JPH04124199A - 全血漿から血液疑固８因子―フオン・ビルブラント因子複合体濃縮物の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は全血液血漿から高い特異性を有する■因子−７
オン・ビルプラント（Ｖａｎ　Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ）
因子の濃縮物の製造方法に関する。

本発明を要約すれば、本発明は全（非−寒冷沈澱）血漿
から高い特異性を有する■因子−７オン・ビルプラント
因子複合体の濃縮物を製造する方法に関し、本方法は塩
化バリウムを用い、及び水酸化アルミニウムを用いる二
重処理によって予備精製することを含んで成り、次いで
本方法はＤＥＡＥ−７ラクトゲル型の陰イオン交換樹脂
によるクロマトグラフィーにより精製することを含んで
成り、本方法は溶剤−界面活性剤を用いる処理によるウ
ィルス不活性化段階を含んでおり、本方法は同じ血漿か
らフィブリノーゲン、アルブミン、免疫クロプリン、抗
トロンビン■、フィブロネクチン及びプロトロンビン複
合体を回収することを可能とするものであることであっ
て、本発明による方法を用いて得られる濃縮物は特に治
療用を対象としていることである。

■因子の注射による血友病Ａの治療は普通に実施されて
おり、高純度の製剤の使用を必要としているが、一方で
はウィルスの感染の危険を減少させ、且つ他方では、注
射は度々繰り返されなければならないので、残留する汚
染物質があれば患者に望ましくない免疫応答の危険を誘
発する危険があり、これをを避けることが必要である。

■因子を精製するためにヒトの血漿の処理を行うだめの
数種の方法が既に工業センターで使用されている。かよ
うな方法は各種の化学剤を用いる汚染蛋白質の沈澱、ゲ
ル透過クロマトグラフィー免疫アフィニティクロマトグ
ラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、及び種々の
方法の各種の組み合わせを含んでいる。

血漿中には少量の■因子が存在するだけであるから、精
製方法の収量は解決さるべき主要な問題である。更に■
因子は不安定な蛋白質であり、他の血液因子（こより活
性化できる蛋白質である；しかし活性化条件においては
それは治療的価値を失う；従って精製方法及び最終的投
薬量もこの問題に取り組むように適応させなければなら
ない。

本発明者はフランス特許出願第８８　０７５３０号に記
載されており、高純度の■因子を得ることができる、イ
オン交換クロマトグラフィーを用いる精製方法を開発し
た。

しかし、この方法においては、他の方法により使用され
るものと同じく、使用される出発物質は血漿の寒冷沈降
画分である。この寒冷沈降段階は上澄液に留まる、■因
子の３０ないし４０％の損失を招く。

従って■因子の損失を抑制するためＪこ寒冷沈降されな
かった全血漿からの製造方法を開発することは有益であ
ろう。更に、かような方法は寒冷沈降法を実施すること
が困難である、設備の不備な製造センターに極めて有利
な簡易化をもたらすであろう。

以上は本発明者が全血漿から■因子を精製する高純度で
、安定な濃縮物を得ることを可能とし、しかも極めて良
好な収率を与える、簡易な方法を開発した理由である。

従って本発明は全血漿から■因子濃縮物を製造する方法
に関する。この方法はプロトロンビン複合体（■、■、
■、Ｘ因子）の構成分を除去するための予備精製、及び
ゲル及び溶離緩衝液の選択により■因子−７オンービル
プラント因子複合体を高純度で得ることを可能とする陰
イオン交換クロマトグラフィーによる精製を含んでいる
。

この方法は追加的精製段階の後に、フィブリノーゲン、
フィブロネクチン、アルブミン、免疫グロブリン及び抗
トロンビンｍのような他の血漿蛋白質の精製溶液を得る
ために使用することかできる。

本方法はヒトの血漿を用いて開発されたが、動物起源の
血漿にも等しく利用可能である。

かように本発明による方法は出発物質として全血漿、即
ち新鮮であっても又は保存するｌ；めに凍結してあって
もよいが、寒冷沈降されていない血漿を使用することを
可能とする。この血漿は抗凝固剤又は安定化溶液の存在
下で採取されることが有利である。通常は、クエン酸塩
−デキストロース−燐酸塩混合物が使用される；それに
■因子の任意の特異的安定剤を追加又は代用することも
有利である。

０．２ないし２Ｕ／１１２のヘパリン、ｌないし５ｍＭ
のＥＤＴＡ及び１ないし１０ｍＭのＣａＣＩ！の混合物
に、５ないし６０ｇ／１２の濃度にグルコースをできる
だけ添加して、血漿出発物質の安定剤溶液として都合良
く使用できる。

本発明による方法は、塩化バリウムでの沈澱及び水酸化
アルミニウムゲル上への吸着を組み合わせた最初の予備
精製段階を含んでいる。

塩化バリウム処理はｐＨが６．５に調節された血漿を用
いて、ＩＭの塩化バリウム溶液を最終的に０．０８Ｍの
濃度が得られるまで、撹拌しながら添加することによっ
て行われることが有利であり、沈澱した蛋白質を除去す
るために５°ないし】０℃で遠心し、次いで上澄液を集
める処理が続いて行われる。沈澱した蛋白質はプロトロ
ンビン複合体又はその構成分を製造するために都合良く
採取することができる。

次いで上澄液を３％の水酸化アルミニウムゲルとｐＨ６
，５で接触させると、それは残りの汚染蛋白質を吸収す
る；この処理に続いて低温槽内で５″ないし８°Ｃに冷
却し、上澄液を集め、それを５ａないし８℃で保存する
ことが行われる。

この上澄液を脱塩しなければならないが、それは次ぎの
クロマトグラフィー段階のための、０゜５ないし２Ｕ／
Ｉａ（ｌのヘパリンを添力ａした装入緩衝液の存在にお
ける限外濾過によって、又は同じ緩衝液の存在における
セファデックスＧ２５を用いるタロマドグラフィーによ
るかのいずれかによって行うことかできる。

本発明による方法は次いで陰イオン交換クロマトグラフ
ィーによる分離を含んでいる。本発明者は既にフランス
特許出願第８８　０７５３０号に、低いイオン交換能及
び寸法の大きい細孔を有する形式の樹脂について、これ
が極めて寸法の大きい分子を保持することを可能とする
点を解明した利点を記載した。この長期の保持が樹脂と
の僅かに疎水性の結合の形成を可能とし、及び緩衝液の
イオン強度の選択によって固定された分子の選択的な脱
着が可能となる。

この種の樹脂はフラクトゲル（Ｆｒａｃｔｏｇｅ＋）の
−般名で商業的に入手し得る。ＤＥＡＥ−フラクトゲル
６５０■及びＴ−又はＤ−ＭＡＥ−フラクトゲル（メル
ク［Ｍｅｒｃｋ］　）が使用できる。これらの同じ樹脂
は現在“触毛（ｔｅｎｔａｃｕｌａｒ）型樹脂″として
供給者により記載された形状で入手できる。これらのマ
トリックスの構造はゲルの能力の増大に資する、正電荷
の固定表面を増大するように改頁されている。

クロマトグラフィーカラムの装入緩衝液はｐＨ７に調節
されたクエン酸ナトリウム及び塩化ナトリウムを基剤と
した緩衝液であり、塩化力ルノウムを０．５ないし６ｍ
Ｍの間の濃度に、リジンを２ないし４９／Ｑの程度の濃
度に、及びグリシンを８ないし１１ｇ／（ｌの濃度に含
むことが有利である。工程の実施はこの塩化ナトリウム
濃度の予定された増大を含んで成る。

本発明による精製工程の実施はクロマトグラフィーカラ
ム上に上記の予備精製調製物を注入することを含む。規
定された条件（０，１１Ｍ　ＮａＣＩ）下で、カラムは
７オン・ビルプラント因子−■因子複合体のような極め
て寸法の大きい分子を固定することができ、そしてフィ
ブリノーゲン、アルブミン、免疫グルプリン、抗トロン
ビン■及びフィブロネクチンを濾液として流出させる。

最適な■因子回収効率を達成することを目的とする本発
明の好適な形態の具体化によれば、クロマトグラフィー
カラムの溶離のだめの緩衝液のイオン強度は、−回だけ
塩化ナトリウム０．２７Ｍまで増大される。本発明の具
体化の他の形態によれば、この溶離工程はフィブロネク
チンを除去するため塩化ナトリウム０．１３Ｍまでイオ
ン強度を上げることによって先行される。

これらの条件下で脱着され溶離された■因子−フォン・
ビルブラント因子複合体は、少なくとも５ないしＩＯＵ
／ｍｇに等しい特異的活性を有している。この方法の全
体的な収率は始めの血漿１１２当たり少なくとも３５０
Ｕであり、上記のように安定他剤混合物が初期血漿に添
加された場合は少なくとも５００　Ｕ／Ｑであることが
できる。

次ぎの用途により、■因子−７オン・ビルプラント因子
複合体は更に精製段階を追加することができ、特に他の
クロマトグラフィーにより濃縮することができる。前記
のように、これはＤＥＡＥ−４はＴ／Ｄ−ＭＡＥ−フラ
クトゲルにより行うことができ：硫酸デキストラン、固
定化されたアミノーヘキ／ル、固定化されたヘパリン、
及びスルホプロピル樹脂及びアフィニティ又は免疫アフ
ィニティ樹脂のような他の支持体も使用できる。

この追加的クロマトグラフィー段階は上記と同じ基礎的
緩衝液中で行われる。できるだけ濃縮された■因子を得
ることを目的とする、本発明の具体化の好適な形態によ
れば、この追加的クロマトグラフィーは最初のものと同
じ条件下で行われる、即ち、緩衝液のイオン強度を０．
２７ＭＮａＣ１に増大することによる単一的脱着条件を
用いて行われる。本発明の他の形態の具体化によれば、
残存する汚染蛋白質を除去するために緩衝液のイオン強
度を最初０．１３Ｍに増大させることが行われ、少なく
とも１０ないし２０ＬＪ／＋＊ｇの特異的活性を有する
高純度の■因子−７オン・ビルプラント因子複合体をを
得るために０．２７Ｍへの第二の増大が行われる。

免疫グロブリン、アルブミン、抗トロンビン■、フィブ
リノーゲン及びフィブロネクチンのようなカラムの最初
の濾液の他の蛋白質も慣用のクロマトゲラフイー法によ
り精製及び濃縮することかできる。

本発明による方法は又既知の技術によるウィルス不活性
化旭理を含む。例えば溶剤−界面活性剤を用いる処理の
ように化学薬品が使用される場合は、クロマトグラフィ
ーが不活性化剤を確実に除去するように、いずれか一つ
のクロマトグラフィー段階に先立って行うことが推奨さ
れる。

■因子−７オン・ビルプラント因子複合体の濃縮物及び
上記の方法を用いて得られる他の血漿蛋白質の濃縮物は
又本発明の目的である。

該濃縮物は薬局法の標準法に従って製剤化され、治療目
的に使用することができる。

下記の実施例は本発明の具体化の二つの形態を説明する
ものであるが、しかし本発明の範囲を限定するものでは
ない。

実施例　Ｉ 抗凝固剤／安定化剤（例えばクエン酸塩−デキストロー
ス−燐酸塩）の存在において採血された、新鮮な血漿、
又は２２−２５℃で解凍されｔ；凍結血＊２５０ｍｆｆ
を用い、酢酸でｐＨを６．５に調節する。

ａ）予ｆ７１！！精製 ｐ　Ｈ６，５で２０ｍＱの１Ｍ塩化バリウムを蝿動式ポ
ンプを用いて０．０８Ｍの最終濃度が得られるまで添加
する。塩化バリウムは４ないし８ｍＣ毎分の速度で添加
され、混合物を室温で１５分間撹拌する。

次いで混合物を８℃で２０分間７００ｒｐｍで遠心し、
次いで上澄液を回収する。

次いで血漿ＩＱ当たり２．３ｇの割合で水酸化アルミニ
ウムゲル（３％のＡｌ（ＯＨ）３を有するアルヒドロゲ
ル・ユーロビオ［Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ　Ｅｕｒ。

−ｂｉｏ］）上に吸着させる。ｐＨを６．５に調節し、
温度を低温槽中で５℃に下げる。混合物を５℃で２７０
０ｒｐｍで２０分間遠心し、上澄液を回収し、５℃で保
存する。

この処理によってプロトロンビン複合体（■、■、■、
Ｘ因子）の各成分を除去することができ、それらは採取
され、既知の方法で精製することができる。

アルヒドロゲル処理単独法ではプロトロンビン及び他の
ＰＰ５Ｂの成分を完全に除去することかできず、及び塩
化バリウム処理のみでは成程度Ｘ因子、プロトロンビン
及びとりわけ■因子が残るから、これらの二つの処理を
組み合わせることにより、特に満足すべき結果を得るこ
とができる。

こうして集められた上澄液は、ＩＵ／＋＊Ｒのヘパリン
を加えた次ぎのクロマトグラフィー段Ｎ（下記参照）の
緩衝液の存在における限外濾過か、又は同じ緩衝液中で
のセファデックスＧ２５によるクロマトグラフィーのい
ずれかによって脱塩される。

次いで溶剤−界面活性剤を用いる慣用のウィルス不活性
化剋理が２４℃で６時間行われる。（この処理方法は欧
州特許出願環０．１３１．７４０号に記載されている。

） ｂ）クロマトグラフィーによる精製 予備精製され、透析された上澄液はクロマトグラフィー
濾過段階に付される。２．６ｃｍの直径及び３０ｃ＋ｍ
の有効高さを有し、その中１０ｃ＋ｍはＤＥＡＥ−７ラ
クトゲルーＴＳＫ６５０＠樹脂（メルク）カ充填されて
いるに２６／３カラム（ファルマシア［Ｐｈａｒｍａｃ
　１ａｌ−ウプサラ、スエーデン）が使用される。

カラム装入及び試料溶解用緩衝液の組成は下記の通りで
ある：クエン酸ナトリウム、１０ｍＭ；塩化カルシウム
、ＩｍＭ；グリシン、９９／１２；リジン、３ｇ／β。

この緩衝液に塩化ナトリウムを添加し、最終濃度０．１
１Ｍ及びｐＨ７に調節する。

試料をカラムに１００　ｍＱ／時間の速度で注入する。

フィブリノーゲン、アルブミン、免疫グロブリン、抗ト
ロンビン■及びフィブロネクチンを含む、非吸着蛋白質
、並びにウィルス不活性化剤を除去するために装入緩衝
液でカラムを洗浄する。

次いで緩衝液のイオン強度を塩化ナトリウム０゜２７Ｍ
に増やして、■因子−フォン・ビルブラント因子を脱着
する。

この方法を用いて得られる■因子溶液は５ないし１Ｑｒ
Ｕ／＋ｍｙの特異的活性を有し、カラムに注入した血漿
に関する精製効率は６０ないし８０％の間である。二つ
の因子、■因子及びリストセチン補助因子単位で表現さ
れたフォン・ヒルプラント因子の濃度について、１．Ｕ
／ＩＬＩに近い比率が常時観察される。

この■因子の溶液の純度は生成物を濃縮できる追加的ク
ロマトグラフィー分離工程により更に僅かに向上させる
ことができる。例えば上記と同じ装入条件下でＤＥＡＥ
−フラクトゲルの第二のカラムが使用され、残留する汚
染蛋白質を除去する０、１３ＭのＮａＣｌを用いる予備
洗浄が実施される。次いで緩衝液のイオン強度を塩化ナ
トリウム０．２７Ｍまで増大させ、高度に精製され且つ
濃縮された■因子−７オン・ビルプラント因子複合体を
脱着させて溶離する。

第二のクロマトグラフィー濃縮段階は限外濾過によって
代替することができる。

本発明の具体化の通常の形態によれば、クロマトグラフ
ィーによる第一の精製段階はＤＥＡＥフラクトゲル樹脂
を用いて行われる。しかし又ＤＥＡＥ−７ラク［・ゲル
の性質と等しい性質を有する、ＴＭＡＥ−フラクトゲル
（ＴＭＡＥ−ｈリメチルアミノエチル）又はＤＭＡＥ−
フラクトゲル（ＤＭＡＥ−ジーＭＡＥ）のような、メル
クにより市販されている新しい樹脂を用いても極めて良
好な結果が得られた。又メルク社により開発され、Ｗ、
ミュラー（Ｍｕｌｌｅｒ）により１９８９年６月ストッ
クホルムの“液体クロマトグラフィー会議ＣＣｏｎｆｅ
ｒｅｎｃｅ　ｏｎ　Ｌｉｑｕｉｄ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ
ｒａｐｈｙ）″で発表された“触毛Ｑｅｎｔａｃｕｌａ
ｒ）ｌ”の新型樹脂を使用することもできる。

実施例　２ 本発明の具体化の他の形態は、やや低い収率及び僅かに
向上した特異性を持った■因子−７オン・ビルプラント
因子濃縮物を同時に与えると共に、フィブリノーゲン及
びフィブロネクチンの濃縮物の製造を可能とするもので
ある。

本方法はＤＥＡＥ−７ラクトゲルの第一のカラムから■
因子−フォン・ビルブラント因子複合体の溶離までは実
施例１と同一である。

フィブリノーゲン、抗トロンビン■、アルブミン及び免
疫グロブリンはカラムによって保持されず、濾液中に回
収できる。

■因子−７オン・ビルプラント因子は残留する汚染蛋白
質を固体しないように、０．１７Ｍの塩化ナトリウムの
イオン強度における緩衝液の装入により、ＤＥＡＥ−７
ラクトゲルによる第二のクロマトグラフィー分離段階に
よって精製及び濃縮できる：塩化ナナトリウムイオン強
度を０．２７Ｍに増大させることにより、■因子−７オ
ン・ビルプラント因子複合体を脱着し、溶離することに
より１０ないし２０１Ｕ／１１９の特異的活性がこうし
て得られる。

フィブリノーゲン及びフィブロネクチンは次いで既知の
クロマトグラフィー法を用いて精製及び濃縮でき、フラ
ンス特許出顯第８８　０７５３０号に記載されたように
、治療用として適当な性質を有する溶液を与える。

血漿の他の蛋白質は慣用の分別方法を使用して精製及び
濃縮することができる。

実施例　３ 精製効率は始めの血漿に、その解凍から２５℃まで上げ
る際に下記の混合物： ヘパリン：ｌＵ／＋Ｑ ＥＤＴＡ　：　２ｍＭ又は０．７４ｇ／Ｑ塩化カルシウ
ム：６ｍＭ又は０．６７９／（１を添加することにより
なお更に向上することができる。

更に５ないし６０９／（ｌの間のグルコースヲ更にこの
溶液に添加することができる。

次いで酢酸を添加することによりｐＨを６．５に下げる
。

精製段階は実施例１又は２のようにして行われる。

これらの条件下で精製工程の全体の収率は、初期血漿Ｉ
Ｑ当たり少なくとも５００Ｕの■因子凝固活性蛋白質（
■：Ｃ）に等しい。

これは蛋白質１１１Ｉｇ当たり１０ないし３０単位の■
因子凝固活性蛋白質（■・Ｃ）の特異的活性に対し、■
因子活性の５５ないし６５％の全体的回収率に対応する
。

本発明の主なる特徴及び態様は以下の通りである。

１、全血漿を塩化バリウムを用い、及び水酸化アルミニ
ウムを用いる二重処理による予備精製、及び極めて大き
い寸法の分子の保持を可能とする陰イオン交換樹脂によ
る精製に付することを特徴とする、高い特異的活性を有
する■因子−７オン・ビルプラント因子複合体の安定な
濃縮物を製造する方法。

２、全血漿が新鮮であるか又は凍結した血漿である、上
記１に記載の方法。

３．０．２ないし２Ｕ／ｍＱのヘパリン、ｌないし５ｍ
ＭのＥＴＤＡ及びｌないし１０ｍＭのＣａＣ１□から成
る安定剤混合物が血漿に添加される、上記ｌ又は２に記
載の方法。

４、安定剤混合物が更に５ないし６０ｙ／Ｑの濃度のグ
ルコースを含む、上記３に記載の方法。

５、予備精製が ａ）塩化バリウムによる沈澱に続いて遠心及び上澄液の
採取、 ｂ）水酸化アルミニウムゲルによる吸着に統いて冷間遠
心及び上澄液の採取、 Ｃ）脱塩処理 を含んで成る、上記１ないし４のいずれか一つに記載の
方法。

６、塩化バリウムによる沈澱がｐＨ６，５においてＩＭ
の塩化バリウムの溶液を撹拌しながら添加し、次いで５
ないし１０℃で遠心し、及び上澄液を採取することによ
り行われる、上記５に記載の方法。

７、水１ｍ化アルミニウムゲルによる吸着がｐＨ６，５
で３％ゲルで行われ、次いで迅速に５℃に冷却され、５
℃で遠心され、及び上澄液が採取される、上記５又は６
に記載の方法。

８、脱塩が継続して行われるクロマトグラフィー段階用
の、ヘパリンが添加されている、装入緩衝液の存在にお
ける限外濾過により行われる、上記５ないし７のいずれ
か一つに記載の方法。

９、脱塩が継続して行われるクロマトグラフィー段階用
の、ヘパリンが添加されている、装入緩衝液の存在にお
けるセファデックスＧ２５のカラムによるクロマトグラ
フィーにより行われる、上記５ないし７のいずれか一つ
に記載の方法。

１０、予備精製を受けた血漿の上澄液が極めて大きい寸
法の分子を排除しない陰イオン交換ゲルヲ含むクロマト
グラフィーカラム上に注入され、フィブリノーゲン、ア
ルブミン、免疫グロブリン、杭トロンビン■及びフィブ
ロネクチンを濾液中に流出させる、上記ｌないし９のい
ずれか一つに記載の方法。

１１、クロマトグラフィーゲルがＤＥＡＥ又はＴ−又は
Ｄ−ＭＡＥ型の基が固定されている種類のビニル重合体
のゲルである、上記１ないし１０のいずれか一つに記載
の方法。

１２、重合体ゲルが７ラクトゲルである、上記１１に記
載の方法。

１３、クロマトグラフィーカラム装入緩衝液がグリシン
及びリジンを含み、０．１．１Ｍの塩化ナトリウムが添
加され、及びｐＨ７に調節された、クエン酸ナトリウム
及び塩化力ルンウム基剤の緩衝液である、上記１０ない
し１２のいずれか一つに記載の方法。

１４、緩衝液が８ないしｆ１ｇ／１２のグリシン及び２
ないし４ｇ／Ｑのリジンを含む、上記１３に記載の方法
。

１５、緩衝液のイオン強度が塩化ナトリウムの０．２７
Ｍまで増大されて、クロマトグラフィーカラムから■因
子−７オン・ビルプラント因子複合体を脱着する、上記
１０ないし１４のいずれか一つに記載の方法。

１６、緩衝液のイオン強度がフィブロネクチンを除去す
る、塩化ナトリウムの０．１３Ｍまで増大サレ、次いで
クロマトグラフィーカラムから■因子−フォン・ビルブ
ラント因子複合体を脱着する、塩化ナトリウムの０−２
７Ｍまで増大される、上記１０ないし１４のいずれか一
つに記載の方法。

１７、クロマトグラフィーカラムから脱着された■因子
−７オン・ヒルプラント因子複合体か追加的精製段階及
びクロマトグラフィーによる濃縮に付される、上記ｌな
いし１６のいずれか一つに記載の方法。

１８、追加的クロマトグラフィーが下記：ＤＥＡＥ−又
はＴ／Ｄ−ＭＡＥ−７ラクトゲル、固定化アミノーヘキ
ンル、固定化ヘパリン、硫酸デキストラン、スルホプロ
ピル、又はアフィニティ又は免疫アフィニティ樹脂：か
ら選択されたイオン交換樹脂を用いて行われる、上記ｌ
ないし１７のいずれか一つに記載の方法。

１９、追加的クロマトグラフィーが塩化ナトリウム０．
１７Ｍに調節された緩衝液を用いて行われ、イオン強度
を二段階に分けて０．１３Ｍに、次いで０．２７Ｍの増
大させることを含む、上記１７又は１８に記載の方法。

２０、追加的クロマトグラフィーが塩化ナトリウムを０
．１７Ｍに調節された緩衝液を用いて行われ、イオン強
度を０．２７Ｍに一回増大させることを含んで成る、上
記１７又は１８に記載の方法。

２１、上記１０に記載のクロマトグラフィー濾液中に存
在する蛋白質が追加的精製及び濃縮段階に付される、上
記１ないし１４のいずれか一つに記載の方法。

２２、慣用のウィルス不活性化処理が任意のクロマトグ
ラフィー段階に先立って溶剤−界面活性剤を用いて行わ
れる、上記１ないし２１のいずれか一つに記載の方法。

２３、上記１ないし２２のいずれか一つに記載の方法に
より得られる、■因子−フォン・ビルブラント因子複合
体濃縮物。

２４、上記ｌないし１４のいずれか一つ及び２１又は２
２に記載の方法により得られる、血漿から誘導された蛋
白質濃縮物。

２５、治療用として製剤化されている、上記２３又は２
４に記載の濃縮物。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、全血漿を塩化バリウムを用い、及び水酸化アルミニ
   ウムを用いる二重処理による予備精製、及び極めて大き
   い寸法の分子の保持を可能とする陰イオン交換樹脂によ
   る精製に付することを特徴とする、高い特異的活性を有
   するVIII因子−フォン・ビルブラント因子複合体の安定
   な濃縮物を製造する方法。