JPH0380074A - バシラス・チューリンジエンシス変種ドネガニ、鞘翅目類に対して殺虫作用を有するそれから得られる製剤または毒素 - Google Patents
バシラス・チューリンジエンシス変種ドネガニ、鞘翅目類に対して殺虫作用を有するそれから得られる製剤または毒素Info
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- JPH0380074A JPH0380074A JP2204942A JP20494290A JPH0380074A JP H0380074 A JPH0380074 A JP H0380074A JP 2204942 A JP2204942 A JP 2204942A JP 20494290 A JP20494290 A JP 20494290A JP H0380074 A JPH0380074 A JP H0380074A
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- C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
- C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/22—Bacillus
- A01N63/23—B. thuringiensis
-
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は、「変種ドネガニＪ（Ｂｔｄ）ＮＣＩＭＢ
４０１５２、と称されるバシラス・チューリンジエンシ
スそれから得られる鞘翅目類に対する段山作用を有する
製剤または毒素に関する。
４０１５２、と称されるバシラス・チューリンジエンシ
スそれから得られる鞘翅目類に対する段山作用を有する
製剤または毒素に関する。
胞子形成性の杆菌であるバシラス・チューリンジエンシ
ス（Ｂｔ）は胞子形成の段階でタン白質性の副胞子の結
晶を生成し、鱗翅目、双翅目、鞘翅目の目に属する多数
の昆虫に対して殺虫作用を示すことはよく知られている
。かかる結晶はその作用を受は得る毘山によって摂取さ
れると、腸粘膜に不可逆的損傷を生じ、昆虫は食餌を停
止して、死に至ることになる。
ス（Ｂｔ）は胞子形成の段階でタン白質性の副胞子の結
晶を生成し、鱗翅目、双翅目、鞘翅目の目に属する多数
の昆虫に対して殺虫作用を示すことはよく知られている
。かかる結晶はその作用を受は得る毘山によって摂取さ
れると、腸粘膜に不可逆的損傷を生じ、昆虫は食餌を停
止して、死に至ることになる。
生化学的および／または生理学的パラメーターおよびそ
の特つ′〔的／選択的段山作用が万いに異なる多数のＢ
ｔの変種が知られている。これらの変種の幾つかは殺虫
用配合物として市販されている。
の特つ′〔的／選択的段山作用が万いに異なる多数のＢ
ｔの変種が知られている。これらの変種の幾つかは殺虫
用配合物として市販されている。
これまでに知られているＢｔの変種は、その特異的／選
択的作用に基づいて３つの病因菌に分類される。
択的作用に基づいて３つの病因菌に分類される。
病因菌 特異的殺虫剤作用 主要な変種Ａ 鱗翅目
クスノキ Ｂ 双翅目 イスラエレンシスＣ鞘翅目
テネブリオニスサンディエコ 鞘翅目に対して特叉的作用を有する病囚菌Ｃとしては、
当該技術分野では、欧州特許出願ＥＰＯ１４９，１６２
号公報に記載の突種テネブリオニスおよびＩＥＰＯ２０
２，７３９号公報に記載の変種サンディエゴの２つの変
種が知られているだけである。
クスノキ Ｂ 双翅目 イスラエレンシスＣ鞘翅目
テネブリオニスサンディエコ 鞘翅目に対して特叉的作用を有する病囚菌Ｃとしては、
当該技術分野では、欧州特許出願ＥＰＯ１４９，１６２
号公報に記載の突種テネブリオニスおよびＩＥＰＯ２０
２，７３９号公報に記載の変種サンディエゴの２つの変
種が知られているだけである。
本発明
本発明の目的は、Ｂｔ変種、鞘翅目に対して優れた特異
的殺虫作用を有するそれから得られる殺虫性標本または
毒素、その結果史に簡単で、廉価で、史に効果的な製剤
を堤供することである。
的殺虫作用を有するそれから得られる殺虫性標本または
毒素、その結果史に簡単で、廉価で、史に効果的な製剤
を堤供することである。
変種ドネガニ（Ｂ ｔ ｄ、 ） ＮＣＩＭＢ４０１５
２と称される、病因菌Ｃであるバシラス・チューリンジ
エンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｊｎｇｉｅｎ−
ｓｌｓ）の変種、および関連の殺虫性製剤または毒素は
、従来から知られていたＢｔの病囚菌Ｃと比較して有利
であり、被覆型の殺虫作用、製造および農地での適用の
ため、意外にも系統的な殺虫作用を有することが判った
。
２と称される、病因菌Ｃであるバシラス・チューリンジ
エンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｊｎｇｉｅｎ−
ｓｌｓ）の変種、および関連の殺虫性製剤または毒素は
、従来から知られていたＢｔの病囚菌Ｃと比較して有利
であり、被覆型の殺虫作用、製造および農地での適用の
ため、意外にも系統的な殺虫作用を有することが判った
。
それ故、本発明の主題はバシラス・チューリンジエンシ
ス変種ドネガニＮＣＩＭＢ ４０１５２または生物学
的に純粋なその培養物である。
ス変種ドネガニＮＣＩＭＢ ４０１５２または生物学
的に純粋なその培養物である。
本発明のもう一つの主題は、胞子形成とそれに続く胞子
嚢す−シス（Ｉｙｓｉｓ）の後にバシラス・チューリン
ジエンシス変種ドネガニＮＣＩＭＢ４０１５２の培養物
から得られる粘晶性の副胞子（ｐａｒａｓｐｏｒａｌ）
のタン白質毒素である。
嚢す−シス（Ｉｙｓｉｓ）の後にバシラス・チューリン
ジエンシス変種ドネガニＮＣＩＭＢ４０１５２の培養物
から得られる粘晶性の副胞子（ｐａｒａｓｐｏｒａｌ）
のタン白質毒素である。
本発明の更にもう一つの主題は、胞子嚢の胞子形成と引
き続くリーシスの後にバシラス・チュリンジエンシスの
変種ドネガニＮＣＩＭＢ４０１５２の培養物から得られ
る結晶性の副胞子のタン白質毒素を有効成分として含む
殺虫製剤である。
き続くリーシスの後にバシラス・チュリンジエンシスの
変種ドネガニＮＣＩＭＢ４０１５２の培養物から得られ
る結晶性の副胞子のタン白質毒素を有効成分として含む
殺虫製剤である。
本発明の更にもう一つの主題は殺虫製剤であって、有効
成分がＢｔｄ ＮＣＩＭＢ ４０１５２の醗酵およ
び胞子形成によって得られる固形の凍結乾燥した生成物
から構成されるものである。
成分がＢｔｄ ＮＣＩＭＢ ４０１５２の醗酵およ
び胞子形成によって得られる固形の凍結乾燥した生成物
から構成されるものである。
本発明の更にもう一つの主題は、植物、またはその部分
、例えば茎、葉または植物が成長する土壌に、Ｂｔｄ
ＮＣＩＭＢ ４０１５２、それから誘導される製剤
または毒素をそのまま、または＝ ５ ＝ 不活性な固形または波状のビヒクルおよび他の添加剤を
含んで成る適当な組成物として適量を散布することから
成る昆虫、特に鞘翅目の殺虫方法である。
、例えば茎、葉または植物が成長する土壌に、Ｂｔｄ
ＮＣＩＭＢ ４０１５２、それから誘導される製剤
または毒素をそのまま、または＝ ５ ＝ 不活性な固形または波状のビヒクルおよび他の添加剤を
含んで成る適当な組成物として適量を散布することから
成る昆虫、特に鞘翅目の殺虫方法である。
バシラス・チューリンジエンシス変種ドネガニ（Ｂｔｄ
）ＮＣＩＭＢ ４０１５２は、鞘翅目、特に葉の害虫
であるＬｅｐｔｊｎｏｔａｒｓａ ｄａｃｅｒｎＩＩｎ
ａａｔａ（ジャガイモのトリフォラ（Ｄｏｒｉｐｈｏｒ
ａ））のような重要な農耕上の標的に対して特異的な殺
虫作用を有し、それ故エイ・クリーブ（Ａ、Ｋｒｉｅｇ
）らのＺ、 Ａｎｇ、 Ｅｎｔ、、 ９Ｂ （１９８ｇ
） ５００−５０８に記載の「病因菌Ｃ」に属する。
）ＮＣＩＭＢ ４０１５２は、鞘翅目、特に葉の害虫
であるＬｅｐｔｊｎｏｔａｒｓａ ｄａｃｅｒｎＩＩｎ
ａａｔａ（ジャガイモのトリフォラ（Ｄｏｒｉｐｈｏｒ
ａ））のような重要な農耕上の標的に対して特異的な殺
虫作用を有し、それ故エイ・クリーブ（Ａ、Ｋｒｉｅｇ
）らのＺ、 Ａｎｇ、 Ｅｎｔ、、 ９Ｂ （１９８ｇ
） ５００−５０８に記載の「病因菌Ｃ」に属する。
Ｂｔｄ ＮＣＩＭＢ ４０１５２は、生化学的およ
び生理学的特性が冗なる点で既知の変種と叉なり、また
、特に形態学的特性が異なりかつ物理化学的および生理
学的観点から異なる挙動を有する副胞子結晶を生成する
点でテネブリオニスおよびサンディエゴ変種と異なる。
び生理学的特性が冗なる点で既知の変種と叉なり、また
、特に形態学的特性が異なりかつ物理化学的および生理
学的観点から異なる挙動を有する副胞子結晶を生成する
点でテネブリオニスおよびサンディエゴ変種と異なる。
自然死によって死亡したＴｅｎｃｂｒｉｏ ｍ○ｌ ｉ
Ｌｏｒの幼虫からバシラス・チューリンジエンシス変
種ドネガニ（Ｂｔｄ）ＮＣＩＭＢ ４０１５２を単離
し、従来のコードＢＴ／４３で内部で実験室で使用する
ために整理した。
Ｌｏｒの幼虫からバシラス・チューリンジエンシス変
種ドネガニ（Ｂｔｄ）ＮＣＩＭＢ ４０１５２を単離
し、従来のコードＢＴ／４３で内部で実験室で使用する
ために整理した。
単離は、ペニシリンＧＩＯＵ／ ｍｌを加えることによ
って選択的にした栄養寒天（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ａｇａ
ｒ）培地で行った。昆虫の内容物を予め８０℃で１５〜
２０分間処理して胞子形成杆菌を選択的に単離した。こ
の微生物の培養物を、１９８９年５月３１１」にブダペ
スト条約に基づき、ナショナル・コレクション・オブ・
インダストリアル・バクテリア（ザ・ナショナル◆コレ
クション・オブ・インダストリアル・アンド・マリーン
・バクテリア・リミテド、トリ・リサーチ・ステーショ
ン、私書箱３１．１３５アベイ・ロード、アバディーン
ＡＢ、９８ ＤＧ、スコツトランド、英国）に登録し
、アクセス番号ＮＣＩＭＢ ４０１５２を与えられた
。
って選択的にした栄養寒天（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ａｇａ
ｒ）培地で行った。昆虫の内容物を予め８０℃で１５〜
２０分間処理して胞子形成杆菌を選択的に単離した。こ
の微生物の培養物を、１９８９年５月３１１」にブダペ
スト条約に基づき、ナショナル・コレクション・オブ・
インダストリアル・バクテリア（ザ・ナショナル◆コレ
クション・オブ・インダストリアル・アンド・マリーン
・バクテリア・リミテド、トリ・リサーチ・ステーショ
ン、私書箱３１．１３５アベイ・ロード、アバディーン
ＡＢ、９８ ＤＧ、スコツトランド、英国）に登録し
、アクセス番号ＮＣＩＭＢ ４０１５２を与えられた
。
Ｂｔｄ ＮＣＩＭＢ ４０１５２は通常の培地、例
えば栄養寒天培地上で２５〜３０°Ｃで保持することが
でき、当業者に自体公知の手法によって増殖させること
ができる。
えば栄養寒天培地上で２５〜３０°Ｃで保持することが
でき、当業者に自体公知の手法によって増殖させること
ができる。
属および種の決定は、微生物の形態学的および生化学的
特性に基づいて行った。
特性に基づいて行った。
形態
栄養寒天培地上のＢｔｄ ＮＣＩＭＢ４０１５２の単
離されたコロニーは偏平で円形または不規則な形状であ
り、浸蝕されたまたは葉状の縁をしており、白っぽい色
のものである。成長細胞は小さな杆状の形をしており、
ダラム陽性であり、直径が１〜２１Ｊｍであり、長さが
６〜８１Ｊｍである。
離されたコロニーは偏平で円形または不規則な形状であ
り、浸蝕されたまたは葉状の縁をしており、白っぽい色
のものである。成長細胞は小さな杆状の形をしており、
ダラム陽性であり、直径が１〜２１Ｊｍであり、長さが
６〜８１Ｊｍである。
生育温度は２５〜３０℃である。
微生物の培養物をオートクレーブ中で１２１℃で１５分
間処理して、胞子および毒素を不活性化する。
間処理して、胞子および毒素を不活性化する。
胞子の位置は中央または幾分端によっている。
走査型電子顕微鏡で観察した副胞子結晶の形状は正方形
を基とした平行六面体であり、上面と下面に等しいベー
スを有する２個のヒラミツド状のものを有し、大きさは
１〜２１．１ｍであり、したがって、テネブリオニスお
よびサンディエゴ変種によって産生される擬似胞子状結
晶とは穴なり、後者は偏平および長斜方形である。
を基とした平行六面体であり、上面と下面に等しいベー
スを有する２個のヒラミツド状のものを有し、大きさは
１〜２１．１ｍであり、したがって、テネブリオニスお
よびサンディエゴ変種によって産生される擬似胞子状結
晶とは穴なり、後者は偏平および長斜方形である。
生化学的特性
Ｂｔｄ ＮＣＩＭＢ ４０１５２は成長段階では、
表−１に示される生化学的特性を有する。
表−１に示される生化学的特性を有する。
表−１
試験
グルコースの酸性化
マンニトールの酸性化
マンノースの酸性化
サッカロースの酸性化
ラクトースの酸性化
アラビノースの酸性化
キシロースの酸性化
サリシンの酸性化
エスクリンの加水分解
澱粉の加水分解
ゼラチンの加水分解
グルコースからのガスの生成
アルギニンジ−ヒドロラーゼ
反応
表−１（続き）
試験 反応リシンデ
カルボキシラーゼ フェニル−アラニンデアミナーゼ ウレアーゼ カタラーゼ ＋（大豆）レ
シチナーゼ ＋ニトレートレダクター
ゼ ＋ボゲスープロスカウア反応
十キチンでの生育 ７％ＮａＣ１中の生育 ５０℃での生育 ペニシリンＧＩＯＵ／ｍｌ中の生育 十りロラ
ムフェニコールＩＯ１，Ｉｇ／ｍｌ中の生育ストレプト
マイシン２５■／ｍｌ中の生育ナリジキシン酸３０■／
ｍｌ中の生育 リゾチーム５０■／ｍｌ中の生育 ＋（用い
た試験性に関しては、「原核生物（Ｔｈｅ Ｐｒｏｋａ
ｒｙｏｔｅｓ ） Ｊスプリンガー出版（Ｓｐｒ４ｎｇ
ｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ） 、１９８１年； 「一般細菌学
の方０ 法便覧（Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ
ＧｅｎｅｒａＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ） 、ザ・
アメリカン・ソサイエティ・フォー・マイクロバイオロ
ジー、１９８１年を参照されたい）。
カルボキシラーゼ フェニル−アラニンデアミナーゼ ウレアーゼ カタラーゼ ＋（大豆）レ
シチナーゼ ＋ニトレートレダクター
ゼ ＋ボゲスープロスカウア反応
十キチンでの生育 ７％ＮａＣ１中の生育 ５０℃での生育 ペニシリンＧＩＯＵ／ｍｌ中の生育 十りロラ
ムフェニコールＩＯ１，Ｉｇ／ｍｌ中の生育ストレプト
マイシン２５■／ｍｌ中の生育ナリジキシン酸３０■／
ｍｌ中の生育 リゾチーム５０■／ｍｌ中の生育 ＋（用い
た試験性に関しては、「原核生物（Ｔｈｅ Ｐｒｏｋａ
ｒｙｏｔｅｓ ） Ｊスプリンガー出版（Ｓｐｒ４ｎｇ
ｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ） 、１９８１年； 「一般細菌学
の方０ 法便覧（Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ
ＧｅｎｅｒａＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ） 、ザ・
アメリカン・ソサイエティ・フォー・マイクロバイオロ
ジー、１９８１年を参照されたい）。
Ｂｔｄ ４０１５２と従来技術から知られている変種
との相違点は、Ｂｔｄ ４０１５．２の生化学的特性と
Ｂｔの下記の表−２に示されている既知の変種の生化学
的特性を比較することによって推定することができる。
との相違点は、Ｂｔｄ ４０１５．２の生化学的特性と
Ｂｔの下記の表−２に示されている既知の変種の生化学
的特性を比較することによって推定することができる。
表−２
（エイ・クリーブの「原核生物」、スプリンガー出版、
１９８１年１７５０頁；エイ・クリーブ、Ｊ、 Ａｐｐ
＋。
１９８１年１７５０頁；エイ・クリーブ、Ｊ、 Ａｐｐ
＋。
Ｅｎｔ、＋ １０４ （１９８７）、 ４１７−４２４
による）変 種 ＭＡＮ ＳＡＮ
ＳＡＬ ＡＮＴ ＣＩＩＴ ＯＲＥ Ａｌ？Ｇ
チューリンジエンシス ＋ ｖ
−十フニチムス アレスティ −一一＋Ｖ クルスタキ − −＋ ■ ＋フッ
ｌ−−＋ −＋ ｖ デンドロリムス −−−−Ｖ ］１ 表−２（続き） （エイ・クリーブの「原核生物」、スプリンガ出版、１
９８１年１７５０頁：エイ・クリーブ、Ｊ、Ａｐｐｌ。
による）変 種 ＭＡＮ ＳＡＮ
ＳＡＬ ＡＮＴ ＣＩＩＴ ＯＲＥ Ａｌ？Ｇ
チューリンジエンシス ＋ ｖ
−十フニチムス アレスティ −一一＋Ｖ クルスタキ − −＋ ■ ＋フッ
ｌ−−＋ −＋ ｖ デンドロリムス −−−−Ｖ ］１ 表−２（続き） （エイ・クリーブの「原核生物」、スプリンガ出版、１
９８１年１７５０頁：エイ・クリーブ、Ｊ、Ａｐｐｌ。
Ｅｎｔ、、 ＋０４ （１９８７）、 ４１７−４２４
による）変 種 ＭＡＮ ＳＡＮ ＳＡ１
． ＡＮＴ ＣＩＩＴ ＵＩ？ＩＥ ＡＩ？Ｇ
Ｉｆｆケニアエ − −■ ガレリアエ −−■ カナデンシス エントモシダス 十 − アイザワイ −−＋＋＋＋十 モリソニ − ＋ −■トルラオルティ
−１／−＋ ダルムスタディ エンシス − −− トウマノフィ −一一一十 トムプソニ − ＋ Ｖ ＋
＋パキスタニ − ＋（＋）＋（＋）イスラエレ
ンシス十 −一＋ ウハネンシス −− テネブリオニス ＋−−−＋ ２ 表−２（続き） （エイ・クリーブの「原核生物」、スプリンガ出版、１
９８１年１７５０頁、エイ・クリーブ、Ｊ、 Ａｐｐｌ
。
による）変 種 ＭＡＮ ＳＡＮ ＳＡ１
． ＡＮＴ ＣＩＩＴ ＵＩ？ＩＥ ＡＩ？Ｇ
Ｉｆｆケニアエ − −■ ガレリアエ −−■ カナデンシス エントモシダス 十 − アイザワイ −−＋＋＋＋十 モリソニ − ＋ −■トルラオルティ
−１／−＋ ダルムスタディ エンシス − −− トウマノフィ −一一一十 トムプソニ − ＋ Ｖ ＋
＋パキスタニ − ＋（＋）＋（＋）イスラエレ
ンシス十 −一＋ ウハネンシス −− テネブリオニス ＋−−−＋ ２ 表−２（続き） （エイ・クリーブの「原核生物」、スプリンガ出版、１
９８１年１７５０頁、エイ・クリーブ、Ｊ、 Ａｐｐｌ
。
Ｅｎｔ、、 ＋０４ （１９８７）、 ４１７−４２４
による）変種 ＭＡＮ ＳＡＮ ＳＡＬ
ＡＭＴ ＣＩＩＴ ＩＩ牛Ｎ刈 ＬＣＴサンデ
ィエゴ ＋ ＋−−− ＮＣＩＭＢ４０Ｌ５２ − ＋ ＋ ＋表−２
の脚注： ＭＡＮ 、 ＳＡＣ、ＳＡＬ ：マンノース、サッカロ
ースおよびサリシンの酸性化、 ＡＭＩ ：澱粉の加水分解、 ＣＲＴキチン上での生育、 ＵＲＥ ：ウレアーゼ、 ＡＲＧ ：アルギニンジヒドロラーゼ、ＬＯＴ ：レシ
チナーゼ、 ＋：陽性反応、−二陰性反応、（＋）二部性的陽性反応
、■＝可変反応。
による）変種 ＭＡＮ ＳＡＮ ＳＡＬ
ＡＭＴ ＣＩＩＴ ＩＩ牛Ｎ刈 ＬＣＴサンデ
ィエゴ ＋ ＋−−− ＮＣＩＭＢ４０Ｌ５２ − ＋ ＋ ＋表−２
の脚注： ＭＡＮ 、 ＳＡＣ、ＳＡＬ ：マンノース、サッカロ
ースおよびサリシンの酸性化、 ＡＭＩ ：澱粉の加水分解、 ＣＲＴキチン上での生育、 ＵＲＥ ：ウレアーゼ、 ＡＲＧ ：アルギニンジヒドロラーゼ、ＬＯＴ ：レシ
チナーゼ、 ＋：陽性反応、−二陰性反応、（＋）二部性的陽性反応
、■＝可変反応。
培養物に関する特性および有効成分の分離法バシラス・
チューリンジエンシス変種ドネガニＮＣＩＭＢ’ ４０
１５２は、通１：’；の酸体培地、３ 例えば栄養ブロスで、２５〜３０℃で、当業者に知られ
ている技法によって培養することができる。
チューリンジエンシス変種ドネガニＮＣＩＭＢ’ ４０
１５２は、通１：’；の酸体培地、３ 例えば栄養ブロスで、２５〜３０℃で、当業者に知られ
ている技法によって培養することができる。
醗酵と胞子形成過程が終了したならば、醗酵液を遠心分
離することによってバイオマスを分離することができる
。
離することによってバイオマスを分離することができる
。
こうして分離したバイオマスを次に蒸発または凍結乾燥
させて、殺虫作用を有する粉末状の固形生成物を得るこ
とができる。
させて、殺虫作用を有する粉末状の固形生成物を得るこ
とができる。
Ｂｔｄ ＮＣＩＭＢ ４０１５２の殺虫作用は実質
的にタン白質性の副胞子の結晶性毒素によるものであり
、これはＢｔ変種テネブリオニスおよび変種サンディエ
イによって産生される毒素とは異なり、中性ｐＨ値で水
溶性である。
的にタン白質性の副胞子の結晶性毒素によるものであり
、これはＢｔ変種テネブリオニスおよび変種サンディエ
イによって産生される毒素とは異なり、中性ｐＨ値で水
溶性である。
それ放、このような毒素は、胞子形成の後に醗酵液から
遠心分離によって分離したバイオマスを中性ｐＨ値で水
に再度懸濁して、こうして得られた懸濁液を室温で１〜
１２ｎ：；間保持することによって分離することができ
る。
遠心分離によって分離したバイオマスを中性ｐＨ値で水
に再度懸濁して、こうして得られた懸濁液を室温で１〜
１２ｎ：；間保持することによって分離することができ
る。
水性懸濁酸を引き続き遠心分離または濾過した後、胞子
および醗酵残渣を含まない水性溶戚４ であって実質的にタン白質性毒素を含むものを回収する
ことができ、これは例えば凍結乾燥のような周知の手法
によって溶成から回収することができる。
および醗酵残渣を含まない水性溶戚４ であって実質的にタン白質性毒素を含むものを回収する
ことができ、これは例えば凍結乾燥のような周知の手法
によって溶成から回収することができる。
レムリ（Ｌａｅｍｌｌｌｊ）の方法（Ｎａｔｕｒｅ、
２２７．６８０１９７０）による、ポリアクリルアミド
ゲル上でのＳＤＳ電気派動で毒素の分子量を決定すると
、２つの主要なバンドの群が現れる。
２２７．６８０１９７０）による、ポリアクリルアミド
ゲル上でのＳＤＳ電気派動で毒素の分子量を決定すると
、２つの主要なバンドの群が現れる。
＊３つのバンドの第一の群は、分子量が６４．ＤＯｆｌ
〜７２．０００の範囲内である。
〜７２．０００の範囲内である。
＊２つのバンドの第二の群は、分子量が３４，０００〜
３［ｉ、０００の範囲内である。
３［ｉ、０００の範囲内である。
生物活性
Ｂｔｄ ＮＣＩＭＢ ４０１５２、それから得られ
る製剤または毒素は、ＬｅｐｔｉｎｏＬａｒｓａｄｅｃ
ｅｍｌｊｎｅａｔａのような鞘翅目に対して被覆型であ
って全身型の殺虫作用を示す。
る製剤または毒素は、ＬｅｐｔｉｎｏＬａｒｓａｄｅｃ
ｅｍｌｊｎｅａｔａのような鞘翅目に対して被覆型であ
って全身型の殺虫作用を示す。
これに対し、５ｐｏｄｏｐｔｅｒａ １ｊｔｔｏｒａｌ
ｉｓやＥｐｈｃｓｔｉａ ｋｕｃｈｒ４ｃｌｌａのよう
な鱗翅目及びＡｃｄｃｓ ａｃｇｙｐｔｔのような双翅
１］では、毒性作用５ か見られなかった。
ｉｓやＥｐｈｃｓｔｉａ ｋｕｃｈｒ４ｃｌｌａのよう
な鱗翅目及びＡｃｄｃｓ ａｃｇｙｐｔｔのような双翅
１］では、毒性作用５ か見られなかった。
鞘翅目の幼虫に対する有効成分の作用態様は、Ｂｔｒ病
因菌Ａ」に基づいた製剤の場合に過失において観察され
たのと同じであり、処置後数時間で幼虫は食餌を停止し
、２４〜４８時間後に死亡する。昆虫の腸の上皮に毒素
が作用して、不可逆的な損傷を与えることによって死亡
する。
因菌Ａ」に基づいた製剤の場合に過失において観察され
たのと同じであり、処置後数時間で幼虫は食餌を停止し
、２４〜４８時間後に死亡する。昆虫の腸の上皮に毒素
が作用して、不可逆的な損傷を与えることによって死亡
する。
Ｂｔｄ ＮＣＩＭＢ ４０１５２、その醗酵および
胞子形成から得られる凍結乾燥した固形生成物および副
胞子タン白質性毒素そのものまたは適当な組成物として
のものは、農業作物に感染する鞘翅目を殺虫するのに有
用である。
胞子形成から得られる凍結乾燥した固形生成物および副
胞子タン白質性毒素そのものまたは適当な組成物として
のものは、農業作物に感染する鞘翅目を殺虫するのに有
用である。
この為には、分離した毒素を用いるのが好ましい。
既知のＢｔの変種、特に「病因菌Ｃ」の変種、テネブリ
オニスおよびサンディエゴから得られる毒素と比較して
、本発明のＢｔｄ ＮＣＩＭＢ４０１５２に由来する毒素はその回収、応用
およびその殺虫作用に関して経済的工業的レベルで極め
て有利である。
オニスおよびサンディエゴから得られる毒素と比較して
、本発明のＢｔｄ ＮＣＩＭＢ４０１５２に由来する毒素はその回収、応用
およびその殺虫作用に関して経済的工業的レベルで極め
て有利である。
５
利点には、例えば次のようなものがある。
＊培地からの毒素の分離が、この毒素が水溶性であるた
め簡単且つ容易であり、したがって、この毒素は胞子、
細胞および醗酵残渣を含まない濃縮された形態で得るこ
とができる。
め簡単且つ容易であり、したがって、この毒素は胞子、
細胞および醗酵残渣を含まない濃縮された形態で得るこ
とができる。
＊先行技術から知られている毒素の懸濁ｌ＆または分散
液とは異なり、この毒素の濃縮された水性溶液は沈澱を
起こさず、より容易に保管したり輸送することができる
。
液とは異なり、この毒素の濃縮された水性溶液は沈澱を
起こさず、より容易に保管したり輸送することができる
。
＊この毒素は、配合物に用いられる通常の有機溶媒と不
混和性であるため固形状で分散して適用される類似の毒
素に比べて容易かつ効果的にその溶成から適用すること
ができる。
混和性であるため固形状で分散して適用される類似の毒
素に比べて容易かつ効果的にその溶成から適用すること
ができる。
更に、本発明者は、Ｂｔｄ ＮＣＩＭＢ４０１５２に
由来の毒素は、被覆型の殺虫作用を有する外に、Ｂｔの
他の変種によって産生される毒素とは具なり、全身性の
殺虫作用を示すことを意外にも且つ有利に見い出した。
由来の毒素は、被覆型の殺虫作用を有する外に、Ｂｔの
他の変種によって産生される毒素とは具なり、全身性の
殺虫作用を示すことを意外にも且つ有利に見い出した。
かかる全身性作用は、本質的には右動成分か適応地点か
ら極めて遠く離れた植物の部分に移７ 行して、植物を広く保護し、用いる有効成分の量を少な
くすることができ、特に本発明の毒素は植物の根の器官
を介して移動する。
ら極めて遠く離れた植物の部分に移７ 行して、植物を広く保護し、用いる有効成分の量を少な
くすることができ、特に本発明の毒素は植物の根の器官
を介して移動する。
更に、毒素は植物の循環系に浸透して、これを破壊した
りまたは洗い落としてしまうことがある外部薬剤から更
に保護されるので、更に長期間効果を有することができ
る。
りまたは洗い落としてしまうことがある外部薬剤から更
に保護されるので、更に長期間効果を有することができ
る。
毒素の全身性作用は、成長段階にあり且つ若い芽を昆虫
に提供し、処理日後に成長する植物を処理するときに一
層有利である。
に提供し、処理日後に成長する植物を処理するときに一
層有利である。
更に、毒素は全身性作用によって予防処理における効率
が更に高くなり、植物生育サイクル中の反復処理の必要
性が減少する。
が更に高くなり、植物生育サイクル中の反復処理の必要
性が減少する。
バシラス・チューリンジエンシス変種ドネガニＮＣＩＭ
Ｂ ４０１５２、その醗酵および胞子形成から得られ
る生成物、およびその副胞子毒素は、肢状または固形状
の不活性ビヒクルおよび配合助剤および／または添加剤
、例えば湿潤剤、定着剤、界面活性剤、紫外線安定剤お
よび更に他の殺虫組成物に一般に用いられる添加 １８ 剤を用いることによってａｊＩ？Ｉ液体、／！１１！潤
性粉末として配合することができる。
Ｂ ４０１５２、その醗酵および胞子形成から得られ
る生成物、およびその副胞子毒素は、肢状または固形状
の不活性ビヒクルおよび配合助剤および／または添加剤
、例えば湿潤剤、定着剤、界面活性剤、紫外線安定剤お
よび更に他の殺虫組成物に一般に用いられる添加 １８ 剤を用いることによってａｊＩ？Ｉ液体、／！１１！潤
性粉末として配合することができる。
農業に実際に用いるためには、Ｂｔｄ
ＮＣＩＭＢ４０１５２から誘導される毒素についての投
与量は０．０５〜４に＋＜／ヘククールの範囲内である
のが好適であり、好ましくは０．２〜２ｋｇ／ヘククー
ルの範囲内である。
与量は０．０５〜４に＋＜／ヘククールの範囲内である
のが好適であり、好ましくは０．２〜２ｋｇ／ヘククー
ルの範囲内である。
幾つかの実施例を下記に示して本発明を説明する。
実施例１
容量が５００ ｍｌであって、トリプトンソイブロス（
ＯＸＯＩＤ）から成る培地１００ ｍｌを含む三角フラ
スコ中で、栄養ブロスを培地としてのバシラス・チュー
リンジエンシスＮＣＩＭＢ４０１５２の１６ＩＩＦｊ間
培養物のＩ ｍｌを接種した。
ＯＸＯＩＤ）から成る培地１００ ｍｌを含む三角フラ
スコ中で、栄養ブロスを培地としてのバシラス・チュー
リンジエンシスＮＣＩＭＢ４０１５２の１６ＩＩＦｊ間
培養物のＩ ｍｌを接種した。
三角フラスコを、２５〜３５℃の温度で軌道撹拌を行う
。胞子形成を顕微鏡で観察する。醗酵が終了したら、バ
イオマスを遠心分離して、ｐＨ７の水に再度懸濁し、室
温で３時間撹拌を行う。
。胞子形成を顕微鏡で観察する。醗酵が終了したら、バ
イオマスを遠心分離して、ｐＨ７の水に再度懸濁し、室
温で３時間撹拌を行う。
胞子と醗酵残渣を遠心分離によって分離した後１つ
に得られる溶液を凍結乾燥し、生物活性の測定または配
合物の作成に用いる。
合物の作成に用いる。
実施例２
実施例１によって得られ実質的に副胞子タン白質性毒素
によって構成される凍結乾燥した製剤の殺虫作用を、こ
の製剤を各種の濃度の水性溶液として用いて測定した。
によって構成される凍結乾燥した製剤の殺虫作用を、こ
の製剤を各種の濃度の水性溶液として用いて測定した。
用いた昆虫による活性試験の実施法を下記に詳細に説明
する。
する。
ＬＥＰＴＩＮＯＴＡＲ３Ａ ＤＥＣＥＭＬＩＮＥＡＴＡ
被覆作用 第二期（ｓｅｃｏｎｄ−ａｇｅ）幼虫に、実施例１に開
示した凍結乾燥毒素の水性液に浸漬することによって処
理した若いジャガイモの植物体を与える。
被覆作用 第二期（ｓｅｃｏｎｄ−ａｇｅ）幼虫に、実施例１に開
示した凍結乾燥毒素の水性液に浸漬することによって処
理した若いジャガイモの植物体を与える。
観察時の環境条件は次の通りである。
＊温度 ２５℃±１℃＊相対湿度
６０％±２％感染後４８時間後に、
死亡率の最終測定を行い、結果を表−３に示す。
６０％±２％感染後４８時間後に、
死亡率の最終測定を行い、結果を表−３に示す。
２０
全身性作用
昆虫の第三期幼虫に、実施例１て作成した凍結乾燥毒素
を２００ ｐｐｍの濃度で溶解して含む水性栽培物にお
いて、それぞれ１２時間および２４時間保持した若いジ
ャガイモ殖物体を与える。
を２００ ｐｐｍの濃度で溶解して含む水性栽培物にお
いて、それぞれ１２時間および２４時間保持した若いジ
ャガイモ殖物体を与える。
幼虫を、２５℃および相対湿度６０％に条件設定した環
境に４８時間保持したところ、いずれの試験でも死亡率
は１００％となった。
境に４８時間保持したところ、いずれの試験でも死亡率
は１００％となった。
第三期幼虫を、温度２５℃±１℃、相対湿度６５％±２
％の調節された条件下で、実施例１の凍結乾燥製品を予
め添加しておいたホワイトミル中で生育させる。
％の調節された条件下で、実施例１の凍結乾燥製品を予
め添加しておいたホワイトミル中で生育させる。
インフエステーションから１４ｎ後に死亡率を１１Ｊ定
し、結果を表−３に示す。
し、結果を表−３に示す。
ＡＥＤＥＳ ＡＥＧＹＰＴＩ
作用
第三期幼虫を実施例１の凍結乾燥製剤を含む蒸留水に移
す。幼虫を２５℃±１℃、相対湿度６０１ ％の調節された条件下に保持し、毎日給餌する。
す。幼虫を２５℃±１℃、相対湿度６０１ ％の調節された条件下に保持し、毎日給餌する。
表−３に示す死亡率は、処理から５日後に測定したもの
である。
である。
５ＰＯＤＯＰＴＥＲＡ ＬＩＴＴＯＩ？ＡＬＩＳ被覆
作用 第二期の幼虫に、実施例１に開示した凍結乾燥毒素の水
性液に浸漬することによって処理したタバコの葉を与え
る。
作用 第二期の幼虫に、実施例１に開示した凍結乾燥毒素の水
性液に浸漬することによって処理したタバコの葉を与え
る。
観察期間中の環境条件は次の通りである。
＊温度 ２５℃±１℃＊相対湿度
６０％±２％死亡率の測定は、感染
から５日後に行い、結果を表−３に示す。
６０％±２％死亡率の測定は、感染
から５日後に行い、結果を表−３に示す。
２
表−３
鞘翅目
鱗翅類
双翅類
ＬｅｐＬｉｎｏｔａｒｓａ
ｄｅｃｅｍｌｉｎｅａｔａ
Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒ
Ｔｒ４ｂｏ口ｕｍ ｃｏｎｆ’ｕｓｕｍＥｐｈｅｓｔｌ
ａ ｋｕｅｈｎｊｅｌｌａ３ｐｏｄｏｌ）ｔｅｒａ １ｉｔｔＯｒａｌｌｓ Ａｅｄｃｓ ａｏｇｙｐｔ＋ ００ １．０００ １．０００ １．０００ １００％ １００％ 」００％ ０％
ａ ｋｕｅｈｎｊｅｌｌａ３ｐｏｄｏｌ）ｔｅｒａ １ｉｔｔＯｒａｌｌｓ Ａｅｄｃｓ ａｏｇｙｐｔ＋ ００ １．０００ １．０００ １．０００ １００％ １００％ 」００％ ０％
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、バシラス・チューリンジエンシス変種ドネガニＮＣ
ＩＭＢ４０１５２またはその生物学的に純粋な培養物。 ２、胞子嚢の胞子形成および連続するリーシスの後にバ
シラス・チューリンジエンシス変種ドネガニＮＣＩＭＢ
４０１５２の培養物から得られる結晶性の副胞子タン白
質毒素。 ３、胞子嚢の胞子形成および連続するリーシスの後にバ
シラス・チューリンジエンシス変種ドネガニＮＣＩＭＢ
４０１５２の培養物から得られる結晶性の副胞子タン白
質毒素を有効成分として含む殺虫製剤。 ４、有効成分が、バシラス・チューリンジエンシス変種
ドネガニＮＣＩＭＢ４０１５２の醗酵および胞子形成か
ら得られる凍結乾燥された固形生成物によって構成され
ていることを特徴とする殺虫製剤。 ５、植物、またはその部分、例えば茎、葉または植物が
成長する土壌に、バシラス・チューリンジエンシス変種
ドネガニＮＣＩＭＢ４０１５２、それから得られる製剤
または毒素をそのまま、または不活性な固形または液状
のビヒクルおよび他の添加剤を含んで成る適当な組成物
として適量を散布することから成る殺虫方法。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT21412A/89 | 1989-08-01 | ||
| IT8921412A IT1231766B (it) | 1989-08-01 | 1989-08-01 | Bacillus thuringiensis var. donegani, preparato o tossina da esso ottenuta aventi attivita' insetticida contro i coleotteri. |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0380074A true JPH0380074A (ja) | 1991-04-04 |
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ID=11181378
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2204942A Pending JPH0380074A (ja) | 1989-08-01 | 1990-08-01 | バシラス・チューリンジエンシス変種ドネガニ、鞘翅目類に対して殺虫作用を有するそれから得られる製剤または毒素 |
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| Country | Link |
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| EP (1) | EP0411582B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0380074A (ja) |
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| DK (1) | DK0411582T3 (ja) |
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| DE69227911T2 (de) * | 1991-08-02 | 1999-05-12 | Kubota Corp., Tokio/Tokyo | Neuer mikroorganismus und insektizid |
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| RU2434939C1 (ru) * | 2010-08-23 | 2011-11-27 | Сергей Ананьевич Тюрин | Штамм бактерий bacillus thuringiensis биос-1, обладающий инсектоакарицидной активностью |
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| US4865981A (en) * | 1985-08-16 | 1989-09-12 | Mycogen Corporation | Cloning and expression of Bacillus Thuringiensis toxin gene toxic to bettles of the order coleoptera |
| US4771131A (en) * | 1985-08-16 | 1988-09-13 | Mycogen Corporation | Cloning and expression of Bacillus thuringiensis toxin gene encoding a protein toxic to beetles of the order Coleoptera |
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