JPH04148685A - 環状プラスミド - Google Patents
環状プラスミドInfo
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- JPH04148685A JPH04148685A JP27037790A JP27037790A JPH04148685A JP H04148685 A JPH04148685 A JP H04148685A JP 27037790 A JP27037790 A JP 27037790A JP 27037790 A JP27037790 A JP 27037790A JP H04148685 A JPH04148685 A JP H04148685A
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- JP
- Japan
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- plasmid
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- rhodococcus
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- microbes
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は新規なプラスミドに関し、さらに詳しくはＲｈ
ｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属に属する微生物に由来する新規な
環状プラスミドに関する。
ｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属に属する微生物に由来する新規な
環状プラスミドに関する。
Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属に属する微生物は、ニトリル
類を水和して対応するアミド類を生産するための微生物
触媒として知られており、またＲｈｏｄｏｃｏｃｅｕｓ
ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ種に属する微生物が極めて高性
能のニトリル水和活性を有することが知られている。
類を水和して対応するアミド類を生産するための微生物
触媒として知られており、またＲｈｏｄｏｃｏｃｅｕｓ
ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ種に属する微生物が極めて高性
能のニトリル水和活性を有することが知られている。
このような状況下、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属の宿主−
ベクター系の開発が以前から期待されていた。しかしな
がら、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属に属する菌株について
はこれらの微生物を宿主とするに適したベクターの開発
は遅れており、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属においてプラ
スミドの見いだされた株はＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｓ
ｐ、 ＨＩ３−＾株（Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、 １
７０．６８３−６４５ （１９８８） ）をはしめ僅
か数株にすぎない、そのため、さらに、Ｒｈｏｄｏｃｏ
ｃｃｕｓ属に属する菌株から工業的に利用し得る微生物
を育種、改良するための新しいベクターの開発が強く要
望される。
ベクター系の開発が以前から期待されていた。しかしな
がら、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属に属する菌株について
はこれらの微生物を宿主とするに適したベクターの開発
は遅れており、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属においてプラ
スミドの見いだされた株はＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｓ
ｐ、 ＨＩ３−＾株（Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、 １
７０．６８３−６４５ （１９８８） ）をはしめ僅
か数株にすぎない、そのため、さらに、Ｒｈｏｄｏｃｏ
ｃｃｕｓ属に属する菌株から工業的に利用し得る微生物
を育種、改良するための新しいベクターの開発が強く要
望される。
本発明者らはＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｉｉに属する菌
株を用いて工業的に有用な宿主−ベクター系を開発すべ
く鋭意研究を行った結果、該属に属する微生物から工業
的に有用な宿主−ベクター系におけるベクターとして利
用可能な新規な環状プラスミドを見い出し、本発明を完
成した。
株を用いて工業的に有用な宿主−ベクター系を開発すべ
く鋭意研究を行った結果、該属に属する微生物から工業
的に有用な宿主−ベクター系におけるベクターとして利
用可能な新規な環状プラスミドを見い出し、本発明を完
成した。
すなわち、本発明は、大きさが約２．６ｋｂであり、制
限酵素切断部位数がＳａｃＩ：２、ＢａｍＨｌ：ｌ、Ｐ
ｖｕＩＩ：１、Ｓｃａ Ｉ ： １，５ｐｈＩ：１およ
びＸｈｏｌ：１であることを特徴とする、Ｒｈｏｄｏｃ
ｏｃｃｕｓ属に属する微生物由来の環状プラスミドであ
る。
限酵素切断部位数がＳａｃＩ：２、ＢａｍＨｌ：ｌ、Ｐ
ｖｕＩＩ：１、Ｓｃａ Ｉ ： １，５ｐｈＩ：１およ
びＸｈｏｌ：１であることを特徴とする、Ｒｈｏｄｏｃ
ｏｃｃｕｓ属に属する微生物由来の環状プラスミドであ
る。
本発明の環状プラスミドは、具体的には、例えばＲｈｏ
ｄｏｃｏｃｃｕｓ ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ ＡＴＣＣ
４２７６、ＡＴＣＣ１４３４９およびＡＴＣＣ１４３４
８から得ることができ、いずれも、大きさが約２．６ｋ
ｂで且つ下記第１表に示す制限酵素に対する分解特性を
有する新規な環状プラスミドである。以下これらのプラ
スミドを、それぞれ、ｐＲｃＯＯｌ、ｐＲｃＯＯ２、ｐ
ＲＣ００３と称する。
ｄｏｃｏｃｃｕｓ ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ ＡＴＣＣ
４２７６、ＡＴＣＣ１４３４９およびＡＴＣＣ１４３４
８から得ることができ、いずれも、大きさが約２．６ｋ
ｂで且つ下記第１表に示す制限酵素に対する分解特性を
有する新規な環状プラスミドである。以下これらのプラ
スミドを、それぞれ、ｐＲｃＯＯｌ、ｐＲｃＯＯ２、ｐ
ＲＣ００３と称する。
第
１表
次に本発明の実施例を示す。
実施例１
（＋）ブースミ′の
Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ Ａ
ＴＣＣ４２７６％ ＡＴＣＣ１４３４９およびＡＴＣＣ
１４３４Ｂを、それぞれ４００ｍ１のＭＹ培地（ポリペ
プトン０．５χ、バクトイ−ストエキス０．３χ、マル
ツエキス０．３χ、グルコース１χ）ニテ培養を開始す
ル、 ＯＤ６６０＝０．１５〜０．２（７）頃にヘニ’
ｉ ！７７ Ｇ ０．５０／ｍｌを加える。 ０Ｄ６６
０＝１．０まで培養後、遠心により菌体を回収する。菌
体を４０ｍ１ Ｔ Ｅ Ｓ （１０ｍＭ Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣＩ（ｐＨ８）、 １０ｍＭ ＮａＣ１１＋
ｅＭ ＥＤＴＡ＞ｔＳＳ液液洗浄後、１１−１の５０ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ（ｐＨ８）／１２．５２ シェー
クロース／ｌｏｏｍＭ ＮａＣ１／１ｍｇ／ｍｌリゾチ
ームに懸濁し、３７°Ｃにて３時間振盪する。
ＴＣＣ４２７６％ ＡＴＣＣ１４３４９およびＡＴＣＣ
１４３４Ｂを、それぞれ４００ｍ１のＭＹ培地（ポリペ
プトン０．５χ、バクトイ−ストエキス０．３χ、マル
ツエキス０．３χ、グルコース１χ）ニテ培養を開始す
ル、 ＯＤ６６０＝０．１５〜０．２（７）頃にヘニ’
ｉ ！７７ Ｇ ０．５０／ｍｌを加える。 ０Ｄ６６
０＝１．０まで培養後、遠心により菌体を回収する。菌
体を４０ｍ１ Ｔ Ｅ Ｓ （１０ｍＭ Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣＩ（ｐＨ８）、 １０ｍＭ ＮａＣ１１＋
ｅＭ ＥＤＴＡ＞ｔＳＳ液液洗浄後、１１−１の５０ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ（ｐＨ８）／１２．５２ シェー
クロース／ｌｏｏｍＭ ＮａＣ１／１ｍｇ／ｍｌリゾチ
ームに懸濁し、３７°Ｃにて３時間振盪する。
これに０．６ｍｌの０．５Ｍ ＥＤＴＡ 、 ２．４ｍ
ｌ の５Ｍ ＮａＣｌ、４．４１の４χ５０Ｓ−０，７
Ｍ ＮａＣｌ を順次加え、緩やかに混合し氷上で１８
時間静置する。４°Ｃにて６５．ＯＯＯｘｇで１時間遠
心し上清を得、これに５０χポリエチレングリコール（
ＭＷ ＝ ６．０００）を４．６１加える。氷上で３時
間静置し、１ 、 ＯＯＯｘｇで５分遠心する。沈澱物
を５１のＴＢＳ緩衝液に溶解し、ＣｓＣ１を７．５ｇ、
１．５ ｍｇ／ｍｌ 臭化エチジュウムーＴＢＳ緩衝液
を２−１加え混合した。この溶液を４２時間１３０．
ＯＯＯｘｇの密度勾配遠心分離にかけた。
ｌ の５Ｍ ＮａＣｌ、４．４１の４χ５０Ｓ−０，７
Ｍ ＮａＣｌ を順次加え、緩やかに混合し氷上で１８
時間静置する。４°Ｃにて６５．ＯＯＯｘｇで１時間遠
心し上清を得、これに５０χポリエチレングリコール（
ＭＷ ＝ ６．０００）を４．６１加える。氷上で３時
間静置し、１ 、 ＯＯＯｘｇで５分遠心する。沈澱物
を５１のＴＢＳ緩衝液に溶解し、ＣｓＣ１を７．５ｇ、
１．５ ｍｇ／ｍｌ 臭化エチジュウムーＴＢＳ緩衝液
を２−１加え混合した。この溶液を４２時間１３０．
ＯＯＯｘｇの密度勾配遠心分離にかけた。
紫外線照射により検出されたプラスミド画分を分取した
後、ｎ−ブタノールで処理し臭化エチジュウムを除いた
。ＴＥＩｌ街液（４０＋ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ（ｐＨ
８）、１ｍＭ ＥＤＴＡ）に対して透析後、エタノール
沈澱により精製プラスミド画分を得た。これを０．７χ
アガロースゲル電気泳動に供し、ゲルを臭化エチジュウ
ムで染色することによりプラスミドの存在を確認した。
後、ｎ−ブタノールで処理し臭化エチジュウムを除いた
。ＴＥＩｌ街液（４０＋ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ（ｐＨ
８）、１ｍＭ ＥＤＴＡ）に対して透析後、エタノール
沈澱により精製プラスミド画分を得た。これを０．７χ
アガロースゲル電気泳動に供し、ゲルを臭化エチジュウ
ムで染色することによりプラスミドの存在を確認した。
（２）ブースミ の
上記のように調製したプラスミドの一部を０．７χアガ
ロースゲル電気泳動に供した。この際、サイズマーカー
として大腸菌プラスミドｐＵｃ１Ｂ、ｐＵｃｌｌＢ、ｐ
ＢＲ３２２（各々２．６９ｋｂ、 ３．１６ｋｂ、４．
３６ｋｂ）を同時に泳動した。Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ
ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ ＡＴＣＣ４２７６、ＡＴＣＣ
１４３４９およびＡＴＣＣ１４３４８から得られたプラ
スミドは、それぞれｐＲＣｏｏｌ、ｐＲｃＯＯ２および
ｐＲｃＯＯ３と命名され、アガロースゲル電気泳動から
求められた大きさは、すべて約２．６ｋｂであった。
ロースゲル電気泳動に供した。この際、サイズマーカー
として大腸菌プラスミドｐＵｃ１Ｂ、ｐＵｃｌｌＢ、ｐ
ＢＲ３２２（各々２．６９ｋｂ、 ３．１６ｋｂ、４．
３６ｋｂ）を同時に泳動した。Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ
ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ ＡＴＣＣ４２７６、ＡＴＣＣ
１４３４９およびＡＴＣＣ１４３４８から得られたプラ
スミドは、それぞれｐＲＣｏｏｌ、ｐＲｃＯＯ２および
ｐＲｃＯＯ３と命名され、アガロースゲル電気泳動から
求められた大きさは、すべて約２．６ｋｂであった。
（３） による
上記のように調製したプラスミドの一部を各種制限酵素
と反応させ、反応終了後、反応液を０．７χアガロース
ゲル電気泳動および５χアクリルアミドゲル電気泳動に
より分析した。サイズマーカーとしてはラムダファージ
ＤＮＡのＨｉｎｄｌ［［消化物およびＰｓｔｌ消化物を
用い、プラスミドの各制限酵素断片のサイズを算出した
。ｐＲｃＯＯｌ、ｐＲｃＯＯ２およびｐＲｃＯＯ３は第
２表に示すような同一の制限酵素切断特性を示した。
と反応させ、反応終了後、反応液を０．７χアガロース
ゲル電気泳動および５χアクリルアミドゲル電気泳動に
より分析した。サイズマーカーとしてはラムダファージ
ＤＮＡのＨｉｎｄｌ［［消化物およびＰｓｔｌ消化物を
用い、プラスミドの各制限酵素断片のサイズを算出した
。ｐＲｃＯＯｌ、ｐＲｃＯＯ２およびｐＲｃＯＯ３は第
２表に示すような同一の制限酵素切断特性を示した。
第２表
第１図は、本発明のプラスミドｐＲｃＯＯ１、ｐＲｃＯ
Ｏ２およびｐＲｃＯＯ３の制限酵素切断地図である。
Ｏ２およびｐＲｃＯＯ３の制限酵素切断地図である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、大きさが約２．６ｋｂであり、制限酵素切断部位数
がＳａｃ I ：２、ＢａｍＨ I ：１、ＰｖｕII：１、Ｓ
ｃａ I ：１、Ｓｐｈ I ：１およびＸｈｏ I ：１であ
ることを特徴とするＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属に属する
微生物由来の環状プラスミド。 ２、微生物がＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｒｈｏｄｏｃｈｒ
ｏｕｓＡＴＣＣ４２７６、ＡＴＣＣ１４３４９およびＡ
ＴＣＣ１４３４８である請求項２記載の環状プラスミド
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27037790A JP2983602B2 (ja) | 1990-10-11 | 1990-10-11 | 環状プラスミド |
| US07/773,055 US5246857A (en) | 1990-10-11 | 1991-10-08 | Circular plasmids derived from the genus rhodococcus |
| DE69110402T DE69110402T2 (de) | 1990-10-11 | 1991-10-09 | Neue zirkuläre Plasmide aus der Gattung Rhodococcus. |
| EP91117212A EP0482426B1 (en) | 1990-10-11 | 1991-10-09 | Novel circular plasmids derived from the genus rhodococcus |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27037790A JP2983602B2 (ja) | 1990-10-11 | 1990-10-11 | 環状プラスミド |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04148685A true JPH04148685A (ja) | 1992-05-21 |
| JP2983602B2 JP2983602B2 (ja) | 1999-11-29 |
Family
ID=17485410
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27037790A Expired - Lifetime JP2983602B2 (ja) | 1990-10-11 | 1990-10-11 | 環状プラスミド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2983602B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0704530A2 (en) | 1994-08-04 | 1996-04-03 | Nitto Chemical Industry Co., Ltd. | A kanamycin resistance gene derived from microorganisms of the genus rhodococcus |
| JP2003009863A (ja) * | 2001-07-05 | 2003-01-14 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | プラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含むｄｎａ断片 |
| JP2005348674A (ja) * | 2004-06-11 | 2005-12-22 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ロドコッカス属細菌由来トリメトプリム耐性ジヒドロ葉酸還元酵素及びその遺伝子 |
| US7446187B2 (en) | 2003-10-31 | 2008-11-04 | Daiichi Fine Chemical Co., Ltd. | Plasmids and utilization thereof |
-
1990
- 1990-10-11 JP JP27037790A patent/JP2983602B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0704530A2 (en) | 1994-08-04 | 1996-04-03 | Nitto Chemical Industry Co., Ltd. | A kanamycin resistance gene derived from microorganisms of the genus rhodococcus |
| JP2003009863A (ja) * | 2001-07-05 | 2003-01-14 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | プラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含むｄｎａ断片 |
| WO2003004639A1 (fr) * | 2001-07-05 | 2003-01-16 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | Fragments d'adn contenant un gene qui possede une fonction associee a la proliferation autonome d'un plasmide |
| US7557202B2 (en) | 2001-07-05 | 2009-07-07 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | DNA fragments containing gene having function relating to autonomous proliferation of plasmid |
| US7446187B2 (en) | 2003-10-31 | 2008-11-04 | Daiichi Fine Chemical Co., Ltd. | Plasmids and utilization thereof |
| JP2005348674A (ja) * | 2004-06-11 | 2005-12-22 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ロドコッカス属細菌由来トリメトプリム耐性ジヒドロ葉酸還元酵素及びその遺伝子 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2983602B2 (ja) | 1999-11-29 |
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Legal Events
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