JPH0413631A - アナカルジウム・オクシデンタレ由来の物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、アナカルジウム・オクシデンタレ（＾ｎｓｃ
ｔｒｄｉｉｍ　　ｏｃｃｉｄｅｎｔｘｌｅ　）から得る
ことができる新規の物質、その製造方法及び該物質を有
効成分として含有する抗腫瘍剤に関する。並びに、この
物質はチロシンキナーゼ阻害活性及びβ−グルコシダー
ゼ阻害活性を有することを特徴とじている。

（従来の技術） チロシンキナーゼ阻害剤： 癌遺伝子は種々のヒト腫瘍において点突然変異、転座、
増幅などの異常を起こしている例が数多く見い出され、
腫瘍の形成に重要な役割を果たしていると考えられてい
る。

癌遺伝子はＳｒＣ，ｒａｇ、ｍ７ｃなどに代表される幾
つかのグループに分類することができるが、最も研究の
進んでいるのはｓｒｃファミリーの癌遺伝子である。こ
の癌遺伝子産物はタンパク質中のチロシン残基を特異的
にリン酸化する活性、すなわちチロシンキナーゼ活性を
もち、この活性が細胞の癌化を引起こすのに重要な役割
を果たしていると考えられている（Ｍ、　　Ｓ、　　Ｃ
ｏ１１ｅｔｔｅら、Ｎ＊ｊｗｒｅ、　　２８５．　１６
７〜１６９　（１９８０）・Ｔ、Ｈｏｎ１ｅｒとＢ、　
Ｍ　５ｅｆｔｏｎ、　Ｐｒｏｃ、　Ｎ＊ｔ１．＾ｃ＊ｄ
、ｓｃｉ、ＵｓＡ、、　７７、　１３１１〜１３１５　
（１９８０）　’）。また、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、
血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）　、インスリンなどの
増殖因子受容体にもｓｒｃファミリーの癌遺伝子産物と
類似したアミノ酸配列のドメインがありチロシンキナー
ゼ活性をもつことが知られている（　Ｊ、　Ｄｏｖｎｖ
ｓｒｄら、Ｎ１ｔｏｔｅ、　　３０７．　５２１〜５２
７（１９８４）　）。さらに、癌遺伝子のうち少なくと
もいくつかは本来正常な細胞の増殖に重要な役割を果た
している増殖因子や増殖因子受容体の遺伝子の変化した
ものであることが判明している（　Ｔ。

ＹＩＩＩＩＩＯＩＯら、Ｃｅ１ｌ、　３５．７１〜７８
　（１９８３）　；　Ｃ。

１、　Ｂ＊Ｂｍ＊ｎ　　ら、Ｃｅ　ｌ　ｌ、　　４５．
　６４９−６５６　　（ＩＨ６＞　）。

このため、癌遺伝子産物の機能を阻害する物質の開発が
、癌の基礎研究及び化学療法の面から重要視されてきた
。これまでに開発されたチロシンキナーゼ阻害剤として
、ゲニスティンＦＴ、へに１マ！ｍｌら、Ｊ、　　Ｂｉ
ｏｌ、　　Ｃｈｅｍ、、　　２６２．　５５９２〜５５
９５（１９Ｂ７））、エルブスタチン（Ｉｔ、　Ｕｍｅ
ｒａｖｘ　ら、１．　Ａ口ｔｉｂｉｏｌｉｃｓ３９、　
１７０〜１７３　　（１９８６）　）、ハービマイシン
Ａ１（Ｙ、Ｕｅｈｒｒｓら、Ｍｏｌ、Ｃｅ１１．Ｂｉｏ
ｌ、、　　６．　２１９８−２２０６（１９８６））　
、スタウロスポリン（中野作文ら（１９８７）日本農芸
化学会昭和６２年度大会講演要旨集、ｐ２１２、　２Ｏ
−１９）などの微生物産生物質、並びにＳＴ６３８　　
（Ｔ、５ｂｉｒｓｉｓｈｉ　　ら、　　Ｃｈｅｍ、Ｐｈ
ｇｒｍ、Ｂｕｌｌ、、３６９７４−９８１　（１９８Ｂ
））のような化学的に合成された物質が知られている。

β−グルコシダーゼ阻害剤： 癌による死因の多くが、直接又は間接的に転移（＋ｅｔ
ｓｓｔｅｓ目）に関係している。癌転移においては、細
胞表面に存在する糖タンパク質及び糖脂質が介在するこ
とが知られており、従って、β−グルコシダーゼが癌細
胞の転移に何らかの関与をしているものと考えられてい
る。実際、公知のβグルコシダーゼ阻害剤であるカスタ
ノスペルミンは転移抑制能のあることが報告されている
（ＭＪ、　Ｈｗｓｐｈｒｒｅｔ　　ら、Ｃ１ｖｃｅｒ　
Ｒｅｓ、　　４Ｌ　　５２１５−５２２２（１９８Ｇ）
　　。

さらにまた、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の原因
病原体であるヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）の感染過
程においても、β−グルコシダーゼが関与していること
が知られている。従って、β−グルコシダーゼ阻害剤は
ＨＩＶ感染を阻害することが可能であり、この機構とし
て、該阻害剤がＨＩｖのｅｎｖタンパク質の１つである
ｇ　ｐ　１２０の正常な糖鎖形成を阻害することによっ
てウィルスの細胞への吸着を実質的に阻害すると考えら
れている（Ｒｆ＾、　Ｇｒｕｔｅｒｓ　ら、Ｎｘ１ｕｔ
ｅ　　３３０．　７４−７７（１９８７））。

このようにβ−グルコシダーゼ阻害剤は、抗転移活性及
び抗ＨＩＶ活性をもっことが考えられる。

（発明が解決しようとする課題） これまでに開発されたチロシンキナーゼ阻害剤は、上述
のとおり微生物が産生じたものか又は化学的に合成され
たものである。しかし、公知のチロシンキナーゼ阻害剤
のなかには、細胞膜透過性が悪い、血清中で不安定であ
るなどの欠点を有するものもある。また、正常細胞に影
響を及ぼさず、阻害活性が十分強く且つ特異性の高いチ
ロシンキナーゼ阻害剤はまだないといってよい。そのた
め、正常細胞と異なる癌遺伝子産物の構造及び機能を識
別し、癌遺伝子産物により強く作用する薬剤の開発が望
まれてきた。

さらにまた、１つの薬剤で癌の進展及び転移を同時に阻
害又は抑制し得るものは知られていない。

本発明は、チロシンキナーゼ阻害活性及びβ−グルコシ
ダーゼ阻害活性を有することを特徴とする、アナカルジ
ウム・オクシデンタレから得ることができる物質、その
製造方法並びに該物質を有効成分として含有する抗腫瘍
剤を提供することを目的としている。

（課題を解決するための手段） 上記目的を達成するために、本発明者は各種の植物の溶
媒抽出物について、チロシンキナーゼ阻害活性及びβ−
グルコシダーゼ阻害活性を有するものを鋭意探索したと
ころ、アナカルジウム・オクシデンタレの抽出物に特に
優れた活性が存在することを見出し、本発明を完成させ
るに至った。

特に、チロシンキナーゼ阻害剤は、従来、微生物由来及
び合成由来のものがほとんどであったが、本発明物質の
ような植物体からのチロシンキナーゼ阻害物質はこれま
で全く知られていなかった。

アナカルジウム・オクシデンタレは、ウルシ科に属する
熱帯植物であって、その果皮の乳液はウルシの原料又は
染料として、また果皮を取り去った残りの種子（もしく
は実）は食品として利用されている。

本発明物質は、アナカルジウム・オクシデンタレを溶媒
で抽出する段階と、得られた抽出物を液体クロマトグラ
フィーに掛けて精製する段階とを包含する方法により製
造することができる。

本発明物質の製造に使用する原料アナカルジウム・オク
シデンタレとしては、チロシンキナーゼ阻害活性及び／
又はβ−グルコシダーゼ阻害活性成分を含有する全ての
種類のものを包含するが、好ましくはアナカルジウム・
オクシデンタレ・エル（＾ｎ１ｃｓｒｄｉｗＩＩｏｅｅ
ｉｄｅｎｔ１１ｅ　　Ｌ、）である。

原料のアナカルジウム・オクシデンタレは、その果皮又
は果皮を含む種子（もしくは実）が好ましく、保存時の
腐敗を防止するために乾燥し、さらに粉砕したものを使
用するのが好ましい。

また、抽出段階で使用する炭化水素溶媒としては、炭化
水素類たとえばペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタ
ン、石油エーテル、石油ベンジン。

リグロイン、ベンゼン、トルエン、キシレン、エチルベ
ンゼンなどｉハロゲン化炭化水素類たとえばクロロホル
ム、メチレンクロライド、四塩化炭素、など；アルコー
ル類たとえばメタノール、エタノール、ブタノール、な
ど；又はこれらの混合溶媒が挙げられ、特にヘキサン、
クロロホルム。

メタノールが好適である。もちろん、これらの溶媒以外
の同様の抽出能力をもつ他の溶媒も使用し得る。有機溶
媒の量は特に限定されないが、本発明の単離物質が抽出
され得る量であればよく、好ましくはアナカルジウム・
オクシデンタレの果皮を含む種子（もしくは実）５０ｇ
（乾燥重量）当たり　１００〜１０１００Ｏである。抽
出温度も特に限定されないが、本発明の単離物質が抽出
され得る温度であればよく、好ましくは室温〜６５℃、
より好ましくは室温〜４５℃である。抽出時間は温度に
より異なるが、例えば室温〜４５℃で抽出する場合１〜
１２ｈｒである。抽出段階での圧力は特に限定されない
が、抽出は通常常圧で実施される。なお、抽出は抽出率
に応じて２回以上繰り返してもよい。

アナカルジウム・オクシデンタレ抽出物からさらにチロ
シンキナーゼ／β−グルコシダーゼ阻害活性をもつ成分
を単離するために、さらに抽出物を直接又は−旦濃縮し
た後に液体クロマトグラフィーに掛けて精製する。

本発明の実施態様によれば、液体クロマトグラフィーは
シリカゲルクロマトグラフィーと分子ふるいクロマトグ
ラフィーとを包含し得る。さらに詳しくは、抽出段階で
得られた抽出物を一旦濃縮した後、ＫｉｃｓｅｌＨｅｌ
　６０を充填したカラムを用い、且つクロロホルム：メ
タノール＝　　１００：Ｏ〜１００：５の展開系でシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーを行うこと；展開系を
クロロホルム：メタノール：濃アンモニア水＝　　１０
０：０：０．１〜１００：５：０．１に代えて同様にク
ロマトグラフィーを行うこと；並びに５ｅｐｈｓｄｅｘ
　Ｌト２０を充填したカラムを用い、且つメタノールを
展開系として分子ふるいクロマトグラフィーを行うこと
によって本発明物質を精製することができる。

チロシンキナーゼ阻害活性及びβ−グルコシダーゼ阻害
活性をもっことを特徴とする本発明物質は以下の物理化
学的及び分光学的性質を有する。

ｆｌ）　　溶媒に対する溶解性：へキサン、クロロホル
ム、酢酸エチル、メタノール、ジメチルスルホキシドに
可溶性であり、水に不溶性である。

（ｂ）　　薄層クロマトク７フイ：　Ｒｆ＝０．４６　
（担体シリカゲル；展開溶媒クロロホルム：メタノール
：濃アンモニア水＝１０：　２　：　０．０５）。

（ｃ）　　ＵＶスペクトル：λ□、　３００　ｎｓ　（
ＩＦ媒メ９ノール）（第１図参照）。

（ｔ）　　　’Ｈ−ＮＭＲスペクトル：溶媒重クロロホ
ルム；δｐｐａ＋　：　０．９．　１．０〜１．７．２
．０．　２．７５゜５．０．　５．３．　５．８．６．
５５．６．９５．　７．５（第２Ａ及び２Ｂ図参照）。

さらに、本発明物質の抗菌活性は弱く、例えば５ｔｓｐ
ｈ７１ｏｃｏｃｃｕｓ　　Ｊｕｒｅｕｓ　　ＦＤＡ　　
２０９Ｐ、　　ＢｓｃｉｌｌｏｓＡＴＣＣ１０７０２に
対する最小阻止濃度（ＭＩＣ）は１２、５４　／　ｍｌ
、Ｅ、　ｃｏｌｉ　Ｋ−１２，ｃ＊ｎｄｉｄｓ　　１ｌ
ｂｉｃｓｎｓ３１４７に対するＭＩＣはｌ　Ｇ　０１１
１　／　０１１以上、及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎｓｓ　　
＊ｅｒｏｇｉｎｏｓｓ　　Ａ　３に対するＭＩＣは５０
埒／ｍ１以上であった。

本発明物質はチロシンキナーゼ阻害活性を有することを
特徴としている。具体的には、アナカルジウム・オクシ
デンタレから本発明方法によって単離された物質を、ヒ
ト上皮癌Ａ　４３１細胞から調製した細胞膜（チロシン
キナーゼ含有）にＥＧＦ。

［γ−３２Ｐ］　ＡＴＰ、合成ペプチド基質ＲＲ−８Ｒ
Ｃと共に作用させるとき、リン酸化されたＲＲ−８ＲＣ
の放射活性の測定から、本発明物質がＥＧＦ受容体のチ
ロシンリン酸化を阻害することが判った。そのチロシン
キナーゼ阻害活性は、後述の実施例に記載の方法を用い
て得たヘキサン抽出物でテストしたとき、最終濃度１０
０４／ｍｌで９０％のチロシンリン酸化阻害を示した（
第１表）。また、チロシンリン酸化を５０％阻害すると
きの阻害剤濃度ＩＣ，。は１９〜／＠ｌであった。

さらにまた、本発明物質はβ−グルコシダーゼ阻害活性
を有することを特徴としている。具体的には、酢酸ナト
リウム緩衝液（ｐｌ＋５．３）中、アーモンド由来のβ
−グルコシダーゼを酵素とし且つバラニトロフェニル−
β−Ｄ−グルコピラノシドを基質とした加水分解反応系
に、本発明の阻害剤を添加したときの阻害率をｐ−ニト
ロフェノールの生成量を測定することにより決定した。

その結果、本発明物質は、最終濃度１００４／ｍｌで９
４％のβ−グルコシダーゼ阻害を示した（第２表）。

また、β−グルコシダーゼ活性を５０％阻害するときの
阻害剤濃度ＩＣ９，は１９／＃／ｍｌであった。

本発明物質は、正常細胞に対してよりもむしろ腫瘍細胞
に対して特に強い細胞毒性を示した。即ち、マウス細胞
系Ｌ９２９に対しては１０００鱈／ｍｌでもその細胞増
殖を全く阻害せず、一方、ヒト子宮頚癌由来の１（ｅｈ
細胞に対しては　１２５埒／ｍｌで強い細胞毒性を与え
た。この結果は、本発明物質が低毒性であり且つ抗癌作
用を有することを示唆するものである。

従って、本発明はさらに、本発明の物質を有効成分とし
て含有する抗腫瘍剤をも提供する。

本発明の抗腫瘍剤は主として経口投与されるが、緊急を
要する場合には静脈内投与を行ってもよく、本発明は投
与方法によって特に限定されない。成人１日当たりの投
与量は投与方法によって異なる。

主たる投与方法である経口投与の場合で言えば、０．１
−１．０　ｇが好ましい１日当たりの投与量である。し
かし、本発明は投与量によって限定されない。また、有
効成分である本発明物質は、上述のとおり、正常細胞に
対してきわめて低毒性である。

以下の実施例により、本発明をさらに詳細に説明するが
、本発明はその実施例に限定されるものではない。

（実施例） 天日で乾燥後、粉砕されたアナカルジウム・オクシデン
タレ・エル（＾■ｃ＊ｒｄｉｏｍ　　ｏｃｃｉｄｅｎｔ
ｓｌｅＬ、）の果皮を含む種子（もしくは実）５０ｇを
加熱器、撹拌機及びコンデンサーを備え付けたＩＬのガ
ラス容器に入れ、ヘキサン２００ｍ１を加え、撹拌下、
室温で半日間抽出した。抽出後、濾過により抽出液と固
体残渣とに分離し、次いで固体残渣を同様の操作でさら
に２回抽出した。３回分の抽出液を合わせて減圧下にヘ
キサンを加熱留去し、ついで得られた残渣を凍結乾燥し
て茶褐色の粘稠液状物質１６．３　ｇを得た。この液状
物質をヘキサン抽出物と称する。

次に、この液状物質６００．を、Ｉ＋ｉｇｓｅ１ｇｅｌ
　６Ｇ　（メルク社製）を充填したシリカゲルカラム（
３４φ×６２　ｍ　）上に載置し、クロロホルム：メタ
ノールの混合溶媒１００：　ｏ、　　１００：　２及び
１００：５を用いて１００ｍ１ずつこの順番で段階溶出
した。このとき、活性成分は溶媒比１００：５で溶出さ
せた画分中に回収された。活性画分を集め、減圧下に溶
媒を蒸発乾固した。

得られた残渣を上記と同様のカラム上に載置し、クロロ
ホルム：メタノール二濃アンモニア水の混合溶媒１００
：　Ｏ：　０．１　、　１００：　１　：　Ｏ，ｔ　。

１００：　２　：　０．１及び１００：　５　：　０．
１を用いてそれぞれ１００ｍ１ずつこの順番で段階溶出
した。このとき、活性成分は溶媒比１１１１１：　５　
：　０．１で溶出させた両分中に回収された。活性画分
を含む溶出液を減圧乾固した。

更に、得られた残渣を５ｅｐｈａ＋Ｉｅｘ　ＬＨ−２０
（ファルマシア社製）を充填したカラム（１９φＸ５８
０ｍ）上に載置し、メタノールを溶媒として分子ふるい
クロマトグラフィーを行い、活性画分を集め、減圧下に
乾固して赤褐色油状物２５■を得た。この物質はチロシ
ンキナーゼ阻害活性とβ−グルコシダーゼ阻害活性をと
もに有していた。この阻害剤の物理化学的及び分光学的
性質は以下のとおりであった。

（ａ）シリカゲル薄層クロマトグラフィー二Ｒｔ　＝０
−４６　（ＣＨａ！３　：　ＭｅＯＨ：　ＮＨ４０ト１
０　：　２Ｇ、　Ｏ５）。

（ｂ）溶解性：ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル、
メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶、水に不溶で
ある。

（ｃ）ＵＶスペクトル：濃度１０／＃／ｍｌ−メタノー
ルのときλ。ａｍ　３１１０　ｎ−０ （ｄ）　　’Ｈ−ＮＭＲスペクトル：（ＣＤＣｊ！ｓ。

δ）　０．９　、　１．０−１．７　、　２．０．２．
７５．　５．０゜５．３　、　５．８．６．５５．６．
９５．７．５　ｐｐｍ　０［１１］　Ａ４３１細胞膜の
調製 ヒト上皮癌Ａ４３１細胞を底面積１７５７のプラスチッ
クフラスコ中で５％子牛血清を含むＤＭＥＭ（Ｄｎｌｂ
ｅｃｃｏ’　ｓ　ｍｏｄｉ＋ｉｃｄ　Ｅｓｇｌｅ″ｓ　
ｌ１ｅｄｉ■）で３７℃で培養した。培地を捨て、ハー
ベスティングソル−シ＊　：／　（０，０５Ｍホ’ｙ酸
、０．１５１　Ｐｉｓ（１１，１ｍＭＭＫＣｆｈ　、１
ｍＭ　　Ｃ５Ｑｌｚ　、ｐＨ７，２）適量で洗浄後ハー
ベスティングソルーションを少量加えて、増殖したＡ４
３１細胞をラバーポリースマンではがし、４５ＤＸ　ｇ
で１０分間遠心して沈澱した細胞を集めた。

細胞の体積と等量のハーベステインクソルーションを加
えよく懸濁させ、−８０℃で保存した。

以下に示した手順は０℃で行った。上記で得たＡ　４３
１細胞の懸濁液をエクストラクティングソルーシａ　ン
（０，０２Ｍ＊”酸、０．２ｍＭ　ＥＤＴ＾、ｐＨＩ’
１１．２）１００倍量中に滴下し分散させた。１０分間
撹拌することにより、細胞は浸透圧で破裂し細胞膜は断
片状になり、細胞質はゲル状になった。

８倍量の（１，５Ｍホウ酸溶液（ｐＨ１［１，２）を添
加し５分間撹拌後、ナイロンガーゼでゲル状の細胞質を
除き　４５０Ｘ　ｇで１０分間遠心して得た上澄みを１
２、０ＯＯＸ　ｇで３０分間遠心後得られた粗細胸膜画
分を３５％（Ｗ／Ｗ）ショ糖を含むＰ　Ｂ　Ｓ　（ｐｂ
ｏｓｐｈＮｅｂｕｆｆｅｔｅｄ　ｇｔｌｉｎＣ）溶液上
にのせ、その上にＰＢＳを少量のせて２４．０ＯＯＸ　
ｇで１時間遠心分離を行った。３５％ショ糖ＰＢＳ溶液
界面に集まった細胞膜断片を集め、Ｐ　Ｂ　Ｓヲ添加シ
１００．０００ｘ　ｇテｌＯ分間遠心分離を行い、得ら
れた沈澱をＡ４３１細胞膜標品とした。

［ｍ］チロシンキナーゼ阻害活性の測定ヒト上皮癌Ａ　
４３１細胞から調製した細胞膜溶液（４■／ｍｌ蛋白質
）　１１Ｕｊ！に、ＥＧＦ　（１〜／ｍ１）６μｓを含
有する　２０　ｍＭ　ＨＥＰＥＳバッファ（ＨＥＰＥ８
０．４８ｇ、ＭｎＣｊ！２１９．７ａ及びＢ　Ｓ　Ａ　
１２．５ｗ／１０Ｇｍｌ水、　ｐＨ７，２）溶液２９成
と上記［Ｉ］で調製した本発明物質（２■／ｍｌ；溶媒
ジメチルスルホキシド）６誠とを加え、０℃で１０分間
ブレインキュベートした。次に、ペプチド基質ＲＲ−８
ＲＣ（ペプチド研究新製；　１２．５■／　ｍｌ）　５
１１１２及び［γ−３２Ｐｌ　ＡＴＰ　（ＮＥＮ製；　
９　Ｃｉ／ｍｍｏｌ）　１０ＩＪｉをさらに加えて０℃
で３０分間反応させた。１０％トリクロロ酢酸水溶液２
５ｉ１１１と牛血清アルブミン（１０■／ｍ１）６μと
を加えて反応を止めた後、Ｎ、　０ＯＯＢで５分間遠心
分離を行い、上清を得た。この上清（４５Ｊｊｊりをフ
ォスフオセルロースペーパー（ワットマンＰ８１．　２
ｃｍｘ２ａｍ）に吸着させた後、３０％酢酸水溶液中で
１０分間洗浄し、さらに１５％酢酸水溶液中で１０分間
ずつ３回洗浄した。最後に、ぺ一ハーヲアセトン洗浄、
乾燥し、フオスフオセルロース紙の３２ｐ−放射活性を
、チェレンコフ効果により液体シンチレーションカウン
ター（Ｂｅｃｋｍｉｎ社製ＬＳ−５０００ＴＤ）を用い
て測定した。このとき、本発明物質を添加しない場合の
チロシンキナーゼ活性を１００％として、阻害率を算出
した。結果を第１表に示した。

第　　１　　表 阻害物質濃度′） （〜／ｍｌ） 阻害率 （％） ０．７５ １２．５ 本発明物質（ヘキサン抽出物）では、濃度依存的にチロ
シンキナーゼ阻害率が向上し、濃度１００埒／ｍｌのと
き阻害率ｇＯ％を示した。また、阻害率５０％となると
きの阻害剤濃度ＩＣ，。は１９１Ｒ１／　ｍｌであった
。

［ＩＶ］　β−グルコシダーゼ阻害活性２５ｍＭの酢酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ５，３）　　４４０μを試験管
に入れ、それにアーモンド由来β−グルコシダーゼ（シ
グマ社、０．２■／ｍｌ）を６μｓ、本発明物質を５ｍ
（２０■／ｍ１）ずつ添加し３７℃で、３分間ブレイン
キュベートした。本発明物質は予めＤＭＳＯに溶解させ
て用いた。基質として５０ｍＭのｐ−ニトロフェニル−
β−グルコピラノシド（シグマ社）を５０／ｉｌ添加後
、１０分間３７℃でインキュベートした。１０分後、　
０４Ｍグリシンバッファー　（ｐＨ１０，４）を２．５
ｍｌ添加して反応を止め、分光光度計（東京ＰＩＩＯＴ
ＯＥＬＥＣＴＲＩＣＣｏ、　ＬＴＤ、）で４１０　ｎｍ
で反応後に生じる、パラニトロフェノールの吸光度を測
定した。このとき、本発明阻害剤を添加しない場合のβ
−グルコシダーゼ活性を　１００％として阻害率を産出
した。

その結果、本発明物質は表２に示すようなβ−グルコシ
ダーゼ阻害活性をもつことが明らかとなった。また阻害
曲線から求めたＩＣ９Ｑは１９〜／ｍｌであった。

第 表 阻害物質濃度 （縛／　ｍｌ　） ネ） 阻害率 （％） あるため、この物質は癌遺伝子産物の機能の解明や癌の
化学療法に有効に使用し得ることが期待される。

【図面の簡単な説明】

第１図は、アナカルジウム・オクシデンタレ・エルの果
皮を含む種子から単離した本発明物質の４し杏 ＵＶスペクトルであり、また第２Ａ及び２Ｂ図はその　
ＩＨ−ＮＭＲスペクトルである。 （発明の効果）

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. （１）アナカルジウム・オクシデンタレから得ることが
   でき、下記の物性値： （ａ）薄層クロマトグラフィー： Ｒ＿ｆ＝０．４６（担体シリカゲル、展開溶媒クロロホ
   ルム：メタノール：濃アンモニア水＝ １０：２：０．０５）、 （ｂ）ＵＶスペクトル： λ＿ｍ＿ａ＿ｘ３００ｎｍ（溶媒メタノール） （ｃ）＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル： 溶媒重クロロホルム；δｐｐｍ：０．９、１．０〜１．
   ７、２．０、２．７５、５．０、５．３、５．８、６．
   ５５、６．９５、７．５、及び （ｄ）溶媒に対する溶解性： ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル、メタノール、ジ
   メチルスルホキシドに可溶性であり、水に不溶性である を有し、並びにチロシンキナーゼ阻害活性及びβ−グル
   コシダーゼ阻害活性を有する物質。
2. （２）アナカルジウム・オクシデンタレがアナカルジウ
   ム・オクシデンタレ・エルである請求項１に記載の物質
   。
3. （３）請求項１に記載のアナカルジウム・オクシデンタ
   レから得ることができる物質の製造方法であって、アナ
   カルジウム・オクシデンタレを溶媒で抽出する段階、及
   び 得られた抽出物を液体クロマトグラフィーに掛けて精製
   する段階 を包含することを特徴とする方法。
4. （４）前記アナカルジウム・オクシデンタレがアナカル
   ジウム・オクシデンタレ・エルである請求項３に記載の
   方法。
5. （５）前記溶媒が炭化水素溶媒、ハロゲン化炭化水素溶
   媒、アルコール溶媒、又はこれらの混合溶媒である請求
   項３又は４に記載の方法。
6. （６）前記炭化水素溶媒がヘキサンである請求項５に記
   載の方法。
7. （７）前記ハロゲン化炭化水素溶媒がクロロホルムであ
   る請求項５に記載の方法。
8. （８）前記アルコール溶媒がメタノールである請求項５
   に記載の方法。
9. （９）前記液体クロマトグラフィーがシリカゲルクロマ
   トグラフィー及び分子ふるいクロマトグラフィーを包含
   する請求項３〜８のいずれか一項に記載の方法。
10. （１０）請求項１に記載のアナカルジウム・オクシデン
    タレから得ることができる物質を有効成分として含有す
    る抗腫瘍剤。
11. （１１）前記アナカルジウム・オクシデンタレがアナカ
    ルジウム・オクシデンタレ・エルである請求項１０に記
    載の抗腫瘍剤。