JPH04211394A - ヒト抗体の遺伝子バンクの製造および使用 - Google Patents

ヒト抗体の遺伝子バンクの製造および使用

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JPH04211394A
JPH04211394A JP3032215A JP3221591A JPH04211394A JP H04211394 A JPH04211394 A JP H04211394A JP 3032215 A JP3032215 A JP 3032215A JP 3221591 A JP3221591 A JP 3221591A JP H04211394 A JPH04211394 A JP H04211394A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】本発明はヒト抗体（Ａｂ）の遺伝子バンク
（「ヒト抗体ライブラリー」）の製造及び使用に関する
。ヒトＢリンパ球の混合物から出発して、それらのｍＲ
ＮＡがオリゴｄＴプライマーを用いてｃＤＮＡに翻訳さ
れる。しかる後、ポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）による
Ａｂ特異性ｃＤＮＡの増幅が適切なオリゴヌクレオチド
プライマー配列を用いて行われる。従って、大腸菌にお
ける細菌発現ベクター、例えば下記ベクターｐＦＭＴ中
でのこの増幅されたＡｂ特異性ｃＤＮＡの発現により、
インビトロで選択抗原をスクリーニングするために包括
的レパートリーとしてヒト抗体ライブラリーを用いるこ
とができる。ヒト又は哺乳動物免疫系は概算数で１０６
〜１０８の異なる抗体を含んでいる。この抗体数は、全
自然抗原及び人工抗原の双方に対する体の免疫反応を起
こす上で十分であると思われる。更に、しばしばいくつ
かの抗体が同一抗原と反応することを考慮にいれれば、
実際に異なる抗体のレパートリーはむしろ１０６〜１０
７の範囲であろう。現在までに特異的抗体は、特定抗原
での免疫化、例えば体内への抗原の注入又は脾臓細胞と
この抗原とのインビトロインキュベーションから出発し
て常に得られていた。ポリクローナル抗体の場合におい
て、免疫グロブリンは従って血清から単離でき、特異的
抗体は例えば吸着法でそこから単離できる。モノクロー
ナル抗体は、個々のＢリンパ球と融合されてクローニン
グされた脾臓腫瘍細胞（ハイブリドーマ細胞）の細胞上
澄又は細胞溶解物から単離される。上記方法は、特異的
ヒト抗体又はヒトモノクローナル抗体の製造に関して特
に不適である。
【０００２】したがって、本発明は抗原結合部位を含ん
だ特異的ヒトモノクローナル抗体（ｈｕＭＡｂ）又は抗
体の一部を産生させるために一般的に使用可能な方法を
開発するという目的を有している。可変の抗原結合ドメ
インを含んだ所望のｈｕＭＡｂ又はその一部はヒト免疫
グロブリンの遺伝子バンクから単離しうることがわかっ
た。最初に、非活性化ヒトＢリンパ球の混合物から出発
して、それらのｍＲＮＡが単離されオリゴｄＴプライマ
ーの補助でｃＤＮＡに翻訳される。得られたｃＤＮＡプ
ール内における抗体ｃＤＮＡ群の特異的増幅はＰＣＲを
用いて行われた。この目的のため、抗体ｃＤＮＡの両末
端における保存配列と相同なあるオリゴヌクレオチドプ
ライマーが用いられた（後記及び例参照）。Ｈ鎖のＤＮ
Ａの非コード鎖の合成に関する逆反応用プライマーのデ
ザインはＩｇＭ配列に基づいている（サブクラスＩＩＩ
　、これはＩｇＭ配列のほとんどを含むため）。ＩｇＭ
分子は他のすべての免疫グロブリンクラスよりも非活性
化Ｂリンパ球においてよりしばしば出現する。これに対
して、ＩｇＧ配列は異なる抗体のレパートリーが極めて
少ない活性化Ｂリンパ球において優勢である。しかも、
ＩｇＧライブラリーは１種又は数種の特に強く発現され
るＩｇＧがライブラリーを支配してしまう危険性を伴う
。 ３０までの増幅サイクルが有利に行われた。オリゴヌク
レオチドプライマーは、増幅ＤＮＡを例えば抗体発現プ
ラスミドｐＦＭＴ（後記参照）に挿入するために適した
制限部位を含んでいる。この発現プラスミドは、細菌（
大腸菌）における抗体ｃＤＮＡの発現および、その後の
発現産物の分泌を可能にする。そのプラスミドの抗体オ
ペロンは、抗体のＨ及びＬ鎖双方の可変部分の配列を含
んでいる。細菌タンパク質のアミノ末端部分からの適切
なリーダー配列は、抗体部分の分泌を可能にする。リー
ダー配列は分泌過程で細菌酵素により開裂される。抗体
ｃＤＮＡ産物の分泌中に抗体のＬ及びＨ鎖（隣接する不
変ドメインを含む又は含まない）は会合するようになる
。その結果、いずれかの場合で、機能的抗原結合部位を
含む抗体又は抗体断片を形成する。個々の抗体に関する
同様の構造体も他の著者により記載されている〔Ｂｅｔ
ｔｅｒ　ｅｔ　ａｌ．（１９８８），Ｓｃｉｅｎｃｅ，
２４０，１０４１及びＳｋｅｒｒａｓ　＆　Ｐｌｕｃｋ
ｔｈｕｎ　（１９８８），Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０，１
０３８　　　〕。抗体の可変部分をコードするＤＮＡの
増幅が他の著者により記載されていることは事実である
〔Ｏｒｌａｎｄｉ　ｅｔ　ａｌ．（１９８９），Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８６，３８３３；
Ｓａｓｔｒｙｅｔ　ａｌ．（１９８９），Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８６，５７２８；Ｗａｒ
ｄ　ｅｔ　ａｌ．（１９８９），Ｎａｔｕｒｅ，３４１
，５４４；Ｈｕｓｅ　ｅｔ　ａｌ．（１９８９），Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ，２４６，２７５　〕。しかしながらこの場
合においては、特に、抗体をもコードするｍＲＮＡがあ
る抗原での処理後にハイブリドーマ細胞又は脾臓リンパ
球から単離された。この理由から、ＩｇＧ配列にのみ基
づくプライマー配列もそこで用いられた。これは、活性
化リンパ球に由来するできるだけ多くの抗体ＤＮＡクロ
ーンが求められる場合に勿論有利である。ＩｇＧ配列か
らのプライマーであれば、注入抗原に対する抗体をコー
ドするＤＮＡを含んだクローンを見つけ出すチャンスは
非常に高い。前記論文において、ネズミ、即ち非ヒト抗
体ＤＮＡが合成され、しかもλ鎖領域以外で増幅された
ことが付け加えられねばならない。
【０００３】本発明は、これに対して、ＩｇＭ　　ｃＤ
ＮＡの不変ドメインにおける配列と相同なプライマー配
列を用いる。これは本発明を実施する上で、換言すれば
ライブラリーの形で抗体の非常に大きな選択、即ち全抗
体レパートリーを利用できるようにする上で最良の方法
である。次いで、好ましくは大腸菌における発現で所望
のヒト抗体ライブラリーが得られるが、ここで所望のヒ
ト抗体又は抗体部分は選択抗原を用いて細菌クローンを
スクリーニングすることにより見つけ出される。増幅に
適したオリゴヌクレオチドプライマーは第１表（表１）
で記載されている。μ、κ及びλ鎖における前記プライ
マーの位置は第２表（表２）に図式の形で示されている
。 特に、発現ベクター、即ち抗体発現プラスミドｐＦＭＴ
の分子生物学的組立ては下記例で詳細に記載されている
。したがって本発明は、非活性化（末梢）ヒトＢリンパ
球からのｍＲＮＡのオリゴｄＴプライマーによる転写、
その後のＩｇＭ　　ｃＤＮＡの保存領域と相同な配列を
含むプライマーを用いたＰＣＲによる増幅、次いでの微
生物における発現用に適した発現プラスミド、好ましく
は大腸菌における発現用の発現ベクターｐＦＭＴへの組
込みによって製造されるヒト抗体ライブラリーに関する
。好ましい態様において、発現産物がマーカーペプチド
に対して確立されたモノクローナル抗体を用いる簡単な
方法で検出されうるように、マーカーペプチド、例えば
ＴＡＧ配列をコードする付加配列が組込まれる〔Ｗｅｈ
ｌａｎｄ　ｅｔ　ａｌ．（１９８４），ＥＭＢＯ　Ｊ．
，３，１２９５　〕。本発明は、選択抗原を用いてスク
リーニングすることで機能的抗原結合部位を含む所望の
ヒト抗体又は抗体の一部を単離するための前記ヒト抗体
ライブラリーの使用、上記ヒト抗体又はそれらの抗原結
合部分を単離するための方法、並びに上記ヒト抗体ライ
ブラリーを製造するための方法にも関する。本発明は抗
体発現プラスミドｐＦＭＴの性質を有する発現ベクター
にも関する。
【０００４】〔例〕
【実施例】下記例は本発明を制限することなく更に説明
するものである。最後に、本発明は特許請求の範囲にも
含まれている。 例： 例１：抗体発現ベクターの製造 プラスミドｐＫＫ２３３‐２〔Ａｍａｎｎ　及びＢｒｏ
ｓｉｕｓ，（１９８５）　Ｇｅｎｅ，４０，１８３；Ｓ
ｔｒａｕｓ　及びＧｉｌｂｅｒｔ，（１９８５），Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８２，２０１４
〕を抗体発現ベクター組立て用の基礎ベクターとして選
択した（図１）。抗体オペロンの組込み前に、プラスミ
ドをＳａｌＩ及びＢａｍＨＩで切断し、末端をクレノウ
ポリメラーゼで補充し、結合させた。そうすることで、
２つの制限部位及びそれらの間のＤＮＡを除去した。加
えて、プラスミドをＨｉｎｄＩＩＩ　で開裂し、末端を
クレノウポリメラーゼで補充し、ＢａｍＨＩリンカーを
用いて結合させた。この操作により、ＨｉｎｄＩＩＩ　
制限部位を除去し、ＢａｍＨＩ部位を挿入した。抗体Ｄ
ＮＡをこの修飾プラスミドに挿入した。ビシストロン（
ｂｉｃｉｓｔｒｏｎ）　抗体ｍＲＮＡをコードする抗体
オペロンの組立てのための概略経路は第３表（表３）で
示されている。抗体の分泌を可能にするため、細菌酵素
ペクチン酸リアーゼ（ｐｅｃｔａｔｅ　ｌｙａｓｅ）　
のリーダー配列を用いた。この酵素のリーダー配列は、
キメラネズミ／ヒト抗体（Ｆａｂ断片；Ｂｅｔｔｅｒ　
ｅｔ　ａｌ．，前掲）及び「ヒト化」抗体の可変部分（
Ｗａｒｄ　ｅｔ　ａｌ．，前掲；Ｈｕｓｅ　ｅｔ　ａｌ
．，前掲）の発現及び分泌のために既に用いられていた
。第一リーダー配列に関するＤＮＡ（Ｈ鎖の上流Ｐ１）
並びに第二リボソーム結合部位（ＲＢＳ）及び第二リー
ダー配列（Ｌ鎖の上流Ｐ２）に関する配列をいくつかの
オリゴヌクレオチドから合成した第４表（表４〜５）。 ヒト抗体（ＨｕＶｈｌｙｓ又はＨｕＶｌｌｙｓ；Ｒｉｅ
ｃｈｍａｎｎ　ｅｔ　ａｌ．，（１９８８）　Ｊ．Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏｌ．，２０３，８２５　）のＨ及びＬ鎖の可
変領域をコードする抗体ｃＤＮＡをＧ．Ｗｉｎｔｅｒ博
士（ケンブリッジ，ＵＫ）から得た。制限部位Ｈｉｎｄ
ＩＩＩ　（ＨｕＶｈｌｙｓ）及びＥｃｏＲＶ（ＨｕＶｌ
ｌｙｓ）を導入して発現ベクターへの抗体ｃＤＮＡの挿
入を可能にさせた。ＢａｎＩＩ（ＨｕＶｈｌｙｓ）及び
ＢｓｔＥＩＩ又はＫｐｎＩ（ＨｕＶｌｌｙｓ）のための
更なる制限部位を導入して、超可変領域を一括して交換
した。ＨｕＶｈｌｙｓ　　ｃＤＮＡ配列の末端に停止シ
グナルを組込んだ。Ｌ鎖におけるＢａｎＩＩ部位を除去
した。これらの改変はバクテリオファージＭ１３ｍｐ１
８での部位特異的変異処理により行った　（Ｚｏｌｌｅ
ｒ及びＳｍｉｔｈ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１０
０，４６８−５００）。完成された抗体ＤＮＡの配列は
第５表（表６）で示されている。リーダー配列Ｐ１（第
４表（表４〜５））の挿入のために、修飾されたプラス
ミドｐＫＫ２３３‐２を制限酵素ＮｃｏＩ及びＰｓｔＩ
で消化し、Ｐ１をこれらの部位間に挿入した（ｐＫＫ２
３３‐２‐Ｐ１）。最後のステップとは別に、更にクロ
ーニングのステップをプラスミドｐＵＣ１８を用いて行
った。その理由は、発現ベクター中における抗体オペロ
ンの個々の部分の存在が細菌宿主の増殖に悪影響を与え
るからである。ｐＵＣ１８でのクローニング前に、その
ＢａｍＨＩ制限部位は除去されねばならなかった。Ｂａ
ｍＨＩで消化後、一本鎖末端をクレノウ断片を用いて補
充し、再結合させた。次いでこの修飾プラスミドをＰｓ
ｔＩ及びＨｉｎｄＩＩＩ　で消化し、Ｐ２＋ＲＢＳを制
限部位間において結合させた（ｐＵＣ１８‐Ｐ２）。こ
の工程で、プラスミドの原ＨｉｎｄＩＩＩ　制限部位は
消失し、新しいＨｉｎｄＩＩＩ　制限部位が組込まれる
。次いでｐＵＣ１８‐Ｐ２をＰｓｔＩ及びＨｉｎｄＩＩ
Ｉ　で消化し、Ｈ鎖のＤＮＡ（Ｍ１３からのＰｓｔＩ‐
ＨｉｎｄＩＩＩ　挿入物）をこれらの２部位に結合させ
た（ｐＵＣ１８‐ＨＰ２）。次いでこのプラスミドをＥ
ｃｏＲＶ及びＢａｍＨＩで消化し、Ｌ鎖のＤＮＡ（Ｍ１
３からのＥｃｏＲＶ‐ＢａｍＨＩ挿入物）を結合させた
（ｐＵＣ１８‐ＨＰ２Ｌ）。好ましい態様においては、
Ｔａｇ配列を新しいＨｉｎｄＩＩＩ　切断部位に結合さ
せた（第４表（表４〜５））。Ｔａｇ配列はペプチドＧ
ｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ　につ
いてコードし、モノクローナル抗体ＹＬ１／２により認
識される〔Ｗｅｈｌａｎｄｅｔ　ａｌ．（１９８４），
ＥＭＢＯ　Ｊ．，３，１２９５　〕。得られたプラスミ
ドはｐＵＣ‐ＨＴＰ２Ｌである。発現ベクターへのＨＰ
２Ｌ又はＨＴＰ２Ｌの挿入のために、ｐＵＣ１８‐ＨＰ
２Ｌ又はｐＵＣ‐ＨＴＰ２Ｌを各々ＰｓｔＩ及びＢａｍ
ＨＩで切断し、関連制限断片を各場合において修飾プラ
スミドｐＫＫ２３３‐２‐Ｐ１中のこれら２つの制限部
位に結合させた。完成された発現ベクターｐＦＭＴの概
略は第６表（表７）で示されている。
【０００５】 例２：ヒトＢリンパ球からのＲＮＡの単離ヒト血液から
の末梢Ｂ細胞を豊富化させるため、これをＰＢＳ（リン
酸緩衝生理食塩水）で１：１希釈し、フィコール　（Ｆ
ｉｃｏｌｌＲ　）　〔ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉ
ａ）　〕のクッション（１．０７７ｋｇ／Ｌ）上で遠心
した。界面の細胞をＰＢＳで２回洗浄し、プラスチック
表面（培養ボトル）で１０％牛胎児血清含有ＲＰＭＩ培
地中３７℃にて１時間インキュベートした。付着細胞（
単球及びマクロファージ）は培養器に付着するため、こ
の方法によりそれらを調製物から除去することができた
。非付着細胞を遠心により集め、４．４Ｍグアニジニウ
ムイソチオシアネート、５％メルカプトエタノール及び
２％ラウロイルサルコシン中でホモジナイズした。次い
でホモジネートを５．７Ｍ　　ＣｓＣｌのクッション上
１２５，０００ｇで１８時間遠心した。沈降したＲＮＡ
を二重蒸留（ｄｏｕｂｌｅ−ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ）Ｈ２
Ｏに溶解し、７０％エタノール及び１／２０容量の８Ｍ
　　ＬｉＣｌを用い−２０℃で一夜かけて沈降させた。 異なる特異性の更に大きな多様性の抗体を得るため、２
０の異なる人からの血液各５００ｍｌのＲＮＡ調製物を
混合した。
【０００６】 例３：抗体ＤＮＡの増幅 ｍＲＮＡをオリゴ‐ｄＴ‐セファロース（ファルマシア
製のキット）で精製し、逆転写酵素〔アマルシャム（Ａ
ｍｅｒｓｈａｍ）のキット〕及びオリゴ‐ｄＴプライマ
ーによってｃＤＮＡに翻訳した。生成物をポリメラーゼ
鎖反応（ＰＣＲ）に直接用いた。ＰＣＲプライマー及び
ハイブリダイゼーション部位は第１表及び第２表で示さ
れている。 ２種の異なる発現バンクは、ベクターｐＦＭＴにおいて
、得られるμ‐ＤＮＡをκ‐又はλ‐ＤＮＡと組合せる
ことにより産生させた。ポリメラーゼ鎖反応における非
コード鎖の合成のための異なるプライマーの使用で、あ
る場合では可変ドメインのみ、他の場合では更に（抗体
のＦａｂ断片に類似した）不変ドメインも含んだ２種の
異なる抗体タイプを製造できる。ＰＣＲのために、合成
ｃＤＮＡ４μＬを容量５０μｌ中で２つのプライマーの
各０．２ｎｍｏｌと反応させた。反応混合物は１００ｍ
Ｍ　　ＫＣｌ、０．１％ゼラチン及びＴａｑポリメラー
ゼ２．５Ｕを含有していた。９５℃で１分間、５５℃で
２分間及び７２℃で２分間を含む３０回の重合サイクル
後、ＤＮＡをエタノールを用いて沈降させた。
【０００７】 例４：発現プラスミドへの抗体ＤＮＡの挿入沈降ＤＮＡ
をアガロースゲル用緩衝液〔０．１％ブロモフェノール
ブルー、７％フィコール（ファルマシア）〕に溶解し、
２％アガロース上でＴＢＥ緩衝液（ｐＨ８．０の４５ｍ
Ｍトリス／ホウ酸塩、１０ｍＭＥＤＴＡ）により１０Ｖ
／ｃｍで分別した。合成された抗体ＤＮＡをその分子量
により同定し、ゲルから溶出させた。それをエタノール
で沈降させ、しかる後特定の制限酵素用の緩衝液に溶解
し、適切な（第１表及び第２表参照）制限酵素〔ベーリ
ンガー・マンハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎ
ｈｅｉｍ）　〕で切断した。エタノール中で沈降後、そ
れは同様の方法でベクターｐＦＭＴに結合させたが、第
７表（表８）で図式の形で示されている。
【０００８】 例５：大腸菌における抗体の発現及びスクリーニングコ
ンピテントな大腸菌を挿入抗体ＤＮＡライブラリーを含
有するｐＦＭＴプラスミドでトランスフェクトし、アガ
ロースプレート上で増殖させ、しかる後所望の抗原で被
覆されたニトロセルロースフィルターを用いてインキュ
ベートする。非特異的結合抗体の除去後、活性クローン
を大腸菌から分泌されるヒト免疫グロブリンに対する標
識抗体で同定する。好ましい態様において、Ｔａｇ配列
に対するモノクローナル抗体ＹＬ１／２を用いて、所望
クローンを同定する。
【０００９】
【表１】
【００１０】
【表２】
【００１１】
【表３】
【００１２】
【表４】
【００１３】
【表５】
【００１４】
【表６】
【００１５】
【表７】
【００１６】
【表８】
【図面の簡単な説明】
【図１】発現ベクターｐＫＫ２３３‐２の制限酵素地図
（Ａｍａｎｎ　及びＢｒｏｓｉｕｓ，前掲）Ｐｔｒｃは
ハイブリッドトリプトファンｌａｃプロモーターを示す
。ＲＢＳはリボソーム結合部位を示す。ｒｒｎＢはリボ
ソームＲＮＡ　　Ｂ（５Ｓ　　ＲＮＡ）を示す。５Ｓは
５Ｓ　　ＲＮＡに関する遺伝子を示す（ｒｒｎＢを含む
）。発現ベクターにおける抗体ＤＮＡをクローニングす
る前に、下記の変更が行われた：１）ＳａｌＩ及びＥｃ
ｏＲＩ制限部位をそれらの間のＤＮＡと共に除去した。 ２）ＨｉｎｄＩＩＩ　制限部位をＢａｍＨＩ制限部位に
変えた。

Claims (10)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】末梢ヒトＢリンパ球からの単離されたｍＲ
    ＮＡをｃＤＮＡへ転写すること、しかる後適切なプライ
    マーを用いたポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）によって抗
    体をコードするｃＤＮＡを増幅すること、次いで適切な
    発現プラスミドへの組込みを行ない最後に個々のクロー
    ンにおいて、その中に含まれかつｃＤＮＡで増幅された
    関連抗体ＲＮＡを発現させること、により得ることがで
    きることを特徴とするヒト抗体ライブラリー。
  2. 【請求項２】発現がプラスミドｐＦＭＴにおいて行われ
    る、請求項１に記載のヒト抗体ライブラリー。
  3. 【請求項３】適切なプライマーを選択することにより、
    可変領域のみ又は可変領域に加えて不変ドメインが各場
    合において増幅される、請求項１又は２に記載のヒト抗
    体ライブラリー。
  4. 【請求項４】ＩｇＭ特異性プライマーがＰＣＲ段階で用
    いられる、請求項１、２又は３に記載のヒト抗体ライブ
    ラリー。
  5. 【請求項５】末梢ヒトＢリンパ球からｍＲＮＡを単離し
    てｃＤＮＡに転写し、しかる後適切なプライマーを用い
    てＰＣＲによって抗体をコードするｃＤＮＡを増幅させ
    、次いで適切な発現プラスミドへの組込みを行い、最後
    に個々のクローンにおいて抗体ｃＤＮＡを発現させるこ
    とを特徴とするヒト抗体ライブラリーの製造方法。
  6. 【請求項６】発現がプラスミドｐＦＭＴにおいて行われ
    る、請求項５に記載の方法。
  7. 【請求項７】適切なプライマーを選択することにより、
    可変領域のみ又は可変領域に加えて不変ドメインが各場
    合において増幅される、請求項５又は６に記載の方法。
  8. 【請求項８】特異的抗原を用いて請求項１、２、３又は
    ４に記載のヒト抗体ライブラリーをスクリーニングする
    ことを特徴とする特異的ヒト抗体の単離方法。
  9. 【請求項９】特異的ヒト抗体を単離するための、請求項
    １、２、３又は４に記載のヒト抗体ライブラリーの使用
    。
  10. 【請求項１０】抗体発現プラスミドｐＦＭＴ。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009519026A (ja) * 2005-12-16 2009-05-14 リボバックス バイオテクノロジーズ ソシエテ アノニム 不死化された抗体分泌細胞を得る方法

Families Citing this family (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE59109273D1 (de) † 1990-02-01 2010-01-07 Siemens Healthcare Diagnostics Herstellung und Verwendung von Genbanken menschlicher Antikörper("Human-Antikörper-Bibliotheken")
CA2111858A1 (en) * 1991-07-15 1993-02-04 James S. Crowe Production of antibodies
DE4142077A1 (de) * 1991-12-19 1993-06-24 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur expression rekombinanter antikoerper
PT1231268E (pt) * 1994-01-31 2005-11-30 Univ Boston Bancos de anticorpos policlonais
DE19728697C1 (de) * 1997-07-04 1999-03-25 Deutsches Krebsforsch Humaner Antikörper gegen ein Fusions(poly)peptid bzw. -protein, das einen Anteil von mindestens sechs Histidinen aufweist
AU9148498A (en) * 1997-09-19 1999-04-12 Medleys Laboratories Inc. Method and kit for early diagnosis of autoimmunity and lymphoma in central nervous system
US7803765B2 (en) * 1999-05-05 2010-09-28 Phylogica Limited Methods of constructing biodiverse gene fragment libraries and biological modulators isolated therefrom
US7270969B2 (en) 1999-05-05 2007-09-18 Phylogica Limited Methods of constructing and screening diverse expression libraries
EP1696038B1 (en) 1999-05-05 2010-06-02 Phylogica Limited Isolating biological modulators from biodiverse gene fragment libraries
EP2199393B1 (en) * 2000-04-17 2012-10-31 Dyax Corp. Methods of constructing display libraries of genetic packages for members of a diverse family of peptides
US8288322B2 (en) 2000-04-17 2012-10-16 Dyax Corp. Methods of constructing libraries comprising displayed and/or expressed members of a diverse family of peptides, polypeptides or proteins and the novel libraries
ES2430857T3 (es) 2000-12-18 2013-11-22 Dyax Corp. Bibliotecas focalizadas de paquetes genéticos
US20040005709A1 (en) * 2001-10-24 2004-01-08 Hoogenboom Henricus Renerus Jacobus Mattheus Hybridization control of sequence variation
US20040067532A1 (en) 2002-08-12 2004-04-08 Genetastix Corporation High throughput generation and affinity maturation of humanized antibody
JP4782700B2 (ja) 2004-01-20 2011-09-28 カロバイオス ファーマシューティカルズ インコーポレイティッド 最低限必須な結合決定基を用いた抗体特異性の移入
US20050282233A1 (en) * 2004-03-05 2005-12-22 Ludwig Institute For Cancer Research Multivalent antibody materials and methods for VEGF/PDGF family of growth factors
EP1754052B1 (en) * 2004-06-03 2015-07-22 Phylogica Limited Peptide modulators of cellular phenotype and bi-nucleic acid fragment library
US20120208824A1 (en) 2006-01-20 2012-08-16 Cell Signaling Technology, Inc. ROS Kinase in Lung Cancer
WO2009051846A2 (en) 2007-10-18 2009-04-23 Cell Signaling Technology, Inc. Translocation and mutant ros kinase in human non-small cell lung carcinoma
SI2671954T1 (sl) 2006-01-20 2018-11-30 Cell Signaling Technology, Inc. Translokacija in mutantna ROS kinaza v človeškem ne-drobnoceličnem karcinomu pljuč
JP5576610B2 (ja) * 2006-02-20 2014-08-20 フィロジカ リミテッド ペプチド構造のライブラリーの構築およびスクリーニング方法
EP2450437B1 (en) 2006-04-14 2017-05-17 Cell Signaling Technology, Inc. Gene defects and mutant ALK kinase in human solid tumors
EP2074138A4 (en) * 2006-09-19 2009-12-30 Phylogica Ltd NEUROPROTECTIVE PEPTIDE AP-1 SIGNALING INHIBITORS AND USES THEREOF
EP2170932A4 (en) * 2007-06-20 2012-10-10 Phylogica Ltd COMPOSITIONS AND APPLICATIONS THEREOF IN THE TREATMENT OF ACUTE ATOMIC SYNDROME (ARDS) AND ASSOCIATED CLINICAL ILLNESSES
US8691730B2 (en) * 2007-09-14 2014-04-08 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
US12529164B2 (en) 2007-09-14 2026-01-20 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
US8877688B2 (en) 2007-09-14 2014-11-04 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
US9873957B2 (en) * 2008-03-13 2018-01-23 Dyax Corp. Libraries of genetic packages comprising novel HC CDR3 designs
ES2528963T3 (es) * 2008-04-24 2015-02-13 Dyax Corp. Bibliotecas de paquetes genéticos que comprenden nuevos diseños de CDR1, CDR2, y CDR3 de HC y nuevos diseños de CDR1, CDR2, y CDR3 de LC
AU2010213578B2 (en) 2009-02-12 2015-01-29 Cell Signaling Technology, Inc. Mutant ROS expression in human cancer
US20110082054A1 (en) * 2009-09-14 2011-04-07 Dyax Corp. Libraries of genetic packages comprising novel hc cdr3 designs
US20130052194A1 (en) 2009-12-16 2013-02-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Anti-prostate cancer antibodies and methods of detection and treatment of prostate cancer using the same
DK2593594T3 (en) 2010-07-16 2017-12-11 Adimab Llc ANTIBODY LIBRARIES
US20120101108A1 (en) 2010-08-06 2012-04-26 Cell Signaling Technology, Inc. Anaplastic Lymphoma Kinase In Kidney Cancer
EP2699597B1 (en) 2011-04-21 2016-06-01 Garvan Institute of Medical Research Modified variable domain molecules and methods for producing and using them b
DK2838998T3 (en) 2012-04-18 2018-01-15 Cell Signaling Technology Inc EGFR AND ROS1 IN CANCER
WO2015184321A2 (en) * 2014-05-29 2015-12-03 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Rare molecule detection
SG11201913137VA (en) 2017-07-11 2020-01-30 Compass Therapeutics Llc Agonist antibodies that bind human cd137 and uses thereof
WO2019089753A2 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Compass Therapeutics Llc Cd137 antibodies and pd-1 antagonists and uses thereof
US11851497B2 (en) 2017-11-20 2023-12-26 Compass Therapeutics Llc CD137 antibodies and tumor antigen-targeting antibodies and uses thereof
US11046769B2 (en) 2018-11-13 2021-06-29 Compass Therapeutics Llc Multispecific binding constructs against checkpoint molecules and uses thereof

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0368684B2 (en) * 1988-11-11 2004-09-29 Medical Research Council Cloning immunoglobulin variable domain sequences.
CA2016842A1 (en) * 1989-05-16 1990-11-16 Richard A. Lerner Method for tapping the immunological repertoire
CA2016841C (en) † 1989-05-16 1999-09-21 William D. Huse A method for producing polymers having a preselected activity
WO1991010737A1 (en) * 1990-01-11 1991-07-25 Molecular Affinities Corporation Production of antibodies using gene libraries
DE59109273D1 (de) † 1990-02-01 2010-01-07 Siemens Healthcare Diagnostics Herstellung und Verwendung von Genbanken menschlicher Antikörper("Human-Antikörper-Bibliotheken")

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009519026A (ja) * 2005-12-16 2009-05-14 リボバックス バイオテクノロジーズ ソシエテ アノニム 不死化された抗体分泌細胞を得る方法
JP2013255515A (ja) * 2005-12-16 2013-12-26 Ribovax Biotechnologies Sa 不死化された抗体分泌細胞を得る方法

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