JPH0413969A

JPH0413969A - 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬

Info

Publication number: JPH0413969A
Application number: JP11665890A
Authority: JP
Inventors: Takashi Sakata; 孝坂田
Original assignee: Sysmex Corp
Current assignee: Sysmex Corp
Priority date: 1990-05-02
Filing date: 1990-05-02
Publication date: 1992-01-17
Anticipated expiration: 2014-05-31
Also published as: JP2897781B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、血液試料中の白血球およびヘモグロビンを測
定する為の試薬に関するものである。

〔従来の技術および発明が解決しようとする課題〕血液
試料中の白血球数およびヘモグロビンを測定することは
、白油病や貧血症等の臨床診断にとって極めて重要であ
る。

まず、白血球数の潰ｉ、定は、顕微＆観察による祝算法
が基本の方法となっている。しかし、視算法ではＴｕｒ
ｋ液等で赤血球を溶血させ白血球な染色した後、計算板
上の白血球な顕＆誂で一個一個確認しながらＶえるため
、非常に手間と時間が必要である。

ところで、血液試料中の白血球数の枳ｉｊ定においては
、自動血液分析装置による方法も広く行われている。通
常、自動血液分析装置による白血球数の曲」定（計数〕
は、まず血液試料に界面活性剤等を含む赤血球溶解剤’
ｌ’ｆｆｉ加することにより１選択的に血液試料中の赤
血球な溶解させ、主として白血球のみが残った白血球測
定用試料な作製し１次に白血球測定用試料を、自動血液
分析装置内の検出部に設けられた細い通路または細孔を
通過させ、このとき、−個一個の白血球に対応して検出
部で発生される電気的または光学的信号を検出すること
によりなされる。

さらに、近年では、赤血球溶解剤を改良することにより
、白血球の変形を極力少なくし、得られる信号強度の差
によって白血球を顆粒球、単球。

リンパ球などのクラス処分類し、カウントする装置も実
現されている。この自動血液分析装＃Ｌを用いれば、上
記の視算法よりも遥かに簡便に白血球を分類・引数する
ことができる。

一方、ヘモグロビンの測定は１通常シアンメトヘモグロ
ビン法ヲ用いておこなわれる。シアンメトヘモグロビン
法は血液試料にノニオン注界面活性剤等な含む赤血球溶
解剤を添加し、赤血球中に含まれるヘモグロビンな溶出
し２次に紡出したヘモグロビンシフェリシアン化カリウ
ムなどの酸化剤の作用によって酸化し、メトヘモグロビ
ンとする、最後にシアンイオンを添加することによって
メトヘモグロビンをシアンメトヘモグロビン（ＨｉＣＮ
）　　とすることにより℃安定なヘモグロビン測定用試
料を作製する。作製されたヘモグロビン測定用試料の特
定波長の吸光度を測定する方法によってヘモグロビン感
度を測定する。この方法は国際標準法として飴められて
いる。この方法で作製した試料は非常に安定な物質であ
るか、酸化剤をもちいてヘモグロビンの酸化な行うため
、酸化が終了するまでに、十数分な必要とする。このた
め、自動血液分析装置においては、赤血球溶血剤の組成
ケ改良することにより酸化に必要な時間を短縮し、数十
秒で反応を終了させ、ヘモグロビン測定な可能にし℃い
る。さらに、同時に白血球の測定も可能である。ところ
が、シアンメトヘモグロビン法では毒物であるシアンを
用いているため、試薬の取扱に危険が伴い、さらに、測
定後の廃液は１次亜塩素酸ナトリウムなどな用いてシア
ンな分解した後に廃棄する必敷かあり、廃液処理に煩わ
しさがある。

（ｌＯ）そのため、赤血球をノニオン囲界面活註剤のみで溶解し
、ヘモグロビンをメトヘモグロビンに酸化することなく
オキシヘモグロビン（ＨｂＯ２）Ｋｋ化させ、＃！ｆ定
波長の吸光度な測定する方法（オキシヘモグロビン法）
も行われる。ｒ、うになってき℃いる。オキシヘモグロ
ビン法では、シアンを使用しないため、試薬の取扱に危
険もなく、廃液処理に煩わしさもない。

しかし２オキシヘモグロビン法においては、メトヘモク
ロビン含量の高い血液試料は正しく測定できないという
問題ケ有する。これは、メトヘモグロビンがオキシヘモ
グロビンに転化しないためである。

例として表１に血液試料の、メトヘモクロビン含量″を
変化させた場合のオキシヘモグロビン法ト本発明の実施
例１との測定結果の比較データを示す。オキシヘモグロ
ビン法ではメトヘモグロビン金部′が増加するにしたが
ってヘモグロビン値が低下する。

この問題を解決する方法として、大礪らにより（ｏＪて、中性緩衝液（ｐＨ７，２）中にドデシル硫酸ナトリ
ウムまたは、等量でラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）
（アニオン性界面活註剤〕およびトリトンＸ−１００（
ノニオン性界面活性剤）を含有してなるヘモグロビン洞
」定用試楽が、クリニカル・バイオケミストリー（Ｃ１
ｉｎ、　ＢｉＯＣｈｅｍ、　）　１５巻８３（１９８２
）に教示され℃いる。この方法では赤血球をＳＬＳ並び
にトリトンｘ−ｉｏｏの働きで溶解し、溶出したヘモグ
ロビンをＳＬＳの働きでメトヘモグロビンとすると同１
時にＳＬＳヘモグロビンに転化する。この方法では、メ
トヘモグロビンクコ影響馨受けることなく、血液中σ）
ヘモグロビン９度を狙Ｊ定でき、しかも、シアンを含ま
ないので廃液処理の煩わしさもない。しかし、この方法
では、ヘモグロビン測定と同時に白血球ヲ餓定すること
ができない。また１日本国特許公開公報昭６１−１４８
５６９　ｒシアニドを含まないヘモグロビン試薬」にお
いて、イオン註界面活囲剤を便ってヘモグロビンｋ　１
）ｌｉｊ定する試薬が公開されているか、この試薬でも
ヘモグロビン測定と同時に白血球？測定することかでき
ない。

以上のように、従来の技術では、シアンを含まない試薬
で、ヘモグロビン測定と同時に白血球を担１ｊ定するこ
と、さらに、メトヘモクロビン含量σ）高い血液試料の
ヘモグロビンを正しく邸」定することはできなかった。

表１．　　ヘモグロビン（Ｉｌｌ　Ｍｌｊ定に果（オキ
シヘモグロビン法ＶＳ実施例１）メトヘモグロビン含量　オキシヘモグロビン法　実施例
１０％　　　　　　　１６．６ｔ／ｌ　　　　１３．６
＆／Ａ５０％　　　　　　　１１．６５’／ｌ　　　１
３．１’／１１００％　　　　　　　　９．７　ｔ／ｌ
　　　　１３．６　Ｗ−／を本発明者はこｔもの問題を
解決するための試薬を特願平１−２７５２８０として先
に出願している。

これは赤血球溶解剤として使用するカチオン性界面活性
剤、ノニオン注界面活匠剤１両註界面活註削、あるいは
酸化剤の種類、内反を厳密に規定することＫより、はと
んど−時にヘモグロビンσ）溶出、メトｆヒケ行いヘモ
グロビン沖」定ナロ」能とし５さらに同時に白血球の測
定ケもｂ」能とする試薬である。しかし、この試薬では
、メトヘモグロビンを安定化する成分を含まないために
１表２の比較例４に示すように測定試料作！！！後ヘモ
グロビン値が経時的に僅かに変化するという間趙かある
。

これは、全自動タイプの試料調製並びに画定な自動的に
行う装置では試料θ匂製後画定までσ〕時間が短く、且
つ散音に規定されるため間順とはならず先の発明の効果
を否定するもσノではない。

一方、現在市場では１泥足装置のコス）Ｙ下げるために
、試ＴＦ＝＋？′ｌ−製？人か行い測定のみ装置が行う
、半自動タイプの装置も使用されている。

半自動タイプの装置では試料作製後、測定筺での時間が
不規則であり１通常試料作製からｆｆ１ｌｉ定まで数分
〜数十分のバラツキがある。

これらの装置に使用するためには、試料作製直後より少
なくとも数十分の間ヘモグロビン値を安定化する心安が
ある。

以上刃ように、従来力技術では、シアンを含まない試薬
で、ヘモグロビンと同時に白血球ヲ泪１１定し、さらに
、メトヘモグロビン含量の商い血液試料のヘモグロビン
を正しく測定し、且つ長時間安定なヘモグロビン測定用
試料を得ることはできなかった。

〔課題ケ解決するための手段および作用〕上述の従来技
術における問題点を解決するために本発明者は鋭意訴究
の結果、以下のような試薬を創製するに至った。

すなわち、以下の条件促洞だす、ｍｌ中の白血球の算定
及びヘモグロビン−度を向Ｊ定するための試薬であって
、シアンを含ぽずに、ヘモグロビンを長時間安定に保つ
ことを特徴とする試薬である。

１）血液中の赤血球を溶血し、ヘモグロビンケ醗化さ七
：うる誤度の四級アンモニウム塩（構造ａ）あるいは、
ピリジニウム塩（模造ｂ）の組成物よりなる群の中から
選ばれたカチオン系界面活性剤の少なくとも１種類な含
むこと。

構造ａＲ１：０８〜Ｃ２ｏアルキル基、アルケニル基、又はア
ルキニル基。

Ｒ２−Ｒ４：ＣエルＣ８アルキル基、アルケニル基、又
はアルキニル基。

Ｘ：陰イオン基構造ｂｎ　：　７〜１９０）１に数。

Ｘ：陰イオン基１１〕構造ｃ−ｅｙ有するカチオン、ノニオン、両性界
面活性剤よりなる群の中から選はれた少なくとも１種類
を言むこと。

（１５〕構造ＣＲ□：０８〜Ｃ２ｏアルキル基、アルケニル基、又はア
ルキニル基。

Ｒ２−Ｒ３：Ｃ□〜Ｃ８エルＣ８アルキル基ニル基。

又はアルキニル基Ｘ：陰イオン基構造ｄＲ−Ｒ−（ＯＨ２０Ｈ，０）ｎ−ＨＲ□：０８〜Ｃ２ｏアルキル基、アルケニル基、又はア
ルキニル基ｎ：１０〜５０の整数構造ｅＲ□：０８〜Ｃカアルキル基Ｒ２〜Ｆ１３：Ｃ□〜Ｃ８エルＣ８アルキル基ニル基。

又はアルキニル基１１ｉ）　構造ｔ’）に示すヘモグロビン安定化剤より
なる群の中から速はれた少なくとも１批類を含み、その
−度が工゛）に示１１度であること。

ｔ″〕　イミダゾール及びその誘導体１ｍ度０．００１
〜２０ｆｆ／ｌＲ□、Ｒ２ニーＨあるいは一〇□〜ｃ４の低級アルキル
基１−ｆ３ニーＨあるいは−Ｇ１〜ｃ４の低級アルキル基
あるいはフェニル基ｉＶ）　　ｌの範囲が３．０〜９ｏの溶液であること。

■）前記四級アンモニウム塩＆園度が、０．１〜１５．
０グ／Ｌの範囲にあること。

Ｖｌ）　　前記ピリジニウム塩総−度が、０．１〜１５
．０（五８）Ｐ／１ｔｙ）範囲におること。

ｖｌｌ）前記ノニオン性界面活性剤総嬢度が、０．１〜
１５．０５’／ｌの範囲にあること。

ｖｉ＋Ｄ　　前記両註界面活往剤総蒐度が、０．１〜１
５．０ｆ／ｌσ）範囲におること。

ＩＸ）　　前記カチオン註界面市註剤総濃度が、０．１
〜１５．０？／４σ〕範囲にあること。

上記試薬中の成分り−ｆ３）’ｌ適宜組み合わせること
により、白血球を例えはリンパ球；単球、好酸球、好塩
基球；好中球など２つあるいは３つに分画することもで
きる。

一般Ｋ、ヘモグロビンの酸１定１ｔ’１ｆ８ｉｌ述した
ように赤血球中０）ヘモグロビンを適当な赤血球溶解剤
の作用によって溶出し、浴出したヘモグロビン中のヘム
鉄を赤血球溶解剤並びに溶液中の酸素の作用または、適
当な酸化剤の作用によって酸化し、生成したメトヘモグ
ロビンにシアンイオン等の従来のメトヘモグロビン安定
ｆヒ剤な作用させることにより安定化し、安定化したヘ
モグロビン試料の吸光度ヲ徂１」定することによって行
われる。しかしながら、この従来のメトヘモグロビン安
定化剤の存在は、前述した廃液処理問題の原因ともなつ
℃いる０メト”モグロビン安走化剤を含まな（・メトヘ
モグロビンはｍｔ＋述したシアンメトヘモグロビン。

オキシヘモグロビンなどに比べ経時的に不女定であり、
且つ溶液のｐＨによって吸光度が変イヒするなどの理由
によっ℃ヘモグロビンの１Ｕｌｊ定には使用されていな
かった。本発明者らは、先に、上述したまうなメトヘモ
グロビン安定化剤を含まづ゛に、メトヘモグロビンを安
定化するために特願平１−２７５２８０の試薬を創製し
た。この試薬ではます、主に４級アンモニウム塩あるい
は、ピリジニウム塩の作用によってｆｆｌ＋液試料中の
亦皿球？選択的に溶解し、赤血球中σ〕ヘモグロビンな
溶出させる。

陣出したヘモグロビンはほとんど鈎時に変性（立体構造
の変化〕を生じ、試薬中に溶存している酸素ニヨリヘモ
グロビン中０）ヘム鉄は２１曲から３価に酸ｆヒさねメ
トヘモグロビンとなる。

単一種類のカチオン囲界面活註剤な作用させた場合は、
上述の方法で作成したメトヘモグロビンと同様の間組が
あるが５この試薬では、さらに。

カチオン、ノニオン、両性界面活性剤など？適当を添加
することによってヘモグロビンの変性の程度をＶ＠整し
、安定なメトヘモグロビンを得ることができる。さらに
ｐ）ＩＩ７）影響は後述するように緩衝剤を添加するこ
とによって解決される。メトヘモグロビンか安定化する
作用機構は明確にはなっていないが恐らく１分子構造σ
ノ異なる被数の界面ｈｎ剤をヘモグロビンに作用させる
ことにより。

メトヘモグロビンへの変性（立体構造の変化）の程度を
一定の水準で固定する一作用があると考えられる。特願
平１−２７５２８０の試薬では白血球も破壊されること
なく残るため白廂珠数σ）　出１ｊ定もｏＪ能である。

本発明の試薬では、さらにメトヘモグロビンを安定にす
るために前述のヘモグロビン安定化剤を添加している。

ヘモグロビン安定化剤の効果は。

表２に示す。

本発明のヘモグロビン安定化剤の作用ＦＭ−は明確にな
っていないが、恐らくヘモグロビン安定化剤の分子構造
中にある。室累原子の孤立電子対がメトヘモグロビン中
のヘム鉄にキレート結合し。

結果としてメトヘモグロビンを安定化し℃いるものと考
える。

本試薬では、さらに厳密に界面活註剤嬢度を規定するこ
とにより、白血球な２つあるいは６つに分画することか
ｈ」能である。

本発明の試薬の組成９１を次に示す。

組成例１　　　　　　　　　　　　　９度範囲ラウリル
トリメチルアンモニウム　　　０．１〜１５．０５’ク
ロライド（四級アンモニウム塩）ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタ　　　０．１〜１５．
０？イン（両性界面活性剤〕４−フェニルイミダゾール　　　　　Ｏ，ＣＩ　０１〜
２．Ｏｆリン酸ｉ＆衝削　　　　　　　　　　　　　　
１／１５〜１／６０Ｍ塩化ナトリウム　　　　　　　　　　　　１．０〜１０
．０？精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
１を組成例２　　　　　　　　　　　　　　濃度範囲ミ
リスチルトリメチルアンモニラ　　　０．１〜１２．Ｏ
ｆｆムブロマイド（四級アンモニウム塩）ポリオキシエテレンノニルフェニ　　　０．１〜１２．
０５’ルエーテル（ノニオン註界面后註剤）４−フェニルイミダゾールｏ、ｏｏｉ〜２．Ｏｚリン酸緩衝剤１／１５〜１／６０Ｍ塩化ナトリウム１．０〜１０．０ｆｉ’ 精製水１を組成例６感度範囲４−７エニルイミダゾールｏ、ｏｏｉ〜２．Ｏｚリン酸緩衝剤１７１５〜１／６０Ｍ塩化ナトリウム１．０〜１０．０ｇ精製水１を組成例１〜６は、四級アンモニウム塩と両性界面活性剤
等の界（３）活性剤と０３作用で赤血球を溶面し溶出し
たヘモグロビンなメト化し安定化し、さらに４−フェニ
ルイミダゾールの作用にょっ℃長時間安定化させたもの
である。

組成例１では四級アンモニウム塩と両性界面活性剤の組
み合わせで、白血球の測定′ｉｋ：可能にしたものであ
り組成例２では四級アンモニウム塩とノニオン註界面活
性剤の組み合わせで、白血球を少なくとも２つに分画で
きるようにしたものであり。

組成例６では２種類の四級アンモニウム塩な組み合わせ
ることにより白血球を少なくとも６つに分画できるよう
にしたものである。

特許請求の範囲で６０載されている四級アンモニウム塩
の総瓢度とは１組成例乙の場合には、ラウリルトリメチ
ルアンモニウムクロライドの一度とセチルトリメチルア
ンモニウムクロライドの一度を加えた０、６１〜１２．
０１’）ｇ度範曲σノことな意味する。

組成例４　　　　　　　　　　　　　−度範囲うウリル
トリメテルアンモニウ　　　　１．ｏ〜１０．０ｇ−ム
クロライドイミダゾール０．３〜２０．０　？リン酸緩衝剤１７１５〜１　／６０Ｍ塩化ナトリウム精製水１．０〜１０．Ｏｚ１を両性界面活性剤によってヘモグロビンをメト化し、安定
化させ、さらにヘモグロビン安定化剤の作用によって長
時間ヘモグロビン＆安定化させたもので夛する。

なお、四級アンモニウム塩並びに各界面活性剤の一度を
調整することにより−１血球を２つ以上の東回に分画す
ることもＤＪ能である。組成例１〜４におい”Ｃ，ＩＪ
ン醒緩伽剤は浴液のｐＨＹ３．０〜９０の範囲内の任意
のｐＨに餉整するためのものであり、その他のクエン酸
、マレイン散、トリスなどの適当な緩衝剤であればいず
れの緩衝剤を用いてもよくリン酸に限定されるものでは
ない。さらに、好ましいｐＨ範囲は５．０〜８．０であ
る。ｐＨが６．０以下になると、白血球へのダメージが
大きくなり白血球（Ｍｉ＋定が困難となる。また、ｐＨ
が９０以上になるとヘモグロビンの経時安定性が悪くな
る。塩化す）　ＩＪウムは電気伝導度を自動血液分析装
置に″Ｃ測定できるレベルに調整するためのものであり
、水浴液中でイオンに解離するような無機塩あるいは有
機塩であれはいずれでもよい。

特許請求の範囲に示されている各成分の一度は、他の希
釈液等な必要とセす、試薬σ）中に血液な加えるだけで
街１１定できるような状態の時の濃度を示しているが、
希釈液と溶解試薬を一定の比率で混合してヘモグロビン
や白血球な潰１゜定するような従来からある装置に使用
する場合には、装置の混合比率にあわせて、各界面活性
剤等の成分感度會変えることも可能である。その場合に
は、特許請求の範囲に示されている各成分の一度は、希
釈液と溶解試薬を混合した液における濃度を表す。

本発明によると１〕ヘモグロビンと白血球の測定が１つの試料で口］ｕ
ｐであり、１１）メトヘモグロビン含鈑の商い血液試料も測定でき
。

（２す１１１〕　　シアンを含まないので、廃液処理の煩わし
さもなく。

１■〕　ヘモグロビンが長時間安定な試薬が供給できる
。

さらにこの試薬を自動血液分析装置に用いた場合。

ヘモグロビン測定用試料作成部と白面Ｋ　１１＋定用試
料作製部を別々に持つ必敷かなくなる為、装置が簡単で
コストも安くなる。

〔実ｈｆレリ〕

下記組成の試薬を１ｉＪｉ８Ｉ製し１表２に示１−ヘモ
グロビン安定化剤を添加した場合−の効果を示す。

襄度ラウリルトリチルアンモニウム　　　　　１．２５Ｐク
ロライドラウリルジメチルアミノ酢酸べ　　　　　１．００５’
タイン精製水　ｔ表２のヘモグロビン変化音並びに変化率は次式にて算出
した。

ヘモグロビン変化量二試料作製後６０分のヘモグロビン測定値−に耕作製後２
０秒のヘモグロビン測定値ヘモグロビン測定値二（ヘモグロビン変化量／試料作ａ投２０秒のヘモグロビ
ン測定値）ｘｌｏｏ測定装置は全てＦ−８００Ｃ束亜医用電子株式会社製〕
をもちいた。

表２の比較例１はシアンメトヘモグロビン法（国際標準
法）を用いて測定した場合のものであり、ヘモグロビン
の酸化に時間がかかるために表２に示すようにヘモグロ
ビン値が試料作成後２０秒から６０分までの間に大きく
変化している。比較例２は、自動血液分析装置に用いら
れている。

自動化シアンメトヘモグロビン法であり、変１ヒ餘は十
分小さい。

比較例６は上記の組成σノうちラウリルジメチルアミン
酢酸ベタインを除いて、単一の界面活性剤（ラウリルト
リメチルアンモニウムクロライド〕でメトヘモグロビン
とした場合のヘモグロビン測定例を示す。メトヘモグロ
ビンが安定化されていないために、ヘモグロビン値は試
料作成後２０秒から６０分σ）間に大きく変化する。

比較例６の組成にさらに両性界面活性剤であるラウリル
ジメチルアミノ酢酸ベタイン？加えた比較例４（特願平
１−２７５２８０の組成例）では変化量は比較例６に比
べ減少する。

さらに本発明の試薬であるヘモグロビン安定化剤ｆＫ：
添加した組成（実施例１〜４）では、変化蓋は比較１１
Ｐ１１４に比べさらに減少している。

第１図に、従来法ＣＦ−８００Ｃ束亜医用電子株式会社
製〕にて測定〕による白血球数測定結果と実施例１の試
薬による白血球数測定結果との相関図を示す。

相関係数γ＝１．０００．回帰直線Ｖ＝１．００１Ｘ＋
０、３３１　　と非常に高い相関を示し℃いる。

８ＰＬ２図に、従来法〔シアンメトヘモグロビン法（国
際標準法）〕によるヘモグロビン値測定結果と（３０〕実施例１の試薬によるヘモグロビン値測定結果との相闇
図ケ示す。

相関係数γ＝０．９９８．回帰直＃ｙ＝１．０１３ｘ＋
Ｃ１，０９５と非常に鳥い相ｒＩＡを示し℃いる。

表１に示すようにメトヘモグロビン普が増えたために、
オキシヘモグロビン法によるヘモグロビン測定値が低下
した場合でも、実施例１の試薬によるヘモグロビン測定
値は変化が見られず一定の値を示す。

実施例　５下記組成の試薬を―製した。

一度ラウリルトリチルアンモニウム　　　　　　ｉ、ｓｏｙ
クロライドセチルトリチルアンモニラムク　　　　　０．４１１０
ライドリン酸緩衝液　　　　　　　　　　　　　　１／２５Ｍ
（ｐＨ６，０）１３付近に調ｆＡ）４−フェニルイミダゾール１００η （３す精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　１を実施
例　６下記組成の試薬を調製した。

ｍ　度ラウリルトリチルアンモニウム　　　　３．２０？クロ
ライドセチルトリチルアンモニラムク　　　　　０．２０？ロ
ライドリン酸緩＃象　　　　　　　　　　　　　　１／２５Ｍ
（ｐＨ６，０）１６付近に肖！！り４−フェニルイミダゾール　　　　　　　１［］ＯＩｎ
ｇ精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　１６第６
〜５図にそれぞれ実施例１．５．６の試薬を使った時の
白血球粒度分布を示す。第６〜５図において、縦軸は血
球の相対度数を表し、横軸は自動血液分析装置によって
血球を麹Ｊ定したときに得られる血球信号の相対強度（
丁なわち血球の大きさ〕な表す。実施例１０試薬ケ用い
た場合には。

第６図に示すように白血球は単峰の粒度分布を示す。実
施例５の試薬を用いた場合には、第４図に示すように白
血球は領域Ａと領域Ｂの２つに分かれた粒度分布を示す
。領域Ａはリンパ球の集団であり、領域Ｂはリンパ球以
外の白血球の集団である。実施例６の試薬を用いた場合
には、第５図に示すように白血球は領域Ａ、領領域と領
域りの６つに分かれた粒度分布を示す。領域Ａはリンパ
球の集団、領域Ｃは単球、好酸球、好塩基球の集団、領
域りは好中球の集団である。

〔発明の効果〕

以上より本発明の試薬によれば、従来とｌｂ」じ測定値
かえられる上に１〕　ヘモグロビンと白血球の測定が１つの試料で可能
であり、しかも白血球を分画することもできる。

１１〕　　メトヘモグロビン含量の高い血液試料も正し
く測定できる。

１１１〕　　シアン叫の毒物を含まないので％廃液処理
の必要が無くなる。

ＩＶ）ヘモグロビンが長時間安定な試薬が供給でき（３
３〕る。

【図面の簡単な説明】

第１図は、従来法ＣＦ−８００（東亜医用電子株式会社
製〕に’Ｃｍ１１定〕による白血球！！２測定結果と実
施例１の試薬による白血球数測定結果との相関図である
。第２図は、従来法〔シアンメトヘモグロビン法（国際標
準法）〕によるヘモグロビン１１１１匝定結果と実施例
１の試薬によるヘモグロビン値沖」定結果との相関図で
ある。第３〜５図はそれぞれ実施例１．５．６の試薬を使った
時１７）白血球粒度分布を示すグラフである。第３〜５図において、縦軸は血球の相対度骸を表し、横
軸は自動血液分析装置によっ℃血球を測定したとぎに得
られる血球信号の相対強度（すなわち血球の大きさ）を
表す。第６図において白血球は単峰の粒度分布な示す。第４図に示す白血球は領域Ａと領域Ｂの２つに分かれた
粒度分布を示す。領域Ａはリンパ球の集団であり、領域
Ｂはリンパ球以外の白血球の集団（３りである。第５図に示す白血球は領域Ａ、領領域と領域りの６つに
分かれた粒度分布を示す。領域Ａはリンパ球の集団、領
域Ｃは単球、好酸球、好塩基球の集団、領域りは好中球
σ）集団である。特許出願人　東亜医用電子株式会社

Claims

【特許請求の範囲】１、以下の条件を満たす、血液中の白血球の算定および
ヘモグロビン濃度を測定するための試薬であって、シア
ンを含ますにヘモグロビンを長時間安定に保つことを特
徴とする試薬。ｉ）血液中の赤血球を溶血し、ヘモグロビンを酸化させ
うる濃度の四級アンモニウム塩（構造ａ）あるいは、ピ
リジニウム塩（構造ｂ）の組成物よりなる群の中から選
ばれたカチオン系界面活性剤の少なくとも１種類を含む
こと。構造ａ ▲数式、化学式、表等があります▼ Ｒ＿１：Ｃ＿８〜Ｃ＿２＿０アルキル基、アルケニル基
、又はアルキニル基、Ｒ＿２〜Ｒ＿４：Ｃ＿１〜Ｃ＿８アルキル基、アルケニ
ル基、又はアルキニル基、Ｘ＾−：陰イオン基構造ｂ ▲数式、化学式、表等があります▼ ｎ：７〜１９の整数、Ｘ＾−：陰イオン基ｉｉ）構造ｃ〜ｅを有するカチオン、ノニオン、両性界
面活性剤よりなる群の中から選ばれた少なくとも１種類
を含むこと。構造ｃ ▲数式、化学式、表等があります▼ Ｒ＿１：Ｃ＿８〜Ｃ＿２＿０アルキル基、アルケニル基
、又はアルキニル基、Ｒ＿２〜Ｒ＿３：Ｃ＿１〜Ｃ＿８アルキル基、アルケニ
ル基、又はアルキニル基、Ｘ＾−：陰イオン基構造ｄ　Ｒ＿１−Ｒ＿２−（ＣＨ＿２ＣＨ＿２Ｏ）＿ｎ
−ＨＲ＿１：Ｃ＿８〜Ｃ＿２＿０アルキル基、アルケニ
ル基、又はアルキニル基、Ｒ＿２：Ｏ，▲数式、化学式、表等があります▼，又は
ＣＯＯ，ｎ：１０〜５０の整数構造ｅ▲数式、化学式、表等があります▼ Ｒ＿１：Ｃ＿８〜Ｃ＿２＿０アルキル基、Ｒ＿２〜Ｒ＿３：Ｃ＿１〜Ｃ＿８アルキル基、アルケニ
ル基、又はアルキニル基ｉｉｉ）構造ｆ）に示すヘモグロビン安定化剤よりなる
群の中から選ばれた少なくとも１種類を含み、その濃度
がｆ）に示す濃度であること。ｆ）イミダゾール及びその誘導体、濃度０．００１〜２０ｇ／ｌ ▲数式、化学式、表等があります▼ Ｒ＿１、Ｒ＿２；−Ｈあるいは−Ｃ＿１〜Ｃ＿４の低級
アルキル基Ｒ＿３：−Ｈあるいは−Ｃ＿１〜Ｃ＿４の低級アルキル
基あるいはフェニル基ｉｖ）ｐＨの範囲が３．０〜９．０の溶液であること。ｖ）前記四級アンモニウム塩総濃度が、０．１〜１５．
０ｇ／ｌの範囲にあること。ｖｉ）前記ピリジニウム塩総濃度が、０．１〜１５．０
ｇ／ｌの範囲にあること。ｖｉｉ）前記ノニオン性界面活性剤総濃度が、０．１〜
１５．０ｇ／ｌの範囲にあること。ｖｉｉｉ）前記両性界面活性剤総濃度が、０．１〜１５
．０ｇ／ｌの範囲にあること。ｉｘ）前記カチオン性界面活性剤総濃度が、０．１〜１
５．０ｇ／ｌの範囲にあること。２、四級アンモニウム
塩よりなる群の中から選ばれた少なくとも２種類を含み
、四級アンモニウム塩の総濃度が０．１〜１２．０ｇ／
ｌの範囲にあり、白血球を少なくとも２つに分画するこ
とができる請求項１の試薬。６、四級アンモニウム塩よりなる群の中から選ばれた少
なくとも１種類を含み、四級アンモニウム塩の総濃度が
０．１〜１２．０ｇ／ｌの範囲にあり、ノニオン性界面
活性剤よりなる群の中から選ばれた少なくとも１種類を
含みノニオン性界面活性剤の総濃度が０．１〜１２．０
ｇ／ｌの範囲にあり、白血球を少なくとも２つに分画す
ることができる請求項１の試薬。４、四級アンモニウム塩よりなる群の中から選ばれた少
なくとも１種類を含み、四級アンモニウム塩の総濃度が
０．１〜１２．０ｇ／ｌの範囲にあり、両性界面活性剤
よりなる群の中から選ばれた少なくとも１種類を含み、
両性界面活性剤の総濃度が０．１〜１２．０ｇ／ｌの範
囲にあり、白血球を少なくとも２つに分画することがで
きる請求項１の試薬。５、四級アンモニウム塩よりなる
群の中から選ばれた少なくとも１種類を含み、四級アン
モニウム塩の総濃度が０．１〜１２．０ｇ／ｌの範囲に
あり、カチオン性界面活性剤よりなる群の中から選ばれ
た少なくとも１種類を含み、カチオン性界面活性剤の総
濃度が０．１〜５．０ｇ／ｌの範囲にあり、白血球を少
なくとも２つに分画することができる請求項１の試薬。６、四級アンモニウム塩よりなる群の中から選ばれた少
なくとも１種類を含み、四級アンモニウム塩の総濃度が
０．１〜１２．０ｇ／ｌの範囲にあり、ピリジニウム塩
よりなる群の中から選ばれた少なくとも１秒類を含み、
ピリジニウム塩の総濃度が０．６〜１０．０ｇ／ｌの範
囲にあり、白血球を少なくとも２つに分画することがで
きる請求項１の試薬。７、四級アンモニウム塩よりなる
群の中から選ばれた少なくとも２種類を含み、四級アン
モニウム塩の総濃度が２．２〜５．０ｇ／ｌの範囲にあ
り、白血球を６つに分画することができる請求項１の試
薬。８、四級アンモニウム塩よりなる群の中から選ばれた少
なくとも１種類を含み、四級アンモニウム塩の総濃度が
６．０〜１２．０ｇ／ｌの範囲にあり、ノニオン性界面
活性剤よりなる群の中から選ばれた少なくとも１種類を
含み、ノニオン性界面活性剤の総濃度が１．０〜１２．
０ｇ／ｌの範囲にあり、白血球を３つに分画することが
できる請求項１の試薬。９、四級アンモニウム塩よりなる群の中から選ばれた少
なくとも１種類を含み、四級アンモニウム塩の総濃度が
１．０〜１０．０ｇ／ｌの範囲にあり、両性界面活性剤
よりなる群の中から選ばれた少なくとも１種類を含み、
両性界面活性剤の総濃度が０．１〜１０．０ｇ／ｌの範
囲にあり、白血球を３つに分画することができる請求項
１の試薬。１０、四級アンモニウム塩よりなる群の中から選ばれた
少なくとも１種類を含み、四級アンモニウム塩の総濃度
が１．０〜１０．０ｇ／ｌの範囲にあり、ピリジニウム
塩よりなる群の中から選ばれた少なくとも１種類を含み
、ピリジニウム塩の総濃度が１．０〜５．０ｇ／ｌの範
囲にあり、白血球を３つに分画することができる請求項
１の試薬。