JPH04208300A - 新規ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、昆虫フェロモン生合成誘導活性を有する新規
ペプチドに関する。

〔従来の技術〕

従来、農作物等に被害を与える害虫を駆除するために、
殺虫物質等の昆虫制御物質が使用されている。しかしな
がら、近年の環境問題の深刻化に伴い、昆虫制御物質の
毒性の高さや自然環境中での分解性の低さから、昆虫制
御物質の残留毒による環境汚染が問題になっている。

このような問題を解決するために、生物が本来有する生
体調節機構を巧みに利用した昆虫制御技術が検討されて
いる。このような昆虫制御技術の一つに、昆虫性フエロ
モンによって昆虫を誘引捕殺する方法等が検討されてい
る。

〔発明が解決しようとする課題〕

しかしながら、昆虫性フエロモンは、化学的に不安定な
物質が多く、構造決定が難しい。また、昆虫性フエロモ
ンの多くは、光学活性物質であるので、化学的合成によ
る昆虫性フエロモンの製造は困難である。このため、多
くの昆虫を捕獲または飼育し、昆虫性フエロモンを抽出
する必要がある。しかし、昆虫は、常に大量の性フエロ
モンを生合成するわけではなく、季節、光条件、気温等
の要因によって性フエロモンの生合成量が変動する。こ
のため、常時、必要量の昆虫性フエロモンを製造するこ
とは困難であった。

このような観点から、本発明者は、昆虫性フエロモンの
生合成を誘導する物質を昆虫に投与して、必要な時期に
昆虫に性フエロモンを生合成させることを鋭意検討した
結果、先に蚕の脳から昆虫フェロモンの生合成誘導活性
を有する２種類の脳ペプチドを精製し、ＰＢＡＮ−Ｉ、
ＰＢＡＮ−ｎと名付けた。このうちＰＢＡＮ−１の化学
構造を、３３残基のアミノ酸からなる修飾ペプチドであ
ると決定した。更に、化学的に合成したこの修飾ペプチ
ドが、天然のＰＡＢＮ−Ｉと同一の昆虫フェロモン生合
成誘導活性を有することを明らかにした（バイオケミカ
ル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケ
ーションズ　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ
、Ｃｏｍｍ、１６３．　５２０〜５２６　（１９８９）
）。

ＰＢＡＮ−Ｉのアミノ酸配列は、下記の通りである。

Ｈ−Ｌｅｕ−８ｅ　ｒ−Ｇ　Ｉ　ｕ−Ａｓ　ｐ−Ｍｅｉ
−Ｐ　ｒｏ−Ａ　ｌ　ａ−Ｔｈ　ｒ−Ｐ　ｒｏ−Ａ　Ｉ
　ａ−Ａｓ　ｐ−Ｇ　Ｉ　ｎ−Ｇ　Ｉ　ｕ−Ｍｅｔ−Ｔ
ｙ　ｒ−Ｇ　ｌ　ｎ−Ｐｒｏ−Ａｓ　ｐ−Ｐｒｏ−Ｇ　
］　ｕ−Ｇ　Ｉ　ｕ−Ｍｅｔ−Ｇ　Ｉ　ｕ−８ｅ　ｒ−
Ａ　ｒｇ−Ｔｈ　ｒ−Ａ　ｒｇ−Ｔｙ　ｒ−Ｐｈｅ７Ｓ
ｅ　ｒ−Ｐ　ｒｏ−Ａ　ｒｇ−１、ｅｕ　Ｎ１（２ 蚕だけでなく、別の昆虫からもＰＢＡＮ−Ｉと同様の脳
ペプチドが精製され、幅広い昆虫種に対してフェロモジ
誘導活性が確認されている（Ａ、に、ｌ？ａｎｊａ、ｅ
ｔ、ａｌ、、５ＣＩＥＮＣＥ、ＶＯｌ、２４４，１９．
Ｍａｙ。

１９８９、Ｐ７９８〜７９８）。

しかし、ＰＢＡＮ−Ｉ等の生理活性物質は、−般に比活
性が高く、不純物の影響を受けやすい。

天然型ＰＢＡＮ−１は、３３残基の長いペプチドからな
るため、高純度のＰＢＡＮ−Ｉを大量に化学合成するこ
とは困難である。

本発明は、かかる点に鑑みてなされたものであり、化学
的に大量にかつ高純度で合成することができる昆虫フェ
ロモン生合成誘導活性を有する新　゛規ペプチドを提供
するものである。

〔課題を解決するための手段〕

上記課題を解決するために、本発明者は、容易に合成及
び精製を行うことができる簡単な構造からなる新規ペプ
チドを得ることを目的として、天然型ＰＢＡＮ−Ｉの３
３の残基のうち、昆虫性フエロモンの生合成誘導活性に
直接関与するアミノ酸残基の特定を試みた。その結果、
ＰＢＡＮ−１の部分構造をもつ合成修飾ペプチド及びそ
れらの誘導体からなる新規ペプチドを見出した。

すなわち、本発明は、 一般式（Ｉ）： Ｒ−Ｐｈ’ｅ−Ｘ　１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−ＮＨ
２（式中、Ｒは、Ｈ＋　アセチル基またはベンゾイル基
を示す。Ｘｌは、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｐｒｏまた
はＶ’ａ　ｌを示す。） で表されるペプチドである。

また、本発明は、一般式（ＩＩ）： Ｒ−（Ｘ　２　）　ｎ　−Ｐｈｅ−Ｘ　、−Ｐｒｏ−Ａ
ｒｇ−Ｌｅｕ−ＮＨ２（゛式中、Ｒは、Ｈｌ　アセチル
基またはベンゾイル基を示す。Ｘ、は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ
、Ａｌａ、ＰｒｏまたはＶａｌを示す。Ｘ２は、一般的
なアミノ酸を示す。ｎは、１〜４の整数を示す。） で表されるペプチドである。

〔実施例〕 以下、本発明の実施例について詳細に説明する。

本発明に係る新規ペプチドである合成修飾ペプチドは、
Ｆｍｏ　ｃ法（国産化学社製のペプチド合成キット）ま
たは、゛全自動ペプチド合成機（アプライドバイオシス
テムズ社製のＡＢＩモデル４３０Ａ）を用いたｔＢ　ｏ
　ｃ法により固相法で合成した。また、アミノ末端のア
セチル化及びベンゾイル化は、レジンと保護基を脱離し
た後、無水酢酸、塩化ベンゾイルと反応させることによ
り行った。

このようにして得られた合成ペプチドを、逆相高速液体
クロマトグラフィー［装置、島津ＬＣ−６Ａ、カラム；
センシュウカガク０ＤＳ−Ｈ−１２５１，４，６Ｘ２５
０ｍｎ＋、溶媒；０．１％トリフルオロ酢酸水溶液０〜
３０％ＣＨ３ＣＮ、流速１ｎΩ／分］により精製した。

［昆虫フェロモン生合成誘導活性の測定コ本発明の新規
ペプチドの昆虫フェロモン生合成誘導活性を、蚕を用い
た生物検定により測定した。

生物検定に使用した蚕は、Ｃ１４０（雌）とＪ１４０（
雄）のＦ１ハイブリッドである。このハイブリッド系は
、雄のほうがやや白っぽいため、容易に雌雄を判別でき
る。このハイブリッド系の幼虫を、成用の半人工餌（ヤ
クルト社製）により、２５℃、４時間ごとに明暗を切り
替える条件下で、１６時間飼育した。雌の蜘のうち１．
９±０．２ｇのものを選び出して以下の試験に使用した
。

羽化後２時間を経過した成虫を断頭した後、各種濃度の
検定用試料１．０ｇｇをマイクロシリンジで注射した。

注射後３時間の成虫の腹部からホルモン腺を摘出した。

摘出したホルモン腺を酢酸エチルで抽出した。この抽出
物を高速液体クロマトグラフィー［装置；島原ＬＣ−６
Ａ、カラムＮｕｅｌｅｏｃｉｌ　５０ＤＳ　（８ｍｍ　
ｉ、ｄ、　Ｘ　１５ｃｍ）　、溶媒；メタノール：水＝
９３ニア、流速１．５ｍｌ／分］により蚕のフェロモン
であるボンビコールを定量した。

フェロモン生合成誘導活性は、検体生物の固体差が大き
いため、検定用試料のかわりにＰＢＡＮ−１を注射した
コントロールのボンビコール生成量を（＋＋）として、
ボンビコールのピークが全く得られないものを（−）、
ボンビコールの存在が僅かに認められるものを（±）、
コントロールに比べて略半分量のボンビコールを生成す
るものを（＋）として評価した。

上述の生物検定方法に従って、本発明に係る修飾ペプチ
ドの実施例及び比較例についてフェロモン生合成誘導活
性を検定した結果を、下記表１に示す。

表１から明らかなように、検定用試料Ｎｏ、２〜７の５
〜１０個のアミノ酸残基からなる本発明に係る合成修飾
ペプチドは、１　ｎｍｏｌの試料濃度では、いずれも天
然型のＰＢＡＮ−Ｉと同等のフェロモン生合成誘導活性
を示した。特に、検定用試料Ｎｏ、４〜７の合成修飾ペ
プチドは、１００ｐＨＩＯ＋の試料濃度においても、Ｐ
ＢＡＮ−Ｉと同等のフェロモン生合成誘導活性を示した
。

これに対して、検定用試料Ｎｏ、１及び１２の４個のア
ミノ酸残基からなる比較例の合成修飾ペプチドは、ボン
ビコールの分泌が殆ど見られず、フェロモン生合成誘導
活性を示さなかった。

また、ペプチドのＣ末端をアミノ基で修飾していない検
定用試料Ｎｏ、８．９及び１１は、フェロモン生合成誘
導活性を示さなかった。

また、検定用試料Ｎｏ、２の本発明に係る合成修飾ペプ
チドＨ−Ｐｈｅ−８ｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｎ
ｌ２のＬｅｕのＣ末端側にＧｌｕが挿入されている検定
用試料Ｎｏ、１０は、フェロモン生合成誘導活性を示さ
なかった。

また、Ｃ末端から数えて６番目のＴｙｒを夫々Ｐｈｅ　
、　Ｌｅｕ　、　Ａ　ｌ　ａに代えた検定用試料Ｎｏ、
１３〜１５の６個のアミノ酸残基からなる合成修飾ペプ
チドは、いずれもｌｎｍｏｌの試料濃度においてＰＢＡ
Ｎ−Ｉと同等のフェロモン生合成誘導活性を示した。

また、Ｃ末端から数えて４番目のアミノ酸残基を夫々Ａ
ｌａ　、　Ｔｈｒ　、　Ｐｒｏに代えた検定用試料Ｎｏ
、１６〜１８の６個のアミノ酸残基からなる合成修飾ペ
プチドは、いずれもＩ　ｎ１ｌ１０１の試料濃度におい
てＰＢＡＮ−１と同等のフェロモン生合成誘導活性を示
した。

また、Ｎ末端のアミノ基を夫々アセチル基、ベンゾイル
基で置換した検定用試料Ｎｏ、１９〜２２の合成修飾ペ
プチドは、いずれもＰＢＡＮ−■と同等のフェロモン生
合成誘導活性を示した。

〔発明の効果〕

以上説明した如くに、本発明の新規ペプチドは、は、化
学的に大量にかつ高純度で合成することができる。これ
により、本発明の新規ペプチドを昆虫に投与して、必要
な時期に昆虫に性フエロモンを生合成させて、害虫の誘
引捕殺に有用な昆虫性フエロモンを容易に得ることがで
きる等顕著な効果を有するものである。

出願人代理人　弁理士　鈴江武彦 第１゛頁の続き ＠発明者国吉　久人 ＠発明′者北村　昭浩 ０発　明　者　　安　　藤　　　　　哲＠発明者中馬　
達二 ＠発明者島崎　利子 東京都文京区弥生１丁目１番１号　東京大学農学部農芸
化学科内 東京都文京区弥生１丁目１番１号　東京大学農学部農芸
化学科内 東京都府中市幸町３丁目５番８号　東京農工大学農学部
応用生物科学科内 神奈川県横浜市緑区梅ケ丘６番地２　日本たばこ産業株
式％式％ 神奈川県横浜市緑区梅ケ丘６番地２　日本たばこ産業株
式会社生命科学研究所内

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式（ I ）： Ｒ−Ｐｈｅ−Ｘ＿１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−ＮＨ＿
   ２（式中、Ｒは、Ｈ、アセチル基またはベンゾイル基を
   示す。Ｘ＿１は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｐｒｏまた
   はＶａｌを示す。） で表されるペプチド。
2. （２）一般式（II）： Ｒ−（Ｘ＿２）＿ｎ−Ｐｈｅ−Ｘ＿１−Ｐｒｏ−Ａｒｇ
   −Ｌｅｕ−ＮＨ＿２（式中、Ｒは、Ｈ、アセチル基また
   はベンゾイル基を示す。Ｘ＿１は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａ
   ｌａ、ＰｒｏまたはＶａｌを示す。Ｘ＿２は、一般的な
   アミノ酸を示す。ｎは、１〜４の整数を示す。） で表されるペプチド。