JPH04234431A - アミノグリコシド腎細胞毒性を阻止する改良された方法と組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は抗生物質アミノグリコシ
ドの使用に付随する腎細胞毒性を阻止するためにえらば
れた小さな１組のポリアスパルチン酸ポリマー保護剤を
使用することに関する。本発明はまた共投与の望まれる
場合に臨床に使用するためのそのような保護剤とアミノ
グリコシドを含む医薬組成物にも関する。

【０００２】

【従来の技術】アミノグリコシド抗生物質は１９４４年
に始めての有用なアミノグリコシドであるストレプトマ
イシンが単離された後に広範囲に使用された。微生物に
よる感染におけるそれらの迅速な殺菌作用のために、ア
ミノグリコシドは特に有用であるけれども、それらの使
用は聴覚毒性および腎細胞毒性の副作用のために主とし
て重症で複雑な感染の治療に限られている。この理由の
ために、アミノグリコシドは系統的に使用される他の抗
生物質に比べて低い治療／リスクの比をもつと考えられ
る。

【０００３】アミノグリコシドからの腎細胞毒性効果は
文献によく紹介されている。アミノグリコシドの悪い作
用と予防の最近の記述は「Ｄｒｕｇ　　Ｅｖａｌｕａｔ
ｉｏｎ」第６版（米国ペンシルバニア州フィラデルフィ
アのＡＭＡ　　ａｎｄＷ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ　　Ｃ
ｏ．刊行）第１４３３−１４３５頁（１９８６年）に見
出される。

【０００４】いくつかの物質とくにアミノ酸誘導体がア
ミノグリコシド誘起腎臓疾患の阻止に有用であることが
報告された。

【０００５】マイスターらは米国特許第４，７５８，５
５１号にγ−グルタミルアミノ酸が腎細胞毒性薬品によ
って生ずる腎臓毒性に斗うのに使用するのに有用な無毒
性剤であることを報告している。シオコリらは米国特許
第４，７５７，０６６号にペネムまたはカルバペネム抗
生物質と組合せてＮ−アシル化アミノ酸を使用して抗生
物質それ自体の使用によって生ずる腎臓毒性を減少させ
ることを開示している。ＷＯ８８０４−９２５Ａ（Ｔｕ
ｌａｎｅ　　Ｅ．Ｆｕｎｄ　　Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔ
ｉｏｎ）には酸性性の小さいペプチドのバイオ合成前駆
体たとえばｇｌｕ−ｇｌｙまたは（ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｓ
）２　がアミノグリコシドの腎細胞毒性効果を阻止する
ことが記載されている。

【０００６】本発明にとって上記より関連の小さいその
他の試剤として、とりわけてＤ−グルカレート（米国特
許第３，９２８，５８３号、第４，１２２，１７１号）
およびアミロライド（米国特許第４，６５４，３２５号
）があげられる。

【０００７】最も適切な技術はウイリアムらによって米
国特許第４，５２６，８８５号に報告されている技術す
なわちある種の中性とアニオン性のポリアミノ酸を組合
せて使用してアミノグリコシド誘起腎細胞毒性を減少さ
せる技術である。ウイリアムらによって教示されている
特定のポリアミノ酸はアスパラギンとアスパルチン酸の
ポリマー類およびそれらのコポリマー類であった。

【０００８】Ｔｈｅ　　Ｊ．ｏｆ　　Ｐｈａｒｍａｃｏ
ｌｏｇｙ　　ａｎｄ　　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　　
Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２３７／３，９１９−９２
５（１９８６）に報告されているウイリアムスらの研究
は他の刊行報文においてラットのモデル研究において確
認された。 ギルバートらのＴｈｅ　　Ｊ．ｏｆ　　Ｉｎｆｅｃｔｉ
ｏｎｓ　　Ｄｉｓｅａｓｅｓ，１５９／５，９４５−９
５３（１９８９年５月）；ラムソミイらのＴｈｅ　　Ｊ
．ｏｆ　　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　　ａｎｄＥｎｐ
ｅｒｉｍｅｎｔａｌ　　Ｔｈｅｒａｐｅｎｔｉｃｓ　　
２５０／１，１４９−１５３（１９８９）参照。

【０００９】アミノグリコシド腎細胞毒性を治療するた
めに、動物モデルでポリアスパルチン酸を使用すること
を報告するこれらの研究は（シグマ・ケミカル・カンパ
ニーから）商業的に入手しうるポリ−Ｌ−アスパルチン
酸を使用した。商業的に入手しうるポリ−Ｌ−アスパル
チン酸は粘度測定によって、もっと最近では粘度と低角
度レーザー光散乱技術の双方によって決定される平均分
子量によってのみ特徴づけられている。物質に付けられ
た名前（ポリ−Ｌ−アスパルチン酸）から、およびカタ
ログ中に記載されている合成は（対応するＮ−カルボキ
シ無水物の…基材開始の重合法）から、これらのポリマ
ー類は各試料について与えられているような平均分子量
をもつ、アスパルチン酸のα−カルボン酸基を含む、ア
ミド結合を介して相互に結合するＬ−アスパルチン酸の
反復単位からなるものと期待することができる。また、
保護を実証する実験研究はアミノグリコシド１部当りポ
リアスパルテート少なくとも１．６５〜３３重量部を使
用して行なわれた。

【００１０】

【発明が解釈しようとする課題】通常の合成を含む他の
資源からのポリ−Ｌ−アスパルチン酸ロットをラットの
アミノグリコシド腎細胞毒性モデルにおいて本発明者が
試験したところ、阻止能力に説明しえない変動が観察さ
れた。他の資源からのポリ−Ｌ−アスパルチン酸の阻止
能力のこのような変動の起源を決定する過程において、
前述のような特徴づけされていない小さい一組のアスパ
ルチン酸ポリマー類が商業的ポリアスパルチン酸に含ま
れていること、及びこれらの夾雑ポリアスパルテート物
質が純粋なポリ−Ｌ−アスパルチン酸（すなわちアスパ
ルチン酸のカルボン酸基を含むアミド結合に接続する主
としてＬ−アスパルチン残基から成る純粋なポリアスパ
ルチン酸）よりも腎細胞毒性に対してずっと大きな阻止
能力をもつ、という発見がなされた。

【００１１】従って本発明はこの新しく発見された成分
を配合したポリアスパルテート物質が「純粋な」ポリ−
Ｌ−アスパルテートよりもずっと高い阻止活性をもつと
いう驚くべき発見の結果である。本発明の過程において
、改良された小さい一組のポリアスパルテート阻止剤の
特徴づけがなされた。

【００１２】従来技術の物質または文献のうちのどれ１
つとして本発明で開示するようなアミノグリコシド腎細
胞毒性の改良された阻止剤を含む従来特徴づけられなか
ったポリアスパルテート物質を明示または示唆している
ものはない。本発明はポリ−Ｌ−アスパルチン酸の有力
な腎細胞毒性阻止に応答するのは商業的ポリ−Ｌ−アス
パルチン酸中の夾雑ポリアスパルテート物質の存在であ
った、という発見から生じたものである。従って本発明
の目的は新しく特徴づけられた更に有力なポリアスパル
テート阻止剤を配合したアミノグリコシド抗生物質を使
用してアミノグリコシド誘起腎細胞毒性を阻止または減
少する方法を提供すること、および抗生物質単独よりも
腎細胞毒性のずっと少ない、然も抑止剤ポリマーが少な
くてすむ、改良された医薬抗生物質組成物を提供するこ
と、にある。

【００１３】

【課題を解決するための手段】本発明の改良されたポリ
アスパルチン酸含有ポリマーは、水溶性であり；生理学
的に許容しうるｐＨに中和され；遊離酸基準で約６００
〜９０００の平均分子量をもち；そして少なくとも３０
のβ−Ｄ因子をもつ；ものとして特徴づけられる。この
「β−Ｄ因子」はポリマー中のβ結合と（Ｄ）アスパル
チン酸の百分率の合計によって誘導される。

【００１４】アミノグリコシドの腎細胞毒性を阻止する
ポリ−Ｌ−アスパルチン酸の異なったロットの能力の変
動についての研究は、純粋なポリ−Ｌ−アスパルテート
に比べて有力な阻止活性をもつポリアスパルチン酸含有
ポリマーの構造上の小さい一組の発見に導いた。ポリア
スパルテートは（Ｄ）−または（Ｌ）−のモノマー単位
の含有によるばかりではなくて特定のアミド結合単位に
よっても構造上相違しうる。

【００１５】

【化１】

【００１６】本発明の有力なポリアスパルテートの特徴
づけは好ましいポリアスパルテート中でのＤ−残基とβ
−結合の役割の認識に誘いた。

【００１７】アミノグリコシドの腎細胞毒性を阻止する
改良法はアミノグリコシド２重量部に対して少なくとも
１重量部の不溶性、部分中和のポリアスパルチン酸を投
与することから成る。阻止剤ポリマーはアスパルチン酸
のホモポリマー、またはアスパルチン酸と少量の医薬的
に許容しうるコモノマーとのコポリマーでありうる。本
発明の文脈において「ポリマー」とはアスパルチン酸の
ホモポリマーとコポリマーの双方に適用されることが理
解されるべきである。

【００１８】改良法に使用するのにえらばれるポリアス
パルテートポリマーは遊離酸基準で約６００〜９０００
好ましくは約８００〜６０００の平均分子量をもち、少
なくとも３０のβ−Ｄ因子を有する。β−Ｄ因子はポリ
マー中のβ結合と（Ｄ）アスパルチン酸単位との百分率
を合計することによって誘導される。すべてのアスパル
チン酸ポリマーは０〜１００％のβ結合および０〜１０
０％の（Ｄ）残基をもつことができる。従ってβ−Ｄ因
子はこれらのポリマーについて０〜２００の範囲であり
うる。３０未満のβ−Ｄ因子をもつポリアスパルテート
は比較的貧弱な腎細胞毒性阻止能力をもつけれども、３
０より大きい種々のβ−Ｄ因子の値をもつものは腎細胞
毒性阻止剤として比較的有効であるようにみえる。従っ
て２００の最大β−Ｄ因子をもつポリアスパルテートを
えらぶことは必要でない。これは有力な経済的利点であ
る。最も単純で有効で安価なアスパルチン酸重合法のい
くつかはＤおよびＬの残基とαおよびβ結合との混合物
を含むポリマーを生成するからである。

【００１９】

【発明の態様】改良されたポリアスパルチン阻止剤の投
与は治療上有効な量のアミノグリコシド抗生物質の投与
とは別に然し同時に行なうことができる。阻止剤の投与
は前または後であってもよく、そして頻度が少なくても
よい。阻止剤と抗生物質はまた医薬的に許容しうる担体
中で混合して一緒に投与することもできる。

【００２０】改良されたポリアスパルテートは投与ビヒ
クルにとかしたとき生理学的に許容しうるｐＨを与える
ように中和されたものである。このｐＨは好ましくは約
６〜８の一般的範囲にあり、好ましくは７である。中和
は好適な塩基たとえばＮａＯＨ，ＫＯＨ，ＮＨ４　ＯＨ
などを用いて達成され、それによってこれらのポリアニ
オン性アスパルチン酸ポリマーの水溶性が増大する。Ｎ
ａＯＨを中和剤として使用するとき、カルボキシレート
部分の約７０〜８０％はナトリウム塩の形体にある。遊
離酸としてのポリアスパルチン酸は安定性に欠ける。

【００２１】ポリアスパルテート阻止剤の分子量はナト
リウム含量に応じて変化する。 （アスパルチン酸単位）（遊離酸）（７０％Ｎａ塩）（
１００％Ｎａ塩）　　　　　　　　１０　　　　　　　
　　　１１６９　　　　　　１３３８　　　　　　　　
　　１４１１　　　　　　　　１２　　　　　　　　　
　１３９９　　　　　　１５９９　　　　　　　　　　
１６８５　　　　　　　　２０　　　　　　　　　　２
３２０　　　　　　２６４３　　　　　　　　　　２７
８１　　　　　　　　４０　　　　　　　　　　４６２
２　　　　　　５２５３　　　　　　　　　　５５２３
　　　　　　　　８０　　　　　　　　　　９２２５　
　　　１０４７２　　　　　　　　１１００６

【００２
２】本発明の腎細胞毒性阻止剤ポリマーと組合せて使用
しうるアミノグリコシド抗生物質はすべてのアミノグリ
コシド抗生物質でありうる。このようなアミノグリコシ
ド抗生物質の例として次のものがあげられる。 すべて当業技術において周知である。カナマイシン（Ｍ
ｅｒｃｋ　　Ｉｎｄｅｘ　　１１ｔｈ　　ｅｄ．＃５１
６１）、ジエンタマイシン（Ｍｅｒｃｋ　　Ｉｎｄｅｘ
　　１１ｔｈ　　ｅｄ．＃４２８３）、アミカシン（Ｍ
ｅｒｃｋ　　Ｉｎｄｅｘ　　１１ｔｈ　　ｅｄ．＃４１
６）、ジベカシン（Ｍｅｒｃｋ　　Ｉｎｄｅｘ　　１１
ｔｈ　　ｅｄ．＃２９８７）、トブラマイシン（Ｍｅｒ
ｃｋ　　Ｉｎｄｅｘ　　１１ｔｈ　　ｅｄ．＃９４１３
）、ストレプトマイシン（Ｍｅｒｃｋ　　Ｉｎｄｅｘ　
　１１ｔｈ　　ｅｄ．＃８７８６／８７８７）、パロモ
マイシン（Ｍｅｒｃｋ　　Ｉｎｄｅｘ　　１１ｔｈ　　
ｅｄ．＃６９８９）、ウツマイシン（Ｍｅｒｃｋ　　Ｉ
ｎｄｅｘ　　１１ｔｈ　　ｅｄ．＃８４９８）、イセパ
マイシン（Ｍｅｒｃｋ　　Ｉｎｄｅｘ　　１１ｔｈ　　
ｅｄ．＃４９８９）、ネオマイシン（Ｍｅｒｃｋ　　Ｉ
ｎｄｅｘ　　１１ｔｈ　　ｅｄ．＃６３６９）、ホルチ
マイシン（Ｍｅｒｃｋ　　Ｉｎｄｅｘ　　１１ｔｈ　　
ｅｄ．＃４１６５およびネチルマイシン（Ｍｅｒｃｋ　
　Ｉｎｄｅｘ　　１１ｔｈ　　ｅｄ．＃６３８９）。有
用な抗生物質として上記化合物類のいくつかの構造上の
変種（たとえばカナマイシンＡ，ＢおよびＣ、ジエンタ
マイシンＡ，Ｃ１　，Ｃ１ａ，Ｃ２　およびＤ；ネオマ
イシンＢおよびＣなど）があげられる。

【００２３】今日までに試験されたすべてのアミノグリ
コシド抗生物質は腎組織中に蓄積し、ある種の腎細胞毒
性ポテンシャルをもつ〔ＬｕｆｔらのＪ．Ｉｎｆ．Ｄｉ
ｓ．，１３８（４）：５４１−５９５（１９７８）〕。 従って、本発明はすべてのアミノグリコシド抗生物質に
ついて有用である。通常の実施において、これらのアミ
ノグリコシドの医薬的に許容しうる酸付加塩が使用され
る。

【００２４】明細書の記述について、「医薬的に許容し
うる酸付加塩」とは１分子のアミノグリコシド抗生物質
と１モル以上の医薬的に許容しうる酸との相互作用によ
って生成するモノ−およびポリ−塩を意味する。これら
の酸として酢酸、塩酸、硫酸、マレイン酸、リン酸、硝
酸、臭化水素酸、アスコルビン酸、リン酸、ならびにア
ミン含有医薬物質の塩を作るのに通常されるその他の酸
類、があげられる。

【００２５】本発明の特別の用途において、ポリアスパ
ルチン酸のカルボン酸基はアミノグリコシドのアミン基
の酸付加塩を作るのに利用することができる。必要なら
ば、生成アミノグリコシド・ポリアスパルチン酸塩は医
薬的に許容しうる塩基または医薬的に許容しうる酸のい
づれかで中和することもできる。

【００２６】腎細胞毒性アミノグリコシドと一緒に使用
する本発明の腎毒性阻止剤は、ホモポリマーおよび少量
のコモノマーとのポリアスパルチン酸の医薬的に許容し
うるコポリマーを包含するポリアスパルチン酸のポリマ
ーの水溶性塩の形体にある。有用なポリアスパルテート
−ポリマーは次のポリマー特性を与える物理的特性をも
つ。

【００２７】水溶性：すべて又は十分な数の有機酸部分
（すなわちカルボン酸基）は水溶性の医薬的に許容しう
るカチオン（Ｎａ＋　；Ｋ＋　；ＮＨ４　＋　；など）
との塩形成によりイオン形体にあり、それによってポリ
マーは容易に水溶性である。ポリマー中のすべての有機
酸部分がイオン性塩の形体にある必要はない。ポリアニ
オン性（イオン化した有機酸官能基部分、たとえばカル
ボキシレート、による）。糸球体を通過するに十分に小
さい分子量。適切な生理学的条件下にアミノグリコシド
を有効に錯化するに十分な大きさ。十分に安定（宿主の
代謝に対して耐性）。

【００２８】測定された分子量は多分散ポリアスパルテ
ートの「平均」分子量である。ポリマーの分子量および
構造特性を決定する技術と種々の方法は当業者にとって
周知である。

【００２９】本発明のポリアスパルテート阻止剤は種々
の様式でアミノグリコシドと一緒に使用することができ
る。アミノグリコシド抗生物質と阻止剤ポリマーは、好
ましくは医薬的に許容しうる担体と共に、単一の調剤単
位に混合することができる。たとえば不活性な医薬的に
許容しうる溶媒または分散剤中の共溶液または分散液な
どにすることができる。代表的に、医薬的に許容しうる
担体とアミノグリコシドと共に従来使用されたものまた
はアミノグリコシドと相溶性があるもののいづれかであ
りうる。

【００３０】あるいはまた、ポリアスパルテート阻止剤
は医薬的に許容しうる物質と別々に配合し、そしてアミ
ノグリコシド抗生物質と同時にあるいはアミノグリコシ
ドの投与の前または後のいづれかに、別々に投与するこ
ともできる。

【００３１】従って本発明の別の面は１種以上の医薬的
に許容しうる担体、賦形剤または希釈剤と組合せて、本
発明のポリアスパルチン酸含有ポリマーを活性成分とし
て含む又はポリアスパルチン酸含有ポリマーとアミノグ
リコシドの組合せを活性成分として含む、医薬処方物に
関する。

【００３２】投与の形体、調剤量および調剤頻度はアミ
ノグリコシド抗生物質と共に有利に使用する投与形体お
よび調剤の考察によって支配される。すなわち、たとえ
ば本発明の種々の組合せは、使用する特定の抗生物質の
所望の用途に関連する医薬および製薬上の慣習によって
示されるように、筋肉内、静脈内またはその他の様式で
投与することができる。

【００３３】アミノグリコシド抗生物質と組合せて使用
するポリアスパルテート阻止剤の量はアミノグリコシド
抗生物質の腎細胞毒性を減少させる量である。その量は
使用するアミノグリコシドに応じて変化する。代表的に
は、使用する改良されたポリアスパルテート阻止剤の量
はアミノグリコシド抗生物質の２重量部当り少なくとも
約１重量部である。上限は実際の重量とコストの考慮に
よっても影響される。抗生物質１部当り３３部までの量
の改良ポリアスパルテートが有効であることが示された
が、不必要であると思われる。これよりずっと低い水準
でもすぐれた阻止効果がえられるからである。改良ポリ
アスパルテート阻止剤とアミノグリコシドとの比の好ま
しい範囲は抗生物質１重量部当り阻止剤約０．５〜４重
量部である。

【００３４】本発明の改良されたポリアスパルテートの
重量基準での大きな阻止能力のために、保護効果を達成
するのに従来より少ない量の阻止剤を必要とするにすぎ
ない。これは経済的観点からのみならず治療上からも有
利である。薬剤の減少は薬剤の望ましくない反応が起る
可能性を少なくするからである。

【００３５】特定の平均分子量とβ−Ｄ「因子」の数の
改良された水溶性部分中和ポリアスパルテートを医薬的
に許容しうる塩の形体で使用することによって、本発明
の２つの目的が達成されることがわかる。

【００３６】１．アミノグリコシド抗生物質の腎細胞毒
性を阻止または減少する方法が提供され、その方法は約
６００〜８０００の平均分子量をもつポリアスパルテー
ト混合物の水溶性塩の形体の有効調剤量の投与から成る
。このポリアスパルテートは、単一の（ホモポリマー）
または少量の医薬的に許容しうるコモノマーとの混合の
（コポリマーの）いづれかのアスパルチン酸の重合した
単位から構成される。

【００３７】２．第２の目的は本発明の改良された腎細
胞毒性阻止性のポリアスパルテートの配合の結果として
腎細胞毒性を減少させた改良アミノグリコシド組成物を
提供する。これらの医薬組成物は抗菌有効量のアミノグ
リコシド、本発明の改良ポリアスパルテート、ポリマー
の腎細胞毒性阻止有効量、および製薬当業者にとって周
知の医薬的に許容しうる担体および／またはビヒクルか
ら成る。使用するアミノグリコシドの実際の量は薬剤処
方の標準の文献に記載の範囲にある（たとえば「Ｐｈｙ
ｓｉｃｉａｎｓ　　Ｄｅｒｋ　　Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ」
第４２版（１９６８）；「Ｄｒｕｇ　　Ｅｖａｌｕａｔ
ｉｏｎｓ」ＡＭＳ，第６版（１９８６）参照）。これら
の組成物による腎細胞毒性のリスクの減少のために、通
常推奨されるよりも大量のアミノグリコシド調剤量を与
えることが可能になる。

【００３８】本発明のポリアスパルテート−ポリマーの
腎細胞毒性阻止効果はジエンタマイシン誘起腎細胞毒性
のラット・モデルによって実証された。１０日間のジエ
ンタマイシン調剤投与（５０ｍｇ／ｋｇ／日）は血清中
の尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチニン強度の増大に
よって、ならびに腎臓の顕微鏡検査によって示されるよ
うに深刻な腎細胞毒性をもたらした。本発明の改良ポリ
アスパルテートの共投与はジエンタマイシン誘起腎細胞
毒性を阻止するかまたは顕著に軽減させた。

【００３９】

【実施例】実施例１ 研究Ｎｏ．１ ５匹のオスＦｉｓｃｈｅｒ３４４ラットから成る治療グ
ループに下記の皮下注射を一日に２回行なった。 ａ．水中７．３６％ＮａＣｌ，１．０ｍｌ／ｋｇｂ．７
．３６％ＮａＣｌ水中の２５ｍｇ／ｋｇのジエンタマイ
シン ｃ．２５ｍｇ／ｋｇのジエンタマイシンと２５ｍｇ／ｋ
ｇのナトリウム・ポリアスパルテート ｄ．２５ｍｇ／ｋｇのジエンタマイシンと２００ｍｇ／
ｋｇのナトリウム・ポリアスパルテート追加の治療グル
ープを上記ＣおよびＤの治療に使用して「β−Ｄ因子」
を研究した。「β−Ｄ因子」の異なる５種のポリアスパ
ルテート試料の値を研究した。

【００３９】研究Ｎｏ．１の種々のナトリウム・ポリア
スパルテート試料の性質は次のとおりであった。 　　　　試料Ｎｏ．　　　β−結合％　　　　Ｄ残基％
　　　　β−Ｄ因子（％β＋％Ｄ）　　　　　　１　　
　　　　　　　　５　　　　　　　　　　　　９　　　
　　　　　　　　　　　　　１４　　　　　　２　　　
　　　　　　　８　　　　　　　　　　１０　　　　　
　　　　　　　　　　　１８　　　　　　３　　　　　
　　　５４　　　　　　　　　　２０　　　　　　　　
　　　　　　　　７４　　　　　　４　　　　　　　　
６３　　　　　　　　　　２２　　　　　　　　　　　
　　　　　８５　　　　　　５　　　　　　　　６２　
　　　　　　　　　２４　　　　　　　　　　　　　　
　　８６すなわち各調剤プロトコール（およびｄについ
て合計５つの治療グループが存在した。

【００４０】注射は１０日間続けた。１１日目にラット
を殺し、腎臓を組織病理学的検査にかけた。下記の表１
に次の組織病理学的カテゴリー群のそれぞれのラットの
数を記録する。 Ａ．著るしい及び中程度の悪化変化 Ｂ．中程度の壊死変化 Ｃ．著るしい及び中程度の再生変化 Ｄ．中程度の管状悪化及び壊死 Ｅ．著るしい及び中程度の再生と肥大

【００４１】

【表１】

【００４２】決論：試料１および２は高調剤水準（プロ
トコールｄ）において部分的な保護を与えるにすぎない
のに対して試料３，４および５は高調剤水準において完
全な保護を与える。低調剤水準（プロトコールＣ）にお
いて、試料３，４および５は部分的な保護を与えるのに
対して試料１および２はごく僅かして保護を与えない。

【００４３】実施例２ 研究Ｎｏ．２ 治療グループは研究Ｎｏ１と同じであった。ただしそれ
ぞれの治療において４匹のＦ３４４ラットを使用した。 研究Ｎｏ．２における種々のナトリウム・ポリアスパル
テート試料の性質は次のとおりであった。 　　　　試料Ｎｏ．　　　β−結合％　　　　Ｄ残基％
　　　　β−Ｄ因子（％β＋％Ｄ）　　　　　　６　　
　　　　　　１１　　　　　　　　　　１９　　　　　
　　　　　　　　　　　３０　　　　　　７　　　　　
　　　７１　　　　　　　　　　２３　　　　　　　　
　　　　　　　　９４　　　　　　８　　　　　　　　
７５　　　　　　　　　　５０　　　　　　　　　　　
　　　１２５　　　　　　９　　　　　　　　７７　　
　　　　　　　　４９　　　　　　　　　　　　　　１
２６

【００４４】試験ラットの腎臓を組織病理学的検査
にかけた。それぞれの腎臓を次の点数で呼んだ。４＝深
刻、３＝中程度、２＝温和、１＝最少、０＝存在せず；
（悪化（ＤＥＧ）、壊死（ＮＥＣ）および再生（ＲＥＧ
）の組織病理学的カテゴリーそれぞれにおいて、次の表
２において）組織病理学的カテゴリーのそれぞれにおけ
る各グループの平均点数を示す。

【００４５】

【表２】

【００４６】結論：すべての試料は高い調剤量水準（プ
ロトコールｄ）で完全な保護を与え、低い調剤量水準（
プロトコールｃ）で部分的な保護を与えた。

【００４７】ポリアスパルチン酸のポリマー合成ポリア
スパルチン酸のポリマーの合成はポリマー化学の当業者
に周知の種々の方法によって行なうことができる。次は
本発明のポリアスパルチン酸ポリマー保護剤の製造に使
用しうるこれらの方法のうちの最も重要なものの要約で
ある。

【００４８】１．決められた長さ、Ｄ−およびＬ−異性
体の比、α−およびβ−結合、およびコポリマー含量の
アスパルチン酸ポリマーは成長しつつあるペプチド鎖に
モノマー単位を逐次に添加する通常のペプチド合成によ
って製造することができる。この試みの好ましい方法論
は固相ペプチド合成である。この合成法はＪ．Ｍ．Ｓｔ
ｅｗａｒｔおよびＪ．Ｄ．ＹｏｕｎｇのＳｏｌｉｄ　　
Ｐｈａｒｅ　　Ｐｅｐｔｉｄｅ　　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
，第２版，ピアース・ケミカル・カンパニー１９８４に
たとえば記載されているように広範囲に記載されている
。

【００４９】２．アミノ酸のホモポリマーおよびコポリ
マーの製造に広範囲に検討された方法はＮ−カルボキシ
−α−アミノ酸無水物中間体を使用する（たとえばＥ−
Ｋａｔｃｈａｌｓｋｉ，Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．
，１９５１，６，ｐ１２３参照）。この技術をアスパル
チン酸に利用するとき、エステル（多くの場合ベンジル
エステル）としてβ−カルボン酸がブロックされ、Ｎ−
カルボキシ無水物中間体が生成し、塩基で開始される重
合が行なわれ、そしてブロッキング基が除去されてポリ
アスパルチン酸が生成する。出発材料および重合と脱ブ
ロッキングの技術を変えることによって、種々の分子量
、Ｄ−およびＬ−異性体含量、およびα−およびβ−結
合含量のポリアスパルチン酸の試料を得ることが可能で
ある。Ｖ．ＳａｕｄｅｋらはＢｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，
１９８１，２０，１６１５において、脱ブロック条件の
変化が＜１０％〜７５％の範囲のβ−結合含量、および
０〜５０％の範囲のＤ−異性体含量を与えうることを示
した（所望のＤ−異性体百分率を含む出発材料を使用す
ることによって、Ｄ−異性体含量はもちろん更に変える
ことができる）。この研究において、β−結合含量は１
３Ｃ−ｎｍｒによって決定された（Ｈ．Ｐｉｖｃｏｖａ
らのＢｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，１９８１，２０，１６０
５参照）。（β−結合含量はまた電位差計滴定によって
も決定することができる。Ｖ．ＳａｕｄｅｋおよびＪ．
ＤｒｏｂｎｉｋのＰｏｌｙｍｅｒ　　Ｂｕｌｌ．，１９
８１，４，４７３参照）。Ｄ−異性体含量は加水分解お
よび光学回転によって決定された。ポリマーの分子量は
粘度測定によって決定された（ポリマー分子量測定の好
ましい方法は低角度レーザー光散乱である（Ｐ．Ｊ．Ｗ
ｙａｔｔらのＡｍｅｒ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８
８，２０，８６参照）。ポリマー分子量は重合開始剤の
量と重合温度の調節によって制御することができる（Ｅ
．Ｋａｔｃｈａｌｓｋｉ，Ｉｏｃ．ｃｉｔ．参照）。こ
の方法を使用してＮ−カルボキシ無水物類の混合物によ
る重合反応を行なうことによってコポリマーを製造する
こともできる（たとえばＹ．ＫｏｂａｙａｓｈｉらのＭ
ａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，１９７７，１０，１２７
１参照）。

【００５０】３．アスパルチン酸ポリマーの製造に特に
有効な方法は熱縮合である（Ｊ．ＫｏｖａｃｓらのＪ．
Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９６１，２６，１０８４参照）
。この技術において、アスパルチン酸またはその誘導体
を加熱してポリスクシンイミドを作り、次いでこれを加
水分解してポリアスパルチン酸を製造する。これらの変
形条件は（出発物質としてＤ−またはＬ−異性体のいづ
れを使用するかに応じて、約２０％〜約８０％の範囲の
Ｄ異性体（Ｅ．ＫｏｋｕｆｕｔａらのＢｕｌｌ．Ｓｏｃ
．Ｃｈｅｍ．Ｊａｐａｎ，１９７８，５１，１５５５参
照）および約５０％〜約８０％の範囲のβ−結合（Ｖ．
ＳａｕｄｅｋおよびＪ．ＤｒｏｂｎｉｋのＰｏｌｙｍｅ
ｒ　　Ｂｕｌｌ，１９８１，４，４７３；Ｈ．Ｐｉｃｏ
ｖａらのＰｏｌｙｍｅｒ，１９８２，２３，１２３７）
を含むポリアスパルチン酸を導く。このポリマーの分子
量は重合条件の変化によって制御することができる（Ｋ
．Ｋｏｋｕｆｕｔａらのｌｏｃ．ｃｉｔ．；Ｐ．Ｎｅｒ
ｉらのＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９７３，１６，８９３
参照）。この方法はまたアスパルチン酸コポリマーの製
造にも使用することができる（Ｓ．Ｗ．ＦｏｘおよびＫ
．ＨａｒａｄａのＡｎａｌｙｔｉｃａｌ　　Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ　　ｉｎ　　Ｐｒｏｔｅｉｎ　　Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ，Ｐ．Ａｌｅｘａｎｄｅｒ　　ａｎｄ　　Ｈ．Ｐ．Ｌ
ｕｎｄｇｒｅｎ，編集，パーガモン・プレス　　１９６
１年刊行，４巻，１２９頁参照）。

【００５１】４．ポリアスパルチン酸の製造のその他の
方法も記載された。Ｔ．ＭｕｎｅｇｕｍｉらのＢｕｌｌ
．Ｓｏｃ．Ｃｈｅｍ，Ｊａｐａｎ，１９８９，６２，２
７４８にはＮ−カルボベンジルオキシアスパルチン酸無
水物から製造したアスパルチン酸無水物の重合が記載さ
れている。α−ベンジル−β−Ｎ−スクシニミミジル−
Ｌ−アスパルテートの重合によるポリ−β−Ｌ−アスパ
ルチン酸の製造はＰ．Ｍ．ＨａｒｄｙらのＪ．Ｃｈｅｍ
．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ　　Ｉ，１９７２，６０５に記
載されている。

【００５２】次の実施例は本発明の改良されたポリアス
パルテート阻止剤の好ましい製造法を示すものである。 これらの実施例は説明の目的においてのみ掲げるもので
あって本発明の範囲を限定するものと解すべきではない
。

【００５３】実施例３ Ａ．β−ベンジル−Ｌ−アスパルテートのＮ−カルボキ
シ無水物誘導体乾燥ＴＨＦ（３０ｍｌ）中のβ−ベンジ
ル−Ｌ−アスパルテート（２．２３ｇ，１０ミリモル）
の懸濁液に、トリクロロメチルクロロホーメート（０．
６７ｍｌ，５．５ミリモル）をアルゴン雰囲気下に４５
℃で加えた。透明溶液を４５℃で１時間攪拌し、減圧下
に３０℃で溶媒を蒸留し去り、残渣にエチルアセテート
（２０ｍｌ）を加えて濾過した。濾液にヘキサン（５０
ｍｌ）を加えて、崇高な沈殿を分離し、ヘキサン（２×
５０ｍｌ）で洗浄して真空乾燥して白色の綿毛状固体（
２．３ｇ，９３％）をえた。

【数１】

【００５４】Ｂ．ジベンジル　　Ｌ−アスパルテートベ
ンゼン（５０ｍｌ）中のＬ−アスパルチン酸（３３．２
７ｇ，０．２５モル）、ベンジルアルコール（１００ｍ
ｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸−水和物（４８．５
ｇ，０．２５５モル）の混合物をＤｅａｎ　　Ｓｔａｒ
ｋ　　ｔｒａｐで１８時間還流させてＨ２　Ｏを共沸し
た。 ベンゼン（２００ｍｌ）および無水エーテル（６００ｍ
ｌ）を上記混合物に加えて４℃に放置した。結晶ｐ−ト
ルエンスルホン酸塩を濾過し、無水エーテルで洗浄し、
メタノールとエーテルの混合物から再結晶させた。この
塩（１５ｇ，３０．８ミリモル）をアセトン／Ｈ２　Ｏ
の１：１混合物（３００ｍｌ）にとかし、固体Ｋ２　Ｃ
Ｏ３　を少しづつ加えて塩基性にした。この混合物をＥ
ｔＯＡｃ（２×１５０ｍｌ）で抽出し、集めた有機相を
Ｈ２　Ｏ（１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２　ＳＯ４
　上で乾燥し、そして濃縮して油状物（９．５ｇ，９８
％）をえた。

【数２】

【００５５】Ｃ．ＮＣＡの重合の一般的方法乾燥ＣＨ３
　ＣＮ（２００ｍｌ）中のβ−ベンジル−Ｌ−アスパル
テートのＮ−カルボキシ無水物誘導体（１０ｇ，４０ミ
リモル）の溶液に、同じ溶媒５ｍｌ中のジベンジル−Ｌ
−アスパルテート（０．２５ｇ，０．８ミリモル）の溶
液を加えた。この混合物を室温で１２０時間、アルゴン
雰囲気下に激しく攪拌して、反応中に生成したＣＯ２　
をフラッシュ除去した。沈殿物を分離し、ＣＨ３　ＣＮ
（２００ｍｌ）およびｎ−ヘキサン（２００ｍｌ）で順
次に洗浄し、そしてＰ２　Ｏ５　（４．８３ｇ，５９％
）上で真空乾燥した。

【数３】

【００５６】Ｄ．上記Ｃからの重合生成物（０．３ｇ）
、エチルメチルサルファイド（６．５ｍｌ）およびｐ−
クレゾール（１ｇ）を反応容器に入れてＨＦラインに接
続した。この容器を−７８℃に０．５時間冷却し、ＨＦ
ラインを短時間真空にした。ＨＦを上記容器に予め印を
付けた水準（２．５ｍｌ）に留去させた。次いで、反応
を氷浴によって０℃に迅速に平衡化し、２時間激しく攪
拌させた。ＨＦとエチルメチルサルファイドと減圧下に
０℃で注意深く留去させた。残渣を１０％水性（ＮＨ４
　）２　ＣＯ３　（２０ｍｌ）にとかし、凍結乾燥して
ガム状物（０．３５ｇ）をえた。このガムをＨ２　Ｏに
とかし、混合床イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ　　５０Ｗ
−Ｘ８，イオン形体Ｈ＋　およびＲｅｘｙｎ２０３（Ｏ
Ｈ），イオン形体ＯＨ−　）のカラムを通過させてスル
ホニウム塩副生物を除去した。適切な留分を混合し、凍
結乾燥させて純粋な脱保護酸（０．０６ｇ，４３％）を
えた。このものをイオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ　　５０Ｗ
−Ｘ８　（イオン形体Ｎａ＋　）のカラムを通過させて
ナトリウム塩に転化した。

【数４】 このナトリウム・ポリアスパルテート生成物は実施例Ｎ
ｏ１に相当し、１４のβ−Ｄ因子をもつ。

【００５７】実施例４ ナトリウム・ポリアスパルテート（熱重合法）テトラリ
ン（３００ｍｌ）中の微粉末Ｄ，Ｌ−アスパルチン（３
０ｇ，０．２２５モル）の懸濁液を９６時間還流させて
Ｈ２　Ｏを共沸蒸留により除去した。えられた黄褐色沈
殿をエーテルで洗浄し、飽和ＮａＨＣＯ３　溶液（３×
１００ｍｌ）と共に分離した。最初の顆粒生成物はそれ
ぞれのすりつぶしにより微粉末に変わった。それぞれの
濾過中に遭遇する困難の程度に応じて濾過および／又は
遠心分離を行なった。生成物をＨ２　Ｏ，１％ＨＣｌそ
して最後にＨ２　Ｏで、濾液が塩を含まない（ＡｇＮＯ
３　試験）ようになるまで洗浄した。、淡黄色の無水ポ
リアスパルチン酸の収量は１６ｇであった。Ｈ２　Ｏ（
３０ｍｌ）中のこの物質（９．５ｇ）を、ｐＨ１０にな
るまで混合物を攪拌しながら２ＭのＮａＯＨ溶液（４５
ｍｌ）を滴下状に加えて処理した。この混合物を９５℃
に１５分間加熱して加水分解を完了させ、最後にｐＨを
１ＮのＨＣｌにより８に調整した。この溶液を濾過し、
Ｓｅｐｈａｄｅｘ　　Ｇ−２５（直径５ｃｍ，高さ１０
０ｃｍ）のカラムに通して部分分離を行ない完全な脱塩
を行なった。ＨＰＬＣによってこれらの留分を分析した
後、これらを混合して２つの大きな留分を作り、これら
を次いで凍結乾燥した。

【数５】 このナトリウム・ポリアスパルテート生成物は試料Ｎｏ
．８に相当し、１２５のβ−Ｄ因子をもつ。

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　次の特性すなわち（ａ）水溶性、（ｂ
   ）投与ビヒクルに溶かしたとき医薬的に許容しうるｐＨ
   、（ｃ）遊離酸基準で約６００〜９０００の平均分子量
   、および（ｄ）少なくとも３０のβ−Ｄ因子（該β−Ｄ
   因子はポリマー中のβ結合とアスパルチン酸単位の百分
   率の合計によって誘導される）、をもつことを特徴とす
   る医薬的に許容しうる塩形体のポリアスパルチン酸含有
   ポリマー。
2. 【請求項２】　　アスパルチン酸のポリアスパルチン酸
   ホモポリマーである請求項１のポリマー。
3. 【請求項３】　　アスパルチン酸とこれより少ない量の
   医薬的に許容しうるコモノマーとのコポリマーである請
   求項１のポリマー。
4. 【請求項４】　　請求項１〜３のいづれか１項のポリア
   スパルチン酸含有ポリマーを活性成分として含み、そし
   て１種以上のそれらの医薬的に許容しうる担体、賦形剤
   または希釈剤を活性成分と組合せて含む医薬処方物。
5. 【請求項５】　　活性成分として２重量部のアミノグリ
   コシド抗生物質と少なくとも１重量部の請求項１〜３の
   いづれか１項のポリアスパルチン酸含有ポリマーを含み
   、そして１種以上のそれらの医薬的に許容しうる担体、
   賦形剤または希釈剤をこれらの活性成分と組合せて含む
   医薬処方物。
6. 【請求項６】　　ポリアスパルチン酸含有ポリマーがア
   スパルチン酸のホモポリマーである請求項５の医薬処方
   物。
7. 【請求項７】　　アミノグリコシドがジエンタマイシン
   またはアミカシンである請求項５の医薬処方物。
8. 【請求項８】　　単位調剤形体の請求項４〜７のいづれ
   か１項の医薬処方物。
9. 【請求項９】　　医薬的に許容しうる形体で（１）アミ
   ノグリコシド８抗生物質および（２）請求項１〜８のい
   づれか１項のポリアスパルチン酸含有ポリマーを含む同
   時の又は逐次の投与に適するキット。