JPH04229169A - ピッチ還元のための新規菌類、それらの調製及び使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、特定の所望する性質を有する新
規菌類、それらの調製及びパルプ用材のピッチ含有量を
減じるためへのそれらの使用に関する。

【０００２】ＥＰ第３８７１８７号においては、パルプ
用材のピッチ含有量を減じるためへのある木材浸透性菌
類の使用が記載される。そのような菌類は子ノウ菌類及
び不完全菌類の種類に属し、そしてサブクラスのオフィ
オストマタリス（Ｏｐｈｉｏｓｔｏｍａｔａｌｅｓ）及
びこのサブクラスに関係する不完全な状態に分類される
種々の属から選択され得る。そのようなオフィオストマ
タリス属の例は、Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ　Ｔ．Ｃ．，Ｎ
ｅｗ　Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　Ｏｐｈｉｏｓ
ｔｏｍａ　ｏｒ　Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔｉｓｓｐｅｃｉ
ｅｓ　ｗｉｔｈ　Ｌｅｐｔｏｇｒａｐｈｉｕｍ　ａｎａ
ｍｏｒｐｈｓ，　Ｍｙｃｏｔａｘｏｎ，　１９８７，　
２８：　３９〜４３及びＬｅｐｔｏｇｒａｐｈｉｕｍ　
Ｓｐｅｃｉｅｓ，　Ｔｈｅｉｒ　Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉ
ｏｎｓ，　Ｈｏｓｔｓ　ａｎｄ　Ｉｎｓｅｅｔ　Ｖｅｃ
ｔｏｒｓ，　Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ　Ｔ．Ｃ．＆　Ｃｏ
ｂｂ　Ｆ．Ｗ．，　１９８８，　ｐａｇｅｓ１〜３９，
　ＡＰＳ　ｐｒｅｓｓ，　Ｓｔ．　Ｐａｕｌ，　Ｍｉｎ
ｅｓｏｔａ　に言及される一般的な概念に関して定義さ
れるようなセラトシスチス、セラトシスチオプシス、グ
ラフィウム、レプトグラフィウム、オフィオストマ、フ
ィスロセファラ（Ｐｈｉｓｌｏｃｅｐｈａｌａ）、及び
スポロトリクス（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ）、並びにＨａ
ｗｋｓｗｏｒｔｈなど。Ａｉｎｓｗｏｒｔｈ　ａｎｄ　
Ｂｉｓｂｙ’ｓＤｉｃｔｉｏｎａｒｙ　ｏｆ　Ｆｕｎｇ
ｉ，１９８３、第７版、Ｃｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ　ｍ
ｙｃｏｌｏｇｙ　ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，　ｋｅｗ，　Ｓ
ｕｒｒｅｙ，　Ｅｎｇｌａｎｄ　に定義されるようなリ
ノクラジエラ（Ｐｈｉｎｏｃｌａｄｉｅｌｌａ）及びヒ
アロデンドロン（Ｈｙａｌｏｄｅｎｄｒｏｎ）を包含す
るが、但しこれだけには限定されない。浸透性菌類が見
出される他の属の例（子ノウ菌類としては分類されない
）は、Ｈａｕｋｓｗｏｒｔｈ、など。（前記）に言及さ
れるようなアルテルナリア（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）、
カドフォラ（Ｃａｄｏｐｈｏｒａ）、クロクジウム（Ｃ
ｈｌｏｒｉｄｉｕｍ）、ジプリジア（Ｄｉｐｌｉｄｉａ
）、ダクチレラ（Ｄａｃｔｙｌｅｌｌａ）、フラリウム
（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、ホルモデンドロン（Ｈｏｒｏｍ
ｏｄｅｎｄｒｏｎ）、ホルモネマ（Ｈｏｒｍｏｎｅｍａ
）、フィアロフォラ（Ｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａ）、スフ
ァエロプシス（Ｓｐｈａｅｒｏｐｓｉｓ）、リクコスポ
リウム（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍ）、コジナエア（
Ｃｏｄｉｎａｅａ）及びバルサ（Ｖａｌｓｏ）を包含す
るが、但しこれだけには限定されない。好ましい菌類は
、クロリジウム、グクチレラ、フィアロフォラ及びバル
サ属並びにオフィオストマタリス又はオフィオストマタ
リスに関連する不完全状態として分類される属に見出さ
れ、ここで後者の属が特に好ましい。より好ましくは、
菌類は、セラトシスチス、セラトシスチオプシス、グラ
フィウム、レプトグラフィウム及びオフィオストマ属に
見出され、この後者が最っとも好ましい。

【０００３】示された菌類種類は、いわゆる多くの染色
菌類及び特に、木材を着色し又は染色する欠点を有する
濃い染色又は浸透性染色、典型的には暗灰色又は黒青色
又は黒色の染色菌類を包含する。そのような暗色染色は
、処理されたパルプ用材から得られたパルプを漂白する
所望しない程度を高める必要性をもたらす。

【０００４】“退色性”又は低着色性の菌株である陰性
菌類が、上記所望しない効果を抑制するために単離され
て来た。しかしながら、そのような“退色性”の単離物
は一般的に、期待される使用のために必要である、非滅
菌木材上での相対的な増殖能力又は毒性を欠くことが見
出された。従って、より明るい菌類は、暗い増殖種によ
り予測されるのと同じ、パルプ用材のピッチ含有量を減
じる結果を得るために高い用量及び／又は長い処理時間
を要するであろう。メラニン生成は、菌類の暗い染色能
力及びパルプ産業における原料として使用される収穫さ
れた木材形に存在する非滅菌環境における競争増殖のそ
れらの毒性又は能力に関係される文献に示されて来た。

【０００５】特に所望される性質を有する新規菌類は、
競争増殖条件下でパルプ用材のピッチ含有量を減じるた
めのそれらの観点から子ノウ胞子単離及び選択の改良さ
れた方法により単離され得ることが見出された。

【０００６】本発明は、子ノウ菌類又は不完全菌類の種
類に属し、そしていづれかの下記特徴：１）１０日間の
増殖期間にわたって測定される場合、同じであるが、し
かし非滅菌木材基質上で親の菌類よりもより毒性に増殖
しながら、参照の親の菌類ほどに、２１日間の増殖の後
、滅菌された木材基質の明るさに影響を及ぼさない特徴
、又は ２）１０日間の増殖期間にわたって測定される場合、同
じであるが、しかし非滅菌木材基質上で親の菌類よりも
実質的に低くない毒性に増殖しながら、２１日間の増殖
の後、滅菌された木材基質上に参照の親の菌類よりも高
い明るさのレベルを生成する特徴を有する子ノウ胞子か
らの単離された子ノウ胞子又はそれから得られる子ノウ
胞子を含んで成る新規菌類株に関する。“対照の親の菌
株”とは、子ノウ胞子を生成する対合方法に関与される
１又は複数の親のいづれかの１種を意味する。

【０００７】そのような新規菌類株は：ａ）子ノウ菌類
又は不完全菌類の種類の１又は複数の菌類の培養物の単
離された子ノウ胞子； ｂ）前記子ノウ胞子から得られる菌類の生物学的に純粋
な培養物； ｃ）上記ｂ）と調和して培養物から分離された胞子及び
／又は菌子を含んで成る接種物； ｄ）前記子ノウ胞子から得られる菌類の誘導体菌類の生
物学的に純粋な培養物、ここで前記誘導体は前記子ノウ
胞子から得られる菌類のピッチ分解性木材増白効果及び
非滅菌性木材競争増殖能力を少なくとも有し；及びｅ）
上記ｄ）と調和して培養物から分離された胞子及び／又
は菌子を含んで成る接種物であり得る。

【０００８】本明細書における“誘導体”とは、菌株変
異を生成する接合、突然変異及び他の既知の技法、たと
えばホモ核型又はヘテロ核型菌類との対合及び自己対合
又は自己受精型により子ノウ胞子又はその子孫から得ら
れるいづれかの菌類を意味する。

【０００９】本発明の好ましい菌類は、オフィオストマ
　　ピリフェラム（Ｏｐｈｉｏｓｔｏｍａ　　ｐｉｌｉ
ｆｅｒｕｍ）種に属し、これらのうち種々の菌株がＰｅ
ｏｒｉａ，　Ｉｌｌｉｎｏｉｓ，　ＵＳＡ　のＮｏｒｔ
ｈｅｒｎ　Ｒｅｇｉｏｎａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅ
ｎｔｅｒ　（ＮＲＲＬ）に寄託されており、それは次の
寄託番号を有する： 　　　　　　菌　　類　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　寄託番号　　　　　　　　　　寄託
日Ｃ−１Ｄ５（Ｏ．ピリフェラム）　　　　　ＮＲＲＬ
　１８６７７　　　　　７月１７日、１９９０Ｃ−１Ｄ
８４（Ｏ．ピリフェラム）　　　ＮＲＲＬ　１８６７８
　　　　　７月１７日、１９９０Ｃ−１（Ｏ．ピリフェ
ラム）　　　　　　　　　ＮＲＲＬ　１８６９１　　　
　　７月２７日、１９９０ＴＡＢ２８（Ｏ．ピリフェラ
ム）　　　　　ＮＲＲＬ　１８６９０　　　　　７月２
３日、１９９０ＴＡＢ５１（Ｏ．ピリフェラム）　　　
　　ＮＲＲＬ　１８７５４　　　　　１月２４日、１９
９１ＷＺ５８（Ｏ．ピリフェラム）　　　　　　　ＮＲ
ＲＬ　１８７５５　　　　　１月２４日、１９９１ＷＺ
１９（Ｏ．ピリフェラム）　　　　　　　ＮＲＲＬ　１
８８４９　　　　　７月１０日、１９９１ＷＺ２４（Ｏ
．ピリフェラム）　　　　　　　ＮＲＲＬ　１８８５０
　　　　　７月１０日、１９９１

【００１０】真の青色
染色菌類ＴＡＢ２８は、増殖毒性ためのより好ましい対
照であり、そしてたとえば、ひじょうに良好な増殖ビル
レンスをすでに有する明るい（薄灰色）単離物Ｃ−１Ｄ
５との対合のために使用され得る。暗青色又は実質的に
黒の単離物ＴＡＢ５１は、薄い（実質的に白色）単離物
Ｃ−１Ｄ８４のような“退色性”の単離物との対合のた
めに使用される菌株の１種である。

【００１１】本発明により供給される特に好ましい子ノ
ウ胞子菌類は、非滅菌基質上でＴＡＢ２８と同じ増殖毒
性について少なくとも示すが、しかし滅菌された基質、
たとえばサザンイエロー松基質上に実質的に白色を増殖
する菌類である。そのような菌類は、出発菌株ＴＡＢ５
１から得られる上記ＷＺ５８及び白色子ノウ胞子株Ｃ−
１Ｄ８４を包含する。他方、Ｃ−１Ｄ８４株は、出発菌
株Ｃ−１、すなわちＶｉｒｇｉｎｉａ，　ＵＳＡ　にお
けるパルプ用材から集められたＯ．ピリフェラムの退色
性（暗灰色）単離物から得られた。

【００１２】本発明はさらに、非滅菌木材基質上に増殖
毒性を最少に有し、そしてＮＲＲＬ寄託番号第１８６９
１号の菌類よりも同じであるが滅菌された基質の白色度
にほとんど影響を与えない子ノウ菌類又は不完全菌類の
種類のホモ核型菌類の生物学的に純粋な培養物又は接種
物を包含する。この観点において、ＮＲＲＬ寄託番号第
１８６７１又は１８６７８の菌類よりも良好な性質を有
するような菌類がより好ましく、そしてＮＲＲＬ寄託番
号第１８７５５の菌類よりも良好な性質を有するような
菌類が最っとも好ましい。

【００１３】本発明の菌類の適切な生成物形は、水に再
懸濁された胞子含有発酵濃縮物及び胞子の安定性に悪影
響を与えない不活性固体キャリヤー、たとえばクレー、
たとえばカオリンの混合物の流動層乾燥により得られる
。

【００１４】本発明はまた、子ノウ菌類又は不完全菌類
の種類の１又は複数の木材浸透性ピッチ分離性親菌類の
培養物の子ノウ胞子の単離及び前記特徴の少なくとも１
つを有し、そして好ましくはまた、２１日よりも多くな
い増殖の後、少なくとも２０％、基質のピッチ含有量を
減じるために滅菌された木材基質上で増殖する基準によ
りこれらの子ノウ胞子から得られた１又は複数のホモ核
型菌類の選択を含んで成るそのような子ノウ胞子又はそ
の誘導体の調製方法にも関する。

【００１５】本発明はさらに、パルプ用材基質又は第１
段階の機械的パルプに本発明のホモ核型菌類又はそのよ
うな菌類の子孫又は突然変異体から得られた接種物を適
用し、そして菌類の増殖を可能にする条件下で前記接種
されたパルプ用材又はパルプを維持することによってパ
ルプ用材のピッチ含有量を減じるための方法も提供する
。好ましくは、そのような方法においては、未処理の対
照に比べて、１０％以上基質の白色度を低下しないで、
２１日よりも多くない増殖の後、少なくとも２５％、滅
菌された基質のピッチ含有量を減じることによって特徴
づけられる菌類が使用される。

【００１６】本発明のホモ核型菌類又はそれに由来する
ヘテロ核型菌株は、基質、たとえば精製されたパルプ用
材１ｋｇ当たり１０１０ＣＦＵ（コロニー形成単位）を
越えない接種レベルで、１４日よりも多くない増殖の後
、非滅菌基質上でのピッチ減少においてひじょうに効果
的であり、そしてさらに、そのような接種レベルでの１
０日よりも多くない増殖の後でさえ、効果的である。

【００１７】本発明によれば、子ノウ胞子は、そのよう
な子ノウ胞子が自己増殖種のメンバーから又は種メンバ
ーの接合により生じてもいづれにしても、少なくとも１
つの暗又は青染色メンバー又は代表的な退色性灰色メン
バー又はそのような種の変異体の培養物から単離され得
る。２種の菌類が接合する場合、それは２種の接合のい
づれかを意味する。複数の接合タイプを包含する複合接
合タイプが結合する場合、それは接合された菌類のいづ
れかを意味する。ほとんどの菌類は２種の接合タイプの
みを含む。従って、複数の親が子ノウ胞子の生成に関与
される場合、同じ親が問題の子ノウ胞子の個々の評価に
おけるすべての基準のために常に参照される条件下で、
スクリーニング基準が適合されるかどうかを決定するた
めに、いづれかの親が参照され得る。すべての親は通常
、個の子ノウ胞子のためにそれぞれの親の一連の評価に
おいて個々に参照されるであろう。

【００１８】問題の菌類、たとえば青（暗）染色菌類種
（それらの退色メンバーも含む）は一般的に、ヘテロ核
型と推定され、すなわちそれらは菌類の生活環を完結す
るために必要な遺伝子の十分な補体を含む個々の複数の
核を含む。ある条件下で、たとえば固体培養物、たとえ
ば寒天プレート上でそのような胞子の胞子形成を可能に
し、続いて単一核を含む胞子（子ノウ胞子）を単離し、
そして別々のコロニーとして子ノウ胞子を増殖する（ホ
モ核型菌株を生成する）ことによって、スクリーニング
するための候補体が得られる。次に単離された菌株が所
望する性質についてスクリーンされる。親菌株が自己増
殖性でない場合、それは、当業者に知られているように
、子ノウ胞子を生成するために、同じ種の適切な又は適
合する接合パートナーと接合される。子ノウ胞子を得る
ための方法におけるすべての可能性ある変法が使用され
得る。そのような子ノウ胞子の選択のためのそのような
基本的な方法は、良く知られているが、但し、本発明者
は、そのような菌株に関して改良された子ノウ胞子単離
方法を提供する。親としてその方法に入いる菌類は、所
望する性質について予備スクリーンされ得る。

【００１９】ホモ株型として増殖する菌類の場合におけ
るように、ホモ核型単離物及びヘテロ核型種は、子ノウ
胞子培養物を生成するために既知の技法により接合され
得る。得られるホモ核型菌類は、適切な接合タイプが示
される条件下で、選択のための子ノウ胞子を供給するた
めに、他の種のメンバー、たとえばその親菌株と接合さ
れ得る。そのような子ノウ胞子単離物は、他の子ノウ胞
子単離物又は野生型と接合する。従って、所望する改良
された性質の他の子ノウ胞子を得、そして所望の場合、
接合により新規の子ノウ胞子を連続して生成するために
、その初めに得られた子ノウ胞子を用いることは、本発
明の範囲内である。

【００２０】本発明の方法は、個々の菌株又は変異体が
自己増殖性であろうとなかろうと、既知の技法により決
定される場合、白色へ黒色のすべての色の菌類に適用さ
れ得る。純粋な黒又は青染色性（退色性でない）菌株が
研究される予定である場合（所望には、１つのパートナ
ーは純粋な青染色であり、そして他のパートナーは薄い
青染色メンバーである）、接合方法をまず使用すること
が一般的に好ましい。接合の前、所望には、基本的な方
法が、接合のための子ノウ胞子選択単離物を得るために
自己増殖性菌株と共に使用され得る。その後、その得ら
れた単離物はまた、接合にゆだねられ、ここでそれは適
切な接合タイプを有する。

【００２１】薄い又は白色の増殖性子ノウ胞子単離がさ
らに接合される場合、薄い子ノウ胞子菌株よりも暗く且
つより毒性である菌株とそれとを接合することが好まし
い。

【００２２】従って、本発明は、個々の子ノウ胞子単離
物及びそれらから得られた菌類のみならず、またそれか
ら得られる追加の誘導体のすべて、特に親子ノウ胞子の
所望する性質のレベルを少なくとも含むものを包含する
。最終的に選択された子ノウ胞子菌類は、ピッチ分解に
使用するためのヘテロ核型菌類を供給するために接合さ
れ得るが、しかしこれは、多くのヘテロ核型が、反復さ
れた増殖又は大規模な増殖の間、１又は複数の所望する
性質において不安定になる傾向があることが見出される
場合、好ましくない。子ノウ胞子はまた、ヒト誘発性突
然変異により突然変異誘発され、他の所望する誘導体が
供給され、そして親子ノウ胞子の所望する改良された性
質を少なくとも実質的に具体化するものは、また本発明
に包含される。従って、本発明は、ａ）子ノウ胞子、ｂ
）子ノウ胞子の突然変異体及びａ）及びｂ）の子孫を包
含する。

【００２３】子ノウ胞子の生成、一般的な分離、分散及
び個々の分離方法及びそれらが生成する菌類の増殖及び
単離は良く知れている。代表的な文献は、たとえばＵｐ
ａｄｈｙａｙ，　Ｈ．Ｐ．（１９８１），　Ａ　Ｍｏｎ
ｏｇｒａｐｈ　ｏｆ　Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔｉｓ　ａｎ
ｄ　Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔｉｏｐｓｉｓ　；　Ｕｎｉｖ
ｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｇｅｏｒｇｉａ　Ｐｒｅｓｓ，　
Ａｔｈｅｎｓ，２８　〜２９ページである。Ｏｐｈｉｏ
ｓｔｏｍａの子ノウ胞子についての特定の参照を有する
出版物は、Ｂｒａｓｉｅｒ，　Ｃ．Ｍ．　及びＪ．Ｎ．
Ｇｉｂｂｓ（１９７６），　Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ　
ｏｆ　Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　Ｃｕｌｔ
ｕｒａｌ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ　ｉｎ　Ｃｅｒａｔｏ
ｃｙｓｔｉｓ　ｕｌｍｉ　：　Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉ
ｏｎ　ｏｆ　Ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ　ａｎｄ　Ｎｏｎ−
Ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ　Ｓｔｒａｉｎｓ　；　Ａｎｎ．
　Ａｐｐｌ．　Ｂｉｏｌ．８３，３１〜３７である。一
般的に、親菌類は、子ノウ胞子生成が十分に完全である
段階に培養され、そして塊状物又は集合体としての子ノ
ウ胞子が、無菌の解剖用針により被子器の上部で粘性の
疎水性子ノウ胞子含有材料のすべて又は１又は複数の部
分をつつき、そして特殊化された胞子懸濁培地、たとえ
ばその疎水性材料（胞子を含まない）を懸濁培地に溶解
するであろうピネンに移すことによって、一般的に分離
され又は回収され得るように、子ノウ胞子が菌類塊状物
から十分に生成され又は分泌される。次に、子ノウ胞子
を含む培地（又はその一部）が希釈され、そしてその希
釈溶液は、個々の子ノウ胞子から生成される菌類の評価
のための接種物を供給するために、個々の培地、たとえ
ば液体培地においての追加の増殖のために取られ又は単
離され得る別々の又は個々の菌類コロニーへの子ノウ胞
子の増殖を可能にするような態様で、固相菌類増殖の進
行のための適切な増殖培地を含むプレート上に分散され
る。

【００２４】本発明の観点として、対象のピッチ分解性
菌類の生存性子ノウ胞子のひじょうに高く且つ適切な計
数が、胞子を含まない疎水性材料を油中に効果的に溶解
し、そして菌類により消費され得る（食物又は炭素源と
して）非毒性油、好ましくは植物油、たとえばコーン油
における菌類培養物から回収されるにつれてそれらの疎
水性キャリヤーに子ノウ胞子を取り又は分散し、そして
次に、そのような油を分散するための多くの既知のタイ
プのもののいづれかであり得る非毒性（菌類又はその胞
子に対して）油分散剤、たとえば界面活性剤、たとえば
良く知られているＴｒｉｔｏｎＲ　×１００により子ノ
ウ胞子含有油を処理することによって得られることが見
出された。分散剤により処理された油からの塗布又はプ
レーチングは、前記油の多くの別々の生存性子ノウ胞子
含有液滴をもたらし、そしてさらに、その油は、消費さ
れ、そして菌類が増殖し、容易に回収され得る、そして
さらに評価のために培養され得る別々の菌類コロニーを
生成するにつれて、プレートから除去される。

【００２５】本発明の基準に従ってのホモ核型菌類の選
択は、次のとおりに行なわれる：基質が、切断後すぐに
７日間、室温で貯蔵された新しく切断された丸太から得
られ、そして次に、敏速に評価にゆだねられる木材チッ
プに製造される（又は５℃で短期間貯蔵される）。その
ような７日後、単離されたもの以外のもの又は生来の菌
類、たとえば青染色株、すなわちパフラスポラ（ｐａｐ
ｕｌａｓｐｏｒａ）及びリリコダーマ（ｔｒｉｃｈｏｄ
ｅｒｍａ）のひじょうに少々の眼に見える増殖を示す木
材チップは拒絶される。そのような基質は、節を有さな
いものとして選択される。それぞれ同じ大きさ（重量）
で、２００〜４００ｇの重量の個々のサンプルロットが
、その収集物から取られるであろう。滅菌されるべきサ
ンプルが、オートクレーブ中において１２０℃で４５分
間加熱される。基質の接種は、チップのたった１０〜３
０％が初めに実際に接触されても、できるだけ多くの個
々の木材片を接触するために適合される態様で行なわれ
るであろう。木材チップ基質が、良好な大きさの透明な
プラスチックバックに置かれ、そしてバックの中のチッ
プは平らな平面上に存在し、そして広げられる。接種物
は、個々のチップ上にたった１滴を添加することによっ
てスポイトにより適用されるであろう。次にバッグが密
封され、そしてチップは１０秒間十分に混合／振盪され
、他のチップへの接触物の分配が行なわれる。次に、バ
ッグはしっかりと締められ、又は必要なら、パイル様堆
積でのチップ間の良好な接触を有するようにチップのま
わりでさらに締めつけられる。すべての接種された基質
は、暗室に貯蔵され、そして次に評価され、ここで貯蔵
は上記のように室温で行なわれる。局部的な又は地域的
な基礎に基づいて最良の菌類を得るためには、子ノウ胞
子由来の菌類が実質的な用途に使用されるであろうこと
に関して、同じ種の木材の切断され又は死んだ木材又は
他のパルプ用材形から親菌類を単離し又は誘導すること
が好ましくは、又は他方、親が得られ又は誘導される使
用目的の木材種タイプの基質上での評価を行なうことが
好ましい。親菌類の木材種源が未知である場合、いくつ
かの異なった木材種及び親菌株種が文献から感染するこ
とが知られている種類の木材種からの滅菌性及び非滅菌
性木材チップ上での予備評価が行なわれ、そしてその評
価は、親菌株がより激しい増殖を示すことに関する木材
種上で行なわれるであろう。多くの現在知られているパ
ルプ用材の源のいづれか又は標的の基質木材種上でいづ
れか参照の親に対する上記基準を満たす子ノウ胞子由来
の菌類は新規であり、そして本発明と調和して有用であ
る。この基準は、基質が同じ木材種及び親菌株が局部的
に単離された種類の木材である場合、子ノウ胞子菌類に
より最良に適合される。オフィオストマ及び針葉樹であ
る松に感染する他の典型的な青染色株のためには、アメ
リカ南部のイエローパイン（黄色松）に対する評価が用
いられ得る。

【００２６】ピッチ減少の基準に関する評価は、塩化メ
チレンにより標準のＴＡＰＰＩ　　Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ
　　Ｔ２０４　　ＯＳ−７６に従って決定され、そして
天然で非滅菌基質を感染する他の生物の影響を評価する
ために滅菌性基質上で行なわれる。一般的に、２１日で
少なくとも２０％のピッチ低下がより適切な候補体のた
めに所望されるであろう。少なくとも２５％、特に少な
くとも３０％の低下が一般的に、好ましい候補体を示す
。基準が２１日で適合する場合、評価の反復及び１４日
で少なくとも２０％、２５％又は３０％のピッチ低下の
レベルの達成が通常、より好ましい候補体を示すであろ
う。

【００２７】特に親が中ぐらいから暗灰色のものであり
、そして基準が適合する場合、選択又は初期選択のため
の子ノウ胞子の１つの好ましいグループは、未処理の滅
菌された対照に比べて、１０％以上、滅菌された基質の
白色度レベルを下げないで、２１日よりも多くない日で
少なくとも２５％、基質中のピッチ含有量を減じるであ
ろう子ノウ胞子菌類を生成するグループであろう。

【００２８】基質の白色度は、決定されたゲージののこ
屑のような標準化された物質に基づいて決定され、そし
て白色度メーター、たとえばＲｈｏｔｏｖｏｌｔＲｅｆ
ｌｅｃｔｉｏｎメーターに基づいて測定される。白色度
に関する評価は所望により、天然において非滅菌性基質
を感染する生物の影響を再び排除し、そして候補体の色
の影響のより絶対的な評価を得るために、滅菌性基質上
でのスクリーニング目的のために行なわれる。これらの
評価はまた、２１日間の増殖の後、行なわれるであろう
。白色度における改良が臨界である場合、少なくとも約
５％の改良が通常、誤差を減じ、そして統計学的な信用
性を提供するために要求される。他方、得られた改良の
程度は、相当に変化する。中ぐらいの色〜暗色の菌類が
親として包含される場合、少なくとも１０％、１５％、
２０％、２５％又はそれ以上の程度の改良が実験され得
る。より薄い親が関与される場合、白色度について選択
される前の子ノウ胞子単離物の改良を要する場合のよう
に、より低い程度の改良が実験され得る。もちろん、白
色度の改良は、選択が増殖毒性に基づいて行なわれる予
定である場合、まったく実現され得ず、そして基準にも
適合しない。

【００２９】基準１）及び２）に従っての増殖毒性決定
は、非滅菌基質上で行なわれ、そして本発明により供給
される所望の菌類に影響を及ぼすために、接種後１０日
で行なわれるであろう。そのような決定は、次の分節に
記載されるように、参照される親の増殖に比べての候補
体の増殖を示す基質又は木材チップの百分率に基づいて
行なわれる。そのような決定は百分率に基づいて行なわ
れ、そして毒性の改良が満足する基準である場合、少な
くとも約１０％ポイントの改良（すなわち８０％〜９０
％）が通常、誤差を減じ、そして統計学的な信用性を提
供するために要求される。決定が、毒性に基づいて行な
われ、そして参照の親及び候補体菌類の両者が８０％又
はそれ以上の増殖を示す場合、１０１０ＣＦＵ　の評価
／基準投与量は、参照の親の増殖が７０％以下、たとえ
ば３６〜６５％になるまで減じられる。

【００３０】菌類の増殖又は毒性が菌類の間での比較の
ために測定され、そして特にことわらない限り、すべて
の可能性ある条件はその比較のためにできるだけ同一に
なされるであろう。増殖又は毒性は、比較的単純な眼で
の観察手段により決定され、そして１０日の試験期間の
最後で、すぐに行なわれる。その手段は、通常の読み取
り距離で肉眼により個々の木材チップ又は基質上で観察
され、又は確かめられ得る増殖の色のカテゴリーに基づ
かれている。１つの色のカテゴリー、典型的には最っと
も薄い色は、お互い比較される場合、子ノウ胞子候補体
又は最っとも薄く増殖する候補体の増殖の色を示すであ
ろう。白色（ｗ．）、灰色（ｇ．）及び黒色（ｂ．）の
カテゴリー及び白色（ｗ．）、薄灰色（ｌ．ｇ．）、中
ぐらいの灰色（ｇ．）、暗灰色（ｄ．ｇ．）及び黒色（
ｂ．）の５種のカテゴリーが、その参照の親菌株又はそ
のような候補体の数に比較される子ノウ胞子候補体の色
にほとんど依存して使用され得る。子ノウ胞子候補体の
色の成長を有することが観察されたチップの数は、下記
に報告される評価に使用されるように実質的に４種のカ
テゴリーに合計され、すなわち１つのプラス（＋）は、
約２５％のチップが特別な子ノウ胞子候補体の増殖を示
す場合に割り当てられ、２つのプラス（＋＋）は、約５
０％のチップの増殖の場合に示され、３つのプラス（＋
＋＋）は、約７０％のチップの増殖の場合に示され、そ
して４つのプラス（＋＋＋＋）は、約１００％のチップ
の増殖が示される場合に示される。中間百分率の約５％
点以内の百分率、たとえば５８％が６２．５％の５％ポ
イント以内である場合、プラスが斜線印の後に加えられ
、そして低い等級、たとえば（＋＋／＋）又は（＋＋／
＋＋＋）が付与される。類似する態様において、第１レ
ベルの等級以下の中間等級は（＋／−）により示される
。類似する合計が参照されるべき親のために行なわれる
であろう。必要な場合、上記の基準に比較してより正確
な評価を行なうためには、実際の百分率が測定され、そ
してその百分率が比較される。しかしながら、限界の誤
差がヒトでの誤差、薄い増殖を確かめる高い困難性及び
本発明の目的の実質的な達成を可能にするであろう。そ
のような限界は１０％ポイントであり、木材チップの７
８％上で増殖することが見出された子ノウ胞子候補体は
、８８％の百分率を付与する親の菌類と等しい増殖能力
又は毒性のものとして見なされるであろう。非滅菌性処
理チップは通常、他の生物、通常黒着色菌類のチップの
他の領域における増殖を示し、そしてそのようなバック
グラウンド増殖の着色が別々に記録され得る。そのよう
なバックグラウンド増殖は、行なわれる評価を変えない
が、しかし天然においてパルプ用材を感染せしめた菌類
の存在を示す。

【００３１】基準１）及び２）に従っての選択は、ある
子ノウ胞子又はそれらの誘導体、所望にはまた、ホモ核
型誘導体が非滅菌基質上での白色度及び毒性に影響を及
ぼす特に好ましい特徴を満たす場合においては省かれ得
る。特に、所望の新規菌類は、ピッチ低下基準が、上記
のように２１日後、滅菌された（及び滅菌されていない
）基質上で満たされ、そして１４日後の対照の非滅菌性
基質が、滅菌された未処理対照に比べて、その白色度が
少なくとも１０％、特に少なくとも２０％減じられる天
然の生物により十分に影響され、さらに子ノウ胞子由来
の菌類が、未処理の非滅菌性対照の白色度レベルと少な
くとも同じである白色度レベルを非滅菌基質上での前記
１４日目の最後でもたらす場合、本発明により供給され
る。そのような菌類は、従来の菌類に比べて新規である
ことが示される。特に所望されるそのような菌類の種類
は、未処理の非滅菌性対照に比べて、少なくとも約５％
又はそれ以上、白色度を実際に高めるものである。その
ような菌類の好ましいサブクラスは、１０１０ＣＦＵ　
／ｋｇ以下の投与量で、特に少なくとも１０９　を越え
ない投与量で及び特に１０８　を越えない投与量で、少
なくとも１種の木材種又は種類上にそのような所望する
結果をもたらすものである。

【００３２】本発明の菌類は、ＥＰ第３８７１８７号に
記載されるようにパルプ用材及び第１段階の機械的パル
プのピッチ含有量を減じるために使用され得る。本発明
に使用されるような用語“パルプ用材”とは、紙、厚紙
、セルロース性製品、たとえばビスコースの製造に使用
される木性材料のいづれか収穫された（切断された）形
を意味し、そして木材、丸太、木材チップ、のこ屑及び
同様のもののような形を包含する。用語“精製されたパ
ルプ用材”とは、高い表面積の多重性、たとえば小片、
たとえば木材チップ及びのこ屑（パルプ工程中に導入で
きる）を得るために、完全なパルプ用材形、たとえば丸
太への機械的及び／又は剪断力の適用から得られるパル
プ用材を意味する。用語“第１段階の機械的パルプ”と
は、パルプ形成の前、基質のリグニン含有率が６０％又
はそれ以上である、機械的パルプ処理工程から単離され
るパルプを意味する。

【００３３】基本的に、少なくとも１種の菌類の接種物
が基質に適用され、そしてその接種された基質は、菌類
の増殖温度、たとえば２〜４３℃、好ましくは７〜３４
℃で、基質のピッチ含有量を低めるために十分な時間、
たとえば７〜１４日間、維持される。精製されたパルプ
用材は、所望には堆積物じゅうに典型的に分配されるで
あろう接種の後、一般的にパイルに堆積される。そのよ
うな堆積は、典型的な木材チップパイルの形で又は容器
又は密閉された空間、たとえばサイロ、貨車、般又は同
様のものの中で存在し、輸送の間にピッチの低下を可能
にされる。材木、丸太及び同様のものは、そのような基
質、たとえば材木又は丸太の主要部分での増殖を誘発す
る多くの態様で処理され得、縦に切り目を付けられ、そ
してその切り目に接種物が適用され得、又はさらに切断
された端に接種され得る。第１段階の機械的パルプは、
滅菌された基質であり、そして本発明は一般的に、滅菌
された及び非滅菌性基質の両者に適用され得る。しかし
ながら、特定の及び所望する利点は、もちろん、本発明
が非滅菌性パルプ用材、たとえば非滅菌性の精製された
パルプ用材により使用される場合、実現される。本発明
の実施において適用される投与量は、精製されたパルプ
用材の基質のｋｇ当り１０１０ＣＦＵ　を越えず、そし
て好ましくは１０９ＣＦＵ／ｋｇを越えず、そしてより
低い投与量がより好ましい態様で使用され得る。

【００３４】本発明によれば、親、すなわちピッチ分解
性親菌類に関して負の白色度効果を減じながら、非滅菌
性木材上で効果的な接種レベルで急速に増殖する菌類を
得ることが可能であるだけでなく、また、特定の好まし
い目的及び態様によれば、木材基質の白色度が、未処理
の非滅菌性対照（典型的な市販の木材チップパイルを表
わす）に対して最少にもたらされ、又は実質的に影響さ
れないだけでなく、またそのような対照と比較してさら
に増強され得ることがまた示されている。そのような特
に好ましい菌類及び非滅菌性基質、たとえば着色性又は
染色性菌類により適度に又はさらにそれ以上に天然にお
いて感染され得るものの上でのそれらの使用は高い興味
の実用性のものとして見なされる。なぜならば、ピッチ
は、その付随する費用の節約と共に減じられるのみなら
ず、また処理された基質の白色度が、通常パルプ処理工
程に入る場合、未処理のパルプ用材に比較してさらに増
強され得るからである。そのような白色度の利点は、特
に好ましい菌類の菌糸からの残存する少程度の薄い又は
実質的に白い残留物によるものであるが、そのような利
点は、そのような産物が処理期間、たとえば１４日間に
わたって増殖する位置に増殖し又は他の着色菌類又は生
物を排除する好ましい菌類の能力により十分に供給され
ることが示される。そのような特に好ましい菌類により
処理される非滅菌パルプ用材はまた、新規であるものと
して見なされる。なぜならば，減じられた毒性又は競争
増殖性（それら自体の着色効果に比べて）を有する他の
ひじょうに薄く増殖する又は退色性の菌類により処理さ
れたそのような基質は、比較的多量の投与量で接種され
る場合でさえ、天然の着色菌類又は他の生物が拡散せず
、そして白色度に対して肯定的に影響を及ぼすためにそ
の天然の着色菌類の増殖を十分に排除するために不十分
に競争する位置上で十分に作用するであろうからである
。そのような新規のパルプ用材及びそれらを生成する菌
類は、非滅菌性対照（未処理）のサンプルは、その白色
度が処理期間にわたって滅菌された未処理のサンプルに
対して室温で少なくとも１０％減じられる十分な感染を
示し、ところが新規の菌類処理基質は、処理期間、たと
えば１４日後、前記非滅菌性で且つ未処理のパルプ用材
対照の白色度レベルに少なくとも等しいか又はそれ以上
の白色レベルを有する場合、着色菌類又は生物による天
然の感染に対して定義され得る。非滅菌性の未処理対照
サンプルに比べて改良された白色度を有するそれらの菌
類処理基質は特に、機械的なパルプ製品の製造において
、追加の加工のための特に所望される生成物であろう。

【００３５】本発明はさらに次の例により例示され、こ
こでＮＲＲＬ寄託番号により表に示されたような好まし
い種Ｏ．ピリフェラムに属する菌類が使用される。

【００３６】

【実施例】例１ 子ノウ胞子の単離 菌類Ｃ−１（Ｏ．ピリフェラムＮＲＲＬ１８６９１）を
滅菌性木材上で２〜４週間増殖し、被子器の生成を可能
にする。次に、子ノウ胞子液滴を、滅菌した解剖用針に
より突き、そして４００μＬのコーン油に移す。そのサ
ンプルを攪拌し、均質の胞子懸濁液を形成する。この懸
濁液を、顕微鏡下で血球計チャンバー中において試験し
、そして１×１０６　個の細胞／ｍＬを含むことが見出
され、このうち９０〜９５％が単一の子ノウ胞子であっ
た。残る５〜１０％の菌類は菌糸フラグメント及び群生
の子ノウ胞子から成った。

【００３７】子ノウ胞子を滅菌されたコーン油に１００
倍に希釈し、次に滅菌された１０％のＴｒｉｔｏｎ×１
００において１０及び１００倍に２種の別々の追加の希
釈溶液を、お互いの比較のために製造した。２種の希釈
溶液の１００μＬアリコートを酵母麦芽寒天上に置き、
プレート当たり１００及び１０個の胞子のプレート密度
を達成した。Ｔｒｉｔｏｎ×１００を用いて、コーン油
を分散し、そして寒天の表面上での油液滴の再凝集を妨
げた。Ｔｒｉｔｏｎ×１００は液体培養物においてこの
菌類に対して非毒性であるが、しかし油／界面活性剤の
ミセルにおける胞子の取込みがそれらの生殖にいかに影
響を及ぼすかが知られていないので、一組の希釈溶液が
界面活性剤なしに製造され、そして比較のためにプレー
トされた。

【００３８】菌類が増殖するにつれて、プレートから油
を除去した。胞子が界面活性剤なしにプレートされたこ
れらのプレート上で、コロニーがその油の上部で浮遊し
、そして密集する傾向があった。油／界面活性剤の存在
下で、コロニーは別々のひじょうに密集したまま存続す
るが、しかし採集できる大きさになるには遅かった。 油コロニーは、４日目までに採集するのに十分な大きさ
であり、そして油／界面活性剤コロニーは７日までに十
分な大きさであった。

【００３９】油／界面活性剤法を用いて観察される発芽
の毒性又は防止は存在しなかった。界面活性剤の不在下
で観察される低い生存性は、油表面上でのコロニー又は
発芽する胞子の凝集により引き起こされ、下記表を参照
のこと。

【００４０】

【表１】

【００４１】個々のコロニーが再ストリークするのに十
分な大きさである場合、低い希釈溶液のプレートからの
コロニーのすべてを、大きさ又は着色性にもかかわらず
、貯蔵及び菌糸生成（ホモ核型状態）についての試験の
ために新鮮な酵母麦芽寒天に移した。

【００４２】例２ ホモ核型体のためのスクリーニング及び予備選択Ｃ−１
子ノウ胞子単離物を、できるだけ多くのヘテロ核型体を
排除し、そしてホモ核型体の生成方法としての油／界面
活性剤単離の効能を決定するためにスクリーンした。成
熟した菌糸含有子ノウ胞子の生成は、ホモ核型株が有さ
ない２種の相補的な接合型を必要とし；ヘテロ核型株は
両因子を有する（すなわち自己増殖性である）。 ホモ核型体は成熟していない菌糸（プロト菌糸と呼ばれ
る）を生成するが、ヘテロ核型体は単に成熟した菌糸の
みを生成することができる。従って、ヘテロ核型株は菌
糸生成により検出され得るが、しかし菌糸形成の不在が
ホモ核型株であるということはわかっていない。

【００４３】スクリーニングを、木材チップ寒天上に個
々の単離物をストリークし、そして２か月間にわたって
菌糸生成をモニターするために行なった。スクリーンさ
れた１０５個のＣ−１単離物のうちたった９個が菌糸を
生成し、そして廃棄した。次の表は、菌糸を生成せず、
そしてホモ核型株であると推測される残存するＣ−１単
離物の詳細を示す。単離物は、木材チップ寒天上での増
殖の色に従ってグループ分けされた。

【００４４】

【表２】

【００４５】Ｃ−１から得られた９６個の推定上のホモ
核型体は、木材チップ寒天上で良好な有効範囲を示した
。薄いＣ−１単離物のすべて（及び他のも）を、追加の
研究のためにこれらの単離物のより毒性物を選択するた
めに非滅菌性及び滅菌性木材チップ上での増殖速度につ
いて予備的にスクリーンした。

【００４６】例３ より毒性の薄いグループ候補体の増殖スクリーニングよ
り毒性の候補体菌類のそれぞれを、２００ｒｐｍ　で攪
拌しながら、室温で７２時間（７２時間はいくつかの菌
株の遅い増殖速度のために選択された）、酵母麦芽培地
中で培養した。細胞を、遠心分離により収穫し、そして
生存できる約１×１０８　個の　ＣＦＵ／ｍＬの濃度に
滅菌水に再懸濁した。

【００４７】滅菌性（オートクレーブされた）及び非滅
菌性（チップ形成後１週以下のチップが使用の前、５℃
で貯蔵された）サザンイエロー松チップを、菌類の懸濁
液１ｍＬにより２通り接種した。

【００４８】接種されたチップを暗室中において室温で
貯蔵した。増殖を１０日間にわたって、時間と共にモニ
ターした。下記表においては、薄い色のグループにおけ
る５種の良好な増殖単離物の評価のみが報告された。略
語は次の意味を有する： ｗ．＝　　白色　　　　　　　　　　　　　　＋／−＝
２５％以下の増殖ｇ．＝　　（中程度）灰色　　　　＋
＝２５％の増殖ｌ．ｇ．＝薄灰色　　　　　　　　　　
＋＋＝５０％の増殖ｄ．ｇ．＝暗灰色　　　　　　　　
　　＋＋＋＝７５％の増殖ｂ．＝黒色　　　　　　　　
　　　　　　　　＋＋＋＋＝１００％の増殖

【００４９
】

【表３】

【００５０】上記ホモ核型単離物は、広範囲の毒性を示
し、そして少なくともＣ−１Ｄ５及びＣ−１Ｄ８４は本
発明の基準を満たすことを示した。

【００５１】例４ ピッチ減少及び白色度効果 菌類を、２００ｒｐｍ　で攪拌しながら、室温で７２時
間、酵母麦芽培地中で培養した。細胞（約９５％の幼芽
胞子／５％菌子）を遠心分離により収穫し、そして約１
×１０８　個の　ＣＦＵ／ｍＬの濃度に滅菌水中に再懸
濁した。滅菌されたサザンイエロー松チップ１００ｇを
含む５個のバッグを、菌類懸濁液１．０ｍＬにより接種
した。その接種されたバッグ及び対照のバッグを、暗室
において室温で３週間、インキュベートした。５個のう
ち４個のバッグ（個々のバッグは一組で存在する）を、
ピッチ含有量について分析した。５番目のバッグは白色
度について測定された。結果は下記表に与えられる。

【００５２】

【表４】

【００５３】上記試験された菌株のすべては、有意なピ
ッチ低下を示した。白色度損失の程度は、木材上での菌
類の増殖の色に依存した。試験された２種の薄い菌株Ｃ
−１Ｄ５及びＣ−１Ｄ８４は、親のＣ−１菌類よりも相
当に良好な白色度を示した。Ｃ−１Ｄ８４は、所望には
、未処理の対照よりも良好な白色度を有することが示さ
れた。

【００５４】多くの退色性子ノウ胞子単離物を、野外条
件（非滅菌性木材チップ）下で増殖について試験した。 菌類株を、手動噴霧機により、１０トンのパイルを形成
するために、切り出し後２日目の丸太から調製された非
滅菌性木材チップ上に接種した。天然のＯ．ピリフェラ
ム青染色株が耐容性である場所から非滅菌性チップを得
、そしてそのような青染色株により天然で感染されるこ
とに基づいて選択された。そのパイルを周囲条件下で野
外で２週間インキュベートした。次にそのパイルを取り
こわし、そして菌類の増殖の量を記録した。下記表は、
手動噴霧機により接種された退色性菌株を比較するこの
野外試験の結果を要約する。

【００５５】

【表５】

【００５６】適用される用量は、木材チップｋｇ当たり
コロニー形成単位（ＣＦＵ）　として表わされる。バッ
クグラウンドの増殖は、木材にすでに存在する黒／暗色
の菌類（又は黒菌株ＴＡＢ２８の場合における接種物の
）の増殖の表示である。

【００５７】さらに、Ｃ−１Ｄ５を、インライン式噴霧
機により、切り出し後３週間目の丸太から調製されたチ
ップ上に接種し、そして１０トンのパイル上での増殖の
結果が下記に与えられる（それはまた、菌類によるバッ
クグラウンド増殖の抑制を示す）。

【００５８】

【表６】

【００５９】Ｃ−１Ｄ５及びＣ−１Ｄ８４の両者は、非
滅菌性チップ上でのひじょうに良好な増殖及びまた、投
与量／応答の関係を示した。

【００６０】良好なピッチ低下及び実質的に不在の負の
白色度影響の他に、上記結果は、選択された単離物Ｃ−
１Ｄ８４及びＣ−１Ｄ５が木材チップパイル又は他のパ
ルプ用材形において遭遇される高い競争条件下でひじょ
うに十分に増殖し、そして特に、ひじょうに効果的なＴ
ＡＢ２８と同じ程度の接種物投与量でそれらの所望する
効果を生成することを示す。そのような目的はこれらの
２種の種により満たされるのみならず、またその結果は
、そのようなパルプ用材を天然で感染する菌類の影響を
一部克服し又は置換するためにそのような菌類の可能性
において追加の及び最っとも有意な利点を示し、それに
よって対照又は従来取扱われて来たパルプ用材よりも実
質的にさらに薄いパルプ用材をもたらし、従って、たと
えば機械的パルプに関して、特に適用される場合、白色
度を強めるために使用される次の処理の削減を可能にす
る。

【００６１】例５ ＷＺ１９，ＷＺ２４及びＷＺ５８の生成白に増殖する子
ノウ胞子菌類Ｃ−１Ｄ８４及び黒に増殖する野生型のＯ
．ピリフェラム菌類ＴＡＢ５１を、木材チップ寒天プレ
ートの同じ部分上をそれぞれの酵母麦芽プレートからの
培養物をストリークし、そして次にそのストリークされ
た培養プレートを、パラフィンによる密封後、ベンチ上
で４週間インキュベートすることによって一緒に接合せ
しめた。その接合からの子ノウ胞子を単離し、そして上
記方法により回収し（油／界面活性剤単離）、そして次
に約９３個の単離物を増殖し、そして色及び増殖毒性に
ついて前もって評価した。３種の候補体、ＷＺ１９，Ｗ
Ｚ２４及びＷＺ５８を、それらの白色度及び卓越した増
殖性質に基づいて追加の評価のために選択した（これら
の３種のすべては、増殖毒性においてＴＡＢ５１よりも
卓越するＴＡＢ２８に類似する増殖毒性を示した）。Ｔ
ＡＢ５１は、木材基質、たとえば滅菌された又は非滅菌
性のサザンイエロー松上で増殖する場合、典型的な青染
色菌類の暗青色又は実質的に黒色を示す。

【００６２】次にそれらの３種の候補体を増殖し、接種
物を生成し、そして比較のために他のものと一緒に、標
題のより毒性の薄いグループ候補体の増殖スクリーニン
グ（Ｇｒｏｗｔｈ　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　Ｍｏｒ
ｅ　Ｖｉｒｕｌｅｎｔ　Ｌｉｇｈｔ　Ｇｒｏｕｐ　Ｃａ
ｎｄｉｄａｔｅｓ）　下で上記のようにして増殖につい
て評価し、サザンイエロー松の非滅菌性木材チップに対
する結果は下記に示される。

【００６３】

【表７】

【００６４】次にこれらの３種の候補体を、標題のピッ
チ減少及び白色度効果（Ｐｉｔｃｈ　Ｒｅｄｕｃｔｉｏ
ｎ　ａｎｄ　Ｂｒｉｇｈｔｎｅｓｓ　Ｅｆｆｅｃｔｓ）
　下に記載される方法に従って、ピッチ減少及び白色度
効果について評価した（但し、処理された基質は２週間
だけインキュベートされた）。サザンイエロー松の滅菌
性木材チップに対する結果は下記に示される。

【００６５】

【表８】

【００６６】例６ 野外条件下で非滅菌性木材チップ上での増殖菌類株を、
４０％のよく枯らした丸太（切り出し後２〜３カ月）及
び６０％の新鮮な木材（切り出し後、約３週間）の混合
物から調製された非滅菌性サザンイエロー松木材チップ
上に手動性噴霧機により接種し、そして１０トンのチッ
プパイルで貯蔵した。チップを、それらがチップ置場の
加熱プラットフォーム上に前端ペイローダーから降され
る場合、２×１０１１ＣＦＵ　／トン（約９．９×１０
７　ＣＦＵ　／ｋｇ）の投与量で接種した。加熱プラッ
トフォームは、２×４の厚板から構成されるフレームを
支持する２フィートの高さの炭がらブロック壁から成る
。強力な亀甲網を２×４の厚板にステープルで留め、木
材チップのための支持体を供給した。サーモスタット制
御の強制空気ヒーターを、個々の加熱プラットフォーム
下に置き、そして２４℃で空気温度を設定した。パイル
をこれらの条件下で１０日間インキュベートした。次に
パイルを評価のために分解した。パイルの内部を通して
の菌類の増殖の平均的量を記録した。サンプルをパイル
の中央から取り、そしてピッチ含有量及び白色度につい
て分析した。結果は下記に示される。

【００６７】

【表９】

【００６８】最良の増殖速度を示す菌株、ＷＺ５８はま
た、ピッチレベルを最少値に減じた。バックグラウンド
増殖は、木材上にすでに存在する黒／暗色菌類の増殖の
表示である。

【００６９】例７ 発酵及び配合 ＷＺ−５８の細胞（幼芽胞子）を、細胞密度が３×１０
９　個の細胞／ｍＬになるまで、１Ｌ当たり２００ｇの
麦芽抽出物及び１Ｌ当たり２０ｇの酵母抽出物を含む培
地中で２５℃で増殖した（２０ＬのＣｈｅｍａｐ発酵器
における１０Ｌの体積の培地）。発酵培地（約３６〜４
８時間）を、空気２体積／培地体積／分で空気付与した
（飽和近くの酸素レベル、すなわち発酵の間、いづれの
時点でも制限しない）。

【００７０】発酵器中で増殖するバイオマスを、遠心分
離により収穫し、そしてそのペレット化された細胞を、
湿潤バイオマス（約２０％の固形分）１部：乾燥カオリ
ンクレー２部の比でクレート共に混合した。バイオマス
：クレーの混合物の湿分は２５〜３０％の範囲である。 その流動性混合物を、Ａｅｒｕｍａｔｉｃｓ流動層乾燥
器中に入れ、そして周囲温度条件下で乾燥せしめ、５〜
１０％の最終湿分を得た。出口の空気温度は３５℃以下
に維持される。乾燥時間は２０〜４０分である。流動層
乾燥材料は、生存性及び非滅菌性木材チップ上での増殖
能力及び−１５℃での長期の貯蔵の後、ピッチレベルを
減じる能力を保持する。

【００７１】

【表１０】

【００７２】例８ 発酵及び配合 ＷＺ−５８の細胞（幼芽胞子）を、細胞密度が３×１０
９　個の細胞／ｍＬになるまで、１Ｌ当たり２００ｇの
麦芽抽出物及び１Ｌ当たり２０ｇの酵母抽出物を含む培
地中で２５℃で増殖した（２０ＬのＣｈｅｍａｐ発酵器
における１０Ｌの体積の培地）。発酵培地（約３６〜４
８時間）を、空気２体積／培地体積／分で空気付与した
（飽和近くの酸素レベル、すなわち発酵の間、いづれの
時点でも制限しない）。

【００７３】発酵器中で増殖するバイオマスを、遠心分
離により収穫し、５％の固形分を有するスラリーを得た
。そのスラリーを、Ａｅｒｕｍａｔｉｃｓ流動層乾燥器
中に水平に供給し（噴霧し）、そして周囲温度条件下で
カオリンクレーと接触し、２〜１０％の最終湿分を得た
。スラリー：クレーの重量比は１：１である。出口の空
気温度は３５℃以下に維持される。乾燥時間は２０〜４
０分である。その得られた噴霧顆粒化生成物は、生存性
及び非滅菌性木材チップ上での増殖能力及び−１５℃で
長期の貯蔵の後、ピッチレベルを減じる能力を保持する
。

【００７４】例９ 種々の木材種からの木材チップにおけるピッチの低下木
材チップを次の基準に従って加工した：木材粉砕　　　
　　　ＴＡＰＰＩ　　Ｔ　　２５７　　ｃｍ　　８５の
こ屑　　　　　　　　ＴＡＰＰＩ　　Ｔ　　２６４　　
ｃｍ　　８８ピッチ抽出　　　　ＴＡＰＰＩ　　Ｔ　　
２０４　　ｏｓ　　７８

【００７５】

【表１１】

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　子ノウ菌類又は不完全菌類の種類のも
   のであり又はいづれかの下記特徴： １）１０日間の増殖期間にわたって測定される場合、同
   じであるが、しかし非滅菌木材基質上で親の菌類よりも
   より毒性に増殖しながら、参照の親の菌類ほどに、２１
   日間の増殖の後、滅菌された木材基質の明るさに影響を
   及ぼさない特徴、又は ２）１０日間の増殖期間にわたって測定される場合、同
   じであるが、しかし非滅菌木材基質上で親の菌類よりも
   実質的に低くない毒性に増殖しながら、２１日間の増殖
   の後、滅菌された木材基質上に参照の親の菌類よりも高
   い明るさのレベルを生成する特徴を有する子ノウ胞子か
   らの単離された子ノウ胞子又はそれから得られる子ノウ
   胞子を含んで成る菌類株。
2. 【請求項２】　　セラトシスチス（Ｃｅｒａｔｏｃｙｓ
   ｔｉｓ）、セラトシスチオプシス（Ｃｅｒａｔｏｃｙｓ
   ｔｉｏｐｓｉｓ）、グラフィウム（Ｇｒａｐｈｉｕｍ）
   、レプトグラフィウム（Ｌｅｐｔｏｇｒａｐｈｉｕｍ）
   又はオフィオストマ（Ｏｐｈｉｏｓｔｏｍａ）属の菌類
   である請求項１記載の菌類株。
3. 【請求項３】　　ａ）子ノウ菌類又は不完全菌類の種類
   の１又は複数の菌類の培養物の単離された子ノウ胞子；
   ｂ）前記子ノウ胞子から得られる菌類の生物学的に純粋
   な培養物； ｃ）上記ｂ）と調和して培養物から分離された胞子及び
   ／又は菌子を含んで成る接種物； ｄ）前記子ノウ胞子から得られる菌類の誘導体菌類の生
   物学的に純粋な培養物、ここで前記誘導体は前記子ノウ
   胞子から得られる菌類のピッチ分解性木材増白効果及び
   非滅菌性木材競争増殖能力を少なくとも有し；及びｅ）
   上記ｄ）と調和して培養物から分離された胞子及び／又
   は菌子を含んで成る接種物から成る群から選択される請
   求項１又は２記載の菌類株。
4. 【請求項４】　　ＮＲＲＬ寄託番号第１８７５５の菌類
   又はそのような培養物から得られた接種物。
5. 【請求項５】　　請求項１〜４のいづれか１項記載の菌
   類株の調製方法であって、子ノウ菌類又は不完全菌類の
   種類の１又は複数の木材浸透性ピッチ分解性親菌類の培
   養物の子ノウ胞子の単離及び請求項１記載の特徴の１つ
   を有するこれらの子ノウ胞子から得られた１又は複数の
   ホモ核型菌類の選択を含んで成る方法。
6. 【請求項６】　　子ノウ胞子により生成される菌株によ
   り消費できる非毒性天然油中に親菌類の子ノウ胞子を分
   散し、そして次に、前記油の別々な子ノウ胞子含有液滴
   を得るために油のための非毒性分散剤により子ノウ胞子
   含有油を処理することを含んで成る請求項５記載の方法
   。
7. 【請求項７】　　２１日よりも多くない増殖の後、少な
   くとも２０％、基質のピッチ含有量を減じるために滅菌
   された木材基質上での増殖の追加の基準による選択を含
   んで成る請求項５又は６記載の方法。
8. 【請求項８】　　パルプ用材基質又は第１段階の機械的
   パルプに請求項１〜４のいづれか１項記載の単離された
   菌類から単離された接種物を適用し、そして菌類の増殖
   を可能にする条件下で前記接種されたパルプ用材又はパ
   ルプを維持することによってパルプ用材のピッチ含有量
   を減じる方法。
9. 【請求項９】　　請求項１〜４のいづれか１項記載の子
   ノウ菌類又は不完全菌類の種類の木材浸透性ピッチ分解
   性菌類により処理されたパルプ用材。
10. 【請求項１０】　　請求項１〜４のいづれか１項記載の
    菌類の胞子含有発酵濃縮物及び胞子の安定性に悪影響を
    与えない不活性固体キャリヤーを含んで成る菌類組成物
    。