原としてスクリーニングする等の
方法を用いることが望ましい。 斯しくして得られるハイブリドーマは、更に遊
離のψ、ウリジン及びウラシルで阻害されるか否
か検討し、ψにより強く阻害され、ウリジン及び
ウラシルで阻害されないか、あるいは極めて弱く
阻害されるものが選ばれ、以下常法によりクロー
ニングして目的の抗体を産生するハイブリドーマ
を得る。 このハイブリドーマにより産生される本発明の
単クローン性抗体は、前記した如き性質を有する
ものである。 叙上の如くして得られた単クローン性抗体を用
いてψを測定する場合の例を挙げれば次の通りで
ある。 すなわち、96ウエルプレートに、ψと牛血清ア
ルブミン（BSA）の結合物を0.2μｇ／穴で添加
したのち、４℃で、12〜24hr放置する。次に各ウ
エルに１％BSAを含むリン酸緩衝生理食塩水
（PBS）を100μずつ添加することにより、抗体
その他のタンパクを非特異的吸着を防止する。次
に試料（尿など）を各ウエルに50μ添加し、さ
らに、本発明の単クローン性抗体（20倍希釈液）
を各ウエルに50μ添加する。よくかくはんした
のちに、４℃で１時間放置する。反応混合物を
PBSでよく洗浄したのちに、アルカリホスフア
ターゼ標識ヤギ抗マウスIgG抗体の1000倍希釈液
を各ウエルに100μずつ添加する。室温で30分
間反応させたのちに、PBSでよく洗い、水分を
切つたのちに基質溶液（パラニトロフエニルフオ
スフエート１mg／ml、PH9.8ジエタノールアミン
バツフアー）を100μずつ加え、37℃で30分間
反応させる。各ウエルの405nｍにおける吸光度
をEIAリーダーで測定することにより試料中に存
在するψ量の定量を行なう。 〔本発明の効果〕 以上のように本発明の単クローン性抗体を用い
れば、試料の前処理をおこなうことなくψの測定
をおこなうことができ、しかもHPLCの如き大が
かりな装置も必要としないので、簡便かつ迅速に
進行癌の有無を判定することができる。また、特
願昭61−143484号記載の単クローン性抗体を用い
るよりも、より特異的なψの定量が可能である。 〔実施例〕 次に実施例を挙げ、本発明を説明する。 実施例 １ (1) 免疫原の調製： 癌患者の尿中から常法により分離したψと、
キヤリアプロテインであるキーホール・リンペ
ツト・ヘモシアニン（Keyhole lympet
hemocyanine；KLH）をエルランガー
（Erlanger）とビーザー（Bieser）の方法（過
ヨウ素酸酸化法）により結合した。すなわちψ
を過ヨウ素酸で酸化し、過剰の過ヨウ素酸をエ
チレングリコールで分解したのち、アルカリ性
（PH９〜9.5）条件下でKLHと結合させ、シツ
フ塩基を形成させる。ついでNaBH4で還元し、
安定化合物を生成させる。この反応混合物を緩
衝液（リン酸緩衝生理食塩水、PH7.4）中で一
晩透析し、未反応のψを除き、このあと凍結乾
燥に付し−20℃の冷凍庫中に保存した。 (2) 単クローン性抗体の作成： () (1)で得たψとKLH結合物を、フロイン
トの完全アジユバント（Freund's Complete
Adjuvant）と等量混合し、エマルジヨンと
したのち、BALB／ｃマウスの腹腔内に一
匹当り50μｇ投与した。２回目以降は不完全
アジユバント（incomplete adjuvant）を用
いたエマルジヨンを、10日間隔で２回腹腔内
に投与した。最終免疫はψ−KLH100μｇ／
ml溶液を0.2ml静脈内投与した。 () 最終免疫の３日後に、過免疫マウスから
摘出した脾細胞（1.3×108個）とBALB／ｃ
マウス由来ミエローマ細胞株SP2／０―
Ag14（1.2×107個）をポリエチレングリコー
ル（PEG）4000を用いて融合した。細胞は
96穴プレートに100μ／穴ずつ加え、24時
間後に培地の半量をハツト（HAT）培地に
交換し２日おきに培地交換した。７〜10日後
にハツト耐性のハイブリドーマの成長がみら
れてくる（288ウエル中、288）。この時期に
培地をHTに変え、約10日間培養したのちに
ハイブリドーマ生育培地に変えた。 () 抗体産生細胞のスクリーニングはψと牛
血清アルブミン（BSA）を結合させたもの
を抗原として用い２抗体エライザ（ELISA）
法により行つた。この方法により、キヤリア
プロテインに対する抗体を産生するハイブリ
ドーマの除外に成功した。次にψによる阻害
がかかるか否かを検討することによりψと特
異的に反応する単クローン性抗体を産生する
ハイブリドーマを選択した。このハイブリド
ーマについて、更にウリジン及びウラシルに
よる阻害がかかるか否かをANTICANCER
RESEARCH6：135−138（1986）、CANCER
RESEARCH46、3164−3167（1986）、
Journal of Immunological Methods.81
（1985）169−185等に開示の方法に準じて検
討し、これらに対する阻害が無いか、あるい
はあつても極めて弱いものを選択した。ここ
で選択された細胞株を限界希釈法によりクロ
ーン化し単クローン性抗体産生ハイブリドー
マクローン（３株）を樹立した。 (3) 単クローン性抗体の性質： ψに対する単クローン性抗体のクラス（サブ
クラス）はIgG1であつた。抗体価は64倍（培
養上清を２段階希釈し、それぞれとψ−BSA
を反応させるELISAを行つた時、最も高い吸
光度の持続する希釈倍率を抗体価とした）であ
つた。また、種々のプリン、ピリミジン、修
飾、非修飾ヌクレオシドおよび塩基類との交叉
反応性を検討したところ、ウリジンとは交叉せ
ず、ウラシルと７％、５−フルオロウラシルと
28％の交叉反応性を示したが他の化合物とは、
交叉反応性を示さなかつた。 実施例 ２ ψの200、100、50、20、10、５、２、１、0.5
（μｇ／ml）溶液をあらかじめψ−BSA0.3μｇ／
穴でコートされた96穴プレートへ50μずつ加
え、実施例１で得られた単クローン性抗体の20倍
希釈液を50μずつ加え、競合阻害実験を行なつ
た。この結果、図１に示すように遊離のψの用量
に依存して抗体とψ−BSAの結合が阻害される
ことが明らかとなつた。本単クローン性抗体を用
いるψの定量範囲は１〜50μｇ／mlであつた。 実施例 ３ 実施例２のψ溶液にかえて試料として、正常人
および癌患者の尿を用い、同様に競合阻害試験を
おこなつた。実施例２の結果から得た検量線を用
い、試料中のψ量を測定した。特願昭61−143484
号に記載されたψに対する単クローン性抗体につ
いても同様の測定を行なうことにより、両単クロ
ー性抗体の比較を行なつたところ、ψ値が（平均
＋２×標準偏差）値を越えた癌患者は新抗体では
５／６、旧抗体では1/6であつた。 この結果を表１に示した。 【表】
は進行癌のマーカーであるシユードウリジンψ
（psedouridine ψ）に対する単クローン性抗体に
関する。 〔従来の技術及びその問題点〕 近年癌関連抗原に対する単クローン性抗体を用
いた臨床検査診断が盛んに実施されてきている。
また、癌になると増加することが知られている物
質である癌胎児性抗原（CEA）、α−フエトプロ
テンなどに対する抗体を用いて同様なことが行わ
れている。 ところで、癌になると増加する物質、すなわち
腫瘍マーカーと呼ばれる物質の中で、進行癌患者
尿中に増加するものとしてシユードウリジンψが
知られている。この物質はトランスフアー・リボ
ヌクレイツクアシド（ｔ‐RNA）の構成成分の
１つであり、その増加の原因は、癌組織における
ｔ−RNAのブレークダウン（breakdown）が正
常組織に比較し、亢進しているためであるといわ
れているが、その増加のメカニズムの詳細につい
ては未解明である。 現在、このシユードウリジンψ（以下「ψ」の
略称することがある）の量を測定し、これから進
行癌の存在を判定する試みがなされているが、ψ
の定量は高速液体クロマトグラフイー（HPLC）
でおこなわれるため、サンプルの前処理等が煩雑
であり、多検体を測定するには非常に長時間を要
するという欠点があつた。 本発明者らは先に、簡敏なψの測定法を開発す
べく、種々検討をおこなつた結果、ψに対する単
クローン性抗体を新たに作成し、これを用いるこ
とにより、尿サンプルの前処理操作を行うことな
くELISA法を応用した多検体同時測定方法を実
施することができ、測定の迅速化、簡素化がはか
れることを見出し特許出願した〔特願昭61−
143484号（特開昭62−299765号）〕。 しかしながら、特願昭61−143484号に記載され
たψに対する単クローン性抗体は、ウリジンと95
〜99％、ウラシルと30〜40％の交叉反応性を有し
ているため、この単クローン性抗体を用いた
ELISAによるψの定量においては、ψのほかに
ウリジンやウラシルも含めて、測定していた可能
性があつた。そのため、進行癌患者においてさえ
もψの高値例が少ないという、これまでのHPLC
による定量のデータと矛盾する結果が得られると
いう欠点があつた。 そこで、本発明者らは更に、ψに対する反応特
異性の高い単クローン性抗体を得べく研究をおこ
なつた結果、遊離のψに対する阻害が強く、ウリ
ジン及びウラシルに対する阻害がないかあるいは
阻害の極めて弱い単クローン性抗体はψに対する
反応特異性が高く、しかもこれをψの測定法に用
いた場合、HPLC等による定量のデータとよく一
致することを見出し、本発明を完成した。 すなわち、本発明は、次の性質 (1) 抗体のクラス：IgG1 (2) 抗体価（培養上清を２段階希釈し、それぞれ
とψ−BSAを反応させるELISAを行なつたと
き、最も高い吸光度を持続する希釈倍率）：64
倍 (3) 交叉反応性：シユードウリジン 100％ ウリジン ０％ ウラシル ７％ ５−フルオロウラシル 2.8％ を有するψに対する単クローン性抗体及びこれを
用いるψの測定法を提供するものである。 本発明のψに対する単クローン性抗体は、例え
ば次の如くして調製される。 すなわち、まず、ψを用いて動物を免疫し、そ
の動物の脾細胞を採取する。この工程において、
ψはそれ単独では免疫原となり得ないので、適当
なキヤリア・プロテイン（Carrier Protein）と
結合させたのち、免疫原として用いる。ψとして
は、例えば進行癌患者の尿中から公知の方法、例
えばシグマ（Sigma）社から販売されている標品
を用いることができ、キヤリア・プロテインとし
ては、ハプテン部分を免疫担当細胞が認識するこ
とを可能にする目的で用いられるプロテイン、例
えばキーホール・リンペツト・ヘモシアニン、牛
血清アルブミン等を用いることができる。また、
このψとキヤリア・プロテインを結合する方法と
しては、例えば、核酸塩基の糖部分を過ヨウ素酸
で酸化したのちにキヤリア・プロテインと結合さ
せる等の方法が挙げられる。更に、免疫動物とし
ては、マウス、ラツト等が挙げられる。 次に得られた免疫動物の脾細胞を骨髄腫細胞と
融合し、ハイブリドーマを得る。細胞融合におい
ては、公知のポリエチレングリコールを用いる方
法及びウイルスを用いる方法のいずれを用いても
良いが、ハイブリドーマのスクリーニングに当つ
ては、キヤリア・プロテインに対する抗体産生ハ
イブリドーマを除去するための留意が必要であ
る。このためには、免疫に用いたキヤリア・プロ
テインと異なつた種由来のプロテインとψを結合
させたものを抗原としてスクリーニングする等の
方法を用いることが望ましい。 斯しくして得られるハイブリドーマは、更に遊
離のψ、ウリジン及びウラシルで阻害されるか否
か検討し、ψにより強く阻害され、ウリジン及び
ウラシルで阻害されないか、あるいは極めて弱く
阻害されるものが選ばれ、以下常法によりクロー
ニングして目的の抗体を産生するハイブリドーマ
を得る。 このハイブリドーマにより産生される本発明の
単クローン性抗体は、前記した如き性質を有する
ものである。 叙上の如くして得られた単クローン性抗体を用
いてψを測定する場合の例を挙げれば次の通りで
ある。 すなわち、96ウエルプレートに、ψと牛血清ア
ルブミン（BSA）の結合物を0.2μｇ／穴で添加
したのち、４℃で、12〜24hr放置する。次に各ウ
エルに１％BSAを含むリン酸緩衝生理食塩水
（PBS）を100μずつ添加することにより、抗体
その他のタンパクを非特異的吸着を防止する。次
に試料（尿など）を各ウエルに50μ添加し、さ
らに、本発明の単クローン性抗体（20倍希釈液）
を各ウエルに50μ添加する。よくかくはんした
のちに、４℃で１時間放置する。反応混合物を
PBSでよく洗浄したのちに、アルカリホスフア
ターゼ標識ヤギ抗マウスIgG抗体の1000倍希釈液
を各ウエルに100μずつ添加する。室温で30分
間反応させたのちに、PBSでよく洗い、水分を
切つたのちに基質溶液（パラニトロフエニルフオ
スフエート１mg／ml、PH9.8ジエタノールアミン
バツフアー）を100μずつ加え、37℃で30分間
反応させる。各ウエルの405nｍにおける吸光度
をEIAリーダーで測定することにより試料中に存
在するψ量の定量を行なう。 〔本発明の効果〕 以上のように本発明の単クローン性抗体を用い
れば、試料の前処理をおこなうことなくψの測定
をおこなうことができ、しかもHPLCの如き大が
かりな装置も必要としないので、簡便かつ迅速に
進行癌の有無を判定することができる。また、特
願昭61−143484号記載の単クローン性抗体を用い
るよりも、より特異的なψの定量が可能である。 〔実施例〕 次に実施例を挙げ、本発明を説明する。 実施例 １ (1) 免疫原の調製： 癌患者の尿中から常法により分離したψと、
キヤリアプロテインであるキーホール・リンペ
ツト・ヘモシアニン（Keyhole lympet
hemocyanine；KLH）をエルランガー
（Erlanger）とビーザー（Bieser）の方法（過
ヨウ素酸酸化法）により結合した。すなわちψ
を過ヨウ素酸で酸化し、過剰の過ヨウ素酸をエ
チレングリコールで分解したのち、アルカリ性
（PH９〜9.5）条件下でKLHと結合させ、シツ
フ塩基を形成させる。ついでNaBH4で還元し、
安定化合物を生成させる。この反応混合物を緩
衝液（リン酸緩衝生理食塩水、PH7.4）中で一
晩透析し、未反応のψを除き、このあと凍結乾
燥に付し−20℃の冷凍庫中に保存した。 (2) 単クローン性抗体の作成： () (1)で得たψとKLH結合物を、フロイン
トの完全アジユバント（Freund's Complete
Adjuvant）と等量混合し、エマルジヨンと
したのち、BALB／ｃマウスの腹腔内に一
匹当り50μｇ投与した。２回目以降は不完全
アジユバント（incomplete adjuvant）を用
いたエマルジヨンを、10日間隔で２回腹腔内
に投与した。最終免疫はψ−KLH100μｇ／
ml溶液を0.2ml静脈内投与した。 () 最終免疫の３日後に、過免疫マウスから
摘出した脾細胞（1.3×108個）とBALB／ｃ
マウス由来ミエローマ細胞株SP2／０―
Ag14（1.2×107個）をポリエチレングリコー
ル（PEG）4000を用いて融合した。細胞は
96穴プレートに100μ／穴ずつ加え、24時
間後に培地の半量をハツト（HAT）培地に
交換し２日おきに培地交換した。７〜10日後
にハツト耐性のハイブリドーマの成長がみら
れてくる（288ウエル中、288）。この時期に
培地をHTに変え、約10日間培養したのちに
ハイブリドーマ生育培地に変えた。 () 抗体産生細胞のスクリーニングはψと牛
血清アルブミン（BSA）を結合させたもの
を抗原として用い２抗体エライザ（ELISA）
法により行つた。この方法により、キヤリア
プロテインに対する抗体を産生するハイブリ
ドーマの除外に成功した。次にψによる阻害
がかかるか否かを検討することによりψと特
異的に反応する単クローン性抗体を産生する
ハイブリドーマを選択した。このハイブリド
ーマについて、更にウリジン及びウラシルに
よる阻害がかかるか否かをANTICANCER
RESEARCH6：135−138（1986）、CANCER
RESEARCH46、3164−3167（1986）、
Journal of Immunological Methods.81
（1985）169−185等に開示の方法に準じて検
討し、これらに対する阻害が無いか、あるい
はあつても極めて弱いものを選択した。ここ
で選択された細胞株を限界希釈法によりクロ
ーン化し単クローン性抗体産生ハイブリドー
マクローン（３株）を樹立した。 (3) 単クローン性抗体の性質： ψに対する単クローン性抗体のクラス（サブ
クラス）はIgG1であつた。抗体価は64倍（培
養上清を２段階希釈し、それぞれとψ−BSA
を反応させるELISAを行つた時、最も高い吸
光度の持続する希釈倍率を抗体価とした）であ
つた。また、種々のプリン、ピリミジン、修
飾、非修飾ヌクレオシドおよび塩基類との交叉
反応性を検討したところ、ウリジンとは交叉せ
ず、ウラシルと７％、５−フルオロウラシルと
28％の交叉反応性を示したが他の化合物とは、
交叉反応性を示さなかつた。 実施例 ２ ψの200、100、50、20、10、５、２、１、0.5
（μｇ／ml）溶液をあらかじめψ−BSA0.3μｇ／
穴でコートされた96穴プレートへ50μずつ加
え、実施例１で得られた単クローン性抗体の20倍
希釈液を50μずつ加え、競合阻害実験を行なつ
た。この結果、図１に示すように遊離のψの用量
に依存して抗体とψ−BSAの結合が阻害される
ことが明らかとなつた。本単クローン性抗体を用
いるψの定量範囲は１〜50μｇ／mlであつた。 実施例 ３ 実施例２のψ溶液にかえて試料として、正常人
および癌患者の尿を用い、同様に競合阻害試験を
おこなつた。実施例２の結果から得た検量線を用
い、試料中のψ量を測定した。特願昭61−143484
号に記載されたψに対する単クローン性抗体につ
いても同様の測定を行なうことにより、両単クロ
ー性抗体の比較を行なつたところ、ψ値が（平均
＋２×標準偏差）値を越えた癌患者は新抗体では
５／６、旧抗体では1/6であつた。 この結果を表１に示した。 【表】
図１は、本発明の単クローン性抗体の、ψに対
する検量線である。
する検量線である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 次の性質、 (1) 抗体のクラス：IgG1 (2) 抗体価（培養上清を２段階希釈し、それぞれ
とシユードウリジンψ−牛血清アルブミン結合
体を反応させるELISAを行なつたとき、最も
高い吸光度を持続する希釈倍率）：64倍 (3) 交叉反応性：シユードウリジン 100％ ウリジン ０％ ウラシル ７％ ５−フルオロウラシル 2.8％ を有するシユードウリジンψに対する単クローン
性抗体。 ２ 被検体に、下に示す性質を有するシユードウ
リジンψに対する単クローン性抗体を加え、生じ
たシユードウリジンψ−単クローン性抗体複合物
量を測定することを特徴とするシユードウリジン
ψの測定法。 (1) 抗体のクラス：IgG1 (2) 抗体価（培養上清を２段階希釈し、それぞれ
とシユードウリジンψ−牛血清アルブミン結合
体を反応させるELISAを行なつたとき、最も
高い吸光度を持続する希釈倍率）：64倍 (3) 交叉反応性：シユードウリジン 100％ ウリジン ０％ ウラシル ７％ ５−フルオロウラシル 2.8％
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62056050A JPS63222699A (ja) | 1987-03-11 | 1987-03-11 | 単クローン性抗体及びこれを用いるシユードウリジンψの測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62056050A JPS63222699A (ja) | 1987-03-11 | 1987-03-11 | 単クローン性抗体及びこれを用いるシユードウリジンψの測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63222699A JPS63222699A (ja) | 1988-09-16 |
| JPH0379995B2 true JPH0379995B2 (ja) | 1991-12-20 |
Family
ID=13016255
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62056050A Granted JPS63222699A (ja) | 1987-03-11 | 1987-03-11 | 単クローン性抗体及びこれを用いるシユードウリジンψの測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63222699A (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1990010708A1 (en) * | 1989-03-09 | 1990-09-20 | The Sendai Institute Of Microbiology | Monoclonal antibody, and assay method, reagent kit, search method and drug missile using said antibody |
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| US20060177883A1 (en) | 2005-02-08 | 2006-08-10 | Saladax Biomedical Inc. | 5-Fluoro-uracil immunoassay |
-
1987
- 1987-03-11 JP JP62056050A patent/JPS63222699A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63222699A (ja) | 1988-09-16 |
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