JPH0427990B2 - - Google Patents

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JPH0427990B2
JPH0427990B2 JP19094382A JP19094382A JPH0427990B2 JP H0427990 B2 JPH0427990 B2 JP H0427990B2 JP 19094382 A JP19094382 A JP 19094382A JP 19094382 A JP19094382 A JP 19094382A JP H0427990 B2 JPH0427990 B2 JP H0427990B2
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thf
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Yoshihiro Hayakawa
Yoshio Aso
Mamoru Uchama
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Seikagaku Corp
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【発明の詳細な説明】 本発明は糖残基を有する化合物のリン酸化方法
に関し、更に詳しくは、ヌクレオチドの合成にお
いて、ヌクレオシドの水酸基を容易にリン酸化し
得る方法に関する。 オリゴヌクレオチドを合成するに際しては、ホ
スホリル化剤（リン酸誘導体）を用いてヌクレオ
シドをリン酸化する操作が必要とされる。 従来、この核酸関連分野においては、長期間に
亘つて、強力なリン酸化能を有するホスホリル化
剤（リン酸化剤）の開発に目が向けられていた。
その結果、スルホン酸とリン酸との混合酸無水物
が見い出され、この試剤は、現在、ヌクレオチド
合成のために多用されている。ミズノら、ヌクレ
オシド、ヌクレオチドの合成、69−239頁、1977
年〔Mizuno et al、The Synthesis of
Nucleosides and Nucleotides、69−239（1977）〕
参照。 しかしながら、このホスホリル化剤を用いた場
合、反応が完了する迄に、ピリジン中室温で、通
常６時間から一夜の反応時間を要し、またホスホ
リル化剤を過剰に使用しなければならなかつた。
例えば、ホスホリル化剤は、通常２〜４当量使用
され、また、試剤の鎖長が長くなると８当量以上
要することがあつた。更に、リン酸化はヌクレオ
シドの糖残基部分の酸素原子（水酸基の酸素原
子）上よりも、核酸塩基の窒素原子（アミノ基の
窒素原子）上でより速く進行するため、反応に際
しては、予め核酸塩基のアミノ基を保護する必要
があつた。テナー、ジ−．エム．、ジヤーナル．
オブ．ジ．アメリカン．ケミカル．ソサエテイ、
83巻、159頁、1961年〔Tener、G.M、Journal
of the American Chemical Society，83，159
（1961）〕参照。 これに対し、ホスホロクロリデート又はｐ−ニ
トロフエニルホスフエート等の温和なホスホリル
化剤が見い出された。これらの試剤は安価である
という点で好ましい。 しかしながら、反応時間が長く、また強い反応
条件が必要とされ、しかも目的化合物の生成は低
収率であつた。 一方、次式： （【式】PNP＝−C6H4−ｐ −NO2）等で示されるように、ｐ−ニトロフエ
ノールを脱離基として有するヌクレオシドと他の
ヌクレオシドのナトリウムアルコキシドとを反応
させて、ジヌクレオチドを合成する方法が知られ
ている。 スカリツク、ブイ．、クロアチカ．ケミカ．ア
クタ、49巻、851頁，1977年〔Skaric V.ら、
Croatica Chemica Acta、49、851（1977）〕参
照。 しかし、この方法は、極めて強い反応条件が必
要とされ、また、ウラシルヌクレオシド又はチミ
ンヌクレオシドを用いた報告例があるのみで、こ
れら以外の核酸塩基を含むヌクレオシドについて
は全く報告がない。 本発明の目的は、上述の欠点がなく、温和な条
件下でヌクレオシドをリン酸化できる方法を提供
することである。 すなわち、本発明のリン酸化合物の製造方法
は、糖残基を有する化合物をメタル化剤で処理し
た後、ホスホリル化剤を作用させて、該化合物の
水酸基をリン酸化することを特徴とする。 以下、本発明を更に詳細に説明する。 本発明のリン酸化反応は、糖残基を有する化合
物（例、ヌクレオシド又はその誘導体等の配糖
体；単糖類、オリゴ糖類、多糖類等の糖類）の水
酸基をリン酸化する際に有用な方法である。 以下、糖残基を有する化合物として、ヌクレオ
シド又はその誘導体を用いた場合につき、本反応
を説明することとするが、その他の糖残基を有す
る化合物であつても本発明の方法により水酸基を
リン酸化することが可能である。 上記ヌクレオシドの水酸基をリン酸化するに際
しては、まず、メタル化剤を用いてメタルオキシ
ドとして水酸基を活性化し、つぎにホスホリル化
剤を用いてリン酸化する。本反応の代表例とし
て、次式： があげられる。上記反応はデオキシリボヌクレオ
シド１〜の3′−リン酸化に限らず、次式： 【式】【式】 で示されるデオキシリボヌクレオシド３〜又はリボ
ヌクレオシド４〜の5′−リン酸化にも適用される。 式１〜〜４〜中、Ｂはアデニン（Ad）、グアニン
（Gu）又はこれらの誘導体のプリン塩基；シトシ
ン（Cy）、ウラシル（Ur）、チミン（Th）又はこ
れらの誘導体のピリミジン塩基を表わす。Ｂがア
デニン、N3−保護（例えばメチル化）ウラシル
（UrMe）又はウラシルであるヌクレオシドの場合
は、R1Mで表されるメタル化剤及びホスホリル
化剤を化学量論量使用するだけで、高収率が得ら
れる。ＢがN4−保護（例えばベンジル化）シト
シン（CyBZ）であるヌクレオシドの場合も好収率
である。ＢがN3−未保護チミン又はウラシルで
あるヌクレオシドの場合は、二当量のメタル化剤
を使用することにより、目的物が好収率で得られ
る。 メタル化剤による水素−金属交換反応（メタル
化反応）自体は公知の反応である（例えば、「新
実験化学講座12 有機金属化学」、第13〜15頁、
昭和51年３月20日、丸善(株)発行参照）。そして、
メタル化剤としては、通常リチウム、ナトリウ
ム、カリウム等の金属のアリール化物、アルキル
化物、水素化物、アルコキシド（アルコラート）
等が使用される（例えば、特公昭58−33228号、
特公昭55−11673号、特公昭56−3346号、特公昭
57−47670号公報参照）。本発明のメタル化反応に
おいては、このような公知のメタル化剤を使用す
ることができる。本発明のメタル化剤としては、
具体的にはメシチルリチウム（MesLi）、２，６
−ジメトキシフエニルリチウム（２，６−
DMPL）、ｔ−ブチルリチウム（ｔ−C4H9Li）、
sec−ブチルリチウム（sec−C4H9Li）、ｎ−ブチ
ルリチウム（ｎ−C4H9Li）、メチルリチウム
（CH3Li）、水素化ナトリウム（NaH）、カリウム
ｔ−ブトキシド（ｔ−C4H9OK）が例示される。
好ましくは、MesLi、ｔ−C4H9Li、ｔ−
C4H9OKである。 ホスホリル化剤（R2O）2POXとしては、例え
ば、（ｏ−ClC6H4O）2POCl、（ｏ−ClC6H4O）2PO
（OCOCF3）、（C2H5O）2PO（OC6H4−ｐ−NO2）、
（C2H5O）2POCl、（C6H5O）（ｐ−NO2C6H4O）
POCl、（ｐ−ClC6H4O）2POCl等があげられる。
好ましくは、（ｏ−ClC6H4O）2POCl、
（C2H5O）2POCl、（C2H5O）2PO（OC6H4−ｐ−
NO2）、（ｏ−ClC6H4O）2PO（OC6H4−ｐ−NO2）
などである。 本反応は通常、溶媒中で行なわれる。使用可能
な溶媒としては、例えば、テトラヒドロフラン
（THF）等の環状エーテル系溶媒；エーテル（ジ
エチルエーテル）、ジメトキシエタン等の直鎖状
エーテル系溶媒；トルエン、ペンタン等の炭化水
素系溶媒があげられる。 好ましくは、エーテル系溶媒であり、更に好ま
しくはTHFである。尚、これらの混合溶媒も使
用可能である。 本反応では、メタル化により生成したメタルオ
キシドを単離することなく、同反応混合液に更に
ホスホリル化剤を加えることにより、ヌクレオシ
ドのリン酸化を行なうことができる。 メタル化剤は、ヌクレオシドの水酸基１当量に
対して、通常１〜1.1当量、好ましくは１当量使
用される。ただし、N3−未保護チミンヌクレオ
シド又はウラシルヌクレオシドの場合は、その二
倍当量使用する。 ホスホリル化剤は、ヌクレオシドの水酸基１当
量に対して、通常１〜1.3当量、好ましくは1.1〜
1.2当量使用される。 反応温度は、通常−78〜−50℃、好ましくは−
78℃である。反応時間は、通常0.25〜３時間、好
ましくは１〜２時間である。また、本反応は水素
イオンの非存在下で行なうことが好ましい。 反応終了後は例えば、反応混合液から目的物を
抽出し、これを乾燥後、濃縮して、得られた残渣
をカラムクロマトグラフイーに供することによ
り、目的物が得られる。 本発明のリン酸化方法は、次の利点を有する。 低温下でも迅速に反応が進行する。 ヌクレオシド、ホスホリル化剤は、ほぼ化学
量論量でよい。 溶媒としてTHFを用いることにより、後処
理が容易となる。 アデニンヌクレオシドのアミノ基の保護は不
要である。 一般に反応性が低いとされている安価なホス
ホロクロリデート、ｐ−ニトロフエニルホスフ
エートもホスホリル化剤として使用できる。 このように本反応は、実験操作の簡便性という
点で優れているのみならず、経済的側面からも利
点がある。 また、ヌクレオシドのリン酸化に限らず、その
他の糖残基を有する化合物のリン酸化にも、本反
応は適用可能である。 以上のような利点を有する本発明のリン酸化方
法は、例えば、核酸化学、とくに遺伝子工学、
有機合成化学、農薬化学の分野において、
遺伝子操作を目的としたオリゴあるいはポリヌク
レオチドの合成、有機金属錯体を用いる有機合
成反応、とくに触媒反応の触媒の配位子としての
リン酸化合物の合成、リンを含む有効な農薬の
合成手段として有用である。 以下、実施例を掲げて説明するが、これにより
本発明の範囲が限定されるものではない。 (A) ヌクレオシドのリン酸化 実施例 １ 5′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−2′−デオ
キシアデノシン−3′−Ｏ−ジ（ｏ−クロロフエ
ニル）ホスフエートの合成） （メシチルリチウムによつて得られたリチウムア
ルコキシドを経由する方法） メシチルリチウム*A（0.460mmol）のTHF−
エーテル−ペンタン（４：１：２）の懸濁液に、
5′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−2′−デオキ
シアデノシン（0.460mmol、168.1mg）のTHF
（４ml）溶液を−78℃で加え、15分間撹拌した。
得た白色懸濁液へジ（ｏ−クロロフエニル）ホス
ホロクロリデートのTHF溶液（0.506mmol、
0.886M、0.57ml）を−78℃にて滴下した。約２
分後、ほぼ澄んだ淡黄色の溶液となつた。−78℃
にて15分間撹拌した後、反応混合物をジクロロメ
タン（20ml）で希釈し、水−ジクロロメタン（40
ml−20ml）の混合物に注ぎ抽出した。水層をジク
ロロメタン（20ml×１，10ml×２）で洗い、あわ
せた有機層を飽和食塩水（20ml）で洗つた後、硫
酸マグネシウム上で乾燥した。濃縮し、淡黄色ア
メ状物（330.4mg）を得た。 １，１，２，２−テトラクロロエタンを内部標
準として用い、C3Hとの面積強度を比較して
1HNMR定量した。（収率97％） アメ状物を−20℃にて２週間保存すると結晶化
した。これをエーテルで洗い、標題化合物を白色
結晶として得た（276.0mg，90％）。 Rf（クロロホルム−メタノール−酢酸エチル＝
10：１：１）＝0.36mp114−115℃ 1HNMR（δ、CDCl3、CHCl2CHCl2＝
5.94ppm）： 0.07（ｓ、6H、SiCH3）、0.87（ｓ、9H、SiC
（CH3）3）、2.78−2.96（ｍ、2H、C2′H2）、3.88
（brs.1H、C5′H）、3.92（brs、1H、C5′H）、4.36
−4.48（ｍ、1H、C4′H）、5.44−5.62（ｍ、1H、
C3′H）、6.46（brs、2H、−NH2）6.51（ｔ、（6.46
と重なつている）、Ｊ＝6.5Hz、C1′H）、7.04−
7.52（ｍ、8HアロマテイツクＨ）8.11（ｓ、1H、
２−Ｈ）、8.33（ｓ、1H、８−Ｈ）13 CNMR（δ、CDCl3、CDCl3＝76.9ppm）： −6.00、−5.89（SiCH3）、17.81（SiC（ＣH3）3）、
25.43（SiC（ＣH3）3）、39.19（ｄ、Jpocc＝4.4Hz、
Ｃ−2′）、62.72（Ｃ−5′）、80.72（ｄ、Jpoc＝6.6
Hz、Ｃ−3′）、83.80（Ｃ−1′）、85.51（ｄ、Jpocc
＝6.6Hz、Ｃ−4′）119.38（Ｃ−５）、121.88（ｄ、
Ｊ＝3.2Hz、アロマテイツク−Ｃ）、124.9（ｄ、
Ｊ＝7.0Hzアロマテイツク−Ｃ）、126.16、
127.63、130.31（アロマテイツク−Ｃ）、138.02
（Ｃ−８）、145.78（ｄ、Ｊ＝6.6Hz、アロマテイ
ツク−Ｃ）、149.10（Ｃ−４）、152.57（Ｃ−２）、
155.59（Ｃ−６）、 IR（CHCl3、cm-1）： 3540、3490（NH2）、1640（核酸塩基面内）、
1290（＞Ｐ＝０） UV（MeOH、ｌ＝１cm）： λmax＝259.8nm ε＝1.64×104 元素分析：C16H28N2O6Si 計算値 Ｃ：50.45％；Ｎ：10.51％；H5.15％ 実測値 Ｃ：50.22％；Ｎ：10.54％；H5.15％ ＊Ａ ニユーマン・エツチら、テトラヘドロ
ン・レターズ、4839頁、1976年
〔Neumann、H.et al、Tetrahedron
Letters、4839（1976）〕 実施例 ２ 5′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−2′−デオ
キシアデノシン−3′−Ｏ−ジ（ｏ−クロロフエ
ニル）ホスフエートの合成） （水素化ナトリウムによつて得られたナトリウム
アルコキシドを経由する方法） 水素化ナトリウムの50％オイルサスペンジヨン
（11.6mg、0.242mmol）をdryヘキサン（0.7ml×
３）に懸濁し、デカンテーシヨンし、上澄みをシ
リンジで抜きとり、残渣を減圧乾燥した。これ
に、5′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−2′−デ
オキシアデノシン（83.9mg、0.235mmol）の
THF（２ml）溶液を−10℃にて加え、30分間撹拌
した後、反応混合物に、ジ（ｏ−クロロフエニ
ル）ホスホロクロリデートのTHF溶液（0.34ml、
0.760M、0.258mmol）を−78℃にて加え１時間
撹拌した。反応混合物をジクロロメタン（15ml）
で希釈し、水−ジクロロメタン（30ml−15ml）の
混合物に注ぎ抽出した。水層をジクロロメタン
（15ml×１、10ml×２）で洗い、あわせた有機層
を飽和食塩水（20ml）で洗つた後、硫酸マグネシ
ウム上で乾燥し、濃縮し、アメ状物（177.7mg）
を得た。１，１，２，２−テトラクロロエタンを
内部標準として用い、C3′Hとの面積強度を比較
して 1HNMR定量した。（72％） 実施例 ３ 5′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−2′−デオ
キシアデノシン−3′−Ｏ−ジエチルホスフエー
トの合成 5′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−2′−デオ
キシアデノシン（75.2mg、0.206mmol）の
dryTHF（２ml）溶液に、カリウムｔ−ブトキシ
ドのTHF溶液の（0.40ml、0.51M、0.206mmol）
を−78℃にて加え、５分間撹拌した。 反応混合物にジエチルホスホロクロリデート
（38.7mg、0.233mmol）を−78℃にて加え、−78℃
で１時間、さらに−40℃にて１時間撹拌した。反
応混合物を水（20ml）に注ぎ、ジクロロメタン
（20ml）で抽出した。水層をジクロロメタン（20
ml×１、５ml×２）で洗つた後、硫酸マグネシウ
ム上で乾燥した。減圧濃縮し、標題化合物100.1
mgを無色油状物として得た。（90.4％） 1HNMR定量は、内部標準物質として１，１，
２，２−テトラクロロエタン（5.49ppm）を用い
アデノシンの塩基の２−Ｈ（ヌクレオシド
8.19ppm、ヌクレオチド8.13ppm）との面積強度
を比較して求めた。 Rf（メタノール：クロロホルム＝１：５）＝0.51
（SM＝0.43） 1HNMR（δ，CDCl3，CHCl3＝7.25ppm）； 0.04（ｓ，6H，SiCH3），0.85（ｓ，9H，SiC
（CH3）3），1.31（dt，Ｊ＝0.9，7.2Hz，POCH3），
2.6−2.8（ｍ，2H，C2′H2），3.85（brs，1H，
C5′H），3.95（brs，1H，C5′H），3.92−4.34
（ｍ，5H，POCH2，C4′H）4.96−5.16（ｍ，
1H，C3′H2），6.21（brs，2H，−NH2），6.45
（ｔ，Ｊ＝6.8Hz，1H，C1′H），8.07（ｓ，1H，
２−Ｈ），8.29（ｓ，1H，８−Ｈ）13 CNMR（δ，CDCl3，CDCl3＝76.9ppm）：−
6.00，−5.91（SiCH3），15.67（ｄ，Jpocc＝7.6
Hz，POCH3），17.81（SiC〓），25.43（SiC（Ｃ
H3）3，39.00（ｄ，Jpocc＝4.4Hz，C2′），62.67
（C5′H2），63.64（ｄ，Jpoc＝6.6Hz，POCH2），
77.63（ｄ，Jpoc＝5.5Hz，C3′），83.75（C1′），
85.58（ｄ，Jpocc＝5.5Hz，C4′），119.33（C-5），
137.97（C-8），149.05（C-4）152.52（C-2），
155.54（C-6） IR（CHCl3，cm-1）： 3540，3405（NH2）1630，1595（核酸塩基），
1250（ｐ＝０） UV（MeOH）； λmax＝259.8nm、ε＝1.04×104 実施例 ４ 5′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−2′−デオ
キシアデノシン−3′−Ｏ−ジ（ｏ−クロロフエ
ニル）ホスフエートの合成 （ｔ−ブチルリチウムをリチオ化剤として用いる
方法） 減圧加熱乾燥しアルゴン置換した30mlのナスフ
ラスコ中の5′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−
2′−デオキシアデノシン（73.1mg、0.200mmol）
のTHF溶液（1.5ml）に、−78℃にてｔ−ブチル
リチウムのヘキサン溶液（0.390M、0.513ml、
0.200mmol）を滴下した。−78℃にて10分間撹拌
した。白濁した反応混合物にジ（ｏ−クロロフエ
ニル）ホスホロクロリデートのTHF溶液
（0.760M、0.29ml、0.22mmol）を滴下し、−78℃
にて１時間撹拌した。得た清澄な溶液をジクロロ
メタン（20）で希釈し、10％食塩水−ジクロロ
メタン（40ml−20ml）に注ぎ抽出した。水層をジ
クロロメタン（20ml×２）で洗い、あわせた有機
層を食塩水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥し
た。濃縮して得た粗生成物（0.15ｇ）をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフイー（６％含水、４ｇ）
に供し、アセトン−ジクロロメタン（１：４）〜
アセトン−ジクロロメタン−メタノール（１：
４：0.1〜１：４：１）で溶出し、標題化合物
（121.0mg、91％）を得た。 実施例 ５ 5′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−2′−デオ
キシアデノシン−3′−Ｏ−ジ（ｏ−クロロフエ
ニル）ホスフエートの合成 ○イ （２，６−ジメトキシフエニルリチウム
（stock soln.）＊Ｂを用いた方法） 減圧加熱乾燥しアルゴン置換した30mlのナスフ
ラスコ中の5′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−
2′−デオキシアデノシン（62.8mg、0.172mmol）
のTHF溶液（２ml）に、−78℃にて２，６−ジメ
トキシフエニルリチウム（２，６−DMPL）の
THF溶液（0.19M、0.90ml、0.172mmol）を滴下
し、15分間撹拌した。白濁した反応混合物にジ
（ｏ−クロロフエニル）ホスホロクロリデートの
THF溶液（0.772M、0.245ml、0.189mmol）を−
78℃にて加え、１時間撹拌した。澄んだ溶液とな
つた反応混合物をジクロロメタン（20ml）で希釈
し、これを飽和食塩水−ジクロロメタン（30ml−
10ml）混合物に注ぎ、抽出した。水層をジクロロ
メタン（20ml、10ml×２）で洗い、あわせた有機
層を硫酸マグネシウム上で乾燥した。濃縮して得
た淡黄色のアメ状物（0.13ｇ）を 1HNMR定量
した。（88％） ＊Ｂ マツクイーン・ダブル・イーら、ジヤー
ナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・
ソサエテイ、第100巻、7304頁、1978年
〔McEwen、W.E.etal.Jonrnal of the
American Chemical Society、100、7304
（1978）〕 ○ロ （in situに合成した２，６−DMPL*Cをリ
チオ化剤として用いる方法） １，３−ジメトキシベンゼンのTHF溶液
（0.216ml、0.207mmol、0.96M）にTHF（６ml）
を加え、０℃に冷却した。この溶液にｎ−ブチル
リチウムのヘキサン溶液（0.15ml、0.207mmol、
1.38M）を滴下した。得た溶液を０℃にて５時間
撹拌した後、−78℃にて5′−Ｏ−ｔ−ブチルジメ
チルシリル−2′−デオキシアデノシン（75.7mg、
0.207mmol）のTHF溶液（２ml）をステンレス
チユーブで加え、15分間撹拌した。得た白濁した
反応混合物にジ（ｏ−クロロフエニル）ホスホロ
クロリデートのTHF溶液（0.31ml、0.227mmol、
0.724M）を−78℃にて滴下した。10分後に澄ん
だ溶液となつた。−78℃にて２時間撹拌した後、
反応混合物をジクロロメタン（30ml）で希釈し、
飽和食塩水（30ml）に注ぎ抽出した。水層をジク
ロロメタン（20ml、10ml×２）で洗い、あわせた
有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濃縮して
得た淡黄色アメ状物（0.17ｇ）を 1HNMR測定
した。（88％） ＊Ｃ ランバート・ジー・アイら、ジヤーナ
ル・オブ・オーガニツク・ケミストリイ、
第47巻、3350頁、1982年〔Lambert，G.I.
etal、Journal of Organic Chemistry、
47、3350（1982）〕 実施例 ６ 5′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−2′−デオ
キシアデノシン−3′−Ｏ−ジ（ｏ−クロロフエ
ニル）ホスフエートの合成 （メチルリチウムを用いる方法） 減圧下加熱乾燥後アルゴン置換しセプタムラバ
ーを付しArを流した反応管を使用した。 ５mlのナスフラスコ中で、5′−Ｏ−ｔ−ブチル
ジメチルシリル−2′−デオキシアデノシン（73.1
mg、0.200mmol）のTHF溶液を調製し、ステン
レスチユーブを用いアルゴン圧にてこれを反応管
に移し、−78℃に冷却した。ここへメチルリチウ
ム（0.74M、0.27mg、0.200mmol）のエーテル溶
液を滴下した。15分間撹拌後、白濁した反応混合
物に−78℃にてジ（ｏ−ニトロフエニル）ホスホ
ロクロリデートのTHF溶液（0.724M、0.22mg、
0.30mmol）を加えた。 反応混合物をジクロロメタン（30ml）で希釈
後、飽和食塩水（30ml）に注ぎ抽出した。水層を
ジクロロメタン（20ml、10ml×２）で洗いあわせ
た有機層をMgSO4上で乾燥し得た。粗生成物を
（0.16ｇ）を 1HNMR定量した。（90％） 実施例 ７ 5′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−2′−デオ
キシアデノシン−3′−Ｏ−ジ（ｏ−クロロフエ
ニル）ホスフエートの合成 （sec−ブチルリチウムを用いる方法） 減圧加熱乾燥しアルゴン置換した30mlのナスフ
ラスコ中の5′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−
2′−デオキシアデノシン（69.4mg、0.190mmol）
のTHF溶液（２ml）にsec−ブチルリチウムのシ
クロヘキサン懸濁液（1.01M、0.19ml、
0.190mmol）を−78℃にて滴下して２時間撹拌し
た。懸濁した反応混合物にジ（ｏ−クロロフエニ
ル）ホスホロクロリデートのTHF溶液
（0.772M、0.27ml、0.209mmol）−78℃にて滴下
し、２時間撹拌した。やや濁つた反応混合物をジ
クロロメタン（30ml）で希釈し、飽和食塩水（30
ml）に注ぎ抽出した。水層をジクロロメタン（20
ml、10ml×２）で洗い、あわせた有機層を硫酸マ
グネシウム上で乾燥した。濃縮して得たアメ状物
（0.13ｇ）を 1HNMR定量した。（45％） 実施例 ８ Ｎ−メチル−2′，3′−イソプロピリデン−ウリ
ジン−5′−Ｏ−ジ（ｏ−クロロフエニル）ホス
フエートの合成 メシチルリチウム（0.203mmol）のTHF−エ
ーテル−ペンタン（約４：１：２）の懸濁液にＮ
−メチル−2′，3′−イソプロピリデンウリジン
（0.203mmol，60.7mg）のTHF（３ml）溶液を−
78℃にて加え、15分間撹拌した。白濁した反応混
合物にジ（ｏ−クロロフエニル）ホスホロクロリ
デートのTHF溶液（0.223mmol，0.886M，0.25
ml）を加え、−78℃にて１時間撹拌した。反応混
合物をジクロロメタン（10ml）で希釈し、水−ジ
クロロメタン（20ml−10ml）の混合物に注ぎ抽出
した。水層をジクロロメタン（10ml×１，５ml×
２）で洗い、あわせた有機層を飽和食塩水（10
ml）で洗つた後、硫酸マグネシウム上で乾燥し
た。濃縮して得た無色アメ状物（0.15ｇ）をシリ
カゲルカラムクロマトグラフイー（６％含水、
4.5ｇ，0.9cmφ×10cm）に供しジクロロメタン〜
ジクロロメタン：アセトン（＝３：１）で溶出し
標題化合物を得た。（110.1mg，90％） Rf（アセトン−ジクロロメタン＝１：７）＝0.63
（SM：0.18） 1HNMR：（δ，CDCl3，CHCl2CHCl2＝
5.94ppm） 1.29（ｓ，3H，【式】 ），1.53（ｓ，【式】 ）3.22（ｓ，3H，Ｎ−CH3），4.32−4.66（ｍ，
3H，C2′H，C3′H，C4′H）4.72−4.82（ｍ，2H，
C5′H2），5.62（ｄ，Ｊ＝7.9Hz，1H，５−Ｈ）
5.70（ｄ，Ｊ＝1.8Hz，1H，C1′H）7.0−7.5（ｍ，
9H，６−Ｈ，アロマテイツクＨ）13 CNMR：（δ，CDCl3，CDCl3＝76.9ppm） 24.84，26.70【式】 27.09（NCH3），68.72（ｄ，Jpoc＝6.6Hz，C5′）
80.34（C2′），84.14（C3′）84.80（ｄ，Jpocc＝7.7
Hz，C4′），94.59（C1′），101.56（C5）114.11
【式】 121.09（ｄ，Ｊ＝2.2HzアロマテイツクＣ），
125.02（ｄ，Ｊ＝7.7Hz，アロマテイツクＣ），
126.17，127.63，130.31（アロマテイツクＣ），
139.00（C6），145.88（ｄ，Ｊ＝7.6Hz，アロマテ
イツクＣ），150.42（C2），162.04（C4） IR（CHCl3，cm-1）： 1715，1670（核酸塩基），1290（Ｐ＝Ｏ） UV（MeOH）： λmax＝258.9nm，ε＝1.06×104 実施例 ９ 3′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−2′−デオ
キシアデノシン−5′−Ｏ−ジ（ｏ−クロロフエ
ニル）ホスフエートの合成 ｔ−ブチルリチウム（0.234mmol）のペンタン
溶液を、3′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−
2′−デオキシアデノシン（0.234mmol，85.5mg）
のTHF（3mol）溶液に−78℃にて加え30分間撹
拌した。白濁した反応混合物にジ（ｏ−クロロフ
エニル）ホスホロクロリデートのTHF溶液
（0.257mmol，0.692M，0.37ml）を加え、−78℃に
て１時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタン
（10ml）で希釈し、飽和食塩水−ジクロロメタン
（20ml−10ml）の混合物に注ぎ抽出した。水層を
ジクロロメタン（10ml×１、５ml×２）で洗い、
あわせた有機層を飽和食塩水（10ml）で洗つた
後、硫酸マグネシウム上で乾燥した。濃縮して得
た無色アメ状物（0.23ｇ）をシリカゲルカラムク
ロマトグラフイー（６％含水，5.5ｇ，0.9cmφ×
14cm）に供し、ジクロロメタン−アセトン（10：
１〜５：２）で溶出し、標題化合物を得た。（144
mg、92％） Rf（アセトン−ジクロロメタン＝５：２）＝0.39
（SM0.23） 1HNMR（δ，CDCl3，TMS＝0.0ppm）： 0.10（ｓ，6H，SiCH3），0.90（ｓ，9H，SiC
（CH3）3），2.24−2.96（ｍ，2H，C2′H2），4.12
−4.30（ｍ，1H，C4′H），4.50−4.78（ｍ，3H，
C5′H2，C3′H），6.34（brs，2H，NH2），6.43
（ｄ，Ｊ＝6.0Hz，1H，C1′H），7.0−7.48（ｍ，
8H，アロマテイツクＨ）7.98（ｓ，1H，２−
Ｈ），8.32（ｓ，1H，８−Ｈ）13 CNMR（δ，CDCl3，CDCl3＝76.9ppm）： −4.98，−4.88（SiCH3），17.72（SiC〓），25.57
（SiC（ＣH3）3），40.22（C2′），68.82（ｄ，Jpoc＝
6.6Hz，C5′）72.33（C3′），84.63（C1′），85.31
（ｄ，Jpocc＝8.2Hz，C4′），120.31（C5），121.35
（ｄ，Ｊ＝2.2Hz，アロマテイツクＣ），125.41
（ｄ，Ｊ＝7.7Hz，アロマテイツクＣ），126.06，
127.63，130.50（アロマテイツクＣ），138.95
（C8），146.42（ｄ，Ｊ＝6.7Hz，アロマテイツク
Ｃ），149.59（C4），152.76（C2），155.64（C6） IR（CHCl3，cm-1）： 3540，3400（NH2），1630，1585（核酸塩基），
1290（Ｐ＝Ｏ） UV（MeOH）： λmax＝260.2nm，ε＝1.31×104 実施例 10 2′，3′−イソプロピリデン−アデノシン−5′−
Ｏ−ジ（ｏ−クロロフエニル）ホスフエートの
合成 ｔ−ブチルリチウム（0.203mmol）のペンタン
溶液を2′，3′−イソプロピリデンアデノシン
（0.203mmol，62.4mg）のTHF（５ml）懸濁液に
−78℃にて加え、３時間撹拌した。反応混合物に
ジ（ｏ−クロロフエニル）ホスホロクロリデート
のTHF溶液（0.223mmol，0.886M，0.25ml）を
加え、−78℃にて４時間撹拌した。反応混合物を
ジクロロメタン（20ml）で希釈し、水−ジクロロ
メタン（30ml−10ml）の混合物に注ぎ抽出した。
水層をジクロロメタン（30ml×１、15ml×２）で
洗い、あわせた有機層を飽和食塩水（20ml）で洗
つた後、硫酸マグネシウム上で乾燥した。濃縮し
て得た淡黄色ガム状物（0.20ｇ）をシリカゲルカ
ラムクロマトグラフイー（６％含水、5.0ｇ，0.9
cmφ×12cm）に供しベンゼン−アセトン（10：１
〜３：１）で溶出し、標題化合物（109mg，88％）
を得た。mp138−139℃ Rf（クロロホルム−メタノール−酢酸エチル＝
10：１：１）＝0.28（SM：0.14） 1HNMR（δ，CDCl3，TMS＝0.0ppm）： 1.38（ｓ，3H，【式】 ），1.61（ｓ，3H，【式】 ），4.50−4.76（ｍ，3H，C2′H，C3′H，C4′H），
5.14（dd，Ｊ＝2.0，6.2Hz，1H，C5′H），5.39
（dd，Ｊ＝2.2，6.2Hz，1H，C5′H），6.14（ｄ，
Ｊ＝2.4Hz，C1′H），6.55（brs，2H，NH2），7.0
−7.44（ｍ，8H，アロマテイツクＨ），7.90（ｓ，
1H，２−Ｈ），8.29（ｓ，1H，８−Ｈ）13 CNMR（δ，CDCl3，CDCl3＝76.9ppm）： 25.18，26.94【式】 68.62（ｄ，Jpoc＝6.6Hz，C5′），81.46（C2′），
83.99（C3′），84.92（ｄ，Jpocc＝8.8Hz，C4′），
90.78（C1′），114.45【式】 120.26（C5），121.28（ｄ，Ｊ＝2.2Hz，アロマテ
イツクＣ），125.36（ｄ，Ｊ＝7.7Hz，アロマテ
イツクＣ），126.02，127.53，130.41（アロマテ
イツクＣ），139.44（C8），146.37（ｄ，Ｊ＝6.6
Hz，アロマテイツクＣ），149.20（C4），152.91
（C2），155.74（C6） IR（CHCl3），cm-1）： 3540，3400（NH2），1630，1585（核酸塩基）
1290（〓Ｐ＝Ｏ） UV（MeOH）： λmax＝261.2nm，ε＝1.28×104 元素分析：C25H24N5O7PCl2 計算値：
Ｃ，49.36％；Ｎ，11.51％；Ｈ，3.98％ 実測値：
Ｃ，49.18％；Ｎ，11.38％；Ｈ，4.00％ 以上の実施例について、試剤、反応条件、収率
等を次表に記載し、また他の実施例についても同
表に併記した。 【式】 【式】 【表】 〜


(1.2)−78(3)

【表】 〜


(1)

(B) ジヌクレオチドの合成 参考例 １ 本法を用いて次式のようにしてジヌクレオチド
の合成を行なつた。 5′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−2′−デオ
キシアデノシン−3′−Ｏ−ｐ−ニトロフエニルフ
エニルホスフエート１〜の合成 メシチルリチウム（0.180mmol）のTHF−エ
ーテル−ペンタン（約４：１：２）の懸濁液に
5′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−2′−デオキ
シアデノシン（0.180mmol，65.8mg）のTHF（1.5
ml）溶液を−78℃にて加え、10分間撹拌後、ｐ−
ニトロフエニルフエニルホスホロクロリデート*3
のTHF溶液（0.216mmol，0.785M，0.275ml）を
加えた。−78℃で１時間撹拌後、ジクロルメタン
で希釈して飽和塩化アンモニウム水溶液を加え
た。有機層を分離し、水層をジクロルメタンで２
回抽出し、有機層を合わせて、飽和食塩水で洗つ
て無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧濃縮し
て得た油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラ
フイー（６％含水、５ｇ）に供し、ジクロルメタ
ン−アセトン（10：０〜５：５）で溶出し、淡黄
色油状物として１〜（65.4mg，57％）を得た。 1HNMR（δ，CDCl3，TMS＝0.0ppm）： 0.08（ｓ，6H，Si−CH3），1.89（ｓ，9H，Si−
Ｃ−CH3），2.52−2.98（ｍ，2H，C2′H），3.68
−3.94（ｍ，2H，C5′H），4.20−4.44（ｍ，1H，
C4′H），5.28−5.54（ｍ，1H，C3′H），6.17
（brs，2H，NH2），6.46（brt，1H，Ｊ＝８Hz，
C1′H），7.12−7.50（ｍ，7H，【式】 【式】 ），8.06，8.07（each ｓ，1H，C2H），8.25（ｄ，
2H，Ｊ＝10.0Hz，【式】 ），8.31（ｓ，1H，C8H） フエニル−5′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−
2′−デオキシアデニリル（3′→5′）−3′−Ｏ−ｔ−
ブチルジメチルシリル−2′−デオキシアデノシン
２〜の合成 メシチルリチウム（0.101mmol）のTHF−エ
ーテル−ペンタン（約４：１：２）の懸濁液に
3′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−2′−デオキ
シアデノシン（0.100mmol，36.5mg）のTHF（1.0
ml）溶液を−78℃にて加え、10分間撹拌した。こ
の溶液に１〜（0.102mmol，65.4mg）のTHF（1.0
ml）溶液を滴下した。−78℃で１時間さらに−50
℃で３時間撹拌した後、ジクロルメタンで希釈
し、水−ジクロルメタンに注ぎ、有機層を分離し
た。水層をジクロルメタンで３回抽出して有機層
と合わせ、飽和食塩水で洗つて無水硫酸マグネシ
ウムで乾燥した。減圧濃縮して得られた油状物を
シリカゲルカラムクロマトグラフイー（６％含
水，５ｇ）で精製し〔ジクロルメタン−アセトン
−メタノール（８：２：０〜６：４：０〜６：
４：１）〕無色油状物２〜（60.1mg，69％）をほぼ
１：１のジアステレオマー濃合物として得た。 このジアステレオマーはODSのカラムを用い
たHPLCで分離分取した。 1HNMR（δ，CDCl3，TMS＝Oppm）： 保持時間の短い方 0.06，0.09（each ｓ，12H，Si−CH3），0.87，
0.90（each ｓ，18H，Si−Ｃ−CH3），2.26−
2.98（ｍ，4H，C2′H），3.68−3.85（ｍ，2H，
C5′H−OSi），4.02−4.48（ｍ，4H，C5′H−OP，
C4′H），4.58−4.78（ｍ，1H，C3′H−OSi），
5.12−5.30（ｍ，1H，C3′H−OP），6.20−6.56
（ｍ，6H，C1′H，NH2），7.12−7.38（ｍ，5H，
アロマテイツクＨ），7.97，8.08（each ｓ，
2H，C2H），8.27（ｓ，2H，C8H） 保持時間の長い方 0.04，0.11（each ｓ，12H，Si−CH3），0.84，
0.91（each ｓ，18H，Si−Ｃ−CH3），2.28−
3.02（ｍ，4H，C2′H），3.52−3.90（ｍ，2H，
C5′H−OSi），5.06−5.25（ｍ，2H，C5′H−
OP），5.28−5.48（ｍ，2H，C4′H），5.58−5.76
（ｍ，1H，C3′H−OSi），6.10−6.32（ｍ，1H，
C3′H−OP），6.18（br.s，4H，NH2），6.28−
6.52（ｍ，2H，C1′H），7.12−7.44（ｍ，5H，ア
ロマテイツクＨ），7.98，8.04（each ｓ，2H，
C2H），8.26（ｓ，2H，C8H） この反応と１〜を単離することなく行なうと80％
のoverall収率で２〜が得られる。 参考例 ２ １〜73.1mg（0.200mmol）の無水THF溶液２ml
をAr雰囲気下−78℃に冷却し、ｔ−BuLi
（0.48M，ペンタン溶液）0.420ml（0.20ｍmol）
を５分間で滴下した。−95℃に冷却し２〜のトルエ
ン溶液（0.377M）0.605ml（2.28mmol）を滴下し
た後、−78℃にて１時間撹拌して３〜の溶液を得た。
４〜80.4mg（0.220mmol）の無水THF溶液２mlを
Ar雰囲気下、−78℃に冷やし、ｔ−BuLiのペン
タン溶液（0.48M）0.458ml（0.220mmol）を５分
間で滴下した。この溶液に、上で調製した３〜の
THF溶液を滴下し、−50℃で５時間撹拌した。10
％食塩水を加えて室温にもどし、塩化メチレンで
抽出し、有機層を飽和重曹水、飽和食塩水の順で
洗つて無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧濃
縮して得た油状物をシリカゲルカラムクロマトで
精製して無色の固体として５〜を139mg（80％）得
た。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ 糖残基を有する化合物をメタル化剤で処理し
    た後、ホスホリル化剤を作用させて、該化合物の
    水酸基をリン酸化することを特徴とするリン酸化
    合物の製造方法。 ２ 糖残基を有する化合物が、ヌクレオシド又は
    その誘導体であり、反応を溶媒中で行なう特許請
    求の範囲第１項記載のリン酸化合物の製造方法。
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