JPH04232460A - 生物流体より濁りを除去する方法および組成物 - Google Patents

生物流体より濁りを除去する方法および組成物

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JPH04232460A
JPH04232460A JP3153691A JP15369191A JPH04232460A JP H04232460 A JPH04232460 A JP H04232460A JP 3153691 A JP3153691 A JP 3153691A JP 15369191 A JP15369191 A JP 15369191A JP H04232460 A JPH04232460 A JP H04232460A
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surfactant
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amphoteric surfactant
sample
removing turbidity
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JP3153691A
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Rolf Vormbrock
ロルフ フオルムブロック
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Merck Patent GmbH
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Merck Patent GmbH
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    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5306Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は界面活性物質を使用して
生物流体より濁りを除去する方法および組成物に関する
【0002】
【従来の技術】生物流体の分析において、試料中に存在
する親油性物質により生ずる濁りが試料の成分の光度を
測定する際に問題を起こす場合がよくある。
【0003】従って、血清または血漿の臨床化学的検査
において、この妨害を除去する幾多の試みが行われてき
た。周知の方法の例は、水と混合しない有機液体による
試料の抽出、試料中に存在する脂質粒子の沈降、または
脂質の可溶化である。抽出および沈降法は試料を調製す
るのに一工程を必要とし、その結果試料の容積が変化す
るので、これらの技術は信頼できるル−チンの分析方法
としては適当ではない。
【0004】脂質の可溶化については界面活性剤混合物
が使用されており、その組成と作用は詳細にヨ−ロッパ
特許 130 537 に記載されている。多くの場合
に、トリグリセリドがある濃度以上であり、試料/試薬
がある比を越えると、これらの界面活性剤はもはや効力
を失うので、たとえ試薬に添加物類を加えても試料の濁
度により誤った測定値となる。ヨ−ロッパ特許 130
 537 に記載されている方法は3種の界面活性剤の
組合せによるものであり、トリグリセリドが高濃度であ
り、試料/試薬が高い比であっても試料は10分以内に
透明となる。
【0005】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、生物
流体より濁りを除去する方法および組成物を提供するこ
とであり、それらはたとえ試料/試薬が高い比であって
も、検出反応を妨害することなく短時間内に脂質粒子の
完全な溶解が達成されるものである。
【0006】
【課題を解決するための手段】本発明は界面活性剤を添
加して生物流体より濁りを除去する方法に関し、その方
法は使用する界面活性剤が水性であって、任意に緩衝液
になり、任意に塩を含有する溶液中で a.アルキルジメチルベンジルアンモニウム 化合物、
b.長鎖脂肪酸を有すソルビタンまたはソルビト−ルの
ポリエトキシ化トリエステルおよび、適当なものである
ならば c.両性界面活性剤、であることを特徴とする。好まし
くはラウロイルサルコシンを両性界面活性剤として使用
する。
【0007】更に本発明は生物流体より濁りを除去する
組成物に関し、その組成物は水性であって、任意に緩衝
液になり、任意に塩を含有する溶液中でa.アルキルジ
メチルベンジルアンモニウム化合物、b.長鎖脂肪酸を
有するソルビタンまたはソルビト−ルのポリエトキシ化
トリエステルおよび、適当なものであるならば c.両性界面活性剤、を含有することを特徴とする。組
成物は好ましくはラウロイルサルコシンを両性界面活性
剤として含有する。驚くべきことに本発明による界面活
性剤の組合せにより、試料/試薬の比が20%であって
も十分10分以内に完全で、かつ永久的な透明化が達せ
られることを発見した。カチオン性界面活性剤によって
本発明による試薬は、臨床化学用試薬として使用する一
般的貯蔵温度2−8℃または15−25℃において他に
保存剤を加えずに安定である。
【0008】適合するアルキルジメチルベンジルアンモ
ニウム 化合物は好ましくはアルキルジメチルベンジル
アンモニウム クロライドであり、アルキル基は例えば
10から14のC原子の鎖長を有する分枝のない炭化水
素基である。このような化合物は例えばLonza A
G,Basle の商品名 Hyamine 3500
または BASF の ProtecolKLCとして
入手できる。また例えばLonza AG,Basle
のHyamine 1622のようなアルキル鎖に分枝
のある炭化水素鎖または芳香族炭化水素鎖およびエ−テ
ル結合を含有する化合物類も適している。これらの化合
物を0.5から10重量%の濃度、2から12の  p
H範囲で、水性、緩衝液または非緩衝溶液中で使用する
【0009】長鎖脂肪酸を有すソルビタンまたはソルビ
ト−ルの妥当なポリエトキシ化トリエステル類は、IC
IのTween 85などのポリオキシエチレン−20
ソルビタントリオレイン酸エステル、WitcoのWi
tsorbox COなどのポリオキシエチレン−20
ソルビト−ルトリオレイン酸エステルまたはICIのT
ween 65 などのポリオキシエチレン−20ソル
ビタントリステアリン酸エステル等である。これらの化
合物を0.5から10重量%の濃度、2から12のpH
範囲で、本発明によるアルキルジメチルベンジルアンモ
ニウム化合物の少なくとも一つを含有する水性、緩衝液
または非緩衝溶液中で使用する。
【0010】上記カチオン性および非イオン性界面活性
剤に加えて本発明による組成物は、適当なものであるな
らば両性界面活性剤も含有できる。妥当な両性界面活性
剤の例は HoechstのMedialan LD 
のようなN−ラウロイルサルコシン等の12から14の
C原子の鎖長のカルボン酸を有すサルコシンのアミド類
である。これら化合物を0.5から7重量%の濃度、2
から12のpH範囲で、本発明によるアルキルジメチル
ベンジルアンモニウム 化合物の少なくとも1つおよび
本発明による非イオン性界面活性剤の少なくとも1つを
含有する水性の緩衝液または非緩衝溶液中で使用する。
【0011】
【作用】本発明による組成物によって臨床化学において
一般的に使用する約15−37℃の温度範囲内で透明と
なる。使用できる緩衝液は、2から10までのpH範囲
を維持できる臨床化学の分野で周知の全ての緩衝液であ
り、好ましくはりん酸緩衝液、トリス緩衝液、PIPE
S緩衝液、グリシン/HCl緩衝液等が挙げられる。緩
衝液の濃度は10から300ミリモル/l,好ましくは
25から200ミリモル/lの範囲である必要がある。
【0012】イオン強度を増加するために、本発明によ
る組成物はまた塩化ナトリウムまたは塩化カリ等の塩を
緩衝液の濃度とほぼ同濃度含有してもよい。
【0013】生物流体中の測定する分析物によっては、
組成物は更にこの分析物の測定用物質を含有できる。
【0014】
【実施例】実施例1 血清中の鉄測定用の試薬 緩衝液:                          
                         
試薬中の濃度グリシン/HCl緩衝液、pH2.9  
        200      ミリモル/lグア
ニジニウム  クロライド             
         4.5  ミリモル/lアスコルビ
ン酸                       
         60      ミリモル/lHy
amine  3500              
        50            g/l
Tween  85                
              40         
   g/lチオ尿素               
                       12
       ミリモル/l着色剤: グリシン/HCl緩衝液、pH4.8        
  200      ミリモル/l3−(ピリジ−2
−ル)−5,6−ビス(              
  4.8  ミリモル/l4−フェニルスルホン酸)
−1,2,4         トリアジン 2ナトリ
ウム塩 測定法: 温度:                      
  25℃波長:                 
       562 nm路長:         
               1cm以下のようにピ
ペットでセルに採る。
【0015】                          
    分析物                ブラ
ンク試薬緩衝液                  
    2.0ml            2.0m
l試料                      
  0.4ml2回蒸留した水           
                         
0.4ml溶液を混合し、吸光度E1を5分後に測定し
てから以下の試薬を加える。 開始剤                      
0.01ml          0.01ml  そ
れから吸光度E2を3分後に測定する。分析物の吸光度
差、EA=E2−E1およびブランク試薬の吸光度差、
EL=E2−E1を計算し、差ΔE=EA−ELを使用
して次の式に従って鉄の濃度を計算する。
【0016】c=1195×ΔEμg/dl本発明によ
る界面活性剤を加えずに測定を行うと脂質性血清による
濁りにより誤った結果を生じ、その誤差はブランク試薬
を測定しても補償できぬものであるが、一方本発明によ
る方法を採用すると、使用する界面活性剤の濃度にもよ
るが1000mg/dlまたはそれ以上のトリグリセリ
ド濃度までこの妨害は除かれる。
【0017】実施例2 血清中のグルコ−ス測定用の試薬 緩衝液:                          
                       試薬
中の濃度PIPES  緩衝液、pH7.2     
             50  ミリモル/l1−
フェニル−2,3−ジメチル −4−アミノピラゾル−5−オン          
              1  ミリモル/lヒド
ロキシ安息香酸                  
              6  ミリモル/lHy
amine  3500              
          25        g/lTw
een  85                  
              25        g
/lN−ラウロイルサルコシン           
                5        
g/lグルコ−ス  オキシダ−ゼ         
                 6      k
U/lペルオキシダ−ゼ              
                    3.2  
kU/lムタロタ−ゼ               
                       0.
05kU/l測定法: 温度:                  25℃波
長:                  500nm
路長:                  1cm以
下のようにピペットでセルに採る。
【0018】                          
    分析物                ブラ
ンク試薬緩衝液                  
    2.0ml            2.0m
l試料                      
  0.02ml2回蒸留した水          
                         
 0.02ml溶液を混合し、吸光度を5分後に測定す
る。
【0019】分析物とブランク試薬の吸光度差、ΔE=
EA−ELを使用して、次の式に従ってグルコ−スの濃
度を計算する。
【0020】c=342×ΔEmg/dl本発明による
界面活性剤を加えずに測定を行うと脂質性血清の濁りに
より誤った結果を生じるが、一方本発明による方法を採
用すると、使用する界面活性剤の濃度にもよるが100
0mg/dlまたはそれ以上のトリグリセリド濃度まで
この妨害は除かれる。

Claims (4)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】  界面活性剤を添加して生物流体より濁
    りを除去する方法であり、使用する界面活性剤が、水性
    であって、任意に緩衝液になり、および任意に塩を含有
    する溶液中の a.アルキルジメチルベンジルアンモニウム 化合物、
    b.長鎖脂肪酸を有すソルビタンまたはソルビト−ルの
    ポリエトキシ化トリエステルおよび、適当なものである
    ならば c.両性界面活性剤、であることを特徴とする方法。
  2. 【請求項2】  両性界面活性剤としてラウロイルサル
    コシンが使用されることから成る請求項1による方法。
  3. 【請求項3】  生物流体より濁りを除去する組成物で
    あり、水性であって、任意に緩衝液になり、および任意
    に塩を含有する溶液中の a.アルキルジメチルベンジルアンモニウム 化合物、
    b.長鎖脂肪酸を有すソルビタンまたはソルビト−ルの
    ポリエトキシ化トリエステルおよび、適当なものである
    ならば c.両性界面活性剤を含有することを特徴とする組成物
  4. 【請求項4】 両性界面活性剤としてラウロイルサルコ
    シンを含有することから成る請求項3による組成物。
JP3153691A 1990-06-09 1991-05-30 生物流体より濁りを除去する方法および組成物 Pending JPH04232460A (ja)

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DE (2) DE4018502A1 (ja)
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EP0461473B1 (de) 1996-03-27
EP0461473A2 (de) 1991-12-18
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