JPH04267875A - グルクロニダーゼの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、アスペルギルス糸状菌
の生産する疎水性のアグリコンにグルクロン酸が直接結
合した糖鎖をもつ配糖体のグルクロナイド結合を直接加
水分解する基質特異性を有し、サポニン類の構造決定用
試薬あるいは食品の呈味性改良剤としての活用が期待さ
れる新規なグルクロニダーゼの製造方法に関するもので
ある。

【０００２】

【従来の技術】大豆は、栄養的、経済的に優れているこ
とから、将来蛋白質供給源として最も期待される素材の
一つでもあり、分離蛋白、濃縮蛋白、さらに、エクスト
ルーダーによる食肉的触感を持つ組織状蛋白などの新し
い食品素材も開発されている。これら食品素材は、溶解
性、気泡性、ゲル化能などの機能特性、栄養価および経
済性もほとんど満足する優れた素材であるにもかかわら
ず、その利用が制限されている。この理由として、苦味
、収斂味等の不快味によるものと考えられる。この不快
味を引き起す原因物質の探究の結果、大豆サポニンおよ
びイソフラボン成分であることが明らかにされた。今ま
で大豆サポニン成分として十数種類報告され、いずれも
トリテルペン骨格の３位にグルクロン酸がＯ−グリコシ
ド結合した共通の構造を持っている。また、このグルク
ロナイド結合部位で加水分解することにより不快味が著
しく減少することも報告されている。そこで、大豆サポ
ニンの酵素的分解による大豆食品の呈味改善について検
討した。

【０００３】市販のβ−グルクロニダーゼとして大腸菌
、海洋軟体動物、肝臓および薬用ヒルから抽出したもの
が報告されている。しかし、これらの酵素を用い大豆サ
ポニンの酵素的分解を試みた結果、いずれも大豆サポニ
ンを分解することができなかった。

【０００４】そこで、種々の微生物を用い大豆サポニン
分解菌の検索を行なった結果、アスペルギルス属糸状菌
が大豆サポニン分解能力を有し、さらに、古来より味噌
および醤油醸造に利用されてきたアスペルギルス．オリ
ーゼに、この大豆サポニンの分解能力のある酵素である
新規なグルクロニダーゼの高い生産能力を見いだすこと
ができた。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】このはじめて見つけた
アスペルギルス属糸状菌の生産する大豆サポニン分解酵
素たる新規なグルクロニダーゼは、グルクロナイドサポ
ニン類の構造決定用試薬として、また、大豆食品の呈味
性改善剤として食品工業への応用が期待されるが、量的
な生産方法が確立されていなかった。そこで、本発明に
おいては、このアスペルギルス属糸状菌の生産する新規
なグルクロニダーゼの生産性を向上させる新たな手段を
提供することを目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は、斯かる課題を
解決するため鋭意研究したところ、アスベルギルス属糸
状菌が生産する大豆サポニン分解能力をもつ新たな酵素
は、大豆サポニンに類似した構造、即ち、疎水性のアグ
リコンにグルクロン酸が直接結合した構造を有する物質
の存在によって生産される誘導酵素であるという新たな
知見を得たことに基いて完成したものである。

【０００７】即ち、本発明は、

【化２】 に示した構造式の基本骨格を有する物質、あるいは、大
豆サポニン（ソヤサポニンＩ）が、マメ科植物全体に共
通に存在する成分であることから、粉砕したマメ科植物
体またはその含水エタノール抽出物を、通常糸状菌の培
養に用いられる培地に添加して、アスペルギルス属糸状
菌の培養し、大豆サポニンを分解する酵素を誘導生産す
るようにしたところ、良好な結果が得られたので、上述
の目的を達成する手段として、アスペルギルス属糸状菌
を、前述の（化２）に示した構造式の基本骨格を有する
物質あるいは、マメ科植物体またはその含水エタノール
抽出物の存在下において培養して、グルクロニダーゼを
誘導生産するグルクロニダーゼの製造方法。

【０００８】この本発明手段における培地としては、通
常糸状菌の培養に用いられているものはいずれも使用で
きる。例えば、脱脂大豆とフスマを混合し、適度の水分
を添加した培地、あるいは、コーンスティープリカー、
大豆粕抽出物等の有機窒素、有機炭素を含み、無機成分
として硝酸ナトリウム、炭酸マグネシウム、硫酸銅等を
加えた培地等である。さらに、ｐＨ調整剤として炭酸カ
ルシウムを添加するのが好ましい。また、有機窒素源と
して大豆および大豆抽出物を添加した場合、マメ科植物
体またはその抽出物を添加する必要はない。調製した培
地をオートクレブ等で減菌し、アスペルギルス属菌株の
胞子を接種後、この種のカビの常法に従って培養を行な
う。アスペルギルス属菌株における新規なグルクロニダ
ーゼの生産能力に差かあるため、優れた菌株を選択する
ことが必要である。

【０００９】

【実施例１】大豆サポニン分解能力をもつ新規なβ−グ
ルクロニダーゼの生産に及ぼす各種誘導基質の影響につ
いて検討した。即ち、分子内にグルクロナイド結合を持
つ酸性多糖類（ヘパリン、コンドロイチン硫酸、ヒアウ
ロン酸）、トリテルペン骨格の３位にグルクロン酸が結
合した構造をもつサポニン類（大豆サポニン、キラヤサ
ポニン、グリチルリチン酸、β−エスシン）、グルクロ
ン酸を還元したグルコースとなっている還元体大豆サポ
ニンＢｂおよびサポニン類の各アグリコンをそれぞれ含
む液体培地でアスペルギルス属糸状菌を培養し、その培
養ろ液中の大豆サポニンＢｂ分解活性を測定した。

【００１０】その結果

【表１】 にあるように、グルクロナイド結合をもつサポニン類に
よって誘導され、その活性は、β−エスシンが最も高く
、続いて、大豆サポニン＞グリチルリチン酸＞キラヤサ
ポニンの順に高かった。一方、グルクロン酸を還元し、
グルクロナイド結合を持たない還元体大豆サポニンＢｂ
、酸性多糖類および各サポニン類のアグリコンによって
は誘導されなかった。従って、この生産された新規な酵
素は、分子内にグルクロナイド結合を持つサポニン類に
よって生産される誘導酵素であることが分かった。

【００１１】

【実施例２】アスペルギルス属糸状菌の培養は、ジャー
ファーメンターで行なった。即ち、１％大豆サポニンを
含む培地（４％マルツエキス、２％酵母エキス、０．２
％リン酸１　カリウム、０．２％硫酸マグネシウム、０
．０３％　塩化カルシウム）をベッセルに入れ減菌後、
胞子を接種し、ｐＨ６．０　〜６．５，３０℃に制御し
、除菌フィルター（０．２μｍ）を通した空気を毎分５
リットル送り培養した。

【００１２】その結果は、

【図１】にあるよう、菌の増殖に伴ない酵素活性が高く
なり、培養開始後４０〜４８時間で活性が最高に達し以
後減少した。

【００１３】この生産された新規な酵素は、ｐＨ４．０
　以下で著しい失活を受けることから、培養中のｐＨ管
理は、非常に重要である。即ち、対数増殖期には、急激
なｐＨの低下が起こり、ｐＨ３．０　以下にも達し、酵
素が完全に失活することから、培養中アルカリ剤により
ｐＨを５．０　以上に維持することが大切である。また
、培地に炭酸カルシウムを添加することは、ｐＨの低下
を防止するのに非常に有効である。

【００１４】

【発明の効果】本発明手段による、アスペルギルス属糸
状菌を培養して大豆サポニンの分解能力をもつ新規な酵
素であるグルクロニダーゼを生産する製造方法は、この
新規なグルクロニダーゼが、大豆サポニンに類似した構
造、即ち、疎水性のアグリコンにグルクロン酸が直接結
合した構造を有する物質の存在によって、アスペルギル
ス属糸状菌により生産される誘導酵素であることから、
このような物質を培地に添加しておいて、アスペルギル
ス属糸状菌を培養することで行なっているので、新規な
グルクロニダーゼの生産性が向上し、安価に大豆サポニ
ン分解能力を持つ酵素を提供することができるようにな
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】新規なβ−グルクロニダーゼ活性の経時的変化
を現わす図である。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　アスペルギルス属糸状菌を、下記構造
   式の基本構造をもつ物質の存在下で培養してグロクロニ
   ダーゼを誘導生産することを特徴とするグルクロニダー
   ゼの製造法。 【化１】 ただし、グルクロン酸の水酸基は、さらにグリコシド結
   合されていてもよいが、グルクロン酸のカルボキシル基
   は、フリーでなければならない。また、アグリコン（Ｒ
   ）は、トリテルペン程度の疎水性を持ち、ステロイド骨
   格でもよい。
2. 【請求項２】　　アスペルギルス属糸状菌の培養をマメ
   科植物体またはその含水エタノール抽出物の存在下でｐ
   Ｈ５．０　〜７．０　で行なう特許請求の範囲第１項記
   載の製造法。