JPH0424994B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH0424994B2 JPH0424994B2 JP59014765A JP1476584A JPH0424994B2 JP H0424994 B2 JPH0424994 B2 JP H0424994B2 JP 59014765 A JP59014765 A JP 59014765A JP 1476584 A JP1476584 A JP 1476584A JP H0424994 B2 JPH0424994 B2 JP H0424994B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- glutathione
- cysteine
- glycine
- glutamic acid
- bacterial cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は、グルタチオンの製造法に関する。
グルタチオンは、医薬用として肝疾患治療剤あ
るいは解毒剤などに使用されている重用なペプチ
ドである。 グルタチオンの製造法としては、有機合成法、
発酵法による菌体内蓄積方法及び微生物もしくは
酵素変換法が知られている。 有機合成法としては、Ｌ−グルタミン酸とＬ−
システインとグリシンを縮合する際に保護基を導
入、脱離する工程が必要で繁雑な方法となる。発
酵法による菌体内蓄積方法としては、酵母を用い
てＬ−グルタミン酸あるいはＬ−システインある
いはグリシンを添加しながら行う方法（特開昭48
−92579，53−94089）が知られているが、このグ
ルタチオン生成系に関与する酵素系は、ATPを
必要とする合成酵素であるので、ATPを生成す
るためにグルタチオン生成を培養と同時に行うこ
とが必須であり、又生成グルタチオンは、少量か
つ菌体内に蓄積するので、グルタチオンの採取が
困難である。 微生物もしくは酵素変換法としては、シユード
モナス属、プロテウス属、バチルス属、エンテロ
バクター属、エルビニア属に属する微生物を水性
媒体中にて、Ｌ−グルタミン酸とＬ−システイン
とグリシンに作用せしめる方法（特開昭57−
2698）あるいはエシエリヒア属に属する微生物を
上記と同様に、反応せしめる方法（特開昭58−
20188）が知られているが、グルタチオン生成系
に関与する酵素系はATPを必要とするので、反
応には高価なATPの添加が必須であつた。 このような背景のもとに、本発明者らは、
ATPの添加を必要とせず、また、菌株を培養し
ながらグルタチオンを生成せしめる方法ではない
安価なグルタチオンの製造法を見出すべく鋭意研
究した結果、微生物をATPを含まない水性媒体
中にてＬ−グルタミン酸とＬ−システインとグリ
シンに作用せしめるだけでグルタチオンが効率よ
く生成することを見出し、本発明を完成させるに
至つた。 即ち、本発明は、アクロモバクター属、セラチ
ア属、フラボバクテリウム属、アグロバクテリウ
ム属、エシエリヒア属、シトロバクター属、コリ
ネバクテリウム属、ザルチナ属、ノカルデイア
属、シテロマイセス属、パキソレン属、トリゴノ
プシス属、シゾブラストスポリオン属、デバリオ
マイセス属、トリコスポロン属、キヤンデイダ
属、ロドトルラ属、サツカロマイセス属、ピヒア
属、クリプロコツカス属、ジオトリカム属、トル
ロプシス属、ハンセヌラ属、アルカリゲネス属、
ブレビバクテリウム属、アースロバクター属、ミ
クロコツカス属、クルイベロマイセス属に属しＬ
−グルタミン酸とＬ−システインとグリシンを縮
合してグルタチオンを生成する能力を有する微生
物を水性媒体中にてＬ−グルタミン酸とＬ−シス
テインとグリシンに作用せしめてグルタチオンを
生成することを特徴とするグルタチオンと製造方
法である。 グルタチオンを生成する能力を有する微生物を
Ｌ−グルタミン酸とＬ−システインとグリシンに
作用せしめてグルタチオンに変換せしめる方法は
水溶性媒体中にてＬ−グルタミン酸とＬ−システ
インとグリシンと上記微生物の菌体、培養液ある
いは菌体処理物とを接触せしめればよい。 本発明において用いるＬ−グルタミン酸とＬ−
システインとグリシンを縮合してグルタチオンに
変換せしめる能力を有する微生物としては、例え
ば、
るいは解毒剤などに使用されている重用なペプチ
ドである。 グルタチオンの製造法としては、有機合成法、
発酵法による菌体内蓄積方法及び微生物もしくは
酵素変換法が知られている。 有機合成法としては、Ｌ−グルタミン酸とＬ−
システインとグリシンを縮合する際に保護基を導
入、脱離する工程が必要で繁雑な方法となる。発
酵法による菌体内蓄積方法としては、酵母を用い
てＬ−グルタミン酸あるいはＬ−システインある
いはグリシンを添加しながら行う方法（特開昭48
−92579，53−94089）が知られているが、このグ
ルタチオン生成系に関与する酵素系は、ATPを
必要とする合成酵素であるので、ATPを生成す
るためにグルタチオン生成を培養と同時に行うこ
とが必須であり、又生成グルタチオンは、少量か
つ菌体内に蓄積するので、グルタチオンの採取が
困難である。 微生物もしくは酵素変換法としては、シユード
モナス属、プロテウス属、バチルス属、エンテロ
バクター属、エルビニア属に属する微生物を水性
媒体中にて、Ｌ−グルタミン酸とＬ−システイン
とグリシンに作用せしめる方法（特開昭57−
2698）あるいはエシエリヒア属に属する微生物を
上記と同様に、反応せしめる方法（特開昭58−
20188）が知られているが、グルタチオン生成系
に関与する酵素系はATPを必要とするので、反
応には高価なATPの添加が必須であつた。 このような背景のもとに、本発明者らは、
ATPの添加を必要とせず、また、菌株を培養し
ながらグルタチオンを生成せしめる方法ではない
安価なグルタチオンの製造法を見出すべく鋭意研
究した結果、微生物をATPを含まない水性媒体
中にてＬ−グルタミン酸とＬ−システインとグリ
シンに作用せしめるだけでグルタチオンが効率よ
く生成することを見出し、本発明を完成させるに
至つた。 即ち、本発明は、アクロモバクター属、セラチ
ア属、フラボバクテリウム属、アグロバクテリウ
ム属、エシエリヒア属、シトロバクター属、コリ
ネバクテリウム属、ザルチナ属、ノカルデイア
属、シテロマイセス属、パキソレン属、トリゴノ
プシス属、シゾブラストスポリオン属、デバリオ
マイセス属、トリコスポロン属、キヤンデイダ
属、ロドトルラ属、サツカロマイセス属、ピヒア
属、クリプロコツカス属、ジオトリカム属、トル
ロプシス属、ハンセヌラ属、アルカリゲネス属、
ブレビバクテリウム属、アースロバクター属、ミ
クロコツカス属、クルイベロマイセス属に属しＬ
−グルタミン酸とＬ−システインとグリシンを縮
合してグルタチオンを生成する能力を有する微生
物を水性媒体中にてＬ−グルタミン酸とＬ−シス
テインとグリシンに作用せしめてグルタチオンを
生成することを特徴とするグルタチオンと製造方
法である。 グルタチオンを生成する能力を有する微生物を
Ｌ−グルタミン酸とＬ−システインとグリシンに
作用せしめてグルタチオンに変換せしめる方法は
水溶性媒体中にてＬ−グルタミン酸とＬ−システ
インとグリシンと上記微生物の菌体、培養液ある
いは菌体処理物とを接触せしめればよい。 本発明において用いるＬ−グルタミン酸とＬ−
システインとグリシンを縮合してグルタチオンに
変換せしめる能力を有する微生物としては、例え
ば、
【表】
これらの微生物の菌体を作用させてグルタチオ
ン生成せしめるにほ、通常の培地を用いて、培養
後の菌体を用いてＬ−グルタミン酸とＬ−システ
インとグリシンとを反応せしめる方法でよい。 培養後の菌体を用いる方法に用いられる培地は
Ｌ−グルタミン酸とＬ−システインとグリシンを
含むほかは通常の炭素源、窒素源、無機イオンを
含有する通常の培地である。 更にビタミン、アミノ酸等の有機微量栄養素を
添加すると望ましい結果が得られる場合が多い。 炭素源としては、グルコース、シユクロース等
の炭水化物、酢酸等の有機酸、アルコール類、そ
の他が適宜使用される。窒素源としては、アンモ
ニアガス、アンモニア水、アンモニウム塩、その
他が用いられる。無機イオンとしては、マグネシ
ウムイオン、燐酸イオン、カリイオン、鉄イオ
ン、その他が必要に応じ適宜使用される。 培養は好気的条件下に、PH４ないし９、温度25
ないし40℃の適当な範囲に制御しつつ１ないし10
日培養を行えば望ましい結果が得られる。 菌体としては、培養終了後の培養液そのまま、
培養液より分離された菌体、洗浄された菌体など
いずれも使用可能である。菌体処理物としては凍
結乾燥菌体、アセトン乾燥菌体、トルエン、界面
活性剤等と接触せしめた菌体、リゾチームで処理
した菌体、超音波にさらした菌体、機械的に摩砕
した菌体等のほか、これら菌体処理物から得られ
たＬ−グルタミン酸とＬ−システインとグリシン
をグルタチオンに変換せしめる酵素活性を有する
酵素蛋白区分、更には、これらの菌体の固定化
物、菌体処理物の不溶化物、その他いずれも使用
できる。 水溶性媒体としては、水、バツフアー及びエタ
ノール等の有機溶媒を含むものが使用できる。更
に必要に応じて、微生物の生育に必要な栄養素、
抗酸化剤、界面活性剤、補酵素、ヒドロキシルア
ミン及び金属イオン等を水性媒体に添加すること
もできる。 上記微生物の培養液、培養菌体あるいは菌体処
理物をＬ−グルタミン酸とＬ−システインとグリ
シンと接触せしめて作用せしめる方法には、Ｌ−
グルタミン酸とＬ−システインとグリシンと培養
液、培養菌体あるいは菌体処理物を溶解または懸
濁した水性媒体を10℃ないし70℃の適当な温度に
調節し、PHを４ないし９に保ちつつ、暫時静置ま
たは撹拌すればよい。かくして５ないし100時間
も経過すれば水性媒体中に多量のグルタチオンが
生成蓄積される。 生成したグルタチオンは、公知の分離方法によ
り分離精製することができる。生成したグルタチ
オンはアミノ酸アナライザーを用いて測定した。 実施例 １ グルコース 2.0ｇ／dl、（NH4）2SO4 0.5ｇ／
dl、KH2PO4 0.1ｇ／dl、K2HPO4 0.1ｇ／dl、
MgSO4・7H2O 0.05ｇ／dl、FeSO4・7H2O １
mg／dl、MnSO4・4H2O １mg／dl、酵母エキス
1.0ｇ／dlｌ、ペプトン1.0ｇ／dlｌ、炭酸カルシ
ウム4.0ｇ／dlｌ、（別殺菌）を含む培地（PH7.0）
を500ml容フラスコに50ml入れ120℃で15分間殺菌
した。 これにブイヨン寒天培地で30℃にて、24時間培
養した表２の微生物を１白金耳接種し、30℃で20
時間培養した。この培養液より菌体を遠心分離に
より採取し、培養液と同量の生理食塩水で１回洗
浄し、菌体を集めた。 これらの菌体を表１に示す反応液Ａに５ｇ／dl
になるように添加し（終末PH6.0、５ml）、37℃に
16時間保持反応した。 この時に生成したグルタチオンをテトラチオネ
ート法（Fahey，R.C.；J.Bacteriol.121：144−
151，1975）で定量し、表２に示した。
ン生成せしめるにほ、通常の培地を用いて、培養
後の菌体を用いてＬ−グルタミン酸とＬ−システ
インとグリシンとを反応せしめる方法でよい。 培養後の菌体を用いる方法に用いられる培地は
Ｌ−グルタミン酸とＬ−システインとグリシンを
含むほかは通常の炭素源、窒素源、無機イオンを
含有する通常の培地である。 更にビタミン、アミノ酸等の有機微量栄養素を
添加すると望ましい結果が得られる場合が多い。 炭素源としては、グルコース、シユクロース等
の炭水化物、酢酸等の有機酸、アルコール類、そ
の他が適宜使用される。窒素源としては、アンモ
ニアガス、アンモニア水、アンモニウム塩、その
他が用いられる。無機イオンとしては、マグネシ
ウムイオン、燐酸イオン、カリイオン、鉄イオ
ン、その他が必要に応じ適宜使用される。 培養は好気的条件下に、PH４ないし９、温度25
ないし40℃の適当な範囲に制御しつつ１ないし10
日培養を行えば望ましい結果が得られる。 菌体としては、培養終了後の培養液そのまま、
培養液より分離された菌体、洗浄された菌体など
いずれも使用可能である。菌体処理物としては凍
結乾燥菌体、アセトン乾燥菌体、トルエン、界面
活性剤等と接触せしめた菌体、リゾチームで処理
した菌体、超音波にさらした菌体、機械的に摩砕
した菌体等のほか、これら菌体処理物から得られ
たＬ−グルタミン酸とＬ−システインとグリシン
をグルタチオンに変換せしめる酵素活性を有する
酵素蛋白区分、更には、これらの菌体の固定化
物、菌体処理物の不溶化物、その他いずれも使用
できる。 水溶性媒体としては、水、バツフアー及びエタ
ノール等の有機溶媒を含むものが使用できる。更
に必要に応じて、微生物の生育に必要な栄養素、
抗酸化剤、界面活性剤、補酵素、ヒドロキシルア
ミン及び金属イオン等を水性媒体に添加すること
もできる。 上記微生物の培養液、培養菌体あるいは菌体処
理物をＬ−グルタミン酸とＬ−システインとグリ
シンと接触せしめて作用せしめる方法には、Ｌ−
グルタミン酸とＬ−システインとグリシンと培養
液、培養菌体あるいは菌体処理物を溶解または懸
濁した水性媒体を10℃ないし70℃の適当な温度に
調節し、PHを４ないし９に保ちつつ、暫時静置ま
たは撹拌すればよい。かくして５ないし100時間
も経過すれば水性媒体中に多量のグルタチオンが
生成蓄積される。 生成したグルタチオンは、公知の分離方法によ
り分離精製することができる。生成したグルタチ
オンはアミノ酸アナライザーを用いて測定した。 実施例 １ グルコース 2.0ｇ／dl、（NH4）2SO4 0.5ｇ／
dl、KH2PO4 0.1ｇ／dl、K2HPO4 0.1ｇ／dl、
MgSO4・7H2O 0.05ｇ／dl、FeSO4・7H2O １
mg／dl、MnSO4・4H2O １mg／dl、酵母エキス
1.0ｇ／dlｌ、ペプトン1.0ｇ／dlｌ、炭酸カルシ
ウム4.0ｇ／dlｌ、（別殺菌）を含む培地（PH7.0）
を500ml容フラスコに50ml入れ120℃で15分間殺菌
した。 これにブイヨン寒天培地で30℃にて、24時間培
養した表２の微生物を１白金耳接種し、30℃で20
時間培養した。この培養液より菌体を遠心分離に
より採取し、培養液と同量の生理食塩水で１回洗
浄し、菌体を集めた。 これらの菌体を表１に示す反応液Ａに５ｇ／dl
になるように添加し（終末PH6.0、５ml）、37℃に
16時間保持反応した。 この時に生成したグルタチオンをテトラチオネ
ート法（Fahey，R.C.；J.Bacteriol.121：144−
151，1975）で定量し、表２に示した。
【表】
【表】
コンスピキユラ
【表】
ス〓フラジリス
Claims (1)
- １ アクロモバクター属、セラチア属、フラボバ
クテリウム属、アグロバクテリウム属、エシエリ
ヒア属、シトロバクター属、コリネバクテリウム
属、ザルチナ属、ノカルデイア属、シテロマイセ
ス属、バキソレン属、トリゴノプシス属、シゾブ
ラストスポリオン属、デバリオマイセス属、トリ
コスポロン属、キヤンデイダ属、ロドトルラ属、
サツカロマイセス属、ビヒア属、クリプトコツカ
ス属、ジオトリカム属、トルロプシス属、ハンセ
ヌラ属、アルカリゲネス属、ブレビバクテリウム
属、アースロバクター属、ミクロコツカス属、ク
ルイベロマイセス属に属し、ATPの不存在下で
Ｌ−グルタミン酸とＬ−システインとグリシンか
らグルタチオンを生成する能力を有する微生物を
ATPを含まない水性媒体中にてＬ−グルタミン
酸とＬ−システインとグリシンに作用せしめて、
グルタチオンを生成することを特徴とするグルタ
チオンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1476584A JPS60160894A (ja) | 1984-01-30 | 1984-01-30 | グルタチオンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1476584A JPS60160894A (ja) | 1984-01-30 | 1984-01-30 | グルタチオンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60160894A JPS60160894A (ja) | 1985-08-22 |
| JPH0424994B2 true JPH0424994B2 (ja) | 1992-04-28 |
Family
ID=11870167
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1476584A Granted JPS60160894A (ja) | 1984-01-30 | 1984-01-30 | グルタチオンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60160894A (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2233137B1 (en) * | 2005-11-09 | 2014-04-30 | Ajinomoto Co., Inc. | Calcium receptor activator |
| WO2008047792A1 (en) | 2006-10-16 | 2008-04-24 | Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. | Crystal of glutathione and process for production thereof |
| CN105581344A (zh) * | 2015-12-16 | 2016-05-18 | 开平牵牛生化制药有限公司 | 一种含还原型谷胱甘肽的益生菌产品及其制备方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5394088A (en) * | 1977-01-27 | 1978-08-17 | Kanebo Ltd | Preparation of glutathione |
| JPS5486691A (en) * | 1977-12-19 | 1979-07-10 | Tokuyama Soda Co Ltd | Preparation of glutathione |
| JPS6041599B2 (ja) * | 1979-12-07 | 1985-09-18 | 田辺製薬株式会社 | グルタチオンの製法 |
-
1984
- 1984-01-30 JP JP1476584A patent/JPS60160894A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS60160894A (ja) | 1985-08-22 |
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