JPH04103597A - ８―ヒドロキシアデノシン―５′―リン酸を含むアデノシンモノホスフェート系三量体、その製造方法及びその化合物からなる蛋白質合成阻害剤 - Google Patents
８―ヒドロキシアデノシン―５′―リン酸を含むアデノシンモノホスフェート系三量体、その製造方法及びその化合物からなる蛋白質合成阻害剤Info
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
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- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は８−ヒドロキシアデノシン−５′−リン酸を含
む新規なアデノシンモノホスフェート系三量体、その製
造方法及びその化合物よりなる蛋白質合成阻害剤に関す
る。
む新規なアデノシンモノホスフェート系三量体、その製
造方法及びその化合物よりなる蛋白質合成阻害剤に関す
る。
〔従来の技術及び
発明が解決しようとする課題］
インターフェロンがウィルス増殖阻害作用を有すること
は広く知られているが、この作用は初期の生細胞系での
研究において、ｍＲＮＡの翻訳段階で起こることが示唆
されていた。その後、インターフェロン処理細胞抽出液
に二重鎖ＲＮＡ （ｄｓＲＮＡ）を加えると、ＡＴＰ依
存性のｍＲＮＡ分解（ｍＲＮＡ翻訳阻害）が起こるとと
もに、ＡＴＰの存在に依存して低分子量の蛋白質合成阻
害物質が生成することが見出された。更にその後の研究
により、この蛋白質合成阻害物質はインターフェロン処
理によって細胞内で誘起された２−５Ａ依存性酵素によ
って生合成されたもので、２′５′結合をもつオリゴア
デニル酸の混合物であることが判明し、２−５Ａと命名
された。
は広く知られているが、この作用は初期の生細胞系での
研究において、ｍＲＮＡの翻訳段階で起こることが示唆
されていた。その後、インターフェロン処理細胞抽出液
に二重鎖ＲＮＡ （ｄｓＲＮＡ）を加えると、ＡＴＰ依
存性のｍＲＮＡ分解（ｍＲＮＡ翻訳阻害）が起こるとと
もに、ＡＴＰの存在に依存して低分子量の蛋白質合成阻
害物質が生成することが見出された。更にその後の研究
により、この蛋白質合成阻害物質はインターフェロン処
理によって細胞内で誘起された２−５Ａ依存性酵素によ
って生合成されたもので、２′５′結合をもつオリゴア
デニル酸の混合物であることが判明し、２−５Ａと命名
された。
このインターフェロン処理によって２−５Ａが生成し、
蛋白質の合成を阻害する過程においては、まずインター
フェロン処理により不活性な２−５Ａ合成酵素が誘起さ
れ、この酵素がｄｓＲＮＡの存在下で活性化され、ＡＴ
Ｐに依存した２−５Ａが合成される。この２−５Ａが不
活性なエンドリボヌクレアーゼ（ＲＮａ ｓ ｅ ａ
Ｌ）を活性化し、ｍＲＮＡを分解することにより結果的
にタンパク質の合成が阻害される。
蛋白質の合成を阻害する過程においては、まずインター
フェロン処理により不活性な２−５Ａ合成酵素が誘起さ
れ、この酵素がｄｓＲＮＡの存在下で活性化され、ＡＴ
Ｐに依存した２−５Ａが合成される。この２−５Ａが不
活性なエンドリボヌクレアーゼ（ＲＮａ ｓ ｅ ａ
Ｌ）を活性化し、ｍＲＮＡを分解することにより結果的
にタンパク質の合成が阻害される。
この２−５Ａは細胞内できわめて不安定な物質である。
これは２−５Ａが分解酵素である２′ＰＤＥａ ｓ ｅ
によって速やかに分解されてしまい、たとえば、三量体
三リン酸（ｐｐｐ５’Ａ２’ｐ５’Ａ２’ｐ５’Ａ）の
場合、マウスＬ細胞無細胞系での半減期はわずか１５分
程度であり、ＲＮａｓｅＬに対する充分な活性作用が発
揮されないうちに分解されてしまうという問題があった
。このため２ ’−ＰＤＥａ ｓ ｅに対する抵抗性を
増大させるための多くの研究が行われている。一方、２
−５Ａ類憤化合物であるアデノシンモノリン酸三量体は
、２’ ＰＤＥａｓｅに対する抵抗性は高いが、ＲＮ
ａｓｅＬに対する結合能力が充分でなく、この結果、蛋
白質合成阻害能力が三すン酸三量体に比べて劣るという
問題があった。
によって速やかに分解されてしまい、たとえば、三量体
三リン酸（ｐｐｐ５’Ａ２’ｐ５’Ａ２’ｐ５’Ａ）の
場合、マウスＬ細胞無細胞系での半減期はわずか１５分
程度であり、ＲＮａｓｅＬに対する充分な活性作用が発
揮されないうちに分解されてしまうという問題があった
。このため２ ’−ＰＤＥａ ｓ ｅに対する抵抗性を
増大させるための多くの研究が行われている。一方、２
−５Ａ類憤化合物であるアデノシンモノリン酸三量体は
、２’ ＰＤＥａｓｅに対する抵抗性は高いが、ＲＮ
ａｓｅＬに対する結合能力が充分でなく、この結果、蛋
白質合成阻害能力が三すン酸三量体に比べて劣るという
問題があった。
本発明者等は上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、
８−ヒドロキシアデノシン−５′−リン酸を含むアデノ
シンモノホスフェート系三量体が、モノリン酸系三量体
でありなから三すン酸三量体と同等の蛋白質剛性阻害能
力を有し、しかも２′−ＰＤＥａ ｓ ｅに対する抵抗
性が高いことを見出し本発明を完成するに至った。
８−ヒドロキシアデノシン−５′−リン酸を含むアデノ
シンモノホスフェート系三量体が、モノリン酸系三量体
でありなから三すン酸三量体と同等の蛋白質剛性阻害能
力を有し、しかも２′−ＰＤＥａ ｓ ｅに対する抵抗
性が高いことを見出し本発明を完成するに至った。
〔課題を解決するための手段］
本発明の８−ヒドロキシアデノシン−５′−リン酸を含
むアデノシンモノホスフェート系三量体の一つは、−船
人（ａ） で示される、８−ヒドロキシアデニル−（２′５’）−
８−ヒドロキシアデニル−（２’−５’）８−ヒドロキ
シアデノシン−５７−モノホスフェートである。また本
発明の８−ヒドロキシアデノシン−５′−リン酸を含む
アデノシンモノホスフェート系三量体のいま一つは、−
船人（ｂ）で示される、アデニル−（２’ −５’ ）
−７テ＝ルー（２’−５１−８−ヒドロキシアデノシ
ン５′−モノホスフェートである。
むアデノシンモノホスフェート系三量体の一つは、−船
人（ａ） で示される、８−ヒドロキシアデニル−（２′５’）−
８−ヒドロキシアデニル−（２’−５’）８−ヒドロキ
シアデノシン−５７−モノホスフェートである。また本
発明の８−ヒドロキシアデノシン−５′−リン酸を含む
アデノシンモノホスフェート系三量体のいま一つは、−
船人（ｂ）で示される、アデニル−（２’ −５’ ）
−７テ＝ルー（２’−５１−８−ヒドロキシアデノシ
ン５′−モノホスフェートである。
また本発明は下記式（Ｃ）、
で示される８−ヒドロキシアデノシン−５′−モノホス
フェートを、トリフェニルホスフィン及びジピリジルジ
スルフィドの存在下にイミダゾールと反応せしめて、下
記式（ｄ）、 で示されるアデニル−（２’−５’）−アデノシン−５
′−モノホスフェートを、トリフェニルホスフィン及び
ジピリジルジスルフィドの存在下にホルホリンと反応せ
しめて、下記式（ｆ）、で示される８−ヒドロキシアデ
ノシン−５゛−ホスホロイミダゾリテートを得、次いで
この８−ヒドロキシアデノシン−５′−ホスホロイミダ
ゾリテートを、ｐＨ＝６．８〜７．０の緩衝液中で酢酸
ウラニル触媒の存在下に三量体化し、加水分解すること
により上記（ａ）で示される８−ヒドロキシアデノシン
−５′−リン酸を含むアデノシンモノホスフェート系三
量体を製造する方法を要旨とする。まで示されるアデニ
ル−（２’−５’）−アデノシンーホスホロモルホリテ
ートを得、次いでこのアデニル−（２’−５’）−アデ
ノシンーホスホロモルホリテートと、−船人（ｄ） で示されるホスホロイミダゾリテート誘導体とを、ｐＨ
＝６．６〜６．８の緩衝液中で酢酸ウラニル触媒の存在
下に三量体化し、次いで加水分解することにより一般式
（ｂ）で示される８−ヒドロキシアデノシ７：−５’−
リン酸を含むアデノシンモノホスフェート系二量体を製
造する方法を要旨とする。
フェートを、トリフェニルホスフィン及びジピリジルジ
スルフィドの存在下にイミダゾールと反応せしめて、下
記式（ｄ）、 で示されるアデニル−（２’−５’）−アデノシン−５
′−モノホスフェートを、トリフェニルホスフィン及び
ジピリジルジスルフィドの存在下にホルホリンと反応せ
しめて、下記式（ｆ）、で示される８−ヒドロキシアデ
ノシン−５゛−ホスホロイミダゾリテートを得、次いで
この８−ヒドロキシアデノシン−５′−ホスホロイミダ
ゾリテートを、ｐＨ＝６．８〜７．０の緩衝液中で酢酸
ウラニル触媒の存在下に三量体化し、加水分解すること
により上記（ａ）で示される８−ヒドロキシアデノシン
−５′−リン酸を含むアデノシンモノホスフェート系三
量体を製造する方法を要旨とする。まで示されるアデニ
ル−（２’−５’）−アデノシンーホスホロモルホリテ
ートを得、次いでこのアデニル−（２’−５’）−アデ
ノシンーホスホロモルホリテートと、−船人（ｄ） で示されるホスホロイミダゾリテート誘導体とを、ｐＨ
＝６．６〜６．８の緩衝液中で酢酸ウラニル触媒の存在
下に三量体化し、次いで加水分解することにより一般式
（ｂ）で示される８−ヒドロキシアデノシ７：−５’−
リン酸を含むアデノシンモノホスフェート系二量体を製
造する方法を要旨とする。
更に本発明は、下記式（ａ）
２′位の水酸基と結合して二量体が形成される。
次いでこの二量体は加水分解され、フリーのホスホロイ
ミダゾリテート基部分がホスフェートとなり本発明の化
合物（ａ）が得られる。また上記式（ｂ）で示される化
合物を得る本発明製造方法において、式（ｅ）で示され
るアデニル−（２’−５’）−アデノシン−５′−モノ
ホスフェートは、下記式で示されるアデノシンモノホス
フェート で示される８−ヒドロキシアデノシン−５′−リン酸を
含むアデノシンモノホスフェート系二量体よりなる蛋白
質合成阻害剤を要旨とする。
ミダゾリテート基部分がホスフェートとなり本発明の化
合物（ａ）が得られる。また上記式（ｂ）で示される化
合物を得る本発明製造方法において、式（ｅ）で示され
るアデニル−（２’−５’）−アデノシン−５′−モノ
ホスフェートは、下記式で示されるアデノシンモノホス
フェート で示される８−ヒドロキシアデノシン−５′−リン酸を
含むアデノシンモノホスフェート系二量体よりなる蛋白
質合成阻害剤を要旨とする。
上記式（ａ）で示される化合物を得る本発明製造方法に
おいて、式（Ｃ）で示される化合物から式（ｄ）で示さ
れる化合物を得、この化合物（ｄ）を緩衝液中で酢酸ウ
ラニル触媒の存在下に反応させると、化合物（ｄ）のホ
スホロイミダゾリテート基が、別の分子のをトリフェニ
ルホスフィン及びジピリジルジスルフィドの存在下でイ
ミダゾールと反応せしめて下で示されるアデノシン−５
′−ホスホロイミダゾリテートを得、このアデノシン−
５′−ホスホロイミダゾリテートをｐＨ＝６．８〜７．
０の緩衝液中で酢酸ウラニル触媒の存在下に反応させる
ことにより得られる。この際酢酸ウラニル触媒／アデノ
シン−５′−ホスホロイミダゾリテートがモル比で１〜
１００となるようにすると二量体や四量体の副生が抑え
られて二量体である（ｅ）で示される化合物が得られる
。
おいて、式（Ｃ）で示される化合物から式（ｄ）で示さ
れる化合物を得、この化合物（ｄ）を緩衝液中で酢酸ウ
ラニル触媒の存在下に反応させると、化合物（ｄ）のホ
スホロイミダゾリテート基が、別の分子のをトリフェニ
ルホスフィン及びジピリジルジスルフィドの存在下でイ
ミダゾールと反応せしめて下で示されるアデノシン−５
′−ホスホロイミダゾリテートを得、このアデノシン−
５′−ホスホロイミダゾリテートをｐＨ＝６．８〜７．
０の緩衝液中で酢酸ウラニル触媒の存在下に反応させる
ことにより得られる。この際酢酸ウラニル触媒／アデノ
シン−５′−ホスホロイミダゾリテートがモル比で１〜
１００となるようにすると二量体や四量体の副生が抑え
られて二量体である（ｅ）で示される化合物が得られる
。
上記化合物（ｅ）から得られる式げ）で示される化合物
と、上記式（ｄ）で示される化合物とを緩衝液中で反応
した後、加水分解することにより本発明化合物（ｂ）を
得ることができる。
と、上記式（ｄ）で示される化合物とを緩衝液中で反応
した後、加水分解することにより本発明化合物（ｂ）を
得ることができる。
化合物（ｄ）と化合物（ｆ）とを反応せしめて得た化合
物を加水分解するには、１０％酢酸水溶液、１０％塩酸
水溶液等を加えてｐＨ＝４．０に調整し、３７゛Ｃで８
〜１４時間インキュベートする方法が採用できる。
物を加水分解するには、１０％酢酸水溶液、１０％塩酸
水溶液等を加えてｐＨ＝４．０に調整し、３７゛Ｃで８
〜１４時間インキュベートする方法が採用できる。
上記本発明方法において用いる緩衝液としては、Ｎ−エ
チルモルホリン−酢酸緩衝液を用いること。
チルモルホリン−酢酸緩衝液を用いること。
ができる。また化合物（ａ）の製造方法において化合物
（ｄ）を二量体化する工程や、化合物ら）の製造方法に
おいて化合物（ｆ）で示される化合物と（ｄ）で示され
る化合物とを反応させる工程において用いる酢酸ウラニ
ルは、モル比で酢酸ウラニル／化合物（ｄ）（または化
合物（ｄ）十化合物げ））＝１１５０〜１／１００とな
る比の範囲で添加すると、四量体、二量体等の副生が少
なく好ましい。また二量体化反応の反応温度は２０〜３
７°Ｃが好ましく、反応時間は１０〜２４時間が好まし
い。反応終了後、触媒、遊離のイミダゾール等を除去し
た後、更にＨＰＬＣにより本発明化合物を分離回収する
ことができる。また得られた本発明化合物の構造は、’
Ｈ−ＮＭＲによって確認することができる。
（ｄ）を二量体化する工程や、化合物ら）の製造方法に
おいて化合物（ｆ）で示される化合物と（ｄ）で示され
る化合物とを反応させる工程において用いる酢酸ウラニ
ルは、モル比で酢酸ウラニル／化合物（ｄ）（または化
合物（ｄ）十化合物げ））＝１１５０〜１／１００とな
る比の範囲で添加すると、四量体、二量体等の副生が少
なく好ましい。また二量体化反応の反応温度は２０〜３
７°Ｃが好ましく、反応時間は１０〜２４時間が好まし
い。反応終了後、触媒、遊離のイミダゾール等を除去し
た後、更にＨＰＬＣにより本発明化合物を分離回収する
ことができる。また得られた本発明化合物の構造は、’
Ｈ−ＮＭＲによって確認することができる。
以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。
実施例１
常法により８−ヒドロキシアデノシン−５′ホスホロイ
ミダゾリテート（化合物（ｄ））を製造し、この化合物
（ｄ）の０．２８ｇを０．５ｍＭの酢酸ウラニルを溶解
した０、 ２ ＭのＮ−エチルモルホリン−酢酸緩衝液
（ｐＨ＝７．０ ）中に５０ｍＭとなるように添加し、
２２゛Ｃにて２４時間放置した。アニオン交換−ＨＰＬ
Ｃにて単量体が消失したことを確認シタ後、カチオン交
換樹脂（Ｄｏｗｅｘ５０Ｗ−Ｘ８． Ｎａ”型）２．５
１！ｉ！を加えてウラニルイオンを吸着除去し濾過した
。濾液を減圧乾固した後、残渣の水溶液をエタノール中
に滴下して再沈澱させた。沈澱物を遠心分離機により分
離した後、エタノール及びジエチルエーテルで洗浄し、
デシケータ−中で減圧乾固し、次いで１５〆の０．０２
Ｍ酢酸アンモニウム（ｐＨ＝５．７５ ）に溶解した。
ミダゾリテート（化合物（ｄ））を製造し、この化合物
（ｄ）の０．２８ｇを０．５ｍＭの酢酸ウラニルを溶解
した０、 ２ ＭのＮ−エチルモルホリン−酢酸緩衝液
（ｐＨ＝７．０ ）中に５０ｍＭとなるように添加し、
２２゛Ｃにて２４時間放置した。アニオン交換−ＨＰＬ
Ｃにて単量体が消失したことを確認シタ後、カチオン交
換樹脂（Ｄｏｗｅｘ５０Ｗ−Ｘ８． Ｎａ”型）２．５
１！ｉ！を加えてウラニルイオンを吸着除去し濾過した
。濾液を減圧乾固した後、残渣の水溶液をエタノール中
に滴下して再沈澱させた。沈澱物を遠心分離機により分
離した後、エタノール及びジエチルエーテルで洗浄し、
デシケータ−中で減圧乾固し、次いで１５〆の０．０２
Ｍ酢酸アンモニウム（ｐＨ＝５．７５ ）に溶解した。
この溶液にＮｕｃｌｅａｓｅ Ｐ １の２．５ ｔａ
ｇ／ ｄ溶液１５０μρを加え、３７゛Ｃでインキュベ
ートした。２４時間後、イソアミルアルコール：クロロ
ホルム＝３＝７に混合した溶液２０１を加えて激しく振
盪し、Ｎｕｃｌｅａｓｅ Ｐ １を失活させた後、水
層をジエチルエーテルで洗浄し、減圧下に濃縮した。残
渣を水２００ｄに溶かし、アニオン交換樹脂カラム（Ｓ
ｅｐｈａｄｅｘ Ａ−２５，ｔＩＣＯｓ型、 １．６
ｘ３０ｃｍ）に充填し、０〜０．８Ｍトリエチルアミン
−炭酸緩衝液（ｐ）Ｉ＝７．５）２１を用いてリニアグ
ラジェント法により化合ｆｌｙＪ（ａ）を分離し、更に
アニオン交換−ＨＰＬＣにより精製した。
ｇ／ ｄ溶液１５０μρを加え、３７゛Ｃでインキュベ
ートした。２４時間後、イソアミルアルコール：クロロ
ホルム＝３＝７に混合した溶液２０１を加えて激しく振
盪し、Ｎｕｃｌｅａｓｅ Ｐ １を失活させた後、水
層をジエチルエーテルで洗浄し、減圧下に濃縮した。残
渣を水２００ｄに溶かし、アニオン交換樹脂カラム（Ｓ
ｅｐｈａｄｅｘ Ａ−２５，ｔＩＣＯｓ型、 １．６
ｘ３０ｃｍ）に充填し、０〜０．８Ｍトリエチルアミン
−炭酸緩衝液（ｐ）Ｉ＝７．５）２１を用いてリニアグ
ラジェント法により化合ｆｌｙＪ（ａ）を分離し、更に
アニオン交換−ＨＰＬＣにより精製した。
得られた化合物を重水に熔かし、２５゛Ｃにおいて’Ｈ
−ＮＭＲ測定を行った。得られた’）ｌ−ＮＭＲスペク
トルを第１図に示す。この結果５．１ ｐｐｆｆｉ〜５
．４ ｐｐｍ付近に、２′位のプロトンの３本のシグナ
ルが現れ、そのうち２本がブロードとなっていることか
ら２′位の水酸基とリン酸基とが結合していることが確
認され、また５、７〜６．０ ｐｐｍ＋付近に現れる１
′位のプロトンのシグナル、７．８〜８． Ｏｐｐｍ付
近に現れる２位のプロトンに起因する３本のシグナル等
から、式（ａ）で示される８−ヒドロキシアデニル−（
２’−５’）−８−ヒドロキシアデニル（２’−５’）
−８−ヒドロキシアデノシン−５′−モノホスフェート
であることが確認された（以下、この化合物を便宜上、
実施例１の化合物という。）。
−ＮＭＲ測定を行った。得られた’）ｌ−ＮＭＲスペク
トルを第１図に示す。この結果５．１ ｐｐｆｆｉ〜５
．４ ｐｐｍ付近に、２′位のプロトンの３本のシグナ
ルが現れ、そのうち２本がブロードとなっていることか
ら２′位の水酸基とリン酸基とが結合していることが確
認され、また５、７〜６．０ ｐｐｍ＋付近に現れる１
′位のプロトンのシグナル、７．８〜８． Ｏｐｐｍ付
近に現れる２位のプロトンに起因する３本のシグナル等
から、式（ａ）で示される８−ヒドロキシアデニル−（
２’−５’）−８−ヒドロキシアデニル（２’−５’）
−８−ヒドロキシアデノシン−５′−モノホスフェート
であることが確認された（以下、この化合物を便宜上、
実施例１の化合物という。）。
実施例２
常法によりアデノシン−５′−モノホスホロイミダゾリ
テートを製造し、この化合物１．４６ ｇを０、５ ｍ
Ｍの酢酸ウラニルを溶解した０、２ＭのＮエチルモル
ホリン−酢酸緩衝液（ｐＨ＝７．０ ）中に４．０ｍＭ
となるように添加し、２２゛Ｃにて２４時間放置した。
テートを製造し、この化合物１．４６ ｇを０、５ ｍ
Ｍの酢酸ウラニルを溶解した０、２ＭのＮエチルモル
ホリン−酢酸緩衝液（ｐＨ＝７．０ ）中に４．０ｍＭ
となるように添加し、２２゛Ｃにて２４時間放置した。
アニオン交換−ＨＰＬＣにて単量体が消失したことを確
認した後、カチオン交換樹脂（Ｄｏｓｍｅｘ５０Ｗ−Ｘ
８． Ｎａ”型）２．５＋ｄを加えてウラニルイオンを
吸着除去した後濾過し、アデニル−（２′−５′）−ア
デノシン−５′−モノホスフェート（化合物（ｅ））を
得た。この化合物（ｅ）２５０ｇ、トリフェニルホスフ
ィン４８０■、ジピリジルスルフィド２００閣及びホル
ホリン０．３２ｄをＤＭＳｏｏ、７４ｄとＤＭＦｏ、７
４ａｌｔの混合溶媒に溶解し、次いでトリエチルアミン
０．１８ｄを加えて室温下で１２時間反応を行い、アデ
ニル−（２’−５つ千−アデノシンー５′−ホスホロモ
ルホリテート（化合物げ））を得た。次いで上記化合物
げ）と、実施例１と同様にして得た化合物（ｄ）を４：
１のモル比となるようにして両者の混合物として３５０
■を０．５ｍＭの酢酸ウラニルを溶解した０、 ２ Ｍ
のＮ−エチルモルホリン−酢酸緩衝液（ｐｆ（＝７．０
）中に５０ｍＭとなるように添加し、２２°Ｃにて２
４時間放置した。アニオン交換−ＨＰＬＣにて化合物げ
）、化合物（ｄ）が消失したことをｉ認した後、カチオ
ン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ５０Ｗ−Ｘ８．Ｎａ”型）２．
５Ｍｆｌを加えてウラニルイオンを吸着除去し濾過した
。
認した後、カチオン交換樹脂（Ｄｏｓｍｅｘ５０Ｗ−Ｘ
８． Ｎａ”型）２．５＋ｄを加えてウラニルイオンを
吸着除去した後濾過し、アデニル−（２′−５′）−ア
デノシン−５′−モノホスフェート（化合物（ｅ））を
得た。この化合物（ｅ）２５０ｇ、トリフェニルホスフ
ィン４８０■、ジピリジルスルフィド２００閣及びホル
ホリン０．３２ｄをＤＭＳｏｏ、７４ｄとＤＭＦｏ、７
４ａｌｔの混合溶媒に溶解し、次いでトリエチルアミン
０．１８ｄを加えて室温下で１２時間反応を行い、アデ
ニル−（２’−５つ千−アデノシンー５′−ホスホロモ
ルホリテート（化合物げ））を得た。次いで上記化合物
げ）と、実施例１と同様にして得た化合物（ｄ）を４：
１のモル比となるようにして両者の混合物として３５０
■を０．５ｍＭの酢酸ウラニルを溶解した０、 ２ Ｍ
のＮ−エチルモルホリン−酢酸緩衝液（ｐｆ（＝７．０
）中に５０ｍＭとなるように添加し、２２°Ｃにて２
４時間放置した。アニオン交換−ＨＰＬＣにて化合物げ
）、化合物（ｄ）が消失したことをｉ認した後、カチオ
ン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ５０Ｗ−Ｘ８．Ｎａ”型）２．
５Ｍｆｌを加えてウラニルイオンを吸着除去し濾過した
。
次いで得られた化合物を実施例１と同様の方法で酵素処
理した後に得られた残渣の水溶液に酢酸を加えてｐＨ＝
ｔｏに調整し、３７°Ｃで１０時間インキュベートした
。残漬の水溶液を減圧乾固した後、残渣を水１００Ｉｄ
に溶かし、アニオン交換樹脂カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ
Ａ−２５１ＨＣＯｊ型、１．６Ｘ３０ｃｍ）に充填し
、０〜０．８ Ｍ ）リエチルアミンー炭酸緩衝液（ｐ
Ｈ＝７．５ ） ２４２を用いてリニアグラジェント法
により化合物（ａ）を分離し、更にアニオン交換ＨＰＬ
Ｃにより精製した。
理した後に得られた残渣の水溶液に酢酸を加えてｐＨ＝
ｔｏに調整し、３７°Ｃで１０時間インキュベートした
。残漬の水溶液を減圧乾固した後、残渣を水１００Ｉｄ
に溶かし、アニオン交換樹脂カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ
Ａ−２５１ＨＣＯｊ型、１．６Ｘ３０ｃｍ）に充填し
、０〜０．８ Ｍ ）リエチルアミンー炭酸緩衝液（ｐ
Ｈ＝７．５ ） ２４２を用いてリニアグラジェント法
により化合物（ａ）を分離し、更にアニオン交換ＨＰＬ
Ｃにより精製した。
得られた化合物を重水に溶かし、２５°Ｃにおいて’）
ｌ−Ｎ？ｌＲ測定を行った。得られた’Ｈ−ＮＭＲスペ
クトルを第２図に示す。この結果４．８ ｐｐｍ〜５．
２ ｐｐｍ付近に、２゛位のプロトンの３本のシグナル
が現れ、そのうち２本がブロードとなっていることから
２′位の水酸基とリン酸基とが結合していることが確認
され、また５、６〜６．２ ｐｐｍ付近に現れる１゛位
のプロトンのシグナル、７．９〜８．Ｏｐｐ■付近に現
れる２位のプロトンに起因する２本のシグナル及び８．
１〜８．２ｐｐ−付近に現れる８位のプロトンに起因す
る２本のシグナル等から、式（ａ）で示されるアデニル
−（２’−５’）−アデニル−（２’−５’Ｌ８−ヒド
ロキシアデノシン−５′−モノホスフェートであること
が確認された（以下、この化合物を便宜上、実施例２の
化合物という。）。
ｌ−Ｎ？ｌＲ測定を行った。得られた’Ｈ−ＮＭＲスペ
クトルを第２図に示す。この結果４．８ ｐｐｍ〜５．
２ ｐｐｍ付近に、２゛位のプロトンの３本のシグナル
が現れ、そのうち２本がブロードとなっていることから
２′位の水酸基とリン酸基とが結合していることが確認
され、また５、６〜６．２ ｐｐｍ付近に現れる１゛位
のプロトンのシグナル、７．９〜８．Ｏｐｐ■付近に現
れる２位のプロトンに起因する２本のシグナル及び８．
１〜８．２ｐｐ−付近に現れる８位のプロトンに起因す
る２本のシグナル等から、式（ａ）で示されるアデニル
−（２’−５’）−アデニル−（２’−５’Ｌ８−ヒド
ロキシアデノシン−５′−モノホスフェートであること
が確認された（以下、この化合物を便宜上、実施例２の
化合物という。）。
実施例３
実施例１の化合物、実施例２の化合物及び比較例として
アデニル−（２’−５’）−アデニル−（２’−５’）
−アデノシン−５′−トリホスフェート（以下この化合
物を便宜上、比較例の化合物という。）の３つの化合物
についてＲＮａ ｓ ｅＬリポソームＲＮＡの解裂試験
を行った。各化合物のＲＮａｓｅＬへの結合能力の濃度
依存性を第１図に示す。尚、第１図においてムは実施例
１の化合物を、マは実施例２の化合物を、・は比較例の
化合物を示す。この結果、実施例１の化合物、実施例２
の化合物はモノリン酸系三景体でありながら、三リン酸
三量体である比較例の化合物と同等の結合能力を有して
いた。また各化合物のＩＣ５゜は、実施例１の化合物、
実施例２の化合物が共に３．０Ｘ１０−’Ｍ、比較例の
化合物が１．５Ｘ１０−’Ｍであり、実施例１の化合物
、実施例２の化合物は比較例の化合物の２倍の値を有し
ていた。
アデニル−（２’−５’）−アデニル−（２’−５’）
−アデノシン−５′−トリホスフェート（以下この化合
物を便宜上、比較例の化合物という。）の３つの化合物
についてＲＮａ ｓ ｅＬリポソームＲＮＡの解裂試験
を行った。各化合物のＲＮａｓｅＬへの結合能力の濃度
依存性を第１図に示す。尚、第１図においてムは実施例
１の化合物を、マは実施例２の化合物を、・は比較例の
化合物を示す。この結果、実施例１の化合物、実施例２
の化合物はモノリン酸系三景体でありながら、三リン酸
三量体である比較例の化合物と同等の結合能力を有して
いた。また各化合物のＩＣ５゜は、実施例１の化合物、
実施例２の化合物が共に３．０Ｘ１０−’Ｍ、比較例の
化合物が１．５Ｘ１０−’Ｍであり、実施例１の化合物
、実施例２の化合物は比較例の化合物の２倍の値を有し
ていた。
次に０．０１ Ｍ塩化マグネシウムを含む０．０１Ｍト
リス酢酸緩衝液（ｐＨ＝ ８．８ ）により、５ＶＰＤ
（スネークベノムホスホジエステラーゼ）の０．２ｕｎ
ｉｔ／ｄ溶液を調整し、この溶液１００μｌを各化合物
（１，０ＯＤ）に添加して３７°Ｃの恒温槽でインキュ
ベートした後、９０℃で３０分かけて酵素を失活させ、
アニオン交換−ＨＰＬＣで定性及び定量を行った。
リス酢酸緩衝液（ｐＨ＝ ８．８ ）により、５ＶＰＤ
（スネークベノムホスホジエステラーゼ）の０．２ｕｎ
ｉｔ／ｄ溶液を調整し、この溶液１００μｌを各化合物
（１，０ＯＤ）に添加して３７°Ｃの恒温槽でインキュ
ベートした後、９０℃で３０分かけて酵素を失活させ、
アニオン交換−ＨＰＬＣで定性及び定量を行った。
その結果、比較例の化合物は１０分程度で略完全に分解
されるのに対し、実施例１の化合物、実施例２の化合物
は１０分程度ではほとんど分解されないことが認められ
た。
されるのに対し、実施例１の化合物、実施例２の化合物
は１０分程度ではほとんど分解されないことが認められ
た。
Ｃ発明の効果〕
本発明の８−ヒドロキシアデノシン−５′−リン酸を含
むアデノシンモノホスフェート系三量体は新規な化合物
であり、また本発明方法によれば上記８−ヒドロキシア
デノシン−５′−リン酸を含む新規なアデノシンモノホ
スフェート系三量体を確実に捉供できる効果を有する。
むアデノシンモノホスフェート系三量体は新規な化合物
であり、また本発明方法によれば上記８−ヒドロキシア
デノシン−５′−リン酸を含む新規なアデノシンモノホ
スフェート系三量体を確実に捉供できる効果を有する。
また本発明の蛋白質合成阻害剤は分解酵素による分解作
用に対する耐性が強く、しかも優れた蛋白質合成阻害作
用を有するものであり、抗ウィルス剤、抗ガン剤等とし
て有用である。
用に対する耐性が強く、しかも優れた蛋白質合成阻害作
用を有するものであり、抗ウィルス剤、抗ガン剤等とし
て有用である。
第１図は実施例１の化合物の’Ｈ−ＮＭＲスペクトルを
、第２図は実施例２の化合物の’）Ｉ−ＮＭＲスペクト
ルを示すチャート、第３図は実施例、比較例の化合物の
ＲＮａｓｅＬに対する結合能力の濃度依存性を示すグラ
フである。 第１図 ８．０ ７．０ ５．０ ４．０ ３．０ ２．０
、第２図は実施例２の化合物の’）Ｉ−ＮＭＲスペクト
ルを示すチャート、第３図は実施例、比較例の化合物の
ＲＮａｓｅＬに対する結合能力の濃度依存性を示すグラ
フである。 第１図 ８．０ ７．０ ５．０ ４．０ ３．０ ２．０
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）下記式（ａ）、 ▲数式、化学式、表等があります▼（ａ） で示される８−ヒドロキシアデノシン−５′−リン酸を
含むアデノシンモノホスフェート系三量体。 ２）下記式（ｂ）、 ▲数式、化学式、表等があります▼（ｂ） で示される８−ヒドロキシアデノシン−５′−リン酸を
含むアデノシンモノホスフェート系三量体。 ３）下記式（ｃ）、 ▲数式、化学式、表等があります▼（ｃ） で示される８−ヒドロキシアデノシン−５′−モノホス
フェートを、トリフェニルホスフィン及びジピリジルジ
スルフィドの存在下にイミダゾールと反応せしめて、下
記式（ｄ）、 ▲数式、化学式、表等があります▼（ｄ） で示される８−ヒドロキシアデノシン−５′−ホスホロ
イミダゾリテートを得、次いでこの８−ヒドロキシアデ
ノシン−５′−ホスホロイミダゾリテートを、ｐＨ＝６
．８〜７．０の緩衝液中で酢酸ウラニル触媒の存在下に
三量体化し、加水分解することを特徴とする請求項１記
載の８−ヒドロキシアデノシン−５′−リン酸を含むア
デノシンモノホスフェート系三量体の製造方法。 ４）下記式（ｅ）、 ▲数式、化学式、表等があります▼（ｅ） で示されるアデニル−（２′−５′）−アデノシン−５
′−モノホスフェートを、トリフェニルホスフィン及び
ジピリジルジスルフィドの存在下にホルホリンと反応せ
しめて、下記式（ｆ）、▲数式、化学式、表等がありま
す▼（ｆ） で示されるアデニル−（２′−５′）−アデノシン−ホ
スホロモルホリテートを得、次いでこのアデニル−（２
′−５′）−アデノシンホスホロモルホリテートと下記
式（ｄ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ｄ） で示されるホスホロイミダゾリテート誘導体とを、ｐＨ
＝６．６〜６．８の緩衝液中で酢酸ウラニル触媒の存在
下に三量体化し、次いで加水分解することを特徴とする
請求項１記載の８−ヒドロキシアデノシン−５′−リン
酸を含むアデノシンモノホスフェート系三量体の製造方
法。 （５）下記式（ａ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ａ） 又は下記式（ｂ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ｂ） で示される８−ヒドロキシアデノシン−５′−リン酸を
含むアデノシンモノホスフェート系三量体よりなる蛋白
質合成阻害剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2218709A JP3042540B2 (ja) | 1990-08-20 | 1990-08-20 | ８―ヒドロキシアデノシン―５′―リン酸を含むアデノシンモノホスフェート系三量体、その製造方法及びその化合物からなる蛋白質合成阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2218709A JP3042540B2 (ja) | 1990-08-20 | 1990-08-20 | ８―ヒドロキシアデノシン―５′―リン酸を含むアデノシンモノホスフェート系三量体、その製造方法及びその化合物からなる蛋白質合成阻害剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04103597A true JPH04103597A (ja) | 1992-04-06 |
| JP3042540B2 JP3042540B2 (ja) | 2000-05-15 |
Family
ID=16724202
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2218709A Expired - Fee Related JP3042540B2 (ja) | 1990-08-20 | 1990-08-20 | ８―ヒドロキシアデノシン―５′―リン酸を含むアデノシンモノホスフェート系三量体、その製造方法及びその化合物からなる蛋白質合成阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3042540B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013501730A (ja) * | 2009-08-07 | 2013-01-17 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 脂質付加オキソアデニン誘導体 |
-
1990
- 1990-08-20 JP JP2218709A patent/JP3042540B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013501730A (ja) * | 2009-08-07 | 2013-01-17 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 脂質付加オキソアデニン誘導体 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3042540B2 (ja) | 2000-05-15 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |