JPH0416470B2 - - Google Patents
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Description
本発明はテトラゾリウム塩を含有する溶液の安
定化方法に関する。詳しくは、シクロデキストリ
ンを用いた、テトラゾリウム塩を含有する溶液の
安定化方法に関する。 ニトロテトラゾリウムブルー（以下NO2−TB
と略記する。）等のテトラゾリウム塩は一般に酸
化還元電位が低く、還元されるとモノホルマザン
化合物又はジホルマザン化合物のようなホルマザ
ン化合物を生じ橙色〜青色を呈するので、臨床化
学、製薬化学、生化学、食品化学のような分野に
於て、脱水素酵素の測定用試薬として或は還元型
補酵素やスーパーオキサイドイオンのような還元
性物質の比色定量用試薬として広く用いられてい
る。 しかしながら、テトラゾリウム塩の水溶液は一
般に安定ではあるが、これに電子伝達体やジアホ
ラーゼ、或はチオール化合物等の還元性物質が共
存すると次第に分解し、これに着色を生じる為、
試薬盲検値の経時的上昇をきたし、誤差の原因と
なる。 テトラゾリウム塩を用いる、被検試料中の体液
成分の測定例を挙げると、スーパーオキサイドイ
オンO2を定量的に生成する反応で生成したスー
パーオキサイドイオンにより定量的にテトラゾリ
ウム塩が還元されて生成するホリマザン化合物の
呈色を定量する方法及び試薬がある。 このようなスーパーオキサイドイオンの生成反
応の例として、酸化酵素を基質に作用させ、スー
パーオキサイドイオンを生成させる酵素反応があ
るが、これは具体的実施に当り、好ましくは、チ
オール化合物、ペルオキシダーゼ、フエノール化
合物の共存下で、酸化酵素を基質に作用させ、ス
ーパーオキサイドイオンを生成させる酵素反応に
より、目的成分を定量するものである。このスー
パーオキサイドイオンをテトラゾリウム塩と定量
的に反応させて、テトラゾリウム塩が還元されて
生成するホルマザン化合物の呈色を定量的に測定
する場合は、チオール化合物の存在により、それ
らテトラゾリウム塩が不安定となり、チオール化
合物及びテトラゾリウム塩を含有する溶液が着色
して、目的成分の定量的測定を妨害する問題点が
生じる。 本発明者らは、上記問題点を解決すべく鋭意研
究の結果、テトラゾリウム塩を含有する溶液に、
特定のシクロデキストリン、即ち、β−シクロデ
キストリン又は／及びγ−シクロデキストリン
夫々単独又は混合して共存させることにより、テ
トラゾリウム塩が安定化されることを見い出し、
本発明を完成するに至つた。 即ち本発明は、β−シクロデキストリン又は／
及びγ−シクロデキストリンを共存させることを
特徴とする、部分構造 を有するテトラゾリウム塩を含有する溶液の安定
化方法の発明である。 α−シクロデキストリンにはそのような作用、
効果はなく、β−シクロデキストリン又はγ−シ
クロデキストリンにのみ、そのような作用、効果
が認められる。 これは、一般的には、それらβ−シクロデキス
トリン又はγ−シクロデキストリンによりテトラ
ゾリウム塩の包接作用によるものであると考える
ことができる。このようにしてβ−シクロデキス
トリン又は／及びγ−シクロデキストリンによつ
て安定化されたテトラゾリウム塩であつても、ス
ーパーオキサイドイオンによるテトラゾリウム塩
の還元反応は、充分速い反応速度で進行し、還元
反応で生成したホルマザンの呈色を測定すること
により、充分な感度でスーパーオキサイドイオン
を定量的に測定することができる。従つて、β−
シクロデキストリン又は／及びγ−シクロデキス
トリンを添加しない場合と発色率の変化はなく、
しかも、盲検値の上昇は抑制される。 又、本発明に関して用いるテトラゾリウム塩が
還元されて生成するホルマザン化合物は、ガラス
材質、プラスチツク材質などの被染体に強い染着
性を有し、ホルマザン化合物による被染体の染着
現象を惹起し、結果として、そのようなホルマザ
ン化合物が吸光度測定用の被染体であるセルなど
の染着して誤差を生じるなどの問題点を有する。 この問題は、ゼラチンを用いることにより解決
された。即ち、ゼラチンは、テトラゾリウム塩か
ら生成するホルマザン化合物の染着力を効果的に
抑制し、同テトラゾリウム塩が還元されて生成す
る色素であるホルマザン化合物による被染体の染
着を効果的に防止する効果を有するため、テトラ
ゾリウム塩を含有する溶液にゼラチンを存在させ
ると、そのような染着は効果的に防止される。 本発明は、β−シクロデキストリン又は／及び
γ−シクロデキストリンによつて、部分構造 を有するテトラゾリウム塩を安定化させる以外、
又はそのようなテトラゾリウム塩が還元されて生
成する、ホルマザン化合物による染着をゼラチン
を用いて効果的に防止する以外は、自体公知の方
法及び試薬によつても容易に実施をすることがで
きる。 部分構造
定化方法に関する。詳しくは、シクロデキストリ
ンを用いた、テトラゾリウム塩を含有する溶液の
安定化方法に関する。 ニトロテトラゾリウムブルー（以下NO2−TB
と略記する。）等のテトラゾリウム塩は一般に酸
化還元電位が低く、還元されるとモノホルマザン
化合物又はジホルマザン化合物のようなホルマザ
ン化合物を生じ橙色〜青色を呈するので、臨床化
学、製薬化学、生化学、食品化学のような分野に
於て、脱水素酵素の測定用試薬として或は還元型
補酵素やスーパーオキサイドイオンのような還元
性物質の比色定量用試薬として広く用いられてい
る。 しかしながら、テトラゾリウム塩の水溶液は一
般に安定ではあるが、これに電子伝達体やジアホ
ラーゼ、或はチオール化合物等の還元性物質が共
存すると次第に分解し、これに着色を生じる為、
試薬盲検値の経時的上昇をきたし、誤差の原因と
なる。 テトラゾリウム塩を用いる、被検試料中の体液
成分の測定例を挙げると、スーパーオキサイドイ
オンO2を定量的に生成する反応で生成したスー
パーオキサイドイオンにより定量的にテトラゾリ
ウム塩が還元されて生成するホリマザン化合物の
呈色を定量する方法及び試薬がある。 このようなスーパーオキサイドイオンの生成反
応の例として、酸化酵素を基質に作用させ、スー
パーオキサイドイオンを生成させる酵素反応があ
るが、これは具体的実施に当り、好ましくは、チ
オール化合物、ペルオキシダーゼ、フエノール化
合物の共存下で、酸化酵素を基質に作用させ、ス
ーパーオキサイドイオンを生成させる酵素反応に
より、目的成分を定量するものである。このスー
パーオキサイドイオンをテトラゾリウム塩と定量
的に反応させて、テトラゾリウム塩が還元されて
生成するホルマザン化合物の呈色を定量的に測定
する場合は、チオール化合物の存在により、それ
らテトラゾリウム塩が不安定となり、チオール化
合物及びテトラゾリウム塩を含有する溶液が着色
して、目的成分の定量的測定を妨害する問題点が
生じる。 本発明者らは、上記問題点を解決すべく鋭意研
究の結果、テトラゾリウム塩を含有する溶液に、
特定のシクロデキストリン、即ち、β−シクロデ
キストリン又は／及びγ−シクロデキストリン
夫々単独又は混合して共存させることにより、テ
トラゾリウム塩が安定化されることを見い出し、
本発明を完成するに至つた。 即ち本発明は、β−シクロデキストリン又は／
及びγ−シクロデキストリンを共存させることを
特徴とする、部分構造 を有するテトラゾリウム塩を含有する溶液の安定
化方法の発明である。 α−シクロデキストリンにはそのような作用、
効果はなく、β−シクロデキストリン又はγ−シ
クロデキストリンにのみ、そのような作用、効果
が認められる。 これは、一般的には、それらβ−シクロデキス
トリン又はγ−シクロデキストリンによりテトラ
ゾリウム塩の包接作用によるものであると考える
ことができる。このようにしてβ−シクロデキス
トリン又は／及びγ−シクロデキストリンによつ
て安定化されたテトラゾリウム塩であつても、ス
ーパーオキサイドイオンによるテトラゾリウム塩
の還元反応は、充分速い反応速度で進行し、還元
反応で生成したホルマザンの呈色を測定すること
により、充分な感度でスーパーオキサイドイオン
を定量的に測定することができる。従つて、β−
シクロデキストリン又は／及びγ−シクロデキス
トリンを添加しない場合と発色率の変化はなく、
しかも、盲検値の上昇は抑制される。 又、本発明に関して用いるテトラゾリウム塩が
還元されて生成するホルマザン化合物は、ガラス
材質、プラスチツク材質などの被染体に強い染着
性を有し、ホルマザン化合物による被染体の染着
現象を惹起し、結果として、そのようなホルマザ
ン化合物が吸光度測定用の被染体であるセルなど
の染着して誤差を生じるなどの問題点を有する。 この問題は、ゼラチンを用いることにより解決
された。即ち、ゼラチンは、テトラゾリウム塩か
ら生成するホルマザン化合物の染着力を効果的に
抑制し、同テトラゾリウム塩が還元されて生成す
る色素であるホルマザン化合物による被染体の染
着を効果的に防止する効果を有するため、テトラ
ゾリウム塩を含有する溶液にゼラチンを存在させ
ると、そのような染着は効果的に防止される。 本発明は、β−シクロデキストリン又は／及び
γ−シクロデキストリンによつて、部分構造 を有するテトラゾリウム塩を安定化させる以外、
又はそのようなテトラゾリウム塩が還元されて生
成する、ホルマザン化合物による染着をゼラチン
を用いて効果的に防止する以外は、自体公知の方
法及び試薬によつても容易に実施をすることがで
きる。 部分構造
【式】を有するテトラゾリウ
ム塩の典型の１は、有機残基R1、R2、及びR3を
その置換基として有する、一般式〔〕 で示されるモノテトラゾリウム塩であり、そのよ
うなモノホルマザン化合物〔〕として代表的な
ものに一般式〔〕 （但しX1及びX2は、−NO2又は−Ｈを表わし、
X3は、−OCH3、−Ｉ又は−Ｈを表わす。）で示さ
れるモノテトラゾリウム塩や構造式(b) で示されるモノテトラゾリウム塩があり、一般式
〔〕で示されるモノテトラゾリウム塩の一例と
して構造式(a) で示されるモノテトラゾリウム塩がある。 又、部分構造 を有するテトラゾリウム塩の他の典型の１は一般
式〔〕 （但しX4及びX5は、−NO2又は−Ｈを表わし、
X6は、−OCH3、−Ｉ又は−Ｈを表わす。）で示さ
れるジテトラゾリウム塩であり、そのような一般
式〔〕で示されるジテトラゾリウム塩の例とし
て構造式(c)乃至(f)で示されるジテトラゾリウム塩
がある。 又、部分構造
その置換基として有する、一般式〔〕 で示されるモノテトラゾリウム塩であり、そのよ
うなモノホルマザン化合物〔〕として代表的な
ものに一般式〔〕 （但しX1及びX2は、−NO2又は−Ｈを表わし、
X3は、−OCH3、−Ｉ又は−Ｈを表わす。）で示さ
れるモノテトラゾリウム塩や構造式(b) で示されるモノテトラゾリウム塩があり、一般式
〔〕で示されるモノテトラゾリウム塩の一例と
して構造式(a) で示されるモノテトラゾリウム塩がある。 又、部分構造 を有するテトラゾリウム塩の他の典型の１は一般
式〔〕 （但しX4及びX5は、−NO2又は−Ｈを表わし、
X6は、−OCH3、−Ｉ又は−Ｈを表わす。）で示さ
れるジテトラゾリウム塩であり、そのような一般
式〔〕で示されるジテトラゾリウム塩の例とし
て構造式(c)乃至(f)で示されるジテトラゾリウム塩
がある。 又、部分構造
【式】を有するテトラゾ
リウム塩が還元されて生成する部分構造
【式】を有するホルマザン化合
物であつて一般式〔〕で示されるモノテトラゾ
リウム塩から生成するモノホルマザン化合物は、
一般式〔〕（〔〕Ｈ）で示される。 又、一般式〔〕で示されるモノテトラゾリウ
ム塩又は一般式〔〕で示されるジテトラゾリウ
ム塩から生成するホルマザンは、各々一般式
〔〕（〔〕Ｈ）、一般式〔〕（〔〕Ｈ）で示さ
れる。 （但し、X4及びX5は、−NO2又は−Ｈを表わし、
X6は、−OCH3、−Ｉ又は−Ｈを表わす。） 又、構造式(a)乃至(f)で示されるテトラゾリウム
塩が還元されて生成するホルマザン化合物は、構
造式(g)（(a)Ｈ）乃至(l)（(f)Ｈ）で示される。 テトラゾリウム塩を安定化するβ−シクロデキ
ストリン又はγ−シクロデキストリンの濃度につ
いて述べると、溶液中、β−シクロデキストリン
を用いる濃度の一例としては、溶液中、通常、
0.01〜1.5重量／容量％、γ−シクロデキストリ
ンを用いる濃度の一例としては、同じく、溶液
中、通常、0.01〜10重量／容量％であり好ましく
は、β−シクロデキストリンは0.1〜0.5重量／容
量％、γ−シクロデキストリンは0.1〜３重量／
容量％が用いられる。又、β−シクロデキストリ
ンとγ−シクロデキストリンを上記濃度で任意の
比率で混合して用いてもよい。 テトラゾリウム塩から還元によつて生成するホ
ルマザン化合物の測定装置部材への染着を効果的
に抑制するゼラチンは、その平均分子料が20000
〜150000であるようなゼラチンであつて、その分
子量が例えば1000とか2000であるような水溶性ゼ
ラチンについてはそのような効果は特に効果的で
はないようにみえる。しかしながら、本発明で用
いるゼラチンは、その平均分子量が20000〜
150000であるようなゼラチンに限定されるもので
はなく、これら、その平均分子量が20000〜
150000であるようなゼラチンと同等な作用を有す
るものであれば、いずれのものでもよい。なお、
その由来は、動物の骨や皮などに由来するものが
市販されているが、これらに限られるこのではな
い。溶液中で効果的なゼラチン濃度は、通常、
0.1〜0.7重量／容量％、好ましくは、0.2〜0.5重
量／容量％である。 又、基質に作用してスパーオキサイドイオン
O2を生成させる酸化酵素による酵素反応の一例
としては、基質がグルコース、コレステロール、
グリセロール、グリセロール燐酸エステル、コリ
ン、アシルCoA、ピルビン酸、尿酸、キサンチ
ン又は乳酸であり、それらの基質に作用する酸化
酵素が各々グルコースオキシダーゼ、コレステロ
ールオキシダーゼ、グリセロールオキシダーゼ、
グリセロール燐酸エステルオキシダーゼ、コリン
オキシダーゼ、アシルCoAオキシダーゼ、ピル
ビン酸オキシダーゼ、ウリカーゼ、キサンチンオ
キシダーゼ又は乳酸オキシダーゼ等が挙げられ
る。このとき、共存させるチオール化合物の一例
として、還元型グルタチオン、チオグリコール
酸、メルカプトエタノール、チオサリチル酸、シ
ステアミン、システイン、ジメルカプトコハク
酸、又はコエンザイムＡ（CoA）が挙げられる。 本発明は、β−シクロデキストリン又は／及び
γ−シクロデキストリンを共存させることによ
り、部分構造 を有するテトラゾリウム塩を含有する溶液を安定
化する方法を提供するものであり、特に、基質に
酸化酵素を作用させてスーパーオキサイドイオン
O2を生成させる反応の具体的実施に当り存在さ
せるチオール化合物によるテトラゾリウム塩の不
安定化の現象を効果的に防止する技術を提供する
ものであつて、その結果、そのような反応を適用
して被検試料中の目的成分（例えば、体液成分）
を定量する測定の試薬盲検値の上昇を効果的に抑
制するなどを含めて、一般に、テトラゾリウム塩
が還元されて生成するホルマザン化合物の呈色を
測定する測定法及び試薬の臨床診断薬、製薬、化
学、生化学、食品化学の分野に於る適用を極めて
容易ならしめる点に於て斯業に貢献する所、極め
て大なるものがある。 以下に本発明に係る実施例を述べるがこれに限
定されるものではない。 実施例 １ 血清遊離コレステロールの測定 発色試液：各々、NO2−TBが20mg／dl、フエノ
ールが0.01％、トリトンＸ−100（ロームアンド
ハース社商品名）が0.1％、パーオキシダーゼ
（東洋紡績(株)製）が300u／dl、コレステロール
オキシダーゼ（天野製薬(株)製）が15u／dl、グ
ルタチオン（還元型）が20mg／dl、ゼラチンが
0.5％、β−シクロデキストリンが0.2％の濃度
になるように、0.1Mトリス緩衝液（PH8.0）に
これらを溶解した液を発色試液とする。 血清遊離コレステロールの測定：血清50μlをと
り、これに発色試液３mlを加えて、37℃恒温槽
中10分間加温後水を対照として波長560nｍに
おける吸光度を測定する。別に、血清の代りに
イオン交換水を用いて同様に操作して求めた吸
光度を試薬盲検値とする。 血清の代りに、コレステロールの200mg／dlな
るイソプロパノール溶液（標準液）を用いて同様
に操作して標準の吸光度を求める。次式により血
清中の遊離コレステロール濃度を算出する。 Es−EB／EStd−EB×200mg／dl ES：血清を用いたときの吸光度 EB：試薬盲検値 EStd：標準液を用いたときの吸光度 比較例 １ 血清遊離コレステロールの測定 発色試液：実施例１の発色試液からゼラチンとβ
−シクロデキストリンを除いた発色試液を調製
する。 血清遊離コレステロールの測定：実施例１に同
じ。 実施例１と比較例１の測定結果比較表
リウム塩から生成するモノホルマザン化合物は、
一般式〔〕（〔〕Ｈ）で示される。 又、一般式〔〕で示されるモノテトラゾリウ
ム塩又は一般式〔〕で示されるジテトラゾリウ
ム塩から生成するホルマザンは、各々一般式
〔〕（〔〕Ｈ）、一般式〔〕（〔〕Ｈ）で示さ
れる。 （但し、X4及びX5は、−NO2又は−Ｈを表わし、
X6は、−OCH3、−Ｉ又は−Ｈを表わす。） 又、構造式(a)乃至(f)で示されるテトラゾリウム
塩が還元されて生成するホルマザン化合物は、構
造式(g)（(a)Ｈ）乃至(l)（(f)Ｈ）で示される。 テトラゾリウム塩を安定化するβ−シクロデキ
ストリン又はγ−シクロデキストリンの濃度につ
いて述べると、溶液中、β−シクロデキストリン
を用いる濃度の一例としては、溶液中、通常、
0.01〜1.5重量／容量％、γ−シクロデキストリ
ンを用いる濃度の一例としては、同じく、溶液
中、通常、0.01〜10重量／容量％であり好ましく
は、β−シクロデキストリンは0.1〜0.5重量／容
量％、γ−シクロデキストリンは0.1〜３重量／
容量％が用いられる。又、β−シクロデキストリ
ンとγ−シクロデキストリンを上記濃度で任意の
比率で混合して用いてもよい。 テトラゾリウム塩から還元によつて生成するホ
ルマザン化合物の測定装置部材への染着を効果的
に抑制するゼラチンは、その平均分子料が20000
〜150000であるようなゼラチンであつて、その分
子量が例えば1000とか2000であるような水溶性ゼ
ラチンについてはそのような効果は特に効果的で
はないようにみえる。しかしながら、本発明で用
いるゼラチンは、その平均分子量が20000〜
150000であるようなゼラチンに限定されるもので
はなく、これら、その平均分子量が20000〜
150000であるようなゼラチンと同等な作用を有す
るものであれば、いずれのものでもよい。なお、
その由来は、動物の骨や皮などに由来するものが
市販されているが、これらに限られるこのではな
い。溶液中で効果的なゼラチン濃度は、通常、
0.1〜0.7重量／容量％、好ましくは、0.2〜0.5重
量／容量％である。 又、基質に作用してスパーオキサイドイオン
O2を生成させる酸化酵素による酵素反応の一例
としては、基質がグルコース、コレステロール、
グリセロール、グリセロール燐酸エステル、コリ
ン、アシルCoA、ピルビン酸、尿酸、キサンチ
ン又は乳酸であり、それらの基質に作用する酸化
酵素が各々グルコースオキシダーゼ、コレステロ
ールオキシダーゼ、グリセロールオキシダーゼ、
グリセロール燐酸エステルオキシダーゼ、コリン
オキシダーゼ、アシルCoAオキシダーゼ、ピル
ビン酸オキシダーゼ、ウリカーゼ、キサンチンオ
キシダーゼ又は乳酸オキシダーゼ等が挙げられ
る。このとき、共存させるチオール化合物の一例
として、還元型グルタチオン、チオグリコール
酸、メルカプトエタノール、チオサリチル酸、シ
ステアミン、システイン、ジメルカプトコハク
酸、又はコエンザイムＡ（CoA）が挙げられる。 本発明は、β−シクロデキストリン又は／及び
γ−シクロデキストリンを共存させることによ
り、部分構造 を有するテトラゾリウム塩を含有する溶液を安定
化する方法を提供するものであり、特に、基質に
酸化酵素を作用させてスーパーオキサイドイオン
O2を生成させる反応の具体的実施に当り存在さ
せるチオール化合物によるテトラゾリウム塩の不
安定化の現象を効果的に防止する技術を提供する
ものであつて、その結果、そのような反応を適用
して被検試料中の目的成分（例えば、体液成分）
を定量する測定の試薬盲検値の上昇を効果的に抑
制するなどを含めて、一般に、テトラゾリウム塩
が還元されて生成するホルマザン化合物の呈色を
測定する測定法及び試薬の臨床診断薬、製薬、化
学、生化学、食品化学の分野に於る適用を極めて
容易ならしめる点に於て斯業に貢献する所、極め
て大なるものがある。 以下に本発明に係る実施例を述べるがこれに限
定されるものではない。 実施例 １ 血清遊離コレステロールの測定 発色試液：各々、NO2−TBが20mg／dl、フエノ
ールが0.01％、トリトンＸ−100（ロームアンド
ハース社商品名）が0.1％、パーオキシダーゼ
（東洋紡績(株)製）が300u／dl、コレステロール
オキシダーゼ（天野製薬(株)製）が15u／dl、グ
ルタチオン（還元型）が20mg／dl、ゼラチンが
0.5％、β−シクロデキストリンが0.2％の濃度
になるように、0.1Mトリス緩衝液（PH8.0）に
これらを溶解した液を発色試液とする。 血清遊離コレステロールの測定：血清50μlをと
り、これに発色試液３mlを加えて、37℃恒温槽
中10分間加温後水を対照として波長560nｍに
おける吸光度を測定する。別に、血清の代りに
イオン交換水を用いて同様に操作して求めた吸
光度を試薬盲検値とする。 血清の代りに、コレステロールの200mg／dlな
るイソプロパノール溶液（標準液）を用いて同様
に操作して標準の吸光度を求める。次式により血
清中の遊離コレステロール濃度を算出する。 Es−EB／EStd−EB×200mg／dl ES：血清を用いたときの吸光度 EB：試薬盲検値 EStd：標準液を用いたときの吸光度 比較例 １ 血清遊離コレステロールの測定 発色試液：実施例１の発色試液からゼラチンとβ
−シクロデキストリンを除いた発色試液を調製
する。 血清遊離コレステロールの測定：実施例１に同
じ。 実施例１と比較例１の測定結果比較表
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】
コレステロール標準液の呈色液をガラスセルに
入れ18時間室温に放置後液を捨てて水洗し乾燥し
て染着度を観測した。 比較表１，２，３，４，５から明らかなよう
に、ゼラチンも、β−シクロデキストリンと、酵
素法によるコレステロールの定量には全く影響を
与えず、これらは、試薬盲検値の上昇を効果的に
抑制し、かつ発色試液を安定化し及び、呈色液に
よるガラスセルの染着を効果的に防止する。 実施例 ２ 血清遊離コレステロールの測定 発色試液：実施例１の発色試液からゼラチンを除
いた発色試液を調製する。 血清遊離コレステロールの測定：実施例１に同
じ。 実施例１と実施例２の測定結果比較表
入れ18時間室温に放置後液を捨てて水洗し乾燥し
て染着度を観測した。 比較表１，２，３，４，５から明らかなよう
に、ゼラチンも、β−シクロデキストリンと、酵
素法によるコレステロールの定量には全く影響を
与えず、これらは、試薬盲検値の上昇を効果的に
抑制し、かつ発色試液を安定化し及び、呈色液に
よるガラスセルの染着を効果的に防止する。 実施例 ２ 血清遊離コレステロールの測定 発色試液：実施例１の発色試液からゼラチンを除
いた発色試液を調製する。 血清遊離コレステロールの測定：実施例１に同
じ。 実施例１と実施例２の測定結果比較表
【表】
【表】
【表】
比較表１，２，３、から明らかなように、β−
シクロデキストリンは試薬盲検値の上昇を効果的
に抑制し、かつ発色基液の安定化の効果を有する
が、ガラスセルの染着を防止する効果は無い。 参考例 １ 血清遊離コレステロールの測定 発色試薬：実施例１の発色試液からβ−シクロデ
キストリンを除いた発色試液を調製する。 血清遊離コレステロールの測定：実施例１に同
じ。 実施例２と参考例１の測定結果比較表
シクロデキストリンは試薬盲検値の上昇を効果的
に抑制し、かつ発色基液の安定化の効果を有する
が、ガラスセルの染着を防止する効果は無い。 参考例 １ 血清遊離コレステロールの測定 発色試薬：実施例１の発色試液からβ−シクロデ
キストリンを除いた発色試液を調製する。 血清遊離コレステロールの測定：実施例１に同
じ。 実施例２と参考例１の測定結果比較表
【表】
【表】
比較表１，２から明らかなようにゼラチンには
試薬盲検値の上昇抑制効果は無いが、ガラスセル
に対する染着防止効果がある。 実施例 ３ 血清遊離コレステロールの測定 実施例１の発色試液の調製法に従い、β−シク
ロデキストリンの代りにγ−シクロデキストリン
を用い、これを0.3％の濃度に調製する。 血清遊離コレステロールの測定：実施例１に同
じ。 比較例 ２ 血清遊離コレステロールの測定 発色試液 実施例３の発色試液からゼラチンと
γ−シクロデキストリンを除いた発色試液を調製
する。 血清遊離コレステロールの測定：実施例１に同
じ。 実施例３と比較例２の測定結果比較表
試薬盲検値の上昇抑制効果は無いが、ガラスセル
に対する染着防止効果がある。 実施例 ３ 血清遊離コレステロールの測定 実施例１の発色試液の調製法に従い、β−シク
ロデキストリンの代りにγ−シクロデキストリン
を用い、これを0.3％の濃度に調製する。 血清遊離コレステロールの測定：実施例１に同
じ。 比較例 ２ 血清遊離コレステロールの測定 発色試液 実施例３の発色試液からゼラチンと
γ−シクロデキストリンを除いた発色試液を調製
する。 血清遊離コレステロールの測定：実施例１に同
じ。 実施例３と比較例２の測定結果比較表
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】
実験法は実施例１に同じ。
実施例 ４
血清遊離コレステロールの測定
発色試液：実施例１の発色試液の調製法に従い、
β−シクロデキストリンの代りに、β−シクロ
デキストリンとγ−シクロデキストリン１重
量：１重量の混合物0.2％を用いる。 血清遊離コレステロールの測定：実施例１に同
じ。 比較例 ３ 血清遊離コレステロールの測定 発色試液：実施例４の発色試液からゼラチン、及
びβ−シクロデキストリンとγ−シクロデキス
トリンの混合物を除いた発色試液を調製する。 血清遊離コレステロールの測定：実施例１に同
じ。 実施例４と比較例３の測定結果比較表
β−シクロデキストリンの代りに、β−シクロ
デキストリンとγ−シクロデキストリン１重
量：１重量の混合物0.2％を用いる。 血清遊離コレステロールの測定：実施例１に同
じ。 比較例 ３ 血清遊離コレステロールの測定 発色試液：実施例４の発色試液からゼラチン、及
びβ−シクロデキストリンとγ−シクロデキス
トリンの混合物を除いた発色試液を調製する。 血清遊離コレステロールの測定：実施例１に同
じ。 実施例４と比較例３の測定結果比較表
【表】
【表】
【表】
【表】
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ β−シクロデキストリン又は／及びγ−シク
ロデキストリンを共存させることを特徴とする、
部分構造 を有するテトラゾリウム塩を含有する溶液の安定
化方法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58095185A JPS59219270A (ja) | 1983-05-30 | 1983-05-30 | テトラゾリウム塩を含有する溶液の安定化方法 |
| AT84106143T ATE31060T1 (de) | 1983-05-30 | 1984-05-29 | Stabilisierung von tetrazoliumsalzen mit cyclodextrin. |
| EP84106143A EP0127179B1 (en) | 1983-05-30 | 1984-05-29 | Stabilization of tetrazolium salt with cyclodextrin |
| DE8484106143T DE3467755D1 (en) | 1983-05-30 | 1984-05-29 | Stabilization of tetrazolium salt with cyclodextrin |
| US06/930,094 US4837331A (en) | 1983-05-30 | 1986-11-13 | Stabilization of tetrazolium salts with cyclodextrins |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58095185A JPS59219270A (ja) | 1983-05-30 | 1983-05-30 | テトラゾリウム塩を含有する溶液の安定化方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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