JPH04271784A - ５−置換ヒダントインラセミ化酵素及びそれをコードする遺伝子 - Google Patents
５−置換ヒダントインラセミ化酵素及びそれをコードする遺伝子Info
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- JPH04271784A JPH04271784A JP3065591A JP6559191A JPH04271784A JP H04271784 A JPH04271784 A JP H04271784A JP 3065591 A JP3065591 A JP 3065591A JP 6559191 A JP6559191 A JP 6559191A JP H04271784 A JPH04271784 A JP H04271784A
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は５−置換ヒダントインを
ラセミ化する方法に関する。
ラセミ化する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＤＬ−５−置換ヒダントインを相当する
光学活性アミノ酸に変換する微生物として、フラボバク
テリウム属（特公昭６１−１２２９６）、バチルス属（
特公昭６３−２４８９５）、シュードモナス属（特公昭
６４−７１４７６）、アースロバクター属（特開昭６０
−２１４８８９）に属する細菌が知られている。ＤＬ−
５−置換ヒダントインを効率よく相当する光学活性アミ
ノ酸に変換するには、５−置換ヒダントインのラセミ化
が必要であり、これらの菌では化学的あるいは酵素的に
５−置換ヒダントインのラセミ化が起こっていると考え
られている。
光学活性アミノ酸に変換する微生物として、フラボバク
テリウム属（特公昭６１−１２２９６）、バチルス属（
特公昭６３−２４８９５）、シュードモナス属（特公昭
６４−７１４７６）、アースロバクター属（特開昭６０
−２１４８８９）に属する細菌が知られている。ＤＬ−
５−置換ヒダントインを効率よく相当する光学活性アミ
ノ酸に変換するには、５−置換ヒダントインのラセミ化
が必要であり、これらの菌では化学的あるいは酵素的に
５−置換ヒダントインのラセミ化が起こっていると考え
られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】中性付近のｐＨでは、
５−置換ヒダントインの化学的ラセミ化は、ほとんど進
行しない。また従来の細菌は、ラセミ化酵素の生産量が
充分ではなかった。
５−置換ヒダントインの化学的ラセミ化は、ほとんど進
行しない。また従来の細菌は、ラセミ化酵素の生産量が
充分ではなかった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、このような課
題を解決するために、ラセミ化酵素を持つ細菌から、そ
の遺伝子をクローニングし、遺伝子増幅、転写及び翻訳
活性を高めることにより目的の酵素生産量を高めようと
するものである。すなわち本発明は、５−置換ヒダント
インラセミ化酵素の遺伝子、それを含むＤＮＡ断片、そ
のＤＮＡ断片を組み込んだベクターＤＮＡ、そのベクタ
ーＤＮＡにより形質転換された微生物、該微生物を使用
する５−置換ヒダントインのラセミ化方法、該微生物か
ら調製したラセミ化酵素、及び本ラセミ化酵素による５
−置換ヒダントインのラセミ化方法である。
題を解決するために、ラセミ化酵素を持つ細菌から、そ
の遺伝子をクローニングし、遺伝子増幅、転写及び翻訳
活性を高めることにより目的の酵素生産量を高めようと
するものである。すなわち本発明は、５−置換ヒダント
インラセミ化酵素の遺伝子、それを含むＤＮＡ断片、そ
のＤＮＡ断片を組み込んだベクターＤＮＡ、そのベクタ
ーＤＮＡにより形質転換された微生物、該微生物を使用
する５−置換ヒダントインのラセミ化方法、該微生物か
ら調製したラセミ化酵素、及び本ラセミ化酵素による５
−置換ヒダントインのラセミ化方法である。
【０００５】本発明を更に具体的に説明する。
【０００６】本発明でラセミ化される５−置換ヒダント
インは、一般式（Ｉ）で示されるものである。 （但し、式中Ｒは５−置換基を示す）Ｒの具体例として
は、種々のアミノ酸に対応した５−置換ヒダントインに
対応したものがあり、例えば、β−ラクタム系抗生物質
の側鎖として重要なｐ−ヒドロキシ−Ｄ−フェニルグリ
シン、Ｄ−フェニルグリシン、Ｄ−システイン、Ｄ−ア
スパラギン酸など、アンジオテンシン変換酵素阻害剤の
合成原料としてのＤ−ホモフェニルアラニン或いは除草
剤であるＬ−２−アミノ−４−メチルフォスフィノ酪酸
に対応したものがあり、又更に、５−置換ヒダントイン
に対応するアミノ酸としてアラニン・ＣＨ３ ＣＨ（Ｎ
Ｈ２）ＣＯＯＨ、バリン・（ＣＨ３）２ ＣＨＣＨ（Ｎ
Ｈ２）ＣＯＯＨ、ロイシン・（ＣＨ３）２ ＣＨＣＨ２
ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨ、イソロイシン・ＣＨ３ Ｃ
Ｈ２ ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨ、セリン
・ＨＯＣＨ２ ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨ、スレオニン・
ＣＨ３ ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨ、メチオ
ニン・ＣＨ３ ＳＣＨ２（ＮＨ２）ＣＯＯＨ、フェニル
アラニンＣ６Ｈ５ＣＨ２ ＣＨ（ＮＨ２ ）ＣＯＯＨ、
チロシン・ＨＯＣ６ Ｈ４ ＣＨ２ ＣＨ（ ＮＨ２）
ＣＯＯＨ 、に対応したものが重要であり、アルキル基
を示すのもとして、メチル基、イソプロピル基、イソブ
チル基、１−メチルプロピル基、又、ヒドロキシル基、
アルキルチオ基、ヒドロキシフェニル基或いはインドリ
ル基等で置換されたアルキル基を示すものとして、ヒド
ロキシメチル基、１−ヒドロキシエチル基、２−メチル
チオエチル基、ベンジル基、ｐ−ヒドロキシベンジル基
或いはインドリルメチル基がある。 （１）遺伝子のクローニング シュードモナス属ＮＳ６７１菌（ＦＥＲＭ Ｐ−９５
４３）は、ＤＬ−５−置換ヒダントインを相当するＬ−
アミノ酸に変換する能力を持つ細菌である。我々は、こ
の細菌から５−置換ヒダントイン変換に関与する遺伝子
、すなわちＤＬ特異的ヒダントイナーゼとＬ特異的Ｎ−
カルバミルアミノ酸ハイドロラーゼの遺伝子をクローニ
ングした（特願平２−１３７１２０）。このとき同時に
クローニングされた遺伝子が５−置換ヒダントインラセ
ミ化酵素のものであることが明らかになった。
インは、一般式（Ｉ）で示されるものである。 （但し、式中Ｒは５−置換基を示す）Ｒの具体例として
は、種々のアミノ酸に対応した５−置換ヒダントインに
対応したものがあり、例えば、β−ラクタム系抗生物質
の側鎖として重要なｐ−ヒドロキシ−Ｄ−フェニルグリ
シン、Ｄ−フェニルグリシン、Ｄ−システイン、Ｄ−ア
スパラギン酸など、アンジオテンシン変換酵素阻害剤の
合成原料としてのＤ−ホモフェニルアラニン或いは除草
剤であるＬ−２−アミノ−４−メチルフォスフィノ酪酸
に対応したものがあり、又更に、５−置換ヒダントイン
に対応するアミノ酸としてアラニン・ＣＨ３ ＣＨ（Ｎ
Ｈ２）ＣＯＯＨ、バリン・（ＣＨ３）２ ＣＨＣＨ（Ｎ
Ｈ２）ＣＯＯＨ、ロイシン・（ＣＨ３）２ ＣＨＣＨ２
ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨ、イソロイシン・ＣＨ３ Ｃ
Ｈ２ ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨ、セリン
・ＨＯＣＨ２ ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨ、スレオニン・
ＣＨ３ ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨ、メチオ
ニン・ＣＨ３ ＳＣＨ２（ＮＨ２）ＣＯＯＨ、フェニル
アラニンＣ６Ｈ５ＣＨ２ ＣＨ（ＮＨ２ ）ＣＯＯＨ、
チロシン・ＨＯＣ６ Ｈ４ ＣＨ２ ＣＨ（ ＮＨ２）
ＣＯＯＨ 、に対応したものが重要であり、アルキル基
を示すのもとして、メチル基、イソプロピル基、イソブ
チル基、１−メチルプロピル基、又、ヒドロキシル基、
アルキルチオ基、ヒドロキシフェニル基或いはインドリ
ル基等で置換されたアルキル基を示すものとして、ヒド
ロキシメチル基、１−ヒドロキシエチル基、２−メチル
チオエチル基、ベンジル基、ｐ−ヒドロキシベンジル基
或いはインドリルメチル基がある。 （１）遺伝子のクローニング シュードモナス属ＮＳ６７１菌（ＦＥＲＭ Ｐ−９５
４３）は、ＤＬ−５−置換ヒダントインを相当するＬ−
アミノ酸に変換する能力を持つ細菌である。我々は、こ
の細菌から５−置換ヒダントイン変換に関与する遺伝子
、すなわちＤＬ特異的ヒダントイナーゼとＬ特異的Ｎ−
カルバミルアミノ酸ハイドロラーゼの遺伝子をクローニ
ングした（特願平２−１３７１２０）。このとき同時に
クローニングされた遺伝子が５−置換ヒダントインラセ
ミ化酵素のものであることが明らかになった。
【０００６】シュードモナス属ＮＳ６７１菌（ＦＥＲＭ
Ｐ−９５４３）のプラスミドｐＨＮ６７１を制限酵
素ＭｂｏＩにより部分消化し、制限酵素ＢａｍＨＩ消化
してホスファターゼ処理したプラスミドベクターｐＵＣ
１８にライゲーションした。この組換え体ＤＮＡを用い
て大腸菌ＪＭ１０３を形質転換し、得られた形質転換株
をＤＬ−５−（２−メチルチオエチル）ヒダントインを
唯一の窒素源とする寒天培地にまいた。目的の遺伝子を
含む組換え体ＤＮＡを持つ形質転換株は、ＤＬ−５−（
２−メチルチオエチル）ヒダントインをＬ−アミノ酸に
変換する際に生成するアンモニウムイオンを窒素源とし
て利用し、上記の寒天培地で生育し、コロニーを形成す
るので容易に分離できる。この選択培地上に形成された
コロニーから形質転換株を培養し、プラスミドＤＮＡを
調製した結果、約１０．２キロ塩基と約１５．５キロ塩
基の大きさを持つ２種類のプラスミドが得られた。前者
のプラスミドをｐＨＰＢ１２、後者のプラスミドをｐＨ
ＰＢ１４と命名した。プラスミドｐＨＰＢ１２は、ＤＬ
特異的ヒダントイナーゼの遺伝子（図１、ＯＲＦ２とＯ
ＲＦ３）とＬ特異的Ｎ−カルバミルアミノ酸ハイドロラ
ーゼの遺伝子（図１、ＯＲＦ４）を含んでいた（特願平
２−１３７１２０）。プラスミドｐＨＰＢ１４は、プラ
スミドｐＨＰＢ１２の挿入ＤＮＡの下流が約５．３キロ
塩基だけ伸びた構造になっていることが制限酵素消化に
よるＤＮＡ断片の解析から明らかになった。
Ｐ−９５４３）のプラスミドｐＨＮ６７１を制限酵
素ＭｂｏＩにより部分消化し、制限酵素ＢａｍＨＩ消化
してホスファターゼ処理したプラスミドベクターｐＵＣ
１８にライゲーションした。この組換え体ＤＮＡを用い
て大腸菌ＪＭ１０３を形質転換し、得られた形質転換株
をＤＬ−５−（２−メチルチオエチル）ヒダントインを
唯一の窒素源とする寒天培地にまいた。目的の遺伝子を
含む組換え体ＤＮＡを持つ形質転換株は、ＤＬ−５−（
２−メチルチオエチル）ヒダントインをＬ−アミノ酸に
変換する際に生成するアンモニウムイオンを窒素源とし
て利用し、上記の寒天培地で生育し、コロニーを形成す
るので容易に分離できる。この選択培地上に形成された
コロニーから形質転換株を培養し、プラスミドＤＮＡを
調製した結果、約１０．２キロ塩基と約１５．５キロ塩
基の大きさを持つ２種類のプラスミドが得られた。前者
のプラスミドをｐＨＰＢ１２、後者のプラスミドをｐＨ
ＰＢ１４と命名した。プラスミドｐＨＰＢ１２は、ＤＬ
特異的ヒダントイナーゼの遺伝子（図１、ＯＲＦ２とＯ
ＲＦ３）とＬ特異的Ｎ−カルバミルアミノ酸ハイドロラ
ーゼの遺伝子（図１、ＯＲＦ４）を含んでいた（特願平
２−１３７１２０）。プラスミドｐＨＰＢ１４は、プラ
スミドｐＨＰＢ１２の挿入ＤＮＡの下流が約５．３キロ
塩基だけ伸びた構造になっていることが制限酵素消化に
よるＤＮＡ断片の解析から明らかになった。
【０００７】（２）プラスミドｐＨＰＢ１４がコードす
る変換能 プラスミドｐＨＰＢ１４で大腸菌ＪＭ１０３を形質転換
し、アンピシリン耐性を指標にして形質転換株を得た。 この形質転換株は、Ｄ−５−（２−メチルチオエチル）
ヒダントインを全てＬ−メチオニンに変換する能力を有
していた。これに対して、プラスミドｐＨＰＢ１２によ
る形質転換株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１１７６）は、Ｄ−
５−（２−メチルチオエチル）ヒダントインをＮ−カル
バミル−Ｄ−メチオニンにしか変換できない。
る変換能 プラスミドｐＨＰＢ１４で大腸菌ＪＭ１０３を形質転換
し、アンピシリン耐性を指標にして形質転換株を得た。 この形質転換株は、Ｄ−５−（２−メチルチオエチル）
ヒダントインを全てＬ−メチオニンに変換する能力を有
していた。これに対して、プラスミドｐＨＰＢ１２によ
る形質転換株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１１７６）は、Ｄ−
５−（２−メチルチオエチル）ヒダントインをＮ−カル
バミル−Ｄ−メチオニンにしか変換できない。
【０００８】（３）プラスミドｐＨＰＢ１４の縮小プラ
スミドｐＨＰＢ１４の制限酵素地図を図１に示した。実
線部分はベクターＤＮＡであるｐＵＣ１８を、棒線部分
はシュードモナス属ＮＳ６７１菌（ＦＥＲＭＰ−９５４
３）のプラスミドｐＨＮ６７１由来の挿入ＤＮＡを示す
。７．５キロ塩基位置の制限酵素ＢａｍＨＩ部位よりも
上流の挿入ＤＮＡは、プラスミドｐＨＰＢ１２のものと
同一である。制限酵素名に附記した数字は挿入ＤＮＡの
始点からの距離（キロ塩基）を示す。塩基配列決定の結
果見いだされたオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ
）の領域と向きを矢印で示した。
スミドｐＨＰＢ１４の制限酵素地図を図１に示した。実
線部分はベクターＤＮＡであるｐＵＣ１８を、棒線部分
はシュードモナス属ＮＳ６７１菌（ＦＥＲＭＰ−９５４
３）のプラスミドｐＨＮ６７１由来の挿入ＤＮＡを示す
。７．５キロ塩基位置の制限酵素ＢａｍＨＩ部位よりも
上流の挿入ＤＮＡは、プラスミドｐＨＰＢ１２のものと
同一である。制限酵素名に附記した数字は挿入ＤＮＡの
始点からの距離（キロ塩基）を示す。塩基配列決定の結
果見いだされたオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ
）の領域と向きを矢印で示した。
【０００９】制限酵素ＳａｌＩで消化したプラスミドｐ
ＨＰＢ１４を、制限酵素ＡｆｌＩＩ、ＳｎａＢＩ、Ｓｐ
ｌＩ、ＳｐｈＩ、あるいはＸｈｏＩでそれぞれ二重消化
し、必要に応じＫｌｅｎｏｗ酵素反応により末端を平滑
化し、セルフライゲーションさせ、欠失プラスミドを得
た。これらの欠失プラスミドで大腸菌ＪＭ１０３を形質
転換し、得られた形質転換株の変換能を調べた。この結
果、プラスミドｐＨＰＢ１４の１０．２キロ塩基位置の
制限酵素ＳｎａＢＩ部位よりも下流を欠失させても、Ｄ
−５−（２−メチルチオエチル）ヒダントインを全てＬ
−メチオニンに変換する能力が保持されているが、９．
１キロ塩基位置の制限酵素ＳｐｌＩ部位よりも下流を欠
失させると、もはや上記変換能が消失する（Ｄ−５−（
２−メチルチオエチル）ヒダントインをＮ−カルバミル
−Ｄ−メチオニンに変換する）ことが分かった。
ＨＰＢ１４を、制限酵素ＡｆｌＩＩ、ＳｎａＢＩ、Ｓｐ
ｌＩ、ＳｐｈＩ、あるいはＸｈｏＩでそれぞれ二重消化
し、必要に応じＫｌｅｎｏｗ酵素反応により末端を平滑
化し、セルフライゲーションさせ、欠失プラスミドを得
た。これらの欠失プラスミドで大腸菌ＪＭ１０３を形質
転換し、得られた形質転換株の変換能を調べた。この結
果、プラスミドｐＨＰＢ１４の１０．２キロ塩基位置の
制限酵素ＳｎａＢＩ部位よりも下流を欠失させても、Ｄ
−５−（２−メチルチオエチル）ヒダントインを全てＬ
−メチオニンに変換する能力が保持されているが、９．
１キロ塩基位置の制限酵素ＳｐｌＩ部位よりも下流を欠
失させると、もはや上記変換能が消失する（Ｄ−５−（
２−メチルチオエチル）ヒダントインをＮ−カルバミル
−Ｄ−メチオニンに変換する）ことが分かった。
【００１０】（４）塩基配列の決定
プラスミドｐＨＰＢ１４の７．０キロ塩基位置から１１
．１キロ塩基位置までの制限酵素ＥｃｏＲＩ消化断片を
Ｍ１３ｍｐ１８ファージにサブクローニングした。この
サブクローニングされた挿入ＤＮＡ部分を各種制限酵素
あるいはキロシークエンス用ディリーションキット（宝
酒造）を用いて縮め、ジデオキシ法によって塩基配列を
決定した。プラスミドｐＨＰＢ１４の７．５キロ塩基位
置の制限酵素ＢａｍＨＩ部位よりも上流の塩基配列は、
プラスミドｐＨＰＢ１２の挿入ＤＮＡの塩基配列と同一
であった。この結果、２個の新しいオープンリーディン
グフレーム、ＯＲＦ５とＯＲＦ６が見いだされた（図１
）。
．１キロ塩基位置までの制限酵素ＥｃｏＲＩ消化断片を
Ｍ１３ｍｐ１８ファージにサブクローニングした。この
サブクローニングされた挿入ＤＮＡ部分を各種制限酵素
あるいはキロシークエンス用ディリーションキット（宝
酒造）を用いて縮め、ジデオキシ法によって塩基配列を
決定した。プラスミドｐＨＰＢ１４の７．５キロ塩基位
置の制限酵素ＢａｍＨＩ部位よりも上流の塩基配列は、
プラスミドｐＨＰＢ１２の挿入ＤＮＡの塩基配列と同一
であった。この結果、２個の新しいオープンリーディン
グフレーム、ＯＲＦ５とＯＲＦ６が見いだされた（図１
）。
【００１１】（５）欠失プラスミドの作製プラスミドｐ
ＨＰＢ１４を制限酵素ＳａｌＩとＳｎａＢＩで二重消化
し、Ｋｌｅｎｏｗ酵素処理後、セルフライゲーションさ
せ、プラスミドｐＳＮＡ１０１（ＯＲＦ２、ＯＲＦ３、
ＯＲＦ４、ＯＲＦ５、及びＯＲＦ６を含む）を作製した
。プラスミドｐＳＮＡ１０１を制限酵素ＫｐｎＩで消化
し、セルフライゲーションさせ、プラスミドｐＫＰＮ１
７（ＯＲＦ６を含む）を作製した。プラスミドｐＫＰＮ
１７を制限酵素ＥｃｏＲＩで消化し、ホスファターゼ処
理し、プラスミドｐＨＰＢ１２の６．４キロ塩基の制限
酵素ＥｃｏＲＩ消化断片（ＯＲＦ２、ＯＲＦ３、及びＯ
ＲＦ４を含む）とライゲーションさせた。オープンリー
ディングフレームの向きが同じになるようにＤＮＡ断片
が挿入されたものを選び、プラスミドｐＳＮＡｄＥＥ（
ＯＲＦ２、ＯＲＦ３、ＯＲＦ４、及びＯＲＦ６を含む）
と命名した。プラスミドｐＳＮＡｄＥＥで大腸菌ＪＭ１
０３を形質転換して得られた形質転換株は、Ｄ−５−（
２−メチルチオエチル）ヒダントインを全てＬ−メチオ
ニンに変換する能力を有していた。すなわち、ＯＲＦ５
は本変換には必要ないことが分かった。したがって、Ｏ
ＲＦ６が本変換において重要な働きをしていると考えら
れた。
ＨＰＢ１４を制限酵素ＳａｌＩとＳｎａＢＩで二重消化
し、Ｋｌｅｎｏｗ酵素処理後、セルフライゲーションさ
せ、プラスミドｐＳＮＡ１０１（ＯＲＦ２、ＯＲＦ３、
ＯＲＦ４、ＯＲＦ５、及びＯＲＦ６を含む）を作製した
。プラスミドｐＳＮＡ１０１を制限酵素ＫｐｎＩで消化
し、セルフライゲーションさせ、プラスミドｐＫＰＮ１
７（ＯＲＦ６を含む）を作製した。プラスミドｐＫＰＮ
１７を制限酵素ＥｃｏＲＩで消化し、ホスファターゼ処
理し、プラスミドｐＨＰＢ１２の６．４キロ塩基の制限
酵素ＥｃｏＲＩ消化断片（ＯＲＦ２、ＯＲＦ３、及びＯ
ＲＦ４を含む）とライゲーションさせた。オープンリー
ディングフレームの向きが同じになるようにＤＮＡ断片
が挿入されたものを選び、プラスミドｐＳＮＡｄＥＥ（
ＯＲＦ２、ＯＲＦ３、ＯＲＦ４、及びＯＲＦ６を含む）
と命名した。プラスミドｐＳＮＡｄＥＥで大腸菌ＪＭ１
０３を形質転換して得られた形質転換株は、Ｄ−５−（
２−メチルチオエチル）ヒダントインを全てＬ−メチオ
ニンに変換する能力を有していた。すなわち、ＯＲＦ５
は本変換には必要ないことが分かった。したがって、Ｏ
ＲＦ６が本変換において重要な働きをしていると考えら
れた。
【００１２】（６）ＯＲＦ６の機能
プラスミドｐＫＰＮ１７で形質転換された大腸菌ＪＭ１
０３とプラスミドｐＨＰＢ１２で形質転換された大腸菌
ＪＭ１０３（ＦＥＲＭ Ｐ−１１１７６）の混合培養
に、Ｄ−５−（２−メチルチオエチル）ヒダントインを
添加すると、全てＬ−メチオニンに変換された。このこ
とはＯＲＦ６が、ＯＲＦ２、ＯＲＦ３、及びＯＲＦ４と
は別の細胞で発現されても正常に機能することを示して
いる。プラスミドｐＫＰＮ１７で形質転換された大腸菌
ＪＭ１０３の培養に、Ｄ−５−（２−メチルチオエチル
）ヒダントインを添加し、一定時間反応させた後、細胞
を濾過により除き、プラスミドｐＨＰＢ１２で形質転換
された大腸菌ＪＭ１０３（ＦＥＲＭ Ｐ−１１１７６
）を代わりに加えて培養すると、反応時間に応じてＬ−
メチオニンの生成割合が増え、Ｎ−カルバミル−Ｄ−メ
チオニンの生成割合が減少し、１：１（モル比）の平衡
に達した。このことはＯＲＦ６が５−置換ヒダントイン
ラセミ化酵素の遺伝子であることを示している。
０３とプラスミドｐＨＰＢ１２で形質転換された大腸菌
ＪＭ１０３（ＦＥＲＭ Ｐ−１１１７６）の混合培養
に、Ｄ−５−（２−メチルチオエチル）ヒダントインを
添加すると、全てＬ−メチオニンに変換された。このこ
とはＯＲＦ６が、ＯＲＦ２、ＯＲＦ３、及びＯＲＦ４と
は別の細胞で発現されても正常に機能することを示して
いる。プラスミドｐＫＰＮ１７で形質転換された大腸菌
ＪＭ１０３の培養に、Ｄ−５−（２−メチルチオエチル
）ヒダントインを添加し、一定時間反応させた後、細胞
を濾過により除き、プラスミドｐＨＰＢ１２で形質転換
された大腸菌ＪＭ１０３（ＦＥＲＭ Ｐ−１１１７６
）を代わりに加えて培養すると、反応時間に応じてＬ−
メチオニンの生成割合が増え、Ｎ−カルバミル−Ｄ−メ
チオニンの生成割合が減少し、１：１（モル比）の平衡
に達した。このことはＯＲＦ６が５−置換ヒダントイン
ラセミ化酵素の遺伝子であることを示している。
【００１３】（７）ＯＲＦ６遺伝子産物（５−置換ヒダ
ントインラセミ化酵素）の分子量 プラスミドｐＫＰＮ１７で大腸菌ＪＭ１０３を形質転換
し形質転換株を得た。本形質転換株は、工業技術院微生
物工業技術研究所（微工研）に微工研条寄第３１８８号
（ＦＥＲＭ ＢＰ−３１８８）として寄託された。こ
の形質転換株を培養して得た菌体を破砕し、可溶性画分
を硫安塩析によって分画し、疎水クロマトグラフィー、
イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラ
フィーにより５−置換ヒダントインラセミ化酵素を精製
した。精製された酵素のＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動上での見かけの分子量は３１，９００であっ
た。ゲル濾過クロマトグラフィーから求められた分子量
は約１３０，０００であった。このことから本ラセミ化
酵素は四量体構造を持っていると推定される。配列表に
ＯＲＦ６を含むプラスミドｐＫＰＮ１７の挿入ＤＮＡの
部分塩基配列を示した。ＯＲＦ６は１９６番目塩基のＡ
ＴＧと２０２番目塩基のＡＴＧの２つの開始コドンで始
まる可能性がある。精製された酵素のＮ端アミノ酸配列
を分析した結果、ＭｅｔＬｙｓＩｌｅＬｙｓＶａｌＩｌ
ｅＡｓｎＰｒｏＡｓｎＴｈｒの配列であることが明らか
となった。従って、本遺伝子は、２０２番目塩基のＡＴ
Ｇを開始コドンとしていることが分かる。塩基配列から
判明する５−置換ヒダントインラセミ化酵素の分子量は
２７，０９０である。
ントインラセミ化酵素）の分子量 プラスミドｐＫＰＮ１７で大腸菌ＪＭ１０３を形質転換
し形質転換株を得た。本形質転換株は、工業技術院微生
物工業技術研究所（微工研）に微工研条寄第３１８８号
（ＦＥＲＭ ＢＰ−３１８８）として寄託された。こ
の形質転換株を培養して得た菌体を破砕し、可溶性画分
を硫安塩析によって分画し、疎水クロマトグラフィー、
イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラ
フィーにより５−置換ヒダントインラセミ化酵素を精製
した。精製された酵素のＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動上での見かけの分子量は３１，９００であっ
た。ゲル濾過クロマトグラフィーから求められた分子量
は約１３０，０００であった。このことから本ラセミ化
酵素は四量体構造を持っていると推定される。配列表に
ＯＲＦ６を含むプラスミドｐＫＰＮ１７の挿入ＤＮＡの
部分塩基配列を示した。ＯＲＦ６は１９６番目塩基のＡ
ＴＧと２０２番目塩基のＡＴＧの２つの開始コドンで始
まる可能性がある。精製された酵素のＮ端アミノ酸配列
を分析した結果、ＭｅｔＬｙｓＩｌｅＬｙｓＶａｌＩｌ
ｅＡｓｎＰｒｏＡｓｎＴｈｒの配列であることが明らか
となった。従って、本遺伝子は、２０２番目塩基のＡＴ
Ｇを開始コドンとしていることが分かる。塩基配列から
判明する５−置換ヒダントインラセミ化酵素の分子量は
２７，０９０である。
【００１４】（８）５−置換ヒダントインラセミ化酵素
遺伝子の利用法 本発明の遺伝子を含むＤＮＡ断片とベクターＤＮＡとの
組換え体ＤＮＡを導入した大腸菌などの微生物を培地に
培養し、Ｄ−５−置換ヒダントインあるいはＬ−５−置
換ヒダントインを添加すればラセミ体の５−置換ヒダン
トインが得られる。また該微生物から５−置換ヒダント
インラセミ化酵素を調製して、酵素反応を行っても同様
である。本発明の方法を、５−置換ヒダントインをヒダ
ントイナーゼ反応によって相当するＮ−カルバミルアミ
ノ酸に変換する方法、及び光学活性Ｎ−カルバミルアミ
ノ酸をＮ−カルバミルアミノ酸ハイドロラーゼ反応によ
って相当する光学活性アミノ酸に変換する方法と組み合
わせて用いれば、原料のＤＬ−５−置換ヒダントインの
全量を効率よく光学活性アミノ酸に変換することができ
る。
遺伝子の利用法 本発明の遺伝子を含むＤＮＡ断片とベクターＤＮＡとの
組換え体ＤＮＡを導入した大腸菌などの微生物を培地に
培養し、Ｄ−５−置換ヒダントインあるいはＬ−５−置
換ヒダントインを添加すればラセミ体の５−置換ヒダン
トインが得られる。また該微生物から５−置換ヒダント
インラセミ化酵素を調製して、酵素反応を行っても同様
である。本発明の方法を、５−置換ヒダントインをヒダ
ントイナーゼ反応によって相当するＮ−カルバミルアミ
ノ酸に変換する方法、及び光学活性Ｎ−カルバミルアミ
ノ酸をＮ−カルバミルアミノ酸ハイドロラーゼ反応によ
って相当する光学活性アミノ酸に変換する方法と組み合
わせて用いれば、原料のＤＬ−５−置換ヒダントインの
全量を効率よく光学活性アミノ酸に変換することができ
る。
【００１５】
【実施例】実施例１．各種５−置換ヒダントインのラセ
ミ化 プラスミドｐＫＰＮ１７で形質転換された大腸菌ＪＭ１
０３（ＦＥＲＭ ＢＰ−３１８８）を５０ｍｌのＬＢ
培地に植菌し、６００ｎｍのＯＤが約０．２になるまで
３０℃で振盪培養した。２５０μｌの２００ｍＭ Ｉ
ＰＴＧを添加し、さらに３０℃で２時間振盪培養した。 この培養の２０ＯＤ（６００ｎｍ）分を遠心し、菌体を
得た。これを０．２％のＤ体あるいはＬ体の各種５−置
換ヒダントインを含む１０ｍｌの２０ｍＭ トリス塩
酸バッファー（ｐＨ７．５）、０．１Ｍ塩化ナトリウム
に懸濁し、３０℃で振盪させた。一定時間後に、１ｍｌ
ずつ抜き取り、遠心と濾過によって菌体を除き上清を得
た。
ミ化 プラスミドｐＫＰＮ１７で形質転換された大腸菌ＪＭ１
０３（ＦＥＲＭ ＢＰ−３１８８）を５０ｍｌのＬＢ
培地に植菌し、６００ｎｍのＯＤが約０．２になるまで
３０℃で振盪培養した。２５０μｌの２００ｍＭ Ｉ
ＰＴＧを添加し、さらに３０℃で２時間振盪培養した。 この培養の２０ＯＤ（６００ｎｍ）分を遠心し、菌体を
得た。これを０．２％のＤ体あるいはＬ体の各種５−置
換ヒダントインを含む１０ｍｌの２０ｍＭ トリス塩
酸バッファー（ｐＨ７．５）、０．１Ｍ塩化ナトリウム
に懸濁し、３０℃で振盪させた。一定時間後に、１ｍｌ
ずつ抜き取り、遠心と濾過によって菌体を除き上清を得
た。
【００１６】この上清に存在する５−置換ヒダントイン
のＤ体とＬ体の割合を光学異性体分離用カラムＣＨＩＲ
ＡＬＰＡＫ ＷＨ（ダイセル化学工業）を用いてＨＰ
ＬＣによって分析し、結果を表１に示した。対照として
、プラスミドｐＵＣ１８で形質転換された大腸菌ＪＭ１
０３を用いて上記と同様の操作を行った結果、Ｄ体また
はＬ体の５−置換ヒダントインからの、それぞれＬ体ま
たはＤ体の５−置換ヒダントインの生成は検出できなか
った。
のＤ体とＬ体の割合を光学異性体分離用カラムＣＨＩＲ
ＡＬＰＡＫ ＷＨ（ダイセル化学工業）を用いてＨＰ
ＬＣによって分析し、結果を表１に示した。対照として
、プラスミドｐＵＣ１８で形質転換された大腸菌ＪＭ１
０３を用いて上記と同様の操作を行った結果、Ｄ体また
はＬ体の５−置換ヒダントインからの、それぞれＬ体ま
たはＤ体の５−置換ヒダントインの生成は検出できなか
った。
【００１７】
【００１８】実施例２．ラセミ化酵素の精製プラスミド
ｐＫＰＮ１７で形質転換された大腸菌ＪＭ１０３（ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−３１８８）を５０ｍｌのＬＢ培地に植菌
し、３０℃で一晩前培養した。この全量を３Ｌの培地（
６ｇ／Ｌ リン酸二ナトリウム、３ｇ／Ｌ リン酸
一カリウム、０．５ｇ／Ｌ 塩化ナトリウム、１ｇ／
Ｌ 塩化アンモニウム、５ｍＭ 硫酸マグネシウム
、０．５ｍＭ 塩化カルシウム、１％ グリセロー
ル、２％ 酵母エキス）に加え、ジャーファーメンタ
ーで５５０ｎｍのＯＤが約１０になるまで３０℃で培養
した。これに１５ｍｌの２００ｍＭ ＩＰＴＧを添加
し、さらに約２時間半培養した後、遠心によって集菌し
、約１００ｇの湿菌体を得た。
ｐＫＰＮ１７で形質転換された大腸菌ＪＭ１０３（ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−３１８８）を５０ｍｌのＬＢ培地に植菌
し、３０℃で一晩前培養した。この全量を３Ｌの培地（
６ｇ／Ｌ リン酸二ナトリウム、３ｇ／Ｌ リン酸
一カリウム、０．５ｇ／Ｌ 塩化ナトリウム、１ｇ／
Ｌ 塩化アンモニウム、５ｍＭ 硫酸マグネシウム
、０．５ｍＭ 塩化カルシウム、１％ グリセロー
ル、２％ 酵母エキス）に加え、ジャーファーメンタ
ーで５５０ｎｍのＯＤが約１０になるまで３０℃で培養
した。これに１５ｍｌの２００ｍＭ ＩＰＴＧを添加
し、さらに約２時間半培養した後、遠心によって集菌し
、約１００ｇの湿菌体を得た。
【００１９】上記湿菌体を５００ｍｌの２０ｍＭ ト
リス塩酸バッファー（ｐＨ７．５）、０．１Ｍ 塩化
ナトリウムに懸濁し、ゴーリンホモジェナイザーによっ
て菌体を破砕した。これを遠心にかけ不溶物を除き、上
清を得た。この上清の６０−９０％飽和硫安塩析画分を
１００ｍｌの２０ｍＭ トリス塩酸バッファー（ｐＨ
７．５）、０．１Ｍ 塩化ナトリウム、０．５Ｍ
硫安に溶解し、同じバッファーで平衡化したブチル−ト
ヨパール（ＴＯＳＯＨ）の疎水クロマトグラフィーにか
けた。
リス塩酸バッファー（ｐＨ７．５）、０．１Ｍ 塩化
ナトリウムに懸濁し、ゴーリンホモジェナイザーによっ
て菌体を破砕した。これを遠心にかけ不溶物を除き、上
清を得た。この上清の６０−９０％飽和硫安塩析画分を
１００ｍｌの２０ｍＭ トリス塩酸バッファー（ｐＨ
７．５）、０．１Ｍ 塩化ナトリウム、０．５Ｍ
硫安に溶解し、同じバッファーで平衡化したブチル−ト
ヨパール（ＴＯＳＯＨ）の疎水クロマトグラフィーにか
けた。
【００２０】ラセミ化酵素の活性は次のようにして検出
した。すなわち、１ｍｌのＬＢ培地にプラスミドｐＨＰ
Ｂ１２で形質転換された大腸菌ＪＭ１０３を植菌し、こ
れに１００μｌの２％ Ｄ−５−（２−メチルチオエ
チル）ヒダントイン、５μｌの２００ｍＭ ＩＰＴＧ
、そして１μｌの被検液を加え、３０℃で一晩振盪培養
した。培養液をＴＬＣにより分析し、メチオニン（Ｌ体
）またはＮ−カルバミルメチオニン（Ｄ体）の生成を調
べた。メチオニン（Ｌ体）の生成はラセミ化酵素活性の
存在を示している。また、ラセミ化酵素活性がないとき
はＮ−カルバミルメチオニン（Ｄ体）のみが生成する。
した。すなわち、１ｍｌのＬＢ培地にプラスミドｐＨＰ
Ｂ１２で形質転換された大腸菌ＪＭ１０３を植菌し、こ
れに１００μｌの２％ Ｄ−５−（２−メチルチオエ
チル）ヒダントイン、５μｌの２００ｍＭ ＩＰＴＧ
、そして１μｌの被検液を加え、３０℃で一晩振盪培養
した。培養液をＴＬＣにより分析し、メチオニン（Ｌ体
）またはＮ−カルバミルメチオニン（Ｄ体）の生成を調
べた。メチオニン（Ｌ体）の生成はラセミ化酵素活性の
存在を示している。また、ラセミ化酵素活性がないとき
はＮ−カルバミルメチオニン（Ｄ体）のみが生成する。
【００２１】ブチル−トヨパールクロマトグラフィーか
ら得られたラセミ化酵素活性画分を２０ｍＭ トリス
塩酸バッファー（ｐＨ７．５）、５０ｍＭ 塩化ナト
リウムに対して透析し、同じバッファーで平衡化したＤ
ＥＡＥ−セファセル（ファルマシア）のイオン交換クロ
マトグラフィーにかけた。ラセミ化酵素活性は１００−
１５０ｍＭ程度の塩化ナトリウムで溶出された。
ら得られたラセミ化酵素活性画分を２０ｍＭ トリス
塩酸バッファー（ｐＨ７．５）、５０ｍＭ 塩化ナト
リウムに対して透析し、同じバッファーで平衡化したＤ
ＥＡＥ−セファセル（ファルマシア）のイオン交換クロ
マトグラフィーにかけた。ラセミ化酵素活性は１００−
１５０ｍＭ程度の塩化ナトリウムで溶出された。
【００２２】ＤＥＡＥ−セファセルクロマトグラフィー
から得られたラセミ化酵素活性画分をＰＭ１０メンブレ
ン（アミコン）によって濃縮し、２０ｍＭ トリス塩
酸バッファー（ｐＨ７．５）、０．１Ｍ 塩化ナトリ
ウムで平衡化したセファディックスＧ−２００スーパー
ファインのゲル濾過クロマトグラフィーにかけた。この
結果、ラセミ化酵素活性は分子量約１３０，０００の位
置に溶出された。このラセミ化酵素活性画分をＳＤＳ−
ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって分析した結果
、分子量３１，９００の位置にバンドが現れた。したが
って、本ラセミ化酵素は四量体構造を持っていると推定
される。
から得られたラセミ化酵素活性画分をＰＭ１０メンブレ
ン（アミコン）によって濃縮し、２０ｍＭ トリス塩
酸バッファー（ｐＨ７．５）、０．１Ｍ 塩化ナトリ
ウムで平衡化したセファディックスＧ−２００スーパー
ファインのゲル濾過クロマトグラフィーにかけた。この
結果、ラセミ化酵素活性は分子量約１３０，０００の位
置に溶出された。このラセミ化酵素活性画分をＳＤＳ−
ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって分析した結果
、分子量３１，９００の位置にバンドが現れた。したが
って、本ラセミ化酵素は四量体構造を持っていると推定
される。
【００２３】
【発明の効果】本発明によって、５−置換ヒダントイン
ラセミ化酵素の遺伝子を大腸菌などの微生物で安定に高
度に発現させることが可能になった。この結果、このよ
うな微生物から容易に本酵素を調製できるようになった
。
ラセミ化酵素の遺伝子を大腸菌などの微生物で安定に高
度に発現させることが可能になった。この結果、このよ
うな微生物から容易に本酵素を調製できるようになった
。
【００２４】
【配列表】配列の長さ：１２８２
配列の型：核酸
鎖の数：二本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 Ｐｌａｓｍｉｄ ＤＮＡ起
源生物名：シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ｓｐ．） 株名：ＮＳ６７１ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：２０２．．９５１ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列 ＧＡＡＴＴＣＧＡＧＣ ＴＣＧＧＴＡＣＣＴＧ ＡＡＡ
ＴＴＧＡＴＧＧ ＴＧＴＡＧＴＡＧＴＧ ＡＴＴＧＡＴ
ＡＧＴＴ ＴＡＴＡＧＡＡＡＣＡ ６０ＡＴＴＧＴ
ＴＧＡＣＣ ＣＴＴＧＧＡＡＡＡＡ ＡＣＡＡＧＣＡＡ
ＡＣ ＴＡＡＡＡＡＣＴＴＡ ＴＡＡＡＴＣＴＣＣＴ
ＧＡＡＡＡＧＡＡＡＧ １２０ＡＡＴＡＴＴＧＣＧＧ
ＧＡＡＡＴＴＡＡＧＡ ＡＡＴＴＴＧＧＧＴＣ ＣＧ
ＴＧＧＡＡＡＡＡ ＧＣＴＡＴＡＡＡＡＴ ＡＡＡＴＴ
ＣＡＣＴＡ １８０ＡＡＴＴＣＴＡＧＧＡ ＧＧＡＡ
Ａ ＡＴＧ ＧＴＴ ＡＴＧ ＡＡＡ ＡＴＴ ＡＡＡ
ＧＴＴ ＡＴＣ ＡＡＣ ＣＣＧ ＡＡＴ ＡＣＡ
２３１
Ｍｅｔ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｖａｌ
Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｔｈｒ
１
５
１０ＡＣＴ ＴＴＧ ＧＣＡ ＡＴＧ Ａ
ＣＡ ＡＡＧ ＧＧＡ ＡＴＴ ＧＡＡ ＣＡＴ ＧＣ
Ｔ ＧＣＴ ＡＡＧ ＴＣＡ ＧＣＴ ＧＣＡ
２７９Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｌｙ
ｓ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｈｉｓ Ａｌａ Ａｌａ
Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ａｌａ Ａｌａ
１５
２０ ２
５ ＡＧＡ ＴＣＴ ＧＡＴ ＡＣＴ ＣＡＡ ＡＴＴ
ＧＴＴ ＧＣＡ ＧＴＧ ＡＧＴ ＣＣＴ ＡＡＡ
ＡＴＧ ＧＧＴ ＣＣＧ ＧＣＴ ３２７Ａｒｇ
Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｖａｌ
Ａｌａ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｍｅｔ Ｇ
ｌｙ Ｐｒｏ Ａｌａ
３０ ３５
４０ ＴＣＡ ＡＴ
Ｔ ＧＡＡ ＴＣＣ ＴＡＣ ＴＡＴ ＧＡＴ ＧＡＡ
ＴＡＴ ＴＴＡ ＡＧＣ ＡＴＴ ＣＣＡ ＧＧＡ
ＧＴＡ ＡＴＴ ３７５Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｇｌｕ
Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｔｙｒ
Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｉ
ｌｅ ４５
５０
５５ ＧＡＧ ＧＡＡ
ＡＴＴ ＡＡＡ ＡＡＧ ＧＧＡ ＧＡＡ ＧＡＡ Ｇ
ＡＡ ＧＧＡ ＧＴＡ ＧＡＴ ＧＣＡ ＴＴＴ ＧＴ
Ｔ ＡＴＡ ４２３Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｌ
ｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌ
ｙ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｉｌｅ
６０
６５ ７０
ＧＣＡ ＴＧＣ ＴＧＧ ＧＧ
Ａ ＧＡＣ ＣＣＴ ＧＧＡ ＴＴＧ ＣＡＴ ＧＣＴ
ＧＣＧ ＡＧＡ ＧＡＡ ＧＴＡ ＡＣＡ ＧＡＴ
４７１Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｒｐ Ｇｌｙ Ａｓｐ
Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ａｌａ Ａｌａ
Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｓｐ ７５
８０
８５
９０ ＡＡＡ ＣＣＡ ＧＴＴ ＧＴＡ
ＧＧＣ ＡＴＴ ＧＣＧ ＧＡＡ ＴＣＣ ＴＣＣ Ｇ
ＴＴ ＴＡＴ ＴＴＡ ＧＣＡ ＴＣＡ ＡＴＧ
５１９Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｉ
ｌｅ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｔｙ
ｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｍｅｔ
９５
１００ １
０５ ＣＴＴ ＧＣＡ ＧＣＣ ＡＧＡ ＴＴＴ ＴＣ
Ｃ ＧＴＧ ＧＴＣ ＡＣＡ ＧＴＴ ＴＴＡ ＣＣＴ
ＡＧＡ ＡＴＴ ＡＡＡ ＡＣＡ ５６７Ｌｅ
ｕ Ａｌａ Ａｌａ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｖａｌ
Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ａｒｇ
Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｔｈｒ １
１０ １１５
１２０ Ａ
ＴＧ ＴＴＡ ＧＡＡ ＧＡＣ ＣＴＧ ＧＴＴ ＧＡ
Ｔ ＴＣＡ ＴＡＣ ＧＧＴ ＡＴＧ ＣＡＡ ＡＡＡ
ＣＧＴ ＧＴＡ ＣＴＡ ６１５Ｍｅｔ Ｌｅ
ｕ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｓｅｒ
Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ａｒｇ
Ｖａｌ Ｌｅｕ １２５
１３０
１３５ ＡＡＣ
ＡＴＣ ＣＧＴ ＡＣＧ ＡＣＡ ＣＣＧ ＡＴＧ
ＧＧＣ ＧＴＡ ＴＴＡ ＧＡＴ ＴＴＴ ＧＡＧ Ａ
ＧＡ ＧＡＴ ＣＣＡ ６６３Ａｓｎ Ｉｌｅ
Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｖ
ａｌ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ａｓ
ｐ Ｐｒｏ １４０
１４５
１５０ ＧＡＡ ＧＣＧ Ｇ
ＧＡ ＡＴＴ ＧＡＡ ＡＴＧ ＴＴＡ ＡＧＧ ＣＡ
Ｇ ＧＡＡ ＧＧＧ ＡＡＡ ＡＧＡ ＧＣＧ ＧＴＡ
ＧＡＧ ７１１Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｉｌ
ｅ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｇｌｕ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ａｌａ Ｖａｌ Ｇｌｕ
１５５ １６０
１６５
１７０ ＧＡＡ ＧＡＴ ＡＡＴ
ＧＣＡ ＧＡＡ ＧＣＴ ＡＴＴ ＴＴＡ ＣＴＴ
ＧＧＡ ＴＧＴ ＧＣＴ ＧＧＴ ＡＴＧ ＧＣＡ Ｇ
ＡＡ ７５９Ｇｌｕ Ａｓｐ Ａｓｎ Ａｌａ
Ｇｌｕ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｃ
ｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｇｌｕ
１７５
１８０
１８５ ＴＴＴ ＧＣＧ ＧＡＴ ＡＧＣ ＣＴＴ ＧＡＡ Ａ
ＡＡ ＧＡＡ ＴＴＡ ＧＧＡ ＧＴＴ ＣＣＣ ＧＴ
Ｔ ＡＴＣ ＧＡＴ ＧＧＡ ８０７Ｐｈｅ Ａ
ｌａ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｇｌ
ｕ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｉｌｅ
Ａｓｐ Ｇｌｙ １９０
１９５
２００ ＧＴＴ ＧＴＡ ＧＣ
Ｇ ＧＧＴ ＧＴＧ ＡＡＡ ＴＴＣ ＧＣＣ ＧＡＡ
ＡＣＡ ＡＴＴ ＧＴＴ ＧＡＴ ＣＴＡ ＧＧＡ
ＡＡＧ ８５５Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｌａ Ｇｌｙ
Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｔｈｒ
Ｉｌｅ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ
２０５
２１０ ２１５
ＡＡＡ ＡＣＡ ＡＧＴ
ＡＡＡ ＣＴＡ ＡＡＡ ＡＣＴ ＴＡＴ ＡＡＡ Ｔ
ＡＴ ＣＣＡ ＧＡＧ ＡＡＡ ＡＡＡ ＧＡＡ ＴＡ
Ｔ ９０３Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｌ
ｅｕ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｐｒ
ｏ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｔｙｒ
２２０ ２２５
２３０
ＧＴＴ ＧＧＧ ＧＣＡ ＴＴＧ ＧＡ
Ｇ ＡＡＣ ＴＴＴ ＧＧＡ ＣＧＧ ＡＡＴ ＣＡＡ
ＡＣＡ ＡＣＡ ＡＣＡ ＡＡＡ ＴＡＡ ９
５１Ｖａｌ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｓｎ
Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｌｙｓ ２３５
２４０
２４５ ＡＡＡＡＴＴＡ
ＡＡＧ ＡＧＴＴＴＴＣＡＣＡ ＣＴＴＧＴＴＡＡＡＴ
ＣＡＴＡＧＡＴＡＧＴ ＴＴＡＴＡＴＣＡＡＴ ＴＴ
ＴＡＴＴＴＡＡＴ １０１１ＴＴＴＧＧＧＣＧＡＡ Ｔ
ＴＴＣＡＡＴＴＡＣ ＴＡＧＴＧＡＡＡＴＴ ＧＣＣＣ
ＡＴＴＴＴＴ ＴＡＡＡＡＧＣＡＴＡ ＡＣＡＧＧＧＡ
ＴＴＴ １０７１ＣＡＧＴＧＡＴＡＴＴ ＧＡＣＴＧＴ
ＴＡＧＧ ＣＡＧＡＡＣＡＧＡＡ ＡＴＴＴＴＡＴＴＡ
Ｔ ＡＣＡＴＣＣＣＴＴＧ ＡＡＴＧＡＡＴＴＡＴ １
１３１ＴＧＣＡＴＡＧＣＡＡ ＡＴＧＧＧＴＧＡＡＣ
ＴＡＴＡＡＡＡＧＴＴ ＣＴＴＡＣＡＴＣＡＡ ＴＡＴ
ＧＴＡＴＣＡＡ ＡＡＡＧＧＡＧＴＧＣ １１９１ＡＧ
ＴＴＡＴＴＣＡＴ ＧＧＡＴＴＴＡＡＡＡ ＴＣＴＡＡ
ＣＡＧＣＧ ＴＣＡＴＣＡＡＴＣＣ ＡＧＡＴＣＣＡＡ
ＡＴ ＡＧＧＡＴＴＣＡＡＡ １２５１ＣＡＡＡＴＡＡ
ＴＴＴ ＴＡＡＣＡＴＣＡＴＡ ＡＡＡＡＣＡＡＧＣＴ
Ｔ
１２８２
源生物名：シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ｓｐ．） 株名：ＮＳ６７１ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：２０２．．９５１ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列 ＧＡＡＴＴＣＧＡＧＣ ＴＣＧＧＴＡＣＣＴＧ ＡＡＡ
ＴＴＧＡＴＧＧ ＴＧＴＡＧＴＡＧＴＧ ＡＴＴＧＡＴ
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ＴＧＡＣＣ ＣＴＴＧＧＡＡＡＡＡ ＡＣＡＡＧＣＡＡ
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ＧＡＡＡＴＴＡＡＧＡ ＡＡＴＴＴＧＧＧＴＣ ＣＧ
ＴＧＧＡＡＡＡＡ ＧＣＴＡＴＡＡＡＡＴ ＡＡＡＴＴ
ＣＡＣＴＡ １８０ＡＡＴＴＣＴＡＧＧＡ ＧＧＡＡ
Ａ ＡＴＧ ＧＴＴ ＡＴＧ ＡＡＡ ＡＴＴ ＡＡＡ
ＧＴＴ ＡＴＣ ＡＡＣ ＣＣＧ ＡＡＴ ＡＣＡ
２３１
Ｍｅｔ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｖａｌ
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５
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２７９Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｌｙ
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１５
２０ ２
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Ａｌａ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｍｅｔ Ｇ
ｌｙ Ｐｒｏ Ａｌａ
３０ ３５
４０ ＴＣＡ ＡＴ
Ｔ ＧＡＡ ＴＣＣ ＴＡＣ ＴＡＴ ＧＡＴ ＧＡＡ
ＴＡＴ ＴＴＡ ＡＧＣ ＡＴＴ ＣＣＡ ＧＧＡ
ＧＴＡ ＡＴＴ ３７５Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｇｌｕ
Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｔｙｒ
Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｉ
ｌｅ ４５
５０
５５ ＧＡＧ ＧＡＡ
ＡＴＴ ＡＡＡ ＡＡＧ ＧＧＡ ＧＡＡ ＧＡＡ Ｇ
ＡＡ ＧＧＡ ＧＴＡ ＧＡＴ ＧＣＡ ＴＴＴ ＧＴ
Ｔ ＡＴＡ ４２３Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｌ
ｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌ
ｙ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｉｌｅ
６０
６５ ７０
ＧＣＡ ＴＧＣ ＴＧＧ ＧＧ
Ａ ＧＡＣ ＣＣＴ ＧＧＡ ＴＴＧ ＣＡＴ ＧＣＴ
ＧＣＧ ＡＧＡ ＧＡＡ ＧＴＡ ＡＣＡ ＧＡＴ
４７１Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｒｐ Ｇｌｙ Ａｓｐ
Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ａｌａ Ａｌａ
Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｓｐ ７５
８０
８５
９０ ＡＡＡ ＣＣＡ ＧＴＴ ＧＴＡ
ＧＧＣ ＡＴＴ ＧＣＧ ＧＡＡ ＴＣＣ ＴＣＣ Ｇ
ＴＴ ＴＡＴ ＴＴＡ ＧＣＡ ＴＣＡ ＡＴＧ
５１９Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｉ
ｌｅ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｔｙ
ｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｍｅｔ
９５
１００ １
０５ ＣＴＴ ＧＣＡ ＧＣＣ ＡＧＡ ＴＴＴ ＴＣ
Ｃ ＧＴＧ ＧＴＣ ＡＣＡ ＧＴＴ ＴＴＡ ＣＣＴ
ＡＧＡ ＡＴＴ ＡＡＡ ＡＣＡ ５６７Ｌｅ
ｕ Ａｌａ Ａｌａ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｖａｌ
Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ａｒｇ
Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｔｈｒ １
１０ １１５
１２０ Ａ
ＴＧ ＴＴＡ ＧＡＡ ＧＡＣ ＣＴＧ ＧＴＴ ＧＡ
Ｔ ＴＣＡ ＴＡＣ ＧＧＴ ＡＴＧ ＣＡＡ ＡＡＡ
ＣＧＴ ＧＴＡ ＣＴＡ ６１５Ｍｅｔ Ｌｅ
ｕ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｓｅｒ
Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ａｒｇ
Ｖａｌ Ｌｅｕ １２５
１３０
１３５ ＡＡＣ
ＡＴＣ ＣＧＴ ＡＣＧ ＡＣＡ ＣＣＧ ＡＴＧ
ＧＧＣ ＧＴＡ ＴＴＡ ＧＡＴ ＴＴＴ ＧＡＧ Ａ
ＧＡ ＧＡＴ ＣＣＡ ６６３Ａｓｎ Ｉｌｅ
Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｖ
ａｌ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ａｓ
ｐ Ｐｒｏ １４０
１４５
１５０ ＧＡＡ ＧＣＧ Ｇ
ＧＡ ＡＴＴ ＧＡＡ ＡＴＧ ＴＴＡ ＡＧＧ ＣＡ
Ｇ ＧＡＡ ＧＧＧ ＡＡＡ ＡＧＡ ＧＣＧ ＧＴＡ
ＧＡＧ ７１１Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｉｌ
ｅ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｇｌｕ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ａｌａ Ｖａｌ Ｇｌｕ
１５５ １６０
１６５
１７０ ＧＡＡ ＧＡＴ ＡＡＴ
ＧＣＡ ＧＡＡ ＧＣＴ ＡＴＴ ＴＴＡ ＣＴＴ
ＧＧＡ ＴＧＴ ＧＣＴ ＧＧＴ ＡＴＧ ＧＣＡ Ｇ
ＡＡ ７５９Ｇｌｕ Ａｓｐ Ａｓｎ Ａｌａ
Ｇｌｕ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｃ
ｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｇｌｕ
１７５
１８０
１８５ ＴＴＴ ＧＣＧ ＧＡＴ ＡＧＣ ＣＴＴ ＧＡＡ Ａ
ＡＡ ＧＡＡ ＴＴＡ ＧＧＡ ＧＴＴ ＣＣＣ ＧＴ
Ｔ ＡＴＣ ＧＡＴ ＧＧＡ ８０７Ｐｈｅ Ａ
ｌａ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｇｌ
ｕ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｉｌｅ
Ａｓｐ Ｇｌｙ １９０
１９５
２００ ＧＴＴ ＧＴＡ ＧＣ
Ｇ ＧＧＴ ＧＴＧ ＡＡＡ ＴＴＣ ＧＣＣ ＧＡＡ
ＡＣＡ ＡＴＴ ＧＴＴ ＧＡＴ ＣＴＡ ＧＧＡ
ＡＡＧ ８５５Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｌａ Ｇｌｙ
Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｔｈｒ
Ｉｌｅ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ
２０５
２１０ ２１５
ＡＡＡ ＡＣＡ ＡＧＴ
ＡＡＡ ＣＴＡ ＡＡＡ ＡＣＴ ＴＡＴ ＡＡＡ Ｔ
ＡＴ ＣＣＡ ＧＡＧ ＡＡＡ ＡＡＡ ＧＡＡ ＴＡ
Ｔ ９０３Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｌ
ｅｕ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｐｒ
ｏ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｔｙｒ
２２０ ２２５
２３０
ＧＴＴ ＧＧＧ ＧＣＡ ＴＴＧ ＧＡ
Ｇ ＡＡＣ ＴＴＴ ＧＧＡ ＣＧＧ ＡＡＴ ＣＡＡ
ＡＣＡ ＡＣＡ ＡＣＡ ＡＡＡ ＴＡＡ ９
５１Ｖａｌ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｓｎ
Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｌｙｓ ２３５
２４０
２４５ ＡＡＡＡＴＴＡ
ＡＡＧ ＡＧＴＴＴＴＣＡＣＡ ＣＴＴＧＴＴＡＡＡＴ
ＣＡＴＡＧＡＴＡＧＴ ＴＴＡＴＡＴＣＡＡＴ ＴＴ
ＴＡＴＴＴＡＡＴ １０１１ＴＴＴＧＧＧＣＧＡＡ Ｔ
ＴＴＣＡＡＴＴＡＣ ＴＡＧＴＧＡＡＡＴＴ ＧＣＣＣ
ＡＴＴＴＴＴ ＴＡＡＡＡＧＣＡＴＡ ＡＣＡＧＧＧＡ
ＴＴＴ １０７１ＣＡＧＴＧＡＴＡＴＴ ＧＡＣＴＧＴ
ＴＡＧＧ ＣＡＧＡＡＣＡＧＡＡ ＡＴＴＴＴＡＴＴＡ
Ｔ ＡＣＡＴＣＣＣＴＴＧ ＡＡＴＧＡＡＴＴＡＴ １
１３１ＴＧＣＡＴＡＧＣＡＡ ＡＴＧＧＧＴＧＡＡＣ
ＴＡＴＡＡＡＡＧＴＴ ＣＴＴＡＣＡＴＣＡＡ ＴＡＴ
ＧＴＡＴＣＡＡ ＡＡＡＧＧＡＧＴＧＣ １１９１ＡＧ
ＴＴＡＴＴＣＡＴ ＧＧＡＴＴＴＡＡＡＡ ＴＣＴＡＡ
ＣＡＧＣＧ ＴＣＡＴＣＡＡＴＣＣ ＡＧＡＴＣＣＡＡ
ＡＴ ＡＧＧＡＴＴＣＡＡＡ １２５１ＣＡＡＡＴＡＡ
ＴＴＴ ＴＡＡＣＡＴＣＡＴＡ ＡＡＡＡＣＡＡＧＣＴ
Ｔ
１２８２
【図１】図１はプラスミドｐＨＰＢ１４の制限酵素地図
である。
である。
Claims (2)
- 【請求項１】 配列表に記載された第２０２番目塩基
から第９５１番目塩基までの配列を有することを特徴と
する５−置換ヒダントインラセミ化酵素遺伝子。 - 【請求項２】 配列表に記載された第１番目アミノ酸
から第２４９番目アミノ酸までの配列を有することを特
徴とする５−置換ヒダントインラセミ化酵素。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3065591A JPH04271784A (ja) | 1990-12-10 | 1991-03-06 | ５−置換ヒダントインラセミ化酵素及びそれをコードする遺伝子 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP40973890 | 1990-12-10 | ||
| JP2-409738 | 1990-12-10 | ||
| JP3065591A JPH04271784A (ja) | 1990-12-10 | 1991-03-06 | ５−置換ヒダントインラセミ化酵素及びそれをコードする遺伝子 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04271784A true JPH04271784A (ja) | 1992-09-28 |
Family
ID=26406729
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3065591A Pending JPH04271784A (ja) | 1990-12-10 | 1991-03-06 | ５−置換ヒダントインラセミ化酵素及びそれをコードする遺伝子 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04271784A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002072841A1 (en) * | 2001-03-08 | 2002-09-19 | Ajinomoto Co., Inc. | Dna encoding hydantoinase, dna encoding n-carbamyl-l-amino acid hydrolase, recombinant dna, transformed cells, process for producing protein and process for producing optically active amino acid |
| WO2006080409A1 (ja) * | 2005-01-31 | 2006-08-03 | Kaneka Corporation | ５－置換ヒダントインラセマーゼ、これをコードするｄｎａ、組換えｄｎａ、形質転換された細胞、および、光学活性ｎ－カルバミルアミノ酸または光学活性アミノ酸の製造方法 |
| US7713724B2 (en) | 2002-05-23 | 2010-05-11 | Dsm Ip Assets B.V. | Hydantoin racemase |
| WO2011003702A1 (en) | 2009-07-09 | 2011-01-13 | Dsm Ip Assets B.V. | Stabilized enzyme compositions |
-
1991
- 1991-03-06 JP JP3065591A patent/JPH04271784A/ja active Pending
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002072841A1 (en) * | 2001-03-08 | 2002-09-19 | Ajinomoto Co., Inc. | Dna encoding hydantoinase, dna encoding n-carbamyl-l-amino acid hydrolase, recombinant dna, transformed cells, process for producing protein and process for producing optically active amino acid |
| US7098020B2 (en) | 2001-03-08 | 2006-08-29 | Ajinomoto Co., Inc. | DNA encoding hydantoinase, DNA encoding N-carbamyl-L-amino acid hydrolase, recombinant DNA, transformed cell, method of producing protein, and method of producing optically active amino acid |
| US7361490B2 (en) | 2001-03-08 | 2008-04-22 | Ajinomoto Co., Inc. | DNA encoding hydantoinase, DNA encoding N-carbamyl-L-amino acid hydrolase, recombinant DNA, transformed cell, method of producing protein and method of producing optically active amino acid |
| US8460902B1 (en) | 2001-03-08 | 2013-06-11 | Ajinomoto Co., Inc. | DNA encoding hydantoinase, DNA encoding N-carbamyl-L-amino acid hydrolase, recombinant DNA, transformed cell, method of producing protein, and method of producing optically active amino acid |
| US7713724B2 (en) | 2002-05-23 | 2010-05-11 | Dsm Ip Assets B.V. | Hydantoin racemase |
| WO2006080409A1 (ja) * | 2005-01-31 | 2006-08-03 | Kaneka Corporation | ５－置換ヒダントインラセマーゼ、これをコードするｄｎａ、組換えｄｎａ、形質転換された細胞、および、光学活性ｎ－カルバミルアミノ酸または光学活性アミノ酸の製造方法 |
| US7709235B2 (en) | 2005-01-31 | 2010-05-04 | Kaneka Corporation | 5-Substituted hydantoin racemase, DNA encoding the same, recombinant DNA, transformed cell, and process for production of optically active N-carbamylamino acid or optically active amino acid |
| JP5096911B2 (ja) * | 2005-01-31 | 2012-12-12 | 株式会社カネカ | ５−置換ヒダントインラセマーゼ、これをコードするｄｎａ、組換えｄｎａ、形質転換された細胞、および、光学活性ｎ−カルバミルアミノ酸または光学活性アミノ酸の製造方法 |
| WO2011003702A1 (en) | 2009-07-09 | 2011-01-13 | Dsm Ip Assets B.V. | Stabilized enzyme compositions |
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