JPH04218370A - マンノースイソメラーゼ及びそれを用いたマンノースの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はＤ−マンノース（以下マ
ンノースと略す。）とＤ−フラクトース（以下フラクト
ースと略す。）を相互変換する新規なマンノースイソメ
ラーゼ、その製造法及びこれを用いたフラクトースから
マンノースの製造法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】マンノースは腸内有害サルモネラ菌の増
殖を阻止する機能のあることが、最近、明らかになり〔
Ｒ．Ｈ．Ｂｒｏｗｎ，Ｆｏｏｄｓｔｕｆｆ，Ｊｕｎｅ　
　１２巻，１０頁（１９８９）〕、ニワトリなど家禽類
の飼料添加物として、また機能性食品素材としての利用
が考えられている。しかし、マンノースは、普通、木材
、コンニャクなど、植物に含まれるマンナンを分解して
製造されるため、現在、非常に高価である。

【０００３】発明者らはマンノースとフラクトースを相
互変換するマンノースイソメラーゼを用い、豊富、かつ
安価に製造されるフラクトースからマンノースを製造す
る技術、及びマンノースイソメラーゼとグルコースイソ
メラーゼ（グルコースとフラクトースを相互変換する酵
素）を組み合わせ、グルコースから直接マンノースを製
造する技術を確立することを目的とし、工業的に使用可
能なマンノースイソメラーゼを生産する微生物の探索を
行ってきた結果、土壌中から分離し、シュードモナス属
の一菌株と同定した細菌が、従来知られているマンノー
スイソメラーゼに比べ、著しく熱安定性に優れたマンノ
ースイソメラーゼを生産することを認めた。

【０００４】マンノースイソメラーゼは、１９５６年、
ＰａｌｌｅｒｏｎｉとＤｏｕｄｏｒｏｆｆらにより、遊
離六炭糖異性化酵素の最初の酵素として、シュードモナ
ス・サッカロフィラ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　　ｓａ
ｃｃｈａｒｏｐｈｉａ）に見い出された〔Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．，２１８巻，５３５頁（１９５６）〕。そ
の後、本発明者らは、土壌中から分離し、キサントモナ
ス・ルブリリネアンス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ　　ｒ
ｕｂｕｒｉｌｉｎｅａｎｓ）と同定した細菌がマンノー
スイソメラーゼを生産すること〔日本農芸化学会誌，３
７巻，５２４〜５２８頁（１９６３）、Ａｇｒｉｃ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８巻，６０１〜６０４頁（１９
６４）〕。また、ストレプトマイセス・アエロコロリゲ
ネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ａｅｒｏｃｏｌｏ
ｒｉｇｅｎｅｓ）にも同酵素の存在を認めた〔工業技術
院発酵研究所報告，２８巻，８９〜９４頁（１９６６）
〕。 しかし、これらの酵素は、いずれも、最適温度が３５〜
４０℃にあり、熱安定性に劣るため、工業的に利用する
ことはできない。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、工業的
にフラクトース含有物からマンノースを製造する技術を
確立することを目的として、微生物の探索を行ってきた
結果、土壌中から分離し、シュードモナス属と同定した
細菌の生産するマンノースイソメラーゼが、その至適温
度が約５５℃にあり、従来、知られているマンノースイ
ソメラーゼと比べ、１５〜２０℃高い。また、本酵素は
、２０〜３０％の高濃度の基質の下でも阻害されること
なく効率的に反応が進行するなど、工業的利用するため
の有利な特性をもっていることがわかった。このような
マンノースイソメラーゼはこれまで知られていない。 本発明はこのような知見に基づいてなされたものであり
、本発明者らは、マンノースイソメラーゼを製造、精製
し、更にその用途を確立して本発明を完成した。

【０００６】以下、本発明のマンノースイソメラーゼの
理化学的性質について述べる。 （ａ）作用 マンノースをフラクトースに、またフラクトースをマン
ノースに異性化する。又、Ｄ−リキソースに作用し、Ｄ
−キシルロースに異性化する。

【０００７】（ｂ）基質特異性 Ｄ−マンノース及びＤ−リキソースに作用し、Ｄ−ラム
ノース、Ｄ−フコース、Ｄ−グルコース、Ｄ−リボース
、Ｄ−キシロース、Ｄ−アラビノース、Ｌ−キシロース
、Ｌ−アラビノース、Ｌ−ラムノース、Ｌ−フコースに
は実質的に作用しない。

【０００８】（ｃ）作用ｐＨ及び至適ｐＨｐＨ約６〜１
１の範囲で作用するが、至適ｐＨは８付近に認められた
（０．１Ｍリン酸緩衝液の下、５０℃で３０分反応）。 その結果を図１に示す。

【０００９】（ｄ）作用温度及び至適温度約７０℃まで
作用するが、至適温度は約５５℃に認められた〔０．１
Ｍマンノース、０．０５Ｍトリス緩衝液（ｐＨ７．０）
の下で３０分間反応〕。その結果を図２に示す。

【００１０】（ｅ）熱安定性 ０．０５Ｍ　　トリス緩衝液（ｐＨ７．０）の下、６０
℃で、５，１０，１５，２０，３０分間加熱したときの
残存活性は、それぞれ、約９０％，約６８％，約５２％
，約４２％，約３０％であった。その結果を図３に示す
。

【００１１】（ｆ）ｐＨ安定性 ０．１Ｍ緩衝液（酢酸またはリン酸緩衝液）の下で、室
温（２５℃）で３時間放置後、残存活性を測定した。そ
の結果、ｐＨ６〜９の範囲で安定であった。その結果を
第４図に示す。

【００１２】（ｇ）阻害剤 ５×１０−３ＭのＨｇＣｌ２，ＦｅＳＯ４，ＡｇＮＯ３
，ＡｌＣｌ３，ｐ−クロロマーキュリベンゾエート（ｐ
ＣＭＢ）などにより強く阻害された。

【００１３】以上の理化学的性質のうち、その主な性質
について、シュードモナス・サッカロフィラ由来の酵素
（以下、酵素Ａと示す。）、キサントモナス・ルブリリ
ネアンス由来の酵素（以下、酵素Ｂと示す。）及びスト
レプトマイセス・アエロコロリゲネス由来の酵素（以下
、酵素Ｃと示す。）の性質を比較し、その結果を表１に
示す。

【００１４】尚、活性測定は下記の方法で行った。０．
２Ｍマンノースを溶解した０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７．０）０．５ｍｌに、適量の酵素を加え、全量を水で
１．０ｍｌとし、５０℃で反応させる。そして生成した
フラクトースをシステイン・カルバゾール法で定量する
。この条件で、１分間に１マイクロモルのフラクトース
を生成する酵素量を１単位とする。

【００１５】

【表１】

【００１６】本発明の酵素はその至適温度が酵素Ｂ及び
酵素Ｃと比較したとき約１５〜２０℃と高く、安定温度
も１０℃以上高い。この様に酵素の熱安定性が、従来知
られている酵素Ｂおよび酵素Ｃと比較して明らかに異な
っている。また、本発明の酵素と由来が同じ属である酵
素Ａとを比較したとき、基質特異性で異なっている。つ
まり、本発明の酵素はＤ−マンノース及びＤ−リキソー
スに作用し、酵素ＡはＤ−マンノース、Ｄ−リキソース
およびＤ−ラムノースに作用する。また、本発明の酵素
はグルコースのによる阻害の程度が、酵素Ａの場合の阻
害と比較したとき優れているため、異性化糖からマンノ
ースイソメラーゼを使用してマンノースの製造に際して
実用的であり、かつ優れた性質を持つものである。

【００１７】更に、至適ｐＨおよび阻害剤の項でも本発
明のマンノースイソメラーゼと公知の酵素Ａ、酵素Ｂお
よび酵素Ｃには違いがみられる。

【００１８】以上により、本発明の酵素は従来知られて
いる酵素とは全く異なる新規なマンノースイソメラーゼ
である。

【００１９】本発明のマンノースイソメラーゼを生産す
る微生物としては、以下に例示するシュードモナス・エ
スピー　　ＡＭ−９５８２（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　
　ｓｐ．ＡＭ−９５８２）または、その変異株などが本
発明に有利に用いることができる。

【００２０】シュードモナス・エスピー　　ＡＭ−９５
８２（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎｕｓ　　ｓｐ．　　ＡＭ−９
５８２）は新たに土壌から発見、分離されたものであり
、その菌学的性質は下記の通りである。尚、本菌は微工
研菌条寄第３２０７号として、工業技術院微生物工業技
術研究所に寄託されている。

【００２１】（１）形態 細胞の形および大きさ：０．６〜０．８×１．０〜２．
０μの桿菌 細胞の多形成の有無：認められない 運動性の有無：二本以上の極鞭毛を有し運動する胞子の
有無：形成しない グラム染色性：陰性 抗酸性：陰性

【００２２】（２）各培地における生育状態肉汁寒天平
板培養：コロニーは３７℃、４８時間培養で直径０．５
〜０．８ｍｍの円形、表面は平滑、半レンズ様の隆起、
全縁状で黄〜黄褐色、半透明、樹脂様の光沢あり肉汁寒
天斜面培養：生育良好、直状に盛り上がり生育、黄褐色
で金属様光沢を示し、緑褐色の水溶性色素を斜面下部の
寒天内に拡散する肉汁液体培養：菌膜を作らず、中程度
に濁り、黄色を帯びるリトマスミルク培養：液化はする
が凝固はしない

【００２３】（３）生理学的性質 硝酸塩の還元：陰性 硝酸塩からのガス：陰性 ＭＲテスト：陰性 ＶＰテスト：陰性 インドールの生成：陰性 硫化水素の生成：陰性 デンプンの加水分解：陰性 クエン酸の利用：シモンズ及びクリスデンの培地で共に
利用する 色素の形成：Ｋｉｎｇ　　Ａ，Ｋｉｎｇ　　Ｂの培地で
は色素の形成無し ウレアーゼ：陰性 オキシダーゼ：陰性（あっても微弱） カタラーゼ：陽性 ＯＦテスト：酸化型 アルギニンヒドロラーゼ：陽性 アシルアミダーゼ：陽性 アミノ酸デカルボキシラーゼ （リジン、オルニチン）：陰性 ＤＮａｓｅ：陰性 生育温度の範囲：４１℃以上で生育しない酸素の対する
態度：好気性 食塩に対する生育性：０〜４（％） 糖類からの酸生成の有無： ガラクトース　　　　　　＋ グルコース　　　　　　　　＋ サッカロース　　　　　　＋ トレハロース　　　　　　＋ Ｌ−アラビノース　　＋ セロビオース　　　　　　＋ キシロース　　　　　　　　＋ 乳糖　　　　　　　　　　　　　　＋ 麦芽糖　　　　　　　　　　　　＋ マンノース　　　　　　　　＋ マンニット　　　　　　　　＋ 果糖　　　　　　　　　　　　　　＋ サリシン　　　　　　　　　　＋ 澱粉　　　　　　　　　　　　　　− ゼラチンの分解（Ｆｒａｉｚｅｒ法）：陽性ＴＳＩ寒天
培地（斜面の酸）：− （高層の酸）：− ＳＳ寒天培地：生育しない ＮＡＣ寒天培地：生育しない ＭａｃＣｏｎｋｙ寒天培地：生育する トリフェニールテトロゾリウム（０．１％）寒天培地：
生育する １０％乳糖から酸の生成：陽性 エスクリンの分解：陽性（微弱） フェニールアラニンデアミナーゼ：陰性Ｔｗｅｅｎ８０
の分解：陽性 ０．１％メチレンブルーミルクの反応：還元液化ＯＮＰ
Ｇ反応：陽性 レバンの産生：陰性 ムコイド集落の発生：陰性

【００２４】以上の菌学的性質について、Ｂｅｒｇｅｙ
’ｓ　　Ｍａｎｎｕａｌｏｆ　　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ
　　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，第２巻（１９８６）を
参照し、その性状を比較したところ、本菌は黄色素を産
生し極鞭毛を有する直桿菌で、硝酸塩の還元陰性、オキ
シダーゼ陰性、Ｔｗｅｅｎ８０分解陽性、食塩耐性が低
い、産生色素が水溶性であることから、本菌をシュード
モナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属する菌と認め
た。 また本菌はレバン産生能陰性、アルギニンヒドロラーゼ
陽性、フェニールアラニンデアミナーゼ陰性、澱粉分解
陰性、アシルアミダーゼ陽性等の生理学的特徴を有し、
更に菌幅０．３〜０．６μである。以上により、本菌株
を新菌株と判定し、シュードモナス・エスピー　　ＡＭ
−９５８２と命名した。

【００２５】本菌を培養して、マンノースイソメラーゼ
を生産するには、窒素源として、肉エキス、ペプトン、
コーンスティープリカー、カゼインなど、通常、微生物
の培養に使用される有機窒素源、及び塩化アンモニウム
、硫酸アンモニウムなどの無機窒素源が使用される。 又、炭素源として、基質であるマンノースとフラクトー
スは良好な炭素源であるが、必ずしもこれら糖である必
要はなく、安価な、ショ糖、異性化糖、グルコース、マ
ルトース、乳糖、ガラクトース、ソルビトール、マンニ
トール、グリセリンなど種々の糖や糖アルコールのほか
、澱粉、デキスオトリンなども利用することができる。 窒素源と炭素源のほかに、補足する培地成分として、リ
ン酸塩、マグネシウム塩、銅塩など各種金属塩が添加さ
れる。

【００２６】培養は、ｐＨ５〜９、好ましくはｐＨ６〜
８、温度２５〜５０℃、好ましくは３０℃で２〜４日程
度行われる。

【００２７】マンノースイソメラーゼは菌体内に生産さ
れる酵素であるので、培養後、ろ過又は遠心分離により
菌体を回収し，そのまま、又は適当な固定化処理をして
使用するか、超音波又は自己消化法により酵素を抽出し
、濃縮する。必要により、硫酸アンモニウム、アセトン
、メタノール、エタノールなどで沈澱し、乾燥保存する
。

【００２８】本酵素は通常の酵素の精製方法により、電
気泳動的に単一まで精製できる。例えば、菌体を臭化セ
チルトリメチルアンモニウム等を用いて酵素を抽出し、
遠心、塩析、ＤＥＡＥ−セファロースカラムクロマトグ
ラフィー，セファデックスＧ−１５０カラムクロマトグ
ラフィーなどにより精製することができる。

【００２９】本酵素を用いフラクトースからマンノース
を生成する反応は、１０〜５０％のフラクトース又はフ
ラクトース含有液の下、ｐＨ６〜８、温度４０〜６０℃
で行われる。反応後の糖組成の分析は高速液体クロマト
グラフィーによった。平衡時のマンノース対フラクトー
スの割合は約２５対７５であった。

【００３０】以下、実施例により本発明の詳細を説明す
る。

【実施例】実施例１ 魚肉エキス１％、第２表記載の炭素源１％、Ｋ２ＨＰＯ
４　０．２％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ　　０．０５％か
らなる培地（ｐＨ７．０）４ｍｌを径１８ｍｍの試験管
に入れ、常法により殺菌後、シュードモナス・エスピー
　　ＡＭ−９５８２（微工研菌条寄第３２０７号）を接
種し、３０℃で２日間振盪培養した。培養後、０．０５
％臭化セチルトリメチルアンモニウム存在下でｐＨ８．
０、３０℃、６時間処理したのち遠心分離する事により
酵素を抽出した。この様にして得られた酵素液について
生産されたマンノースイソメラーゼを測定した。得られ
た結果を表２に示す。

【００３１】

【表２】

【００３２】表２から明らかなように、マンノースイソ
メラーゼの基質であるマンノース又はフラクトースは良
好な炭素源であるが、安価なショ糖，　グルコースなど
種々の炭素源を用いてもマンノースイソメラーゼが生産
できることがわかった。

【００３３】更に得られた上澄液を６０％硫安塩析して
沈澱を得る。更に透析を行い、ＤＥＡＥセファロースカ
ラムクロマトグラフィー、セファディクスＧ１５０によ
るゲルろ過を３回行った。得られた生成マンノースイソ
メラーゼは電気泳動的に単一であり、比活性は約２９０
倍に精製された。

【００３４】実施例２ 実施例１において、培地炭素源として、ショ糖、フラク
トース、グルコース、又はこれらの混合物１．５％含む
培地に、シュードモナス・エスピー　　ＡＭ−９５８２
（微工研菌条寄第３２０７号）を接種し、３０℃で２日
間振盪培養した。培養後、実施例１に従い、生産された
マンノースイソメラーゼを測定した。結果を表３に示す
。

【００３５】

【表３】

【００３６】表３から明らかなように、培養炭素源とし
て、フラクトースとグルコースの混合物、特にフラクト
ース約８０％、グルコース約２０％の組成の炭素源を用
いたとき、最も良好な結果が得られた。

【００３７】実施例３ 魚肉エキス２．５％，グルコース２．５％，フラクトー
ス１．２５％，Ｋ２ＨＰＯ４　０．１５％，ＭｇＳＯ４
・７Ｈ２０　　０．０５％からなる培地、及びこれにＣ
ｕＳＯ４を２×１０−４〜８×１０−４添加した培地に
ついて、実施例１と同様にしてシュードモナス・エスピ
ー　　ＡＭ−９５８２（微工研菌条寄第３２０７号）を
接種し、３０℃で２４時間培養し、生産されたマンノー
スイソメラーゼを測定した。得られた結果は表４の通り
であった。

【００３８】

【表４】

【００３９】表４から明らかなように、銅イオンを添加
することにより、マンノースイソメラーゼの生産量が顕
著に増加した。

【００４０】実施例４ 実施例３に従って培養し得られた菌体を２０ＫＣ超音波
で１分間処理してマンノースイソメラーゼを抽出した酵
素液（０．４２単位／ｍｌ）を用い、フラクトースを基
質としてマンノースの生産試験を行った。

【００４１】該マンノースイソメラーゼ（０．３０単位
）に、フラクトースを、各５０，１００，２００，３０
０ｍｇ添加し、水で全量を１．０ｍｌとし、ｐＨ７．０
，４５℃で反応した。経時的に一定量をとり、生成した
マンノース及び残存フラクトース量を高速液体クロマト
グラフィーにより定量した。得られた結果を表５及び図
６に示す。

【００４２】

【表５】

【００４３】表５からも明らかなように、本酵素は高濃
度の基質の下でも効率良くマンノースを生成し、最終的
に２４〜２６％の収量でマンノースが得られた。

【００４４】実施例５魚肉エキス２．５％，グルコース
２．５％，フラクトース１．２５％，Ｋ２ＨＰＯ４　０
．１５％，ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０　　０．０５％，Ｃｕ
ＳＯ４　　６×１０−４Ｍからなる培地２０Ｌにシュー
ドモナス・エスピー　　ＡＭ−９５８２（微工研菌条寄
第３２０７号）を接種し、３０℃で２４時間培養し、２
５０ｇの湿菌体を得た。次いで得られた湿菌体１００ｇ
を添加し、ｐＨ７．０、４５℃にて１６時間反応した。 なお湿菌体の活性は湿物１ｇ当たり７単位であった。

【００４５】生成したマンノースを測定したところ、５
６．３ｇであった。フラクトースよりの変換率は１８．
８％であった。

【００４６】実施例６ 実施例５で得られた１００ｇの湿菌体を２５ｍＭ、ｐＨ
７．０リン酸緩衝液５Ｌに懸濁し、菌体固定化用担体と
して”Ｃｅｌｉｔｅ　　Ｃａｔａｌｕｓｔ　　Ｃａｒｒ
ｉｅｒｓ”Ｎｏ．Ｒ−６２０（Ｍａｎｖｉｌｌｅ社製　
　Ｕ．Ｓ．Ａ．）を充填したカラム（直径５ｃｍ、高さ
３０ｃｍ）に下方より、流速２．５Ｌ／時間で７時間循
環通液した。その後２５ｍＭ、ｐＨ７．０リン酸緩衝液
を２．５Ｌ／時間の流速で１０時間通液し、固定化担体
に未吸着の菌体を洗い出し、マンノースイソメラーゼ活
性を持つ固定化菌体カラムを調製した。

【００４７】調製したカラムに３０％フラクトース溶液
（ｐＨ７．０、４５℃）を下方より流速６０ｍｌ／時間
（ＳＶ＝０．１）で連続的に通液したところ、１ｍｌ当
たり６８ｍｇのマンノースが連続的に生産できた。

【００４８】７日間連続的に反応した後でも、１ｍｌ当
たり６５ｍｇのマンノースが生産できた。

【００４９】

【発明の効果】本発明のマンノースイソメラーゼは耐熱
性でかつ２０〜３０％の高濃度の基質の存在下でも阻害
されることなく効率的に反応が進行する優れた性質を有
するので、本発明によってはじめてマンノースを豊富に
安価に工業生産できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のマンノースイソメラーゼの至適ｐＨを
示す。

【図２】本発明のマンノースイソメラーゼの至適温度を
示す。

【図３】本発明のマンノースイソメラーゼの熱安定性を
示す。

【図４】本発明のマンノースイソメラーゼのｐＨ安定性
を示す。

【図５】本酵素をフラクトースに作用させたときのマン
ノースの生成量を示すものであり、図中で−●−はフラ
クトースが５％のとき、−○−は１０％のとき、−■−
は２０％のとき及び−□−は３０％のときの結果を示す
。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　下記の理化学的性質を有するマンノー
   スイソメラーゼ。 （ａ）作用 マンノースをフラクトースに、またフラクトースをマン
   ノースに異性化する。 （ｂ）基質特異性 Ｄ−マンノース及びＤ−リキソースに作用し、Ｄ−ラム
   ノース、Ｄ−フコース、Ｄ−グルコース、Ｄ−リボース
   、Ｄ−キシロース、Ｄ−アラビノース、Ｌ−キシロース
   、Ｌ−アラビノース、　　Ｌ−ラムノース、Ｌ−フコー
   スには実質的に作用しない。 （ｃ）至適ｐＨ ５０℃反応でｐＨ８付近。 （ｄ）至適温度 ｐＨ７．０、３０分反応で５５℃付近。 （ｅ）熱安定性 ｐＨ７．０、１０分間で、５５℃付近まで。 （ｆ）ｐＨ安定性 ２５℃、３時間でｐＨ６乃至９付近。 （ｇ）阻害 水銀イオン、鉄イオン、銀イオン、アルミニウムイオン
   およびｐ−クロロマーキュリベンゾエートで阻害される
   。
2. 【請求項２】　　シュードモナス属に属し、請求項１記
   載のマンノースイソメラーゼを生産する微生物を培養し
   、該マンノースイソメラーゼを産生せしめ、これを採取
   すること特徴とするマンノースイソメラーゼの製造法。
3. 【請求項３】　　フラクトース含有液に下記の理化学的
   性質を有するマンノースイソメラーゼを作用せしめ、得
   られるマンノース含有液を採取することを特徴とするマ
   ンノースの製造法。 （ａ）作用 マンノースをフラクトースに、またフラクトースをマン
   ノースに異性化する。 （ｂ）基質特異性 Ｄ−マンノース及びＤ−リキソースに作用し、　　Ｄ−
   ラムノース、Ｄ−フコース、Ｄ−グルコース、Ｄ−リボ
   ース、Ｄ−キシロース、Ｄ−アラビノース、Ｌ−キシロ
   ース、Ｌ−アラビノース、Ｌ−ラムノース、Ｌ−フコー
   スには実質的に作用しない。 （ｃ）至適ｐＨ ５０℃反応でｐＨ８付近。 （ｄ）至適温度 ｐＨ７．０、３０分反応で５５℃付近。 （ｅ）熱安定性 ｐＨ７．０、１０分間で、５５℃付近まで。 （ｆ）ｐＨ安定性 ２５℃、３時間でｐＨ６乃至９付近。 （ｇ）阻害 水銀イオン、鉄イオン、銀イオン、アルミニウムイオン
   およびｐ−クロロマーキュリベンゾエートで阻害される
   。
4. 【請求項４】　　シュードモナス属に属し、請求項１記
   載のマンノースイソメラーゼ生産能を有する微生物を培
   養し、集菌し、固定化したのち該固定化菌体をフラクト
   ース含有液に作用せしめ、得られるマンノース含有液を
   採取することを特徴とするマンノースの製造法。
5. 【請求項５】　　アルギニンヒドロラーゼ陽性、フェニ
   ルアラニンデアミナーゼ陰性、澱粉分解陰性、アシルア
   ミダーゼ陽性及びレバン産生能陰性の生理学的性質を有
   し、かつ５５℃１０分の耐熱性マンノースイソメラーゼ
   選択生産能を有するシュードモナス・エスピーＡＭ９５
   ８２。