JPH04210923A - 薬物調合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

［０００１］本発明は免疫変性活性をもつ蛋白質、コラ
ン酸誘導体および脂質を含む薬物調合物に関する。 ［０００２］本明細書において「免疫変性活性をもつ蛋
白質」と言う言葉は人および動物の免疫系の異なった細
胞の成熟、賦活および抑制を制御する蛋白質を意味する
。使用される蛋白質は天然のものでも良く、また組み換
え法によってつくることもできる。 ［０００３］　このような蛋白質の例としてはインター
フェロン（ＩＦＮ）、例えばＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、
■ＦＮ−γ；複合インターフェロン；インターロイキン
（ＩＬ）、例えばＩＬ−１（ＥＴＡＦ、ＬＡＦ）、ＩＬ
２　（ＴＣＧＦ）、ＩＬ−３（マルチ−Ｃ８Ｆ、ＭＣＧ
Ｆ）、ＩＬ−４（ＢＳＦ−１、ＢＣＧＦ−２）、ＩＬ５
　　（ＴＲＦ、ＢＣＧＦ−Ｉ　Ｉ）、ＩＬ−７（リンフ
ォポイエチン）；リンフォトキシン（ＴＮＦ−β）；マ
クロファージ阻害因子（ＭＩＦ）；チモポイエチン（Ｔ
ＰＯ）；形質転換促進因子−α（ＴＧＦ−α）；形質転
換促進因子−β（ＴＧＦ−β）；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ
α、カケクチン、ＤＩＦ）；ウロモデュリン［タム・ホ
ルスフォール（Ｔ　ａｍｍ−Ｈｏ　ｒ　ｓ　ｆ　ａ　ｌ
　１　）蛋白］　；ノイロロイキン；ＣＤ４がある。 ［０００４］免疫機構に活性をもつ蛋白質の他の例とし
ては成長および分化因子、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ
Ｃ８Ｆ）、顆粒球−マクロファージ・コロニー刺激因子
（ＧＭ−Ｃ８Ｆ、Ｃ３Ｆ−２）　、マクロファージ・コ
ロニー刺激因子（Ｃ８Ｆ−１、Ｍ−Ｃ８Ｆ）；抗体また
は抗体−試薬複合体、ハイブリッド蛋白質、例えばＩＬ
２ジフテリア・トキシン、およびエイズ、マラリア、肝
炎、ヘルペス、インフルエンザ、を髄灰白質炎および他
の感染性疾患に対するワクチン製造用の蛋白質がある。 ［０００５］本発明においては、このような蛋白質はコ
ラン酸誘導体と脂質との水溶液を使用すると可溶化およ
び／または安定化させることができ、通常の水溶液に比
べ、このようにして得られた混合ミセルは例えば可溶化
性か大きく、表面に対する蛋白質の吸着性が少なく、凝
集の傾向が少なく、同時に濃厚な調合物をつくり得る能
力が大きく、正確に投与でき、貯蔵安定性が良好である
という技術的進歩が得られる従って本発明はコラン酸塩
および脂質を免疫変性活性をもった蛋白質の溶液および
乾燥調合物の製造に使用する方法、およびこれを水溶液
中の免疫変性活性をもった蛋白質の吸着の予防、脱着、
凝集の予防および脱凝集に使用する方法に関する。 ［０００６］本発明の調合物は公知方法、例えばドイツ
特許公開明細書第２．７３０．５７０号記載の方法に取
りつくることができる。 ［０００７］本発明の調合物中の適当なコラン酸誘導体
はコラン酸の塩およびドイツ特許公開明細書第２，７３
０．５７０号記載のコラン酸誘導体、例えばコレート、
グリココレートおよびタウロコレート、特にそのアルカ
リ金属塩、例えばナトリウム塩である。Ｎａ−グリココ
レートが特に好適である。 ［０００８］脂質の例としては天然の、および半合成ま
たは全合成されたフォスファチジルコリン、ホスファチ
ジルエタノールアミン、フォスファチジルイノシトール
、フォスファチジルセリン、スフィンゴマイニリン、プ
ラズマロゲン、カルシオリピン、スルファチド、および
側鎖が変性された合成レシチン、例えばヨーロッパ特許
明細書Ａ２−０．１５４，９７７号記載のものがある。 混合ミセルは他の成分としてコレステロール（脂質含量
に関し最高約３０モル％）および陽電荷または陰電荷を
帯びた脂質、例えばフォスファチジン酸またはステアリ
ルアミド（脂質含量に関し最高約１０モル％）を含んで
いることができる。 ［０００９］脂質対フラン酸塩のモル比は０．１：１〜
２：１の程度が適当である。この比が０．８：１〜１゜
５：１の混合物が好適である。 ［００１０］脂質およびコラン酸塩の全量は好ましくは
約５０〜３００ｍｇ／ｍｌである。調合物１容量単位の
蛋白質の量は広い範囲で変えることができ、含まれる特
定の蛋白質の生物活性に依存する。一般に蛋白質は約０
、００１〜１０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．０１〜１ｍ
ｇ／ｍ１の濃度で存在する。

【００１１】酸化防止剤、例えばトコフェロール、アス
コルビルパルミテート、アスコルビン酸ナトリウム、亜
硫酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウムまたは亜硫
酸ナトリウムを加え、活性化合物および担体材料の酸化
反応を防ぐことができる。 ［００１２］他の助剤、即ちｐＨ調節剤、例えば燐酸塩
、クエン酸塩またはトリス緩衝剤；等張力性賦与剤、例
えば塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトールまた
はグルコース、防腐剤、例えばｐ−安息香酸メチルおよ
びプロピル、ベンジルアルコールまたはフェノールを加
えることもできる。 ［００１３］必要に応じ混合ミセル−蛋白質溶液は通常
の乾燥法、例えば凍結乾燥法を用いて乾燥調合物に変え
ることができる。 ［００１４］本発明の調合物は被経口投与により、例え
ば静脈注射または皮下注射により、或いは腸管経由投与
法により、例えば口、鼻、口腔、直腸または膣を介して
、或いは局所的に投与することができる。 ［００１５］下記実施例により本発明の調合物の製造法
を例示する。 ［００１６］

【実施例１】レシチン（ＰＣ）およびＮａグリココレー
ト（ＮａＧＣ）をモル比１：１でクロロフォルム／メタ
ノール（１：１容量部）に溶解する。回転丸底フラスコ
中で４０℃において減圧をかけ溶媒を蒸発させる。フラ
スコの壁に残渣として残ったフィルムを水に分散させ、
撹拌しながら蛋白質を加える。組み替えインターロイキ
ン（ｒＩＬ−２）および組み換えβ−インターフェロン
（ｒ　Ｉ　ＦＮ−β）を水性緩衝溶液（組成は下記表１
に示す）として加える。Ｈｉｓ６−ｐ１９０　（Ｉ−２
）　　［プラスモディウム・ファルシパルム（Ｐ　１　
ａ　ｓｍｏｄ　ｉ　ｕｍ　　ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）表
面蛋白質］およびＨＩＶ２２（ＨＩＶＩ　　融合蛋白質
）を／／／シた形で加えた。このようにして得られた溶
液（いずれの場合もＰＣおよびＮａＧＣ濃縮物１００ｍ
Ｍ）のｐＨを０．ＩＮのＮａＯＨを加えて７．１±０．
１に調節し、Ｎ２で不活性雰囲気にし、滅菌濾過し［０
，２２μｍミリボア（Ｍｉ　１１１ｐｏｒｅ）フィルタ
ー］、アンプルに注ぎ、室温で貯蔵する。 ［００１７］

【表１】 表１ このようにしてつくられたミセル溶液を可溶化挙動に関
して試験し、純粋の水溶液（非ミセル溶液）と比較した
。この目的のために製造後２４時間においてこれらの溶
液を１５℃で遠心分離に１時間かけた（３５，０００Ｕ
／分）。上澄液中の蛋白質含量をマークウェル（Ｍａｒ
ｋｗｅｌｌ）法［アナリティカル・バイオケミストリー
（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
）誌８７巻２０６〜２１０頁（１９７８年）］により測
定した。得られた測定値を表２に示す。 ［００１８］

【表２】表２ １）初期濃度に関する％。 ［００１９］　これらの測定値似よれば、混合ミセル溶
液中のｒＩＬ−２、ｒＩＦＮ−β、Ｈｉｓ６−ｐ１９０
（１−２）およびＨＩＶ　　２２は溶液中で可溶化した
形で残り、非ミセル性の従来の水溶液に比べ明らかに高
濃度で存在している。この効果は蛋白質がミセル溶液中
で凝集し吸着される傾向が少ないことにより説明するこ
とができるが、実用的には著しい重要性をもっているこ
とが示される。免疫変性活性をもった蛋白質は極めて高
い活性をもった化合物である。このような活性化合物を
治療に使用するには信頼性のある投与が必要である。表
２に示すように、通常の溶液を使用する代わりに本発明
の溶液を用いた場合、より正確な投与を高度の信頼性を
もって行うことができる。さらに蛋白質の凝集により生
じる免疫応答（抗体の生成）を減少または予防すること
ができる。 ［００２０］

【実施例２］　１８，０００，０ＯＯ１，Ｕ、のｒＩＦ
Ｎ−ａおよび３ｍｌの注射用の水または０．８％のベン
ジルアルコールを含んだ、人の血漿アルブミンを含みま
たは含まない凍結乾燥物から再調製したｒＩＦＮ−α溶
液は数日以内で、−殻内には室温で１〜２日以内、５℃
では２〜５日以内で明らかな凝集を示す。 ［００２１１他方、同じ凍結乾燥物および溶液からつく
られたナトリウムグリココレートおよびレシチンを含ん
だｒＩＦＮ−α溶液は、調製後生なくとも最高−夕月後
においても室温および５℃において物理的に安定であり
、抗ウィルス活性を失わなかった（表３参照）。 ［００２２］　リュービンシュタイン（Ｒｕｂｉｎｓｔ
ｅｉｎ）等［ジャーナル・オヴ・ヴアイロン（Ｊ、Ｖｉ
ｒｏｎ）３７巻７５５〜７５８頁（１９８１年）］記載
のＭＤＢＫ　［マジソン・ダービー（Ｍａｄｉｓｏｎ　
　Ｄａｒｂｙ）の牛の腎臓］の細胞および■Ｓ■ウィル
ス［水液性口内炎ウィルス］を用いる細胞変性試験を使
用し、ｒ−α−ＩＦＮの抗ウィルス活性を決定した。 ［００２３］ 【表３】 表３ １８．０００，０００１．Ｕ、のｒＩＦＮ−ａおよび３
ｍｌの溶媒を含む凍結乾燥物からつくったα−インター
フェロン溶液の安定性溶媒　　　　　　　　物理的安定
性　　　　　　　抗ウィルス活性（初期値に対する％） 注射用の水　　　　　室温で１〜２日後、５℃で　　　
　決定せず２〜５日後に透明な粒子が 生成（底から渦巻き状になる）。 ［００２４］ ０．９％ベンジル　　室温で１〜２日後、５℃で　　　
　決定せずアルコール　　　　　２〜５日後に透明な粒
子が生成（底から渦巻き状になる）。 ［００２５］　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　２０ナトリウム　　　　　透明な溶液。室温お
よび５℃　　　１０１．６％グリココレート　　　にお
いて調製後最高少なくとも　　（１ヶ月／室温）および
レシチン　　　一ヶ月後にも粒子は生成せず。　　９５
．２％を含む溶媒１）（１ヶ月１５℃） １）使用した溶液は下記の組成をもっている。 ［００２６］ グリココリン酸　　　　　　　　　　　　　８８．５ｍ
ｇＮａＯＨ４０％　　　　　　　　　　　　１９．０ｍ
ｌレシチン　　　　　　　　　　　　　　　　１６９．
０ｍｇベンジルアルコール　　　　　　　　　　　　９
．０ｍｇｐＨを６．０にするためのＩＮ　　ＮａＯＨ必
要量注射用の水　　　　　　　　　　　　　　全体を１
．０ｍｌにする量これは次のようにしてつくることがで
きる。 ［００２７］　　８．８５ｇのグリココリン酸をＮ２を
通じた注射用の水５０ｍ１に懸濁させ、１．９ｍｌの４
０％ＮａＯＨを用いて溶解させる。１６．９ｇの微粉末
レシチンを加え、撹拌しながら溶解させる。０．９ｇの
ベンジルアルコールを加え、ＩＮのＮａＯＨでｐＨを６
．０に調節した後、得られた溶液をＮ２を通じた注射用
の水で１００ｍ１にする。膜フイルタ−（０，４５μｍ
）を通してこの溶液を濾過し、無菌条件下でアンプルに
注ぎ、最後にオートクレーブ中で滅菌する。 ［００２８］

【実施例３】ガラスの凍結乾燥物フラスコの壁にｒＩＦ
Ｎ−αが明らかに吸着するため、１，０００，０ＯＯＩ
。 Ｕ、のｒ−ＩＦＮ−αおよび注射用の水を含む人の血漿
アルブミンを含まない凍結乾燥物を再調製すると、通常
間らかにｒ−ＩＦＮ−α含景が低い溶液が得られる。表
４から判るように、ナトリウムグリココレートおよびレ
シチンを含んだ溶媒は所望のようにｒ−ＩＦＮ−αを脱
着する。従って問題の多い人の血漿アルブミンを使用す
ることなく、ｒ−ＩＦＮ−αを正確に投与することが可
能になる。 ［００２９］必要に応じナトリウムグリココレートおよ
びレシチンを凍結乾燥物すべきｒ−ＩＦＮ−αの溶液に
加えることができ、或いは別法としてｒ−ＩＦＮ−αの
すぐ使用できるアンプル溶液に加え、試験管のガラス壁
に蛋白質が吸着するのを防ぐことができる。 ［００３０１ 【表４］ 表４ １．０００，０００１．Ｕ、のｒ−ＩＦＮ−ａおよび１
ｍｌの溶媒を含み人の血漿アルブミンんを含まない凍結
乾燥物からつくられたｒ−ＩＦＮ−α溶液の抗ウィルス
活性 溶媒 注射用の水 溶媒Ｎｏ、　１１） 溶媒Ｎｏ、　２２） 抗ウィルス活性 ５７０．０００　１．Ｕ。 ９１０．０００　１．Ｕ。 ９６０．０００　１．Ｕ。 ■）表３記載の溶媒から５％の滅菌したグルコースを用
い１＋１９　（溶媒Ｎｏ、　１）および１＋３（溶媒Ｎ
ｏ。 ２）で希釈して２種の溶媒をつくった。これらの溶媒は
１ｍｌ当たりそれぞれ４．４ｍｇまたは２２．１ｍｇの
ナトリウムグリココレートおよび８．４５ｍｇまたは４
２゜２５ｍｇのレシチンを含んでいた。 ［００３１１本発明の主な特徴及び態様は次の通りであ
る。 １、免疫変性活性をもつ蛋白質、コラン酸誘導体および
脂質を含む薬物調合物。 ［００３２］２．免疫変性活性をもつ蛋白質が成長また
は分化因子である上記第１項記載の調合物。 ［００３３］３．成長または分化因子がコロニー刺激因
子である上記第２項記載の調合物。４．免疫変性活性を
もつ蛋白質がワクチン製造用の蛋白質である上記第１項
記載の調合物。 ［００３４］　５．免疫変性活性をもつ蛋白質がシトキ
ンである上記第１項記載の調合物。 ［００３５］　６．免疫変性活性をもつ蛋白質がインタ
ーフェロンまたはインターロイキンである上記第５項記
載の調合物。 ［００３６］　７．シトキンがｒ−ＩＦＮ−ａ、ｒ−Ｉ
ＦＮ−βまたはＩＬ−２である上記第５項記載の調合物
。 ［００３７］　８．非経口投与および腸管経由投与用の
上記第１〜７項記載の調合物。 ［００３８］　９．免疫変性活性をもつ蛋白質の溶液ま
たは乾燥調合物の製造にコラン酸塩および脂質を使用す
る方法。 ［００３９］　　１０．水溶液中において免疫変性活性
をもつ蛋白質の吸着の予防、脱着、凝集の予防および脱
凝集を行うのにフラン酸塩および脂質を使用する方法。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　免疫変性活性をもつ蛋白質、コラン酸誘
   導体および脂質を含有して成ることを特徴とする薬物調
   合物。