JPS6210690B2

JPS6210690B2 -

Info

Publication number: JPS6210690B2
Application number: JP4828777A
Authority: JP
Inventors: Yukinae Yamazaki; Hidekatsu Maeda; Hideo Suzuki; Akira Kamibayashi
Original assignee: Agency of Industrial Science and Technology
Current assignee: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
Priority date: 1977-04-25
Filing date: 1977-04-25
Publication date: 1987-03-07
Also published as: JPS53133283A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、一般式（式中、Ｒは置換基を含有していてもよい２価
の炭化水素基であり、Ｙはモノリン酸、ジリン酸
及びトリリン酸の中から選ばれるリン酸残基であ
る）で表わされるアデニン核の６位アミノ基がカ
ルバモイル化されたアデニンヌクレオチド誘導体
又はその塩を、その末端アミノ基を介して多糖類
又は側鎖としてカルボキシル基の結合した繰返し
構造単位を有する高分子物質に化学結合させてな
るアデニンヌクレオチドを結合した高合子物質に
関するものである。本発明による物質は新規であり、そのリガンド
として結合する前記式（Ｉ）で表わされるアデニ
ンヌクレオチド誘導体の作用により、アフイニテ
イクロマトグラフイーの吸着体や、酵素反応にお
ける反応媒体などとして利用される。酵素工業において、必要な酵素の分離精製に用
いる、いわゆる、アフイニテイクロマトグラフイ
ーの吸着体や、酵素反応における反応媒体などと
して、アデニンヌクレオチドを結合させた高分子
物質の開発は強く要望されているが、従来提案さ
れているものは、いずれも、その調製に著しい困
難が伴つたり、目的物の収率が良くなかつたり、
さらに実際の使用に際し、酵素に対する親和性が
極端に低かつたり、あるいは結合されたアデニン
ヌクレオチドが使用中に容易に脱離するなどの欠
点があり、未だ満足すべきものは得られていな
い。たとえば、アデニンヌクレオチド誘導体をリ
ガンドとして結合した高分子物質の中で、前記し
た目的に最も適合したものといわれている例とし
て次の式で表わされるものが知られている〔M.
Lindberg et al.，Eur.J.Biochem.，53，481
（1975）〕。（式中、Ｙはモノリン酸、ジリン酸又はトリリ
ン酸であり、〔SP〕はセフアロースを表わす）この高分子物質は各種のキナーゼに対して良好
な親和性を示し、実際の使用条件で安定であると
いう特徴を有するものの、その調製は著しく困難
であり、リガンドとして高分子物質に結合させる
アデニンヌクレオチドのN⁶―〔（６―アミノヘキ
シル）カルバモイルメチル〕誘導体を調製するの
に数段階を要し、その１つの反応段階においては
反応の完結に５日以上という長期間を要し、とう
てい実用性あるものということができない。本発明者らは、使用特性にすぐれしかも調製の
容易なものを開発すべく鋭意研究を重ねた結果、
前記一般式（Ｉ）で表わされるアデニンヌクレオ
チド誘導体をリガンドとして含む高分子物質がこ
の目的に適合することを見出し、本発明を完成す
るに至つた。本発明において、高分子物質にリガンドとして
結合させる前記一般式（Ｉ）で表わされるアデニ
ンヌクレオチド誘導体は文献未載の新規化合物で
あり、以下に示すようにして製造される。なお、
前記一般式において、２価炭化水素基Ｒの具体例
としては、エチレン、プロピレン、ブチレン、ア
ミレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン、
ドデシレンなどのC₂〜C₂₀、好ましくはC₄〜C₈の
アルキレン；ブテニレン、ヘキセニレン、ドデセ
ニレンンなどのC₄〜C₂₀、好ましくはC₄〜C₁₂の
アルケニレン；フエニレン、キシリレンなどのア
リーレン基などがあり、これらは塩素、臭素、ヨ
ウ素などのハロゲン原子、メトキシなどのアルコ
キシ、アセチル、アクリロイルなどのアシル基、
アセトキシなどのアルコキシカルボニル及びニト
ロ基などの置換基により置換されていてもよい。
また、これらの塩としては、たとえば、ナトリウ
ム塩、カリウム塩、リチウム塩などのアルカリ金
属塩、バリウム塩などのアルカリ土金属塩、アル
ミニウム塩などの他の金属塩の他、アンモニウム
塩などが挙げられる。前記一般式（Ｉ）で表わされるアデニンヌクレ
オチド誘導体を製造するには、まず対応する
AMP，ADP又はATPを原料とし、これを溶媒中
において、ジイソシアネート（NCO―Ｒ―
NCO）（式中、Ｒは前記と同じ）と反応させる。
この場合、反応温度は30〜100℃、好ましくは50
〜80℃であり、溶媒としてはヘキサメチルホスホ
ルアミド、ジメチルスルホキシド、ジメチルホル
ムアミドなどの出発物質を溶解し、かつジイソシ
アネートと反応しない不活性のものが用いられ
る。原料アデノシンリン酸１モルに対するジイソ
シアネートの使用量は、化学量論的には１モルで
あればよいが、一般には、30〜200モルの割合で
ある。この割合は反応温度及びジイソシアネート
の反応性の強さにより、できる限りジイソシアネ
ートの少量で反応を行うのがよいが、一般には大
過剰が必要である。次に、この反応の終了後、室温又はそれ以下の
温度通常10〜０℃に冷却しながら、PH３以下、好
ましくは１〜２のアデニンヌクレオチドが分解せ
ずかつ残存するイソシアネートの反応によるゲル
化が起らないPH範囲に調整した酸性条件の水と有
機溶媒との混合系に注加する。この場合の溶媒と
しては水に対して非混和性を示すが、イソシアネ
ートに対しては不活性でかつ混和性を示すもの、
たとえばベンゼン、ヘキサンなどの炭化水素、ク
ロロホルムなどのハロゲン化炭化水素、酢酸エチ
ルなどの他、エーテル、ケトンなどがある。この
有機溶媒は水100重量部に対し50〜200重量部であ
る。この混合液の量は、前記反応液１重量部に対
し、５〜100重量部、好ましくは20〜40重量部で
ある。このようにして、原料化合物であるAMP，
ADP及びATPにおけるアデニン核の６位のアミ
ノ基が末端にアミノ基を有するカルバモイル基で
カルバモイル化された化合物を得る。この場合の
反応は次の式で表わされる。（式中、〔AP〕はアデノシリン酸残基を表わ
す）本発明の反応を行う場合、目的物を収率よく得
るには、反応(2)で示される加水分解反応をすみや
かに行うことが必要である。反応系に単に水を加
えるのみでは、系全体がゲル状になつてしまう。
このような不都合を回避するには、可及的低温に
おいて、酸性水と非水溶性の有機溶媒との混合系
をはげしくかきまぜながら、この混合系に反応(1)
で得た反応液を注加する。本発明の反応において、有利なことには、原料
としてADPを用いる場合、生成物としては、そ
の目的とするADP誘導体の他に、これとほぼ等
量のAMP及びATPの誘導体がそれぞれ得られる
ことである。ATP誘導体の製造が一般に困難で
あることを考えると、本発明によりADPを原料
としてATP誘導体を容易に製造し得るのは工業
的に大きな意義がある。本発明においては、このようにして得られたア
デニンヌクレオチド誘導体を、その末端アミノ基
の反応性を利用して、多糖類又は側鎖としてカル
ボキシル基の結合した繰返し構造単位を有する高
分子物質に化学的に結合させる。使用する多糖糖
類としては、デンプン、セルローズ、デキストラ
ン、アガロースなど水可溶性、不溶性のものを問
わず使用できる。可溶性の場合、分子量は数千か
ら数十万まで、どのような大きさのものでもよ
い。これらの多糖類は、グルコースやガラクトー
スなどの単糖類がグリコシル結合を介して重合し
てなるものである。これらの多糖類にアデニンヌ
クレチド誘導体を結合する場合、その結合は次の
ようにして行う。多糖類の水酸基をブロムシアン
で活性化して、イミドカルボナート誘導体とす
る。このイミドカルボナート基は、前記一般式
（Ｉ）のアミノ基と反応してイソウレア結合、イ
ミドカルボナート結合又はウレタン結合を形成す
る。反応の様子を次に示す。（〔Ａ〕―R₁―NH₂は、使用するアデニンヌクレ
オチド誘導体を表わす。）この結合反応は既知であり、例えば成書（固定
化酵素、千畑ら著、講談社刊1974年）に記述され
ている。従つて、本発明の高分子は、前記一般式
（Ｉ）で表わされるアデインヌクレオチド誘導体
又はその塩を、そのN⁶位置換基末端のアミノ基
を用いて、グルコースやガラクトースなどの単糖
類がグリコシル結合によつて分子量数千から数十
万の範囲に重合してなる多糖類の水酸基に対して
イソウレア結合、イミドカルボナート結合、又は
ウレタン結合によつて結合した高分子物質であ
る。この場合、多糖類の1gあたりアデニンヌク
レオチド誘導体が10〜100μmol結合されるが、
これは多糖類を構成する単糖類の600個から60個
残基あたり１個のアデニンヌクレオチド誘導体の
分子が結合されていることに相当する。なお、そ
の結合順序は全く無秩序である。又、カルボキシル基の結合した繰返し構造単位
を有する高分子の場合、使用する高分子物質とし
ては、ポリアクリル酸、カルボキシメチルセルロ
ースなど構造が既知のものが用いられる。これら
の高分子の分子量は数千から数十万まで、どのよ
うな大きさのものでもよい。これらのカルボキシ
ル基を有する高分子にアデニンヌクレオチド誘導
体を結合する場合、その結合は次のようにして行
う。カルボキシル基を水溶性カルボジイミドで活
性化して前記一般式（Ｉ）のアデニンヌクレオチ
ド誘導体と反応させると、アミノ基と反応してア
ミド結合を形成する。この結合反応は既知であ
り、例えば前記成書に記述されている。従つて、本発明の高分子は、前記一般式（Ｉ）
で表わされるアデニンヌクレオチド誘導体又はそ
の塩を、そのN⁶位置換基末端のアミノ基を用い
て、構造既知の含カルボキシル基高分子に対し
て、そのカルボキシル基ヘアミド基として結合し
た高分子物質である。例えば、ポリアクリル酸の
場合1gあたり50〜100μmolのアデニンヌクレオ
チド誘導体を結合した高分子物質が得られるが、
これはカルボキシル基の280個から140個残基あた
り１個のアデニンヌクレオチド誘導体分子が結合
されていることに相当する。なお、その結合順序
は全く無秩序である。本発明による前記アデニンヌクレオチド誘導体
を結合した高分子物質は、その合成は著しく容易
であり、しかも通常の使用条件下ではそのN⁶―
カルバモイル結合が極めて安定で、結合したアデ
ニンヌクレオチド誘導体が遊離するようなことは
なく、さらに、関係酵素に対し強い親和力を有
し、たとえばアフイニテイクロマトグラフイーの
吸着体として使用した場合、各種のキナーゼやデ
ヒドロゲナーゼの分離に顕著な効果を示す。ま
た、固定化補酵素として酵素反応器（バイオリア
クター）に対して応用する場合、各種のキナーゼ
に対して高い補酵素活性を示す。次に本発明を実施例によりさらに詳細に説明す
る。実施例Ａ：アデニンヌクレオチド誘導体の合成Ａ―(1) N⁶―〔Ｎ―（６―アミノヘキシル）
カルバモイル〕―AMP・Li塩の合成アデノシン5′―モノホスフエート
（AMP）2gを50mlのヘキサメチルホスホルア
ミド（HMPA）に溶解させ、これにヘキサ
メチレンジイソシアネート（HDC）17mlを
加え、70℃で２時間反応させた。次に、この
反応混液を、PH１の塩酸酸性の水750mlとク
ロロホルム750mlの混合物に氷冷下、激しく
かきまぜながら、注加した。反応液を分液ロ
ートに移し、室温で一夜放置したのち、水層
を取り、クロロホルム層は再度PHの塩酸酸性
の水で抽出した。両者の水層を合せ、1Nの
LiOHでPH７とし、エバポレータにより40℃
で濃縮した。約100mlに濃縮した液に、氷冷
下、エタノールとアセトンの１：１混合液約
１を加えとると、白色沈殿が生成した。こ
の沈殿を遠心分離により集め、減圧下乾燥し
た。得られた固形物を再度水に溶解させ、
Dowex1×２（Ｃ⁻）を吸着体とするイオ
ン交換クロマトグラフイーで精製した。この
場合の溶出は、0.05MLiC溶液（PH５）１
と0.2MLiC（PH２）１の２液による直
線勾配溶出法によつた。500mlから800mlまで
の溶出液を合せ、1NLiOHでPH７に調整し、
これを濃縮後、エタノールとアセトンの１：
１混合液をこの濃縮液に加えて白色沈殿を形
成し、これを遠心分離し、減圧乾燥して、
N⁶―〔Ｎ―（６―アミノヘキシル）カルバ
モイル〕―AMP・Li塩の１水和物(A)0.39gを
白色粉末として得た。次に、このLi塩の一部
を水に溶かし、ギ酸酸性として白色沈殿を生
成させ、これを遠心分離し、減圧乾燥して遊
離酸の１水和物(B)を白色粉末として得た。前記のようにして得た化合物(A)及び(B)は、
薄層クロマトグラフイー（TLC）において
単一スポツトを示し、又高速液体クロマトグ
ラフイー（HSLC）において単一ピークを示
し、単一物質であると認められた。第１表に
そのRf値と、保持時間をまとめて示す。化
合物(B)はLiOHで中和した後分析にかけたた
め、化合物(A)の場合と同じ値を示した。ま
た、第１表には参考のために出発物質である
AMPについての値も合せて示した。なお、表中に示した展開溶媒は次の通りで
ある。ａ；イソ酪酸：1Mアンモニア水（５：３）（EDTAで飽和させた）ｂ：0.1Mリン酸カリウム（PH6.8）：硫酸ア
ンモニウム：１―プロパノール〔100：
60：２（Ｖ／Ｗ／Ｖ）〕ｃ；2Mギ酸：0.5MLiC（１：１）ｄ；1MLiC ｅ；２％硼酸：2MLiC（２：１）ｆ；３％硼酸：3MLiC（２：１）

【表】また、化合物(A)、(B)はいずれも不定形固体
であつて明瞭な融点を示さないが、分解点と
しては、化合物(A)は215〜225℃、化合物(B)は
192〜195℃の値を示し、また化合物(A)の旋光
度は〔α〕^１３ _Ｄ＝−29.7゜（Ｃ＝0.74，H₂O）を
示した。化合物(A)及び(B)の元素分析値はそれぞれ理
論値と一致することが確認された。さらに、
官能基分析により、化合物(A)及び(B)は分子内
に１つのアミノ基を持つことが確認された。さらに、C¹³核磁気共鳴スペクトルにおい
て、化合物(A)及び(B)は分子内に１つのアミノ
基を持つことが確認された。さらにC¹³核磁気共鳴スペクトルにおい
て、化合物(A)は26.5ppmから41.3ppmの間に
６本のシグナルを示す。このことから分子内
にヘキサメメチレン基の存在することが確認
された。また、化合物(A)及び(B)のUVスペク
トルから、分子内にアデニン核の６位のアミ
ノ基に結合したカルバモイル基の存在が確認
された。Ａ―(2) N⁶―〔Ｎ―（６―アミノヘキシル）
カルバモイル〕―ADP・Li塩及びN⁶―〔Ｎ
―（６―アミノヘキシル）カルバモイル〕―
ATP・Li塩の合成アデノシン5′―ジリン酸（ADP）1gを50ml
のHMPAに溶解させ、これにHDC20mlを加
え、75℃で1.5時間反応させた。反応液を実
施例(A)―１の場合と同様にして処理して、
N⁶―〔Ｎ―（６―アミノヘキシル）カルバ
モイル〕―ADP・Li塩〔イオン交換クロマ
トグラフイーにおける1000ml〜1200ml溶出
分、化合物(C)〕0.19g及びN⁶―〔Ｎ―（６―
アミノヘキシル）カルバモイル〕ATP・Li
塩〔イオン交換クロマトグラフイーにおける
1600ml〜1900ml溶出分、化合物(D)〕0.26gを
それぞれ白色粉末として得た。これらの化合物(C)及び(D)について、前記Ａ
―１の場合と同様にしてTLC及びHSLC分析
の結果を第２表に示す。

【表】化合物(C)及び(D)はいずれも不定形固体であ
つて明瞭な融点を示さないが、化合物(C)は
220℃以上で、化合物(D)は225℃以上で分解
し、また、旋光度については、化合物(C)は
〔α〕^１３ _Ｄ＝−21.9゜（Ｃ＝0.82，H₂O）、化合物
(D)は〔α〕^１３ _Ｄ＝−27.2゜（Ｃ＝1.69，H₂O）を
示した。なお、ADPとATPについては、その末端
のリン酸無水物結合が希酸中で加熱処理する
ことにより切断され、いずれもAMPに移行
することが知られているが、このようにして
化合物(C)及び(D)を処理すべく、それぞれを水
に溶かしてPH３とし、100℃で５時間処理し
たのち、得られた生成物をイオン交換クロマ
トグラフイーで精製単離し、ギ酸酸性での沈
殿を取り、これを集めて減圧乾燥して白色固
形物を得た。化合物(C)及び化合物(D)から得ら
れた生成物はいずれも化合物(B)と同一である
ことが、TLCとIRスペクトルにより確認さ
れた。また、リン分析の結果、化合物(C)は分
子内にリン２原子を持ち、化合物(D)は分子内
にリン３原子を持つことが示された。また、化合物(C)及び(D)はUVスペクトル分
析からカルバモイル基の存在が確認され、又
核磁気共鳴分析によりヘキサメチレン基の存
在が確認された。さらに、化合物(C)はピルビ
ン酸キナーゼとアセテートキナーゼに対して
ADPとしての補酵素活性を示し、化合物(D)
はヘキソキナーゼ、グリセロキナーゼに対し
てATPとしての補酵素活性を示した。その
活性の度合は元のADP又はATPと比較する
と、最大速度においてそれぞれ20及び82，63
及び87％であつた。Ｂ：高分子物質に対するアデニンヌクレオチド誘
導体の結合Ｂ―(1) 市販のアガロースゲルであるセフアロ
ースに対するN⁶―〔Ｎ―（６―アミノヘキ
シル）カルバモイル〕―AMPの結合 4gのセフアロース4Bを水６mlに懸濁し、
0.5NのNaOHでPH11とし、これに６mlの水に
溶かしたBrCN120mgを加えた。PHの低下を
補なうように0.5NのNaOHを加えPH10に15分
保つた後、吸引ロ過し、得られた固形物を
0.1MのNaHCO₃50mlで洗い、洗液は吸引ロ
過により除去した。なお、以上の操作は全て
氷冷下で行なつた。次に、このようにしてBrCNで活性化され
たセフアロース4Bゲルを、前記Ａ―(1)で得
られたN⁶―〔Ｎ―（６―アミノヘキシル）
カルバモイル〕―AMP・Li塩20mgを４mlの
0.1M NaHCO₃に溶かした溶液に加え、４℃
で15時間かきまぜながら反応させた。次い
で、これを吸引ロ過して集めたのち、水、
1M NaC及び水の順で十分よく洗浄し、吸
引ロ過して湿潤ゲル約4gを得た。リン分析
の結果、このゲル中には、活性成分としての
N⁶―〔Ｎ―（６―アミノヘキシル）カルバ
モイル〕―AMPが、湿潤ゲル1g当り、1.81
μmolの割合で結合されていることが確認さ
れた。（以下、このものはセフアロース4B固
定化AMPと呼称する）Ｂ―(2) セフアロース4Bに対するN⁶―〔６―
アミノヘキシル）カルバモイル〕―ADP及
びN⁶―〔Ｎ―（６―アミノヘキシル）カル
バモイル〕―ATPの結合前記Ｂ―(1)において、原料としてN⁶―
〔Ｎ―（６―アミノヘキシル）カルバモイ
ル〕―ADP及びN⁶―〔Ｎ―（６―アミノヘ
キシル）カルバモイル〕―ATPの各々のLi
塩を用いた以外は同様にして反応を行ない、
セフアロース4B固定化ADP（活性成分含量
1.01₁μmol／1g湿潤ゲル）及びセフアロース
4B固定化ATP（活性成分含量0.67μmol／1g
湿潤ゲル）をそれぞれ得た。Ｂ―(3) デキストランに対するN⁶―〔Ｎ―
（６―アミノヘキシル）カルバモイル〕―
ATPの結合可溶性デキストラン（デキストランT40）
の100mgを３mlの水に溶かし、0.5N NaOHで
PH11とし、これにBrCN100mgを水２mlに溶
かした溶液の0.4mlを加え、0.5NNaOHを加
えてPH11に保つた。約15分後、PHの低下がな
くなり、この時点で0.1NのHCによりPH9.5
に調整したのち、N⁶―〔Ｎ―（６―アミノ
ヘキシル）カルバモイル〕―ATP・Li塩20
mgを含む水溶液１mlを加え、これをかきまぜ
ながら16時間室温に放置した。次いで0.2M
エタノールアミン塩酸塩（PH8.5）１mlを加
えて１時間放置したのち、BiOGel Ｐ―６の
カラムでゲルクロマトグラフイーを行ない、
その高分子分画を集め、さらにこれを0.1M
トリエタノールアミン緩衝液（PH7.6）に対
して一夜透析した。透析内液のリン分析の結
果、デキストラン1gあたり10.2μmolのATP
が結合した可溶性デキストラン固定化ATP
が得られたことが確認された。Ｂ―(4) ポリアクリル酸に対するN⁶―Ｎ―
（６―アミノヘキシル）カルバモイル〕―
ATPの結合ポリアクリル酸100mgを水３mlに溶かし、
0.5N NaOHでPH４とし、これにエチルジメ
チルアミノプロピルカボジイミド塩酸塩200
mgを加え、直ちにN⁶―〔Ｎ―（６―アミノ
ヘキシル）カルバモイル〕―ATPのLi塩20
mgを水0.5mlに溶かして加え、かきまぜなが
ら一夜40℃で放置した。この反応液を前記Ｂ
―(3)の場合と同様にゲルロ過と透析処理によ
り精製した。透析内液のリン分析の結果、ポ
リアクリル酸1gあたり50μmolのATPを結合
したポリアクリル酸固定化ATPが得られた
ことが確認された。Ｃ：応用例Ｃ―(1) 吸着体としての応用前記Ｂ―(1)で調製したセフアロース4B固
定化AMPの湿潤ゲル5gをカラムに詰め（カ
ラムベツド容量6.5ml）25mMトリエタノー
ルアミン緩衝液（PH7.6）を十分に流して平
衝後、アルコールデヒドロゲナーゼ
（ADH）、乳酸デヒドロゲナーゼ（LDH）、ピ
ルビン酸キナーゼ（PK）、ヘキソキナーゼ
（HK）、３―ホスホグリセリン酸キナーゼ
（PGK）の各々4.2，2.9，3.6，2.7，4.9（ユ
ニツト）と、血清アルブミン３mgを含む液
0.2mlをカラム上部より加え、まず、上記緩
衝液に1mMになるようにメルカプトエタノ
ールを加えた液を50ml流し、次いでこのメル
カプトエタノールを加えた上記緩衝液にさら
に1MになるようKCを加えた液と加えない
液による直線勾配溶出を行つた（各液60mlづ
つ）。溶離液を4.8mlづつコレクターで分画
し、各フラクシヨン中の血清アルブミン濃度
を280mμの吸光度で測定し、また各酵素の
活性を常法により測定した。その結果、アミ
ブミンとHKはフラクシヨンNo.２に溶出さ
れ、LDHはフラクシヨンNo.６の前後、PGK
はフラクシヨンNo.18と19，PKはフラクシヨ
ンNo.18と19，ADHはフラクシヨンNo.23と24
に溶出された。同様にＢ―(2)で調製したセフアロース4B
固定化ADPとセフアロース4B固定化ATPを
それぞれ吸着体としての実験を行なつて、い
ずれのカラムでもHK，LDH，PK，PGK，
ADHが相互によく分離することを確認し
た。Ｃ―(2) 固定化補酵素としての応用前Ｂ―(3)で調製した可溶性デキストラン固
定化ATPはヘキソキナーゼ及びグリセロキ
ナーゼに対して未修飾のATPのそれぞれ49
及び70％の活性を示した。更に、アセテート
キナーゼ（AK）とヘキソナーゼ（HK）の
共役酵素反応系において次の反応の媒体とし
て作用した。この共役酵素反応系におけるこの固定化
ATPの回転数（ATP型とADP型のリサイク
ル）はその濃度が0.1mMにおいて
7.5cycles／hrであり、一方、未修飾のATP
は同濃度において38.2cycles／hrの回転数を
示した。次に、AK（1.8ユニツト）、HK（８ユニツ
ト）及びこの固定化ATP（0.1mM）を含む
液３mlを分子量１万以上をカツトオフする限
外ロ過膜を装着した連続限外ロ過装置のセル
に入れ、100mMのグルコースと7.5mMのア
セチルリン酸を含む基質液を11ml／hrの流速
で流したところ、膜を通過してくる流出液中
に0.27mMのグルコース―６―リン酸が含ま
れており、その濃度は６時間の連続限外ロ過
においてほぼ一定であつた。流出液の全量は
60mlであり、セル内液の20倍だけ流して、な
おかつグルコース―６―リン酸がコンスタン
トに生産されることが明らかとなつた。

Claims

【特許請求の範囲】１一般式（式中、Ｒは置換基を含有していてもよい２価
の炭化水素基であり、Ｙはモノリン酸、ジリン酸
及びトリリン酸の中から選ばれるリン酸残基であ
る）で表わされるアデニンヌクレチオド誘導体又
はその塩を、その末端アミノ基を介して多糖類又
は側鎖としてカルボキシル基の結合した繰返し構
造単位を有する高分子物質に化学結合させてなる
アデニンヌクレオチドを結合した高分子物質。