JPH04211632A - 新規生理活性物質ベナスタチンａおよびｂ、その製造法およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は抗グルタチオントランス
フェラーゼ作用を有する新規な生理活性物質ベナスタチ
ン（Ｂｅｎａｓｔａｔｉｎ）ＡおよびＢ、その製造法お
よびその用途に関する。

【０００２】

【従来の技術】グルタチオントランスフェラーゼは細胞
膜及び細胞質に局在する酵素である。細胞膜酵素に対す
る阻害物質は、免疫調節作用を持つことが報告されてい
る（Ｔ．Ａｏｙａｇｉ，“Ｐｒｏｔｅａｓｅ　　ｉｎｈ
ｉｂｉｔｏｒ　　ａｎｄ　　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　　
ｃｏｎｔｒｏｌ”、Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ　　Ｍｅｔａｂ
ｏｌｉｔｅｓ　　ｆｒｏｍ　　Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉ
ｓｍｓ、ｅｄｓ　　ｂｙ　　Ｍ．Ｅ．Ｂｕｓｈｅｌｌ　
　ａｎｄ　　Ｕ．Ｇｒａｅｆｅ、第４０３〜４１８頁、
Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　　Ｓｃｉｅｎｃｅ　　Ｐｕｂｌｉｓ
ｈｅｒｓ　　Ｂ．Ｖ．、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、１９８９
年）。したがって、グルタチオントランスフェラーゼに
対する阻害物質においても、免疫調節作用が期待される
。

【０００３】さらに、膜結合性グルタチオントランスフ
ェラーゼは、ロイコトリエンＣ４　合成酵素としても働
き、炎症・アレルギー反応に深く関わることが報告され
ている〔蛋白質・核酸・酵素、第３３巻、１５６４〜１
５７３頁（１９８８）〕。また、細胞質性グルタチオン
トランスフェラーゼは、抗癌剤耐性腫瘍細胞の耐性機構
に深く関わることが報告されている〔癌と化学療法、第
１６巻、５９２〜５９８頁（１９８９）〕。グルタチオ
ントランスフェラーゼ阻害物質としては、インドメタシ
ン（Ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ）及びメクロフェナン酸
（Ｍｅｃｌｏｆｅｎａｍｉｃ　　ａｃｉｄ）等が報告さ
れている〔Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　　ａｎｄ　　Ｂｉ
ｏｐｈｙｓｉｃａｌ　　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　　Ｃｏｍｍ
ｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、第１１２巻、９８０〜９８５頁
（１９８３）〕。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】インドメタシン及びメ
クロフェナン酸等のグルタチオントランスフェラーゼ阻
害物質は、グルタチオントランスフェラーゼに対する特
異性が低い。したがって、グルタチオントランスフェラ
ーゼに対する特異性の高い阻害物質が望まれている。本
発明の目的は、そのような特異性の高いグルタチオント
ランスフェラーゼ阻害活性を有する生理活性物質、その
製造法及びその用途を提供することにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明を概説すれば、本
発明の第１の発明は新規生理活性物質ベナスタチンＡお
よびＢに関する発明であって、下記式（Ｉ）：

【化２】 （式中Ｒは−ＣＨ２　−ＣＨ２　−又は−ＣＨ＝ＣＨ−
を示す。）で表される化合物であることを特徴とする生
理活性物質ベナスタチンＡおよびＢおよびその薬学的に
許容し得る塩を提供するものである。

【０００６】式（Ｉ）で示される化合物のうち、ベナス
タチンＡ（Ｒ＝−ＣＨ＝ＣＨ−の化合物）は下記式で示
される。

【化３】

【０００７】ベナスタチンＡの理化学的性質は下記の通
りである。 ベナスタチンＡの理化学的性状 （１）　　　色及び形状：黄色粉末 （２）　　　分子式：Ｃ３０Ｈ２８Ｏ７　（３）　　　
分子量：５００　　ＦＡＢ−ＭＳ（Ｎｅｇａｔｉｖｅ）
ｍ／ｚ　　４９９（Ｍ−Ｈ）−　 （４）　　　融点：１７０〜１７３℃（ｄｅｃ．）（５
）　　　紫外線吸収スペクトル：添付図面の図１に示す
。 （６）　　　赤外線吸収スペクトル：添付図面の図２に
示す。 （７）　　　水素核核磁気共鳴スペクトル：添付図面の
図３に示す。 （８）　　　炭素核核磁気共鳴スペクトル：添付図面の
図４に示す。 （９）　　　溶解性：ジメチルスルホキシド、メタノー
ル、アセトン、酢酸エチルに可溶であり、水に不溶であ
る。 （１０）　　薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：０．３
７シリカゲル（メルク社製Ａｒｔ．５７１５）薄層を用
い、展開溶媒としてクロロホルム−メタノール（４：１
）を用いた。

【０００８】式（Ｉ）で示される化合物のうち、ベナス
タチンＢ（Ｒ＝−ＣＨ２　−ＣＨ２　−の化合物）は下
記式で示される。

【０００９】ベナスタチンＢの理化学的性質は下記の通
りである。 ベナスタチンＢの理化学的性状 （１）　　　色及び形状：黄色粉末 （２）　　　分子式：

【化４】 Ｃ３０Ｈ３０Ｏ７　 （３）　　　分子量：５０２　　ＦＡＢ−ＭＳ（Ｎｅｇ
ａｔｉｖｅ）ｍ／ｚ　　５０１（Ｍ−Ｈ）−　 （４）　　　融点：２１０〜２１２℃（ｄｅｃ．）（５
）　　　紫外線吸収スペクトル：添付図面の図５に示す
。 （６）　　　赤外線吸収スペクトル：添付図面の図６に
示す。 （７）　　　水素核核磁気共鳴スペクトル：添付図面の
図７に示す。 （８）　　　炭素核核磁気共鳴スペクトル：添付図面の
図８に示す。 （９）　　　溶解性：ジメチルスルホキシド、メタノー
ル、アセトン、酢酸エチルに可溶であり、水に不溶であ
る。 （１０）　　薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：０．４
４シリカゲル（メルク社製Ａｒｔ．５７１５）薄層を用
い、展開溶媒としてクロロホルム−メタノール（４：１
）を用いた。

【００１０】ベナスタチンＡおよびＢはその薬学的に許
容し得る塩の形態にあってもよく、このような塩として
は、例えばナトリウム、カリウム、リチウムなどのアル
カリ金属およびカルシウムなどのアルカリ土類金属等と
の塩が挙げられる。本発明の第２の発明は、新規生理活
性物質ベナスタチンＡおよびＢの製造法に関する発明で
あって、ストレプトミセス属に属するベナスタチン生産
菌を栄養培地中で培養し、その培養物から上記式（Ｉ）
で表される生理活性物質ベナスタチンＡおよびＢを分離
採取することを特徴とする。

【００１１】本発明に使用されるベナスタチン生産菌の
１例としては、本発明者らにより東京都杉並区の土壌よ
り分離された放線菌であって、ＭＩ３８４−ＤＦ１２の
菌株番号が付された菌株がある。ＭＩ３８４−ＤＦ１２
株の菌学的性状は次の通りである。

【００１２】１．　　形態 ＭＩ３８４−ＤＦ１２株は、顕微鏡下で分枝した基中菌
糸より気菌糸を伸長する。気菌糸は通常まっすぐである
が、らせん状の胞子鎖を有し、胞子の連鎖は２０個以上
を数える。特徴的な形態として直径１．５〜６ミクロン
の偽似胞子のう（Ｐｓｅｕｄｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）
を形成する。輪生枝および胞子のうは認められない。胞
子の大きさは約０．５〜０．６×０．７〜０．８ミクロ
ンであり、その表面は平滑である。

【００１３】２．　　各種培地における生育状態色の記
載について以下の〔　　〕内に示す標準は、コンティナ
ー・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハー
モニー・マニュアル（ＣｏｎｔａｉｎｅｒＣｏｒｐｏｒ
ａｔｉｏｎ　　ｏｆ　　Ａｍｅｒｉｃａのｃｏｌｏｒ　
　ｈａｒｍｏｎｙｍａｎｕａｌ）を用いた。 （１）　　　シュクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培
養）発育は明るい茶〔４ｎｇ，Ｌｔ　　Ｂｒｏｗｎ〕〜
暗い茶〔３ｐｎ，Ｄｋ　　Ｂｒｏｗｎ〕、気菌糸の着生
は、認められない。溶解性色素はかすかに茶色味を帯び
る。 （２）　　　グルコース・アスパラギン寒天培地（２７
℃培養） 発育はうす茶〔３ｉｅ，Ｃａｍｅｌ〕〜赤茶〔５ｕｉ，
ＲｏｓｅｗｏｏｄＢｒｏｗｎ〕、気菌糸の着生は認めら
れない。溶解性色素はわずかにピンク色を帯びる。

【００１４】 （３）　　　グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳ
Ｐ−培地５，２７℃培養） 茶灰〔４ｎｉ，Ｓｐｉｃｅ　　Ｂｒｏｗｎ〕〜暗いオリ
ーブ灰〔１ｐｏ，Ｅｂｏｎｙ〕の発育上に、まばらに白
い気菌糸を着生する。溶解性色素はわずかにピンク色を
帯びる。発育の色調および溶解性色素は０．０５Ｎ−Ｎ
ａＯＨの添加により緑色を帯びるが、０．０５Ｎ−ＨＣ
ｌの添加によって変化しなかった。 （４）　　　スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地
４，２７℃培養） 茶灰〔４ｎｉ，Ｓｐｉｃｅ　　Ｂｒｏｗｎ〕〜暗い茶〔
４ｐｎ，Ｄｋ　　Ｂｒｏｗｎ〕の発育上に、綿状の白い
気菌糸を着生する。溶解性色素はかすかに茶色味を帯び
る。 発育の色調および溶解性色素は０．０５Ｎ−ＮａＯＨの
添加により緑色を帯びるが、０．０５Ｎ−ＨＣｌの添加
によって変化しなかった。

【００１５】 （５）　　　チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７，２７
℃培養） 発育は灰味茶〔３ｎｉ，Ｃｌｏｖｅ　　Ｂｒｏｗｎ〕〜
暗い茶〔４ｎｌ，ＤｋＢｒｏｗｎ〕、気菌糸の着生は認
められない。溶解性色素は茶色味を帯びる。 （６）　　　栄養寒天培地（２７℃培養）発育はうす茶
〔３ｎｇ，Ｙｅｌｌｏｗ　　Ｍａｐｌｅ〕〜灰味茶〔３
ｎｉ，Ｃｌｏｖｅ　　Ｂｒｏｗｎ〕、気菌糸の着生は認
められない。溶解性色素は茶色味を帯びる。 （７）　　　イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２
，２７℃培養） うす黄茶〔２ｐｇ，Ｍｕｓｔａｒｄ　　Ｇｏｌｄ〕〜う
す茶〔２ｎｉ，Ｍｕｓｔａｒｄ　　Ｂｒｏｗｎ〕の発育
上に、白い綿状の気菌糸を着生する。溶解性色素は認め
られない。

【００１６】 （８）　　　オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３，
２７℃培養） うすピンク〔５ｂａ，Ｓｈｅｌｌ，Ｐｉｎｋ〕〜うす黄
茶〔２ｌｇ，Ｍｕｓｔａｒｄ　　Ｔａｎ〕の発育上に、
明るい灰色〔１３ｃｂ，Ｐｅａｒｌ　　Ｇｒａｙ〕の気
菌糸をうっすらとまばらに着生する。溶解性色素はうす
ピンクを帯びる。 （９）　　　グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養
）発育はピンク〔６ｉｅ，Ｒｅｄｗｏｏｄ〕〜灰味赤〔
６ｌｇ，Ｄｋ　　Ｒｅｄｗｏｏｄ〕、気菌糸の着生は認
められない。溶解性色素はわずかにうすピンクを帯びる
。 （１０）　　スターチ寒天培地（２７℃培養）発育はう
す茶〔３ｎｇ，Ｙｅｌｌｏｗ　　Ｍａｐｌｅ〕〜暗い茶
〔４Ｐｎ，ＤｋＢｒｏｗｎ〕、気菌糸の着生は認められ
ない。溶解性色素はわずかにうすピンクを帯びる。 （１１）　　リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養）発育
はうすオリーブ〔１ｌｅ，Ｏｌｉｖｅ　　Ｙｅｌｌｏｗ
　　〕、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められない
。

【００１７】 （１２）　　セルロース（濾紙片添加合成液、２７℃培
養）培養後３週間観察したが、生育を認めなかった。 （１３）　　ゼラチン穿刺培養（１５％単純ゼラチン培
地、２０℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン培地
、２４℃培養） 単純ゼラチン培地の場合は、発育はうす茶、気菌糸は着
生せず、溶解性色素は茶色味を帯びる。グルコース・ペ
プトン・ゼラチン培地では、発育はうす黄茶、気菌糸は
着生せず、溶解性色素は茶色味を帯びる。 （１４）　　脱脂牛乳（３７℃培養） 発育はうす茶、気菌糸は着生せず、溶解性色素は褐色を
呈する。

【００１８】３．　　生理的性質 （１）　　　生育温度範囲 イースト・スターチ寒天培地（可溶性デンプン１．０％
、イースト・エキス０．２％、ひも寒天３．０％、ｐＨ
７．０）を用い、２０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３
７℃、５０℃の各温度で試験した結果、２０℃、２４℃
、２７℃、３０℃、３７℃で生育したが、２０℃での生
育は極めて悪く、５０℃では生育しない。生育至適温度
は２７℃〜３０℃付近と思われる。 （２）　　　ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチン培地
、２０℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン培地、
２７℃培養） １５％単純ゼラチン培地においては、液化を示さず、グ
ルコース・ペプトン・ゼラチン培地では培養後２１日目
に弱い液化を示した。その作用は弱い方である。

【００１９】 （３）　　　スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒
天培地及びスターチ寒天培地、いずれも２７℃培養）い
ずれの培地でも、培養後３日目には水解性を認めその作
用は中等度である。 （４）　　　脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳、
３７℃培養） 培養後６日目頃よりペプトン化が始まり１３日目頃には
完了する。その作用は中等度〜強い方である。凝固は、
認められない。

【００２０】 （５）　　　メラニン様色素の生成（トリプトン・イー
スト・ブロス、ＩＳＰ−培地１；ペプトン・イースト・
鉄寒天培地、ＩＳＰ−培地６；チロシン寒天培地、ＩＳ
Ｐ−培地７；いずれも２７℃培養） トリプトン・イースト・ブロス（ＩＳＰ−培地１）、ペ
プトン・イースト・鉄寒天培地（ＩＳＰ−培地６）は陽
性、チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７）はわずかにメ
ラニン様色素を生成する。 （６）　　　炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ
寒天培地、ＩＳＰ−培地９、２７℃培養） Ｌ−アラビノース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース
、シュクロース、イノシトール、Ｄ−マンニトールを利
用して発育する。Ｄ−キシロースもおそらく利用する。 ラムノース、ラフィノース、ラクトースは利用しない。

【００２１】 （７）　　　リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天培
地、２７℃培養） 陰性である。 （８）　　　硝酸塩の還元反応（０．１％硝酸カリウム
含有ペプトン水、ＩＳＰ−培地８、２７℃培養）陽性で
ある。 （９）　　　セルロースの分解（濾紙片添加合成液、２
７℃培養） 生育しない。

【００２２】以上の性状を要約すると、ＭＩ３８４−Ｄ
Ｆ１２株はその形態上、らせん形成および特徴的な偽似
胞子のうを有する気菌糸を伸長する。胞子の連鎖は２０
個以上を数え、その表面は平滑である。種々の培地で、
発育はうす茶〜暗い茶、特定な培地ではピンク色を呈す
る。気菌糸の着生は認めないことが多いが、ＩＳＰ−培
地２、３、４、５では白い気菌糸を着生する。溶解性色
素は、培地によりピンク色を帯びる場合と褐色を帯びる
場合がある。メラニン様色素の生成は陽性、蛋白分解力
は中等度、スターチの水解性も中等度である。

【００２３】なお、細胞壁に含まれる２，６−ジアミノ
ピメリン酸はＬＬ−型であった。これらの性状より、Ｍ
Ｉ３８４−ＤＦ１２株はストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ）に属すると考えられる。近縁の既知菌
種を検索すると、ＭＩ３８４−ＤＦ１２株の特徴である
偽似胞子のうを有するものとして次の２種があげられた
。すなわち、ストレプトミセス・パラドクス（Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｐａｒａｄｏｃｕｓ，Ｉｎｔｅｒ
ｎａｔｉｏｎａｌ　　Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　　Ｓｙ
ｓｔｅｍａｔｉｃ　　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，３６
巻、５７３〜５７６頁、１９８６年；Ｓｙｓｔｅｍａｔ
ｉｃ　　ａｎｄ　　ＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌ
ｏｇｙ，８巻、６１〜６４頁、１９８６年）およびスト
レプトミセス・ヴィタミノフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ　　ｖｉｔａｍｉｎｏｐｈｉｌｌｕｓ，Ｉｎｔ
ｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　　Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　　
ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，３６
巻、５７３〜５７６頁、１９８６年；Ｓｙｓｔｅｍａｔ
ｉｃ　　ａｎｄ　　Ａｐｐｌｉｅｄ　　Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌｏｇｙ，８巻、６１〜６４頁、１９８６年；Ｉｎｔ
ｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　　Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆＳｙ
ｓｔｅｍａｔｉｃ　　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，３３
巻、５５７〜５６４頁、１９８３年）である。このうち
、ストレプトミセス・ヴィタミノフィルスとは、ビタミ
ン要求性において区別された。ＭＩ３８４−ＤＦ１２株
をストレプトミセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ　　ｓｐ．）ＭＩ３８４−ＤＦ１２と同定した。

【００２４】ＭＩ３８４−ＤＦ１２株を工業技術院微生
物工業技術研究所に寄託申請し、平成２年２月８日に微
工研菌寄第１１２７０号として受託された。平成３年１
月１８日にブタペスト条約に基づく国際寄託に移管され
、微工研条寄第３２２８号（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−３２２
８）の受託番号が付与されている。ＭＩ３８４−ＤＦ１
２株は他の放線菌の場合に見られるように、その性状が
変化しやすい。たとえば、ＭＩ３８４−ＤＦ１２株に由
来する突然変異株（自然発生または誘発性）、形質融合
体または遺伝子組み換え体であっても、ベナスタチンの
生産能を有するストレプトミセス属の菌はすべて本発明
の方法に使用することができる。

【００２５】本発明の方法では、前記の菌を通常の微生
物が利用しうる栄養物を含有する培地で培養する。炭素
源としては、グルコース、水飴、デキストリン、シュク
ロース、でんぷん、糖蜜、動・植物油等を使用できる。 窒素源としては、大豆粉、小麦、小麦胚芽、コーンステ
ィープ・リカー、綿実かす、肉エキス、ペプトン、酵母
エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ、尿素等を利用
できる。その他、必要に応じ、ナトリウム、コバルト、
塩素、硫酸、燐酸、及びその他のイオンを生成すること
のできる無機塩類を添加することは有効である。菌の生
育を助け、生理活性物質ベナスタチンの生産を促進する
ような有機及び無機物を適当に添加することができる。

【００２６】培養法としては、好気的条件での培養法、
特に深部培養法が適している。培養に適当な温度は１５
〜３７℃であるが、多くの場合、２６〜３０℃付近で培
養する。生理活性物質ベナスタチンの生産は培地や培養
条件により異なるが、振盪培養、タンク培養とも通常１
〜１０日の間でその蓄積が最高に達する。培養物中の生
理活性物質ベナスタチンの蓄積量が最高になった時に、
培養を停止し、培養液から目的物質を単離精製する。

【００２７】本発明によって得られるベナスタチンの培
養液からの採取にあたっては、その性状を利用した通常
の分離手段を適宜組み合わせて抽出して精製することが
できる。ベナスタチンＡおよびＢは培養濾液及び菌体の
両方に存在する。培養濾液よりは、酢酸エチル等の水不
混和性の有機溶媒で抽出できる。菌体よりは、メタノー
ル、アセトン等の有機溶剤で抽出後、抽出液を減圧濃縮
し、培養濾液と同様の方法で更に溶媒抽出することがで
きる。

【００２８】上述の方法に加え、脂溶性物質の採取に用
いられる公知の方法、例えば吸着クロマトグラフィー、
ゲル濾過クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー
よりのかき取り、高速液体クロマトグラフィー等を適宜
組み合せ、あるいは繰り返すことによってベナスタチン
Ａ又はＢを純粋に単離することができる。ベナスタチン
Ａ又はＢの薬学的に許容し得る塩は、公知の方法によっ
て製造することができ、例えば水酸化ナトリウム、水酸
化カリウム、水酸化リチウム、水酸化カルシウムなどを
含む溶液で対応するベナスタチンを処理することによっ
て得ることができる。

【００２９】本発明の第３の発明は、ベナスタチンＡ又
はＢまたはその薬学的に許容し得る塩及び医薬用添加剤
とからなるグルタチオントランスフェラーゼ阻害剤およ
び抗菌剤である。本発明の第４の発明はベナスタチンＡ
またはその薬理学的に許容しうる塩及び医薬用添加剤と
からなる免疫抑制剤に関するものである。本発明の第５
の発明はベナスタチンＢまたはその薬学的に許容しうる
塩及び医薬用添加剤とからなる免疫調節剤（ｉｍｍｕｎ
ｏｍｏｄｉｆｉｅｒ）に関するものである。　　医薬用
添加剤は特に制限はなく、一般的に使用されるものが使
用できる。組成物中の有効成分（ベナスタチンＡ又はＢ
）の割合はその剤形などにより異なるので一概にはいえ
ないが、０．０５〜９９％程度まで広範囲に使用するこ
とができ、通常注射剤では０．１％〜５０％程度であり
、それ以外の製剤では１％〜６０％程度である。残部は
医薬用添加剤である。ベナスタチンＡ及びＢは以下の試
験例に示すように細胞膜及び細胞質に局在する酵素であ
るグルタチオントランスフェラーゼを強く阻害し、抗菌
作用を有するが、毒性を示さない。また、ベナスタチン
Ａは免疫抑制作用を示し、ベナスタチンＢは低濃度では
免疫を賦活する傾向があり、一定濃度以上では免疫を抑
制作用を示す。マウスによる移植片対宿主反応では、５
０ｍｇ／ｋｇまで投与して、その反応を調べたところ、
いずれも免疫を賦活した。

【００３０】したがって、ベナスタチンＡはグルタチオ
ントランスフェラーゼ阻害剤、免疫抑制剤および抗菌剤
として極めて有用である。またベナスタチンＢはグルタ
チオントランスフェラーゼ阻害剤、免疫調節剤（ｉｍｍ
ｕｎｏｍｏｄｉｆｉｅｒ）（主として免疫賦活剤）およ
び抗菌剤として有用である。ベナスタチンＡ又はＢを、
通常、人を含む温血動物に経口投与あるいは静脈、皮内
、筋肉内投与などの非経口投与でその有効量を投与する
ことにより生体中のグルタチオントランスフェラーゼの
阻害、免疫調節（免疫抑制又は免疫賦活）及び抗菌を行
うことができる。従って本発明は場合によりグルタチオ
ントランスフェラーゼ阻害方法、免疫調節方法及び抗菌
方法を提供する。投与量は投与する対象、投与ルートな
どによって変動するが通常、０．０５〜１５０ｍｇ／ｋ
ｇ／日、０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは１
〜５０ｍｇ／ｋｇ／日である。

【００３１】投与する際の製剤としては慣用的に用いら
れている剤形が挙げられる。経口投与の場合には、医薬
用添加剤例えばデンプンなどの通常の賦形剤などととも
に成型された錠剤、顆粒剤、カプセル剤などが用いられ
る。非経口投与の場合には医薬用添加剤例えば生理食塩
水、溶解剤などを用いて製剤化された通常の注射剤など
が用いられる。

【００３２】

【発明の効果】以上に詳細に説明したように、本発明で
は新規な生理活性物質ベナスタチンＡ及びＢが提供され
、この化合物はグルタチオントランスフェラーゼを強く
阻害し、抗菌作用を有する。したがって、グルタチオン
トランスフェラーゼ阻害剤および抗菌剤として極めて有
用である。また、ベナスタチンＡは免疫抑制作用を有す
ることから、免疫抑制剤として、ベナスタチンＢは低濃
度（低投与量）では免疫を賦活し、一定濃度以上では免
疫を抑制することから、免疫調節剤として、有用である
が、通常は免疫賦活剤として利用しうる。

【００３３】

【実施例】次に実施例によって本発明のベナスタチンＡ
及びＢの製造例及び製剤例を示す。 実施例１（ベナスタチンＡの製造） 種培地として、ガラクトース２．０％、デキストリン２
．０％、バクト−ソイトン（登録商標）（ティフコ社製
）１．０％、コーンスティープ・リカー（イワキ社製）
０．５％、硫酸アンモニウム０．２％、炭酸カルシウム
０．２％、消泡剤としてシリコンＫＭ−７０（信越化学
社製）及び大豆油（局法）の混液（混合割合１：１）０
．０５％を含む培地を用いた。なお、殺菌前の培地はｐ
Ｈ７．４に調整して使用した。

【００３４】５００ｍｌ容三角フラスコに１１０ｍｌを
分注した前記種培地を１２０℃で２０分間滅菌し、これ
にストレプトミセス・エスピー　　ＭＩ３８４−ＤＦ１
２株（ＦＥＲＭ　　Ｐ−１１２７０）の斜面培養の１〜
２白金耳を接種し、３０℃、１８０回転／分の回転式振
盪機にて３日間培養し種培養とした。ついで生産培地と
してグリセリン２．０％、エスサンミート（味の素社製
）１．５％、燐酸水素二カリウム０．１％、塩化コバル
ト六水塩０．０００５％を含む培地（ｐＨ６．２、１Ｍ
燐酸一カリウムで調整）を５００ｍｌ容三角フラスコに
１１０ｍｌずつ分注し、１２０℃で２０分間滅菌し、前
記種培養液２ｍｌずつを移植し、２７℃で４日間振盪培
養した。培養終了後、培養液を濾過し培養濾液と菌体に
分別した。

【００３５】培養濾液９．８リットルに酢酸エチル１０
リットルを加え、よく攪拌して有効成分を抽出し、これ
を濃縮して赤色の粗物質３．５２ｇを得た。この粗物質
をメタノール２０ｍｌに溶解し、シラナイズドシリカゲ
ル（メルク社製、Ａｒｔ．７７１９）２０ｇを加えて減
圧下に濃縮乾固した。次に、これを４０％メタノールで
懸濁後、あらかじめ４０％メタノールで充填したシラナ
イズドシリカゲル４００ｍｌのカラムにかけ、有効成分
を４０％メタノール〜１００％メタノールの直線的濃度
勾配溶出法により溶出し、濃縮乾固して赤色の粗物質８
７８．７ｍｇを得た。この粗物質メタノール１０ｍｌに
溶解し、ＹＭＣ−ＧＥＬ（ＯＤＳ−Ａ６０−２００／６
０、山村化学研究所社製）１０ｇを加えて濃縮乾固した
。

【００３６】次に、これを４０％メタノールで懸濁後、
あらかじめ４０％メタノールで充填したＹＭＣ−ＧＥＬ
　　２００ｍｌのカラムにかけ、有効成分を４０％メタ
ノール〜１００％メタノールの直線的濃度勾配溶出法に
より溶出し、濃縮乾固して褐色の粉末３２９．２ｍｇを
得た。 この粉末をメタノール１０ｍｌに溶解し、シリカゲル６
０（メルク社製、Ａｒｔ．７７３４）１０ｇを加えて濃
縮乾固した。次に、これをクロロホルム：メタノール（
９０：１０）で懸濁後、あらかじめ同混合溶媒で充填し
たシリカゲル６０　　２００ｍｌのカラムにかけ、同混
合溶媒で洗浄した。

【００３７】続いて、有効成分をクロロホルム：メタノ
ール（８０：１５）で溶出し、濃縮乾固することにより
、純粋なベナスタチンの黄色粉末を１１５．１ｍｇを得
た。純粋なベナスタチンを用いて、紫外線吸収スペクト
ル、赤外線吸収スペクトル、水素核核磁気共鳴スペクト
ル及び炭素核核磁気共鳴スペクトルを測定した。これら
のスペクトルは図１、図２、図３及び図４に示した通り
である。ベナスタチンＡの培養工程ならびに精製工程中
での追跡は、抗グルタチオントランスフェラーゼ活性の
測定に基づいて行った。その方法は、後述する試験例で
示すグルタチオントランスフェラーゼ阻害活性の測定法
と同様の方法を用いた。

【００３８】実施例２（ベナスタチンＢの製造）実施例
１と同様に振盪培養し、培養終了後、培養液を濾過し、
培養濾液と菌体に分別した。培養濾液３０リットルに酢
酸エチル３０リットルを加え、よく攪拌して有効成分を
抽出し、これを濃縮して赤色の粗物質１２．３２ｇを得
た。この粗物質をメタノール４０ｍｌに溶解し、シラナ
イズドシリカゲル（メルク社製、Ａｒｔ．７７１９）４
０ｇを加えて減圧下に濃縮乾固した。次に、これを４０
％メタノールで懸濁後、あらかじめ４０％メタノールで
充填したシラナイズドシリカゲル　　５００ｍｌのカラ
ムにかけ、有効成分を４０％メタノール〜１００％メタ
ノールの直線的濃度勾配溶出法により溶出し、濃縮乾固
して赤色の粗物質６．３６ｇを得た。

【００３９】この粗物質をメタノール２０ｍｌに溶解し
、ＹＭＣ−ＧＥＬ（ＯＤＳ−Ａ６０−２００／６０、山
村化学研究所社製）２０ｇを加えて濃縮乾固した。次に
、これを４０％メタノールで懸濁後、あらかじめ４０％
メタノールで充填したＹＭＣ−ＧＥＬ　　５００ｍｌの
カラムにかけ、有効成分を４０％メタノール〜１００％
メタノールの直線的濃度勾配溶出法により溶出し、濃縮
乾固して褐色の粉末３．２９ｇを得た。この粉末をメタ
ノール２０ｍｌに溶解し、シリカゲル６０（メルク社製
、Ａｒｔ．７７３４）２０ｇを加えて濃縮乾固した。次
に、これをクロロホルムで懸濁後、あらかじめ同溶媒で
充填したシリカゲル６０　　４００ｍｌのカラムにかけ
、同溶媒で洗浄した。続いて、有効成分をクロロホルム
：メタノール（９５：５）で溶出し、濃縮乾固して黄色
の粉末１．３５ｇを得た。

【００４０】次に、この粉末をあらかじめ酢酸を１％含
有する７８％アセトニトリルで平衡化した高速液体クロ
マトグラフィー（ＨＰＬＣ）用カラム（資生堂社製、カ
プセルパック　　Ｃ１８、２０Φ×２５０ｍｍ、流速８
ｍｌ／ｍｉｎ　）へ通し、前記平衡液で溶出し、得られ
た活性画分を濃縮乾固することにより、純粋なベナスタ
チンＢの黄色粉末を９２．７ｍｇ得た。純粋なベナスタ
チンＢを用いて、紫外線吸収スペクトル、赤外線吸収ス
ペクトル、水素核核磁気共鳴スペクトル及び炭素核核磁
気共鳴スペクトルを測定した。これらのスペクトルは図
５、図６、図７及び図８に示した通りである。ベナスタ
チンＢの培養工程ならびに精製工程中での追跡は、実施
例１と同様にして行った。

【００４１】実施例３ ベナスタチン３０重量部、結晶乳糖１２０部、結晶セル
ロース１４７部及びステアリン酸マグネシウム３部をＶ
型混合機で打錠し、１錠３００ｍｇの錠剤を得た。

【００４２】

【試験例】以下に、ベナスタチンＡおよびＢがグルタチ
オントランスフェラーゼ阻害活性を有し、また免疫調節
作用および抗菌作用を有し、且つ毒性を示さないことを
試験例により示す。

【００４３】試験例１ ベナスタチンＡおよびＢのグルタチオントランスフェラ
ーゼ阻害活性 グルタチオントランスフェラーゼ阻害活性はＢｉｏｃｈ
ｅｍｉｃａｌ　　ａｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　　Ｒ
ｅｓｅａｒｃｈ　　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、第
１１２巻、９８０〜９８５頁（１９８３）に記載の方法
の改良法で行った。即ち、試験管に９０ｍＭグルタチオ
ン（還元型）０．１ｍｌ、２０ｍＭ３，４−ジクロロニ
トロベンゼン０．０５ｍｌ、０．１Ｍカリウム燐酸緩衝
液（ｐＨ７．４）１．７ｍｌ、検体を含む水溶液０．１
ｍｌを加えた混合溶液を３７℃、３分間加温した後、ラ
ット肝臓のホモジェネートよりＤＥＡＥ−セルロースカ
ラム、硫酸アンモニウム塩析により部分精製したグルタ
チオントランスフェラーゼ溶液０．０５ｍｌを加え、３
７℃、３０分間反応させた。

【００４４】反応後、３４５ｎｍにおける吸光度（ａ）
　を測定した。同時に検体を含まない緩衝液のみを用い
た盲検の吸光度（ｂ）　を測定し、グルタチオントラン
スフェラーゼ阻害率を〔（ｂ−ａ）／ｂ〕×１００によ
り計算した。５０％阻害率を示す検体の濃度をＩＣ５０
の値とした。この定量法で純粋なベナスタチンＡは２．
５０μｇ／ｍｌの濃度で、またベナスタチンＢは０．９
２μｇ／ｍｌの濃度でグルタチオントランスフェラーゼ
を５０％阻害した。

【００４５】試験例２ ベナスタチンＡの免疫抑制作用 リンパ球幼若化反応に対するベナスタチンの抑制効果の
試験法は次の通りである。培養には２０％牛胎児血清、
２５ｍＭ　　Ｈｅｐｅｓ　　ｂｕｆｆｅｒ、１００μｇ
／ｍｌのストレプトマイシン及び１００単位／ｍｌのペ
ニシリンＧを添加したＲＰＭＩ　　１６４０培地を用い
た。培養は９６穴の平底マイクロプレート（ＣＯＳＴＡ
Ｒ）で行った。マイトジェンは、リポポリサッカライド
（ＬＰＳ）とコンカナバリンＡ（Ｃｏｎ　Ａ）をそれぞ
れ最終濃度１００、５μｇ／ｍｌで用いた。

【００４６】脾臓細胞は、ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌性、
２５週齢）から脾臓を取り出し単細胞浮遊液を作り、ハ
イパーショック（ｈｙｐｅｒ　　ｓｈｏｃｋ）で赤血球
を除去し調整した。各ウェルに２×１０５　個の脾細胞
と、それぞれの希釈濃度の被検化合物を加え総量０．２
ｍｌとし、これを７２時間培養した。培養終了の８時間
前にウェル当たり３７ｋＢｑの〔　３Ｈ〕−チミジンを
添加し、その細胞内への取り込み量を測定した。効果の
判定は、それぞれの被検化合物添加群の対照に対する〔
　３Ｈ〕−チミジンの取り込み量の比率によった（日本
免疫学会編、免疫実験操作法、第２２６７〜２２７６頁
）。ベナスタチンＡは、ＬＰＳ添加群、Ｃｏｎ　Ａ添加
群とも濃度に依存してリンパ球幼若化反応を抑制した。 〔　３Ｈ〕−チミジンの取り込みの５０％阻害濃度（Ｉ
Ｃ５０）は、ベナスタチンＡではＬＰＳで７．７μｇ／
ｍｌ、Ｃｏｎ　Ａで７．３μｇ／ｍｌであった。

【００４７】試験例３ ベナスタチンＡおよびＢの抗菌活性 本発明のベナスタチンＡおよびＢの寒天稀釈法での細菌
、酵母およびカビに対する最小発育阻止濃度を第１表に
示した。第１表に示す如く、ベナスタチンＡ及びＢは主
にグラム陽性細菌に対して抗菌活性を示した。

【表１】

【００４８】試験例４ ベナスタチンＡおよびＢの毒性 ベナスタチンＡおよびＢを、それぞれ、マウスに腹腔内
投与してその毒性を調べたところ、それぞれの１００ｍ
ｇ／ｋｇ投与でも毒性を示さなかった。

【００４９】試験例５ ベナスタチンＢの免疫調節作用 （１）　　　被検化合物 リンパ球幼若化反応にはベナスタチンＢをメタノールに
溶解したのち、メタノールの最終濃度が０．５％になる
ようにＰＢＳ（−）を加えて調製したものを用い、移植
片対宿主反応には生理食塩水に溶解し調製したものを用
いた。

【００５０】 （２）　　　方法 ａ．　　リンパ球幼若化反応に対する作用培養には２０
％牛胎児血清、２５ｍＭ　　Ｈｅｐｅｓ　　ｂｕｆｆｅ
ｒ、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン及び１００
単位／ｍｌのペニシリンＧを添加したＲＰＭＩ１６４０
培地を用い、９６穴の平底マイクロプレート（ＣＯＳＴ
ＡＲ）で行った。マイトジェンはリポポリサッカライド
（ＬＰＳ）と、コンカナバリンＡ（Ｃｏｎ　Ａ）をそれ
ぞれ最終濃度１００μｇ／ｍｌと、５μｇ／ｍｌで用い
た。脾臓細胞は、ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌性、＞２０週
齢）から脾臓を取り出し単細胞浮遊液を作り、ｈｙｐｅ
ｒ　　ｓｈｏｃｋで赤血球を除去しＬＰＳ用にはこれを
そのまま用いて調製し、Ｃｏｎ　Ａ用にはＴ細胞分離用
Ｎｙｌｏｎ　　Ｆｉｂｅｒ（和光純薬）を通して調製し
た。各ウェルにマウス脾臓細胞を２×１０５　個と、各
々の希釈濃度の被検化合物を加え総量０．２ｍｌとし、
これを７２時間培養した。培養終了の８時間前にウェル
あたり３７ｋＢｑ〔３　Ｈ〕−チミジンを添加し、その
細胞内への取込み量を測定した。効果の判定はそれぞれ
の被検化合物添加群の対照群に対する〔３　Ｈ〕−チミ
ジンの取込み量の比率によった。

【００５１】 ｂ．　　移植片対宿主反応（ｇｒａｆｔ−ｖｅｒｓｕｓ
−ｈｏｓｔ　　ｒｅａｃｔｉｏｎ；ＧｖＨ）に対する作
用ＧｖＨに対する作用は、脾臓重量測定法〔Ｓｉｍｏｎ
ｓｅｎ，Ｍ　　ｅｔ　　ａｌ．：Ａ　　ｓｔｕｄｙ　　
ｏｆ　　ｔｈｅ　　ｇｒａｆｔ−ｖｅｒｓｕｓ−ｈｏｓ
ｔ　　ｒｅａｃｔｉｏｎ　　ｉｎ　　ｔｒａｎｓｐｌａ
ｍａｔａｔｉｏｎ　　ｔｏ　　ｅｍｂｒｙｏｓ，Ｆｌ　
　ｈｙｂｒｉｄｓ，ａｎｄ　　ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ　
　ａｎｉｍａｌｓ．Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
　　７３：８３４−８４１，（１９７８）〕を一部改変
した方法〔Ａｂｅ．Ｆ．，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ｍ．，
Ｂｌａｃｋ，Ｐ．Ｌ．＆　　Ｔａｌｍａｇｅ，Ｊ．Ｅ．
：Ｃｈｅｍｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙｗｉｔｈ　　
ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　　ａｎｄ　　ｅｘ
ｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　　ｉ
ｎ　　ｍｉｃｅ．Ｃａｎｃｅｒ　　ｉｍｍｕｎｏｔｈｅ
ｒ．２９：２３１−２３６，（１９８９）〕で行なった
。Ｃ５７ＢＬ／６　　マウス（雌性、１０週齢）から脾
臓を取り出し、供与者として上述の方法で調製した脾臓
細胞５×１０６　個をＦ１受容者であるＢＤＦ１マウス
（７日齢）の腹腔内に移入した。被検化合物を、その日
を含む３日間、各希釈濃度で皮下投与した。移入後７日
目にそれぞれのＢＤＦ１マウスについて体重と脾臓の重
さを測定し、脾臓の重さ（ｍｇ）の体重（ｇ）に対する
比率（ｍｇ／ｇ）を求めた。

【００５２】ベナスタチンＢのマウスのリンパ球幼若化
反応に対する作用を表２に示した。ベナスタチンＢは低
濃度においてＬＰＳによるリンパ球幼若化反応を促進し
、１２．５μｇ／ｍｌ以上では強く抑制した。また、Ｃ
ｏｎ　Ａによるリンパ球幼若化反応を６．２５μｇ／ｍ
ｌ以上で強く抑制した。ベナスタチンＢのＧｖＨに対す
る作用を表３に示す。ＧｖＨ反応に対しては各用量にお
いて有意な促進が見られ、特に低用量で強い促進が見ら
れた。

【表２】 　　　　　　表２　　マウスリンパ球幼若化反応におけ
るベナスタチンＢの作用　　────────────
──────────────────────　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　作用指数（
％）　　　　　　サンプル　　　　　　　　　　濃度　
　　　　　　　　　────────────────
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（μｇ
／ｍｌ）　　　　　　　　ＬＰＳ　　　　　　　　　　
Ｃｏｎ　Ａ　　──────────────────
────────────────　　　　対　　　　
照　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　１００　　　　　　　　　　１００　　　
　ベナスタチンＢ　　　　　　　　３．１３　　　　　
　　　１４７．５＊　　　　　１０６．２　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６．２５　
　　　　　　　１３８．０＊　　　　　　　１２．６＊
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
１２．５　　　　　　　　　　　　５８．９　　　　　
　　　２６．８　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　２５　　　　　　　　　　　　　　　　　
　０．２＊　　　　　　　　　１．０＊　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　５０　　　　　
　　　　　　　　　　　　　０．４　　　　　　　　　
　１．０　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　１００　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２
　　　　　　　　　　０．９＊　　　────────
─────────────────────────
─　　　＊　　ｐ＜０．０５ｖｓコントロール

【表３】 　　　　　　表３　　インビボにおけるＧｖＨ反応に対
するベナスタチンＢの作用─────────────
──────────────────────　　サ
ンプル　　　　　　薬　　　　量　　　　マウス数　　
　　脾臓重量／体重　　　　　　指　　数　　　　　　
　　　　　　　　　　（ｍｇ／ｋｇ）　　　　　　　　
　　　　　　　　（ｍｇ／ｋｇ）──────────
─────────────────────────
　　非移入　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　１０　　　　　　４．５±０．３　　　　　　１．
００　　移入　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　９　　　　　　８．３±２．５　　　　
　　１．８４　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　ベナスタチンＢ　　　　０．５　　　　１０　　
　　１２．５±２．２　　　　　　２．７８＊　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　５　　　　　　　
　１１　　　　１１．５±０．８　　　　　　２．５６
＊　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５０　　　
　　　　　１１　　　　１０．６±１．３　　　　　　
２．３６＊　───────────────────
────────────────　　＊　ｐ＜０．０
５ｖｓコントロール

【図面の簡単な説明】

【図１】ベナスタチンＡの１０μｇ／ｍｌエタノール溶
液の紫外線吸収スペクトルを示す。

【図２】ベナスタチンＡの臭化カリウム錠内での赤外線
吸収スペクトルを示す。

【図３】ベナスタチンＡの重メタノール中で測定した４
００ＭＨｚ　水素核核磁気共鳴スペクトルを示す。

【図４】ベナスタチンＡの重メタノール中で測定した１
００ＭＨｚ　炭素核核磁気共鳴スペクトルを示す。

【図５】ベナスタチンＢの１０μｇ／ｍｌエタノール溶
液の紫外線吸収スペクトルを示す。

【図６】ベナスタチンＢの臭化カリウム錠内での赤外線
吸収スペクトルを示す。

【図７】ベナスタチンＢの重メタノール中で測定した４
００ＭＨｚ　水素核核磁気共鳴スペクトルを示す。

【図８】ベナスタチンＢの重メタノール中で測定した１
００ＭＨｚ　炭素核核磁気共鳴スペクトルを示す。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　下記式（Ｉ）　 【化１】 （式中Ｒは−ＣＨ２　−ＣＨ２　−又は−ＣＨ＝ＣＨ−
   を示す。）で表される化合物であることを特徴とする生
   理活性物質ベナスタチンＡおよびＢ又はその薬理学的に
   許容し得る塩。
2. 【請求項２】　　ストレプトミセス属に属するベナスタ
   チン生産菌を栄養培地中で培養し、その培養物からベナ
   スタチンＡ又はＢを採取することを特徴とする生理活性
   物質ベナスタチンの製造法。
3. 【請求項３】　　ベナスタチンＡ又はＢあるいはその薬
   学的に許容し得る塩及び医薬用添加剤とからなるグルタ
   チオントランスフェラーゼ阻害剤および抗菌剤。
4. 【請求項４】　　ベナスタチンＡまたはその薬学的に許
   容しうる塩及び医薬用添加剤とからなる免疫抑制剤。
5. 【請求項５】　　ベナスタチンＢまたはその薬学的に許
   容しうる塩及び医薬用添加剤とからなる免疫調節剤（ｉ
   ｍｍｕｎｏｍｏｄｉｆｉｅｒ）。