JPH04232460A - 生物流体より濁りを除去する方法および組成物 - Google Patents
生物流体より濁りを除去する方法および組成物Info
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- JPH04232460A JPH04232460A JP3153691A JP15369191A JPH04232460A JP H04232460 A JPH04232460 A JP H04232460A JP 3153691 A JP3153691 A JP 3153691A JP 15369191 A JP15369191 A JP 15369191A JP H04232460 A JPH04232460 A JP H04232460A
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は界面活性物質を使用して
生物流体より濁りを除去する方法および組成物に関する
。
生物流体より濁りを除去する方法および組成物に関する
。
【0002】
【従来の技術】生物流体の分析において、試料中に存在
する親油性物質により生ずる濁りが試料の成分の光度を
測定する際に問題を起こす場合がよくある。
する親油性物質により生ずる濁りが試料の成分の光度を
測定する際に問題を起こす場合がよくある。
【0003】従って、血清または血漿の臨床化学的検査
において、この妨害を除去する幾多の試みが行われてき
た。周知の方法の例は、水と混合しない有機液体による
試料の抽出、試料中に存在する脂質粒子の沈降、または
脂質の可溶化である。抽出および沈降法は試料を調製す
るのに一工程を必要とし、その結果試料の容積が変化す
るので、これらの技術は信頼できるル−チンの分析方法
としては適当ではない。
において、この妨害を除去する幾多の試みが行われてき
た。周知の方法の例は、水と混合しない有機液体による
試料の抽出、試料中に存在する脂質粒子の沈降、または
脂質の可溶化である。抽出および沈降法は試料を調製す
るのに一工程を必要とし、その結果試料の容積が変化す
るので、これらの技術は信頼できるル−チンの分析方法
としては適当ではない。
【0004】脂質の可溶化については界面活性剤混合物
が使用されており、その組成と作用は詳細にヨ−ロッパ
特許 130 537 に記載されている。多くの場合
に、トリグリセリドがある濃度以上であり、試料/試薬
がある比を越えると、これらの界面活性剤はもはや効力
を失うので、たとえ試薬に添加物類を加えても試料の濁
度により誤った測定値となる。ヨ−ロッパ特許 130
537 に記載されている方法は3種の界面活性剤の
組合せによるものであり、トリグリセリドが高濃度であ
り、試料/試薬が高い比であっても試料は10分以内に
透明となる。
が使用されており、その組成と作用は詳細にヨ−ロッパ
特許 130 537 に記載されている。多くの場合
に、トリグリセリドがある濃度以上であり、試料/試薬
がある比を越えると、これらの界面活性剤はもはや効力
を失うので、たとえ試薬に添加物類を加えても試料の濁
度により誤った測定値となる。ヨ−ロッパ特許 130
537 に記載されている方法は3種の界面活性剤の
組合せによるものであり、トリグリセリドが高濃度であ
り、試料/試薬が高い比であっても試料は10分以内に
透明となる。
【0005】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、生物
流体より濁りを除去する方法および組成物を提供するこ
とであり、それらはたとえ試料/試薬が高い比であって
も、検出反応を妨害することなく短時間内に脂質粒子の
完全な溶解が達成されるものである。
流体より濁りを除去する方法および組成物を提供するこ
とであり、それらはたとえ試料/試薬が高い比であって
も、検出反応を妨害することなく短時間内に脂質粒子の
完全な溶解が達成されるものである。
【0006】
【課題を解決するための手段】本発明は界面活性剤を添
加して生物流体より濁りを除去する方法に関し、その方
法は使用する界面活性剤が水性であって、任意に緩衝液
になり、任意に塩を含有する溶液中で a.アルキルジメチルベンジルアンモニウム 化合物、
b.長鎖脂肪酸を有すソルビタンまたはソルビト−ルの
ポリエトキシ化トリエステルおよび、適当なものである
ならば c.両性界面活性剤、であることを特徴とする。好まし
くはラウロイルサルコシンを両性界面活性剤として使用
する。
加して生物流体より濁りを除去する方法に関し、その方
法は使用する界面活性剤が水性であって、任意に緩衝液
になり、任意に塩を含有する溶液中で a.アルキルジメチルベンジルアンモニウム 化合物、
b.長鎖脂肪酸を有すソルビタンまたはソルビト−ルの
ポリエトキシ化トリエステルおよび、適当なものである
ならば c.両性界面活性剤、であることを特徴とする。好まし
くはラウロイルサルコシンを両性界面活性剤として使用
する。
【0007】更に本発明は生物流体より濁りを除去する
組成物に関し、その組成物は水性であって、任意に緩衝
液になり、任意に塩を含有する溶液中でa.アルキルジ
メチルベンジルアンモニウム化合物、b.長鎖脂肪酸を
有するソルビタンまたはソルビト−ルのポリエトキシ化
トリエステルおよび、適当なものであるならば c.両性界面活性剤、を含有することを特徴とする。組
成物は好ましくはラウロイルサルコシンを両性界面活性
剤として含有する。驚くべきことに本発明による界面活
性剤の組合せにより、試料/試薬の比が20%であって
も十分10分以内に完全で、かつ永久的な透明化が達せ
られることを発見した。カチオン性界面活性剤によって
本発明による試薬は、臨床化学用試薬として使用する一
般的貯蔵温度2−8℃または15−25℃において他に
保存剤を加えずに安定である。
組成物に関し、その組成物は水性であって、任意に緩衝
液になり、任意に塩を含有する溶液中でa.アルキルジ
メチルベンジルアンモニウム化合物、b.長鎖脂肪酸を
有するソルビタンまたはソルビト−ルのポリエトキシ化
トリエステルおよび、適当なものであるならば c.両性界面活性剤、を含有することを特徴とする。組
成物は好ましくはラウロイルサルコシンを両性界面活性
剤として含有する。驚くべきことに本発明による界面活
性剤の組合せにより、試料/試薬の比が20%であって
も十分10分以内に完全で、かつ永久的な透明化が達せ
られることを発見した。カチオン性界面活性剤によって
本発明による試薬は、臨床化学用試薬として使用する一
般的貯蔵温度2−8℃または15−25℃において他に
保存剤を加えずに安定である。
【0008】適合するアルキルジメチルベンジルアンモ
ニウム 化合物は好ましくはアルキルジメチルベンジル
アンモニウム クロライドであり、アルキル基は例えば
10から14のC原子の鎖長を有する分枝のない炭化水
素基である。このような化合物は例えばLonza A
G,Basle の商品名 Hyamine 3500
または BASF の ProtecolKLCとして
入手できる。また例えばLonza AG,Basle
のHyamine 1622のようなアルキル鎖に分枝
のある炭化水素鎖または芳香族炭化水素鎖およびエ−テ
ル結合を含有する化合物類も適している。これらの化合
物を0.5から10重量%の濃度、2から12の p
H範囲で、水性、緩衝液または非緩衝溶液中で使用する
。
ニウム 化合物は好ましくはアルキルジメチルベンジル
アンモニウム クロライドであり、アルキル基は例えば
10から14のC原子の鎖長を有する分枝のない炭化水
素基である。このような化合物は例えばLonza A
G,Basle の商品名 Hyamine 3500
または BASF の ProtecolKLCとして
入手できる。また例えばLonza AG,Basle
のHyamine 1622のようなアルキル鎖に分枝
のある炭化水素鎖または芳香族炭化水素鎖およびエ−テ
ル結合を含有する化合物類も適している。これらの化合
物を0.5から10重量%の濃度、2から12の p
H範囲で、水性、緩衝液または非緩衝溶液中で使用する
。
【0009】長鎖脂肪酸を有すソルビタンまたはソルビ
ト−ルの妥当なポリエトキシ化トリエステル類は、IC
IのTween 85などのポリオキシエチレン−20
ソルビタントリオレイン酸エステル、WitcoのWi
tsorbox COなどのポリオキシエチレン−20
ソルビト−ルトリオレイン酸エステルまたはICIのT
ween 65 などのポリオキシエチレン−20ソル
ビタントリステアリン酸エステル等である。これらの化
合物を0.5から10重量%の濃度、2から12のpH
範囲で、本発明によるアルキルジメチルベンジルアンモ
ニウム化合物の少なくとも一つを含有する水性、緩衝液
または非緩衝溶液中で使用する。
ト−ルの妥当なポリエトキシ化トリエステル類は、IC
IのTween 85などのポリオキシエチレン−20
ソルビタントリオレイン酸エステル、WitcoのWi
tsorbox COなどのポリオキシエチレン−20
ソルビト−ルトリオレイン酸エステルまたはICIのT
ween 65 などのポリオキシエチレン−20ソル
ビタントリステアリン酸エステル等である。これらの化
合物を0.5から10重量%の濃度、2から12のpH
範囲で、本発明によるアルキルジメチルベンジルアンモ
ニウム化合物の少なくとも一つを含有する水性、緩衝液
または非緩衝溶液中で使用する。
【0010】上記カチオン性および非イオン性界面活性
剤に加えて本発明による組成物は、適当なものであるな
らば両性界面活性剤も含有できる。妥当な両性界面活性
剤の例は HoechstのMedialan LD
のようなN−ラウロイルサルコシン等の12から14の
C原子の鎖長のカルボン酸を有すサルコシンのアミド類
である。これら化合物を0.5から7重量%の濃度、2
から12のpH範囲で、本発明によるアルキルジメチル
ベンジルアンモニウム 化合物の少なくとも1つおよび
本発明による非イオン性界面活性剤の少なくとも1つを
含有する水性の緩衝液または非緩衝溶液中で使用する。
剤に加えて本発明による組成物は、適当なものであるな
らば両性界面活性剤も含有できる。妥当な両性界面活性
剤の例は HoechstのMedialan LD
のようなN−ラウロイルサルコシン等の12から14の
C原子の鎖長のカルボン酸を有すサルコシンのアミド類
である。これら化合物を0.5から7重量%の濃度、2
から12のpH範囲で、本発明によるアルキルジメチル
ベンジルアンモニウム 化合物の少なくとも1つおよび
本発明による非イオン性界面活性剤の少なくとも1つを
含有する水性の緩衝液または非緩衝溶液中で使用する。
【0011】
【作用】本発明による組成物によって臨床化学において
一般的に使用する約15−37℃の温度範囲内で透明と
なる。使用できる緩衝液は、2から10までのpH範囲
を維持できる臨床化学の分野で周知の全ての緩衝液であ
り、好ましくはりん酸緩衝液、トリス緩衝液、PIPE
S緩衝液、グリシン/HCl緩衝液等が挙げられる。緩
衝液の濃度は10から300ミリモル/l,好ましくは
25から200ミリモル/lの範囲である必要がある。
一般的に使用する約15−37℃の温度範囲内で透明と
なる。使用できる緩衝液は、2から10までのpH範囲
を維持できる臨床化学の分野で周知の全ての緩衝液であ
り、好ましくはりん酸緩衝液、トリス緩衝液、PIPE
S緩衝液、グリシン/HCl緩衝液等が挙げられる。緩
衝液の濃度は10から300ミリモル/l,好ましくは
25から200ミリモル/lの範囲である必要がある。
【0012】イオン強度を増加するために、本発明によ
る組成物はまた塩化ナトリウムまたは塩化カリ等の塩を
緩衝液の濃度とほぼ同濃度含有してもよい。
る組成物はまた塩化ナトリウムまたは塩化カリ等の塩を
緩衝液の濃度とほぼ同濃度含有してもよい。
【0013】生物流体中の測定する分析物によっては、
組成物は更にこの分析物の測定用物質を含有できる。
組成物は更にこの分析物の測定用物質を含有できる。
【0014】
【実施例】実施例1
血清中の鉄測定用の試薬
緩衝液:
試薬中の濃度グリシン/HCl緩衝液、pH2.9
200 ミリモル/lグア
ニジニウム クロライド
4.5 ミリモル/lアスコルビ
ン酸
60 ミリモル/lHy
amine 3500
50 g/l
Tween 85
40
g/lチオ尿素
12
ミリモル/l着色剤: グリシン/HCl緩衝液、pH4.8
200 ミリモル/l3−(ピリジ−2
−ル)−5,6−ビス(
4.8 ミリモル/l4−フェニルスルホン酸)
−1,2,4 トリアジン 2ナトリ
ウム塩 測定法: 温度:
25℃波長:
562 nm路長:
1cm以下のようにピ
ペットでセルに採る。
試薬中の濃度グリシン/HCl緩衝液、pH2.9
200 ミリモル/lグア
ニジニウム クロライド
4.5 ミリモル/lアスコルビ
ン酸
60 ミリモル/lHy
amine 3500
50 g/l
Tween 85
40
g/lチオ尿素
12
ミリモル/l着色剤: グリシン/HCl緩衝液、pH4.8
200 ミリモル/l3−(ピリジ−2
−ル)−5,6−ビス(
4.8 ミリモル/l4−フェニルスルホン酸)
−1,2,4 トリアジン 2ナトリ
ウム塩 測定法: 温度:
25℃波長:
562 nm路長:
1cm以下のようにピ
ペットでセルに採る。
【0015】
分析物 ブラ
ンク試薬緩衝液
2.0ml 2.0m
l試料
0.4ml2回蒸留した水
0.4ml溶液を混合し、吸光度E1を5分後に測定し
てから以下の試薬を加える。 開始剤
0.01ml 0.01ml そ
れから吸光度E2を3分後に測定する。分析物の吸光度
差、EA=E2−E1およびブランク試薬の吸光度差、
EL=E2−E1を計算し、差ΔE=EA−ELを使用
して次の式に従って鉄の濃度を計算する。
分析物 ブラ
ンク試薬緩衝液
2.0ml 2.0m
l試料
0.4ml2回蒸留した水
0.4ml溶液を混合し、吸光度E1を5分後に測定し
てから以下の試薬を加える。 開始剤
0.01ml 0.01ml そ
れから吸光度E2を3分後に測定する。分析物の吸光度
差、EA=E2−E1およびブランク試薬の吸光度差、
EL=E2−E1を計算し、差ΔE=EA−ELを使用
して次の式に従って鉄の濃度を計算する。
【0016】c=1195×ΔEμg/dl本発明によ
る界面活性剤を加えずに測定を行うと脂質性血清による
濁りにより誤った結果を生じ、その誤差はブランク試薬
を測定しても補償できぬものであるが、一方本発明によ
る方法を採用すると、使用する界面活性剤の濃度にもよ
るが1000mg/dlまたはそれ以上のトリグリセリ
ド濃度までこの妨害は除かれる。
る界面活性剤を加えずに測定を行うと脂質性血清による
濁りにより誤った結果を生じ、その誤差はブランク試薬
を測定しても補償できぬものであるが、一方本発明によ
る方法を採用すると、使用する界面活性剤の濃度にもよ
るが1000mg/dlまたはそれ以上のトリグリセリ
ド濃度までこの妨害は除かれる。
【0017】実施例2
血清中のグルコ−ス測定用の試薬
緩衝液:
試薬
中の濃度PIPES 緩衝液、pH7.2
50 ミリモル/l1−
フェニル−2,3−ジメチル −4−アミノピラゾル−5−オン
1 ミリモル/lヒド
ロキシ安息香酸
6 ミリモル/lHy
amine 3500
25 g/lTw
een 85
25 g
/lN−ラウロイルサルコシン
5
g/lグルコ−ス オキシダ−ゼ
6 k
U/lペルオキシダ−ゼ
3.2
kU/lムタロタ−ゼ
0.
05kU/l測定法: 温度: 25℃波
長: 500nm
路長: 1cm以
下のようにピペットでセルに採る。
試薬
中の濃度PIPES 緩衝液、pH7.2
50 ミリモル/l1−
フェニル−2,3−ジメチル −4−アミノピラゾル−5−オン
1 ミリモル/lヒド
ロキシ安息香酸
6 ミリモル/lHy
amine 3500
25 g/lTw
een 85
25 g
/lN−ラウロイルサルコシン
5
g/lグルコ−ス オキシダ−ゼ
6 k
U/lペルオキシダ−ゼ
3.2
kU/lムタロタ−ゼ
0.
05kU/l測定法: 温度: 25℃波
長: 500nm
路長: 1cm以
下のようにピペットでセルに採る。
【0018】
分析物 ブラ
ンク試薬緩衝液
2.0ml 2.0m
l試料
0.02ml2回蒸留した水
0.02ml溶液を混合し、吸光度を5分後に測定す
る。
分析物 ブラ
ンク試薬緩衝液
2.0ml 2.0m
l試料
0.02ml2回蒸留した水
0.02ml溶液を混合し、吸光度を5分後に測定す
る。
【0019】分析物とブランク試薬の吸光度差、ΔE=
EA−ELを使用して、次の式に従ってグルコ−スの濃
度を計算する。
EA−ELを使用して、次の式に従ってグルコ−スの濃
度を計算する。
【0020】c=342×ΔEmg/dl本発明による
界面活性剤を加えずに測定を行うと脂質性血清の濁りに
より誤った結果を生じるが、一方本発明による方法を採
用すると、使用する界面活性剤の濃度にもよるが100
0mg/dlまたはそれ以上のトリグリセリド濃度まで
この妨害は除かれる。
界面活性剤を加えずに測定を行うと脂質性血清の濁りに
より誤った結果を生じるが、一方本発明による方法を採
用すると、使用する界面活性剤の濃度にもよるが100
0mg/dlまたはそれ以上のトリグリセリド濃度まで
この妨害は除かれる。
Claims (4)
- 【請求項1】 界面活性剤を添加して生物流体より濁
りを除去する方法であり、使用する界面活性剤が、水性
であって、任意に緩衝液になり、および任意に塩を含有
する溶液中の a.アルキルジメチルベンジルアンモニウム 化合物、
b.長鎖脂肪酸を有すソルビタンまたはソルビト−ルの
ポリエトキシ化トリエステルおよび、適当なものである
ならば c.両性界面活性剤、であることを特徴とする方法。 - 【請求項2】 両性界面活性剤としてラウロイルサル
コシンが使用されることから成る請求項1による方法。 - 【請求項3】 生物流体より濁りを除去する組成物で
あり、水性であって、任意に緩衝液になり、および任意
に塩を含有する溶液中の a.アルキルジメチルベンジルアンモニウム 化合物、
b.長鎖脂肪酸を有すソルビタンまたはソルビト−ルの
ポリエトキシ化トリエステルおよび、適当なものである
ならば c.両性界面活性剤を含有することを特徴とする組成物
。 - 【請求項4】 両性界面活性剤としてラウロイルサルコ
シンを含有することから成る請求項3による組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4018502.8 | 1990-06-09 | ||
| DE4018502A DE4018502A1 (de) | 1990-06-09 | 1990-06-09 | Verfahren und mittel zur beseitigung von truebungen in biologischen fluessigkeiten |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04232460A true JPH04232460A (ja) | 1992-08-20 |
Family
ID=6408105
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3153691A Pending JPH04232460A (ja) | 1990-06-09 | 1991-05-30 | 生物流体より濁りを除去する方法および組成物 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5258315A (ja) |
| EP (1) | EP0461473B1 (ja) |
| JP (1) | JPH04232460A (ja) |
| DE (2) | DE4018502A1 (ja) |
| ES (1) | ES2085927T3 (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4218555A1 (de) * | 1992-06-05 | 1993-12-09 | Elemer Dipl Chem Dr Faltusz | Verfahren zur Solubilisierung der Milch für Untersuchungszwecke |
| JP3301646B2 (ja) * | 1993-03-19 | 2002-07-15 | シスメックス株式会社 | 幼若細胞測定用試薬 |
| US5614414A (en) * | 1995-03-30 | 1997-03-25 | Streck Laboratories, Inc. | Liquid lipoprotein control |
| US5770451A (en) * | 1995-03-30 | 1998-06-23 | Streck Laboratories, Inc. | Liquid lipoprotein control |
| JP3001087B2 (ja) * | 1995-10-18 | 2000-01-17 | 株式会社日立製作所 | 自動分析装置および方法 |
| DE60101254T2 (de) * | 2001-02-19 | 2004-04-22 | Olympus Diagnostica Gmbh | Mittel zur Beseitigung von Eintrübungen in biologischen Proben |
| US6472216B1 (en) * | 2001-07-24 | 2002-10-29 | Ann-Shyn Chiang | Aqueous tissue clearing solution |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3864472A (en) * | 1972-11-06 | 1975-02-04 | Colgate Palmolive Co | Clear lemon-flavored mouthwash |
| US3869308A (en) * | 1973-04-27 | 1975-03-04 | Ppg Industries Inc | Forming size for glass fibers and resulting product |
| DE2816229C2 (de) * | 1978-04-14 | 1983-11-10 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Mittel zur Beseitigung von Trübungen |
| DE2839433A1 (de) * | 1978-09-11 | 1980-03-20 | Merck Patent Gmbh | Waessrige lipid-standardloesung und verfahren zu ihrer herstellung |
| US4369250A (en) * | 1981-07-31 | 1983-01-18 | Sherwood Medical Industries Inc. | Fatty acid determination |
| US4510239A (en) * | 1982-08-09 | 1985-04-09 | Beckman Instruments, Inc. | Double antibody immunoassays of enzymes such as prostatic acid phosphatase |
| DE3323949A1 (de) * | 1983-07-02 | 1985-01-03 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und mittel zur raschen und vollstaendigen beseitigung einer truebung in einer biologischen fluessigkeit |
| EP0141879A1 (en) * | 1983-10-18 | 1985-05-22 | Victor A. Bernstam | Surfactant compositions and methods for clarifying and partitioning aqueous lipid-containing specimens |
| US4621049A (en) * | 1984-11-19 | 1986-11-04 | Miles Laboratories, Inc. | Enzymatic high range glucose test |
| US5041390A (en) * | 1988-08-11 | 1991-08-20 | Skov Per S | Method and means for allergy diagnosis |
-
1990
- 1990-06-09 DE DE4018502A patent/DE4018502A1/de not_active Withdrawn
-
1991
- 1991-05-29 EP EP91108765A patent/EP0461473B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-05-29 DE DE59107602T patent/DE59107602D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-05-29 ES ES91108765T patent/ES2085927T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-05-30 JP JP3153691A patent/JPH04232460A/ja active Pending
- 1991-06-10 US US07/712,379 patent/US5258315A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5258315A (en) | 1993-11-02 |
| DE4018502A1 (de) | 1991-12-12 |
| EP0461473B1 (de) | 1996-03-27 |
| EP0461473A2 (de) | 1991-12-18 |
| DE59107602D1 (de) | 1996-05-02 |
| EP0461473A3 (en) | 1992-07-29 |
| ES2085927T3 (es) | 1996-06-16 |
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