JPH04290897A - 治療用物質の標的送達用医薬組成物 - Google Patents

治療用物質の標的送達用医薬組成物

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JPH04290897A
JPH04290897A JP3326183A JP32618391A JPH04290897A JP H04290897 A JPH04290897 A JP H04290897A JP 3326183 A JP3326183 A JP 3326183A JP 32618391 A JP32618391 A JP 32618391A JP H04290897 A JPH04290897 A JP H04290897A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】本発明は、放射性標識された修飾オリゴヌ
クレオチドに係る。
【０００２】放射性標識されたオリゴヌクレオチドは、
例えばハイブリダイゼーションアッセイで使用されるプ
ローブとして公知である。かかるオリゴヌクレオチドの
ｉｎｖｉｖｏ使用は通常は不可能である。その理由は、
修飾されないＤＮＡ及びＲＮＡはｉｎ　　ｖｉｖｏで速
やかに代謝されるからである。ｉｎ　　ｖｉｖｏで使用
するための修飾オリゴヌクレオチドは、Ｅ．Ｕｈｌｍａ
ｎｎ及びＡ．ＰｅｙｍａｎによってＣｈｅｍｉｃａｌ　
　Ｒｅｖｉｅｗｓ，　　９０，　　５４３（１９９０）
に記載されている。
【０００３】所謂「アンチセンスオリゴヌクレオチド」
療法は、任意に酵素または細胞増殖抑制剤と結合させた
修飾ＤＮＡまたはＲＮＡの合成フラグメントが、腫瘍ま
たはウイルス感染細胞のような「標的」細胞中に存在す
る相補的核酸フラグメント（ＤＮＡまたはＲＮＡ）を認
識するものである。循環中に所望の安定性を維持する（
特に、内在酵素に対する耐性を維持する）ために、アン
チセンスオリゴヌクレオチドを修飾する必要があり、こ
のような修飾の結果として更に、細胞及び組織に対する
浸透性が改良され得る。アンチセンスオリゴヌクレオチ
ドは標的細胞中の核酸に相補的であり、ＤＮＡ転写、ｍ
ＲＮＡ翻訳または（ウイルス性）核酸複製を阻害し得る
。
【０００４】ラジオイムノセラピーに使用する放射性同
位体で標識された化学基に「アンチセンスオリゴヌクレ
オチド」を結合したことはこれまでなかった。
【０００５】本発明は、治療に使用する同位体で標識さ
れた修飾「アンチセンスオリゴヌクレオチド」（放射性
アンチセンスヌクレオチド：ＲＡＮ）に係り、また、抗
癌療法及び抗ウイルス療法におけるＲＡＮの使用に係る
。更に、相補的核酸（フラグメント）の所在がわかるよ
うにＲＡＮを標識してもよい。ＲＡＮが細胞内作用を行
なう必要があるときは、オージェ電子を放出する同位体
（例えば７７Ｂｒ、８０Ｂｒ、１２５Ｉ及び１２３Ｉ）
が好ましく、細胞外に局在させる場合にはα−またはβ
−放出同位体（例えば９０Ｙ、１３１Ｉ、１８６Ｒｅ、
２１１Ａｔ及びＢｉ同位体）が好ましい。後者のグルー
プの同位体はまた、ＲＡＮが細胞の内部及び外部の双方
で「標的」に到達する必要がある場合にも好ましい。
【０００６】例えばＥ．Ｕｈｌｍａｎｎ及びＡ．Ｐｅｙ
ｍａｎがＣｈｅｍｉｃａｌ　　Ｒｅｖｉｅｗｓ，　　９
０，　　５４３（１９９０）に記載しているような公知
の任意のオリゴヌクレオチド合成技術に従ってＲＡＮを
調製し得る。天然の糖骨格（リボース及びデオキシリボ
ース）またはそれらの鏡像異性体を選択し、任意に適宜
修飾して例えば２’−Ｏ−メチルリボースにしてもよい
が、デオキシグルコースのような別の骨格を選択するた
めに、内在酵素に耐性で且つオリゴヌクレオチドの塩基
と対合できる十分なＴｍ（融点）を有する立体異性体（
αでなくβヌクレオシドの鏡像異性体）を使用すること
も可能である。
【０００７】また、糖間のホスフェート結合を、（ｉｎ
　　ｖｉｖｏで）より安定な結合、例えば−ＣＨ２−、
ＳＯ２−ＣＨ２−または−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−で置換して
もよい。
【０００８】塩基は天然の塩基（Ａ、Ｕ、Ｃ、Ｇ、Ｔ）
でもよいが、また、キサンチン、ヒポキサンチンのよう
な希塩基、及びＢｅｎｎｅｒ　　ｅｔ　　ａｌ．，Ｊ．
Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｖｏｌ．１１１　　ｐ２１，
１９８９に記載のような塩基でもよい。
【０００９】ＲＡＮは直鎖状オリゴヌクレオチドでもよ
くまたは環状オリゴヌクレオチドでもよい。
【００１０】好ましいＲＡＮは、式Ｉ：
【００１１】
【化３】
【００１２】〔式中、ｎ＝５〜２０、Ｂ＝適宜放射性ハ
ロゲンによって標識されているヌクレオシド塩基（Ｃ、
Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｕ）または同様の塩基、Ｘ＝Ｏ−、Ｓ−、
Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アルキル、アルキル及び／または
その組み合わせ、Ｙ＝Ｏ及び／またはＳ、Ｚ、Ｚ’＝放
射性同位体を含有する化学基、及び／またはＺ、Ｚ’が
Ｈ、アルキル、アシルまたはヌクレオシド〕で示される
放射性標識された修飾オリゴヌクレオチドである。
【００１３】（Ｂの位置の）塩基配列は「標的核酸フラ
グメント」の塩基配列によって決定され、ＲＡＮは該配
列に相補的である（相補的塩基の例はＣ−Ｇ及びＡ−Ｔ
）。
【００１４】本発明の別の目的は、標的細胞の抗原を認
識する抗体またはそのフラグメントもしくはその誘導体
のようなターゲット化部分と、ＲＡＮに相補的な修飾オ
リゴヌクレオチドとの結合体を提供することである。レ
セプターに対するリガンドなどのように、特定の標的細
胞グループの相補的フラグメントと共に特異的結合対を
形成し得る別の任意のフラグメントをターゲット化部分
として選択することが可能である。結合体を患者に投与
する。投与された結合体は標的部位に局在する。結合体
が局在できるように十分な時間をおいてから、結合体の
相補的修飾オリゴヌクレオチドに結合し得るＲＡＮを投
与する。これは、（自己）免疫疾患、ウイルス感染症及
び腫瘍などの治療で使用されているミサイル療法（ｔａ
ｒｇｅｔｅｄ　　ｔｈｅｒａｐｙ）の効果を顕著に増進
させるであろう。このようなプレターゲット化プログラ
ムを図１に示す。
【００１５】腫瘍治療に特異的抗体を使用することは公
知である。しかしながら、放射性標識抗体は「標的」組
織中での吸収が遅く、その結果として、疾病組織と健常
組織との間の放射線被曝の割合が好ましくないので、そ
の使用が制限されている。
【００１６】このような好ましくない割合を改善するた
めに所謂「プレターゲット化プログラム」が使用される
。このプログラムにおいては、抗体結合体のような非放
射性の二官能ターゲット化部分を疾病組織に配給し（初
期結合）、次いで、抗体が疾病組織と健常組織との間に
最適比で分配されたときに、放射性標識リガンドを投与
する。このリガンドは組織に速やかに分配され、抗体の
第２結合部位に付着する。しかしながら、文献に記載さ
れている従来のプレターゲット化は、一方では第２の特
異的結合の親和性が小さいこと、他方では、アビジンの
ような生体に対する異物を使用すること、の結果として
、その可能性に制約が残っている（Ｇｏｏｄｗｉｎ　　
ｅｔ　　ａｌ．，　　Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２８，　
　７２２（１９８７）　　＆　　２９，　　２２６（１
９８８）参照）。ＲＡＮの使用によって得られる利点は
、ＲＡＮが、（ｉ）体内の物質に極めて類似している、
（ｉｉ）強力に特異的結合する、（ｉｉｉ）組織に速や
かに且つ良好に分布する、（ｉｖ）化学的修飾の種類に
よって人体内の滞留時間を最適に調整し得る、ことであ
る。
【００１７】ＲＡＮが、抗体のようなターゲット化部分
に結合したオリゴヌクレオチドを認識するときは、結合
したオリゴヌクレオチドが、ＲＡＮに相補的であり、式
ＩＩ：
【００１８】
【化４】
【００１９】〔式中、ｎ＝５〜２０、Ｂ＝ヌクレオシド
塩基、Ｘ＝Ｏ−、Ｓ−、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アルキル
、アルキル及び／またはその組み合わせ、Ｙ＝Ｏ及び／
またはＳ、Ｑ、Ｑ’はターゲット化部分との結合に適し
た化学フラグメントを示し、このフラグメントが、反応
性アルデヒド、ＮＨ２、またはＳＨ基を含むか、及び／
またはＱ、Ｑ’がＨ、アルキル、アシルまたはヌクレオ
シドを示す〕を有していなければならない。
【００２０】上記のごとき基（Ｑ、Ｑ’）、及び、Ｑま
たはＱ’をターゲット化部分に結合させるために必要な
結合技術は、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ　　Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ　　１，　　ｐｐ．１６５〜１８７（１９９０
）に収載のＪ．Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄの論文に記載されて
いる。
【００２１】任意に、式ＩＩのヌクレオチドを撮影用同
位体で標識してもよい。
【００２２】式Ｉのオリゴヌクレオチドに対する結合部
位の数を増すために、ターゲット化部分に複数の（式Ｉ
Ｉ）のオリゴヌクレオチドを結合させるのが好ましい。 オリゴヌクレオチド配列が細胞内腫瘍遺伝子またはウイ
ルス遺伝子の非反復配列に対応するときに最大効果が得
られる。
【００２３】化学合成された修飾オリゴヌクレオチド（
式Ｉ）を所望の放射性同位体で標識することによってＲ
ＡＮを調製する。ＲＡＮ（式Ｉ）及び式ＩＩの双方に適
した修飾オリゴヌクレオチドの合成は、Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ　　Ｒｅｖｉｅｗｓ　　９０，ｐｐ．５４３〜５８４
（１９９０）に記載されたような公知の方法で行なうこ
とができ、メチルホスホネート類、リンアミダート類、
リンチオアート類及びアルキルホスホトリエステル類な
どで修飾されるのが好ましい。これらは、天然のホスホ
ジエステルバンドと組み合わせて取り込まれるのが好ま
しい。
【００２４】前記オリゴヌクレオチドは一般に、所謂「
固相」合成によって調製されるので、標識すべき基を好
ましくは５’末端に配置する。放射性ハロゲンで標識す
る場合のこれらの基は、式：
【００２５】
【化５】
【００２６】のグループから成る。＊は放射性ハロゲン
を示す。
【００２７】または、核酸塩基を直接ハロゲン化しても
よい。
【００２８】放射性金属を使用するときは、Ｚ／Ｚ’が
放射性金属とキレート化剤との錯体である。キレート化
剤の例は、ＤＴＰＡ大環状キレート化剤、ＮｘＳｘキレ
ート化剤、及び、式：
【００２９】
【化６】
【００３０】で示される同様の物質である。
【００３１】
【実施例】アンチセンス療法では、主としてヌクレアー
ゼに対するオリゴヌクレオチドの安定性を増進し且つ細
胞吸収を増進するために種々のＤＮＡ修飾を導入した。 最も普通に使用されるのは、ホスホロチオエート、メチ
ルホスホネート及びアルキルホスホトリエステル（特に
ホスフェート−メチル化ＤＮＡ）オリゴヌクレオチドの
ような骨格修飾ＤＮＡ類似体である。しかしながら、こ
れらのすべての場合に、修飾ホスフェート基の導入が、
オリゴヌクレオチドの水溶解度を低下させたり標的配列
との複合体の安定性を低下させたりしてはならない。
【００３２】前述のごとく、双方のＤＮＡフラグメント
、ＲＡＮ及びターゲット化部分に結合したフラグメント
を、ヌクレアーゼ分解から保護するために修飾しなけれ
ばならない。血液中の主なヌクレアーゼ活性は３’−エ
キソヌクレアーゼに由来する。従って、オリゴヌクレオ
チドの３’−末端の（１つまたは複数の）ホスホジステ
ルの修飾が重要であることが判明した。ターゲット化部
分に結合したオリゴヌクレオチドが極めて長期間（２〜
３日）安定に維持される必要があるので、このフラグメ
ントはＲＡＮよりも厳重に修飾される必要があるが、免
疫原性になるほど修飾されてはならない。本発明の目的
のためには、メチル−ホスホネート修飾を選択した。 メチルホスホネート結合は、標準（ホスホラミジット）
ＤＮＡ化学を使用してＤＮＡフラグメントに容易に導入
され得る。
【００３３】更に、この修飾は、結合及び放射性標識に
必要な化学的条件に対して安定であり、中性のヌクレオ
シド間結合の導入は、高電荷オリゴヌクレオチドが正電
荷血液タンパク質に非特異的に結合することを抑制する
。
【００３４】原則として、部分的にホスフェート−メチ
ル化されたＤＮＡも本発明の目的を満たす。本発明では
、部分的にホスフェート−メチル化された既知の構造の
ＤＮＡを調製するための合成方法の開発にも成功した。 この修飾によってメチルホスホトリエステルの不安定性
を得るためには、結合中及び放射性標識中に穏やかな条
件が必要である。その他の場合には、ホスホトリエステ
ルのジメチル化またはその他の副反応が生じるであろう
。
【００３５】実施例１ Ａｐｐｌｉｅｄ　　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　　ＤＮＡシ
ンセサイザー（モデル３８１Ａ）を使用し、夫々２つ及
び５つのメチルホスホネート結合を含む以下の相補的Ｄ
ＮＡフラグメントＩ及びＩＩを合成した（メタノール中
のアンモニアで３日間脱保護し、ゲル透過クロマトグラ
フィーで精製した後で得られた）。
【００３６】Ｉ：Ｕ５’−５’Ｇｐ（Ｍｅ）ＣＣＧＧＣ
ＧＣＡＡＧＣＧｐ（Ｍｅ）Ｃ　　３’ ＩＩ：Ｕ５’−５’Ｇｐ（Ｍｅ）ＣＧＣＴｐ（Ｍｅ）Ｔ
ＧＣＧｐ（Ｍｅ）ＣＣＧｐ（Ｍｅ）Ｇｐ（Ｍｅ）Ｃ　３
’ ｐ（Ｍｅ）は、適宜保護されたメチルホスホンアミジッ
ト（ｍｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｎａｍｉｄｉｔｅｓ）
を用いて導入されたメチルホスホネートを示す。
【００３７】二重鎖の安定性 ２つの相補的ＤＮＡ鎖の二重鎖の安定性を融点Ｔｍで示
す。この温度は螺旋構造の半分が失われる温度である。 ２６０ｎｍの吸光度を温度の関数として測定することに
よって融点Ｔｍをモニターし得る。０．１ＭのＮａＣｌ
、０．０１ＭのトリスＨＣｌ（ｐＨ＝７．０）中のＩと
ＩＩとのＤＮＡ二重鎖のＴｍ値は５７℃であった。ｉｎ
　　ｖｉｖｏ（３７℃）の生理学的条件下では有効なハ
イブリダイゼーションが生じるであろう。
【００３８】修飾ＤＮＡフラグメント（Ｉ、ＩＩ）の５
’−末端に５’−５’結合したウリジンヌクレオチドを
導入した。このウリジン部分は、シスジオールの酸化後
に、還元性アミノ化を介して種々のアミノ含有リンカー
を取り込む可能性を与える（図２）。
【００３９】抗体と結合させるために最高度に修飾され
たＤＮＡフラグメントＩＩを使用した。
【００４０】実施例２ 放射性標識オリゴヌクレオチド（ＲＮＡ）の調製合成ヌ
クレオチド（Ｉ）を放射性標識してＲＡＮを調製した。
【００４１】Ｕ５’−５’Ｇｐ（Ｍｅ）ＣＣＧＧＣＧＣ
ＡＡＧＣＧｐ（Ｍｅ）Ｃ　　３’ 酢酸ナトリウムバッファ（０．１Ｍ、ｐＨ＝４．７５）
中でオリゴヌクレオチドを過ヨウ素酸ナトリウム（０．
０５Ｍ；３０当量）と、暗中で０℃で１時間反応させる
ことによって、（Ｕの）リボースをジアルデヒドに変換
した。Ｓｅｐｈａｄｅｘ　　Ｇ−１０カラムで余剰の過
ヨウ素酸ナトリウムを除去してから、０．１Ｍのリン酸
塩バッファ（ｐＨ＝６．９）／メタノール（２：１（ｖ
／ｖ））中で０．０５Ｍのチラミン溶液中でジアルデヒ
ドをアミノ化した。
【００４２】室温で３０分間維持した後、メタノール中
のシアノホウ水素化ナトリウム（０．１Ｍ；３０当量）
を添加した。室温で一夜還元させた後、追加量（３０当
量）のシアノホウ水素化ナトリウムを添加した（１時間
、室温）。反応混合物を濃縮し、０．０５ＭのＴＥＡＢ
を溶出剤としてＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５カラムに通し
た。ＤＮＡ含有分画を収集し、凍結乾燥すると、誘導体
化したオリゴヌクレオチドＩＩＩが得られた。
【００４３】
【化７】
【００４４】オリゴヌクレオチドＩＩＩのｐ−ヒドロキ
シフェニルエチル部分は、ｉｏｄｏｇｅｎ（登録商標）
の存在下にＮａ１２５Ｉで容易に標識できた。
【００４５】簡単に説明すると、ｉｏｄｏｇｅｎ（５０
μｇ）のメチレンクロリド溶液を窒素で乾燥させること
によって、エッペンドルフ反応チューブをｉｏｄｏｇｅ
ｎでコートした。反応チューブに１０μｇのＮａ１２５
Ｉ溶液（約２ｍＣｉ）を添加した。ときどき攪拌しなが
ら室温で１５分間ヨウ素化した。ＰＢＳバッファまたは
２×ＳＳＣバッファ（ハイブリダイゼーション試験のた
め）を使用してＳｅｐｈａｄｅｘ　　ＰＤ１０でＲＡＮ
を精製した。このようにして得られたＲＡＮの比活性は
３５μＣｉ／μｇであった。
【００４６】実施例３ 抗体−オリゴヌクレオチド結合体の調製まず、前記のオ
リゴヌクレオチドの誘導体化と同様の手順で、活性化チ
オールリンカーでオリゴヌクレオチドＩＩを誘導体化し
た。簡単に説明すると、０．１２Ｍの酢酸ナトリウムバ
ッファ（ｐＨ＝４．７５）中の０．０５Ｍの過ヨウ素酸
ナトリウム（１２．５当量）でオリゴヌクレオチドＩＩ
を暗中で０℃で１時間酸化した。余剰の過ヨウ素酸ナト
リウムを（Ｓｅｐｈａｄｅｘ　　Ｇ−１０）で除去した
後に、０．１Ｍのリン酸塩バッファ（ｐＨ＝８．０）／
メタノール（２：１（ｖ／ｖ））中の０．０４ＭのＳ−
ピリジルシステアミン．ＨＣｌ（３０当量）によってジ
アルデヒドをアミノ化し、次いでメタノール中のシアノ
ホウ水素化ナトリウム（５当量）で室温で１６時間還元
した。追加量（５当量）のシアノホウ水素化ナトリウム
を添加した後で、０．０５ＭのＴＥＡＢを溶出剤として
用いてＳｅｐｈａｄｅｘ　　Ｇ−２５カラムでオリゴヌ
クレオチドを精製した。ＤＮＡ含有分画を凍結乾燥する
と、２−ピリジルジスルフィドとして活性化されたチオ
ールリンカーを含むオリゴヌクレオチドＩＶが得られた
。ジスルフィドの還元によって遊離されたピリジン−チ
オンのＵＶ吸光度によれば、オリゴヌクレオチドの約４
５％が活性化チオールリンカーを含有していた。
【００４７】
【化８】
【００４８】ジスルフィド結合したタンパク質−ＤＮＡ
結合体はｉｎ　　ｖｉｖｏ系中で十分に安定でないかも
しれないので、マレイミド結合法に注目した。この方法
では一般に、スクシニミジル−４−（Ｎ−マレイミドメ
チル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣ
Ｃ）によってタンパク質を処理することによって抗体を
マレイミド基によって誘導体化する。
【００４９】次いで、安定なチオエーテル結合を介して
チオール含有オリゴヌクレオチドとの結合体を形成する
。
【００５０】実施例４ 抗ＨＣＧ抗体１３０Ａによるｉｎ　　ｖｉｔｒｏ実験オ
リゴヌクレオチドを結合させる適正条件を探すために、
まず抗ＨＣＧ抗体１３０Ａを使用した。
【００５１】結合体調製（Ｉ）
【００５２】
【化９】
【００５３】まず、０．０５Ｍのリン酸塩バッファ（ｐ
Ｈ＝７．５）中のＩｇＧ　　１３０ＡとＳＭＣＣ（ＤＭ
Ｆ中に０．０１）を暗中で室温で１時間反応させた。６
０当量のＳＭＣＣで処理すると、抗体１つあたり平均１
０個のマレイミド基が導入された。０．０５Ｍのリン酸
塩バッファ／０．１ＭのＮａＣｌ／５ｍＭのＥＤＴＡ（
ｐＨ＝６．０）を溶出剤として用いてＰＤ−１０カラム
で抗体を精製した。０．１Ｍのリン酸塩バッファ（ｐＨ
＝８．０）／メタノール（２：１（ｖ／ｖ））中の２−
ピリジルジスルフィド活性化オリゴヌクレオチドをトリ
ブチルホスフィン（１当量、５分間、室温）で処理して
還元した後で、チオール含有ＤＮＡフラグメント（抗体
に対して５０当量）をマレイミド誘導体化抗体と直ちに
反応させた（図３）。４℃で一夜結合させ、次いで未反
応マレイミド基をシステアミンで封鎖した。
【００５４】結合体調製物中の共有結合したオリゴヌク
レオチドの存在を、等電点電気泳動（ＩＥＦ）及びＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥによって証明した。ＩＥＦでは、等電点が
低いｐＨ値に向かってシフトしたことが観察され、ＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥでは、非結合ＩｇＧ　　１３０Ａに比べて
分子サイズの増加が観察された。
【００５５】抗体−オリゴヌクレオチド結合体は、Ｓｅ
ｐｈａｃｒｙｌ　　Ｓ−１００でゲル濾過することによ
って余剰の未反応オリゴヌクレオチドから容易に分離で
きた。ＰＢＳを溶出剤として用い４℃でＨＲカラムに流
した。抗体結合体を含有する分画を４℃で保存した。
【００５６】精製した結合体の２６０ｎｍ／２８０ｎｍ
の吸光度の比に基づいてオリゴヌクレオチドと抗体との
モル組成３：１が測定された。
【００５７】ハイブリダイゼーション試験（ＩＩ）
【０
０５８】
【化１０】
【００５９】２×ＳＳＣバッファ中で、ＲＡＮを、抗体
結合体（１０μｇ／ｍｌ）のオリゴヌクレオチドとハイ
ブリダイズさせた。結合したＤＮＡフラグメントの総量
に比べてやや過剰の量（約１．２当量）のＲＡＮを使用
した。室温で１時間のハイブリダイゼーションの後で、
混合物をＳｅｐｈａｃｒｙｌ　　Ｓ−１００カラムに通
し、４℃のＰＢＳバッファで溶出させて、非ハイブリダ
イズＲＡＮを結合体／ＲＡＮ複合体から分離した。溶出
した分画の２８０ｎｍの吸光度及び放射能を測定した（
図４）。
【００６０】溶出曲線は、結合体のピーク及びＲＡＮの
ピークの双方に放射能を示した。
【００６１】溶出した放射能の約４５％が、抗体−結合
体を含有するピークに存在していた。抗体に対するＲＡ
Ｎの非特異的結合を除外するために、非誘導体化ＩｇＧ
　　１３０ＡとＲＡＮとをハイブリダイゼーションバッ
ファ中でインキュベートする対照実験を行なった。混合
物のゲル濾過によって、使用した放射能の０．１％未満
が抗体分画中に存在することが判明した。
【００６２】これらの実験は、ＲＡＮが特異的ハイブリ
ダイゼーションメカニズムを介して抗体の相補的配列を
実際に認識し得ることを証明する。
【００６３】抗原結合試験（ＩＩＩ）
【００６４】
【化１１】
【００６５】次に解明すべき問題は、抗体−オリゴヌク
レオチド結合体がその抗原結合特性を維持していたか否
かである。この問題を解明するために、ハイブリダイゼ
ーション混合物（上記参照）の一部をＨＣＧコートした
Ｓｅｐｈａｒｏｓｅビーズと共にインキュベートした。
【００６６】室温で９０分間維持した後、混合物を遠心
し、上清を除去した。ビーズをハイブリダイゼーション
バッファで数回洗浄した後、ビーズの残留放射能を測定
した。ＨＣＧ−ＳｅｐｈａｒｏｓｅビーズをＲＡＮ及び
ＩｇＧ　　１３０Ａの混合物と共にインキュベートして
前記と同様に処理した対照実験に比べて、１５０倍の高
い放射能が測定された。これは、抗体（またはビーズ）
に対するＲＡＮの非特異的結合が全く生じないことを示
す。
【００６７】結論として、これらの抗原結合試験は、オ
リゴヌクレオチドと結合した後の抗体が、ｉｎ　　ｖｉ
ｔｒｏで抗原に特異的に結合する能力を維持していたこ
とをはっきりと証明する。
【００６８】実施例５ ヒト抗腫瘍抗体１６８８を用いたｉｎ　　ｖｉｔｒｏ実
験ＩｇＧ　　１３０Ａで有望な結果が得られたので、現
在の処では種々の腫瘍のラジオイムノセラピーに有効で
あると考えられているＩｇＭ　　１６８８の研究に焦点
を合わせた。
【００６９】１３０Ａ抗体に関する前述の記載と同様に
ＳＭＣＣで処理することによってＩｇＭ　　１６８８を
マレイミド基で活性化した。ＩｇＭはＩｇＧよりも多く
の反応性部位を与えるので、ＩｇＧ　　１３０Ａの誘導
体化に比べてやや過剰な量のＳＭＣＣを使用した。
【００７０】１７当量のＳＭＣＣと反応させると、分光
光度法で測定して平均８．５個のマレイミド基で誘導体
化された。活性化した抗体を、還元直後の（トリブチル
ホスフィン）オリゴヌクレオチドＩＶ（抗体に対して４
０当量）と直ちに反応させた。（４℃で）一夜結合させ
た後、未反応マレイミド基をシステアミンで封鎖し、Ｐ
ＢＳバッファを溶出剤として用いた４℃のＳｅｐｈａｃ
ｒｙｌ　　Ｓ−１００　　ＨＲカラムで余剰のオリゴヌ
クレオチドとその他の試薬とを抗体−オリゴヌクレオチ
ド結合体から分離した。２６０ｎｍ／２８０ｎｍの吸光
度の比は、ＩｇＭ　　１６８８（０．５７）に比べて精
製結合体（０．６３）ではシフトしていたが、タンパク
質の優勢なＵＶ−吸光度があるので結合オリゴヌクレオ
チドの数を正確に定量することはできなかった。しかし
ながら、１３０Ａに関する本出願人の実験に基づいて、
抗体１つあたり２〜３個のオリゴヌクレオチドが結合し
たと推定される。
【００７１】ＩｇＧ　　１３０Ａの実験と同様に、Ｉｇ
Ｍ　　１６８８−ＤＮＡ結合体を、２×ＳＳＣバッファ
中でＲＡＮ（結合体に対して約２当量）とインキュベー
トして、相補的ＤＮＡフラグメントのハイブリダイゼー
ションを生起させた。室温で１時間のハイブリダイゼー
ション後に、Ｓ−１００カラム（ＰＢＳバッファ、４℃
）を用いて抗体含有分画を非ハイブリダイズＲＡＮから
分離した。双方の分画中の放射能を測定すると、溶出カ
ウント数の１６％が抗体−結合体分画中に存在すること
が判明した。ＩｇＧ　　１３０Ａの場合と同様に、ＲＡ
ＮとＩｇＭ１６８８とをインキュベートし次いで分離す
る対照実験を行なうと、ＩｇＭ　　１６８８に対するＲ
ＡＮの非特異的結合は無視できる程度であることが判明
した。溶出放射能の０．２％が抗体ピーク中に存在して
いた。
【００７２】これらの知見は、一連のドット−ブロット
ハイブリダイゼーション実験によって確認された。この
アッセイでは、系列希釈したＩｇＭ　　１６８８−ＤＮ
Ａ結合体をニトロセルロースフィルターに固定した。フ
ィルターをＢＬＯＴＴＯで封鎖して非特異的結合を制止
した後で、ＲＡＮと共に２×ＳＳＣバッファ中で室温で
２時間インキュベートした。次に、フィルターを洗浄し
、オートラジオグラフィーで撮影すると、優れた希釈パ
ターンが生じた。
【００７３】平行実験として、同様に系列希釈したＩｇ
Ｍ　　１６８８−ＤＮＡ結合体を、非標識オリゴヌクレ
オチドＩＩＩで１００倍に希釈した等量のＲＡＮで処理
した。この系列でスポットされた放射能は最初の実験の
１００倍希釈パターンに完全に一致した。ＩｇＭ　　１
６８８を固定したニトロセルロースフィルターをＲＡＮ
と共にインキュベートした対照実験では、バックグラウ
ンド放射能だけが検出された。
【００７４】要約すると、これらの結果は、ＩｇＭ抗体
が極めて巨大な寸法を有するにもかかわらず、ＲＡＮが
結合オリゴヌクレオチドと特異的に相互作用し得ること
を示す。
【００７５】抗原結合試験 ＩｇＭ　　１６８８−ＤＮＡ結合体の抗原結合能をＩｇ
Ｇ　　１３０Ａ結合体の場合と同様に、ＣＴＡ−１でコ
ートしたＳｅｐｈａｒｏｓｅビーズと、ＩｇＭ　　１６
８８の同族抗原と、結合体とＲＡＮとのハイブリダイゼ
ーション混合物とのインキュベーションによって試験し
た。対照と比較すると、ＩｇＭ　　１６８８／ＲＡＮ混
合物の場合にはＣＴＡでコートしたビーズに１７．５倍
の放射能が検出された。
【００７６】結合体を抗原に結合させる前のＲＡＮを結
合体とハイブリダイズする前記実験に対する追試として
、プレターゲット化「結合配列」の模擬試験を実施した
。即ち、まず、ＣＴＡでコートしたビーズをＩｇＭ　　
１６８８−ＤＮＡ結合体と共に４℃で一夜インキュベー
トした（段階１）。余剰の結合体を除去し、数回洗浄し
た後で、ビーズをＲＡＮと共に２×ＳＳＣバッファ中で
室温で２時間半インキュベートした（段階２）。同様に
して、非標識オリゴヌクレオチドＩＩＩで１００倍に希
釈した同量のＲＡＮとのハイブリダイゼーションを含む
競合試験を実施した。上清を除去し数回洗浄した後で、
ビーズの残留放射能を測定した。これらの実験の結果を
表１にまとめる。
【００７７】 表１ 　　　　　　　　段階１　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　段階２　　　　　　　　　　　　　　
　　相対放射能ＩｇＭ　　１６８８−ＤＮＡ　　　　Ｒ
ＡＮ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　１０．６ＩｇＭ　　１６８８（対照）　　　　Ｒ
ＡＮ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　１．８ＩｇＭ　　１６８８−ＤＮＡ　　　　
ＲＡＮ／ＤＮＡ（ＩＩＩ）（１：１００）　　　　１．
４ＩｇＭ　　１６８８（対照）　　　　ＲＡＮ／ＤＮＡ
（ＩＩＩ）（１：１００）　　　　１予想通り、非希釈
のＲＡＮを用いたプレターゲット化実験で最高放射能が
検出された。更に、データは、未標識オリゴヌクレオチ
ドも競合的な挙動を有することをはっきりと示した。
【００７８】（腫瘍細胞に由来の抗原のためのモデルと
して作用するＣＴＡ−コートされたビーズを用いた）上
記の実験は、抗体−結合体が抗原に結合している場合に
も放射性標識されたオリゴヌクレオチドが抗体−結合体
の相補的配列を認識し得ることを示す。このようにして
、ＤＮＡハイブリダイゼーションに基づくプレターゲッ
ト化をｉｎ　　ｖｉｔｒｏで行なうことに成功した。
【００７９】ヒト抗腫瘍抗体１６．８８及びその抗原に
関してはＥＰ（Ａ）０３２８５７８に記載されている。
【図面の簡単な説明】
【図１】放射性標識アンチセンスヌクレオチド（ＲＡＮ
）の治療的使用の説明図である。
【図２】５’−５’結合ウリジンを介したアミノ含有リ
ンカーの取り込みの説明図である。
【図３】抗体−オリゴヌクレオチド結合体の調製の説明
図である。
【図４】ＩｇＧ　　１３０Ａ−ＤＮＡ／ＲＡＮハイブリ
ダイゼーション混合物のゲル濾過の説明図である。

Claims (9)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】　　オリゴヌクレオチドが「標的」細胞の
    内部または近傍に局在する核酸フラグメントに相補的で
    あり且つ治療用物質によって標識されていることを特徴
    とする標識された修飾オリゴヌクレオチド。
  2. 【請求項２】　　オリゴヌクレオチドが「標的」細胞の
    内部または近傍に局在する核酸フラグメントに相補的で
    あり且つ治療用同位体によって標識されていることを特
    徴とする標識された修飾オリゴヌクレオチド。
  3. 【請求項３】　　一般式Ｉ： 【化１】 〔式中、ｎ＝５〜２０、Ｂ＝ヌクレオシド塩基（Ｃ、Ｇ
    、Ａ、Ｔ、Ｕ）または同様の塩基、Ｘ＝Ｏ−、Ｓ−、Ｎ
    −ジアルキル、Ｏ−アルキル、アルキル及び／またはそ
    の組み合わせ、Ｙ＝Ｏ及び／またはＳ、Ｚ、Ｚ’＝放射
    性同位体を含む化学基、またはＺ、Ｚ’はＨ、アルキル
    、アシルまたはヌクレオシド〕で示されることを特徴と
    する請求項２に記載の標識された修飾オリゴヌクレオチ
    ド。
  4. 【請求項４】　　Ｂが放射性ハロゲンによって標識され
    ていることを特徴とする請求項３に記載の放射性標識さ
    れた修飾オリゴヌクレオチド。
  5. 【請求項５】　　標的細胞に対する特異性を有するター
    ゲット化部分と修飾オリゴヌクレオチドとを含み、前記
    修飾オリゴヌクレオチドが請求項１から４のいずれか一
    項に記載の標識された修飾オリゴヌクレオチドに相補的
    であることを特徴とする結合体。
  6. 【請求項６】　　結合される修飾オリゴヌクレオチドが
    、一般式ＩＩ： 【化２】 〔式中、ｎ＝５〜２０、Ｂ＝ヌクレオシド塩基、Ｘ＝Ｏ
    −、Ｓ−、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アルキル、アルキル及
    び／またはその組み合わせ、Ｙ＝Ｏ及び／またはＳ、Ｑ
    、Ｑ’は抗体との結合に適した化学フラグメントを示す
    〕で示されることを特徴とする請求項５に記載の結合体
    。
  7. 【請求項７】　　ターゲット化部分が抗体またはそのフ
    ラグメントもしくはその誘導体であることを特徴とする
    請求項５または６に記載の結合体。
  8. 【請求項８】　　請求項１から４のいずれか一項に記載
    の標識された修飾オリゴヌクレオチドと適当な投与媒体
    とを含むことを特徴とする特定細胞集団除去用の医薬組
    成物。
  9. 【請求項９】　　請求項８に記載の組成物と、請求項５
    〜７のいずれか一項に記載の結合体と適当な投与媒体と
    を含む組成物を含むことを特徴とする特定細胞集団除去
    用の医薬組成物。
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PT (1) PT99752B (ja)
ZA (1) ZA919694B (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001525356A (ja) * 1997-12-05 2001-12-11 カタリナ エドワーズ、 ２工程標的設定を用いた薬物送達システム

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9123947D0 (en) * 1991-11-12 1992-01-02 Imp Cancer Res Tech Therapeutic compounds
EP0680335A1 (en) * 1992-11-30 1995-11-08 The Wellcome Foundation Limited Sequential targeting of tumor sites with oligonucleotide conjugates of antibody and complementary oligonucleotide conjugates of chelated radionuclide
US5571680A (en) * 1994-01-21 1996-11-05 Beckman Instruments, Inc. Homogeneous immunoassays and enzyme based assays of analytes using capillary electrophoresis
IL114237A (en) * 1994-07-14 2000-08-31 Schering Ag Oligonucleotide conjugates and diagnostic processes utilizing the same
GB2291877B (en) * 1994-08-01 1998-09-23 Tom Robin Caine Boyde Interlinking at least two protein molecules via nucleic acid chains
US5821354A (en) * 1996-11-26 1998-10-13 Angiogene Inc. Radiolabeled DNA oligonucleotide and method of preparation
US20010051348A1 (en) 2000-01-28 2001-12-13 Lee Chee Wee Novel ligands and methods for preparing same
WO2001054731A2 (en) * 2000-01-28 2001-08-02 National University Of Singapore Ligand conjugates and methods for preparing same
WO2001072203A2 (en) * 2000-03-24 2001-10-04 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Therapy of proliferative disorders by direct irradiation of cell nuclei with tritiated nuclear targeting agents
DE10361502A1 (de) * 2003-12-23 2005-07-28 Phenion Gmbh & Co. Kg Kosmetische oder pharmazeutische Zubereitungen enthaltend Superstruktur-bildende Nukleinsäure-Sequenzen

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0273085A1 (en) * 1986-12-29 1988-07-06 IntraCel Corporation A method for internalizing nucleic acids into eukaryotic cells
WO1989005853A1 (en) * 1987-12-15 1989-06-29 Synthetic Genetics Nucleic acid chelate conjugate as therapeutic and diagnostic agents
AU3056889A (en) * 1988-01-21 1989-08-11 Yale University Selective inhibition of gene expression by photoactivatable oligonucleotides
GB8809616D0 (en) * 1988-04-22 1988-05-25 Cancer Res Campaign Tech Further improvements relating to drug delivery systems
US5109124A (en) * 1988-06-01 1992-04-28 Biogen, Inc. Nucleic acid probe linked to a label having a terminal cysteine
CA2049028A1 (en) * 1989-03-07 1990-09-08 Genentech, Inc. Covalent conjugates of lipid and oligonucleotide
JPH04500679A (ja) * 1989-04-18 1992-02-06 アメリカ合衆国 オリゴデオキシヌクレオチド化合物およびその製造方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001525356A (ja) * 1997-12-05 2001-12-11 カタリナ エドワーズ、 ２工程標的設定を用いた薬物送達システム

Also Published As

Publication number Publication date
CA2057292A1 (en) 1992-06-11
JP3143506B2 (ja) 2001-03-07
FI915780L (fi) 1992-06-11
NO914839D0 (no) 1991-12-09
FI915780A7 (fi) 1992-06-11
EP0490434B1 (en) 2000-03-15
NO914839L (no) 1992-06-11
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