JPH0482893A - ペプチド誘導リン脂質化合物およびそれを用いたポリペブチドリポソームの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はリポソーム、特に重合性リポソーム形成用脂質
として有用なペプチド誘導リン脂質化合物およびポリペ
プチドリポソームの製造方法に関する。

（従来の技術） 近年、医学、薬学の分野においてリポソームに水溶性あ
るいは脂容性の薬物を担持させリポソームを薬物運搬体
や診断薬として利用する試みが多数なされている（例え
ば、抄本ら　バイオサイエンスとインダストリー、第４
７巻、４７５頁、１９８９年）。しかし、リポソームは
疎水相互作用による単なる分子集合体であり、薬物運搬
体、診断薬として用いる場合以下のことが大きな問題と
して指摘されている。すなわち、内包薬物の漏出、血中
からの非常に速い消失である。

これらの解決法として、リポソームの高分子化が検討さ
れている。（たとえば、Ｒｉｎｇｓｄｏｒｆら、アンゲ
ヴアンテ　ヒミー　インターナショナルエデイジョン　
イングリッシュ（Ａｎｇｅｗ、　Ｃｈｅｍ。

Ｉｎｔ、　Ｅｄ、Ｅｎｇｌ、）第２０巻、３０５頁、１
９８１年、Ｒｉｎｇｓｄｏｒｆら、同誌、第２０巻、９
０頁、１９８１年） しかし、高分子リポソームの多くは生分解性に乏しく生
体適合性の観点から問題である。

生分解性を有する高分子リポソームとしてＲ４ｎｇｓｄ
ｏｒｆらによりポリペプチドリポソームが報告されてい
る（マクロモレキュール　ケミストリ、ラビッツドコミ
ュニケーション、（Ｍａｋｒｏｍｏｌ。

Ｃｈｅｍ、　Ｒａｐｉｄ、　Ｃｏｍｍｕｎ、）第３巻、
１６７頁、１９８２年、ジャーナル　オブ　アメリカン
　ケミストリー　ソサイアティ（Ｊ、八ｍ、　Ｃｈｅｍ
、　Ｓｏｃ、）第１０８巻、４８７頁、１９８６年）。

しかし、前者では高分子リポソームの親水部の親水性が
弱い、後者では巨大なリポソームしか形成しないという
欠点を有していた。

（発明が解決しようとする課題） 従って、本発明の目的は、従来の欠点を解決し生分解生
を有するポリペプチドリポソームを容易に形成できる新
規なペプチド誘導リン脂質化合物およびこれを用いたポ
リペプチドリポソームの製造方法を提供することである
。

（課題を解決するための手段） 本発明の目的は、下記、−形成（１）で示されるペプチ
ド誘導リン脂質化合物およびこれをリポソーム構成脂質
原料としてリポソームを形成したのち、この化合物を重
合することを特徴とするポリペプチドリポソームの製造
方法により達成された。

ＩＩ　　　　　　　　　ＩＩ　　　　　　　　１１Ｈ−
（ＮＨ−Ｃ）ｌ−Ｃ）　　１Ｉ−ＮＨ−ＣＩ−Ｃ−（Ｎ
）ｌ−ＣＩ　−Ｃ）　　□−ＸＲ３ＩＩＣＨ２Ｒ” ０＝Ｐ−０−Ｍ＋ ＣＨｚ　　ＣＨＣＨｚ ＲＩ　　　Ｒ２ 式中、Ｒ１，Ｒ２は炭素数８〜２４のアルキル基または
アシル基を示す。Ｒ１，Ｒ２はそれぞれ直鎖でも分岐で
もよい。また置換基、不飽和基を有していてもよい。好
ましくは、テトラデシル基、ヘキサデシル基、オクタデ
シル基、ミリストイル基、バルミトイル基、ステアロイ
ル基である。

Ｒ３″、Ｒ４′はそれぞれα−アミノ酸の側鎖残基を示
す。好ましくは、水素原子、リシン側鎖残基（（ＣＨ２
）４ＮＨ２）　、アスパラギン酸側鎖残基ら （−Ｃ１２Ｃｏｏｌ（）　、セリン側鎖残基（−ＣＨ２
ＯＨ）である。ｍが２以上のときＲ３″′は同じでも異
なっていてもよい。またｎが２以上のときＲ４″は同じ
でも異なっていてもよい。ｍ、ｎはそれぞれ０〜５の整
数を示す。好ましくは、ｍとｎの和がＯ〜３の整数であ
る。Ｍ４はリン酸陰イオンの対イオンを示す。（水素原
子を含む。）。好ましくは、Ｈ“アルカリ金属イオン（
Ｌｉ“、Ｎａ”　、Ｋ”Ｒｂ”、Ｃｓ”″）である。ま
た、分子末端のアミノ基がアンモニウム塩となり下記式
（ｎ）のように分子内でリン酸陰イオンと対イオンをな
していてもよい。

合成経路例 Ｃ２゜ ＣＨ３ ０＝Ｐ　−０ＣＩ３ ＣＨ−ＣＨ２ ０＝Ｐ−ＯＣＲ３ ＣＨ２−ＣＨ−ＣＨ２ ０＝Ｐ−ＯＣＲ。

ＣＨ２−ＣＨ−ＣＨ３ Ｘはその共役酸のｐｋａが７〜１６の間の離脱基を示す
。好ましくは、フェノキシ基、トリクロルエトキシ基、
ジクロルエトキシ基、モノクロルエトキシ基、エトキシ
基、メトキシ基、ＣＨ３ ＣＨ：ＣＣＨ２０−基、ＣＨ−Ｃ＝Ｎ−０−基、である
。

また、分子内に存在する不斉炭素に関しては、ラセミ体
でも光学活性体のいずれでもよいが光学活性体が望まし
い。

分子末端のアミノ基はアンモニウムイオンとなり適当な
酸成分と塩（例えばトリフルオロ酢酸塩、塩酸塩）を形
成してもよい。さらに分子内のリン酸陰イオンと塩を形
成してもよい。

本発明のペプチド誘導リン脂質の合成経路の例を下記に
示す。但し、本発明はこれに限定されるものではない。

Ｂｏｃ＝　（ＣＨ３）　ａ−Ｃ−０−ＣＣＨ。

ＣＨ２−ＣＨ−ＣＨ２ ３ｍ ＣＨ２−ＣＦＩ−Ｃ）＋３ Ｒ１Ｒ２ ＦＡ ・）１３Ｎ＝−ＣＩ−Ｃ （Ｎ−ＣＨ−Ｃ）。

−ＣＨ−Ｃ （Ｎ−ＣＨ−Ｃ）　、−Ｘ Ｒ３＋Ｉｆ ＣＨ２ １１４＋１ ０＝Ｐ−ＯＨ ＣＨ２−ＣＨ−ＣＨ２ （Ｎ−ＣＩ−Ｃ）。

−ＣＨ−Ｃ （Ｎ−ＣＨ−Ｃ）、ｌ ３ｆｆｉ ＣＨ２ ０＝Ｐ−０−Ｎａ” ＣＨｚ−ＣＨ−ＣＨｚ （１）ナトリウム塩 合成経路例 ＣＨｚ Ｂｏｃ　−Ｎ−ＣＨ−Ｃ−ＯＨ Ｂｏｃ−Ｎ−ＣＩ−Ｃ （Ｎ−ＣＩｌ−Ｃ） ＣＨ２ ＣＨ２ ＣＨ２−ＣＨ−ＣＨ２ ＣＨｚ−ＣＨ−ＣＴ。

ＣＨ。

ＣＨ２ ａ）８、■ メチルイミダゾール、 ＴＨＦ。

ｂ）７、■−メチルイミダゾール、ＴＨＦＣ） ５％ パラジウム炭素、 Ｒ７ 、酢酸エチル Ｒ４（１１ トリエチルアミン ｅ） トリフルオロ酢酸、 ジクロロメタン ジクロロメタン ｇ）臭化リチウム、 メチルエチルケトン； ｈ）炭酸水素ナトリウム水溶液、 クロロホルム １Ｈ１１ −　ｌ（３Ｎ”−ＣＨ−Ｃ−　（Ｎ−Ｃ）Ｉ−Ｃ）、ｌ
ＣＩｌｚ　　　　Ｒ” ＣＨｚ−ＣＨ−ＣＨｚ ・ＨＪ＋−ＣＩ−Ｃ−（Ｎ−Ｃ：Ｈ−Ｃ）　ｌ、ｌ−＋
　−Ｎ−ＣＨ−Ｃ−（Ｎ−ＣＨ−Ｃ）　１ｌ−ＸＲ３Ｃ
ｍ−１１ＣＬ　　　　１１７４１１０＝Ｐ−ＯＨ ＣＨｚ−Ｃｔｌ−ＣＨｚ ｏ　　　Ｏ（１） トリフルオロ酢酸塩 Ｉ　　Ｒ２ Ｈ−（Ｎ−ＣＨ−Ｃ）、−Ｎ−Ｃ８−Ｃ−（Ｎ−１ｃＨ
−Ｃ）。−ＸＲ”’　　　　　Ｃ１１２１１” ０−Ｐ−〇”−Ｎａ” ＣＨｚ−ＣＨ−Ｃｌｉｚ ｏｏ（１）ナトリウム塩 Ｉ　　Ｒ２ ここで、本発明のポリペプチドリポソームの製造方法に
ついて説明する。

本発明に係わるリポソームの重合はリポソームの脂質二
分子膜において一般式（１）で示されるペプチド誘導リ
ン脂質化合物が縮合重合してアミド結合を形成し、ポリ
ペプチドを形成することによって行われる。

本発明ではまず一般式（１）のペプチド誘導リン脂質化
合物をリポソームの構成素材として、リポソームを調整
する。リポソームの調製法としてはヴオルテックスイン
グ法、超音波照射法、界面活性剤除去法、逆相蒸発法（
ＲＥＶ法）、エタノール注入法、エーテル注入法、プレ
ーベシクル法（Ｐｒｅ−Ｖｅｓｉｃｌｅ法）、フレンチ
プレス押出法、エクストルージョン法（Ｅｘｔｒｕｓｉ
ｏｎ法）、アニーリング法（Ａｎｎｅａｌｉｎｇ法）、
凍結融解法、Ｗ１０／Ｗエマルジョン法、さらに５ｔａ
ｂｌｅ　ＰｌｕｒｉｌａｍｅｌｌａｒＶｅｓｉｃｌｅ法
（ＳＰＬＶ法）等の通常の方法が全て挙げられる。

これらのリポソーム調製法に関してはＰａｐａｈａｊｏ
ｐｏｕｌｓ　らによる総説（八ｎｎ、Ｒｅｖ、Ｂｉｏｐ
ｈｙｓ、Ｂｏｉｏｅｎｇ、　＋第９巻、４６７頁、１９
８０年）、野鳥、抄本、弁上らによる底置（リポソーム
、２１−４０頁、南江堂（１９８８））に記載されてい
る。

リポソームの精製に関しては通常の方法により行えばよ
い。（例えば、セファデックス　カラム、セファローズ
　カラム等によるゲルろ適法、遠心分離法、透析法が挙
げられる。） 本発明において、リポソームに内包可能な化合物として
は各種薬剤、抗生物質、色素、蛍光性物質などが挙げら
れる。

以上のように調製したリポソームの重合は、リポソーム
調製後適当な時間、好ましくは数十分から数時間放置し
ておけばよい。このときの分散液のｐＨは特に制限はな
いが、ｐＨ４〜１０の範囲でアミド形成を制御するのが
好ましい。

さらに、リポソーム調製時にリポソーム構成脂質として
、本発明における一般式（Ｉ）で示される化合物と既存
のリポソームの製造法において用いられる脂質とを混合
してもよい。（例えばシバ１フ ルミドイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、シミリ
ストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジステア
ロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、シバルミＩ
−イルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、
ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤｐＰＳ）　、
Ｅｇｇ　　レシチン等が挙げられる。） 尚、混合した場合混合する脂質は一種類でも二種類以上
でもよい。また、コレステロール類との混合でもよい。

以下に本発明の一般式（１）で示されるペプチド誘導リ
ン脂質化合物の好ましい具体例を示す。

しかし、本発明はこれらに限定されるものではない。

■ ■ ０＝Ｐ−ＯＮａ” Ｈｚｑ　　Ｈｚｑ ０２Ｐ−０１１ １ＬｚｑＨ□。

■ ０−Ｐ−０１（ １１ＨＩＩ ０＝Ｐ−ＯＨ Ｈ２９Ｈ２９ ０−Ｐ−０−Ｎａ” Ｈ：１７　　Ｈ３７ ０＝Ｐ−ＯＨ Ｈ３７Ｈ３□ ０＝Ｐ−０１１ Ｈ３？　　Ｈ３７ Ｈ２ ０＝Ｐ−０−Ｎａ＋ ｔｌ　ｚ　ｑ　　Ｈｚ　ｑ ■ ０＝Ｐ−ＯＨ Ｉ２９　８２９ ＣＨ ０＝Ｐ−０−Ｎａ’ Ｈｆｆ７　　Ｉ３７ ＣＨｚ ０＝Ｐ−０”Ｎａ＋ ＣＨｚ−ＣＨ−ＣＨ２ ＣＩ４　　Ｃｌ４ Ｉ２９　　Ｉ２９ 以下に、 本発明の好ましい具体例の相転移温度 または融点を示す。

ＣＨ ０＝Ｐ−ＯＨ ＣＩｌＩ　　ＣＩ［１ Ｉ３７　Ｉ３７ ０＝Ｐ−０−Ｎａ＋ ＣＩ４　　Ｃｌ４ Ｉ２９　Ｉ２９ 以下に、 本発明の合成例および実施例を示すが、本発明はこれら
に限定されるものではない。

合成例 ２）の合成） メチルホスホロジクロリーデート１２．２５ｇをテトラ
ヒドロフラン（ＴＨＦ）２０ｄに溶解した。ジテトラデ
シルー５ｎ−グリセロール８（８においてＲ’　＝Ｒ”
　＝Ｃ＋４Ｈｚ、）７．２５　ｇｌｌ−メチルイミダゾ
ール１．２５ｇ、ＴＨＦ混合液５０戚を滴下した。室温
で１．５時間攪拌した後にＢｏｃ−１−セリンベンジル
エステル７４゜３８１１−メチルイミダゾール１．２５
ｇ、ＴＨＥ混合液５０ｒｄを滴下して一昼夜静置した。

溶媒留去後して酢酸エチルで抽出し、有機層を硫酸ナト
リウムで乾燥し、酢酸エチルを減圧留去してシリカゲル
クロマト（ヘキサン／酢酸エチル−７５／２５）により
生成物を精製し２（２においてＲ１−Ｒ２＝Ｃｌ４Ｈ２
９）を無色液体として２．３ｇ得た。

上で得た２（２においてＲ’　＝Ｒ”　＝Ｃ，、Ｉ２．
）２．０ｇを酢酸エチル５０戚に溶解し５％パラジウム
炭素０，５ｇを加えて加水素分解を行った。

（室温３時間）セライトを用いてろ過し、ろ液を溶媒留
去し３（３においてＲ’　＝Ｒ２＝Ｃ，，Ｈ２，）を得
た。

３（３においてＲ’　＝　Ｒ２＝　Ｃｒ　ｐ　Ｈ２９）
　１　、　５ｇをジクロロメタン１５滅に溶解し、Ｎ、
　Ｎ’ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）０゜
５ｇを加え３０分間攪拌した。つぎに、グリシンプロパ
ギルエステルトリフルオロ酢酸塩０．７ｇ、トリエチル
アミン０．３ｇ、ジクロロメタン液１０雌を加え４時間
攪拌した。

これに水を加え有機層を硫酸ナトリウム乾燥し、生成物
をシリカゲルクロマト（ヘキサン／酢酸エチル−１／１
）にて精製し４（４においてＲ’　−Ｒ２−ＣＩ４Ｉ２
９、Ｘ＝−０−ＣＨ２Ｃ三ＣＨ１ｎ＝１、Ｒ柿−Ｈ）を
半固体状物質として０．　８ｇ得た。４（４においてＲ
’　＝Ｒ２＝ＣＩ４Ｈ２９、Ｘ＝ＣＨｚ　Ｃ＝ＣＨ，、
Ｒ４′″＝Ｈ）０．７ｇに）す７／Ｌ／オロ酢酸１０ｒ
ｄ、ＣＨ２Ｃｌ！、、１０戒を加え３０分間攪拌した。

溶媒留去後、残留物をＣＨ，Ｃｆｆ１２５ｄに溶解して
トリエチアミン０．１ｇ、Ｂｏｃグリシン無水物０．７
ｇを加え６時間攪拌した。溶媒留去後、生成物をシリカ
ゲルクロマト（ヘキサン／酢酸エチル−３／７）により
精製し６（６においてＲ’　＝Ｒ２＝Ｃ＋ａＨｚｑ、Ｘ
−−０−ＣＨ２ｃ＝ｃＨ，ｍ＝ｎ＝Ｌ　　Ｒ３ｍ−Ｒ４
＋″＝Ｈ）を蟻状物質として０．６ｇ得た。６（６にお
いてＲ’　＝Ｒ２＝Ｃ，４Ｈ２７、Ｘ−−ＯＣＨ２Ｃ＝
ＣＨＸｍ＝ｎ＝１、Ｒ”＝Ｒ４Ｉ′Ｉ＝Ｈ）０．４ｇを
メチルエチルケトン３　ｒｄ溶解し臭化リチウム０．９
ｇを加え一晩静置した。溶媒留去して、ジクロロメタン
、飽和食塩水を用いて抽出し、有機層を硫酸ナトリウム
乾燥して、ジクロロメタンを減圧留去した。残留物をビ
クロロメタン２ｒｎＩ。

に溶解し、トリフルオロ酢酸２ｄを加え３０分間攪拌し
た。溶媒留去して、残留物を酢酸エチルにより再結晶し
てペプチド誘導リン脂質（１−１）１５０ｍｇを得た。

赤外吸収スペクトル図を第２図に示す。

尚、各合成中間体の不斉炭素に関してはセリン部位が８
体、グリセロール部位がＲ体である。

合成例　２　　（（１−１）の合成） 合成例　１で得たペプチド誘導リン脂質（Ｉ２）１００
■をクロロホルムに溶解し飽和炭酸水素ナトリウム水溶
液を加え攪拌し、有機層を硫酸ナトリウム乾燥して溶媒
留去してペプチド誘導リン脂質（Ｉ−１）を得た。赤外
吸収スペクトル図を第１図に示す。

合成例　３　Ｎ１−４）の合成） フェニルホスホロジクロリーデート９８．０２ｇをＴＨ
Ｆ６０ｄに溶解し、Ｂｏｃ−１−セリンベンジルエステ
ル７８．８５ｇ、１−メチルイミダゾール３．１２ｇＴ
ＨＦ混合液１００ｍを滴下した。室温で１．５時間攪拌
した後にジオクタデシル−５ｎ−グリセロール８（８に
おいてＲ１＝Ｒ”　＝Ｃ＋４Ｈｚ、）１７．８８　ｇ、
１−メチルイミダゾール３．１２ｇ、ＴＨＦ混合液２５
０戚を滴下して一昼夜静置した。溶媒留去後して酢酸エ
チルで抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、酢酸
エチルを減圧留去してシリカゲルクロマト（ヘキサン／
酢酸エチル−７０／３０）により生成物を精製し１０　
（１０においてＲＩ＝　Ｒ２＝　Ｃ＋　ｓ　Ｈ３７）を
無色半固体として１０．５ｇ得た。

上で得た１０　（１０においてＲ’　＝　Ｒ２＝　ＣＩ
ｅ　Ｈ３７）２．９ｇを酢酸エチル５０ｄに溶解し５％
パラジラム炭素０，５ｇを加えて加水素分解を行った。

（室温３時間）セライトを用いてろ過し、ろ液を溶媒留
去して１１ を得た。

（１１においてＲ’　＝Ｒ”　＝Ｃｌ８Ｈ３７）１１　
（１１においてＲ’　＝Ｒ２＝ＣＩ８Ｈ３７）２．２ｇ
をジクロロメタン２０戒に溶解し、Ｎ、　Ｎ’ジシクロ
へキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）０゜５３ｇを加え３
０分間攪拌した。つぎに、グリシンメチルエステル０．
２７ｇジクロロメタン液１０戚を加え６時間攪拌したこ
れに水を加え有機層を硫酸ナトリウム乾燥し、生成物を
シリカゲルクロマト（ヘキサン／酢酸エチル−１／１）
にて精製ＬＬ２　（１２ニオイテＲ’　＝Ｒ２＝ＣＩＢ
Ｈ３７、Ｘ＝ＯＣＨ３、ｎ＝１、Ｒ”−Ｈ）を半固体状
物質として１．６８ｇ得た。１２　（１２においてＲＩ
＝Ｒ２ＣＩ８Ｈ３７、Ｘ−ＯＣＨ３、ｎ＝１、Ｒ”＝Ｈ
）１．６８ｇにトリフルオロ酢酸２０ｄ、ジクロロメタ
ン２０ｍ１を加え３０分間攪拌した。溶媒留去後、残留
物をＣＨ，（１２５ｄに溶解してトリエチルアミン０．
１８ｇ、Ｂｏｃグリシン無水物０１６０ｇを加え一晩攪
拌した。溶媒留去後、生成物をシリカゲルクロマト（ヘ
キサン／酢酸エチル−３／７）により精製し１４　（１
４においてＲ’　＝Ｒ２＝ＣＩ８Ｈ３７、Ｘ＝−ＯＣＨ
３、ｍ＝ｎ＝１、Ｒ３ｍ＝Ｒ”＝Ｈ）を螺状物質とし７
１．５ｇ得た。１４（１４においてＲ’　−Ｒ２＝　Ｃ
＋　ａ　Ｈ３７、Ｘ−−ＯＣＨ，、ｍ＝ｎ＝１、Ｒ””
＝Ｒ”＝Ｈ）１．０ｇを酢酸エチル２０成に溶解しＡｄ
ａｍｓ触媒０．３ｇを加え加水素分解した。セライトを
用いてろ過し、ろ液を減圧留去した。残留物をジクロロ
メタン２蔵に溶解し、トリフルオロ酢酸２ｒｄを加え３
０分間攪拌した。溶媒留去して、残留物を酢酸エチルに
より再結晶してペプチド誘導リン脂質（１−４）０．７
０ｇを得た。赤外吸収スペクトル図を第４図、　“Ｈ−
ＮＭＲスペクトル図を第８図に示す。

尚、合成中間体の光学活性に関してはセリン部位が８体
、グリセロール部位がＲ体である。

合成例　４　（（１−３）の合成） 合成例３で得たペプチド誘導リン脂質（１−４）１００
ｍｇをクロロホルムに溶解し飽和炭酸水素ナトリウム水
溶液を加え攪拌し、有機層を硫酸ナトリウム乾燥して溶
媒留去してペプチド誘導リン脂質（１−３）を得た。赤
外吸収スペクトル図を第３図に示す。

合成例　５　（（Ｉ−５）の合成） フェニルホスホロジクロリデート９３．２０ｇをＴＨＦ
　１０　（ｌｔｌ！に溶解し、Ｂｏｃ−１−セリンメチ
ルエステル３．３０ｇ、１−メチルイミダゾール１．２
０ｇ、ＴＨＦ混合液５０ｄを滴下した。室温で１．５時
間攪拌した後にジオクタデシル−５ｎ−グリセロール８
（８においてＲ＋、、＝Ｒｚ−Ｃ＋ｅＨ３７）　８．　
９０　ｇ、１、メチルイミダゾール１．２０ｇ、ＴＨＦ
混合液１００　ｒｄを滴下して一昼夜静置した。溶媒留
去後して酢酸エチル（ＡｃＯＥｔ）で抽出し、有機層を
硫酸ナトリウムで乾燥し、酢酸エチルを減圧留去してシ
リカゲルクロマト（ヘキサン／酢酸エチル−７０／３０
）により生成物を精製し無色半固体を３．９３ｇ得た。

上で得た無色半固体１．５ｇにトリフルオロ酢３３〜 酸２０戚、ジクロロメタン２０ｄを加え３０分間攪拌し
溶媒留去して残留物１．５ｇを得た。

Ｚ−グリシルグリシン４２６　ｍｇ、カルボニルイミダ
ゾール（ＣＤＩ）２６０■、ジメチルスルホキシド（Ｄ
ＭＳＯ）混合液１５ｍ１に、先に得た残留物Ｉ５ｇ、ト
リエチルアミン１６２■ＤＭＳＯ混合液を滴下した。−
日放置後溶媒留去して、クロロホルムと水を加え有機層
を硫酸ナトリウム翰燥して、溶媒を減圧留去した。残留
物をシリカゲルクロマト（メタノール／クロロホルム）
により精製し螺状物質６４０■を得た。

この螺状物質２５０■を酢酸エチル１０ｄ、メタノール
１０ｍに溶解しＡｄａｍｓ触媒１００ｍｇを加え加水素
分解した。

溶媒留去後、メタノールにより再結晶して、ペプチド誘
導リン脂質化合物（Ｉ−５）を２００■得た。赤外吸収
スペクトル図を第５図、′ＨＮＭＲスペクトル図を第９
図に示す。

尚、各合成中間体の不斉炭素のに関してはセリン部位が
８体、グリセロール部位がＲ体である。

合成例　６　（（１−６）の合成） 合成例　１と同様に合成した４（４においてＲ１＝　Ｒ
２＝　ＣＩａ　Ｈ２９、Ｘ−−０−ＣＨ２Ｃ三ＣＨ。

ｎ＝１、Ｒ″′−Ｈ）０．１　ｇをメチルエチルケトン
２　ｍｆｌに溶解し臭化リチウム０．１ｇを加え一晩静
置した。溶媒留去して、ジクロロ、メタン、飽和食塩水
を用いて抽出し、有機層を硫酸ナトリウム乾燥して、ジ
クロロメタンを減圧留去した。残留物をジクロロメタン
１　ｄに溶解し、トリフルオロ酢酸１ｒｄを加え３０分
間攪拌した。溶媒留去して、残留物を酢酸エステルによ
り再結晶してペプチド誘導リン脂質（Ｉ−６）５０■を
得た。赤外吸収スペクトル図を第６図に示す。

尚、各合成中間体の不斉炭素のに関してはセリン部位が
３体、グリセロール部位がＲ体である。

合成例　７（（１−７）の合成） 合成例　３と同様に合成した１２（１２においてＲ’　
＝Ｒ”　＝Ｃｌ８Ｈ３７、Ｘ−ＯＣＨ３、ｎ　＝　１、
Ｒ”＝Ｈ）０．３８ｇを酢酸エチル１０ｄ溶解しＡｄａ
ｍｓ触媒０．１ｇを加え加水素分解した。

セライトを用いてろ過し、ろ液を減圧留去した。

残留物をジクロロメタン２戚に溶解し、トリフルオロ酢
酸２　ｍｌ、を加え３０分間攪拌した。溶媒留去して、
残留物を酢酸エチルにより再結晶してペプチド誘導リン
脂質（１−７）０．２０ｇを得た。

赤外吸収スペクトル図を第７図に示す。

尚、各合成中間体の不斉炭素のに関してセリン部位が３
体、グリセロール部位がＲ体である。

実施例　１（ポリペプチドリポソームの製造）ペプチド
誘導リン脂質（Ｉ−１）３■をクロロホルムに溶解し、
クロロホルムを減圧留去して薄膜を形成させた。次に純
水１ｍｌを加え（ｐＨ８゜５）、ヴオルテックスミキシ
ングを行った（１分間、３回）。続いて、超音波照射を
行った（プローブ型、３０ｗ、１．５分、２回）。

１時間静置して、重合を完結させポリペプチドリポソー
ムを得た。

さらに、電子顕微鏡写真によりリポソームの形態観察を
行い粒径７５ｎｍのリポソームが形成されていることを
確認した。

実施例　２（ポリペプチドリポソームの製造）ペプチド
誘導リン脂質（Ｉ−３）３■をクロロホルムに溶解し、
クロロホルムを減圧留去して薄膜を形成させた。次に純
水１滅を加え（ｐＨ８゜６）、ヴオルテックスミキシン
グを行った（１分間、３回）。続いて、超音波照射を行
った（プローブ型、３０ｗ、１．５分、２回）。

８日間静置して、重合を完結させたポリペプチドリポソ
ームを得た。（粒径１５０　ｎｍ）実施例　３（ポリペ
プチドリポソームの内包試験）ペプチド誘導リン脂質（
１−２）３■をクロロホルムに溶解し、クロロホルムを
減圧留去して薄膜を形成させた。つぎに２００ｍＭカル
ボキシフルオレセイン、はう酸バッファーｐＨ９，０１
ｍｌ、を加え、ヴオルテックスミキシングを行った（１
分間、３回）。続いて、超音波照射を行った（プローブ
型、３０ｗ、１．．５分、２回）。

１時間静置して、重合を完結させ、セファロース　４Ｂ
カラムを用いてゲルろ過を行いポリペプチドリポソーム
がカルボキシフルオレセインを内包することを見いだし
た。

実施例　４（ポリペプチドリポソームの内包試験）ペプ
チド誘導リン脂質（Ｉ−３）３■をクロロホルムに溶解
し、クロロホルムを減圧留去して薄膜を形成させた。次
に２００ｍＭカルボキシフルオレセイン、リン酸バッフ
ァーｐＨ７，４１ｍｆ！を加え、ヴオルテックスミキシ
ングを行った（１分間、３回）。続いて、超音波照射を
行った（プローブ型、３０ｗ、１．５分、２回）。

８日間静置して、重合を完結させ、セファロース　４Ｂ
カラムを用いてゲルろ過を行いポリペプチドリポソーム
がカルボキシフルオレセインを内包することを見いだし
た。

【図面の簡単な説明】 第１図　ペプチド誘ｉ１Ｊン脂質化合物（［−１）の赤
外吸収スペクトル図、ＫＢｒ法 第２図　ペプチド誘導リン脂質化合物（１−２）の赤外
吸収スペクトル図、ＫＢｒ法 第３図　ペプチド誘導リン脂質化合物（Ｉ−３）の赤外
吸収スペクトル図、ＫＢｒ法 第４図 第５図 第６図 第７図 第８図 第９図 ペプチド誘導リン脂質化合物（Ｉ−４）の赤外吸収スペ
クトル図、ＫＢｒＢ ｒジペプチド誘導リン脂質化合物−５）の赤外吸収スペ
クトル図、ＫＢｒＢ ｒジペプチド誘導リン脂質化合物−６）の赤外吸収スペ
クトル図、ＫＢｒＢ ｒジペプチド誘導リン脂質化合物−７）の赤外吸収スペ
クトル図、ＫＢｒＢ ｒジペプチド誘導リン脂質化合物−４）の’Ｈ−ＮＭＲ
スペクトル図 （ＣＤ（１３−Ｄ２０中） ペプチド誘導リン脂質化合物（１−５）の“Ｈ−ＮＭＲ
スペクトル図 （ＣＤＣｌ２．”−Ｉ）ｚＯ中）

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記、一般式（ I ）で示される化合物。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、Ｒ＾１、Ｒ＾２は炭素数８〜２４のアルキル基
   またはアシル基を示す。Ｒ＾１、Ｒ＾２はそれぞれ直鎖
   でも分岐でもよい。また置換基、不飽和基を有していて
   もよい。Ｒ＾３＾ｍ、Ｒ＾４＾ｎはそれぞれα−アミノ
   酸の側鎖残基を示す。ｍ、ｎはそれぞれ０〜５の整数を
   示す。Ｍ＾＋はリン酸陰イオンの対イオンを示す（Ｈを
   含む。）。Ｘはその共役酸のｐｋａが７〜１６の間の離
   脱基を示す。また、分子内に存在する不斉炭素に関して
   は、ラセミ体でも光学活性体のいずれでもよい。分子末
   端のアミノ基はアンモニウムイオンとなり塩を形成して
   もよい。〕
2. （２）特許請求の範囲第一項の一般式（ I ）で示され
   る化合物をリポソーム構成脂質の少なくとも一つとした
   リポソームを形成したのち、この化合物を重合すること
   を特徴とするポリペプチドリポソームの製造方法。