JPH04211341A - 甘味剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は甘味剤としての１−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースの使用に関する。

【０００２】Ｇ．　Ａｖｉｄａｄ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．　
Ｊ．　７３、５８７［１９５９］）はスクロース及びフ
ルクトースの混合物に対するイーストの作用により１−
Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースを得
ることを報告した。しかしながら、収率が非常に低かつ
た（出発スクロースを基準として０．７７％）。Ｂ．　
Ｍ．　Ｌｕｎｄ及びＧ．Ｍ．Ｗｙａｔｔ（Ｊ．　Ｇｅｎ
．　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．　７８［Ｐｔ．２］、３３１
−６［１９７３］）はスクロース２−４％を含有する栄
養溶液に対するエルビニア　　カロトボラ　　アトロセ
プチカ（Ｅｒｖｉｎｉａ　ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ　ａｔ
ｒｏｓｅｐｔｉｃａ）の作用により６−Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシド−Ｄ−フルクトース（イソマルチユロー
ス）の他に１−Ｏ−α−グルコピラノシド−Ｄ−フルク
トースを製造することができた。

【０００３】これらの製造方法は非常に低い収率である
という欠点を有し、従つてこの方法の工業的使用は可能
ではなかつた。

【０００４】ドイツ公開３０３８２１９は１−Ｏ−α−
Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースは固定化バク
テリア細胞（ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｂａｃｔｅｒｉ
ａｌ　ｃｅｌｌｓ）を使用してスクロースからの酵素に
よる転化によりイソマルチユロース（６−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシド−Ｄ−フルクトース）の製造における
副生物として形成されることを開示している。

【０００５】反応の正しい条件を観測することによつて
、生成物溶液はサツカロースからイソマルチユロースを
形成する微生物を使用してスクロース溶液及びイソマル
チユロース溶液の両方から製造することができ、驚くべ
きことに該生成物溶液は主成分として１−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースを含有する。微生
物が生きている形態又は死んだ形態の完全細胞（Ｗｈｏ
ｌｅ　ｃｅｌｌｓ）として使用されるか又は細胞が固定
化されていないか（ｆｒｅｅ）もしくは固定化されてい
る（ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ）かどうか或いは酵素が最
初細胞から導かれ次いで固定化されていない酵素として
もしくは固定化された形態で使用されるかどうかはこの
点に関しては重要ではない。スクロース又はイソマルチ
ユロースからの酵素による転化（ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　
ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ）により１−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシド−Ｄ−フルクトースを製造するための本発明
の方法は、スクロース又はイソマルチユロースの溶液を
スクロースからイソマルチユロースを形成する微生物の
固定化されていない又は固定化された酵素抽出物又は固
定化されていないもしくは固定化された、生きているも
しくは死んだ完全細胞と接触させ、１−Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシド−Ｄ−フルクトースをイオン交換体又は
他の適当な分離物質によるクロマトグラフイー分離によ
り水溶液として先ず得、次いでそれをそれ自体公知の方
法で乾燥形態に転化することを特徴とする。

【０００６】本発明の方法においては、好ましくは約２
０−５５重量％の濃度におけるスクロース又はイソマル
チユロースの溶液を固定化されていないもしくは固定化
された細胞又は微生物の酵素抽出物で、２５−５５℃、
好ましくは３０−５０℃の温度で、且つスクロースもし
くはイソマルチユロースを所望の糖に十分に転化する時
間処理する。接触時間は少なくとも１０−２０時間であ
り、好ましくはスクロース溶液に対して少なくとも１５
−１８時間である。より長い接触時間がイソマルチユロ
ースの溶液に対して必要である。

【０００７】スクロース又はイソマルチユロース溶液の
転化は、適当な反応器において、たとえば発酵器（ｆｅ
ｒｍｅｎｔｅｒ）中で又は特に固定化された細胞もしく
は酵素抽出物を使用する場合には固定化された細胞もし
くは酵素抽出物を充填されたカラムにおいて連続的に又
はバツチ方式で行なうことができる。

【０００８】生きているもしくは死んだ細胞として又は
酵素抽出物の形態の本発明の方法に有用な微生物として
は、固定化されていても固定化されていなくても、スク
ロースをイソマルチユロースに酵素により転化すること
ができる微生物の何れも使用することができる。これら
は、プロトアミノバクタールブルム（Ｐｒｏｔａｍｉｎ
ｏｂａｃｔｅｒｒｗｂｒｕｍ）（ＣＢＳ５７４，７７）
、セラチアプリムチカ（Ｓｅｒｒａｔｉａ　ｐｌｙｍｕ
ｔｈｉｃａ）（ＡＴＣＣ１５９２８）、セラチア　　マ
ルセツセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ　ｍａｒｃｅｓｃｅｎ
ｓ）（ＮＣＩＢ８２８５）、ロイコノストツク　　メセ
ンテロイデス（ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ　ｍｅｓｅｎｔ
ｅｒｏｉｄｅｓ）（ＮＲＲＬ　　Ｂ−５１２Ｆ［ＡＴＣ
Ｃ１０８３０ａ］）及びエルヴイナラポンテイシ（Ｅｒ
ｗｉｎｉａ　ｒｈａｐｏｎｔｉｃｉ）（ＮＣＰＰＢ１５
７８）を包含する。プロトアミノバクタールブルム（Ｃ
ＢＳ５７４，７７）の細胞又は酵素抽出物が好ましくは
使用される。

【０００９】その後に固定化され又は本発明の方法に対
する酵素抽出に付され得る細胞を製造するために、５重
量％の乾燥物質含有率のみ含有する栄養培地において最
適の細胞増殖が行なわれる。栄養培地はシロツプ（砂糖
工業の中間生成物）、コーンステイープリカー（ｃｏｒ
ｎ　ｓｔｅｅｐ　ｌｉｑｕｏｒ）及び（ＮＨ４）２ＨＰ
Ｏ４を含有する。しかしながら、テンサイ糖蜜（ｓｕｇ
ａｒ　ｂｅｅｔ　ｍｏｌａｓｓｅｓ）及び（ＮＨ４）２
ＨＰＯ４のみから成る実質的により経済的な栄養剤基質
（ｍｕｔｒｉｅｎｔ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）を使用する
のが有利である。 この栄養剤基質を製造するために、上記糖蜜は乾燥物質
５重量％の含有率まで蒸留水で希釈される。追加の窒素
及びホスフエイト源として（ＮＨ４）２ＨＰＯ４　　０
．１Ｋｇをこの溶液１００Ｋｇに加える。ｐＨ値はカセ
イソーダ又はカセイカリによつて又は塩酸によつて７．
２に調節される。

【００１０】イソマルチユロース形成性微生物、たとえ
ば、プロタミノバクター・ルブルム（ＣＢＳ５７４，７
７）の接種物（ｉｎｏｃｕｌｕｍ）は上記組成の無菌の
栄養剤基質１０ｍｌと共に振とうフラスコに移されそし
て２９℃における同じ栄養剤培地２００ｍｌ中でインキ
ユベーシヨンする。撹拌された培養物中の細胞計数が５
×１０９細胞／ｍｌに達するとただちに培養物を上記組
成の栄養剤培地と共に小さな発酵器に移し、そして２９
℃の最大可能な通気及び撹拌速度で増殖させる。増殖は
細胞計数の決定により撹拌培養物（ａｇｉｔａｔｉｏｎ
　ｃｕｌｔｕｒｅ）に対すると同じ方法で制御される。 細胞計数が５×１０９細胞／ｍｌに達するや否や発酵器
から収穫することができる。

【００１１】細胞の固定化は完全細胞を固定化するため
のＩ．ＣＨＩＢＡＴＡ（Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｅｎ
ｚｙｍｅｓ，　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　Ｓｏｎ
ｓ，　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，　Ｌｏｎｄｏｎ，　１９７８
）により記載された方法に従つて行なうことができる。 特に適用可能であることが見出された方法はカチオン性
凝集剤による凝集、キトサン（ｃｈｉｔｏｓａｎ）によ
る凝集、アルギン酸カルシウムマトリツクスへの封入（
ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ）、セルロースジアセテート又はセ
ルローストリアセテートへの封入；Ｋ−カラジーナンゲ
ル（Ｋ−ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ　ｇｅｌ）への封入及
びカチオン性凝集剤又はアニオン性凝集剤又はこれらの
両方の組合せによる凝集を含む。

【００１２】細胞の漏洩を防止するために、上の方法に
より製造された調製物は架橋を必要とする。２官能性試
薬、たとえばグルタルアルデヒドが架橋のために使用さ
れる。イソマルチユロース形成性微生物に関して３０−
４５分の接触時間に対して２．５〜５％の普通の使用さ
れるグルタルアルデヒドを使用することは可能ではない
。これらの条件下では、固定化された調製物はすべて完
全に不活性化されたことが見出された。本方法に対する
最適架橋条件はグルタルアルデヒド０．１％の濃度、及
び１０分の処理時間であることが見出された。

【００１３】本発明の方法に有用な酵素はイソマルチユ
ロース形成性酵素からたとえば分解、硫酸アンモニウム
沈殿及びゲルクロマトグラフイーを含む当業界で良く知
られている方法によつて抽出することができる。それ自
体公知である酵素の固定化方法は適当な固定化された酵
素を製造するために使用することができる。

【００１４】固定化された細胞又は酵素は適当なカラム
反応器に入れることができる。この反応器は加熱可能で
なければならずそして約１：１〜１：２０、好ましくは
１：１〜１：１０、特に１：１．５〜１：５の直径対床
高さ割合であるべきである。スクロース又はイソマルチ
ユロース溶液はカラムの頂部から底部へ又は底部から頂
部へ２５〜５５℃の温度でポンプ送りされる。流速は適
切な接触時間、たとえば１０〜２０時間を得るように調
節される。

【００１５】本発明の方法に従う方法の他の特徴は本願
において後に記された実施例に関連して記載された好ま
しい方法を参照することによつてより良く理解される。

【００１６】本発明の方法により得られた１−Ｏ−α−
Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースは食料品、ご
ちそう（ｄｅｌｉｃａｃｉｅｓ）及び飼料に対する甘味
料として（ａ）　　固体又は液体形態で及び／又は（ｂ
）　　スクロースの甘味力に等しいか又はそれより高い
特定の甘さ又は甘味力の甘味料との混合物として（ｃ）
　　フルクトース、ソルビツト、キシリツト、パラチニ
ツトＲ（ｐａｌａｔｉｎｉｔＲ）又はスクロースの甘さ
に匹敵し得る特定の甘さの他の二糖アルコールとの混合
物として、又は （ｄ）　　スクロースの溶解性に匹敵し得る溶解性を有
するイソマルチユロースとの混合物として使用すること
ができる。

【００１７】比較味試験において決定された通り、１−
Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースの特
定の甘さはスクロースのそれの４５％でありそしてイソ
マルチユロースのそれに等しい。

【００１８】スクロース又はイソマルチユロースに比較
して水中の１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フ
ルクトースの溶解性は特に高い。たとえば、スクロース
２ｇ、イソマルチユロース０．６ｇが、しかし４ｇより
多くの１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルク
トースが２０℃で水１ｇに溶解するであろう。故に、た
とえばイソマルチユロース及び１−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシド−Ｄ−フルクトースの混合物を使用すること
によつてイソマルチユロースのより低い溶解性に関する
欠点を回避することが可能である。最初の研究はストレ
プトコツカス・ムタンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
　ｍｕｔａｎｓ）によるインキユベーシヨンに続く僅か
な酸形成によりこの糖は非う食原性（ｎｏｎ−ｃａｒｉ
ｏｇｅｎｅｔｉｃ）として分類されるべきことを確かに
するように思われる。更に、それはプラーク・ポリサツ
カライド（ｐｌａｑｕｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄ
ｅｓ）の形成に影響を与えないように思われる。１−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースは又人
間の小腸による分離（ｓｐｌｉｔ）は困難であり、従つ
てそれは部分的にのみ且つ遅延を伴なつて吸収される。

【００１９】本発明の方法を下記の参考例及び実施例に
関して以下にさらに説明する。

【００２０】

【参考例１】（ａ）　プロタミノバクター・ルブルム菌
株（Ｐｒｏｔａｍｉｎｏｂａｃｔｏｒ　ｒｕｂｒｕｍ　
ｓｔｒａｉｎ）（ＣＤＳ５７４．７７）の接種物（ｉｎ
ｏｃｕｌｕｍ）からの細胞を糖植物（乾燥物質含有率＝
６５％）、コーンステイープリカー２Ｋｇ、（ＮＨ４）
２ＨＰＯ４　　０．１Ｋｇ及び蒸留水８９．９Ｋｇ（必
要に応じて７．２のｐＨに調節された）からの濃厚ジユ
ース８Ｋｇから成る無菌の栄養基質１０ｍｌ中に懸濁さ
せる。この懸濁液を上の組成の栄養溶液の各々２００ｍ
ｌを有する１ｌフラスコ中での撹拌機プレカルチヤー（
ｐｒｅｃｕｌｔｕｒｅ）に対する接種物質（ｉｎｏｃｕ
ｌａｔｉｎｇ　ｍａｔｅｒｉａｌ）として使用する。２
０のかかるフラスコ（全容量＝４ｌ）を２９℃で３０時
間インキユベーシヨンする。しかる後、上記組成の栄養
溶液１６ｌに上記２０のフラスコの内容物を３０ｌの小
さな発酵器中において接種しそして２０ｌ／分の通気速
度及び３５０ｒｐｍの撹拌速度で２９℃で発酵させる。 増殖する細胞計数を顕微鏡で決定する。５×１０９細胞
／ｍｌを越える細胞計数に達した後、撹拌及び通気を止
めそして温度を２０℃に下げることによつて醗酵を停止
する。発酵器内容物は無菌条件下に発酵器中に残りそし
て下記参考例の酵素源として使用する。

【００２１】（ｂ）　参考例１（ａ）における発酵の終
り近くで、乾燥物質内容物の下記組成が確かめられる：
フルクトース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２−
４重量％グルコース　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　０．５−１重量％スクロース　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　５−１０重量％イソマルチユロー
ス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　７５−８５重量％１−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルクトース　　　　５
−１０重量％オリゴマー　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　０．５−２重量％この発酵器液をゆつくり撹
拌しながら通気なしで３０℃で更に４時間インキユベー
シヨンすると下記組成物が得られる。

【００２２】 フルクトース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　５−８重量％乾燥物質含有
率グルコース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　２−５重量％　　　　
　〃スクロース　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　０−０．５重量％　
　〃１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド− Ｄ−フルクトース　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　１０−２０重量％乾燥物質含有率イ
ソマルチユロース　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　６５−７２重量％　　　〃オリゴマー　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　３−６重量％　　　　　〃　　（ｃ）
　参考例１（ｂ）の栄養溶液を遠心分離により細胞から
分離しそして８０％の乾燥物質含有率に蒸発させ、そし
て冷却結晶器中でイソマルチユロース種結晶を同時に添
加しながら２０℃の温度に１−５℃／時間の速度で冷却
する。発生したイソマルチユロース結晶をストレーナー
バスケツト遠心分離機で除去する。母液を再び８０％の
乾燥物質含有率に蒸発させ、そして冷却している結晶化
器中でイソマルチユロース種結晶を添加しながら冷却し
そして０．５−２℃／時間の速度で２０℃に冷却する。 母液を再び乾燥物質含有率８０％まで蒸発させそして冷
却している結晶化器中でイソマルチユロース種結晶を添
加して０．５〜２℃／時間の速度で２０℃に冷却する。 発生したイソマルチユロース結晶をストレーナーバスケ
ツト遠心分離器において分離する。この第２の母液を乾
燥物質含有率８５％となるまで蒸発させそしてイソマル
チユロース結晶を接種する（ｓｅｅｄ）。このシロツプ
をメタノール、エタノール又は他のアルコールで約１：
１容量比に希釈しそしてアルコール性溶液を４℃に冷却
する。結晶化したイソマルチユロースを遠心分離により
除去する。この第３の母液は、ほぼ次の乾燥物質含有率
を有する： フルクトース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
８−１２重量％グルコース　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　４−６重量％スクロース　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　０−２重量％イソマル
チユロース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　４５−５０重量％１
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルクトース　
　　　３０−３５重量％オリゴマー　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　３−６重量％　　（ｄ）　参
考例１（ｃ）で得られた母液から蒸発によりメタノール
を除去しそして乾燥物質含有率１５−２０％に調節しそ
してスクロース、グルコース及びフルクトースが溶液中
に見出すことができなくなるまで３７℃でパン酵母によ
り発酵させる。酵母を分離する。透明な溶液を乾燥物質
含有率５０％に蒸発させ次いでクロマトグラフイー分離
カラムにより分離に付す。１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラ
ノシド−Ｄ−フルクトースを含有するフラクシヨンを採
集しそして完全脱塩に続いて、１−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシド−Ｄ−フルクトースが結晶化、凍結乾燥、噴
霧乾燥又は他の同様な方法により乾燥形態で得られる。

【００２３】（ｅ）　参考例１（ｄ）に記載した酵母に
よる母液の発酵は必須ではない。かかる発酵を省きそし
て母液を直接クロマトグラフイー分離に付すことすら有
利であり得る。かかる態様においては、メタノールは参
考例１（ｄ）により得られた母液から蒸発により除去さ
れ、乾燥物質含有率５０％に調節され次いでクロマトグ
ラフイー分離カラムにより分離に付される。糖、１−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースがそれ
を含有するフラクシヨンから結晶化、凍結乾燥、噴霧乾
燥又は他の同様な方法による完全脱塩後に乾燥形態で得
られる。

【００２４】収率：仕込みスクロース１００Ｋｇ当り１
４．３Ｋｇクロマトグラフイー分離において蓄積するフ
ルクトース、グルコース及びイソマルチユロースの如き
他の糖は、他の観点において有用である（たとえばイソ
マルチユロースはパラチニツト（ｐａｌａｔｉｎｉｔ）
を製造するのに使用される）ので損失にはならない。

【００２５】

【参考例２】本参考例で使用する微生物は参考例１（ａ
）の発酵器液を遠心分離することにより得られ、そして
それ自体既知の方法によつて固定化する。固定化された
細胞は温度制御されたカラム中に入れ、スクロース溶液
（５０％乾燥物質含有率）を５０℃におけるこれらの固
定化された細胞を連続的に通過させる。流速は１０〜２
０時間、好ましくは１５−１８時間の平均滞留時間が得
られるように調節する。下記例示組成が生成物流におい
て測定される： フルクトース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　５．８％乾燥物質含有率グルコース
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　２．５％　　　　　　〃スクロース　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　０　　　　　　　　　　　〃イソマルチユロース　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６５．８　
　　　　　〃１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド− Ｄ−フルクトース　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　２３．２　　　　　　〃オリゴマー　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　２．７　　　　　　　　〃（ｂ）　生成物溶液を
８０％の乾燥物質含有率に蒸発させそしてイソマルチユ
ロース種結晶を添加して１−５℃／時間の冷却速度で冷
却している結晶器中で２０℃に冷却する。発生したイソ
マルチユロース結晶をストレーナー−バスケツト遠心分
離器において除去する。母液を再び８０％の乾燥物質含
有率に蒸発させそして冷却している結晶化器においてイ
ソマルチユロース種晶を添加して０．５−２℃の冷却速
度で２０℃に冷却する。発生したイソマルチユロース結
晶をストレーナー−バスケツト遠心分離器において除去
する。この第２の母液を８５％の乾燥物質含有率になる
まで蒸発させそしてイソマルチユロース結晶を接種する
。このシロツプをメタノール、エタノール、又は他のア
ルコールで約１：１容量比となるように希釈しそしてア
ルコール溶液を４℃に冷却する。結晶化したイソマルチ
ユロースを遠心分離により除去する。 そのように得られた第３の母液は次の例示組成を有する
： フルクトース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　１２．７％乾燥物質中グルコース　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　５．５　　　　　　　　〃スクロース　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　０　　　　　　　　　　　〃イソマルチユロース　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２５．０　
　　　　　〃１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド− Ｄ−フルクトース　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　５０．９　　　　　　〃オリゴマー　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　５．９　　　　　　　　〃（ｃ）（１）　参考例
２（ｂ）により得られる母液を蒸発に付してメタノール
を除去し、１５−２０％の乾燥物質含有率に調節しそし
てスクロース、グルコース又はフルクトースが溶液中に
確かめられなくなるまで３７℃でパン酵母で発酵させる
。酵母を除去する。透明な溶液を５０％の乾燥物質含有
率となるように蒸発させ、次いでクロマトグラフイー分
離カラムにより分離に付す。１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシド−Ｄ−フルクトースがそれを含有するフラクシ
ヨンから、結晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥又は他の同様な
方法により乾燥形態で得られる。

【００２６】（ｃ）（２）　参考例２（ｂ）により得ら
れた母液を蒸発に付してメタノールを除去し、５０％の
乾燥物質含有率に調節し、次いでクロマトグラフイー分
離カラムによつて分離に付す。１−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシド−Ｄ−フルクトースがそれを含有するフラク
シヨンから、結晶化、凍結乾燥又は他の同様な方法によ
り乾燥形態で得られる。

【００２７】 収率：仕込みスクロース１００Ｋｇ当り１８．６Ｋｇ

【
００２８】

【参考例３】微生物は参考例１（ａ）により得られた発
酵器液から遠心分離により得られ、そしてスクロースか
らイソマルチユロースを形成する酵素が分解、硫酸アン
モニウム沈殿及びゲルクロマトグラフイーの如きそれ自
体既知の方法により純粋な形態で単離される。次いでこ
の酵素をそれ自体既知の方法により固定化する。

【００２９】固定化された酵素を温度制御されたカラム
反応器中に入れそしてスクロース溶液（５０％乾燥物質
含有率）を５０℃で連続的に該酵素を通過させる。流速
を１０−２０時間、好ましくは１５−１８時間の平均滞
留時間が得られるような方法で調節する。

【００３０】生成物流における糖の組成は参考例２（ａ
）に記載した組成に殆んど等しい。この生成物溶液は実
施例２（ｂ）及び２（ｃ）に記載の如くして更に処理さ
れる。従つて、かくして得られた１−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシド−Ｄ−フルクトースは実施例２のそれと実
質的に同一である。即ちそれはスクロースの仕込み量に
対して約１８％である。

【００３１】

【参考例４】参考例１（ａ）により製造されそしてそれ
自体既知の細胞固定化方法の１つにより固定化されたプ
ロタミノバクター・ルブルム（ＣＢＳ５７４．７７）の
固定化された細胞を温度制御されたカラム反応器に加え
、そして５０℃のそして３０％の乾燥物質含有率を有す
るイソマルチユロース溶液を連続的に該細胞を通過させ
る。イソマルチユロース溶液を循環せしめる。反応はイ
ソマルチユロースが生成物流れ中にもはや存在しなくな
るまで続ける。全接触時間は約１５０時間になる。生成
物溶液は下記組成物を有することが決定される：フルク
トース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　３１％（乾燥物質の）グ
ルコース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　３１％　　　　　
　〃１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド− Ｄ−フルクトース　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　３８％　　　　　　〃
この生成物溶液を５０％の乾燥物質含有率に蒸発させ、
次いでクロマトグラフイー分離カラムにより分離に付す
。上記糖、即ち１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ
−フルクトースがそれを含有するフラクシヨンから、結
晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥又は他の同様な方法により乾
燥形態で得られる。

【００３２】クロマトグラフイー分離を回避しそして随
伴糖（ｃｏｍｐａｎｉｏｎ　ｓｕｇａｒ）、フルクトー
ス及びグルコースを酵母を使用して除去することも可能
である。しかしながら、この方法は非経済的である。何
故ならばそれによつて２つの価値ある糖、即ちフルクト
ース及びグルコースが破壊されるからである。

【００３３】 収率：仕込みイソマルチユロースの約３８％。

【００３４】

【実施例１】硬質キヤンデイにおける糖、１−Ｏ−α−
Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースの使用：処方
： ２５Ｋｇの１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フ
ルクトース ８ｌの水 １．２％酸（クエン酸／酒石酸＝１：１）３％香味料た
とえばレツドオレンジ　　シレジア（ｒｅｄ−ｏｒａｎ
ｇｅ　Ｓｉｌｅｓｉａ）１１１／６５８１０１又はレモ
ン　　シレジア（Ｌｅｍｏｎ　Ｓｉｌｅｓｉａ）１１１
／７１０１３４１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ
−フルクトースを水に溶解しそして１３８℃で沸騰させ
る。しかる後その物質を冷却テーブル上に置きそして酸
、香味料及び着色料の混合物を入れる。次いでその物質
をフツク（ｈｏｏｋ）から数回抜き出し、最後にキヤン
デイに成形する。

【００３５】

【実施例２】アイスクリームにおける糖、１−Ｏ−α−
Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースの使用処方： ３．６Ｋｇのバター（８３％脂肪） １２．５Ｋｇの脱脂ミルク粉末（ｓｋｉｍｍｅｄ　ｍｉ
ｌｋ　ｐｏｗｄｅｒ）１５Ｋｇの１−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシド−Ｄ−フルクトース ０．６Ｋｇの乳化剤［クラノダン（Ｃｒａｎｏｄａｎ）
ＴＥＦ４、グラインドステツド（Ｇｒｉｎｄｓｔｅｄ）
］６８．３Ｋｇの水。 上記物質を先ず７８℃で低温殺菌し（ｐａｓｔｅｕｒｉ
ｚｅｄ）次いで二段階方法で均一化する（ｈｏｍｏｇｅ
ｎｉｚｅｄ）。

【００３６】

【実施例３】ジヤムにおける糖、１−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシド−Ｄ−フルクトースの使用処方： ２５０ｇの１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フ
ルクトース ４５０ｇのフルーツ ５ｇのアミド化ペクチン ２．５ｇのジエニユーゴム（ｇｅｎｕｇｕｍ）４ｇのク
エン酸 ０．８ｇのソルビン酸カリウム ２８７．７ｇの水 乾燥物質：３２％ 先ず、１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルク
トース、アミド化ペクチン、ジエニユーゴム（ｇｅｎｕ
ｇｕｍ）、クエン酸及びソルビン酸カリウムから先ず予
備混合物を調製し、次いでこれを微粉砕したフルーツに
加える。混合物を２４時間放置する。その後、水を加え
そして混合物を沸騰させる。４分間の沸騰に続いてジヤ
ムをジヤーに充填する。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　食品及び甘味剤として１−Ｏ−α−Ｄ
   −グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースを含有すること
   を特徴とする甘味付与された組成物。
2. 【請求項２】　　甘味剤が天然又は人工甘味剤を更に含
   有する請求項１記載の組成物。