JPH0428710B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0428710B2 JPH0428710B2 JP56119031A JP11903181A JPH0428710B2 JP H0428710 B2 JPH0428710 B2 JP H0428710B2 JP 56119031 A JP56119031 A JP 56119031A JP 11903181 A JP11903181 A JP 11903181A JP H0428710 B2 JPH0428710 B2 JP H0428710B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- acyl
- hydrogen
- formula
- tylactone
- acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
- C07H17/08—Hetero rings containing eight or more ring members, e.g. erythromycins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D313/00—Heterocyclic compounds containing rings of more than six members having one oxygen atom as the only ring hetero atom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/08—Oxygen as only ring hetero atoms containing a hetero ring of at least seven ring members, e.g. zearalenone, macrolide aglycons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
- C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
- C12R2001/54—Streptomyces fradiae
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
Description
本発明は、有用な抗生物質、たとえばタイロシ
ン（tylosin）（例えばテトラヘドロンレタース、
2339（1970年）参照）およびタイロシン誘導体を
製造するのに有用な新規マクロライド系化合物お
よびその関連化混合物に関する。 下記の式〔〕で示される本発明の新規化合
物、即ち５−Ｏ−ミカロシル−20−ジヒドロ−
20，23−ジデオキシタイロノリドは、簡略化のた
めに以下ミカロシルタイラクトン称ぶ： この式には立体配置が示されていないが、この
化合物はタイロシンの相当する部分と立体化学的
に同じである。その名が示す様に式〔〕中の糖
はミカロースである。 関連するミカロシルタイラクトン誘導体は下記
〔〕で示される化合物である： 〔式中、ＲおよびR1はアシル基である〕。 本発明には、式〔〕のミカロシルタイラクト
ン誘導体から製造することができる３−Ｏ−アシ
ルタイラクトン誘導体も包含される。 本発明はまた、ミカロシルタイラクトンまたは
式〔〕のミカロシルタイラクトン誘導体を緩や
かに酸加水分解してそれぞれタイラククトンまた
は３−Ｏ−アシルタイラクトン誘導体を製造する
方法を提供するものである。 本発明に係る３−Ｏ−アシルタイラクトン誘導
体は下記の式〔〕で示される： 式〔〕、〔〕および〔〕で示される化合物
は16員環マクロライド系抗生物質を製造するため
の有用な中間体である。従つて本発明は、例え
ば、式〔〕の化合物を化学的に変換して相当す
る３−モノアシル16員環マクロライド系抗生物質
を製造する新規な方法を提供するものである。 ミカロシルタイラクトンの重要な用途の１つは
タイラクトンおよびタイラクトン誘導体を製造す
るための中間体として使用することである。タイ
ラクトンは下記の式〔〕で示される化合物であ
る： ミカロシルタイラクトンは、シリカゲル薄層ク
ロマトグラフイーによりタイラクトンおよびタイ
ロシンと区別することができる。濃硫酸または希
硫酸（50％）を噴霧して検出することができる。
この検出法によれば、タイラクトンは最初黄色〜
褐色スポツトを示し、ミカロシルタイラクトンは
青紫色のスポツトを示す。クロマトグラフイーに
蛍光背景のシリカゲル板を使用してUV検出する
のも便利である。ミカロシルタイラクトンのおお
よそのRf値を以下の表１に示す。
ン（tylosin）（例えばテトラヘドロンレタース、
2339（1970年）参照）およびタイロシン誘導体を
製造するのに有用な新規マクロライド系化合物お
よびその関連化混合物に関する。 下記の式〔〕で示される本発明の新規化合
物、即ち５−Ｏ−ミカロシル−20−ジヒドロ−
20，23−ジデオキシタイロノリドは、簡略化のた
めに以下ミカロシルタイラクトン称ぶ： この式には立体配置が示されていないが、この
化合物はタイロシンの相当する部分と立体化学的
に同じである。その名が示す様に式〔〕中の糖
はミカロースである。 関連するミカロシルタイラクトン誘導体は下記
〔〕で示される化合物である： 〔式中、ＲおよびR1はアシル基である〕。 本発明には、式〔〕のミカロシルタイラクト
ン誘導体から製造することができる３−Ｏ−アシ
ルタイラクトン誘導体も包含される。 本発明はまた、ミカロシルタイラクトンまたは
式〔〕のミカロシルタイラクトン誘導体を緩や
かに酸加水分解してそれぞれタイラククトンまた
は３−Ｏ−アシルタイラクトン誘導体を製造する
方法を提供するものである。 本発明に係る３−Ｏ−アシルタイラクトン誘導
体は下記の式〔〕で示される： 式〔〕、〔〕および〔〕で示される化合物
は16員環マクロライド系抗生物質を製造するため
の有用な中間体である。従つて本発明は、例え
ば、式〔〕の化合物を化学的に変換して相当す
る３−モノアシル16員環マクロライド系抗生物質
を製造する新規な方法を提供するものである。 ミカロシルタイラクトンの重要な用途の１つは
タイラクトンおよびタイラクトン誘導体を製造す
るための中間体として使用することである。タイ
ラクトンは下記の式〔〕で示される化合物であ
る： ミカロシルタイラクトンは、シリカゲル薄層ク
ロマトグラフイーによりタイラクトンおよびタイ
ロシンと区別することができる。濃硫酸または希
硫酸（50％）を噴霧して検出することができる。
この検出法によれば、タイラクトンは最初黄色〜
褐色スポツトを示し、ミカロシルタイラクトンは
青紫色のスポツトを示す。クロマトグラフイーに
蛍光背景のシリカゲル板を使用してUV検出する
のも便利である。ミカロシルタイラクトンのおお
よそのRf値を以下の表１に示す。
【表】
ミカロシルタイラクトンは、この化合物を生産
するストレプトマイセス・フラデイアエ株を適当
な培養培地中、液中好気条件下で、実質的な量の
該化合物が得られるまで培養することにより製造
することができる。 このストレプトマイセス・フラデイアエを発育
させるための培養培地は、多くの培地のいずれで
あつてもよい。しかし経済的な生産、最高収量、
生成物の簡単な単離を達成するにはある種の培地
を使用するのが好ましい。従つて、例えば大規模
な発酵で用いられる好ましい炭素源としては炭水
化物、例えばデキストリン、グルコース、でんぷ
ん、およびコーンミール、大豆油の如き油が挙げ
られる。好ましい窒素源としてはコーンミール、
大豆ミール、魚粉、アミノ酸などが挙げられる。
培地中に添加し得る栄養無機塩は、鉄、カリウ
ム、ナトリウム、マグネシウム、カルシウム、ア
ンモニウム、塩素、炭酸、硫酸、および硝酸イオ
ンなどを生成し得る通常の可溶性塩類である。 微生物の発育および繁殖に必要な必須微量元素
も培地に含まれていなければならない。しかしこ
の様な微量元素の、微生物の発育に必要な量は培
地中の他の成分に不純物として含まれているのが
普通である。大規模な発酵培地において、泡が問
題になる場合には、少量（例えば0.2ml／Ｌ）の
消泡剤、例えばポリプロピレングリコール（分子
量約2000）を添加する必要がある場合もある。 多量のミカロシルタイラクトンを生産するに
は、タンク中で液中好気培養するのが好ましい。
少量のミカロシルタイラクトンはフラスコ振盪培
養により得ることができる。大きなタンクに微生
物を胞子の形で接種すると抗生物質の生産にはタ
イムラグが生じるのが普通であるので、増殖形接
種材料を使用するのが好ましい。増殖形接種材料
は少量の培地に微生物の胞子形材料または菌系フ
ラグメントを接種することにより得ることがで、
微生物が新鮮に、活発に発育している培養菌を得
る。次いでこの増殖形接種材料をより大きいタン
クに入れる。増殖形接種材料用に使用される培地
は、大規模な発酵に使用されるものと同じであつ
てよいが、他の培地を使用することもできる。 本発明方法で使用される微生物はタイロシンを
生産するストレプトマイセス・フラデイアエ株の
化学的突然変異によつて得られた。この突然変異
によつて得られた微生物はタイロシンを少量しか
生産せず、主成分としてミカロシルタイラクトン
およびタイラクトンを生産する。 ミカロシルタイラクトンを生産するこの新規な
微生物はストレプトマイセス・フラデイアエの１
菌株に分類された。この新株はNorthern
Regional Research Center、Agricultural
Research、North Central Region、1815
North University Street.Peoria、Illinois、
61604に寄託番号NRRL−12201として寄託され、
貯蔵されており、誰でもこれを利用することがで
きる。 他の微生物と同様、ストレプトマイセス・フラ
デイアエNRRL−12201の性質は変異しやすい。
例えば、種々の既知の物理的および化学的変異誘
発要因、例えば紫外線、Ｘ−線、ガンマ−線およ
びＮ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグア
ニジンで処理することにより、NRRL12201株の
組換え体、突然変異株または人工的変異株が得ら
れる。ミカロシルタイラクトン生産能を保持して
いるこれらのストレプトマイセス・フラデイアエ
NRRL12201の天然のあるいは人工の変異株、突
然変異株および組換型（体）は、いずれも本発明
の化合物を製造するのに使用することができる。 ストレプトマイセス・フラデイアエ
NRRL12201は約10℃〜約40℃で増殖することが
できる。約28℃においてミカロシルタイラクトン
の生産が最高になるようである。 好気的液中培養では当り前の事であるが、滅菌
した空気を培養培地に吹き込む。効率よく抗生物
質を生産するためには、タンク生産のための空気
飽和％は約30％またはそれ以上（28℃、１気圧に
おいて）にすべきである。 発酵中、ミカロシルタイラクトンおよびタイラ
クトンの生産は、ブロスからの試料をTLCまた
はUV検出器を備えた高速液体クロマトグラフイ
ーで試験することにより追跡することができる。 液中好気培養条件下でミカロシルタイラクトン
を生産した後、発酵分野で用いられている方法で
発酵培地からミカロシルタイラクトンを回収する
ことができる。ミカロシルタイラクトンは水に溶
けにくいので、それが生産された培地中には全部
溶けていないかもしれない。従つて、ミカロシル
タイラクトンの回収は１）発酵ブロスの抽出、ま
たは２）発酵ブロスの濾過、および濾過したブロ
スと菌糸ケーキの両者の抽出によつて行なうこと
ができる。抽出には種々の技術を用いることがで
きる。濾過ブロスを精製するための好ましい方法
は、酢酸アミルまたは石油エーテルの様な適当な
溶媒でブロスを抽出し（一般にpHを調節するこ
となく）、減圧下で有機相を濃縮して結晶または
油を得る方法である。得られた結晶または油を吸
着クロマトグラフイーで精製し、ミカロシルタイ
ラクトンおよびタイラクトンを得る。 ミカロシルタイラクトンの３位および4′位の水
酸基を、既知の方法でアシル化剤を用いて処理す
ることにより式〔〕のアシルエルテル誘導体と
することができる。ミカロシルタイラクトンのア
シルエステル誘導体は新規マクロライド系抗生物
質を製造するための有用な中間体である。 代表的なアシル化剤は有機酸の無水物、ハロゲ
ニド（通常、塩基またはその他の酸捕獲剤と共に
使用する）および活性エステルなどである。アシ
ル化は有機酸とＮ，N′−ジシクロヘキシルカル
ボジイミドの如き脱水剤の混合物を用いて行うこ
ともできる。 この誘導体は一般に知られているエステル化法
により製造することができる。例えば、化学量論
量またはやや過剰のアシル化剤、例えばアシル無
水物を用い、有機溶媒、例えばピリジン中、ほぼ
０℃〜室温で、約１ないし約24時間、エルテル化
が実質的に終了するまでこの化合物を処理する。
エステル誘導体は、反応混合物から標準的な方
法、例えば抽出、クロマトグラフイーおよび結晶
化などにより分離することができる。 有用なエステルは、炭素数が１ないし18の脂肪
族、脂環式、芳香族、芳香脂肪族、異項環式のカ
ルボン酸、スルホン酸、およびアルコキシ炭酸を
包含する有機酸および硫酸、リン酸などの無機酸
のエステルである。 好ましいエステルは、Ｒが炭素原子数１〜18の
モノカルボン酸またはジカルボン酸から導かれる
アシル基であるものである。 好適なエステルの代表的なものは、ギ酸、酢
酸、クロロ酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソバレ
リン（吉草）酸、グルクロン酸、アルコキシ炭
素、ステアリン酸、シクロプロパンカルボン酸、
シクロヘキサンカルボン酸、β−シクロヘキシル
プロピオン酸、１−アダマンタンカルボン酸、安
息香酸、フエニル酢酸、フエノキシ酢酸、マンデ
ル酸および２−チエニル酢酸、アルキル−、アリ
ール−、およびアルアルキル−スルホン酸類、並
びに芳香環にハロゲン、ニトロ、低級アルコキシ
などの置換基を有していることもあるアリール−
およびアルアルキル−酸類などから誘導されるも
のである。また、コハク酸、マレイン酸、フマル
酸、マロン酸、フタル酸などのジカルボン酸から
導かれるヘミエステル類も好適なエステルに包含
される。 式〔〕、〔〕および〔〕で示される化合物
は16員環マクロライド系抗生物質を製造するため
の有用な中間体である。例えば式〔〕のミカロ
シルタイラクトンを緩和な酸性条件下で加水分解
してタイラクトン〔〕を得ることができる。同
様にして、式〔〕のミカロシルタイラクトン誘
導体を加水分解して相当する式〔〕の３−Ｏ−
アシルタイラクトン誘導体を得ることができる。 緩和な酸加水分解条件は当業者には知られてい
る。加水分解するにはpHが約４またはそれ以下
の適当な溶液を使用することができる。極性有機
共溶媒（Cosolvent）、例えばエタノールの如き
アルコールを、反応体を溶液状態に保つために溶
液中に含ませるべきである。この方法は約20〜約
100°で行なうことができる。加水分解に必要な反
応時間は反応混合物のpHおよび反応温度によつ
て変わる。pHが高い程反応速度は遅くなり、反
応温度が高い程反応速度は速い。この反応は、ミ
カロシルタイラクトンまたは３−Ｏ−アシルミカ
ロシルタイラクトン誘導体を、ミカロシル基を除
去してタイラクトンまたは３−Ｏ−アシルタイラ
クトンを得るに十分な時間、緩和な酸溶液で処理
することによつて行なわれる。 タイラクトンはタイロシンまたはタイロシン関
連化合物に生物学的に変換することができる。こ
の生物学的変換は、変換菌の増殖培地にタイラク
トンを添加することによつて行なうことができ
る。この変換菌は、タイロシン自体を製造する
か、あるいはタイラクトン生産がブロツクされて
いるほかはタイロシン生産能を有するストレプト
マイセス株であつてよい。 タイラクトン生産はブロツクされているがタイ
ロシン生産能を有する菌株は、タイロシン生産株
を変異誘発物質で処理し、タイロシンを生産し得
ないものを生存菌株からふるいわけることによつ
て得ることができる。これらのタイロシンを生産
し得ない生存菌をさらにスクリーニングし、どの
菌株がライラクトンをも生産し得ず、しかしタイ
ラクトンをタイロシンに変換することができるか
を決める。これらの菌株は、選択した生存菌の小
スケールの振盪フラスコ培養基にタイラクトンを
添加し、タイロシンが生産されるかどうかを調べ
ることによつて確認する。 ストレプトマイセス・フラデイアエ菌株
NRRL2702およびNRRL2703はタイロシンを生
産し得るストレプトマイセス株の例である。選択
菌株を得るために使用される典型的な変異誘発物
質はＮ−メチル−N′−ニトロ−ニトロソグアニ
ジンである。 タイラクトンおよび３−Ｏ−アシルタイラクト
ン誘導体は生合成のまたは代謝の研究のための標
識化合物を製造するのに特に有用である。タイラ
クトン部分かあるいは加えた糖部分のいずれかを
ラベル（標識化）することによつて、生合成また
は代謝経路の研究に有用な特定の標識化されたタ
イロシンを得ることができる。３−Ｏ−アシルタ
イラクトン誘導体のアシル置換分も標識化し得る
部位である。 以下に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明
する。 実施例 １ Ａ ミカロシルタイラクトンの振盪フラスコ培養 ストレプトマイセス・フラデイアエ
NRRL12201の凍結乾燥ペレツトを減菌水１〜２
mlに分散した。この溶液の一部（0.5ml）を以下
の組成の増殖培地（150ml）に接種した。 成 分 量（％） コーン浸漬液 1.0 酵母エキス 0.5 あらびき大豆 0.5 CaCO3 0.3 大豆油（粗） 0.45 脱イオン水 97.25 別法として、１ml容量の、液体窒素中に保存し
たS.フラデイアエNRRL12201の増殖培地を素早
く解かし、増殖培地に接種するのに用いる。接種
した増殖培地を、500mlの三角フラスコ中、29℃
で約48時間、閉鎖箱型シエーカー上、300rpmで
インキユベートした。 このインキユベートした増殖培地（0.5ml）を、
以下の組成の生産培地７mlに接種した。 成 分 量（％） テンサイ糖密 2.0 とうもろこし粉 1.5 魚粉 0.9 とうもろこしグルテン 0.9 NaCl 0.1 （NH4）2HPO4 0.04 CaCO3 0.2 大豆油（粗） 3.0 脱イオン水 91.36 この接種した発酵培地を50mlのビンの中で、29
℃で約６日間、閉鎖箱型シエーカー上、300rpm
でインキユベートした。 Ｂ ミカロシルタイラクトンのタンク発酵 多量の接種材料を得るために、Ａに記載した方
法と類似の方法で製造したインキユベート増殖培
地60mlを、以下の組成の第２次増殖成長培地38
に接種した。 成 分 量（％） とうもろこし浸漬液 1.0 大豆油粉 0.5 酵母エキス 0.5 CaCO3 0.3 大豆油（粗） 0.5 レシチン（粗） 0.015 水 97.185 50％NaOH溶液でpHを8.5に調節した。 この第２次増殖培地を68のタンク中、29℃で
約47時間インキユベートした。 この様にして得た第２次培地（４）を以下の
組成の滅菌生産培地40に接種した。 成 分 量（％） 魚粉 0.92 とうもろこし粉 1.57 とうもろこしグルテン 0.92 CaCO3 0.21 NaCl 0.10 （NH4）2HPO4 0.04 テンサイ糖密 2.10 大豆油（粗） 3.15 レシチン（粗） 0.09 水 90.90 50％NaOH溶液を用いてpHを7.2に調節した。 接種した生産培地を68のタンク中、約５日間
28℃で発酵させた。発酵培地に滅菌空気を吹き込
んで溶解酸素を約30％〜50％に保ち、通常の攪拌
器を用いて約300rpmで攪拌した。 実施例 ２ ミカロシルタイラクトンおよびタイラクトンの
分離 実施例１、Ａに記載した方法で得た発酵ブロス
（900ml）を石油エーテル（900ml）で抽出した。
この石油エーテル抽出物を空気流中で濃縮して油
を得た。この油を少量の酢酸エチル（約15ml）に
溶解した。これにヘプタン（約15〜20ml）を添加
した。酢酸エチルを徐々に蒸発させて結晶化させ
た。この結晶を分離し、タイラクトンおよびミカ
ロシルタイラクトンの結晶混合物450mgを得た。 残つた全ブロスに同量のメタノールを加え、得
られた溶液を濾過し、濾液を塩化メチレンで抽出
することにより、さらに生成物を得ることができ
た。 結晶混合物（400mg）をベンゼンに溶解するこ
とにより分離した。即ち、このベンゼン溶液を、
シリカゲル（woelm）カラム（ベンゼン充填）
に入れクロマトグラフイーにかけた。溶出液をシ
リカゲル薄層クロマトグラフイーでモニターした
（溶離剤：ベンゼン／酢酸エチル（３／２）、検
出：濃硫酸噴霧）。カラムを先づベンゼンで溶出
して脂質を除き、次いでベンゼン／酢酸エチル
（９／１）１、ベンゼン／酢酸エチル（６／１）
1400mlおよびベンゼン／酢酸エチル（３／１）で
溶出してタイラクトンおよびミカロシルタイラク
トンを分離した。容量約150mlのフラクシヨンを
集めた。タイラクトンが先づ溶出され（フラクシ
ヨン14〜19）、後で（フラクシヨン22〜26）ミカ
ロシルタイラクトンが溶出された。それぞれを含
むフラクシヨンを合わせ、減圧下に蒸発させ、ヘ
プタンから結晶化させてタイラクトン160mgおよ
びミカロシルタイラクトン120mgを得た。 ヘプタン、ヘキサンまたは酢酸エチル−ヘキサ
ンから結晶化させたミカロシルタイラクトンは白
色固体であり、約182〜184℃で融解する。そのお
およその元素組成（％）は以下の通りである：炭
素67％、水素９％、酸素24％。その実験式はC30
H50O8であり、分子量は約538である。 クロロホルム中でのミカロシルタイラクトンの
赤外吸収スペクトルを第１図に示す。観察された
吸収極大は以下の通りである。（cm-1）：3640
（ｍ）、2941および2907（二重線、st）、2421（V.
S.）、1712（st）、1678（ｍ）、1623（ｓ）、1590（st
）、
1456（ｍ）、1404（ｓ）、1374（ｓ）、1359（肩）、13
14
（ｓ）、1284（ｓ）、1263（V.S.）、1229（ｓ）、1178
（st）、1157（ｍ）、1134（V.S.）、1109（ｓ）、1078
（V.S.）、1050（ｍ）、1025（V.S.）、1000（st）、98
4
（st）、962（ｍ）、920（V.S.）、911（V.S.）、887
（ｓ）、867（ｓ）、848（肩）、836（ｓ）および799
（ｓ）。ここでV.S.は非常に弱い、ｓは弱い、ｍは
中程度、stは強い吸収を意味する。 中性エタノール中でのミカロシルタイラクトン
の紫外線吸収スペクトルは、約282nmに極大吸収
を示す（Ｅ１％ １cm＝568）。 ミカロシルタイラクトンは以下の比旋光度を有
する：〔ｄ〕25 D＝−46.4°（Cl、CH3OH） ミカロシルタイラクトンはほとんど水に溶けな
いが、アセトン、メタノール、エタノール、ジメ
チルホルムアミド、クロロホルム、ジエチルエー
テル、石油エーテル、ベンゼンおよびジメチルス
ルホキシドの如き有機溶媒に可溶である。 実施例 ３ ３，4′−ジ−Ｏ−アセチル−５−Ｏ−ミカロシ
ルタイラクトン 実施例２によつて得たミカロシルタイラクトン
（20mg）をピリジン（0.5ml）に溶解した。無水酢
酸（0.25ml）を添加した。この混合物を室温で15
時間攪拌し、次いで減圧下で濃縮乾固した。残留
物をメタノール／シクロヘキサンに入れ、固形物
が得られるまで再蒸発させて３，4′−ジ−Ｏ−ア
セチル−５−Ｏ−ミカロシルタイラクトンを得
た。 実施例 ４〜７ 実施例３と同様にして、ただし無水プロピオン
酸を用いて３，4′−ジ−Ｏ−プロピオニル−５−
Ｏ−ミカロシルタイラクトンを得た。 実施例３と同様にして、ただし無水吉草酸を用
いて３，4′−ジ−Ｏ−イソバレリル−５−Ｏ−ミ
カロシルタイラクトンを得た。 実施例３と同様にして、ただし無水安息香酸を
用いて３，4′−ジ−Ｏ−ベンゾイル−５−Ｏ−ミ
カロシルタイラクトンを得た。 実施例３と同様にして、ただし無水ｎ−酪酸を
用いて３，4′−ジ−Ｏ−（ｎ−ブチリル）−５−Ｏ
−ミカロシルタイラクトンを得た。 実施例 ８ ミカロシルタイラクトンからタイラクトンの製
造 実施例２に従つて製造したミカロシルタイラクト
ンを塩酸の含水メイタノール溶液（pH1.8）に溶
解した。加水分解が終了するまでこの溶液を放置
し（蒸気浴上で約30分間加温する）、次いで水酸
化ナトリウムを加えてpH7.0に調節した。この溶
液を酢酸エチル、ジクロロメタンまたはクロロホ
ルムで抽出した。抽出液を乾燥し、減圧下で蒸発
させてタイラクトンを得た。 ヘプタン、ヘキサンまたは酢酸エチル−ヘキサ
ンから結晶化させたタイラクトンは白色固体であ
り、約162〜163℃で融解する。タイラクトンのお
およその元素組成（％）は以下の通りである：炭
素70％、水素9.7％、酸素20.3％。その実験式は
C23H38O5であり、分子量は約394である。 クロロホルム中でのタイラクトンの赤外吸収ス
ペクトルは、以下の極大吸収を示す（cm-1）：
3534（ｍ）、2924（st）、2398（ｗ）、2353（ｗ）、17
09
（v.st）、1678（v.st）、1626（ｓ）、1592（v.st）、
1458
（st）、1441（肩）、1404（st）、1379（ｓ）、1316（
st）、
1284（ｍ）、1181（v.st）、1143（ｓ）、1103（ｍ）、
1078（ｍ）、1049（v.s.）、1025（ｍ）、984（v.st）
、
958（st）、923（ｍ）、911（肩）、859（ｓ）、868（
ｍ）、
840（ｍ）、820（v.s）および661（ｓ）。ここでｗは
弱い、v.s.は非常に小さい、ｓは小さい、ｍは中
程度の、stは強い、v.stは非常に強い吸収を表わ
す。 中性エタノール中でのタイラクトンの紫外線吸
収スペクトルは282nmに極大吸収を示す（Ｅ１％ １cm
＝560）。 タイラクトンは以下の比旋光度を示す：〔ｄ〕25 D
＝−55.23°（Cl、CH3OH）。 66％水性ジメチルホルムアミド中でタイラクト
ンを電気滴定したところ、滴定可能基を有しない
ことがわかつた。 タイラクトンは水にほとんど溶けないがアセト
ン、メタノール、エタノール、ジメチルホルムア
ミド、クロロホルム、ジエチルエーテル、石油エ
ーテル、ベンゼンおよびジメチルスルホキシドの
如き有機溶媒に可溶である。 実施例 ９ ３−Ｏ−アセチルタイラクトンの製
造。 実施例３で製造した３，4′−ジ−Ｏ−アセチル
−５−Ｏ−ミカロシルタイラクトンを、メタノー
ル／0.1NHCl（１／１、pH1.5）を用い実施例８
の方法で加水分解して３−Ｏ−アセチルタイラク
トンを得た。 実施例 10〜13 実施例９と同様にして、実施例４の３，4′−ジ
−Ｏ−プロピオニル−５−Ｏ−ミカロシルタイラ
クトンから３−Ｏ−プロピオニルタイラクトンを
得た。 実施例９と同様にして、実施例５の３，4′−ジ
−Ｏ−イソバレリル−５−Ｏ−ミカロシルタイラ
クトンから３−Ｏ−イソバレリルタイラクトンを
得た。 実施例９と同様にして、実施例６の３，4′−ジ
−Ｏ−ベンゾイル−５−Ｏ−ミカロシルタイラク
トンから３−Ｏ−ベンゾイルタイラクトンを得
た。 実施例９と同様にして、実施例７の３，4′−ジ
−Ｏ−（ｎ−ブチリル）−５−Ｏ−ミカロシルタイ
ラクトンから３−Ｏ−（ｎ−ブチリル）タイラク
トンを得た。 実施例 14 タイラクトンからタイロシンの製造 もともとタイロシンを生産したがマクロライド
環形成がブロツクされているストレプトマイセ
ス・フラデイアエ株を実施例１、Ａに記載した方
法で培養した。温度は28℃で行なつた。接種48時
間後、培養物にタイラクトンを添加した。多量の
タイロシンが生産されるまで、即ち、さらに約３
日間培養を続けた。タイロシンの存在は、ブロス
の試料をタイロシンに対して感受性を有すること
が知られている微生物に対して試験することによ
り調べた。１つの有用なアツセイ用微生物はスタ
フイロコツカス・アウレウスATCC9144である。
この生物学的検定は自動濁度法を用いて好適に実
施した。その他の検定法には薄層クロマトグラフ
イーおよびUV検出器を備えた高速液体クロマト
グラフイーがある。 実施例 15 標識化タシロシンの製造 標識化したアセテート、プロピオネートまたは
ブチレートを培養培地に添加するほかは実施例１
および２の方法でミカロシルタイラクトンを製造
した。この様にして製造した標識化したミカロシ
ルタイラクトンを使用して、実施例８の方法で標
識化したタイラクトンを製造した。この標識化タ
イラクトンを使用して、実施例14の方法でタイロ
シンを製造した。この様にしてマクロライド環上
を標識化したタイロシンを得た。 実施例 16 ３−Ｏ−アセチル−５−Ｏ−β−デ
ソサミニルタイラクトンの製造 実施例10で製造した３−Ｏ−アセチルタイラク
トンを、ニトロメタン中シアン化水銀の存在下で
５当量の１−α−ブロモ−２−Ｏ−アセチルデソ
サミン臭化水素酸塩と混合した（20℃、10時間）。
シリカゲルカラムクロマトグラフイーにより３，
2′−Ｏ−ジアセチル−５−Ｏ−β−デソサミニル
タイラクトンを分離した。この化合物をメタノー
ル中、室温で放置して2′−アセチル基を除去する
と３−Ｏ−アセチル−５−Ｏ−β−デソサミニル
タイラクトンが得られた（抗生物質Ｍ−4365G1
の３−Ｏ−アセチル誘導体）。
するストレプトマイセス・フラデイアエ株を適当
な培養培地中、液中好気条件下で、実質的な量の
該化合物が得られるまで培養することにより製造
することができる。 このストレプトマイセス・フラデイアエを発育
させるための培養培地は、多くの培地のいずれで
あつてもよい。しかし経済的な生産、最高収量、
生成物の簡単な単離を達成するにはある種の培地
を使用するのが好ましい。従つて、例えば大規模
な発酵で用いられる好ましい炭素源としては炭水
化物、例えばデキストリン、グルコース、でんぷ
ん、およびコーンミール、大豆油の如き油が挙げ
られる。好ましい窒素源としてはコーンミール、
大豆ミール、魚粉、アミノ酸などが挙げられる。
培地中に添加し得る栄養無機塩は、鉄、カリウ
ム、ナトリウム、マグネシウム、カルシウム、ア
ンモニウム、塩素、炭酸、硫酸、および硝酸イオ
ンなどを生成し得る通常の可溶性塩類である。 微生物の発育および繁殖に必要な必須微量元素
も培地に含まれていなければならない。しかしこ
の様な微量元素の、微生物の発育に必要な量は培
地中の他の成分に不純物として含まれているのが
普通である。大規模な発酵培地において、泡が問
題になる場合には、少量（例えば0.2ml／Ｌ）の
消泡剤、例えばポリプロピレングリコール（分子
量約2000）を添加する必要がある場合もある。 多量のミカロシルタイラクトンを生産するに
は、タンク中で液中好気培養するのが好ましい。
少量のミカロシルタイラクトンはフラスコ振盪培
養により得ることができる。大きなタンクに微生
物を胞子の形で接種すると抗生物質の生産にはタ
イムラグが生じるのが普通であるので、増殖形接
種材料を使用するのが好ましい。増殖形接種材料
は少量の培地に微生物の胞子形材料または菌系フ
ラグメントを接種することにより得ることがで、
微生物が新鮮に、活発に発育している培養菌を得
る。次いでこの増殖形接種材料をより大きいタン
クに入れる。増殖形接種材料用に使用される培地
は、大規模な発酵に使用されるものと同じであつ
てよいが、他の培地を使用することもできる。 本発明方法で使用される微生物はタイロシンを
生産するストレプトマイセス・フラデイアエ株の
化学的突然変異によつて得られた。この突然変異
によつて得られた微生物はタイロシンを少量しか
生産せず、主成分としてミカロシルタイラクトン
およびタイラクトンを生産する。 ミカロシルタイラクトンを生産するこの新規な
微生物はストレプトマイセス・フラデイアエの１
菌株に分類された。この新株はNorthern
Regional Research Center、Agricultural
Research、North Central Region、1815
North University Street.Peoria、Illinois、
61604に寄託番号NRRL−12201として寄託され、
貯蔵されており、誰でもこれを利用することがで
きる。 他の微生物と同様、ストレプトマイセス・フラ
デイアエNRRL−12201の性質は変異しやすい。
例えば、種々の既知の物理的および化学的変異誘
発要因、例えば紫外線、Ｘ−線、ガンマ−線およ
びＮ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグア
ニジンで処理することにより、NRRL12201株の
組換え体、突然変異株または人工的変異株が得ら
れる。ミカロシルタイラクトン生産能を保持して
いるこれらのストレプトマイセス・フラデイアエ
NRRL12201の天然のあるいは人工の変異株、突
然変異株および組換型（体）は、いずれも本発明
の化合物を製造するのに使用することができる。 ストレプトマイセス・フラデイアエ
NRRL12201は約10℃〜約40℃で増殖することが
できる。約28℃においてミカロシルタイラクトン
の生産が最高になるようである。 好気的液中培養では当り前の事であるが、滅菌
した空気を培養培地に吹き込む。効率よく抗生物
質を生産するためには、タンク生産のための空気
飽和％は約30％またはそれ以上（28℃、１気圧に
おいて）にすべきである。 発酵中、ミカロシルタイラクトンおよびタイラ
クトンの生産は、ブロスからの試料をTLCまた
はUV検出器を備えた高速液体クロマトグラフイ
ーで試験することにより追跡することができる。 液中好気培養条件下でミカロシルタイラクトン
を生産した後、発酵分野で用いられている方法で
発酵培地からミカロシルタイラクトンを回収する
ことができる。ミカロシルタイラクトンは水に溶
けにくいので、それが生産された培地中には全部
溶けていないかもしれない。従つて、ミカロシル
タイラクトンの回収は１）発酵ブロスの抽出、ま
たは２）発酵ブロスの濾過、および濾過したブロ
スと菌糸ケーキの両者の抽出によつて行なうこと
ができる。抽出には種々の技術を用いることがで
きる。濾過ブロスを精製するための好ましい方法
は、酢酸アミルまたは石油エーテルの様な適当な
溶媒でブロスを抽出し（一般にpHを調節するこ
となく）、減圧下で有機相を濃縮して結晶または
油を得る方法である。得られた結晶または油を吸
着クロマトグラフイーで精製し、ミカロシルタイ
ラクトンおよびタイラクトンを得る。 ミカロシルタイラクトンの３位および4′位の水
酸基を、既知の方法でアシル化剤を用いて処理す
ることにより式〔〕のアシルエルテル誘導体と
することができる。ミカロシルタイラクトンのア
シルエステル誘導体は新規マクロライド系抗生物
質を製造するための有用な中間体である。 代表的なアシル化剤は有機酸の無水物、ハロゲ
ニド（通常、塩基またはその他の酸捕獲剤と共に
使用する）および活性エステルなどである。アシ
ル化は有機酸とＮ，N′−ジシクロヘキシルカル
ボジイミドの如き脱水剤の混合物を用いて行うこ
ともできる。 この誘導体は一般に知られているエステル化法
により製造することができる。例えば、化学量論
量またはやや過剰のアシル化剤、例えばアシル無
水物を用い、有機溶媒、例えばピリジン中、ほぼ
０℃〜室温で、約１ないし約24時間、エルテル化
が実質的に終了するまでこの化合物を処理する。
エステル誘導体は、反応混合物から標準的な方
法、例えば抽出、クロマトグラフイーおよび結晶
化などにより分離することができる。 有用なエステルは、炭素数が１ないし18の脂肪
族、脂環式、芳香族、芳香脂肪族、異項環式のカ
ルボン酸、スルホン酸、およびアルコキシ炭酸を
包含する有機酸および硫酸、リン酸などの無機酸
のエステルである。 好ましいエステルは、Ｒが炭素原子数１〜18の
モノカルボン酸またはジカルボン酸から導かれる
アシル基であるものである。 好適なエステルの代表的なものは、ギ酸、酢
酸、クロロ酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソバレ
リン（吉草）酸、グルクロン酸、アルコキシ炭
素、ステアリン酸、シクロプロパンカルボン酸、
シクロヘキサンカルボン酸、β−シクロヘキシル
プロピオン酸、１−アダマンタンカルボン酸、安
息香酸、フエニル酢酸、フエノキシ酢酸、マンデ
ル酸および２−チエニル酢酸、アルキル−、アリ
ール−、およびアルアルキル−スルホン酸類、並
びに芳香環にハロゲン、ニトロ、低級アルコキシ
などの置換基を有していることもあるアリール−
およびアルアルキル−酸類などから誘導されるも
のである。また、コハク酸、マレイン酸、フマル
酸、マロン酸、フタル酸などのジカルボン酸から
導かれるヘミエステル類も好適なエステルに包含
される。 式〔〕、〔〕および〔〕で示される化合物
は16員環マクロライド系抗生物質を製造するため
の有用な中間体である。例えば式〔〕のミカロ
シルタイラクトンを緩和な酸性条件下で加水分解
してタイラクトン〔〕を得ることができる。同
様にして、式〔〕のミカロシルタイラクトン誘
導体を加水分解して相当する式〔〕の３−Ｏ−
アシルタイラクトン誘導体を得ることができる。 緩和な酸加水分解条件は当業者には知られてい
る。加水分解するにはpHが約４またはそれ以下
の適当な溶液を使用することができる。極性有機
共溶媒（Cosolvent）、例えばエタノールの如き
アルコールを、反応体を溶液状態に保つために溶
液中に含ませるべきである。この方法は約20〜約
100°で行なうことができる。加水分解に必要な反
応時間は反応混合物のpHおよび反応温度によつ
て変わる。pHが高い程反応速度は遅くなり、反
応温度が高い程反応速度は速い。この反応は、ミ
カロシルタイラクトンまたは３−Ｏ−アシルミカ
ロシルタイラクトン誘導体を、ミカロシル基を除
去してタイラクトンまたは３−Ｏ−アシルタイラ
クトンを得るに十分な時間、緩和な酸溶液で処理
することによつて行なわれる。 タイラクトンはタイロシンまたはタイロシン関
連化合物に生物学的に変換することができる。こ
の生物学的変換は、変換菌の増殖培地にタイラク
トンを添加することによつて行なうことができ
る。この変換菌は、タイロシン自体を製造する
か、あるいはタイラクトン生産がブロツクされて
いるほかはタイロシン生産能を有するストレプト
マイセス株であつてよい。 タイラクトン生産はブロツクされているがタイ
ロシン生産能を有する菌株は、タイロシン生産株
を変異誘発物質で処理し、タイロシンを生産し得
ないものを生存菌株からふるいわけることによつ
て得ることができる。これらのタイロシンを生産
し得ない生存菌をさらにスクリーニングし、どの
菌株がライラクトンをも生産し得ず、しかしタイ
ラクトンをタイロシンに変換することができるか
を決める。これらの菌株は、選択した生存菌の小
スケールの振盪フラスコ培養基にタイラクトンを
添加し、タイロシンが生産されるかどうかを調べ
ることによつて確認する。 ストレプトマイセス・フラデイアエ菌株
NRRL2702およびNRRL2703はタイロシンを生
産し得るストレプトマイセス株の例である。選択
菌株を得るために使用される典型的な変異誘発物
質はＮ−メチル−N′−ニトロ−ニトロソグアニ
ジンである。 タイラクトンおよび３−Ｏ−アシルタイラクト
ン誘導体は生合成のまたは代謝の研究のための標
識化合物を製造するのに特に有用である。タイラ
クトン部分かあるいは加えた糖部分のいずれかを
ラベル（標識化）することによつて、生合成また
は代謝経路の研究に有用な特定の標識化されたタ
イロシンを得ることができる。３−Ｏ−アシルタ
イラクトン誘導体のアシル置換分も標識化し得る
部位である。 以下に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明
する。 実施例 １ Ａ ミカロシルタイラクトンの振盪フラスコ培養 ストレプトマイセス・フラデイアエ
NRRL12201の凍結乾燥ペレツトを減菌水１〜２
mlに分散した。この溶液の一部（0.5ml）を以下
の組成の増殖培地（150ml）に接種した。 成 分 量（％） コーン浸漬液 1.0 酵母エキス 0.5 あらびき大豆 0.5 CaCO3 0.3 大豆油（粗） 0.45 脱イオン水 97.25 別法として、１ml容量の、液体窒素中に保存し
たS.フラデイアエNRRL12201の増殖培地を素早
く解かし、増殖培地に接種するのに用いる。接種
した増殖培地を、500mlの三角フラスコ中、29℃
で約48時間、閉鎖箱型シエーカー上、300rpmで
インキユベートした。 このインキユベートした増殖培地（0.5ml）を、
以下の組成の生産培地７mlに接種した。 成 分 量（％） テンサイ糖密 2.0 とうもろこし粉 1.5 魚粉 0.9 とうもろこしグルテン 0.9 NaCl 0.1 （NH4）2HPO4 0.04 CaCO3 0.2 大豆油（粗） 3.0 脱イオン水 91.36 この接種した発酵培地を50mlのビンの中で、29
℃で約６日間、閉鎖箱型シエーカー上、300rpm
でインキユベートした。 Ｂ ミカロシルタイラクトンのタンク発酵 多量の接種材料を得るために、Ａに記載した方
法と類似の方法で製造したインキユベート増殖培
地60mlを、以下の組成の第２次増殖成長培地38
に接種した。 成 分 量（％） とうもろこし浸漬液 1.0 大豆油粉 0.5 酵母エキス 0.5 CaCO3 0.3 大豆油（粗） 0.5 レシチン（粗） 0.015 水 97.185 50％NaOH溶液でpHを8.5に調節した。 この第２次増殖培地を68のタンク中、29℃で
約47時間インキユベートした。 この様にして得た第２次培地（４）を以下の
組成の滅菌生産培地40に接種した。 成 分 量（％） 魚粉 0.92 とうもろこし粉 1.57 とうもろこしグルテン 0.92 CaCO3 0.21 NaCl 0.10 （NH4）2HPO4 0.04 テンサイ糖密 2.10 大豆油（粗） 3.15 レシチン（粗） 0.09 水 90.90 50％NaOH溶液を用いてpHを7.2に調節した。 接種した生産培地を68のタンク中、約５日間
28℃で発酵させた。発酵培地に滅菌空気を吹き込
んで溶解酸素を約30％〜50％に保ち、通常の攪拌
器を用いて約300rpmで攪拌した。 実施例 ２ ミカロシルタイラクトンおよびタイラクトンの
分離 実施例１、Ａに記載した方法で得た発酵ブロス
（900ml）を石油エーテル（900ml）で抽出した。
この石油エーテル抽出物を空気流中で濃縮して油
を得た。この油を少量の酢酸エチル（約15ml）に
溶解した。これにヘプタン（約15〜20ml）を添加
した。酢酸エチルを徐々に蒸発させて結晶化させ
た。この結晶を分離し、タイラクトンおよびミカ
ロシルタイラクトンの結晶混合物450mgを得た。 残つた全ブロスに同量のメタノールを加え、得
られた溶液を濾過し、濾液を塩化メチレンで抽出
することにより、さらに生成物を得ることができ
た。 結晶混合物（400mg）をベンゼンに溶解するこ
とにより分離した。即ち、このベンゼン溶液を、
シリカゲル（woelm）カラム（ベンゼン充填）
に入れクロマトグラフイーにかけた。溶出液をシ
リカゲル薄層クロマトグラフイーでモニターした
（溶離剤：ベンゼン／酢酸エチル（３／２）、検
出：濃硫酸噴霧）。カラムを先づベンゼンで溶出
して脂質を除き、次いでベンゼン／酢酸エチル
（９／１）１、ベンゼン／酢酸エチル（６／１）
1400mlおよびベンゼン／酢酸エチル（３／１）で
溶出してタイラクトンおよびミカロシルタイラク
トンを分離した。容量約150mlのフラクシヨンを
集めた。タイラクトンが先づ溶出され（フラクシ
ヨン14〜19）、後で（フラクシヨン22〜26）ミカ
ロシルタイラクトンが溶出された。それぞれを含
むフラクシヨンを合わせ、減圧下に蒸発させ、ヘ
プタンから結晶化させてタイラクトン160mgおよ
びミカロシルタイラクトン120mgを得た。 ヘプタン、ヘキサンまたは酢酸エチル−ヘキサ
ンから結晶化させたミカロシルタイラクトンは白
色固体であり、約182〜184℃で融解する。そのお
およその元素組成（％）は以下の通りである：炭
素67％、水素９％、酸素24％。その実験式はC30
H50O8であり、分子量は約538である。 クロロホルム中でのミカロシルタイラクトンの
赤外吸収スペクトルを第１図に示す。観察された
吸収極大は以下の通りである。（cm-1）：3640
（ｍ）、2941および2907（二重線、st）、2421（V.
S.）、1712（st）、1678（ｍ）、1623（ｓ）、1590（st
）、
1456（ｍ）、1404（ｓ）、1374（ｓ）、1359（肩）、13
14
（ｓ）、1284（ｓ）、1263（V.S.）、1229（ｓ）、1178
（st）、1157（ｍ）、1134（V.S.）、1109（ｓ）、1078
（V.S.）、1050（ｍ）、1025（V.S.）、1000（st）、98
4
（st）、962（ｍ）、920（V.S.）、911（V.S.）、887
（ｓ）、867（ｓ）、848（肩）、836（ｓ）および799
（ｓ）。ここでV.S.は非常に弱い、ｓは弱い、ｍは
中程度、stは強い吸収を意味する。 中性エタノール中でのミカロシルタイラクトン
の紫外線吸収スペクトルは、約282nmに極大吸収
を示す（Ｅ１％ １cm＝568）。 ミカロシルタイラクトンは以下の比旋光度を有
する：〔ｄ〕25 D＝−46.4°（Cl、CH3OH） ミカロシルタイラクトンはほとんど水に溶けな
いが、アセトン、メタノール、エタノール、ジメ
チルホルムアミド、クロロホルム、ジエチルエー
テル、石油エーテル、ベンゼンおよびジメチルス
ルホキシドの如き有機溶媒に可溶である。 実施例 ３ ３，4′−ジ−Ｏ−アセチル−５−Ｏ−ミカロシ
ルタイラクトン 実施例２によつて得たミカロシルタイラクトン
（20mg）をピリジン（0.5ml）に溶解した。無水酢
酸（0.25ml）を添加した。この混合物を室温で15
時間攪拌し、次いで減圧下で濃縮乾固した。残留
物をメタノール／シクロヘキサンに入れ、固形物
が得られるまで再蒸発させて３，4′−ジ−Ｏ−ア
セチル−５−Ｏ−ミカロシルタイラクトンを得
た。 実施例 ４〜７ 実施例３と同様にして、ただし無水プロピオン
酸を用いて３，4′−ジ−Ｏ−プロピオニル−５−
Ｏ−ミカロシルタイラクトンを得た。 実施例３と同様にして、ただし無水吉草酸を用
いて３，4′−ジ−Ｏ−イソバレリル−５−Ｏ−ミ
カロシルタイラクトンを得た。 実施例３と同様にして、ただし無水安息香酸を
用いて３，4′−ジ−Ｏ−ベンゾイル−５−Ｏ−ミ
カロシルタイラクトンを得た。 実施例３と同様にして、ただし無水ｎ−酪酸を
用いて３，4′−ジ−Ｏ−（ｎ−ブチリル）−５−Ｏ
−ミカロシルタイラクトンを得た。 実施例 ８ ミカロシルタイラクトンからタイラクトンの製
造 実施例２に従つて製造したミカロシルタイラクト
ンを塩酸の含水メイタノール溶液（pH1.8）に溶
解した。加水分解が終了するまでこの溶液を放置
し（蒸気浴上で約30分間加温する）、次いで水酸
化ナトリウムを加えてpH7.0に調節した。この溶
液を酢酸エチル、ジクロロメタンまたはクロロホ
ルムで抽出した。抽出液を乾燥し、減圧下で蒸発
させてタイラクトンを得た。 ヘプタン、ヘキサンまたは酢酸エチル−ヘキサ
ンから結晶化させたタイラクトンは白色固体であ
り、約162〜163℃で融解する。タイラクトンのお
およその元素組成（％）は以下の通りである：炭
素70％、水素9.7％、酸素20.3％。その実験式は
C23H38O5であり、分子量は約394である。 クロロホルム中でのタイラクトンの赤外吸収ス
ペクトルは、以下の極大吸収を示す（cm-1）：
3534（ｍ）、2924（st）、2398（ｗ）、2353（ｗ）、17
09
（v.st）、1678（v.st）、1626（ｓ）、1592（v.st）、
1458
（st）、1441（肩）、1404（st）、1379（ｓ）、1316（
st）、
1284（ｍ）、1181（v.st）、1143（ｓ）、1103（ｍ）、
1078（ｍ）、1049（v.s.）、1025（ｍ）、984（v.st）
、
958（st）、923（ｍ）、911（肩）、859（ｓ）、868（
ｍ）、
840（ｍ）、820（v.s）および661（ｓ）。ここでｗは
弱い、v.s.は非常に小さい、ｓは小さい、ｍは中
程度の、stは強い、v.stは非常に強い吸収を表わ
す。 中性エタノール中でのタイラクトンの紫外線吸
収スペクトルは282nmに極大吸収を示す（Ｅ１％ １cm
＝560）。 タイラクトンは以下の比旋光度を示す：〔ｄ〕25 D
＝−55.23°（Cl、CH3OH）。 66％水性ジメチルホルムアミド中でタイラクト
ンを電気滴定したところ、滴定可能基を有しない
ことがわかつた。 タイラクトンは水にほとんど溶けないがアセト
ン、メタノール、エタノール、ジメチルホルムア
ミド、クロロホルム、ジエチルエーテル、石油エ
ーテル、ベンゼンおよびジメチルスルホキシドの
如き有機溶媒に可溶である。 実施例 ９ ３−Ｏ−アセチルタイラクトンの製
造。 実施例３で製造した３，4′−ジ−Ｏ−アセチル
−５−Ｏ−ミカロシルタイラクトンを、メタノー
ル／0.1NHCl（１／１、pH1.5）を用い実施例８
の方法で加水分解して３−Ｏ−アセチルタイラク
トンを得た。 実施例 10〜13 実施例９と同様にして、実施例４の３，4′−ジ
−Ｏ−プロピオニル−５−Ｏ−ミカロシルタイラ
クトンから３−Ｏ−プロピオニルタイラクトンを
得た。 実施例９と同様にして、実施例５の３，4′−ジ
−Ｏ−イソバレリル−５−Ｏ−ミカロシルタイラ
クトンから３−Ｏ−イソバレリルタイラクトンを
得た。 実施例９と同様にして、実施例６の３，4′−ジ
−Ｏ−ベンゾイル−５−Ｏ−ミカロシルタイラク
トンから３−Ｏ−ベンゾイルタイラクトンを得
た。 実施例９と同様にして、実施例７の３，4′−ジ
−Ｏ−（ｎ−ブチリル）−５−Ｏ−ミカロシルタイ
ラクトンから３−Ｏ−（ｎ−ブチリル）タイラク
トンを得た。 実施例 14 タイラクトンからタイロシンの製造 もともとタイロシンを生産したがマクロライド
環形成がブロツクされているストレプトマイセ
ス・フラデイアエ株を実施例１、Ａに記載した方
法で培養した。温度は28℃で行なつた。接種48時
間後、培養物にタイラクトンを添加した。多量の
タイロシンが生産されるまで、即ち、さらに約３
日間培養を続けた。タイロシンの存在は、ブロス
の試料をタイロシンに対して感受性を有すること
が知られている微生物に対して試験することによ
り調べた。１つの有用なアツセイ用微生物はスタ
フイロコツカス・アウレウスATCC9144である。
この生物学的検定は自動濁度法を用いて好適に実
施した。その他の検定法には薄層クロマトグラフ
イーおよびUV検出器を備えた高速液体クロマト
グラフイーがある。 実施例 15 標識化タシロシンの製造 標識化したアセテート、プロピオネートまたは
ブチレートを培養培地に添加するほかは実施例１
および２の方法でミカロシルタイラクトンを製造
した。この様にして製造した標識化したミカロシ
ルタイラクトンを使用して、実施例８の方法で標
識化したタイラクトンを製造した。この標識化タ
イラクトンを使用して、実施例14の方法でタイロ
シンを製造した。この様にしてマクロライド環上
を標識化したタイロシンを得た。 実施例 16 ３−Ｏ−アセチル−５−Ｏ−β−デ
ソサミニルタイラクトンの製造 実施例10で製造した３−Ｏ−アセチルタイラク
トンを、ニトロメタン中シアン化水銀の存在下で
５当量の１−α−ブロモ−２−Ｏ−アセチルデソ
サミン臭化水素酸塩と混合した（20℃、10時間）。
シリカゲルカラムクロマトグラフイーにより３，
2′−Ｏ−ジアセチル−５−Ｏ−β−デソサミニル
タイラクトンを分離した。この化合物をメタノー
ル中、室温で放置して2′−アセチル基を除去する
と３−Ｏ−アセチル−５−Ｏ−β−デソサミニル
タイラクトンが得られた（抗生物質Ｍ−4365G1
の３−Ｏ−アセチル誘導体）。
第１図はクロロホルム中でのミカロシルタイラ
クトンの赤外吸収スペクトルを示すグラフであ
る。
クトンの赤外吸収スペクトルを示すグラフであ
る。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 式［］： ［式中、Ｒは水素またはアシル、Ｑは水素または
式： （式中、R1は水素またはアシルを表わす）で示
されるミカロシル基を表わす。ただしＱが水素で
ある場合Ｒはアシル表わす。］ で示される化合物。 ２ Ｒがアシルである時、Ｑが水素またはR1が
アシルであるミカロシル基である第１項に記載の
化合物。 ３ ＲおよびR1が、炭素原子数１〜18のモノま
たはジカルボン酸から導かれるアシル基である第
１項または第２項のいづれかに記載の化合物。 ４ ミカロシルタイラクトンの名称を有する第１
項に記載の化合物。 ５ 式［］： ［式中、Ｒは水素またはアシル、Ｑは水素また
式： （式中、R1は水素またはアシルを表わす）で示
されるミカロシル基を表わす。ただしＱが水素で
ある場合Ｒはアシルを表わす。］ で示される化合物の製造方法であつて、同化し得
る炭素源、窒素源および無機塩を含有する培養培
地中、液中好気条件下でストレプトマイセス・フ
ラデイアエNRRL12201株を培養してＲが水素、
ＱがR1が水素であるミカロシル基である式［］
の化合物を得、次いで所望により、 ａ アシル化してＲおよびＱの一方または両方が
アシルである式［］の化合物を得、 ｂ ａで得た式［］の化合物を緩やかに加水分
解してＱが水素、Ｒがアシルである式［］の
化合物を得ることを特徴とする製造方法。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/173,312 US4299953A (en) | 1980-07-29 | 1980-07-29 | Mycarosyltylactone |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5758696A JPS5758696A (en) | 1982-04-08 |
| JPH0428710B2 true JPH0428710B2 (ja) | 1992-05-15 |
Family
ID=22631450
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56119031A Granted JPS5758696A (en) | 1980-07-29 | 1981-07-28 | Macrolide compound |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4299953A (ja) |
| JP (1) | JPS5758696A (ja) |
| CA (1) | CA1181746A (ja) |
| CS (1) | CS228517B2 (ja) |
| PH (1) | PH16087A (ja) |
| ZA (1) | ZA815183B (ja) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4419508A (en) * | 1980-11-10 | 1983-12-06 | Eli Lilly And Company | 20-Dihydro-20-deoxy-23-demycinosyltylosin and process for its production |
| US4401660A (en) * | 1981-12-14 | 1983-08-30 | Eli Lilly And Company | Ester derivatives of 5-O-mycaminosyl tylonolide and method of using same |
| US4423148A (en) * | 1982-07-02 | 1983-12-27 | Eli Lilly And Company | Process for producing 20-dihydro-20-deoxy-23-de(mycinosyloxy)tylosin |
| US4436729A (en) | 1982-06-30 | 1984-03-13 | Schering Corporation | 23-Demycinosyltylosin compounds, pharmaceutical compositions and method of use |
| US4528369A (en) * | 1982-07-02 | 1985-07-09 | Eli Lilly And Company | 20-Dihydro-20-deoxy-23-de(mycinosyloxy)tylosin |
| US4443436A (en) * | 1982-09-13 | 1984-04-17 | Eli Lilly And Company | C-20-Modified macrolide derivatives of the macrolide antibiotics tylosin, desmycosin, macrocin, and lactenocin |
| US4820695A (en) * | 1982-09-13 | 1989-04-11 | Eli Lilly And Company | C-20-dihydro-deoxy-(cyclic amino)-derivatives of macrolide antibiotics |
| US4552701A (en) * | 1984-04-16 | 1985-11-12 | Eli Lilly And Company | Glycopeptide antibiotics and process of preparation |
| JPS61185124U (ja) * | 1986-04-03 | 1986-11-18 | ||
| DK143389A (da) * | 1988-03-28 | 1989-09-29 | Lilly Co Eli | Fremgangsmaade til fremstilling af 20-deoxotylosin |
| KR100914251B1 (ko) | 2007-06-27 | 2009-08-26 | 이화여자대학교 산학협력단 | 신규한 올리보실 틸락톤 및 그 제조 방법 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3178341A (en) * | 1960-06-27 | 1965-04-13 | Lilly Co Eli | Antibiotics tylosin and desmycosin and derivatives thereof |
| US3326759A (en) * | 1962-07-19 | 1967-06-20 | Lilly Co Eli | Antibiotics macrocin and lactenocin |
| US3344024A (en) * | 1963-04-17 | 1967-09-26 | American Cyanamid Co | Antibiotic am-684 and method of production |
| BE667952A (ja) * | 1964-08-05 | |||
| US4161523A (en) * | 1972-11-15 | 1979-07-17 | Schering Corporation | Rosamicin esters, acid addition salts and methods for production thereof |
| US4092473A (en) * | 1975-08-01 | 1978-05-30 | Sanraku Ocean Co., Ltd. | Tylosin derivatives and their manufacturing process |
| US4056616A (en) * | 1976-03-05 | 1977-11-01 | Schering Corporation | Rosamicin derivatives and method of using same |
| GB1587685A (en) * | 1977-03-09 | 1981-04-08 | Microbial Chem Res Found | Macrolactone derivatives and their production |
| US4205163A (en) * | 1977-11-08 | 1980-05-27 | Sanraku-Ocean Co., Ltd. | Tylosin derivatives |
-
1980
- 1980-07-29 US US06/173,312 patent/US4299953A/en not_active Expired - Lifetime
-
1981
- 1981-07-28 ZA ZA815183A patent/ZA815183B/xx unknown
- 1981-07-28 JP JP56119031A patent/JPS5758696A/ja active Granted
- 1981-07-28 CA CA000382652A patent/CA1181746A/en not_active Expired
- 1981-07-28 PH PH25978A patent/PH16087A/en unknown
- 1981-07-29 CS CS815777A patent/CS228517B2/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA1181746A (en) | 1985-01-29 |
| JPS5758696A (en) | 1982-04-08 |
| PH16087A (en) | 1983-06-20 |
| US4299953A (en) | 1981-11-10 |
| ZA815183B (en) | 1983-03-30 |
| CS228517B2 (en) | 1984-05-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR840001956B1 (ko) | 데(마이시노실옥시)타일로신의 제조방법 | |
| JPH0428710B2 (ja) | ||
| KR850001666B1 (ko) | 마크로라이드 항생물질의 제조방법 | |
| US4366247A (en) | Process for preparing tylactone | |
| KR840001957B1 (ko) | 데(마이시노실옥시)타일로신의 제조방법 | |
| US4440857A (en) | Process for preparing mycarosyltylactone | |
| US4362881A (en) | Tylactone | |
| CA1158579A (en) | Antibiotic ar-5 complex, derivatives thereof and methods for production thereof | |
| KR860001997B1 (ko) | 데(미시노실옥시)틸로신 유도체의 제조방법 | |
| KR840001193B1 (ko) | 마크로라이드 항생물질의 제조방법 | |
| EP0045205B1 (en) | Macrolides | |
| US4429115A (en) | 3-O-Oleandrosyl-5-O-desosaminyl erythronolide compounds | |
| CA1171869A (en) | Tylactone | |
| NZ197869A (en) | 5-0-mycarosyl-20-dihydro-20,23-dideoxytylonolide derivatives | |
| CA1175423A (en) | Method of preparing 23-deoxy-5-0- mycaminosyltylonolide | |
| JPH0434555B2 (ja) | ||
| NO124729B (ja) | ||
| JPS5932120B2 (ja) | ９−β−Ｄアラビノフラノシル・アデニンの製造法 |