JPH04183398A - Ｔｓ―２モノクロナール抗体とその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は溶連菌製剤Ｑ　Ｋ−４３２に対する新規なモノ
クロナール抗体であるＴＳ−２抗体及びその製造方法に
関する。

（従来の挟術〕 溶連菌製剤であるＯ　Ｋ−４３２は、インターフェロン
（以下ＩＦＮと略記する）やインターロイキン２などの
サイトカイン産生能を有し、ナチュラルキラー（以下Ｎ
Ｋと略記する〉細胞、マクロファージ或いは細胞障害性
（Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　）　Ｔ細胞のような免疫担当細
胞の誘導と活性化を介して抗腫瘍効果を発揮することが
知られている。

一方、ＩＦＮかマクロワ１−ジ、あるいはＮＫ細胞を活
性化することも知られている。

本発明者らは先にＯＫ−４３２に対するモノクロプール
抗体であるＴＳ−１抗体の取得に成功し、これを用いて
ＯＫ−４３２の組織移行の解析研究を行い、ＩＦＮがＯ
Ｋ−４３２により誘導、活性化されたマクロファージや
ＮＫＩ［胞に発現されることを報告した（Ｊ、ｆ３ｉｏ
１．ｆ？ｅｓｐｏｎｓｅ　Ｍｏｄ、、Ｖｏｌ、７．　Ｎ
ｏ２、ｐ２１２〜２２Ｂ、　（１９８Ｂ）　）。

（発明が解決しようとする課題） しかしながら、上記ＴＳ−１抗体ではＩ　ＦＮＩ導性が
菌体物であるＱ　Ｋ−４３２のどのような分画に存在す
るかをつきとめることができなかった。

本発明の課題は、ＯＫ−４３２のＩＦ＼産生を抑制し、
ＮＫ及びＬＡＫ活性も抑制するような抗体であって、Ｏ
Ｋ−４３２のＩＦＮ誘導能を有する分画と反応するＯ　
Ｋ−４３２に対する新規なモノクロナール抗体を創製し
、該抗体を用いて、ＯＫ−４３２のより優れた製剤を開
発するとともに新規で有用な免疫賦活剤を探索するとこ
ろ（ある。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは上記課題を解決するためＯＫ〜４３２に対
するモノクロナール抗体について研究をざらに行った結
果、Ｑ　Ｋ−４３２に対する新規なモノクロナール抗体
であるＴＳ−２抗体の取得に成功し、この抗体が前記課
題を解決する諸特性を有することを見出し本発明に到達
した。

すなわち、本発明は溶連菌製剤ＯＫ−４３２に対するモ
ノクロナール抗体であって、ＩｇＭのクラス、サブクラ
スを示し、ＯＫ−４３２の菌体表面の糖鎖抗原を認識し
、且つＯＫ−４３２のｒ−インターフエロン誘導能を有
する分画と反応することを特徴とするＴＳ−２七ノクロ
ノ一ル抗体、及びこれを得るための、腹腔内にＯＫ−４
３２を投与免疫したマウスより摘出した稗細胞とマウス
由来ミエローマ細胞を細胞融合し、ついて形成されたハ
イブリドーマからＯＫ−４３２に対する抗体産生能を有
するハイブリドーマをスクリーニングした後、クローニ
ングを行って得たハイブリドーマクローンを培養し、培
養液上清から目的抗体を精製するか又は該ハイブリドー
マクローンをマウス腹腔内に投与し、その腹水より目的
抗体を精製することを特徴とする工Ｓ−２モノクロナー
ル抗体の製造方法を提供するものである。

以下本発明の詳細な説明する。

本発明のＴＳ−２抗体は溶連菌製剤ＯＫ　−４３２に対
する新規なモノクロナール抗体であり、ＩｇＭのクラス
、サブクラスを示すものである。そして本発明者らによ
りこの抗体はＯＫ　−４３２菌体表面の糖鎖抗原を認識
することが後で説明する方法（より確認された。

又、該ＴＳ−２抗体はＯＫ−４３２のγ−ＩＦＮ産生を
ほぼ完全（抑制、ＮＫ及びＬＡＫ　（−Ｌｙｍｐｈｏｋ
ｉｎｅ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｋｉｌｌｅｒ　）活性も
抑制することかわかった。

ざらに、債に述べるＭｏｒｒｉｓｏｎの方法でＯＫ−４
３２より抽出した糖脂質標品（ＯＫ−ＰＳ）が、ＩＦＮ
産生、ＮＫおよびＬＡＫ活性誘導能を有するのに対し、
ＴＳ−２抗体の方はＯＫ−ＰＳのＩＦＮ産生をほぼ完全
に抑制し、ＮＫ及びＬＡＫ活性の誘導も抑制することが
わかった。一方、多糖体標品（Ｓｕ−ＰＳ）にはＩＦＮ
産生、ＮＫ及びＬＡＫ活性誘導能が認められなかった。

これらの結果から、本発明のＴＳ−２抗体はＯＫ−４３
２のＩＦＮ、待にγ−ＩＦＮの誘導能を有する分画と反
応することか確認された。

次に、本発明のＴＳ−２抗体の製造方法について説明す
る。

まず、６週齢の雌のＢａ１ｂ／ｃマウスの腹腔内にＯＫ
−４３２を５クリニカルユニツト（Ｋｌｉｎｉｓｃｈｅ
Ｅｉｎｈｅｉｔ、以下ＫＥと略す、なおＫＥはＯＫ　−
４３２の単位であり、ＩＫＥはその使用前に０．２ｄの
生理的食塩水中に懸濁させた０、１ｍｇの乾燥球菌（１
０７−１０８＞を含んでいる〕投与し免疫する。

１週間後（、さらにこのマウスの腹腔内にＯＫ−４３２
を５ＫＥ追加投与免疫し、この最終免疫の３日後に当該
マウスより無菌的に稗臓を摘出し、稗細胞を調製する。

得られた脾細胞とＢａ１ｂ／ｃマウス由来ミエローマ細
胞、Ｐ３−ＮＳ−１−Ａｇ４−１　（以下Ｎ５−１と略
す）　　（Ｋ６ｈｉｅｒ　Ｇ、　Ｈｉｌｓｔｅｉｒｉ　
Ｃ，、Ｅｕｒ、Ｊ　、　Ｉ　ｌｌＩｍｕｎｏ　ｌ、ｖｏ
ｌ　６．　ｐ５１１〜５１９（１９７６）　）をポリエ
チレングリコール４０００て常法（上記に６ｈｌｅｒと
Ｍｉｌｓｔｅｉｎの方法）に従い細胞融合を行う。

細胞融合後、形成したハイブリトーマのなかてＯＫ−４
３２に対する抗体産生能を有するものを酵素免疫測定法
（ＥＬＩＳＡと略す〉を用いてスクリーニングした。

スクリーニング後、抗ＯＫ−４３２モノクロナール抗体
を産生するハイブリドーマに対し限界希釈法によるクロ
ーニングを２〜３回行った。

なお、本発明においては、ＥＬＩＳＡ及び限界希釈法は
通常の方法、例えば岩崎、忙著［単クローン抗体ハイブ
リドーマとＥＬＩＳＡｊ講談社発行（１９８３年）に記
載されている方法で行った。

その結果、得られたＯ　Ｋ−４３２に対する抗体を産生
するハイブリトーマが丁５−２（微工研菌寄第１１８４
６号）である。

このハイブリトーマの産生抗体のクラス、サブクラスは
、二次抗体にマウス免疫グロブリンクラス、サブクラス
特異的家兎免疫グロブリン（ＭｏＡｂ−３ｕｂ−Ｉｓｏ
ｔｙｐｉｎｇ　Ｋｉｔ；Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いたＥＬ
ＩＳＡで決定する。

抗ＯＫ−４３２モノクロナール抗体の精製は、ハイブリ
ドーマ培養上清或いはハイブリトーマをＢａ１ｂ／Ｃマ
ウス腹腔内に投与し得た腹水より、２０　ｍ）ｆＴｒｉ
ｓ−ＨＣＩ緩衝液（ｐＨ８，０）を用いた５ｅｐｈａｃ
ｒｙｌＳ−３００（Ｐｈａｒ−ｍａｃｉａ）カラムクＯ
？トゲラフイーで行う。

次に本発明のＴＳ−２抗体の機能、性質を確認するため
に用いた測定法について説明する。

なお、担癌ヌードマウスは６週齢、雄のＢａ　Ｉ　ｂ、
／Ｃヌードマウス背部皮下ｔ、−１ｘ　ｔｏ７個のＨ５
Ｇ細胞〔ヒト唾液腺癌細胞：白砂、佐原等、　Ｃａｎｃ
ｅｒ　４８Ｐ７４５〜７５２　　（１９８１）　）を移
植し、移植後１ケ月で８〜１０．の腫瘍を発生した。担
癌ヌードマウスを使用した。

間接蛍光抗体法： ＯＫ−４３２＜２．５　ＫＥ　）を担癌ヌードマウスの
腫瘍内に投与して得た腫瘍より凍結切片を作製し、ＯＫ
−４３２と抗ＯＫ−４３２モノクロナール抗体の反応性
を間接蛍光抗体法で検索した。この場合、モノクロナー
ル抗体はビオチン化したものを用い、二次抗体はＦＩＴ
ＣＩＩ識アビジンを用いた。

゛ヨウ素酸及びプロナーゼ処し 抗ＯＫ−４３２モノクロナール抗体の特異性の検索とし
て、ＯＫ−４３２投与ヌードマウスの腫瘍の凍結切片を
過ヨウ素酸或いはプロナーゼで処理し、間接蛍光抗体法
を行った。過ヨウ素酸処理は５０　ｍ）！過ヨウ素酸を
含む１０　ｍＨＴｒｉｓ−ＨＣＩ緩衝液（ｐＨ７，４）
で４℃、２時間反応させることで行い、プロノー−し処
理ではタンパク量で０．１〜０，２ｍリ　・′…１のプ
ロノーし・を含む２００　ｍＭ酎耐酸７ンーニウム水溶
液（ｐｌ＋６．５＞で３７℃、１時間反応させた。

免疫電顕二 ＯＫ−４３２と抗ＱＫ−４３２′ｔノクロノール抗体の
反応性の検索として、ＯＫ−４３２とごオチン化抗ＯＫ
−４３２抗体とを反応さｔ！尭疫沈降物を形成させた。

この免疫沈降物にベルＡキシターゼ標識アビジンを反応
後、ジメチルアミノアゾベンゼン＜ＤＡＢ。

和光紬薬製）で発色させた。常法に従いエポン包埋を行
った後、超薄切ハを作製し透過型電子顕微鏡で観察した
。

ＰＢＭＣはＦｉｃｏｌ　＋−ｔ＋ｙｐａｑｕｅを用いた
比重遠心法で調製し、１ｘｌＯ−６／ｍｊ７の割合で１
０％牛脂児血清を含むＲＰＭＩ　１６４０培地で２４時
間培養した。

ＯＫ−４３２処理はＯＫ　−４３２０〜０．１ＫＥ／’
ｍを培地に添加することで行った。抗ＯＫ−４３２土ノ
クロナール抗体処理は、ＯＫ−４３２とＭＡｂｌＯμＪ
とを４°Ｃ１１時間反応させた後、上記の割合で調製し
たＰＢＭＣを加え、３７°Ｃて２４時間培養した。

この後、処理を行った培養上清中のＩＦＮ力価と、次項
に記す処理したＰＢＭＣのＮＫ、ＬＡＫを測定した。

■ＩＦＮ力価測定： ＩＦＮ活性の測定はヒト羊膜由来細１１（Ｆｏｇｈ。

Ｌｕｎｄ、　Ｐｒｏｃ、Ｓｏｃ　、　Ｅｘｐ　、　Ｂｉ
ｏｌ、　Ｈｅｄ、、　９４．　ｐ５３２〜５３７　　（
１９５７）　：　ＦＬ細胞）と水痢性口内炎ウィルス（
ＶＳＶ）を用いたプラーク減少法で行った。

ＩＦＮの型分類は、抗ヒトＤ−Ｉ　ＦＮ抗体（ＬｅｅＢ
ｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｉｎｃ、
　）　、抗ヒトβ−ＩＦＮ抗体（Ｌｅｅ　Ｂｉｏｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｉｎｃ、　）　、抗
ヒトｒ−ＩＦＮ抗体（ＥＮ［）ＯＧＥＮ　）を用いた中
和試験により行った。すなわち、中和活性で５００Ｕ／
ｉＩｌに調製した抗ヒトα−ＩＦＮ抗体と抗じトＢ−Ｉ
ＦＮ抗体の混合抗体或いは抗ヒトγ−ＩＦＮ抗体２００
μｍを段階希釈したＩＦＮ標品である培養上清８００μ
ｍに加え、４℃、２４時間反応させた。

この後、残存するＩＦＮｊＪ価を測定した。

ＮＫ、ＬＡＫ活性の測定法： ＯＫ−４３２及び抗ＯＫ−４３２ＭＡＭ処理したＰＢＭ
ＣのＮＫ、ＬＡＫ活性の測定は、標的細胞にＮＫ活性測
定にはヒト赤芽球性白面癌細胞（Ｂｆｏｏｄ、４５，０
３２　（１９７５）　：　Ｋ−５６２細胞〕を、ＬＡＫ
活性測定にはヒトバーキットリンパ腫由来細胞（Ｃａｎ
ｃｅｒ　Ｒｅｓ、　２８．　ｐ１３００〜１３１０（１
９６８）　：　　Ｄａｕｄｉ細胞〕を用いた５１Ｃｒｙ
ｔ１出法で行った。すなわち、標的細胞１０６個をｉｏ
ｏμＣ！　Ｎ　ａ２　Ｃｒ　５１０４て３７°Ｃ１９０
分間反応させて放射線標識をした後、９６穴マイクロタ
イタープレート中に１穴当り１０４個／１００μｍの割
合で植込んだ。ＲＰＭＩ　　１６４０培養液で調製した
ＰＢＭＣをエフェクター細胞として、２Ｘ１０”個／１
００μｍの割合で加え、３７°Ｃて４時間培養した。

ＮＫ、ＬＡＫ活性は％障害能で表わし、下記の公式より
緯出した。

ＯＫ−４３２の糖脂質分画の抽出法はＨｏｒｒ　ｉ　Ｓ
Ｏｎの方法（ＴＨＥ　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＢＩＯＬ
ＯＧＩＣＡＬ　ＣＨＥＩ４１ＳＴＲＹＶＯＬ、２５０．
ＮＯ８，Ｐ２９１１〜２９１９　（１９７５）　）　Ｍ
準シテ行った。すなわら、生理食塩水５ｍｌに溶解した
ＯＫ−４３２５ＯＫＥに１−ブタノール５ｍｌをｈｏえ
混和した。この後３５，０ＯＯＸ（＋で２０分間遠心し
、水溶液層を採取した。この抽出溶液にプロナーｔ？′
２０μｇ／ｍｌで加え、３７°Ｃで２４時間反応した。

３５，０ＯＯＸＣ＋で２０分間遠心した後上清を採取し
た。この抽出標品をリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ　（−））
にて透析し、糖脂質標品（以下ＯＫ−ＰＳという）とし
た。

多糖体分画は５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　Ｐｙｏｇｅ
ｎｅｓ＾−３ＳＵ株より５ｌａｄｅの方法（ＪＯＵＲＮ
ＡＬ　ＯＦ　ＢＡＣＴＥＲＩＯＬＯＧＹ。

ＶＯＬ、９０．ＮＯ３，Ｐ６６７　　（１９６５）　）
　ニ準シテ抽出シタ多糖体標品（以下５ｕ−ＰＳという
：中外製薬製）を用いた。

〔実施例） 以下実施例で本発明を説明する。

実施例１〈バイブリド゛−マＴＳ−２の製造とモノクロ
ナール抗体ＴＳ−２の産生〉 １１１Ｂａｌｂ／ｃマウス（６週齢）の腹腔内にＯＫ−
４３２（中外製薬製〉の５ＫＥを投与し免疫した。

１週間後に、さらに腹腔内［ＯＫ−４３２の５ＫＥを追
加免疫し、この最終免疫３日後に該マウスより無菌的に
ｉｐ？臓を摘出し、脾細胞を調製した。この稗細胞と前
出のＴＳ−２抗体の製造方法の説明の項で記載したＮ５
−１細胞をＫｏｈｌｅｒとＭｉ　１ｓｔｅｉｎの方法（
文献、前記の通り）に従い、ポリエチレングリコール４
，０００　　（和光紬薬製〉を用い、無血清ＲＰＭＩ　
１６４０培地中で細胞融合を行った。

その結果２８８個のハイブリドーマ上清が得られた。

このハイ１リドーマ培養土清を用いてＥＬｉＳＡの検索
を行った結果、Ｑ　Ｋ−４３２に対する抗体を産生ずる
４個のハイ１リドーマが得られた。

このスクリーニングされた４このハイブリドーマに対し
、限界希釈法によるクローニングを２〜３回行い、Ｑ　
Ｋ−４３２に対する抗体を産生じ、且つ安定な増殖を示
すハイブリドーマクローンを得た。

該ハイブリドーマをＴＳ−２と命名し、工業技術院微生
物工業技術研究所に受託番号、微工研菌寄第１１８４６
号（ＦＥＲＭ　　Ｐ−１１８４６’）として寄託した。

このＴＳ−２より産生きれるＴＳ−２抗体のクラス、サ
ブクラスを二次抗体に抗マウス免疫グロブリンクラス、
υブリラス特異的家兎免疫グロブリン（ＭｏＡｂ−３ｕ
ｂ−Ｉｓｏｔｙｐｉｎｇにｉｔ：Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用
い、ＥＬＩＳＡにて調べたところＩＣＩＭであることが
判明した。

ＴＳ〜２抗体の精製はハイブリドーマ培養上清或いはハ
イブリドーマをＢａ１ｂ／ｃマウス腹腔内に投与シタ腹
水より、２０　ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ緩衝液（ｐＨ８
，０）を用いた５ｅｐｈａｃｒｙｌ　Ｓ−３００（５−
３００（Ｐｈａｒカラムクロマトグラフィーで行った。

実施例２（ＴＳ−２抗体及びそれにより認識される抗原
の性質） ２．５ＫＥのＯＫ−４３２を！Ｉ瘍山内投与た担癌ヌー
ドマウス＠瘍の凍結切片を用い、前述した間接蛍光抗体
法で検索した。その結果ＴＳ〜２抗体によりＯＫ−４３
２の存在が明らかに観察された。

なお、実験に用いた担癌ヌードマウスは６週齢、雌のＢ
ａ１ｂ／ｃのヌードマウスの背部皮下に１×１０７個の
Ｈ５Ｇ細胞を移植し、移植後約１ケ月で８〜１０ｍｎ＋
の腫瘍を発生せしめたものを使用した。

（２）ＴＳ−２抗体より認識される抗原の性質：前記の
過ヨウ素酸及びプロナーゼ処理の項で説明した方法でＯ
Ｋ−４３２を投与した腫瘍切片を過ヨウ素酸及びプロナ
ーゼで処理した後、間接蛍光抗体法でＴＳ−２抗体との
反応性を検討した。その結果、過ヨウ素酸で処理した切
片ではＴＳ−２抗体で認識されるＯ　Ｋ−４３２の抗原
は消失していたが、プロナーゼ処理では影響を受けない
ことが判明した。

このことより、ＴＳ−２抗体により認識される抗原は糖
鎖抗原であることか確認された。また、ＴＳ−２抗体を
用いた前述した免疫電顕を行うと、ＯＫ−４３２の菌体
表面に反応性を認め、ＴＳ−２抗体がＯＫ−４３２の表
面抗原を認識していることがわかった。

前述したＩＦＮ力価の測定法、およびＮＫ、ＬＡＫ活性
の測定法により最終濃度Ｏ〜０．ＩＫＥ／１ＩｌｌのＯ
Ｋ−４３２を培地に添加してＰＢＭＣを２４時間培養し
、培養上清中のＩＦＮ力価と処理したＰＢＭＣのＮＫ及
びＬＡＫ活性を測定した。第１図及び第２図に示すよう
にＯＫ−４３２の添加１１度と共にＩＦＮ力価、ＮＫ及
びしＡＫ活性は上昇し、そのピークは０．０１ＫＥ／ｇ
ｔｔであることがわかった。

次にＯＫ−４３２より誘導されたｉＦＮの型決定を行う
ために、ＯＫ−４３２を処理したＰＢＭＣの培養上清を
抗α／β−ＩＦＮ抗体及び抗γ−ＩＦＮ抗体で処理を行
った後、前述の方法でＩＦＮ力価を測定すると、抗α／
β−ＩＦＮ抗体処理ではＩＦＮ力価にほとんど影響を認
めなかったが、抗Ｔ−ＩＦＮ抗体処理では著明に低下を
認めた。これらの結果を第１表に示す。これらのことよ
り、ＯＫ−４３２で処理したＰＢＭＣより誘導されるＩ
ＦＮは主にｒ−ＩＦＮであることが判明した。

第　　１　　表 Ｈａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ　ｕ　Ｔｅ５ｔ　　：★：　
　Ｐ＜０．０１次いでＯＫ−４３２により誘導されるγ
−ＩＦＮ、ＮＫ及びＬＡＫ活性に及ぼすＴＳ−２抗体の
影響を検討した。すなわち、あらかじめＴＳ−２抗体を
処理したＯＫ−４３２でＰＢＭＣを２４時間培養し、培
養上清中のＩＦＮ力価と、処理したＰＢＭＣのＮＫ及び
ＬＡＫ活性を前）ホの方法により測定した。

その結果、第２表に示すようにＴＳ−２抗体処理により
ＯＫ−４３２より誘導されるγ−ＩＦＮは、はぼ完全に
抑制され、ＮＫ及びＬＡＫ活性も抑制か認められた。

（以下余白） 第２表 ＯＫ１３２のＩ　Ｆ−’　Ｎ産生、ＮＫ及びＬＡＫ活性
に及ぼすＴＳ−２抗体の影響 実験１．実験２は異なる健康人よりのＰＢＭＣを用いた
。

実施例４　（ＯＫ−４３２より抽出したＯＫ−ＰＳのＯ
Ｋ−４３２よりＭｏｒｒ　ｉ　ｓｏｎの方法に準じて抽
出したＯＫ−ＰＳと、ＳＩ　ａｄｅの方法に準じて抽出
した５ｕ−ｐｓとＴＳ−２抗体との反応性をＥＬＩＳＡ
（で検索すると、共に反応性を認めた。

次にＯＫ−ＰＳと５ｕＰＳのＩＦＮ産生、ＮＫ及びＬＡ
Ｋ活性の誘導能について検討したところ、第３図〜第６
図に示すようにＯＫ−ＰＳはＩＦＮ産生、ＮＫ及びＬＡ
Ｋ活性の誘導能を有していたが、５ｕ−ＰＳには全ての
誘導能を認めなかった。

さらにＯＫ−ＰＳのＩＦＮ産生、ＮＫ及びＬＡＫ活性の
誘導能に及ぼすＴＳ−２抗体の影響を検討したところ、
第３表に示すよう＆：ＩＦＮ産生は完全に抑制されＮＫ
、ＬＡＫ活性も抑制されることがわかった。

以上の結果を総合することにより、本発明のモノクロナ
ール抗体ＴＳ−２がＯＫ−４３２のｒ−ＩＦＮ誘導能を
有する分画と反応することが判明した。

第　　３　　表 ＯＫ−ＰＳのＩＦＮ産牛、ＮＫ及び１．−ＡＫ活性に及
ぼすＮａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ　Ｔｅ５ｔ　：★：
　　Ｐ＜０．０１．　＊：　　Ｐ＜０．０５．・：　　
Ｐ＜０２０５〔発明の効果〕 以上説明してきたように本発明のモノクロナール抗体で
あるＴＳ−２抗体は、溶連菌製剤ＯＫ−４３２に対する
新規なモノクロナール抗体であって、ＩｇＭのクラス、
サブクラスを示し、ＯＫ　−４３２の菌体表面の糖鎖抗
原を認識するものである。そして該ＴＳ−２抗体はＯＫ
−４３２のＴ−ＩＦＮ誘導能を有する分画と反応するも
のであるから、これを用いてＯＫ−４３２上のＴＳ−２
抗体により認識される抗原を解析、精製することにより
、ＯＫ−４３２由来のものより効果の優れた製剤を得ら
れる可能性かあり、さらに新規でより右動な免疫賦活剤
も開発されることか期待できる。

【図面の簡単な説明】

第１図はＯＫ−４３２によるＩＦＮの誘導を示すグツで
あり、第２図はＯＫ−４３２によるＮＫ、ＬＡＫ活性の
誘導を示すグラフである。 第３図はＯＫ−ＰＳによるＩＦＮの誘導を示すグラフで
あり、第４図はＯＫ−ＰＳによるＮＫ。 ＬＡＫ活性の誘導を示すグラフであり、第５図は５ｕ−
ｐｓによるＩＦＮの誘導を示すグラフであり、第６図は
５ｕ−ＰＳによるＮＫ、ＬＡＫ活性の誘導を示すグラフ
である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、溶連菌製剤ＯＫ−４３２に対するモノクロナール抗
   体であって、ＩｇＭのクラス、サブクラスを示し、ＯＫ
   −４３２の菌体表面の糖鎖抗原を認識し、且つＯＫ−４
   ３２のγ−インターフエロン誘導能を有する分画と反応
   することを特徴とするＴＳ−２モノクロナール抗体。 ２、腹腔内にＯＫ−４３２を投与免疫したマウスより摘
   出した脾細胞とマウス由来ミエローマ細胞を細胞融合し
   、ついで形成されたハイブリドーマからＯＫ−４３２に
   対する抗体産生能を有するハイブリドーマをスクリーニ
   ングした後、クローニングを行って得たハイブリドーマ
   クローンを培養し、培養液上清から目的抗体を精製する
   か又は該ハイブリドーマクローンをマウス腹腔内に投与
   し、その腹水より目的抗体を精製することを特徴とする
   ＴＳ−２モノクロナール抗体の製造方法。 ３、得られたハイブリドーマクローンがＴＳ−２微工研
   菌寄第１１８４６号である請求項２記載のＴＳ−２モノ
   クロナール抗体の製造方法。 ４、マウスがＢａｌｂ／Ｃマウスである請求項２記載の
   ＴＳ−２モノクロナール抗体の製造方法。 ５、マウス由来ミエローマ細胞がｐ３−ＮＳ−１Ａｇ４
   −１である請求項２記載のＴＳ−２モノクロナール抗体
   の製造方法。 ６、スクリーニングを酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法）
   で行い、クローニングを限界希釈法で行い、且つ精製を
   カラムクロマトグラフィーで行うことを特徴とする請求
   項２記載のＴＳ−２モノクロナール抗体の製造方法。