JPH04202123A - ペプチドリポソームおよびペプチドリポソームの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はリポソーム、特にペプチドリポソームに関する
。

（従来の技術） 近年、医学・薬学の分野においてリポソームに水溶性あ
るいは脂溶性の薬物を担持させリポソームを薬物運搬体
や診断薬として利用する試みが多数なされている。（例
えば、抄本ら　ハイオザイエンスとインダストリー、第
４７巻、４７５頁、１９８９年）しかし、リボソー１１
は疎水相互作用による単なる分子集合体であり、薬物運
搬体、診断薬として用いる場合以下のことが大きな問題
として指摘されている。すなわち、内包薬物の漏出、血
中からの非常に速い消失である。

これらの解決法として、リポソームの高分子化が検討さ
れている。（たとえば、Ｒｉｎｇｓｄｏｒｆ　ら、アン
ゲヴアンテ　ヒミー　インターナショナルエデイジョン
　イングリシ、：Ｌ　（Ａｎｇｅｗ、　Ｃｈｅｍ、　Ｉ
ｎｔ。

Ｅｄ、　Ｅｎｇｌ、）第２０巻、３０５頁、１９８１年
、Ｒｉｎｇｓｄｏｒｆ　ら、同誌、第２０巻、９０頁、
１９８１年） しかし、高分子リポソームの多くは生分解性に乏しく生
体適合性の観点から問題である。

生分解性を有する高分子リポソームとしてＲｉｎｇｓｄ
ｏｒｆ　らによりペプチドリポソームが報告されている
。（マクロモレキュール　ケミストリー、ラピソツドコ
ミュニケーション、（Ｍａｋｒｏｍｏｌ、　Ｃｈｅｍ。

Ｒａｐｉｄ、　Ｃｏｎ＋ｎ＋ｕｎ、）第３巻、１６７頁
、１９８２年、ジャーナル　オブ　アメリカン　ケミス
トリーソサイアティ（Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、
）第１０８巻、４８７頁、１９８６年）しかし、前者で
は高分子リポソームの親水部の親水性が弱い、後者では
巨大なリポソームしか形成しないという欠点を有してい
た。

（発明が解決しようとする課題） 従って、本発明の目的は、従来の欠点を解決し生分解性
を有するペプチドリポソーム、および該ペプチドリポソ
ームを容易に製造する方法を提供　　　　　゛すること
である。

（課題を解決するための手段） 本発明の目的は、下記−船人（Ｉ）で示される化合物の
重合体（二量体以上を示す。）をリポソーム構成成分の
少なくとも一つとして有することを特徴とするペプチド
リポソーム、および−船人（Ｉ）で示される化合物を構
成成分の少なくとも一つとしてリポソームを形成した後
に一般式（１）で示される化合物どうしを重合させるこ
とを特徴とするペプチドリポソームの製造方法により達
成された。

＋１−　（ＮＨ−ＣＩｌ−Ｃ）　１Ｉ−ＮＨ−ＣＩｌ−
Ｃ−（ＮＨ−ＣＩ−Ｃ）　Ｉ、−０ＨＲ３１１，Ｃｌ１
２　　　　Ｒ４ｒ′ ■ Ｏ＝Ｐ−０−Ｍ’ ＣＨ２−ＣＨ−Ｃｌ＋□ Ｒ’　　Ｒ２（１） 式中、Ｒ１、Ｒ２は炭素数８〜２４のアルキル基または
アシル基を示す。Ｒ１，Ｒ２はそれぞれ直鎖でも分岐で
もよい。また置換基（例えばメチル基、エチル基、イソ
ブｌ］ピル基、ハロゲン原子を示ず。）、不飽和基を有
していてもよい。好ましくは、テ１−ラデシル基、ヘキ
ザデシル基、オクタデシル基、ミリストイル基、バルミ
トイル基、ステアロイル基、フィタニル基である。Ｒ”
、Ｒ４″はそれぞれα−アミノ酸の側鎖残基を示す。

好ましくは、水素原子、リジン側鎖残基（−（ＣＩ−１
２）　４ＮＨ２）、アスパラギン酸側鎖残基（−ＣＨ２
ＣＯＯＩｌ）、セリン側鎖残基（−ＣＩｌ□０ｆ−１）
である。ｍ、ｎはそれぞれ０〜５の整数を示す。好まし
くは、ｍとｎの和が１〜３の整数である。

Ｍ゛はリン酸陰イオンの対イオンを示す（水素原子を含
む。）。好ましくは、アルカリ金属イオン（Ｌｉ”、　
Ｎａ”　、　Ｋ”、　Ｒｂ”　、　Ｃｓ”　）である。

また、分子末端のアミノ基がアンモニウム塩となり分子
内で対イオンを形成しても良い。また、分子内に存在す
る不斉炭素に関しては、ラセミ体でも光学活性体のいず
れでもよいが光学活性体が望ましい。

分子末端のアミノ基はアンモニウムイオンとなり適当な
酸成分と塩（例えばトリフルオロ酢酸塩、塩酸塩）を形
成してもよい。さらに分子内で適当な酸成分と塩を形成
してもよい。

本発明に用いるペプチド誘導リン脂質の合成経路の例を
下記に示す。但し、本発明はこれに限定されるものでは
ない。

ＣＨ２ 〜　　　　　　　Ｃ１ｌ□−ＣＨ−ＣＨｚ１　　Ｉ　　
　　〜 ＩＩ　　ＲＺ ＣＩｌ□−ＣＨ−ＣＨｚ　　　　　　　ＣＨｚ−ＣＩ−
Ｃｌｌ□ＩＩ　　　　　　　　　　１１ ＣＩｌ□　　　Ｒ４″ □ ＣＩｌ　２−Ｃ）Ｉ−Ｃ）＋２ １　１　　〜 ＩＩ　　Ｒ２ Ｒ３１Ｉ　　　ＣＨ２Ｒ” ■ ＣＨ２−Ｃｌ−ＣＨ２ １１〜 ＩＩ　　Ｒ２ Ｑ　　　　　　　ＱＯ Ｂｏｃ　・（Ｎ−ＣＨ−Ｃ）ｌｌｌ−Ｎ−ＣＨ−Ｃ−（
Ｎ−ＣＨ−Ｃ）、−０ＨＲ”　　　　　ＣＨ２Ｒ” ・１ｅ Ｏ＝Ｐ−ＯＨ−−→ 唱 ■ Ｃｌ１ｚ−ＣＨ−Ｃ１１２ ＩＲ２ ＴＦ八−・　　Ｈ３Ｎ“−ＣＩｌ−Ｃ−（Ｎ−ＣＩ−Ｃ
）−−＋　　　Ｎ−ＣＨ−Ｃ−（Ｎ−ＣＩ−Ｃ）　１ｌ
−Ｏｌｌｌ　　　　　１　　　　　１　　　１ Ｒ３１１１Ｂ＊　Ｌｌｌ−１１ＣＨ２Ｒ４１１唱 ０＝Ｐ−Ｏｆ（ Ｃ１ｌ□−ＣＩ−ＣＩ。

ＩＩ ＩＩ ＩＲ２ （Ｉ）トリフルオロ酢酸塩 Ｈ２−（Ｎ−ＣＩｌ−Ｃ）　ｌＩ−Ｎ−ＣＨ−Ｃ−（Ｎ
−Ｃ１ｌ−Ｃ）　１ｌ−ＯＨＩ　　　　　　　　ＩＩ Ｒ”　　　　　　ＣＨ２１１” 〜ン　　　　　　　　　　　　　　ｏ＝ｐ−ｏ−ＣＨ２
−ＣＨ−ＣＩｌ。

ＩＩ　　Ｒ２ ＣＨ２０Ｒ’　　　　　　　　　　　ＣＩ＋□ａ）７．
１−メチルイミダゾール、Ｔ　ＩＩ　Ｆ；ｂ）８．１−
メチルイミダゾール、Ｔ　ＨＦｃ）５％〜パラジウム炭
素、Ｒ２、酢酸エチル、Ｒｅｎ　　　　Ｒ４（ｎ−１１ 、トリエチルアミン ｄ）ＤＣＣｌ ｅ）トルフルオロ酢酸、ジクロロメタントリエチルアミ
ン、ジクロロメタン ｇ）二酸化白金、酢酸エチル； ｈ）アンバーライト　ｌＲ１２０Ｂ。

アンバーライト　ａ３Ｚｕ（共にローｌ、・アンド・ハ
ース社製） ここで、本発明のペプチドリポソームの製造方法につい
て説明する。

本発明に係わるリボソーｌ、の重合はリポソームの脂質
二分子膜の膜中において一般式（１）で示されるペプチ
ド誘導リン脂質化合物どうしを縮合重合し、アミド結合
を形成させペプチドを形成することによって行われる。

従って、本発明ではまず一般式（１）で示されるペプチ
ド誘導リン脂質化合物をリポソームの構成成分の少なく
とも１部として、リポソームを調製する。

リポソームの調製法としてはヴオルテソクスイング法、
超音波照射法、界面活性剤除去法、逆相蒸発法（ＲＥ　
Ｖ法）、エタノール注入法、エーテル注入法、プレーベ
シクル法（Ｐｒｅ−Ｖｅｓｉｃｌｅ法）、フレンチプレ
ス押出法、エクストルージョン法（Ｅｘ　ｔｒｕｓ　ｉ
ｏｎ法）、アニーリング法（Ａｎｎｅａｌｉｎｇ法）、
凍結融解法、Ｗ１０／Ｗエマルジョン法、さらに５ｔａ
ｂｌｅ　Ｐｌｕｒｉｌａｍｅｌｌａｒ　Ｖｅｓｉｃｌｅ
法（Ｓ　Ｐ　Ｌ　Ｖ法）等の通常の方法が全て挙げられ
る。

これらのリポソーム調製法に関してはＰａｐａｈａｊｏ
ｐｏｕｌｓらによる総説（Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ、　Ｂｏｉｏｅｎｇ、、第９巻、４６７頁、１
９８０年）、野島、抄本、井上らによる放置（リポソー
ム、２１−４０頁、南江堂（１９８８）　）に記載され
ている。

リポソームの精製に関しては通常の方法により行えばよ
い。（例えば、セファデックス　カラム、セファローズ
　カラム等によるゲルろ過性、遠心分離法、透析法が挙
げられる。） 本発明において、リポソームに内包可能な化合物として
は各種薬剤、抗生物質、色素、蛍光性物質などが挙げら
れる。

以上のように調製したリポソームの重合は、リポソーム
調製後適当な縮合剤を加えて水冷下から５０°Ｃの間で
数十分から数日間放置しておけばよい。このときの分散
鍍のｐｌ＋は特に制限はないが、ｐｌ（４〜１０の範囲
でアミド形成を制御するのが好ましい。

縮合剤としては、既存のペプチド合成に用いられる縮合
剤が挙げられる。例えば １−エチル−３−（ジメチルアミノプロピル）カルボジ
イミド（ＷＳＣＤ）、 １−−エチル−３−（ジメチルアミノプロピル）カルボ
ジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）、 Ｎ、Ｎ’　−−カルボニルジ・イミダゾール（ＣＤＩ）
等が好ましい例として挙げられる。

重合したリポソームの精製に関しては通常の方法により
行えばよい。（例えば、セファデックスカラム、セファ
ローズカラム等によるゲルろ過性、遠心分離法、透析法
が挙げられる。

重合の評価は赤外吸収スペクトル測定法、末端アミノ基
定量ＧＰＣ測定法が容易である。

さらに、リポソーム調製時にリポソーム構成脂質として
、本発明における一般式（Ｉ）で示される化合物と既存
のリポソームの製造法において用いられる脂質とを混合
してもよい。（例えばジパルミトイルホスファチジルコ
リン（ＤＰＰＣ）、シミリストイルホスファチジルコリ
ン（ＤＭＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン
（Ｄ　Ｓ　Ｐ　Ｃ）、ジパルミトイルホスファチジルエ
タノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジパルミトイルホスファ
チジルセリン（ＤＰＰＳ）　、Ｅｇｇレシチン等が挙げ
られる。） 尚、混合した場合混合する脂質は一種類でも二種類以上
でもよい。また、コレステロール類との混合でもよい。

さらに、一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘導リン脂質
化合物を通常の方法で縮合させ（例えばＤＣＣ法、ＣＤ
Ｉ法が挙げられる。）重合体とした後、得られた重合体
をリポソーム構成成分としてリポソームを形成させても
よい。

以下に本発明の一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘導リ
ン脂質化合物の好ましい具体例を示す。しかし、本発明
はこれらに限定されるものではない。

ＨＪ”−ＣＨｚ−Ｃ−Ｎ−ＣＩ−Ｃ−Ｎ−ＣＨｚ−Ｃ−
ＯＨＯＨ２ ■ ｏ＝ｐ−ｏ− 蔭 ＣＨｚ　　　ＣＨＣＨ２ Ｉ Ｃ１４Ｈ２１１ＣｔｔＨｚｑ ＴＦＡ−・　Ｈ３Ｎ”−ＣＩＩ２−Ｃ−Ｎ−ＣＩ（−Ｃ
−Ｎ−ＣＩＩ。−Ｃ−ＯＨＯＨ２ 〇 ０＝Ｐ−０１１ ＣｔｌｚＣＨＣ１ｌ□ １　　　　　； Ｃｕ＋ＨｚｔＣＩＢ＋（３゜ １１Ｉ１ １１２Ｎ−Ｃ）Ｉ−Ｃ−Ｎ−ＣＩＩ　。−Ｃ−０１１Ｏ
Ｈ２ ■ ■ （１−Ｐ−０−Ｎａ” ■ ■ Ｃ１１ｚＣ１ｌＣＨ７ ＣＩＪＩ＋ｚＣｚ、ｌＬ＋を ＴＦＡ−・　Ｈ３Ｎ”−ＣＨ２−Ｃ−Ｎ−Ｃｌ−Ｃ−Ｏ
ＨＣＩＩ。

電 ■ ０工Ｐ−ＯＨ ＣＨ２Ｃ１ｌ　　ＣＨ２ Ｉ Ｃｌ　ｂｕｓ：＋　　Ｃｌ　６１１３３１１＋＋　　　
　ｌｌ １１２Ｎ−ＣＨ−Ｃ−Ｎ−ＣＩｌ−Ｃ−ＯＨＣＨ２Ｃ１
＋□ Ｉ Ｃ０ＯＨ０ ０＝Ｐ−ＯＲ Ｃ１＋□−−Ｃｌ−Ｃｌ＋□ Ｃｌ　ｂｌｈｓ　　Ｃｌ　６Ｈ１ｌ −　　ｌ　　（ｉ　−− ＴＦＡ−・　Ｈ３Ｎ”　　　Ｃ１１−Ｃ−Ｎ−Ｃｌ−Ｃ
−ＯＨ］　　　　ｌ ＣＨ２（［ｚ Ｉ Ｑ　　　　　　ＯＨ ■ ０＝Ｐ−０１１ ■ ＣＨｚ　　　　ＣＨＣＨ□ Ｃｌ６１１３３　　Ｃｌ６１１３：ｌ ｌ−７００ １ＨＩ１ １１３Ｎ“−ＣＨ−Ｃ−Ｎ−ＣＩ（−Ｃ−０−（ＣＨ２
）４　ＣＨ２ Ｎｌｈ”　　　Ｏ ｏ＝ｐ−ｏ− Ｃ１１２ＣＩＩ　　Ｃ１１□ Ｉ Ｃｚｏｌｌｔ＋　　Ｃ２０１１４＋ ＝１８〜 ■−８０００ １１ＨＩＩ　　■　　　　１１ ＴＦＡ−・ＨＪ”　　Ｃ）ｌ−Ｃ−Ｎ−ＣＨｚ−Ｃ−Ｎ
−Ｃ１ｌ。−Ｃ−０１１■ ＣＩ（２ ■ ■ ０＝Ｐ−ＯＨ ■ ＣＩｌ□−ＣＩｌ−ＣＨ２ ＣＩ　ｏｌＬ＋７Ｃ＋　１１１１３□ Ｔ−９０００ １１Ｈ１１＋１　　　　ＩＩ Ｈ３Ｎ′″−Ｃ１ｌｚ　　Ｃ−Ｎ−ＣｚＨ−Ｃ−Ｎ−Ｃ
１ｌ−Ｃ−ＯＨＣＨ２ ■ ■ ｏ＝ｐ−ｏ− ＣＨｚ　　　　Ｃ８、ＣＨ２ ＣＩＯ１１２１ＣＩ、０Ｈ２１ ＋１Ｈ，１ｌ Ｈ２Ｎ−ＣＨ−Ｃ−Ｎ−Ｃ１，ｚ−Ｃ−ＯＨＣＨ２ □ ０−Ｐ−０−Ｎａ” ■ ＣＨ２ＣＨＣＨ２ ｏ＝ｃ　　　　　　ｃ＝。

ＴＦＡ−・　Ｈ３Ｎ”−ＣＦＩＺ−Ｃ−Ｎ−ＣＨ−Ｃ−
ＯＨＣ１ｌ□ ０＝Ｐ−ＯＨ ■ ＣＨｚ　　’　　ＣＨＣＨｚ ｏ＝ｃ　　　　　　ｃ＝。

ＩＩ ０重５Ｈ３１ＣＩＳＨ３１ 以下に本発明の一般式（１）で示されるペプチド誘導リ
ン脂質化合物の合成例を示す。しかし、本発明はこれに
限定されるものではない。

合成例　（Ｉ−１の合成） フェニルホスホロジクロリデート１８．２ｇをＴＨＦｌ
ｏｏｍｌに溶解した。１．　２−ｏ−ジテトラデシルグ
リセロール７　（７においてＲ１−Ｒ２−ＣＩｔＨｚ、
）１５．　８　ｇ、　１−メチルイミダゾール３．２ｇ
ＴＨＦ混合液５０ｍ１を加えて一時間攪拌した。次にＢ
ｏｃ−セリソベンジルエステル８〜 １０．３ｇ、１−メ°チルイミダゾール３．２ｇＴＨＦ
混合液５０ｍ１を加えて１昼夜攪拌し、ＴＨＥを減圧留
去した。クロロホルムを加え、有機層を水で洗った後有
機層をボウ硝乾燥してクロロホルムを減圧留去した。残
留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製しくヘ
キサン／酢酸エチル−８／２）２　（２においてＲ’　
＝Ｒ２＝Ｃ＋４Ｈｚ、）を１３．５ｇ得た。

２　（２においてＲ’　＝Ｒ２＝Ｃ＋４Ｈｚ、）１３．
　５　ｇに酢酸エチル４００ｍ１を加え、５％パラジウ
ム炭素８．０ｇを加え加水素分解して３（３においてＲ
’　＝Ｒ”＝Ｃｌ４Ｈｚ、）１３　、　３ｇを得た。

３（３においてＲ’　＝Ｒ”＝Ｃ＋４ｔｌ。、）１３．
３ｇ。

ジシクロへキシルカルボジイミド３．６ｇをジクロロメ
タン４００ｍ１に？容解しグリシンベンジルエステル−
ｐ−Ｉ・ルエンスルホン酸塩５．８ｇ、）リエチルアミ
ン１．８ｇを加え一昼夜撹拌した。

反応液をろ過し、ろ液を水で洗いボウ硝乾燥した後ジク
ロロメタンを減圧留去した。残留物をシリカゲルクロマ
トグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル−６／４）にて精
製し、４（４においてｎ＝１、Ｒ”””Ｉｆ　、Ｒ’　
＝Ｒ２＝ＣＩ４１１□、）８．６ｇを得た。

４（４においてｎ＝１、Ｒ”＝Ｉ＋　、　Ｉｌ’＝Ｒ２
−Ｃ１４Ｈ２９）　　８　、　６　ｇをジクロロメタン
５０ｍ１、トリフルオロ酢酸３０ｍ１に溶解し、３０分
撹拌した。

溶媒を減圧留去後、残留物をジクロロメタン１００ｍ１
に？容解し、１ヘリエチルアミンｌ、５ｇ、Ｂｏｃ−グ
リシン無水物５．４ｇを加え一晩撹拌した。

反応液を水で洗い、ボウ硝乾燥した後、シリカゲルクロ
マトグラフィーにより精製しくヘキサン／酢酸エチル−
４／６）６　（６においてｎ＝ｍ＝１、Ｒ３″＝Ｒ”　
＝Ｈ、Ｒ’＝Ｒ２＝Ｃ＋ｎｉｈ、）８．　８　ｇを得た
。

６　（６においてｍ＝ｎ＝１、Ｒ３１１１＝Ｒ”　＝ｌ
ｌ、Ｒ’　＝Ｒ２＝Ｃ＋ｔＨｚ、）８　、　８　ｇを酢
酸エチル３００ｍ１に熔解し、二酸化白金１．０ｇを加
えて加水素分解して７　（７においてｍ＝ｎ＝１、Ｒ″
″＝Ｒ４ｎ　＝１１　、Ｒ’＝Ｒ２＝Ｃ＋ｔＨｚ、）７
．　６　ｇを得た。

７　（７においてｍ＝ｎ＝１．１１３′″＝Ｒ”　＝Ｉ
ｌ、Ｒ’＝Ｒ２＝Ｃ＋ｔｌｌｚ、）２００ｍｇをジクロ
ロメタン１０ｍ１、トリフルオロ酢酸１０ｍ１を加え３
０分攪拌した。溶媒を減圧留去して残留物を酢酸エチル
で再沈澱させＩ−１トリフルオロ酢酸塩１２０ｍｇを得
た。

１−１）リフルオロ酢酸塩をアンバーライトＩＲ−１２
０Ｂ、続いてアンバーライトＩＲＡ−９３ＺＵで処理し
てＩ−１を１２０ｍｇ得た。

以下に、本発明の実施例を示すが、本発明はこれらに限
定されるものではない。

実施例１　（ペプチドリポソームの製造）ペプチド誘導
リン脂質（１−１）５ｍｇをクロロホルムに熔解し、ク
ロロホルムを減圧留去して薄膜を形成させた。次に２５
ｍＭ炭酸水素ナトリウム水溶液５ｍｌを加え、ヴオルテ
ックスミキシングを行った（１分間、３回）。続いて、
超音波照射を行った（プローブ型、３０Ｗ、１．５分、
２回）。

ｌ−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カル
ボジイミド（ＷＳＣＤ）を４当量加え、２５°Ｃにて６
０時間重合させた。スペクトラ／ポア　７　　ＭＷｌｏ
ｏＯＯ（フナコシ薬品株式会社品）を用いて純水に対し
て透析を行ないペプチド−リポソームを得た。（平均粒
径１１０ｎｍ、数平均分子量３００．０−５０００　（
ＧＰＣ測定、ＤＭＦ可溶分）） さらに、電子顕微鏡写真による形態観察からリポソーム
であることを確認した。重合は赤外吸収スペクトル測定
、およびフルラムを用いた末端アミン定量により行った
。重合前後の赤外吸収スペクトルを（第１図）に示す。

実施例２　　（カルボキシフルオレセイン内包ペプチド
リポソームの製造） ペプチド誘導リン脂質トリフルオロ酢酸塩（Ｉ−２）５
ｍｇをクロロホルムに溶解し、クロロホルムを減圧留去
して薄膜を形成させた。次に２００ｍＭカルボキシフル
オレセイン、１／１５ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７，４，（
株式会社ヤトロン品）５ｍｌ加え、ヴオルテソクスミキ
シングを行った（１分間、３回）。続いて、超音波照射
を行った（プローブ型、３０Ｗ、１．５分、２回）。

セファロース　４Ｂカラムを用いてゲルろ過を行いカル
ボキシフルオレセインを内包したリポソーム分画を得た
。

得られたリポソーム液に１−エチル−３−（３−ジメチ
ルアミノプロピル）カルボジイミド（ＷＳＣＤ）を４当
量加え、２５℃にて６０時間重合させた。スペクトラ／
ポア　７　　ＭＷｌｏｏＯＯ（フナコシ品）を用いて１
／１５ｍＭリン酸緩衝液に対して透析を行ないカルボキ
シルフルオレセイン内包ペプチドリポソームを得た。（
平均粒径１１０ｎｍ） 実施例３　　（グルコース内包ペプチドリポソームの製
造） ペプチド誘導リン脂質Ｈ−５）５ｍｇをクロロホルムに
溶解し、クロロホルムを減圧留去して薄膜を形成させた
。次に５０ｍＭグルコース２５ｍＭ炭酸水素ナトリウム
水溶液５ｍｌを加え、ヴオルテックスミキシングを行っ
た（１分間、３回）。続いて、超音波照射を行った（ハ
ス型　１５分、２回）。

１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カル
ボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）を４当量加え、２５°Ｃに
て６０時間重合させた。スペクトラ／ポア　７　　ＭＷ
ｌｏｏＯＯ（フナコシ品）を用いて純水に対して透析を
行ないペプチドリポソームを得た。（平均粒径３５０ｒ
＋ｎ＋、数平均分子量５０００（ＧＰＣ測定、ＤＭＦ可
溶分））さらに、電子顕微鏡写真による形態観察からリ
ポソームであることを確認した。

実施例４　　（ペプチドリボソーＪ、の製造）ペプチド
誘導リン脂質（Ｉ　−１０）　５ｍｇをクロロボルムに
溶解し、クロロホルムを減圧留去して薄膜を形成させた
。次に２５ｍＭ炭酸水素す°トリウム水溶液５ｍｌを加
え、ヴオルテソクスミキシングを行った（１分間、３回
）。続いて、超音波照射を行った（プローブ型　３０Ｗ
、１．５分、２回）。

■−エチルー３−（３−ジメチルアミノプロピル）カル
ボジイミド（ＷＳＣＤ）を４当量加え、２５℃にて６０
時間重合させた。スペクトラ／ボア　７　　ＭＷｌｏｏ
ＯＯ（フナコシ薬品株式会社品）を用いて純水に対して
透析を行ないペプチドリポソームを得た。（平均粒径１
４０ｎｍ、数平均分子量３０００−５０００　（ＧＰＣ
測定、ＤＭＦ可溶分）） さらに、電子顕微鏡写真による形態観察からリポソーム
であＺ）ことを確認した。重合は凍結乾燥品を）ＴＣＩ
ガスで処理した試料のＩ（Ｂｒ法による赤外吸収スペク
トル測定、およびフルラノ、４用いた末端アミノ定量に
より行った。

実施例５　　（カルボキシフルオレセイン内包ペプチド
リポソームの製造） ペプチドリン誘導リン脂質トリフルオロ酢酸塩（１−１
１）　５ｍｇをクロロホルムに溶解し、クロロホルムを
減圧留去して薄膜を形成させた。次に２００ｍＭカルボ
キシフルオレセイン、１／１５ｍＭリン酸緩衝液ｐｌ＋
７．４（株式会社ヤトロン品）５ｍｌを加え、ヴオルテ
ソクスミキシングを行った（１分間、３回）。続いて、
超音波照射を行った（プローブ型、３０Ｗ、１．５分、
２回）。

セファロース　４Ｂカラムを用いてゲルろ過を行いカル
ボキシフルオレセインを内包したリポソーム分画を得た
。

得られたリポソーム液に１−エチル−３−（３−ジメチ
ルアミノプロピル）カルボジイミド（ＷＳＣＤ）を４当
量加え、２５℃にて６０時間重合させた。スペクトラ／
ポア　７　　ＭＷｌｏｏＯＯ（フナコシ品）を用いて１
／１５ｍＭリン酸緩衝液に対して透析を行ないカルボキ
シルフルオレセイン内包ペプチドリポソームを得た。（
平均粒径１５０ｎｍ） 実施例６　　　（ＤＰＰＣ混合ペプチドリポソームの製
造） ペプチド脂質（Ｉ　　８）５ｍｇ、’ＤＰＰＣ５’ｍｇ
をクロロホルムに溶解し、クロロホルムを減圧留去して
薄膜を形成させた。

次に純水５ｍｌを加え、超音波照射を行った。

（プローブ型、３０Ｗ、１．５分、２回）１−エチル−
３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（
ＷＳＣＤ）を２当量加え、６０時間重合させた。セファ
ロース４Ｂでゲルろ過してＤＰＰＣ混合ペプチドリポソ
ームを得た。

（平均粒径１２０ｎｍ）重合はフルラムを用いた末端ア
ミノ基定量により行った。

実施例７ ペプチド誘導リン脂質化合物Ｉ−１，５Ｂ、シミリスチ
ルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）５ｍｇの混合物を
用いて実施例５と同様にしてカルボキシフルオレセイン
内包ペプチドリポソーム（未重合体）およびカルボキシ
フルオレセイン内包ペプチドリポソーム（重合体）を得
た。

２０℃における内包物（カルボキシルフルオレセイン）
の漏出を蛍光測定にて追跡した。第２図に結果を示す。

実施例８ ペプチド誘導リン脂質化合物（１５）、５ｍｇ、シミリ
スチルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）５ｍｇの混合
物を用いて実施例５と同様にしてカルボキシフルオレセ
イン内包ペプチドリポソーム（未重合体）およびカルボ
キシフルオレセイン内包ペプチドリポソーム（重合体）
を得た。

２０°Ｃにおける内包物（カルボキシフルオレセイン）
の漏出を蛍光測定にて追跡した。第３図に結果を示す。

（発明の効果） 本発明のペプチドリポソームはリポソームの内包物の漏
出が少ない。

従来の重合性リポソームと比べ、ペプチド結合により重
合体を形成しているので生分解性が高い。

以上の観点から本発明の効果は大である。

用途 本発明のペプチドリポソームは薬物担体として有用であ
る。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ペプチド誘導リン脂質（１−１）を用いたペ
プチドリポソームの重合前後の赤外吸収スペクトル測定
の結果を示す。 第２図は２０℃における、ペプチド誘導リン脂質（１−
１）　、ＤＭＰＳ　（１：　１）混合ペプチドリポソー
ムの未重合体および重合体の内包物（カルボキシルフル
オロセイン）漏出度の経時変化を示す。 第３図は３７℃におけるペプチド誘導リン脂質（１−５
）　、ＤＭＰＣ（１：　１）混合ペプチドリポソームの
未重合体および重合体の内包物（カルボキシルフルオロ
セイン）漏出度の経時変化を示す。 特許出願人　　富士写真フィルム株式会社第２図 第３図 ２、　発明の名称　　ペプチドリポソームおよびペプチ
ドリポソームの製造方法 ３、補正をする者 事件との関係　　　　　特許出願人 柱　所　　　神奈川県南足柄市中沼２１０番地名　称（
５２０）富士写真フィルム株式会社連絡先　〒１０６東
京都港区西麻布２丁目２６番３０号富士写真フィルム株
式会社　東京本社 ４、　補正の対象　　明細書の「発明の詳細な説明Ｊの
欄 ５、補正の内容 明細書の「発明の詳細な説明」の項の記載を下記の通り
補正する。 ｌ）　第１１真下から８行目の ｒｌＲ１２０Ｂ、を ｒＩＲ−１２０ＢＪ と補正する。 ２）　第１１真下から７行目の 「ａ３Ｚｕ」を ｒＩＲＡ−９３ＺＵＪ と補正する。 ３）　第１４頁７行目の 「アミノ基定量ＧＰＣ測定法」を ［アミノ基定量法、ＧＰＣ測定法」 と補正する。 ４）　第１４頁１１〜１２行目の 「ジパルミトイルホスファチジルコリン」「ジパルミト
イルホスファチジルコリン」と補正する。 ５）　第１０頁最下行の 「醋酸エチル」の後に行を改めて ｒｄ）ＤＣＣ。 を挿入する。 ６）　第１１頁３行目の ｒｄ）　ＤＣＣＪを 削除する。 ７）　第１９頁化合物１−９の化学構造式を別紙のとお
り補正する。 ８）　第２１頁１０行目の ［セリンベンジルエステル」を ［セリンベンジルエステル」 と補正する。 別紙 ［■−９ Ｈ３Ｎ　”　−ＣＨ２−Ｃ−Ｎ−ＣＨ２−Ｃ−Ｎ−ＣＨ
−Ｃ−０）１■ ＣＨ２ ■ ｏ＝ｐ−ｏ− ■ ■ ＣＨｚ　　　ＣＨ−ＣＨｚ Ｉ Ｃｌ０Ｈ２１Ｃｌ０Ｈ２１ 」

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記、一般式（ I ）で示される化合物の重合体
   （二量体以上を示す。）をリポソームの構成成分の少な
   くとも一つとして有することを特徴とするペプチドリポ
   ソーム。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒ＾１、Ｒ＾２は炭素数８〜２４のアルキル基
   またはアシル基を示す。Ｒ＾１、Ｒ＾２はそれぞれ直鎖
   でも分岐でもよい。また置換基、不飽和基を有していて
   もよい。Ｒ＾３＾ｍ、Ｒ＾４＾ｎはそれぞれα−アミノ
   酸の側鎖残基を示す。ｍ、ｎはそれぞれ０〜５の整数を
   示す。Ｍ＾＋はリン酸陰イオンの対イオンを示す（Ｈを
   含む。）。また、分子内に存在する不斉炭素に関しては
   、ラセミ体でも光学活性体のいずれでもよい。分子末端
   のアミノ基はアンモニウムイオンとなり適当な酸成分と
   塩を形成してもよい。〕
2. （２）請求項（１）記載の一般式（ I ）で示される化
   合物をリポソームの構成成分の少なくとも一つとしてリ
   ポソームを形成した後、該一般式（ I ）で示される化
   合物どうしを重合させることを特徴とするペプチドリポ
   ソームの製造方法。